CLONACION Y TRANSGENESIS EN OVINOS

CLONACION
HISTORIA:
1938: Hans Spemann propone la clonacin animal mediante la transferencia nuclear de
clulas somticas (SCNT).
La primera clonacin en el mundo animal fue realizada en 1952, a partir del vulo de una
rana, por cientficos de la Universidad de Pennsylvania, quienes despus del xito logrado
continuaron haciendo clonacin con ratones.
1977: Karl Illmensee afirma haber clonado ratones (en 1983 acusado de fraude
cientfico).
1984: DavorSolter (Instituto Wistar, PA) afirma que la clonacin es biolgicamente
imposible.
1984: SteenWilladsen (Cambridge, Reino Unido) clones de embriones de ovejas por la
separacin de las primeras clulas embrionarias, similar a la manera en que surgen
naturalmente los gemelos (llamado embrin gemelo). Fue el primero en Verificar la
clonacin de un mamfero.
1986: en la Universidad de Wisconsin, una vaca es clonada a partir de clulas de un
embrin de vaca, utilizando clonacin gemela.
En 1991 en Taiwan el Dr. Wu Ming-Che del Instituto de Investigacin de Ganado clon 5
cerdos de una especie en extincin, aunque slo con 90% de similitud.
1997: El 27 de febrero IanWilmut (RoslinInstitute), clon una oveja, llamada "Dolly", de
una clula mamaria.
En el Instituto Roslin, en Escocia, en 1998 se logr la clonacin de las ovejas "Megan y
Moran" idnticas genticamente y adems transgnicas. En el mismo ao, en la
Universidad de Massachussets, el argentino Jos Cibelli produce los primeros terneros
clonados y transgnicos, pues provenan del mismo tejido embrionario.
2000: En enero, el Doctor Schatten y su equipo obtuvieron en el Centro de Investigacin
de Primates de Oregn (EEUU) el primer mono clnico.
2002: En Agosto nace con xito en Argentina el primer bovino clonado, de raza Jersey
(Pampa).

2003: Nacen en la Argentina 12 terneras transgnicas destinadas a que expresen en su

leche la protena humana hGH u hormona de crecimiento, la cual desempea un papel
importantsimo en el tratamiento del enanismo hipofisiario, entre otras enfermedades. A
futuro se piensa producir por este mismo mtodo el factor activador tisular de
plasmingeno humano o tPA, potente fibrinoltico de amplia utilizacin en el tratamiento
del infarto agudo de miocardio.
Vaca Rosita ISA en Argentina (2011) se logra producir leche maternizada humana a
partir de una vaca (INTA BALCARCE)
En consecuencia, lo extraordinario de este descubrimiento permite poder reproducir
copias genticamente idnticas de cualquier ser vivo, sea estril o no, ya que para la
reproduccin, como se ha visto en este caso, se necesita de clulas somticas.
En el mundo hay ya ms de 300 mamferos clonados con la misma tcnica que dio lugar a
Dolly, con ms o menos variantes. Eso al menos estima uno de sus padres, Harry Griffin,
del Instituto Roslin, en Edimburgo. Un tercio son vacas, ovejas y cabras, y el resto ratones.
Se investiga tambin con primates y perros. Pero la comunidad cientfica no se ha
recuperado an del asombro que le produjo saber que de la clula de un animal adulto se
puede obtener otro ejemplar prcticamente igual.
CLON
El trmino fue creado en 1903 por H. J. Webber. La palabra Clon (el trmino se debe a J. B.
S. Haldane, 1963) procede del griego, y significa brote, retoo o esqueje, y multitud.
Es un organismo o grupo de organismos o clulas que derivan de otro a travs de un
proceso de reproduccin asexual y poseen la misma informacin gentica que su clula de
origen.
Algunos tipos de reproduccin asexual son biparticin o fisin, gemacin, fragmentacin y
la esporulacin de los hongos.
El trmino se ha aplicado tanto a clulas como a organismos, de modo que un grupo de
clulas que proceden de una clula nica tambin se considera un clon.
Por lo general, los miembros de un clon tienen caractersticas hereditarias idnticas; es
decir, sus genes son iguales, con excepcin de algunas diferencias a causa de las
mutaciones o al ambiente en que se desenvuelven ya que afecta la expresin de los genes.
Por ejemplo, los gemelos idnticos, que proceden de la divisin de un huevo fecundado
nico, son miembros de un clon, mientras que no lo son los gemelos no idnticos que se

originan a partir de la fecundacin de dos huevos independientes. Sin embargo, en el caso

de los gemelos idnticos, a pesar de tener igual informacin gentica, pueden ser
diferentes en carcter, peso, estatura, etctera, debido a la influencia del ambiente en su
desarrollo.
Adems de los procariotas (bacterias y algas verdeazuladas), otros organismos simples
como la mayora de los protozoos, otro tipo de algas, y algunas levaduras, se reproducen
tambin por clonacin, al igual que ciertos organismos superiores, caso de los gusanos
planos y plantas como el diente de len.
LA CLONACION:
Se define como una reproduccin asexuada que origina
idnticos.

individuos genticamente

A partir de una clula de un individuo se crea otro exactamente igual al anterior.

Los caracteres que puede mostrar un ser humano se deben a los genes que ha heredado de
los progenitores.
Mediante la clonacin se consigue que el individuo tenga los mismos genes que el padre o
la madre.
La reproduccin sexual se sustituye por una reproduccin artificial asexual.
Pero los genes los aporta una nica persona o animal.
El individuo tendr los mismos genes, pero est demostrado cientficamente, que es
posible que sus rasgos puedan oscilar.
La clonacin Se trata de un hecho que supera las formas de fecundacin artificial
conocidas hasta ahora, las cuales se realizan siempre utilizando dos gametos.
Se deben tomar en cuenta las siguientes caractersticas:
1. Se necesita clonar las molculas ya que no se puede hacer un rgano o parte del clon
sino se cuenta con las molculas que forman a dicho ser, para hacer una clonacin
necesitamos saber qu es lo que buscamos clonar.
2. Ser parte de un animal ya desarrollado, porque la clonacin responde a un inters por
obtener copias de un determinado animal que nos interesa y slo cuando es adulto
conocemos sus caractersticas.
3. Se trata de crearlo de forma asexual. La reproduccin sexual no nos permite obtener
copias idnticas, ya que este tipo de reproduccin por su misma naturaleza genera
diversidad.

LA CLONACIN ANIMAL puede definirse como el proceso por el que se consiguen copias
idnticas de un animal, clula o molcula del mismo ya desarrollado.
MTODOS DE CLONACIN
NATURAL: Es la que se produce por la propia naturaleza. Un ejemplo es el caso de dos
gemelos que provienen de un vulo fecundado pero que en sus primeras etapas de
desarrollo se divide en dos individuos idnticos.
ARTIFICIAL: Se manipula el material gentico y se crea un nuevo ser.
TCNICA DE CLONACIN EN ANIMALES
Consiste en conseguir clulas que contengan el gen responsable de la caracterstica
deseada. Posteriormente, el ncleo de esa clula es insertado en un ovocito, del que
previamente se ha extrado su ncleo.
Despus hay que conseguir que esa clula diploide se divida formando un nuevo
individuo, tal como lo hara un cigoto formado por la fecundacin del vulo por el
espermatozoide.
Finalmente, para que desarrolle este embrin, hay que implantarlo en el tero de
una hembra.
Las tcnicas ms habituales de clonacin de animales son las siguientes:
1. DIVISIN ARTIFICIAL DE EMBRIONES: En el estadio de mrula esta se puede
dividir en 2 para obtener 2 embriones.
2. BISECCIN EMBRIONARIA: Puede ser de mrula o blastocito. En este ltimo caso
tendremos que cortar por la mitad la masa celular interna. A cada parte resultante
se le llama demiembrin o hemiembrin.
3. TRANSFERENCIA DE NCLEOS: Se necesita un ncleo donante y un citoplasma
receptor, ste de un vulo.

CMO SE CLON DOLLY

La clonacin de animales a partir de una clula adulta resulta obviamente mucho ms

compleja y difcil que cultivar una planta a partir de un esqueje. Por lo tanto, cuando los
cientficos que trabajaban en el Instituto Roslin de Escocia produjeron a Dolly, el nico
cordero nacido de 277 intentos, fue una gran noticia en todo el mundo.

Para producir a Dolly, los cientficos utilizaron en ncleo de la clula mamaria de una
oveja blanca se seis aos de la raza Finn Dorset. El ncleo contiene casi todos los genes
celulares. Tenan que encontrar una manera de 'reprogramar' las clulas mamarias (para
mantenerlas vivas, pero detener su crecimiento), lo que consiguieron alterando el medio
de cultivo (el 'caldo' en el que las clulas se mantenan vivas). Entonces inyectaron las
clulas en un ovocito no fertilizado al que se le haba extrado su ncleo y provocaron la
fusin de las clulas utilizando impulsos elctricos. El ovocito no fertilizado proceda de
una oveja de la raza Scottish Balckface. Despus de que el equipo de investigacin
consiguiese fusionar el ncleo de la clula de la oveja blanca adulta con el ovocito de la
oveja de cara negra, necesitaba asegurarse de que la clula resultante se desarrollara
hasta formar un embrin. Lo cultivaron durante seis o siete das para ver si se divida y se
desarrollaba con normalidad, antes de implantarlo en una madre de alquiler, otra oveja de
la raza Scottish Blackface. Dolly tena la cara blanca.
De 277 fusiones celulares, 29 embriones en etapa temprana se desarrollaron y fueron
implantados en 13 madres de alquiler. Sin embargo, solamente uno de los embarazos lleg
a trmino y naci el cordero de la raza Finn Dorset de 6,6 kg 6LLS (alias, Dolly) despus de
148 das.
CLONACIN DE LA OVEJA DOLLY:

Una oveja con tres madres y sin padre. Fue seguida meses despus en julio de 1997
por Polly, otro clon de ovejas; esta fue creada para confirmar que Dolly no fue fruto
de la casualidad y para confirmar las esperanzas de las perspectivas medicas de la
clonacin. Polly posee adems el gene de una protena humana con propiedades
curativas que se elimina por la leche en grandes cantidades. Dolly nacida el 5 de
julio de 1996 y bautizada asi en honor de la cantante Dolly parson. Este clon fue
logrado por el equipo del Dr. IanWilmut del instituto rostin de edinburgo, formado
a partir del animal breedinresearchdepartament creado en 1919 dentro de la
university of edinburg.
Puede que la oveja Dolly haya sido el clon ms famoso del mundo, pero no el
primero. La clonacin crea una copia genticamente idntica de un animal o una
planta. Se haban clonado muchos animales (incluyendo ranas, ratones y vacas)
antes que Dolly. Las plantas se clonan con frecuencia (al sacar un esqueje se
produce un clon de la planta original). Los gemelos idnticos humanos tambin son
clones.
Dolly fue el primer mamfero en ser clonado a partir de una clula adulta y no de un
embrin. Esto supuso un importante logro cientfico, aunque tambin plante
problemas ticos.
QU OCURRI CON DOLLY?
Dolly vivi en el Instituto Roslin, donde fue sumamente mimada. Se apare y
produjo una descendencia normal por el mtodo convencional, demostrando que
estos animales clonados pueden reproducirse. Nacida el 5 de julio de 1996, fue
sacrificada el 14 de febrero de 2003, a la edad de seis aos y medio. La oveja vive
unos 11 o 12 aos, pero Dolly padeca artritis en una articulacin de una pata
posterior y adenomatosis pulmonar ovina, un tumor de pulmn inducido por un
virus frecuente entre las ovejas criadas en confinamiento. El 2 de febrero de 2003,
la primera oveja clonada en Australia falleci repentinamente a los dos aos y diez
meses. La causa de la muerte era desconocida y el cadver se inciner rpidamente,
dado que se estaba descomponiendo.
Los cromosomas de Dolly eran un poco ms cortos que los de la otra oveja, pero
prcticamente en todos los aspectos era igual que cualquier otra oveja de su edad
cronolgica. No obstante, su envejecimiento temprano puede reflejar que se obtuvo
del ncleo de una oveja de seis aos. El estudio de sus clulas tambin revel que la
pequea cantidad de ADN que se encuentra fuera del ncleo, en la mitocondria de
las clulas, es heredado por completo del ovocito del donante y no del ncleo del
donante como el resto de su ADN. Por tanto no es una copia totalmente idntica.

Esta conclusin podra ser importante para las enfermedades relacionadas con el
gnero, como la hemofilia y determinadas afecciones neuromusculares, cerebrales
y renales que se transmiten solamente por parte de la familia de la madre.
MULTIPLICACION EMBRIONARIA O CLONAJE:
Los mtodos de micromanipulacion de los estadios tempranos del desarrollo
embrionario ofrecen la posibilidad de producir monocigotos, mellizos, cuadruples o
grandes nmeros de copias mltiples de embriones genticamente idnticos a
partir de un embrin individual de animales de alto merito gentico. La biseccin o
separacin de embriones en el estado de mrula o blastocito ha sido aplicada en la
prctica comercial tanto en bovinos como en ovinos y caprinos. Al ser colocadas en
una zona pelucida 34% fueron frtiles despus de ser trasplantadas, produciendo
embriones monicigotes normales, aunque en estas parece ser ms difcil la
biseccin debido a una dbil unin clula clula que se desintegra al ser
manipulado y a una zona pelucida muy flexible, con una supervivencia de los demi
embriones de 29% inferior al 37% de los embriones enteros al ser transferidos.
Para el desarrollo normal de embriones producidos por transferencia nuclear se
requiere por lo menos de tres condiciones, manipulacin adecuada para la
reconstruccin del embrin, compatibilidad funcional entre el ciclo celular del
nucleo y del citoplasma y una completa reprogramacin del ncleo transferido. La
investigacin en esta rea se considera una estrategia reproductiva clave.
Beneficios de la clonacin:Otra aplicacin (ms en la lnea de la ganadera
tradicional) sera asegurar copias de un ejemplar que haya mostrado buenos
rendimientos (en carne, en leche, etc.). La clonacin evitara que su buena
combinacin de genes (su genotipo) se "diluyera" al cruzarlo sexualmente con otro.
Se ha hablado igualmente de que la clonacin podra representar la salvacin "in
extremis" de ciertas especies silvestres amenazadas de extincin y difciles de criar
en cautividad. Pero si se llega a este caso, sera el triste reconocimiento de nuestro
fracaso de conservarlas por medios ms simples y naturales. Para el consumidor,
compra de productos de calidad garantizada (aqu hay que sealar el escepticismo
con el que responden los consumidores). El sector mdico-farmacutico ser el ms
beneficiado: produccin de protenas, utilizacin de animales clonados como
donantes de rganos, eliminacin del riesgo de rechazo por productos derivados de
la sangre humana.

TRANSGENESIS EN OVEJAS
Introduccin
La produccin de organismos transgnicos ha supuesto un gran avance tcnico en el
estudio de la Biologa ya que permite cambiar la composicin gentica de un animal
proporcionando una mutacin inmediata, inducida y dirigida, y de esta manera el
investigador puede interpretar las funciones especficas de cada gen y conocer la
maquinaria celular que interviene en su expresin. La participacin de los animales
transgnicos en la investigacin en biotecnologa, est siendo fundamental para entender
los mecanismos de regulacin gentica y la biologa del desarrollo. La tecnologa
transgnica ha proporcionado avances significativos y ofrece enormes posibilidades de
futuro en otras reas: estudio de la funcin de los genes involucrados en el desarrollo del
cncer (oncogenes) y de los virus oncognicos, investigacin de los mecanismos de
regulacin y de la interaccin de las clulas en el sistema inmunitario y estudio de los
mecanismos de control del crecimiento.
Tambin son de gran utilidad los animales transgnicos para el avance de la biologa del
desarrollo, porque permiten conocer las interacciones ncleo-citoplasma y que efecto
tiene la ubicacin de los genes, dentro del cromosoma, en su expresin.
La ingeniera gentica, utilizando los conocimientos que aporta la Biologa junto a los de
otras ciencias experimentales, ha desarrollado un conjunto de tcnicas que permiten
aislar, duplicar, modificar, combinar e introducir material en el genoma de un ser vivo,
dando lugar a una estructura diferente a la que originalmente encontramos en la
naturaleza.
LA TRANSGENESIS
La transgnesis se puede definir como la introduccin de ADN extrao en un genoma,
de modo quese mantenga estable de forma hereditaria y afecte a todas las clulas en los
organismosmulticelulares. Generalmente, en animales, el ADN extrao, llamadotransgen,
se introduce enzigotos, y los embriones que hayan integrado el ADN extrao en su
genoma, previamente a la primera divisin, producirn un organismo transgnico; de
modo que el transgn pasar a las siguientesgeneraciones a travs de la lnea germinal
(gametos).

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Entre las aplicaciones de los animales transgnicos se pueden destacar:

La posibilidad de estudiar a nivel molecular el desarrollo embrionario y

su regulacin.
Manipular de forma especfica la expresin gnica.
Estudiar la funcin de genes especficos.
Poder utilizar a mamferos comobiorreactorespara la produccin de protenas
teraputicas.
Mejora de caracteres productivos.
Resistencia a enfermedades.
Modelos animales de enfermedades humanas (por ejemplo, ratones knockout)
Donacin de rganos: Xenotransplantes

La Biotecnologa incluye "cualquier tcnica que utilice organismos vivos o parte de los
organismos para fabricar o modificar productos, mejorar plantas o animales o desarrollar
microorganismos para usos especficos" (Rodrguez-Villanueva, 1986).

La potencialidad de la biotecnologa estriba en producir cantidades ilimitadas de:

Substancias de las que nunca se haba dispuesto con anterioridad
Productos que se obtenan en pequeas cantidades
Abaratamiento de los costes de produccin
Mayor seguridad en los productos obtenidos
Nuevas materias primas, ms abundantes y menos caras

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La transgnesis puede efectuarse siguiendo 2 estrategias distintas:

1. Transgnesis por microinyeccin de zigotos
Desde que en 1982 se obtuviera un ratn transgnico, la produccin de animales
transgnicas es cada vez ms cotidiana, existiendo ya animales transgnicos de las
siguientes especies.
La tcnica se realiza, fundamentalmente por micro inyeccin y se realiza de la
siguiente forma:
En la primera fase, se aislan un nmero grande de vulos fertilizados. Se consigue
sometiendo a las hembras a un para provocar una superovulacin. La
fertilizacin puede hacer sein vitro o in vivo.
En la segunda fase, los zigotos obtenidos se manipulan uno a uno y con una
micropipeta a modo de aguja, se introduce una solucin que contiene ADN.
En la tercera fase, estos vulos son reimplantados en hembras que actuarn como
nodrizas permitiendo la gestacin hasta trmino.
Por ltimo, tras el destete de los recin nacidos, stos se chequean, para ver si ha
ocurrido la incorporacin del transgn.
2. Transgnesis por manipulacin de clulas embrionarias
Una estrategia ms poderosa para la transgnesis implica la introduccin de ADN
extrao en clulas embrionarias totipotentes (clulas ES)o clulas embrionarias
madres(clulas EM).Estas clulas se toman del interior de la blstula en
desarrollo y se pasan a un medio donde se tratan con distintos productos con lo
que se conseguir que las clulas no se diferencien, y se mantiene su estado
embrionario.
El ADN extrao se introduce en las clulas ES mediante diversas tcnicas,
posteriormente las clulas transfectadas son reintroducidas en una blstula y sta
reimplantada en una hembra. Con esta tcnica los neonatos son quimeras; pero
mediante el cruce de stas se consiguen animales transgnicos con aquellas
quimeras que hayan incorporado el transgn en su lnea germinal. Cuando la
integracin del transgn ocurre despus de la primera divisin celular, el animal es
quimrico, lo que quiere decir que las clulas de su cuerpo tienen diferentes
caractersticas, segn tengan o no el transgn, as en la quimera entre oveja y cabra,
las clulas de su piel, unas producan lana y otras pelo.

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Ambas estrategias tienen objetivos similares:

1.
2.
3.
4.

La expresin de productos genticos que anteriormente no existan.

La sobre-expresin de genes que si que se encontraban previamente en el genoma.
La sntesis de protenas en clulas, tejidos u rganos diferentes a los habituales.
La alteracin de la regulacin de sistemas enzimticos o rutas metablicas
determinadas.

Tanto en una estrategia como en la otra, es fundamental asegurar la habilidad para

romper las cadenas e introducir, o extraer, los genes en lugares diana especficos ya que la
eficacia del procedimiento depende de la posibilidad de reproducir las modificaciones que
se persiguen y esto no se podr conseguir si no somos capaces de garantizar la fiabilidad
de la transferencia.
ANIMALES TRANSGENICOS
Normalmente, en los organismos superiores animales o vegetales la informacin gentica
se transmite por mecanismos de reproduccin sexual; es lo que se conoce
como transmisin gentica vertical. Sin embargo, hace ya unos veinte aos se logr
obtener los primeros ratones transgnicos mediante transferencia gnica por inyeccin
directa de ADN extrao en un cigoto obtenido por fecundacin in vitro; es decir, se trataba
de una transmisin gentica horizontal, tambin llamadatransgnesis.
A partir de las experiencias de Gordon, Ruddle y colaboradores iniciadas en 1980 en las
que inyectaron ADN de ratn en uno de los proncleos de un cigoto de la misma especie,
se inici una nueva era en la manipulacin gentica de embriones de mamferos. Al ao
siguiente, Gordon y Ruddle (1981) demostraban la integracin y transmisin estable a
travs de la lnea germinal de genes inyectados en proncleos de cigotos de ratn
obtenidos por fecundacin in vitro. Eran los primerosratones transgnicos. El paso
siguiente consisti en probar que tambin se podan obtener ratones transgnicos que
incorporaran en su genoma un gen (transgn) de otra especie. As, Palmiter y
colaboradores (1982) obtuvieron ratones transgnicos gigantes al inyectar en el
proncleo de un cigoto el gen de la rata que codifica para la hormona del crecimiento.
Incluso, se obtuvieron tambin ratones transgnicos gigantes cuando el transgn
introducido era el gen humano que codifica para la hormona de crecimiento (Palmiter et
al., 1983).
La ingeniera gentica para la obtencin de animales transgnicos tiene un gran potencial
en la cra de animales de granja, con fines de mejorar la calidad de la carne o la leche, la
resistencia a enfermedades, etc., Otra vertiente es la destinada a la industria farmacutica.
En este caso se utilizan los animales transgnicos como bioreactores para la produccin de
protenas en su sangre, o en la leche, que pueden ser utilizados como frmacos. Una nueva

13

vertiente que encierra cierto inters es la de la modificacin gentica de animales, como

cerdos u otros, con genes humanos, proceso denominado humanizacin, para su
utilizacin en xenotransplantes. Tambin se utiliza esta tecnologa para la obtencin de los
llamados ratones knockout, que tienen anulado (noqueado) algn gen determinado, con
el fin de estudiar sus efectos en el fenotipo. Esto es muy interesante como mtodo de
experimentacin en biomedicina.

FIG.01.- El ratn transgnico, que lleva incorporado el gen de la hormona de crecimiento de

la rata, tiene un aumento de tamao del 80% en comparacin con un ratn normal (Fuente:
S.F.Gilbert, 1988, Developmental Biology, 2nd edition, Sinauer Associate, Inc.)

FIG.02.- Cerdo transgnico que lleva incorporado el gen humano de la hormona del
crecimiento. Su desarrollo presentaba trastornos fisiolgicos importantes (Fuente:
M.R.Cummings, 1995, Herencia Humana, 3 edicin,Interamericana).

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En el cuadro adjunto se indican algunas especies en las que se han obtenido animales
transgnicos:

MAMFEROS TRANSGNICOS
Como se indicaba anteriormente, las investigaciones llevadas a cabo a principio de los
aos ochenta no fueron ms que el lanzamiento de una serie ininterrumpida de avances,
tanto en la investigacin bsica como en la utilizacin prctica de los animales
transgnicos. En el cuadro adjunto se incluyen los principales hitos relacionados con la
obtencin y desarrollo de los mamferos transgnicos:

AO

ANIMAL

1938
1949
1961
1966
1980 ratones
1981
1982 Ratones
1983

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RESPONSABLE

METODO
Propone el experimento de transferencia
Spemann
nuclear.
Mantiene embriones de ratn en
Hammond
cultivo in vitro
Obtiene ratones quimricos agregando
Tarkowski
embriones.
Describe la tcnica de microinyeccion de
Lin
embriones de raton
Gordon, Ruddle Microinyeccion de ADN en el proncleo
y col.
de cigotos de raton.
Evans
y
Obtienen clulas totipotentes de raton
Kaufman
Trangenes
de
la
hormona
del
Palmiter y col.
crecimiento de la rata.
Desarrollan una nueva tcnica para
McGrath y Solter
experimentos de transferencia nuclear

1985

conejos,
cerdos

ovejas,

1987 Ratones knockout

en ratn
Transgn de la hormona del crecimiento
humano

Hammer y col.
Thomas
Capecchi

Recombinacin homloga

Gen humano del factor IX de coagulacin

1989 Ovejas
Clark y col
de la sangre mediante microinyeccin de
ADN en el proncleo del cigoto
En humano de la a -1-antitripsina
1991 Ovejas
Wright y col.
mediante microinyeccin de ADN en el
proncleo de cigotos
Gen atphhumano (activador tisular de
1991 Cabras
Ebert y col.
plasmingeno) mediante microinyeccin
de ADN en proncleo de cigoto
Gen humano de la lactoferrina mediante
Krimpenfort y
1991 Vacas
microinyeccin de ADN en el proncleo
col.
de cigotos
1993 Ratones
Nagy y Rossant
Por co-cultivo de embriones
1993 Ratones
Schedl y col.
Cromosomas artificiales de levaduras
1994 Ratones
Brinster y col.
Transplante de espermatogonias.
ovejas
clnicas
Por transferencia nuclear a partir de
1997
Schnieke y col.
transgnicas
clulas fetales diferenciadas
vacas
clnicas
Por transferencia nuclear a partir de
1998
Cibelli y col.
transgnicas
clulas fetales diferenciadas
1999 Cabras
Baguisi y col.
Transferencia nuclear
Yanagimachi y Co-inyeccin
de
cabezas
de
1999 ratones
col.
espermatozoides y ADN exgeno.
TCNICAS PARA OBTENER ANIMALES TRANSGNICOS
Las tcnicas ms utilizadas para obtener animales transgnicos son:

Microinyeccin.
Retrovirus.
Uso de clulas madres embrionarias.
Transformacin de clulas somticas y transferencia nuclear (clonacin).

Microinyeccin: el ADN se introduce en el vulo, fecundado in vitro, por medio de

un capilar a travs de un microscopio. Posteriormente, el vulo se reintroduce en la
hembra.

Transgnesis por microinyeccin de zigotos

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Desde que en 1982 se obtuviera un ratn transgnico, la produccin de animales

transgnicas es cada vez ms cotidiana, existiendo ya animales transgnicos de las
siguientes especies: ratn, rata, conejo, cerdo, vaca, cabra y oveja.
La tcnica se realiza, fundamentalmente por microinyeccin y se realiza de la
siguiente forma:
o En la primera fase, se aislan un nmero grande de vulos fertilizados. Se
consigue sometiendo a las hembras a un tratamiento hormonal para
provocar
una superovulacin.
La fertilizacin puede hacerse in vitro o in vivo.
o En la segunda fase, los zigotos obtenidos se manipulan uno a uno y con una
micropipeta a modo de aguja, se introduce una solucin que contiene ADN.
o En la tercera fase, estos vulos son reimplantados en hembras que actuarn
como nodrizas permitiendo la gestacin hasta trmino.
Por ltimo, tras el destete de los recin nacidos, stos se chequean, para ver si ha
ocurrido la incorporacin del transgn.
Esta tcnica es aplicable a la mayora de especies; el inconveniente que tiene es que
al insertar el gen al azar en el genoma solo un 5% de vulos dan lugar a un animal
transgnico vivo y sano
Obtencin de una cerda transgnica
Un gen hbrido que contiene el gen humano que codifica la sntesis de una protena
de inters biolgico junto con el promotor del gen que codifica una protena de la
leche de rata, se introducen por microinyeccin en un vulo de cerda fecundado.
El desarrollo de ese vulo da lugar a un animal transgnico que tiene en todas sus
clulas el gen hbrido. Debido al promotor elegido, ese gen solamente se expresa en
la glndula mamaria de la cerda induciendo la produccin de la proteina humana
en la leche.

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Transgnesis por manipulacin de clulas embrionarias.

Una estrategia ms poderosa para la transgnesis implica la introduccin de ADN
extrao en clulas embrionarias totipotentes(clulas ES) o clulas embrionarias
madres (clulas
EM).
Estas clulas se toman del interior de la blstula en desarrollo y se pasan a un
medio donde se tratan con distintos productos con lo que se conseguir que las
clulas no se diferencien, y se mantiene su estado embrionario.

18

El ADN extrao se introduce en las clulas ES mediante diversas

tcnicas,posteriormente las clulas transfectadas son reintroducidas en una
blstula y sta reimplantada en una hembra.
Con esta tcnica los neonatos son quimeras ; pero mediante el cruce de stas se
consiguen animales transgnicos con aquellas quimeras que hayan incorporado el
transgn en su linea germinal.

19

Retrovirus: esta tcnica se utiliza desde los aos 80, se utilizan virus, ya que son
vectores eficientes en transportar genes a las clulas, y, al igual que la
microinyeccin, la insercin se efecta al azar. Para realizar esta tcnica se necesita
unos cultivos celulares especiales, denominados "clulas empaquetadoras".
Esta tcnica se basa en introducir el transgen en un virus benigno para que este lo
baya extendiendo por todas las clulas del cuerpo del animal. Pero tiene el riesgo
de que el virus usado como transporte se reproduzca en el organismo transgnico
dando lugar a enfermedades.

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Transformacin de clulas somticas y transferencia nuclear (clonacin); esta

tcnica se us por primera vez en 1952, en anfibios, y consiste en extraer el
material gentico de un ovocito para posteriormente introducirle el material
gentico de una clula del animal a clonar. Uno de los experimentos ms conocidos
es la creacin de la oveja Dolly. Mira esta imagen para entender con claridad el
proceso:

APLICACIONES EN ZOOTECNIA
La aplicacin de metodologas transgnicas en el mbito de la medicina veterinaria puede
producir una drstica renovacin de la profesin, en particular en lo referente a la
produccin en ganadera. Los caracteres de produccin y reproduccin han mejorado con
la introduccin de nuevos genes en los animales de abasto.
Hay muchas aplicaciones potenciales de la ingeniera gentica en el desarrollo de nuevas y
mejores estirpes de animales de granja que tendran utilidades prcticas en la produccin:
incremento de la prolificidad y mejora de las caractersticas reproductivas, aumento de los
ndices de conversin y de las tasas de crecimiento, mejora en la composicion de los
canales, mayor y mejor produccin lctea y mayor resistencia a las enfermedades.
La ingeniera gentica en animales de granja se ha dirigido a mejorar la productividad
animal: mejorando en el ganado transgnico la composicin corporal, la calidad de la
carne, la produccin de leche, la calidad de la lana, e incrementando la prolificidad y la
resistencia a enfermedades. As, se han desarrollado vacas que producen ms leche, ovejas
que producen ms lana y peces con mayor tasa de crecimiento.
La mejora de los nutrientes de la leche o el conseguir la produccin comercial de leche con
valor teraputico puede tener un profundo impacto en la supervivencia y el crecimiento
de los lactantes, tanto humanos como animales. Pero, adems, otros productos de origen
animal, tales como huevos y carne podran beneficiarse de la utilizacin de la transgnesis.
La transgnesis ha llegado tambin a la acuicultura comercial para mejorar el crecimiento
y el valor nutri- camente modificados es objeto de mucho inters desde el punto de vista
comercial, siendo los rasgos de mayor inters: el crecimiento, la resistencia a las
enfermedades y la mejor tolerancia ambiental.
La modificacin gentica se ha extendido a gran nmero de especies como por ejemplo al
gusano de seda, para segregar colgeno; o a orugas, portadoras de espidrona, la protena
responsable del ultrarresistente hilo de las araas (utilizado para tejer paracadas y
chalecos antibalas).

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Caracteristicas que se mejoran con la transgenesis.

Cambios en la composicin de la leche

Modificacin de los ndices de crecimiento y de la composicin de la canal
Animales resistentes a enfermedades
Mejora de los rendimientos reproductivos y de la prolificidad
Modificacin de las caractersticas de los integumentos: piel, pelo y lana

Las ovejas uruguayas fluorescentes que brillan como medusas

El genoma es el de la oveja, pero adems estos corderos tienen un gen de la medusa.

Son nueve corderos de poco ms de seis meses, de aspecto normal a la luz del da
pero de tono verde fluorescente bajo luz ultravioleta, una propiedad
proporcionada por el gen de una medusa.
Para los no familiarizados con la transgnesis, a simple vista este experimento puede
parecer algo rocambolesco, pero sus resultados representan un paso ms hacia un
futuro en el que los animales transgnicos podrn ayudar a curar enfermedades.
As lo creen los cientficos que desarrollaron el experimento en Montevideo, una
colaboracin entre el equipo del Instituto de Reproduccin Animal Uruguay (Irauy) y el
Institut Pasteur, con el apoyo del especialista Ignacio Anegn.
La transgnesis consiste en "importar" un gen de inters de una determinada
especie a otra para que sta lo incorpore a su ADN, con la intencin de que genere
caractersticas nuevas consideradas tiles.
"En este caso tomamos la oveja como especie receptora de esos genes, y de esa forma el
cordero que nace tiene el genoma de la oveja, es decir, toda la informacin gentica de la

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oveja, es una oveja, pero adems tiene un gen de la especie originaria que le confiere
cierta caracterstica de inters", le explic a BBC Mundo Alejo Mancheca, veterinario
fundador del Irauy y codirector del estudio.
Para este experimento los investigadores utilizaron un gen que originariamente en la
naturaleza se encuentra en una medusa, la Aequorea Victoria, tambin conocida como
medusa de cristal por su luminosidad.
Ese gen es el responsable de producir la protena verde fluorescente (GFP, por sus siglas
en ingls), que ahora hace resplandecer algunos tejidos de los corderos bajo ciertas
condiciones de luz.
"Cuando ese gen se introduce en un embrin de cordero, despus el cordero expresa esa
protena", explic Mancheca.
"Ahora las tenemos en condiciones experimentales, en las que se las evala
constantemente y se las compara con otros animales"
Doctor Alejo Menchaca
"Usamos este gen en particular porque ese color verde permite muy fcilmente
identificar que la tcnica fue exitosa, es decir, a simple vista podemos saber que ese gen
ya est incorporado en el genoma del ovino", dijo el investigador.
La utilizacin de esa protena fluorescente como marcador biolgico fue desarrollada
por dos investigadores estadounidenses y uno japons, cuyos esfuerzos fueron
reconocidos en 2008 con el premio Nobel de Qumica..
La vida del animal
Desde que nacieron hasta hoy, que tienen seis meses, las ovejas uruguayas siguen
resplandeciendo en verde como el primer da, as que el primer objetivo del
experimento, que era comprobar que las ovejas mantuvieran la expresin de la protena
fluorescente, est cumplido.
"Ahora las tenemos en condiciones experimentales, en las que se las evala
constantemente y se las compara con otros animales", explic el investigador.
Las ovejas estn muy cuidadas y a nivel visual no muestran ninguna diferencia con otros
corderos no transgnicos.
"A diferencia de los animales que se utilizan para producir alimentos, como la carne, a
stos nadie los va a sacrificar. Van a vivir el tiempo que corresponda", dijo Menchaca.
"Van a tener una vida de oveja normal", concluy.

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VENTAJAS:

Especificidad: la caracteristica requeridapuede elegirse con mucha mas precision

y asi los rasgos adicionales no deseados pueden reducirse al minimo.
Velocidad: se puede establecer una caracteristica deseada en una generacion,
mientras que en el caso de la reproduccion selectiva suelen ser necesarias
muchas generaciones.
Flexibilidad: existe la posibilidad de crear nuevas caracteristicas (cruces de
especies).
Economia: se puede introducir nuevas caractyeristicas en animales para reducir
sus necesidades de suplementacion alimenticios y tratamientos medicos.

DESVENTAJAS:

Salud del animal: la insercion de un transgen puede alterar la expresion del

genoma ( y por lo tanto las funciones del animal).
Transmision del virus: este es un tema particularmente preocupante en el caso
de la reproduccion de animales como donantes de tejidos para los
xenotrasplantes.
Diseminacion: los transgenes podrian transmitirse a la poblacion silvestre a
traves de la reproduccion normal.

REFERENCIA BIBLIOGRAFCA:
D Aubeterre, R. 1990. Curso sobre produccin de ovinos y caprinos. FONAIAP
lara. Barquisimeto Venezuela. Pag 250 251
http://www.animalresearch.info/es/avances-medicos/151/clonaci-n-de-laoveja-dolly/
http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/clonacion.htm
http://es.scribd.com/doc/94586947/Clonacion-de-Ovejas
http://cerezo.pntic.mec.es/~jlacaden/clona.html

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