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FIBRINOGEN

Fibrinogne
Mthode de Clauss
Dtermination quantitative de fibrinogne
IVD
Conserver 2-8C
PRINCIPE DE LA METHODE
Le fibrinogne, en prsence dun excs de thrombine, se transforme en fibrine.
Le temps de formation du caillot est inversement proportionnel la
concentration de fibrinogne prsent dans lchantillon de plasma.
La dtermination de fibrinogne par le temps de coagulation de thrombine
1
repose sur la mthode dcrite par Clauss . En prsence de fortes
concentrations de thrombine, le temps ncessaire la formation du caillot dans
le plasma dilu est inversement proportionnel la concentration de fibrinogne.
SIGNIFICATION CLINIQUE
Le fibrinogne (Facteur I), protine synthtis dans le foie, est un composant du
sang utilis pour former le caillot. Sa dtermination nous aide valuer les
altrations dans les mcanismes de la coagulation.
La concentration de fibrinogne augmente au cours des inflammations aigus et
lors de la grossesse ; au contraire, on observe des valeurs faibles dans le cas
des thrapies thrombolytiques, des maladies hpatiques, de la dysfibrinognie
congnitale, de la DIC (Coagulation intravasculaire dissmine) et la
pancratite1.
Le diagnostic clinique doit tre ralis en tenant compte de toutes les donnes
cliniques et de laboratoire.
RACTIFS
R1

Thrombine bovine

R2

Tampon imidazole

R3

Solution kaolin

Optionnel

COAGULATION CAL
CONTRLE NORMAL
CONTRLE PATHOLOGIQUE

Dilution du Calibrateur

1/40

1/30

1/20

1/10

1/5

Tampon Imidazole (mL)

3,9

2,9

1,9

0,9

0,4

COAGULATION
(mL)

0,1

0,1

0,1

0,1

0,1

Facteur

10/40*

10/30*

10/20*

10/10*

10/5*

Concentration (mg/dL)

0,25*
xc

1* x c

2* x c

Temps (s)
18,1
26,4
49,6
84,7
153
4.

La Coagulation etalon est traable pour Fibrinogne la norme de lOMS,


2e Standard International pour Fibrinogne, de plasma (98/612).
CONSERVATION ET STABILITE
Tous les composants du kit sont stables jusqu la date de premption indique
sur lemballage, si les flacons bien ferms sont conservs 2-8C, et que la
contamination est vite pendant leur utilisation. Ne pas utiliser de ractifs
ayant dpass la date de premption.
Indices de dtrioration des ractifs:
Prsence de particules et turbidit.
- Rsultat dans le Contrle de qualit hors des plages tablies.
- Variations de couleur.
MATERIEL SUPPLEMENTAIRE
- Coagulomtre ou chronomtre et bain 37C 0,5C.
- quipement habituel de laboratoire (REMARQUE 1).
CHANTILLONS
Plasma obtenu par ponction veineuse, dilu raison de 1/10 dans une solution
de citrate trisodique 3,8 % (105 mmol/L).
Mlanger immdiatement le sang avec lanticoagulant. viter la formation de
mousse.
Centrifuger la mousse 3 000 x g 10 min et transfrer le plasma.
Utiliser uniquement des conteneurs en verre silicon ou plastique.
Les plasmas troubles, ictriques, lipmiques ou hmolyss peuvent donner des
rsultats errons.
Lchantillon est stable 4 heures temprature ambiante (15-25C) ou 28 jours
si on le congle immdiatement 20C.
REMARQUES
1. Le matriel de laboratoire utilis doit tre dpourvu de traces de dtergent.
2. Suivre minutieusement les instructions du fabricant de linstrument, les
rsultats obtenus doivent tre valids par le laboratoire.
PROCEDURE
Le ractif peut tre employ avec des techniques manuelle, mcaniques, photooptique ou avec tout instrument permettant de dtecter la formation du caillot
(Note 2)
.
1. Prparer une dilution 1/10 de lchantillon et les Contrles dans le Tampon
Imidazole : 50 L chantillon + 450 L Tampon Imidazole.
Lchantillon dilu doit tre trait avant 1 heure.
2. Prparer les dilutions du Calibrateur en Tampon Imidazole, comme suit :
COIS03-F

04/03/14

0,5* x c

CALCULS
1. Calculer la moyenne des duplications des temps de coagulation, immdiatement
aprs la fin de la raction. Utiliser les cinq points du calibrateur pour crer une
courbe des temps obtenus (s) par rapport aux valeurs de concentration de
fibrinogne de chaque dilution du Calibrateur (mg/dL).
2. Tracer la meilleure courbe. Examiner la courbe et, si besoin, omettre les points non
linaires. La courbe finale doit comporter au moins trois points conscutifs. Crer la
courbe uniquement avec les points les plus linaires donnera la meilleure
rcupration des contrles et des chantillons de patient.
3. La courbe de calibration suivante a uniquement un caractre dorientation ; elle
varie en fonction du lot, de la concentration du calibrateur et de linstrument utilis.

RF. : 1709101
RF. : 1709104
RF. : 1709106

TRACABILITE

0,33* x c

(c = Valeur du Calibrateur)
3. Dans 0,2 mL de chaque dilution, ajouter 20 L de R3 et mettre temprature
ambiante 37C pendant 4-6 minutes.
4. Ajouter 0,1 mL de ractif R1 et chronomtrer la formation de caillots. Ne pas mettre
temprature ambiante la thrombine R1.

100 u NIH/mL

PRPARATION
R1 : Reconstituer ( ) dans 2,0 mL deau distille. Boucher et mlanger
doucement jusqu dissolution de son contenu. Stabilit : 7 jours 2-8C ou 1
mois 20C, si on le congle immdiatement et quon le conserve dans le
flacon original. Ne pas recongeler.
R2 : Agiter avant emploi.
R3 : Prt lemploi.

CAL

5.

Concentration (mg/dL)
608
304
152
76
38

Concentration (g/L)
6,08
3,04
1,52
0,76
0,38

La concentration de fibrinogne dans lchantillon se calcule par interpolation de


son temps de coagulation dans la courbe de calibration. La dilution 1/10 du
plasma reprsente 100 % de la valeur assigne.
Si les temps de dilution 1/10 sont hors de la courbe linaire, prparer des
dilutions 1/5 ou 1/20, en fonction des besoins. Si lchantillon est dilu 1/5
diviser le rsultat de la courbe par 2 ; si lchantillon est dilu 1/20, multiplier le
rsultat par 2 afin dobtenir le rsultat final.

CONTROLE DE QUALITE
Il convient danalyser avec les chantillons, les srums contrle valus :
CONTRLE NORMAL

RF. : 1709104

CONTRLE PATHOLOGIQUE RF. : 1709106


Si les valeurs dcouvertes sont hors de la plage de tolrance, il faut revoir linstrument,
les ractifs ou la technique.
Chaque laboratoire doit disposer de son propre contrle de qualit et dterminer les
mesures correctives mettre en place dans le cas o les vrifications ne
correspondraient pas aux attentes.
VALEURS DE REFERENCE
200 - 400 mg/dL1.

Ces valeurs ont un caractre dorientation. Il est conseill chaque laboratoire de


dfinir ses propres valeurs de rfrence.
CARACTERISTIQUES DE LA METHODE
Prcision:
Inter-srie (n= 30)
Moyenne (U/L)
144 294 488
CV (%)
5,9
3,4
2,9

Exactitude: Les ractifs SPINREACT ne montrent pas de diffrences


systmatiques significatives lorsquon les compare dautres ractifs
commerciaux.
INTERFRENCES ET LIMITATIONS
Des interfrences importantes ont t observes dans les chantillons comportant des
produits dgradant le fibrinogne. Les ractions inflammatoires aigus peuvent
augmenter le fibrinogne circulant. Lhmolyse peut causer lactivation des facteurs de
coagulation et interfrer avec la dtection du point final. Les niveaux levs de
paraprotine et de mdicaments activant le systme fibrinolytique peuvent interfrer
avec les dterminations de fibrinogne. Il a t rapport que certaines drogues et
autres substances interfrent avec sa dtermination2, 3.
BIBLIOGRAPHIE
1. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
PRSENTATION
Rf: 1709211

Cont.

R1 8 x 2 mL
R2 1 x 100 mL
R3 1 x 3.5 mL

SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN


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