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Manual de prcticas de laboratorio

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia


rea de Docencia Salud Pblica

UNIVERSIDAD AUTNOMA DEL ESTADO DE MEXICO


FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

MANUAL DE PRCTICAS DE
PARASITOLOGA

UNIDAD DE APRENDIZAJE PARASITOLOGA

M en C Jorge Estrada Botello

[Escriba texto]

Manual de prcticas de laboratorio


Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
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PREFACIO
La Parasitologa Veterinaria es una de las asignaturas ms importante en cualquier plan de
estudios de Medicina Veterinaria, por lo que es imprescindible contar con un Manual de Prcticas
de Laboratorio que contenga informacin bsica para el estudiante, facilitndole el aprendizaje, la
comprensin y la aplicacin de las tcnicas de diagnstico, as como la identificacin de los
diversos estadios evolutivos de los parsitos que afectan los animales domsticos, esto con la
finalidad de que sea capaz de reconocer y solucionar los problemas parasitarios, a los que se
enfrentar en su actividad profesional, aplicando las exploraciones parasitolgicas mas habituales
con el fin de prevenir, controlar y dar el tratamiento de las enfermedades que afectan con mayor
frecuencia a los animales domsticos.
En 1980, se elabor un Manual de Prcticas de Parasitologa Clnica Veterinaria, con el objetivo
de obtener el grado de Medico Veterinario Zootecnista, el MVZ. Valente Velzquez Ordoez,
utilizndose como material de consulta hasta la fecha, durante el ao 2011 se inicio el desarrollo
de un nuevo manual cuyo ttulo es: Manual de Tcnicas Diagnsticas en Parasitologa con el
objetivo de la obtencin del ttulo de Mdico Veterinario Zootecnista, presentando su evaluacin
profesional el da viernes 11 de enero de 2013, el MVZ Abraham Romero Marmolejo.
Conscientes de la necesidad de contar con un manual acorde al plan de estudios vigente y con la
finalidad de complementar varios aspectos de los documentos mencionados se dio a la tarea de
incluir una amplia gama de material fotogrfico y la estructuracin de cada prctica tomando en
consideracin la viabilidad del desarrollo de dichas prcticas.
El manual consta de 12 prcticas; las dos primeras prcticas dedicadas a las generalidades de
parasitologa, donde se aborda la identificacin del material y equipo del laboratorio a utilizar en
parasitologa y al uso adecuado de los microscopios y la medicin de microorganismos; la prctica
tres, cuatro y cinco esta relacionada a la toma, conservacin y envi de nuestras al laboratorio, de
la prctica seis a la once se lleva a cabo el desarrollo de diversas tcnicas diagnsticas en el
laboratorio y la prctica doce contempla la deteccin de parsitos externos en abejas., posterior al
desarrollo de las prcticas se tiene un anexo que contiene fotografas inditas de diversos estadios
de los parsitos.
El proceso de elaboracin de material didctico requiere de constante actualizacin, seguramente
el presente material presenta algunas deficiencias, sin embargo, es deseo del autor
complementarlo en todos sus aspectos, con el nico objetivo de seguir mejorando el proceso de
enseanza-aprendizaje de la parasitologa veterinaria.

FMVZ-UAEM, Toluca, Estado de Mxico, Junio, 2013


M en C Jorge Estrada Botello
Profesor de la FMVZ-UAEM

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Agradecimientos:
Quiero manifestar un sincero reconocimiento por la participacin activa y desinteresada del MVZ
Abraham Romero Marmolejo cuyo objetivo principal fue el de obtener el ttulo, y de que estuviera
de acuerdo en que se elaborar el presente documento
A los M. en C. Trinidad Beltrn Len y M. en C. Benjamn Valladares Carranza por su empeo en
la revisin del presente manual, aportando sus valiosos comentarios y sugerencias, siempre con la
finalidad de mejorar la calidad del documento que repercutir, en mejores profesionistas en un
futuro cercano.
Al personal que labora en el Departamento de Prcticas de la FMVZ-UAEM, por las oportunidades
y facilidades brindadas para el desarrollo de algunas de las prcticas en ese espacio acadmico,
especialmente a la Ing. Mara Lourdes Garca Bello.

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Contenido

Pg.
PREFACIO ........................................................................................................................................................ ii
Agradecimientos: ............................................................................................................................................. iii
PRCTICA 1. IDENTIFICACIN DE MATERIAL Y EQUIPO DE USO EN EL LABORATORIO
PARA ESTUDIOS DE PARASITOLOGA .................................................................................................... 1
PRCTICA 2. MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO (PTICO) Y ESTEREOSCPICO .. 6
CALIBRACIN DEL MICROSCOPIO COMPUESTO Y MEDICIN DE PARSITOS Y
ESTRUCTURAS PARASITARIAS ................................................................................................................. 8
CONSEJOS PRCTICOS PARA EL USO DEL MICROSCOPIO PTICO: ........................................10
PRCTICA 3, 4 Y 5. TOMA, CONSERVACIN Y ENVO DE MUESTRAS AL LABORATORIO DE
PARASITOLOGA. .........................................................................................................................................12
OBTENCIN DE ECTOPARSITOS .........................................................................................................20
PRCTICA 6. FROTIS DIRECTO EN HECES. .........................................................................................23
PRCTICA 7: TCNICA DE FLOTACIN PARA LA DETERMINACIN DE PARASITOSIS
OCASIONADAS POR PROTOZOARIOS Y NEMATODOS ....................................................................25
PRCTICA 8: DIAGNSTICO DE LAS PARASITOSIS OCASIONADAS POR TREMATODOS Y
CESTODOS ....................................................................................................................................................28
PRCTICA 9:TCNICA DE COPROCULTIVO (CULTIVO DE LARVAS DE NEMATODOS). ..........30
PRCTICA 10. TCNICA DE MIGRACIN LARVARIA (BAERMANN) ...............................................33
PRCTICA 11. TCNICA DE MC MASTER..............................................................................................36
PRCTICA 12. DETECCIN DE Varroa destructor (EXAMEN DE ABEJAS ADULTAS Y
DETRITUS). ....................................................................................................................................................39
ANEXO: Fotos a color ...................................................................................................................................42
LITERATURA REVISADA .............................................................................................................................46

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UNIDAD DE COMPETENCIA I
PRCTICA 1. IDENTIFICACIN DE MATERIAL Y EQUIPO DE USO EN EL LABORATORIO
PARA ESTUDIOS DE PARASITOLOGA
OBJETIVO: El discente conocer y utilizar de manera adecuada los materiales, reactivos y
equipo de acuerdo a la tcnica de diagnstico a desarrollar.
INTRODUCCIN: El laboratorio de parasitologa, es una herramienta til para la realizacin y
confirmacin de la posible presencia de parsitos, en muestras obtenidas adecuadamente, de
acuerdo al diagnstico presuntivo. El laboratorio de parasitologa cuenta con material de cristalera
y diverso, as como soluciones, colorantes y equipo esencial para llevar a cabo las tcnicas
diagnsticas ms comunes en parasitologa veterinaria. El reconocimiento de material y equipo de
laboratorio permitir llevar a cabo las tcnicas parasitoscpicas de mayor utilidad, ms
eficientemente, dicho material y equipo es el siguiente:
MATERIAL Y EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL:
El discente deber presentar el material y equipo solicitado para la realizacin de cada sesin
prctica.
De seguridad personal: Bata u overol, cubre bocas, guantes.

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Fig. 1. Material de cristalera


MATERIAL DE LABORATORIO (CRISTALERA). Descripcin de materiales de acuerdo a
numeracin (Fig. 1).
1. Caja Petri: En forma de plato plano con bordes elevados que consta de una base y
una tapa. En el rea de parasitologa nos sirve de apoyo para el depsito de
parsitos, cultivo de larvas y como depsito de heces para la identificacin de
huevecillos de elevado peso especfico.
2. Cubreobjetos: Placa de vidrio delgada, de forma cuadrada o rectangular que sirve
para colocarlo sobre frotis hmedos o fijos.
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3. Embudo: Instrumento empleado para trasvasar principalmente lquidos y otros


materiales slidos granulares a recipientes con bocas estrechas.
4. Matraz Erlen Meyer: Tiene forma acampanada con el fondo plano, graduado, sirve
para preparar medios de cultivo, reactivos, colorantes, soluciones o para mantener
en medio lquido una gran cantidad de microorganismos.
5. Pipeta: Tubo de vidrio o plstico de punta larga o corta, que es utilizada para separar
muestras lquidas y adems, permite depositar sustancias de volumen variable.
6. Portaobjetos: Placa de vidrio rectangular indispensable en la realizacin de frotis.
7. Probeta graduada: Son cilindros de dimetro variable. La base de la probeta es
amplia y plana y en el extremo superior generalmente tiene doblado el borde en
forma de pico. Su capacidad es variable ya que las hay desde 10 mL hasta 2000 mL
o ms. Son utilizados para medir volmenes variables.
8. Termmetro: El termmetro es un instrumento que se usa para medir la temperatura.
Su presentacin ms comn es de vidrio, el cual contiene un tubo interior con
mercurio, que se expande o dilata debido a los cambios de temperatura. Para
determinar la temperatura, el termmetro cuenta con una escala debidamente
graduada, que la relaciona con el volumen que ocupa el mercurio en el tubo.
9. Tubos de ensayo: Tubo de cristal con base convexa, y en el otro extremo una
abertura que puede ser lisa o con rosca, hay en diversos tamaos, sirven para
contener sustancias lquidas, slidas o semislidas.
10. Varilla de vidrio: Instrumento que consiste en un fino cilindro macizo de vidrio (puede
ser de punta roma), que sirve para agitar soluciones.
11. Vaso de precipitado: Tiene forma cilndrica con base plana, y en su borde superior
una ranura triangular, que sirve para verter lquidos, son graduados y los hay de
diferentes capacidades.
12. Vidrio de reloj: Permite contener sustancias, se utiliza principalmente para cubrir
recipientes, pesar y transferir slidos.
SOLUCIONES:

1
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Fig. 2. Soluciones de uso en Parasitologa.


Descripcin de soluciones de acuerdo a numeracin (Fig. 2).
1. Agua destilada: Es aquella que como todo tipo de agua, su composicin se basa en
la unidad de molculas H2O, solo que se le han eliminado los iones e impurezas
mediante la destilacin.

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2. Alcohol: El alcohol etlico, es un producto que se obtiene a partir de la melaza, uno


de los subproductos de la caa de azcar, actualmente tiene diferentes usos y
aplicaciones.
3. Formol (al 5 y 10%): Es el aldehdo frmico, obtenido por oxidacin cataltica del
alcohol metlico. El formol es un lquido incoloro, con olor sofocante, miscible en
agua, acetona, benceno, cloroformo, alcohol y ter etlico.
4. Solucin glucosada: Solucin isotnica (entre 275 y 300 miliosmoles/L) de glucosa.
Para su elaboracin se requiere de 1280 g. de azcar, 1000 mL de agua caliente y
20 g de fenol
5. Solucin saturada de sal (S.S.NaCl): Es aquella en la que se ha disuelto la mxima
cantidad de soluto que pueda disolverse, a una temperatura determinada (25C).
Est compuesta de la siguiente manera: NaCl = 331 g, H2O = 1000 mL.
6. Sulfato de zinc (ZnSO4). Compuesto qumico, cristalino, incoloro y soluble en agua,
aunque siempre va acompaado de un determinado nmero de molculas de agua.
COLORANTES:

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Fig. 3. Colorantes de uso en Parasitologa


Descripcin de colorantes de acuerdo a numeracin (Fig. 3).
1. Azul de metileno: Colorante cargado positivamente.
2. Giemsa: Es un colorante compuesto ya que es una mezcla de colorante Giemsa,
azul de metileno fosfatado y buffer fosfatado gota gruesa Giemsa.
3. Lugol: Es una disolucin de yodo molecular y yoduro potsico en agua destilada.
4. Violeta de genciana (Cloruro de metilrosanilina): Colorante de anilina, utilizada para
teir ncleos. Tambin tiene propiedades bactericidas, bacteriostticas y actividad
fungicida.

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Fig. 4. Materiales utilizados en Parasitologa


Descripcin de materiales de acuerdo a numeracin (Fig. 4).
1. Coladera: Instrumento que sirve de filtro, evitando la introduccin de partculas
mayores al tamao de los orificios de ste.
2. Cuchara: Utensilio que consiste, en una pequea cabeza cncava, en el extremo de
un mango. Que sirve para la obtencin de la muestra.
3. Frascos de diferentes tamaos: Recipiente de forma circular, que permite el
transporte, almacenamiento y conservacin de la muestra.
4. Gasas: Malla de algodn de uso mltiple.
5. Guantes: Prenda que cubre la mano, adaptndose a su forma y que tiene una funda
para cada uno de los dedos; se usa para proteger esta parte del cuerpo.
6. Jeringas: Consiste en un embolo insertado en un tubo que tiene una pequea
abertura en uno de sus extremos por donde se expulsa el contenido de dicho tubo,
las hay en diversos volmenes.
7. Vasos de plstico: Recipiente destinado a contener lquidos.
EQUIPO DE LABORATORIO:

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Fig. 5. Equipo de uso en Parasitologa


Descripcin del equipo de uso en laboratorio, de acuerdo a numeracin (Fig. 5)

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1. Balanza granataria: Es un tipo de balanza, utilizada para determinar o pesar la masa


de objetos. Suelen tener capacidades de 2 2,5 kg y medir con una precisin de
hasta 0,1 0,01 g.
2. Centrfuga: Aparato que pone en rotacin, una muestra para separar por fuerza
centrifuga sus componentes o fases (generalmente una slida y una lquida), en
funcin de su densidad.
3. Equipo Mc Master (cmara y tubo): Consiste en una cmara de conteo, que posibilita
el examen microscpico de un volumen conocido de suspensin de materia fecal (2 x
0.15 mL). Tambin se integra un tubo que permite la correcta homogenizacin, y
equilibrio de la muestra fecal, con la solucin glucosada.
4. Microscopio Estereoscpico: Instrumento que hace posible la visin tridimensional de
los objetos.
5. Microscopio Compuesto (ptico): Se trata de un instrumento ptico, que contiene
una o varias lentes u objetivos, que permiten obtener una imagen aumentada del
objeto y que funciona por refraccin
6. Pinza Mhr: Es un instrumento metlico, que se utiliza para obstruir el paso de un
lquido o gas, a travs del tubo ltex.
7. Soporte universal: Es un utensilio de hierro que permite sostener varios recipientes.
Pieza bsica en el montaje de los sistemas y aparatos como pinzas y anillos de
metal.
MATERIAL Y EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL:
El discente deber presentar el material y equipo solicitado para la realizacin de cada sesin
prctica.
De seguridad personal: Bata u overol, cubrebocas, y guantes
CUESTIONARIO:
1. Menciona los materiales de cristal tiles para medir volmenes

2. Menciona el material necesario para trasvasar lquidos o soluciones

3. Equipo necesario para llevar a cabo el desarrollo prctico en la parasitologa

4.- Equipo de uso para el pesaje de las muestras

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UNIDAD DE COMPETENCIA I
PRCTICA 2. MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO (PTICO) Y ESTEREOSCPICO

OBJETIVO: Identificar las estructuras que integran a cada uno de los microscopios, as como su
correcta manipulacin.
INTRODUCCIN: Los microscopios son aparatos que, en virtud de las leyes de formacin de
imgenes pticas, aumentadas a travs de lentes convergentes, permiten la observacin de
pequeos detalles de una muestra dada que a simple vista no se percibiran. Para un manejo
eficaz del microscopio, es necesario conocer cmo est constituido; por lo que a continuacin se
hace una descripcin de las partes que lo integran, tanto el microscopio compuesto como el
estereoscpico.
MATERIAL Y EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL:
El discente deber presentar el material y equipo solicitado para la realizacin de cada sesin
prctica.
De seguridad personal: Bata u overol.
PARTES QUE INTEGRAN EL MICROSCOPIO COMPUESTO.

Fig. 6. Microscopio compuesto

Descripcin de las partes que integran al microscopio compuesto, basado en la numeracin de la


imagen (Fig. 6).
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1. Oculares. Los oculares estn constituidos generalmente por dos lentes, dispuestas sobre
un tubo corto.
2. Cabeza. Permite el soporte, entre los oculares y el brazo.
3. Brazo. Sostiene el tubo en su porcin superior, y por el extremo inferior se adapta al pie.
4. Revolver: Pieza giratoria provista de orificios, en los cuales se enroscan los objetivos: lente
panormico (4x), seco dbil (10x), seco fuerte (40x), lente de inmersin (100x).
5. Pinzas sujetadoras de la preparacin. Estructura que permite la fijacin de la muestra, o
preparacin a observar.
6. Platina mvil. Es una pieza metlica plana, en la que se coloca la preparacin u objeto que
se va a observar. Presenta un orificio en el eje ptico del tubo, que permite el paso de los
rayos luminosos a la preparacin.
7. Tornillo micromtrico. Mediante el movimiento casi imperceptible, que se produce al
deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y ntido de la preparacin.
8. Tornillo macromtrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio,
deslizndose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos movimientos largos
permiten el enfoque rpido de la preparacin.
9. Tornillo de desplazamiento de la platina. Tornillo que permite desplazar la preparacin,
sobre la platina, en sentido longitudinal y transversal.
10. Palanca o tornillo del diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
11. Diafragma. Se encuentra sobre el reflector de la fuente de iluminacin, y abrindolo o
cerrndolo permite graduar la intensidad de la luz.
12. Condensador. El condensador est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es
concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparacin. El condensador se halla
debajo de la platina.
13. Pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio, y en l se encuentra la
fuente de iluminacin.
PARTES QUE INTEGRAN AL MICROSCOPIO ESTEREOSCPICO

Fig. 7. Microscopio estereoscpico.


Descripcin de las partes que integran al microscopio estereoscpico, de acuerdo a la numeracin
de la imagen (Fig. 7).
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1. Oculares: Son los sistemas de lentes, ms cercanos al ojo del observador, situados en la
parte superior del microscopio.
2. Cabeza: Estructura en la que se incrustan los oculares.
3. Tornillo de enfoque: Permite obtener la visibilidad precisa, de la muestra a estudiar.
4. Perilla de ajuste de zoom: Permite ajustar la visibilidad de la muestra, de acuerdo al
objetivo seleccionado.
5. Brazo: Constituye el soporte del microscopio.
6. Objetivo: Permite observar la imagen, a diferentes tamaos.
7. Base: Es la base del microscopio y tiene forma rectangular.
8. Estructura mvil, de coloracin oscura en uno de sus lados y en otro de coloracin blanca
para ser utilizada de la mejor manera que se requiera durante la observacin.
CALIBRACIN DEL MICROSCOPIO COMPUESTO Y MEDICIN DE PARSITOS Y
ESTRUCTURAS PARASITARIAS
OBJETIVO: Al trmino de la prctica, el alumno, aplicar el mtodo para la calibracin del
microscopio compuesto, con la finalidad de realizar la medicin de parsitos y/o estructuras
macroscpicas y microscpicas
INTRODUCCIN: La determinacin del tamao de las estructuras parasitoscpicas o de parsitos
adultos, es de gran utilidad tanto para el parasitlogo como para el profesor o investigador, para
tener el tamao preciso, de los diferentes estadios de los parsitos, y as poder establecer las
caractersticas morfolgicas diferenciales de cada una de las fases. Para las mediciones
micromtricas se utilizan dos instrumentos: el micrmetro ocular y el micrmetro objetivo, siendo la
unidad bsica de medida la micra (0.001).
Para llevar a cabo la medicin de parsitos microscpicos y macroscpicos, es necesario el
material y equipo que a continuacin se enlista:
Microscopio compuesto
Escalas objetiva y ocular micromtrico
Preparaciones fijas de parsitos o huevecillos
Charola plana para diseccin
Regla metlica o de plstico
Cestodos y nematodos adultos
Ocular micromtrico:
Es una pieza de vidrio que se adapta al ocular ordinario, la que contiene una escala grabada que
no tiene valor absoluto, su valor depende del objetivo empleado, es decir, de los aumentos con
que se trabaje; se trata de unidades relativas, cuyo autentico valor nicamente debe determinarse
de acuerdo con el microscopio empleado, y con cada uno de los objetivos de dicho microscopio.
Objetivo micromtrico:
Consta de una placa de vidrio, sobre la cual se ha grabado 1 mm dividido en 100 partes iguales.
Por lo tanto cada divisin equivale a 10 m.
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METODOLOGA PARA LA CALIBRACIN DEL MICROSCOPIO COMPUESTO:


1. Colocar en la platina del microscopio, la escala objetiva micromtrica y enfocar con el
objetivo que se desea calibrar 4x (lente panormico),10x (seco dbil), 40x (seco fuerte), y
100x (lente de inmersin)
2. Instalar la escala ocular micromtrica, en el tubo ocular correspondiente, enfocar y hacer
coincidir la primera lnea de la escala objetiva (desplazndola), con la primera lnea de la
escala ocular (girndola), observar donde vuelven a coincidir las lneas, tanto de la escala
objetiva como de la escala ocular
3. Contar el nmero de espacios, al punto de coincidencia de ambas escalas y aplicar la
siguiente frmula:
Nmero de espacios de la escala objetiva x 10 = Factor en de la escala ocular
Nmero de espacios de la escala ocular
4. Retirar la escala objetiva micromtrica de la platina
5. Colocar sobre la platina y enfocar la preparacin a medir
6. Contar el nmero de espacios, a lo largo y a lo ancho y multiplicar por el factor en del
ocular micromtrico, de acuerdo al objetivo calibrado (4x, 10x, 40x y 100x)
Ejemplo:

Calibracin del objetivo 10x: 10 espacios de la escala micromtrica ocular (Esc. Oc.)
coinciden exactamente con 10 espacios de la escala micromtrica objetiva (Esc. Ob.), si
aplicamos la frmula: nmero de espacios de la Esc. Ob. X 10 dividido entre el nmero de
espacios de la Esc. Oc., obtenemos el valor del factor en , que para este objetivo es de
10

Fig. 8. Escala micromtrica con el objetivo 10x

Calibracin del objetivo 40x: 20 espacios de la escala micromtrica ocular (Esc. Oc.),
coinciden exactamente con 5 espacios de la escala micromtrica objetiva (Esc. Ob.), si
aplicamos la formula: nmero de espacios de la Esc. Ob. X 10 dividido entre el nmero de
espacios de la Esc. Oc., obtenemos el valor del factor en , que para este objetivo es de
2.5

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Fig. 9. Escala micromtrica con el objetivo 40x

Cabe hacer mencin, que este mtodo de calibracin es exclusivo del microscopio que se calibra,
de ser necesario el uso de otros microscopios, se deber calibrar cada microscopio por separado y
cada objetivo de este a utilizar.
Pasos para determinar el tamao:
Colocar la muestra en la platina
Ubicar la muestra a medir, coloque la regla del objetivo paralela por el eje longitudinal o
transversal, de acuerdo a lo que se quiera medir
CONSEJOS PRCTICOS PARA EL USO DEL MICROSCOPIO PTICO:

Se debe mantener apagada la luz del microscopio, siempre que no se est utilizando, ya
que la vida media de la bombilla es corta.
Siempre se debe comenzar el enfoque con el objetivo de menor aumento.
Salvo que se indique lo contrario no utilizar nunca el objetivo de inmersin, ya que se
requiere un aceite especial sin el que, adems de no enfocar bien, existe una gran
probabilidad de daar la lente al rozar con el cubreobjetos.
Una vez enfocada la laminilla, procurar recorrer, con los tornillos de la platina, toda la
preparacin, realizar movimientos en forma de almena, con la finalidad de cubrir todo el
campo

PASOS A SEGUIR PARA EL USO EFICAZ DEL MICROSCOPIO:


1. Enchufar el microscopio al regulador de corriente y ste a la red elctrica (nunca enchufar
directamente a la red, y siempre que no se est observando por el microscopio hay que
apagar la luz).
2. Colocar la preparacin sobre la platina, de forma que la estructura a observar, quede en el
orificio central de la platina.
3. Ubicar el objetivo de menor aumento, cuyo amplio campo visual, facilita el hallazgo de
estructuras importantes.
4. Subir la platina accionando el tornillo macromtrico, y observando la preparacin desde
fuera hasta alcanzar el tope superior. En ningn caso tocar la preparacin con los objetivos.
5. Para observar la preparacin a mayores aumentos cambiar de objetivo con un simple giro
del revlver.
6. Para observar otros campos, desplazar la preparacin, moviendo los tornillos de la platina.
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7. Para cambiar la laminilla o preparacin, primero se baja la platina, se coloca el objetivo de


menor aumento, despus se quita la laminilla y se coloca otra.
8. Una vez terminada la sesin prctica, apagar el microscopio, desenchufar el regulador y
por ltimo se guarda en su estuche
El microscopio estereoscpico hace posible la visin tridimensional de los objetos. Consta de dos
tubos oculares y dos objetivos pares para cada aumento. Este microscopio ofrece ventajas para
observaciones que requieren pequeos aumentos.
ILUMINACION DE KOHLER: Esta tcnica tiene como objetivo regular el paso de los rayos de luz
del microscopio desde la propia fuente luminosa, facilitando una observacin ms clara y confiable.
La metodologa es la siguiente:
1. Levantar el condensador hasta el tope y retirar los oculares del tubo, mover el foco hacia
adelante y atrs hasta que aparezca iluminado el lente posterior del objetivo. Poner una
preparacin en la platina, colocar los oculares y enfocar con el objetivo 10x.
2. Cerrar casi por completo el diafragma de campo luminoso y llevar su imagen borrosa en la
preparacin hasta el centro del campo visual, descender ligeramente el condensador para
enfocar ntidamente la preparacin y el diafragma.
3. Abrir el diafragma de campo luminoso hasta quedar libre la totalidad del campo visual.
4. Cerrar ligeramente la posicin de la montura de la lmpara de microscopa hasta quedar el
campo visual lo ms uniformemente iluminado.
5. Abrir completamente el diafragma del condensador para que la imagen se vea muy
iluminada. Cerrarlo de nuevo slo lo necesario para que las estructuras ms importantes de
la imagen ya no estn sobre iluminadas, sino que aparezcan con buen contraste.
CUESTIONARIO:
1. Menciona los objetivos con los que cuenta el microscopio ptico

2. Qu estructura regula la cantidad de luz que entra en el condensador

3. Escriba la formula de la calibracin del microscopio compuesto

4. Anote las caractersticas de la escala micromtrica objetiva

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UNIDAD DE COMPETENCIA I, III, IV, V, VI Y VII


PRCTICA 3, 4 Y 5. TOMA, CONSERVACIN Y ENVO DE MUESTRAS AL LABORATORIO
DE PARASITOLOGA.
OBJETIVO: Identificacin de las tcnicas ms comunes de recoleccin, conservacin y envi de
muestras al laboratorio
Reconocer los medios de conservacin ms adecuados para la conservacin de muestras para
diagnstico de parasitosis
El discente deber manejar los criterios adecuados para que las muestras renan las condiciones
y caractersticas necesarias para ser utilizadas en el diagnstico parasitolgico.
INTRODUCCIN: La capacidad para confirmar la sospecha de una enfermedad, est
directamente relacionada con la calidad de las muestras remitidas, para el diagnstico. El
profesional de campo tiene la responsabilidad de seleccionar, recolectar, preservar y enviar
adecuadamente las muestras convenientes, para el diagnstico. Las muestras ideales, se obtienen
de animales vivos, en distintos estadios de la enfermedad. Para la recoleccin de cualquier tipo de
muestra, se debe utilizar material limpio y seco. Los envases utilizados para el envo de muestras
deben ser en lo posible irrompibles, hermticos y de dimensiones adecuadas. Las precauciones a
considerar, varan con la clase de muestra, temperatura ambiente y transporte
MATERIAL Y EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL:
El discente deber presentar el material y equipo solicitado para la realizacin de cada sesin
prctica.
De seguridad personal: Bata u overol, cubre bocas, guantes y gafas o googles,
CRITERIOS IMPORTANTES A TENER EN CUENTA INDEPENDIENTEMENTE
DEL TIPO DE MUESTRA
1.
2.
3.
4.
5.

Deben ser obtenidas, lo ms frescas posibles y preservadas correctamente.


Cada muestra, debe ser identificada y rotulada.
Junto con la muestra, se debe incluir la historia clnica.
Determinar con claridad, el tipo de estudio que se requiere.
Mencionar si existe programa de desparasitacin.

ENVIO DE MUESTRAS AL LABORATORIO.


Las muestras a enviar al laboratorio, deben ser colocadas en un recipiente hermtico, de vidrio o
plstico. El recipiente debe estar correctamente empaquetado, para evitar que se rompa durante el

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transporte (por ejemplo: con aserrn, papel o algodn). En los casos en que se requiera
refrigeracin, sta se puede realizar de diferentes formas, como seran:

Con hielo natural de un refrigerador, en un recipiente hermtico, y el frasco de la muestra


colocarlo dentro del mismo (la conserva de 8 a 24 horas).
El uso de refrigerante, es de gran utilidad para la conservacin de cualquier tipo de
muestra.
Otro mtodo de refrigeracin ms prolongado, consiste en el empleo de hielo seco (bixido
de carbono slido).
En este caso, se coloca el recipiente que contiene la muestra, en una bolsa de plstico, la
que se rodea con hielo seco envuelto en papel. Nunca colocar el hielo seco en una caja
hermtica, pues la volatizacin del bixido de carbono, puede causar una explosin. El
recipiente ideal cuando se utiliza hielo seco, es una caja de unicel, para evitar el cierre
hermtico

COLECTA, CONSERVACIN Y ENVO DE HECES:


MATERIAL:
Guantes de plstico.
Bolsas de polietileno.
Esptulas de madera.
Recipientes de plstico con boca ancha, con tapa a rosca o tapa a presin.
Formol al 10%.
Marcadores o lpiz.
Cinta adhesiva.
Varilla de vidrio punta roma.
Refrigerante o hielo.
Dicromato de potasio al 2%
Tabla 1.Cantidad apropiada de heces por especie.
OVINOS Y CAPRINOS
30 g.
BOVINOS
80-100 g.
EQUINOS
80-100 g.
SUINOS
30-50 g.
PERROS Y GATOS
AVES Y CONEJOS

10-15 g.
Una muestra por lote

MTODO
Obtencin de heces.
En los bovinos y equinos es prctico e higinico obtener la muestra del recto con un guante de
plstico.

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Fig. 10. Sujecin del animal

Fig. 11 .Entrada al recto del animal

1. Cuando se obtiene la cantidad de heces suficiente el guante es volteado hacia adentro,


sirviendo de esta manera como recipiente de recoleccin.

Fig. 12. Coleccin de la muestra

Fig. 13. Involucin del guante

2. Se cierra cuidadosamente tratando de eliminar todo el aire y se identifica con los datos
necesarios para su posterior envo al laboratorio.

Fig. 14. Muestra fecal obtenida.

Fig. 15. Identificacin de la muestra.

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En ovinos, caprinos y porcinos se toma la muestra directamente del recto, previo masaje en la
regin perianal o bien, introduciendo los dedos ndice y medio por va rectal.

Fig. 16. Masaje en regin perianal.

Fig. 17. Obtencin de la muestra.

En caninos y felinos, se puede realizar la toma de la muestra introduciendo los dedos ndice y
medio o bien una varilla de vidrio por va rectal, de no ser posible lo anterior, colocar al animal en
un local o superficie limpia y colectar las heces inmediatamente despus de la defecacin o bien
de la parte superior de estas. La cantidad de heces requerida es de acuerdo a la especie, (Tabla
1).
En aves es posible obtener una muestra representativa colocando un papel marrn debajo de las
perchas (8 hojas de 1 m x 0.5 m) por cada 1000 animales seleccionados al azar. Por la maana
las muestras cecales y heces intestinales son recolectadas separadamente.
COLECTA CONSERVACIN Y ENVO DE SANGRE
Material:
Tubos vacutainer con anticoagulante.
Jeringas y agujas hipodrmicas de varios calibres.
Alcohol metlico y del 96%
Caja de poliuretano
Hielo o refrigerantes
Etiquetas auto adheribles y lpiz marcador.
MTODO:
En todos los casos el sitio de puncin debe ser recortado y frotado con alcohol para eliminar el
riesgo de contaminacin de la muestra.

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Fig. 18. Rasurado regin yugular de bovino

Fig.19. Rasurado regin yugular de oveja

Fig. 20. Asepsia previa a la toma de muestra en bovinos y ovinos.


En caballos la sangre se extrae de las venas yugulares utilizando agujas finas (calibre 21) de 3.5
cm y una jeringa o por medio de vacutainer.
La extraccin de sangre en perros y gatos puede hacerse utilizando aguja y jeringa de la vena
ceflica o tarsal recurrente que son elevadas utilizando una ligadura o bien por un asistente
haciendo presin digital.
En bovinos, ovinos y caprinos tambin se utiliza la vena yugular, que se eleva por presin digital y
se inserta una aguja de 5 cm, calibre 16 o 18 (o con el uso del vacutainer).

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Fig. 21. Presin digital sobre vena yugular en bovinos, ovinos y equinos

Fig. 22. Preparacin del material para la obtencin de la muestra.

Fig. 23. Introduccin de la aguja y extraccin de la muestra en bovinos.

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Fig. 24. Introduccin de la aguja y extraccin de la muestra en ovinos.

Fig. 25. Extraccin de la muestra en equinos.


Cuando se cuenta con manga de manejo, el sitio ms conveniente para muestrear es la vena
coccgea en la base de la cola. Se procede a elevar sta ltima y se inserta la aguja dos a tres cm
directamente en la lnea media, de acuerdo a la condicin corporal del animal, a la altura del
segundo o tercer espacio intervertebral coccgeo.

Fig.26. Asepsia de regin caudal.

Fig.27. Sujecin de la cola e introduccin de la aguja.


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Fig. 28. Extraccin de la muestra en vena coccgea.


Despus de obtenida la muestra en esta forma, se retira la aguja de la jeringa, y se procede a
depositar la muestra en un tubo guiando la sangre por las paredes de dicho tubo con el fin de
evitar la hemolisis.

Fig. 29. Jeringa sin aguja.

Fig. 30. Depsito de muestra por paredes de tubo.

Fig. 31. Cierre del tubo con la muestra.

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OBTENCIN DE ECTOPARSITOS
OBJETIVO: Realizar la colecta, conservacin, envi al laboratorio e identificacin de parsitos
externos ms comunes en los animales domsticos.
INTRODUCCIN: En muchas ocasiones es posible colectar parsitos directamente del cuerpo de
los animales, ya sea in vivo o durante la necropsia, en cualquiera de los casos la colecta deber
realizarse de manera sistemtica practicando un examen exhaustivo con la finalidad de no perder
material que podra resultar muy valioso para un diagnstico final.
COLECTA DE ECTOPARSITOS:
Garrapatas: Debido al dao que les causan a los animales directamente (consumo de sangre), e
indirectamente (vectores de algunos microorganismos patgenos), causantes de enfermedades las
que originan prdidas considerables a la ganadera en general, por lo que se deber llevar a cabo
la obtencin correcta de este parsito evitando daar sus estructuras bucales ya que complicara
su identificacin en el laboratorio (ver Anexo).
MATERIAL Y EQUIPO:
Frascos con tapa con pequeas perforaciones y sin perforaciones
Pinzas para la obtencin adecuada de garrapatas
Papel filtro
Alcohol al 70%
Solucin salina fisiolgica
Tcnica de obtencin: Se colectan directamente del animal con pinzas especiales diseadas para
este objetivo, y girando la mano como si llevar a cabo la accin de destapar una botella. Se debe
retirar el gnatosoma completo en cualquiera de las formas de obtencin de la muestra; de acuerdo
al objetivo se pueden colectar las garrapatas y depositarlas en un frasco con alcohol al 70% o bien
enviarlas vivas en frascos cuyas tapas presenten pequeas perforaciones, y se introduce papel
filtro en el fondo, humedecido con SSF para su posterior envo.
Tcnica de raspado de piel para colecta de ectoparsitos (ver Anexo):
MATERIAL Y EQUIPO:
Hoja de bistur
Glicerina o aceite mineral
Portaobjetos
Cubreobjetos
Pinzas
Alcohol
ter.
MTODO:
1. En las lesiones sugerentes de sarna se colocan una o dos gotas de glicerina.

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Fig. 32. Aplicacin de glicerina en la zona a realizar el raspado.


2.

Con una hoja de bistur, sujetada entre el pulgar y el dedo ndice y mantenida
perpendicularmente a la piel, se hace un raspado profundo de la misma o superficial.

Fig. 33. Forma correcta de sujetar el bistur y realizar el raspado de piel.


3.

El material que se queda adherido en la hoja de bistur se coloca entre el cubreobjetos y


portaobjetos y se examina en el microscopio compuesto (ver Anexo).

Fig. 34. Aplicacin del material

Fig. 35. Presentacin final.

Nota: se recomienda hacer varios raspados en diferentes partes del cuerpo. En este caso la
muestra se puede colocar en tubos de ensayo con hidrxido de sodio o de potasio al 10%. Se
centrifuga a 2000 rpm x 2 minutos y se observa el sedimento en el microscopio ptico.
MATERIAL Y EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL:
El discente deber presentar el material y equipo solicitado para la realizacin de cada sesin
prctica.
De seguridad personal: Bata u overol, cubrebocas, y guantes
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CUESTIONARIO
1. Mencionar dos tcnicas de recoleccin de muestras en parasitologa
2. Tipos de conservadores utilizados en muestras para diagnstico parasitolgico

3. Lugar indicado para la toma de muestras sanguneas


4. Qu cantidad de muestra se enva para diagnstico en:
a. Grandes especies
b. Pequeas especies

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UNIDAD DE COMPETENCIA III, IV, V Y VI


PRCTICA 6. FROTIS DIRECTO EN HECES.
OBJETIVO: El discente conocer y aplicar las tcnicas coproparasitoscpicas utilizadas en el
diagnstico de las parasitosis (gastrointestinales, pulmonares y sistmicas), identificando distintas
formas de protozoos (trofozoitos, quistes u ooquistes), helmintos (progltidas, huevos y adultos,
larvas), (ver Anexo).
INTRODUCCIN: Existe una variedad de tcnicas que se utilizan segn el agente parasitario que
se desea buscar, por lo que se deben conocer las ventajas y desventajas de cada una para
solicitarlas e interpretarlas en forma adecuada. Las tcnicas directas se basan en el diagnstico
morfolgico de los distintos estadios de los parsitos.
MATERIAL Y EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL:
El discente deber presentar el material y equipo solicitado para la realizacin de cada sesin
prctica.
De seguridad personal: Bata u overol, cubre bocas, guantes y gafas o googles,
MATERIAL Y EQUIPO:
Solucin saturada de NaCl
Lugol
Portaobjetos
Cubreobjetos
Aplicadores de madera
Microscopio ptico
Heces
MTODO:
1. Depositar una gota de solucin salina fisiolgica en un cubreobjetos y en el otro extremo
una gota de lugol.

Fig. 36. Aplicacin de solucin salina y lugol.


2. Con la ayuda de un aplicador de madera se toma una muestra de aproximadamente 1 a 4
mg de heces, se mezcla con la solucin salina y se repite la misma accin con el lugol.
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Fig. 37. Muestra a observar en el microscopio.


3. Observar al microscopio a 10x y 40x.

Fig. 38. Observacin al microscopio compuesto.


CUESTIONARIO
1. Ventajas y limitantes de sta tcnica

2. Desventajas de la tcnica
3. Material y equipo para el desarrollo de la tcnica
4. Cantidad de heces a utilizar

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UNIDAD DE COMPETENCIA III Y VI


PRCTICA 7: TCNICA DE FLOTACIN PARA LA DETERMINACIN DE PARASITOSIS
OCASIONADAS POR PROTOZOARIOS Y NEMATODOS
OBJETIVO: Realizar esta tcnica cualitativa, observar e identificar los elementos parasitarios
encontrados en las muestras fecales a estudiar. Interpretando la presencia de huevecillos u
ooquistes de los diversos gneros parasitarios
INTRODUCCIN: Esta tcnica se basa en la diferencia que existe entre el peso especfico del
liquido de dilucin empleado y de los huevecillos presentes en la muestra (de menor peso
especfico) de helmintos y ooquistes de coccidias. La densidad o peso especfico de la solucin a
utilizar deber ser mayor de 1.200, considerando que la mayora de huevos y quistes tienen
densidades entre 1.050 y 1.150; siendo una excepcin los de trematodos y de algunos cestodos,
que requieren densidades de 1.300 a 1.350, utilizndose para este tipo de parsitos soluciones
con densidades mayores.
MATERIAL Y EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL:
El discente deber presentar el material y equipo solicitado para la realizacin de cada sesin
prctica.
De seguridad personal: Bata u overol, cubre bocas, guantes y gafas o googles,
MATERIALY EQUIPO:
Vasos
Cucharas
Coladeras
Tubos de ensayo
Cubreobjetos
Portaobjetos
Aplicador de madera
Solucin
saturada
de sal (S.S.NaCl)
Solucin
saturada
de azcar
Asa de micromel
Agua
Microscopio ptico
Centrifuga
Lugol
Heces

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PROCEDIMIENTO:
1. Depositar una muestra de 3 a 4 gramos de heces a un vaso de plstico y homogenizar.

Fig. 39. Depsito de la muestra en el vaso.


2.

Administrar agua al vaso y con la ayuda de una cuchara de aluminio o plstico disolver la
muestra.

Fig. 40. Disolucin de la muestra.


3. Depositar el contenido a otro vaso a travs de una coladera.
4. Depositar la muestra en un tubo de ensaye, y enrasar con otro tubo para centrifugar

Fig. 41. Llenado de tubos.


5. Centrifugar a 2500 rpm durante 3 minutos, colocando frente a frente los tubos aforados

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Fig. 42. Centrifuga con tubos para flotacin.


6. Decantar los tubos y volver a aforar con solucin saturada de Na Cl.
7. Volver a centrifugar a 2500 rpm durante 3 minutos.
8. Con la ayuda de un asa obtener unas gotas del sobrenadante, colocarlas sobre un
portaobjetos y cubrir con el cubreobjetos.

Fig. 43. Obtencin del sobrenadante.


9. Observar al microscopio con el objetivo 10x y 40x.
10. Con el apoyo de imgenes de huevecillos, realizar la identificacin de los parsitos que
pudieran estar presentes en las muestras (ver Anexo).
CUESTIONARIO
1. Cul es el principio en el que se basa la tcnica
2. Importancia de la presencia de diversos estadios parasitarios en la muestra
3. Gneros de parsitos que pueden identificarse con esta tcnica
4. Puntos de inters a tener en cuenta al hacer uso de la centrfuga

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UNIDAD DE COMPETENCIA IV Y V
PRCTICA 8: DIAGNSTICO DE LAS PARASITOSIS OCASIONADAS POR TREMATODOS Y
CESTODOS
OBJETIVO: Desarrollar la tcnica de sedimentacin para llevar a cabo la identificacin y
diagnstico de los trematodos y de cestodos en muestras (heces) obtenidas de animales
Diferenciar los mecanismos fisiopatolgicos de los trematodos y de los cestodos hacia el
hospedero. Evaluar los daos ocasionados en hgados de decomiso (obtenidos en rastro), as
como la identificacin de Fasciola heptica en sus diferentes fases.
INTRODUCCIN: Esta tcnica se basa en la diferencia existente del agua pura (tibia) respecto al
peso especfico de los huevecillos, los cuales al tener mayor peso tienden a depositarse en el
fondo del recipiente que los contiene. Con el uso de esta tcnica se observan huevos pesados
como los de trematodos ejemplo, Fasciola heptica y Paramphistomum spp., o de nematodos
como seran nematodirus a los ascridos (de elevado peso especfico).
MATERIAL Y EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL:
El discente deber presentar el material y equipo solicitado para la realizacin de cada sesin
prctica.
De seguridad personal: Bata u overol, cubrebocas, guantes y gafas o googles,
MATERIAL Y EQUIPO:
Agua tibia, 37 C
Lugol o azul de metileno
Cuchara
Vaso
Vidrio de reloj o caja Petri cuadriculada
Coladera
Heces
Tamices de diferentes calibres
Microscopio estereoscpico
Microscopio compuesto
MTODO:
1. Depositar una muestra de 3 a 4 gramos de heces en un vaso y homogenizar.
2. Agregar agua tibia, con la ayuda de una cuchara de aluminio o plstico disolver la muestra
homogenizndola.
3. Depositar el contenido a otro vaso a travs de la coladera de malla fina.
4. Dejar reposar la muestra hasta que exista una clara separacin entre la parte lquida y el
sedimento (5 minutos aproximadamente).
5. Verter el lquido sobrenadante, dejando el sedimento solamente.
6. Volver a repetir esta accin hasta que la solucin o muestra se encuentre lo ms posible
libre de partculas que obstaculicen su observacin.

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Fig. 44. Tcnica de sedimentacin.


7. Decantar el lquido sobrenadante y el sedimento, depositarlo en una caja Petri vidrio de
reloj, agregar dos a tres gotas de lugol para hacer resaltar los huevos, y observar en el
microscopio estereoscpico o en el compuesto con el objetivo seco dbil (10x) (ver Anexo).
8. Registrar los resultados

Fig. 45. Observacin al microscopio estereoscpico de la muestra.


Cuestionario:
1.- Describir los diferentes estadios de desarrollo del ciclo biolgico de Fasciolosis

2.- Describa la morfologa del trematodo Paramphistomun en fase adulta

3.- Cestodos de mayor importancia econmica que afectan los animales

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UNIDAD DE COMPETENCIA VI
PRCTICA 9:TCNICA DE COPROCULTIVO (CULTIVO DE LARVAS DE NEMATODOS).
OBJETIVO: Proporcionar las condiciones adecuadas para la eclosin y desarrollo de larvas, a
larva 3 e identificacin posterior de estas larvas.
INTRODUCCIN: El cultivo de larvas es el procedimiento por el cual se obtienen larvas de tercer
estadio (L3), de nematodos gastrointestinales; con el fin de identificar aquellos gneros y especies
parasitarias a partir de los huevos emitidos junto con las materias fecales. Se trata de proporcionar
a la materia en estudio las condiciones ptimas de temperatura, humedad y oxigenacin, para la
eclosin de los huevos y su posterior desarrollo a larvas infectantes.
MATERIAL Y EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL:
El discente deber presentar el material y equipo solicitado para la realizacin de cada sesin
prctica.
De seguridad personal: Bata u overol, cubre bocas, guantes y gafas o googles,
MATERIAL Y EQUIPO:

Caja Petri
Agua tibia
Aserrn estril y limpio
Pipeta Pasteur
Cuchara de aluminio
Aparato Baermann
Microscopio compuesto (ptico)
Microscopio estereoscpico
Pinza Mhr
Vidrio de reloj

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MTODO:
1. En una caja Petri depositar 5 gramos de materia fecal positiva a nematodos
gastrointestinales.

Fig. 51. Pesaje de la muestra.


2. Agregar una cucharada de aserrn estril, adicionar unas gotas de agua y mezclar con la
ayuda de una cuchara, agregar pequeas cantidades de agua, hasta que el contenido de la
caja se observe con suficiente humedad.

Fig. 52. Adicin de aserrn estril

Fig. 53. Adicin de agua

Fig. 54. Medio propicio para el cultivo de larvas.

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3. Etiquetar la caja Petri con los siguientes datos: (nombre del animal, fecha de entrada y
fecha de salida del coprocultivo).
4. Meter a la estufa de cultivo a una temperatura de 27C durante 10 o 12 das o el tiempo
suficiente para que se desarrollen a L. Se deber checar diario la humedad presente y
remover la muestra para favorecer una adecuada oxigenacin del cultivo.
5. Transcurrido los 10 a 12 das sacar el cultivo y todo su contenido y colocarlo en el aparato
de Baermann, en el que se deja reposar durante ocho horas.
6. Transcurrido el tiempo se retira la pinza Mhr y se obtiene la muestra (lquido)
depositndola en un vidrio de reloj y se observa con el microscopio estereoscpico para
identificar las L.
7. La identificacin de las larvas es de acuerdo a sus caractersticas morfolgicas; siguiendo
el proceso realizado para la tcnica de Baermann (ver Anexo).

Fig. 55. Muestra para ser depositada en estufa de cultivo.

CUESTIONARIO
1. Antecedente de la muestra para llevar a cabo la tcnica de coprocultivo

2. Cul es el fundamento de la tcnica

3. Tipo de larvas obtenidas durante esta tcnica

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UNIDAD DE COMPETENCIA VI
PRCTICA 10. TCNICA DE MIGRACIN LARVARIA (BAERMANN)

OBJETIVO: Realizar el cultivo de larvas en muestras positivas a nematodos y su posterior


identificacin.
INTRODUCCIN: La tcnica de Baermann tiene como principio el aprovechamiento del tactismo
biolgico de las larvas (L1), tales como: el higrotropismo, el termotropismo y la gravedad que
permite que las larvas migren y se facilite su obtencin o aislamiento de las muestras fecales. De
utilidad para lograr la concentracin de larvas de nematodos pulmonares como son: Dictyocaulus
viviparus, D. filaria, Muellerius capillaris, en los rumiantes y D. arnfieldi en equinos.
MATERIAL Y EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL:
El discente deber presentar el material y equipo solicitado para la realizacin de cada sesin
prctica.
De seguridad personal: Bata u overol, cubrebocas, guantes y gafas o googles,
MATERIAL Y EQUIPO:

Agua tibia
Lugol
Heces
Gasas
Manguera de hule ltex
Coladera de plstico
Embudo de plstico
Cuchara de aluminio
Pipeta Pasteur
Pinzas Mhr
Portaobjetos y cubreobjetos
Soporte Universal
Microscopio compuesto (ptico)
Microscopio estereoscpico
Vidrio de reloj

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MTODO:
1. Estructurar el aparato Baermann, que consiste en un soporte universal, un aro metlico, un
embudo, una manguera de hule ltex, una coladera y una pinza Mhr.

Fig. 46. Equipo Baermann


2.

Envolver de 3 a 5 gramos de heces con una gasa y colocarla sobre la coladera.

Fig. 47. Muestra para la ejecucin de la tcnica.


3. Agregar agua tibia (25C), por las paredes del embudo hasta que cubra la mitad de la
muestra, dejar reposar de 8 a 12 horas.

Fig. 48. Aplicacin de agua tibia.


4. Obtener en un vidrio de reloj o caja Petri, de 0.5 a 1 mL del contenido, aflojando la pinza
Mhr y observar en el microscopio estereoscpico.
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Fig. 49. Obtencin de lquido observacin de larvas.


5. Extraer con la pipeta Pasteur las larvas y depositarlas en un portaobjetos, agregar una gota
de lugol para su fijacin y colocar un cubre objetos.

Fig. 50. Obtencin de larvas


6. Observar en el microscopio compuesto con el objetivo (10x y 40x). La identificacin se
realiza de acuerdo a las caractersticas morfolgicas (ver Anexo).
CUESTIONARIO:
1. Formas de llevar a cabo la recuperacin larvaria
2. Importancia del agua en el desarrollo de la tcnica
3. Utensilio para extraer las larvas
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UNIDAD DE COMPETENCIA III, VI


PRCTICA 11. TCNICA DE MC MASTER.

OBJETIVO: Conocer y realizar la tcnica de Mc Master con heces positivas de diferentes


especies de animales, llevando a cabo la identificacin, conteo e interpretacin de la presencia de
parsitos.
INTRODUCCIN: La tcnica de Mc Master es usada para demostrar y contabilizar huevos de
helmintos y ooquistes de protozoarios en muestras fecales. Es el mtodo ms ampliamente
utilizado para este propsito. Esta tcnica utiliza cmaras de conteo que posibilitan el examen
microscpico de un volumen conocido de suspensin fecal (2 x 0.15 mL). Dicha tcnica al ser
cuantitativa busca determinar el nmero de huevecillos por gramo de heces
MATERIAL Y EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL:
El discente deber presentar el material y equipo solicitado para la realizacin de cada sesin
prctica.
De seguridad personal: Bata u overol, cubrebocas, guantes y gafas o googles,
MATERIAL Y EQUIPO:
Solucin saturada de glucosa
Gotero
Gasas
Heces
Microscopio ptico
Equipo de Mc Master (tubo, tapa, cmara, gotero, portaobjeto y cubreobjeto).
PROCEDIMIENTO:
1. En un tubo Mc Master depositar solucin saturada glucosada hasta la primera lnea.

Fig. 56. Tubo con solucin glucosada a la primera marca, tcnica de Mc Master
2.

Depositar una muestra de heces hasta la segunda lnea del tubo.

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Fig. 51. Tubo con solucin glucosada y heces, segunda marca.


3.

Depositar solucin saturada hasta la tercera lnea del tubo, cerrar y agitar hasta lograr un
homogenizado completo.

Fig. 52. Tubo con cantidad total de solucin glucosada y heces.


4.

Introducir una gasa para que cumpla la funcin de filtro o colador.

Fig. 53. Introduccin de la gasa.


5.

Con la ayuda de un gotero obtener el lquido que se encuentra dentro de la gasa y


depositarlo en la cmara Mc Master cuidando que no se formen burbujas.

Fig. 54. Obtencin del lquido y deposicin en cmara Mc Master.


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6.

Colocar la cmara de Mc Master en el microscopio compuesto y enfocar las cuadriculas


con el objetivo seco dbil (10x).
7. Para realizar la lectura e interpretacin, enfocar el ngulo superior derecho del cuadro e ir
subiendo y bajando entre cada carril hasta completar el recorrido en las seis divisiones de
la primera cmara, registrar el nmero de ooquistes, quistes de protozoarios y huevecillos
de helmintos encontrados, realizar el mismo procedimiento con la siguiente cmara y al
terminar el conteo sumar el total de ooquistes, quiste y huevecillos encontrados en ambas
cmaras, multiplicar por 100 y dividir entre dos; el resultado ser el nmero de quistes,
ooquistes o huevecillos por gramo de heces de la materia fecal (ver Anexo).
8. Interpretar los resultados.

Fig. 55. Observacin en el microscopio

CUESTIONARIO
1. Qu determina la tcnica de Mc Master

2. Cules son los componentes que integran el equipo Mc Master

3. Cul es el volumen de las cmaras Mc Master

4. Qu funcin tiene la gasa en esta tcnica

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UNIDAD DE COMPETENCIA VII


PRCTICA 12. DETECCIN DE Varroa destructor (EXAMEN DE ABEJAS ADULTAS Y
DETRITUS).
OBJETIVO: Llevar a cabo la tcnica e identificar morfolgicamente al parsito.
INTRODUCCIN: La Varroa es un caro parsito externo de las abejas, que afecta tanto a las
cras como a las abejas adultas. Es una parasitosis que deteriora la salud de las abejas
favoreciendo la entrada de otros microorganismos y afecta la produccin de miel.
La Varroasis es una parasitosis externa de las abejas del gnero Apis, causada por el caro
Varroa jacobsoni (Oudemaus), actualmente conocida como Varroa destructor.
La parasitosis se inicia cuando las hembras preadas de Varroa se introducen en las celdillas de la
cra de abejas que estn a punto de ser operculadas. Una vez dentro, empiezan a ovopositar,
primero un huevo del que se desarrollar un macho y posteriormente da origen nicamente a
hembras.
Las Varroas alcanzan su madurez sexual y se aparean dentro de la celda; de sta salen las
hembras preadas para continuar el ciclo.
La Varroasis ocasiona dos tipos de dao a la apicultura, que son:
a).- El ejercido por el caro sobre las abejas en forma directa e indirecta.
b).- Por erogacin econmica.
La Varroa se puede detectar mediante el examen de las abejas adultas, de la cra, o de de los
desechos de la colonia.
MATERIAL Y EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL:
El discente deber presentar el material y equipo solicitado para la realizacin de cada sesin
prctica.
De seguridad personal: Overol, cubre bocas, guantes, velo botas y gafas o googles,
MATERIAL Y EQUIPO:
Abejas
Frasco de plstico o vidrio
Microscopio estereoscpico o lupa
Caja Petri o Vidrio de reloj
Aguja de diseccin
PROCEDIMIENTO:
1. Colectar de 50 a 100 abejas de un bastidor del centro de la colmena en un frasco, es
importante verificar que no se encuentre la reina entre estas.

Fig. 67. Abejas contenidas en frasco con alcohol


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2. Se pueden utilizar cuatro mtodos para determinar si las abejas colectadas tienen caros:
Por observacin directa, por lavado, utilizando ter y observacin de detritus de la colmena.
a) Observacin directa. Las abejas se examinan mientras se encuentran anestesiadas con
ter. Las abejas adultas se examinan individualmente con una lupa o con un microscopio
estereoscpico (10x). La efectividad de este mtodo, en comparacin con el de lavado, es
poco mayor de 85% debido en parte a que las Varroas son difciles de encontrar cuando
estn adheridas entre los segmentos del cuerpo de la abeja

Fig. 68. Observacin del parasito en microscopio estereoscpico.


b) Lavado. Los caros se desprenden del cuerpo de las abejas si estas se agitan dentro de
lquidos como agua caliente, alcohol al 70%, detergente, gasolina o hexano. Con agitacin
de 20 minutos, se desprende el 100% de los caros, si el agitado es durante 1 minuto, se
desprender aproximadamente el 90%. La muestra se pasa por una malla de 8 a 10
cuadros por pulgada, para que las abejas sean retenidas en esta, de tal forma que solo
pasen los caros y el lquido; despus el lquido se filtra a travs de una tela blanca y limpia
de algodn, que retendr a los caros si se encuentran presentes
c) Uso de ter. Se recolectan aproximadamente 100 abejas de los panales en un frasco de
vidrio de boca ancha y se hacen dos a tres descargas de ter en aerosol al interior del
frasco. Despus el frasco se cierra, se agita por 10 a 15 segundos. El ter causa que los
caros se desprendan del cuerpo de las abejas y se adhieran a las paredes del frasco, con
lo que se hacen visibles
d) Observacin de detritus de la colmena con charola caza Varroa: se coloca un papel
(cartulina), un cartn o una lmina de color blanco impregnada con aceite vegetal, aceite
comestible o con vaselina y se coloca en el interior de una trampa de recoleccin. La
trampa se coloca sobre el fondo de la colmena a tratar y se deja por espacio de 24 a 36
horas, al trmino de la cual se retira la cartulina con el detritus teniendo cuidado de que no
se tire nada, para posteriormente ser enviada al laboratorio con todos los datos del apiario
y del apicultor
e) Con la muestra en el laboratorio se lleva a cabo la revisin de sta, identificando y
realizando el conteo de los caros presentes, si la muestra son abejas se realiza el conteo
de estas para obtener el grado de infestacin de la colmena (ver Anexo).

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Fig. 69. Colocacin de la charola

Fig. 70. Retiro de la charola

CUESTIONARIO:
1. Describa el ciclo de la Varroasis

2. Mencione los daos ocasionados por la Varroa en la apicultura

3. Cules son los cuatro mtodos para determinar si las abejas colectadas tienen caros

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ANEXO: Fotos a color


Huevecillos de PROTOZOARIOS por tcnica de flotacin:

Eimeria spp
Tamao 30-40

Isospora
Tamao: 22-23 x 10-19

Huevecillos de NEMATODOS y larvas

Haemonchus spp
Tamao: 44-78

Toxocara vitulorum spp.


Tamao: 81-103

Trichostrongylus spp
Tamao: 41-87

Cooperia spp
Tamao: 36-77

Strongyloides papillosus
Tamao 25-56

Ostertagia spp.
Tamao: 40-79

Nematodirus spp
Tamao: 75-150

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Trichuris spp
Tamao: 35-65

Abertura tocolgica de
Capillaria spp. (ID pichn)

Parascaris equorum
Tamao: 90-100

Capillaria hembra parte superior


Capillaria spp.macho parte inferior

Parte posterior de Capillaria


spp. (ID pichn)

Bursa copulatriz de un
Capillaria spp.

Parte anterior de Capillaria


spp (ID pichn)

Porcin bucal de un nematodo


Capillaria spp.

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Parte bucal Haemonchus

Parte caudal Haemonchus

Ascaris suum

Huevecillos (por tcnica de flotacin) y parsitos adultos de CESTODOS (por observacin directa
en pichones).

Huevecillo de Taenia
Tamao: 35-40 (pichn)

Taenia spp (pichn)

Progltidos grvidos Moniezia (bovino)

Proglotidos de cestodo
(pichn)

Huevecillo de Moniezia spp.


Tamao 80-90

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Huevecillos (por tcnica de sedimentacin) y parsitos adultos de TREMATODOS:

Fasciola heptica (bovino) Heterophyidae spp. (pichn) Notocotylus spp (pichn)


Tamao: 80-140
Tamao: 30
Tamao: 10-21

ECTOPARSITOS

Varroa destrutor

Boophilus spp (macho)

Haematopinus suis

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LITERATURA REVISADA
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(2005):
Estructura
y
manejo
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http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/bolarios/BiologiaCCAA/Guiones/Practica3.h
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Bowman D. (2004): Parasitologa para veterinarios. 8 ed., ELSEVIER, Espaa.
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Antoqua. Colombia.
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