Nombre

de la
prueba.

Fundamento
.

Reaccin
positiva.

Agar
Hierro
Lisina
(LIA).

Esta prueba se
realiza para
determinar la
capacidad de un
microorganismo
de producir una
enzima que
descarboxila el
aminocido
lisina.

Movilidad
, Indol,
Ornitina
(MIO).

Medio usado
para la
identificacin de
Enterobacteriace
ae en base a su
movilidad,
actividad de
ornitina
decarboxilasa y
produccin de
indol.

Reacci
n
qumic
a.

Indicad
or.

Reactivo
adicional
.

Cmo se
lee la
prueba.

Modo de
inoculaci
n.

Microorganism
os que dan
positivo.

Positiva: Pico
violeta/fondo
violeta.
Negativa: Pico
violeta/fondo
amarillo.

Prpura de
Bromocres
ol.

Simplement
e
observando
la muestra.

Por puncin
profunda con
aguja de
inoculacin.
En
aerobiosis,
durante 24
horas a 3537 C.

Salmonella
typhimurium,
Citrobacter freundii,
Edwarsiella spp.

Movilidad:
Positivo:
Presencia de
turbidez o
crecimiento
ms all de la
lnea de
siembra.
Negativo:
Crecimiento
solamente en
la lnea de
siembra.
Ornitina
decarboxilasa
:
Positivo: Color
prpura.
Negativo:
Color amarillo.

Purpura de
Bromocres
ol.

Peptona de
gelatina,
Extracto de
levadura,
Glucosa,
Lisina,
Citrato de
hierro y
amonio,
Tiosulfato
de sodio,
Agar.
Dextrosa,
Extracto de
levadura,
Peptona,
Tripteina,
Clorhidrato
de LOrnitina,
Agar,
Reactivo de
Kovacs o
de Erlich.

Movilidad:
Observando.
Ornitina:
Observando.
Indol:
Observando
la coloracin
despus de
agregar el
reactivo
revelador.

Inocular por
puncin
profunda con
ansa recta.
En
aerobiosis,
durante 1824 horas a
35-37 C.

Escherichia coli.

Prueba del
indol:
Positivo: Color
rojo al agregar
el reactivo
revelador.
Negativo:
Incoloroamarillento al
agregar el
revelador.

Nombre
de la
prueba.

Fundamento
.

Reaccin
positiva.

Tres
Azucares
Hierro
(TSI).

Medio empleado
para la
diferenciacin de
enterobacterias,
en base a la
fermentacin de
glucosa, lactosa,
sacarosa y a la
produccin de
cido
sulfhdrico.

Pico
alcalino/fondo
cido (pico
rojo/fondo
amarillo): el
microorganismo
solamente
fermenta la
glucosa.
2-Pico
cido/fondo cido
(pico
amarillo/fondo
amarillo): el
microorganismo
fermenta
glucosa, lactosa
y/o sacarosa.

Reacci
n
qumic
a.

Indicad
or.

Rojo de
fenol.

Reactivo
adicional
.

Cmo se
lee la
prueba.

Modo de
inoculaci
n.

Extracto de
carne,
Pluripeptona
, Cloruro de
sodio,
Lactosa,
Sacarosa,
Glucosa,
Sulfato de
hierro y
amonio,
Tiosulfato
de sodio,
Agar.

Simplement
e
observando
el pico y el
fondo de la
muestra.

Sembrar en
TSI, picando
el fondo y
extendiendo
sobre la
superficie del
medio.
A 35-37C
durante 24
horas, en
aerobiosis.

Microorganism
os que dan
positivo.
Escherichia coli.
P. aeruginosa.
S. enteritidis.

3-Pico
alcalino/fondo
alcalino (pico
rojo/fondo rojo):
el
microorganismo
es no
fermentador de
azcares.
4-La presencia de
burbujas, o
ruptura del medio
de cultivo, indica
que el
microorganismo
produce gas.
5-El
ennegrecimiento
del medio indica
que el
microorganismo
produce cido
sulfhdrico.

Rojo de
metilo.

Medio utilizado
para la
realizacin del
ensayo de Rojo
de Metilo y
Voges
Proskauer.
Es
particularmente
til para la
clasificacin de
enterobacterias.

Nombre

Fundamento

Positivo: Color
rojo.
Negativo:
Color amarillo.

Reaccin

Rojo de
metilo.

Reaccin

Indicad

Pluripeptona
, Glucosa,
Fosfato di
potsico.

Aadir unas
gotas de
una solucin
de rojo de
metilo al
0.04%,
observar el
color del
medio.

Por
inoculacin
directa, a
partir del
cultivo en
estudio. En
aerobiosis, a
35-37C por
3 das.

Reactivo

Cmo se

Modo de

Escherichia coli.
P. mirabilis.
S. typhimurium.

Microorganism

de la
prueba.

positiva.

Voges
Proskaue
r.

Medio utilizado
para la
realizacin del
ensayo de Rojo
de Metilo y
Voges
Proskauer.
Es
particularmente
til para la
clasificacin de
enterobacterias.

Caldo
rojo de
fenol
lactosa.

El caldo rojo de
fenol lactosa es
utilizado para la
diferenciacin de
cultivos puros,
en base a su
capacidad para
fermentar la
lactosa.

qumica.

or.

adicional
.

lee la
prueba.

inoculaci
n.

os que dan
positivo.

Positivo:
Desarrollo de
un color rojo
en pocos
minutos
despus de
una completa
agitacin del
tubo.
Negativo:
Ausencia de
color rojo.

Hidrxido
de Potasio
y Alfa
Naftol,
junto con
la
agitacin.

Pluripeptona
, Glucosa,
Fosfato di
potsico.

Por
inoculacin
directa, a
partir del
cultivo en
estudio. En
aerobiosis, a
35-37C por
3 das.

K. pneumoniae,
Enterobacter
aerogenes.

Positivo: El
caldo se torna
de color
amarillo,
puede
observarse
gas en forma
de burbujas.
Negativo: Si
no hay

Rojo de
fenol.

Peptona de
casena,
extracto de
carne,
cloruro de
sodio,
lactosa.

Aadir 0,6
ml de alfa
naftol al 5%
en alcohol
etlico
absoluto y
0.2 ml de
hidrxido de
potasio al
40% a 2.5
ml de
cultivo.
Agitar
vigorosame
nte el tubo,
y dejar a
temperatura
ambiente
durante 1015 minutos.
Observar el
color de la
superficie
del medio.
Se observa
el color
adquirido
por el caldo
y si hay
aparicin de
burbujas.

Inocular el
medio con
una gota de
una
suspensin
hecha con un
cultivo puro.
Incubar a 35
2 C entre
4 y 18 horas

S. thermophilus.
L. bulgaricu.
Streptococcus lactis.
Leuconostoc
cremoris.
Streptococcus
diacetylactis.
Penicillium glaucum.

fermentacin
el caldo tiene
una
coloracin
naranjarojiza.
Positivo:
Color
amarillo,
puede
observarse
gas en forma
de burbujas.
Negativo:
Coloracin
naranjarojiza.

Caldo
rojo de
fenol
sacarosa.

El caldo rojo de
fenol sacarosa es
utilizado para la
diferenciacin de
cultivos puros,
en base a su
capacidad para
fermentar la
sacarosa.

Nombre
de la
prueba.

Fundamento
.

Reaccin
positiva.

Agar
almidn.

La molcula del
almidn es muy
compleja y para
su asimilacin
por las bacterias,
estas deben
descomponerla
(hidrolizarla) en
sustancias ms
simples y
fcilmente
asimilables. Un
gran nmero de
bacterias son
capaces de
elaborar una

Positivo: Al
agregar la
solucin de
lugol, aparece
una zona
clara
alrededor de
las colonias,
esto significa
la hidrlisis
del almidn.
Negativo: Se
formar un
color azul al
agregar la
solucin de
lugol si no

con las tapas

flojas.

Reaccin
qumica.

Rojo de
fenol.

Peptona de
casena,
extracto de
carne,
cloruro de
sodio,
sacarosa.

Se observa
el color
adquirido
por el caldo
y si hay
aparicin de
burbujas.

Inocular el
medio con
una gota de
una
suspensin
hecha con un
cultivo puro.
Incubar a 35
2 C entre
4 y 18 horas
con las tapas
flojas.

Saccharomyces
cerevisiae.
Kluyveromyces
fragilis.
Zymomonas mobilis.

Indicad
or.

Reactivo
adicional
.

Cmo se
lee la
prueba.

Modo de
inoculaci
n.

Microorganism
os que dan
positivo.

Lugol.

Extracto de
carne,
cloruro de
sodio,
almidn,
Agar-agar.

En el medio
slido (sobre
las placas)
al agregar
unas gotas
de la
solucin de
lugol y
observar el
color que
aparece.

Se inocula en
las placas
mediante
estras.
Incubar por
lo menos 10
das,
haciendo
controles a
los 2, 5, 8 y
10 das.

Zymomonas mobilis.
Escherichia coli.
Bacillus subtilis.

Citrato
de
Simmons
.

enzima amilasa
que hidroliza el
almidn con
formacin de
maltosa. La
maltosa puede
ingresar a la
clula para ser
utilizada.
Medio utilizado
para la
diferenciacin de
enterobacterias
con base a la
capacidad de
usar citrato
como nica
fuente de
carbono y
energa.

hubo
hidrlisis.

Positivo: Hay
crecimiento
bacteriano
con un
intenso color
azul en el
pico de flauta.
Negativo:
Ausencia de
crecimiento y
permanencia
del color
verde en el
medio de
cultivo.

Nombre
de la
prueba.

Fundamento
.

Reaccin
positiva.

Caldo
malonato
.

El malonato es in
inhibidor
enzimtico. El
acido malnico se
une a la enzima, ya
que el acido
malnico y el acido
succnico son

Medio sin
inocular: color
verde.
Positivo: azul
de Prusia
oscuro.
Negativo: sin
cambios

Reaccin
qumica.

Azul de
bromotim
ol.

Citrato de
sodio,
cloruro de
sodio,
fosfato di
potsico,
fosfato
monoamni
co, sulfato
de
magnesio,
agar.

Observar el
color del
crecimiento
bacteriano
en el medio
de cultivo.

Estriar la
superficie del
medio de
cultivo.
Mantener en
aerobiosis, a
35-37 C
entre 24 y 72
horas.

Indicad
or.

Reactivo
adicional
.

Cmo se
lee la
prueba.

Modo de
inoculaci
n.

Azul de
Bromotimol

Estearato de
levadura,
Sulfato de
amonio,
Fosfato di
potsico,
Fosfato mono
potsico,

El cambio de
color verde a
azul en el
tubo de
ensayo

Inocular 1-2
asadas del
microorganism
o en el caldo
Malonato,
incubar a 37
C por 24 horas

Klesiella
pneumoniae.
S. typhimurium.

Microorganism
os que dan
positivo.
Enterobacter
aerogenes
Klebsiella pneumoniae

Catalasa.

estructuralmente
muy parecidos y
ocupa los sitios
activos; as la
enzima no puede
combinarse con su
sustrato, y bloquea
la accin del acido
succnico, es
necesario la
activacin de la
enzima-sustrato
para la activacin
del sustrato, para
formar el acido
frmico. El acido
succnico es el
causante de la
inhibicin del
succnico
La catalasa acta
como una enzima
esencial de
defensa biolgica
contra la toxicidad
del oxigeno. La
catalasa es una
enzima que
descompone el
perxido de
hidrogeno en
oxigeno y agua

NaDl,
Malonato de
sodio,
Glucosa

Positivo:
efervescencia
y/o burbujeo.
Negativo: Sin
cambios

---

Perxido de
hidrogeno
30%

La produccin
rpida y
sostenida de
burbujas o
efervescencia
constituye
una reaccin
positiva

Con un asa o
palillo de
madera,
transferir parte
del centro de
una colonia a
la superficie de
un
portaobjetos.
Agregar 1 gota
de perxido de
hidrogeno al
30% y
observar la
produccin de
burbujas

Staphylococcus
aureus, Escherichia
coli, Pseudomonas sp.

Nombre
de la
prueba.

Fundamento
.

Reaccin
positiva.

Reaccin
qumica.

Indicad
or.

Reactivo
adicional
.

Cmo se
lee la
prueba.

Modo de
inoculaci
n.

Oxidasa.

Se basa en la
produccin
bacteriana de una
enzima oxidasa
intracelular, esta
reaccin se debe a
un sistema de
citocromo oxidasa
que activa la
oxidacin del
citocromo reducido
por el oxigeno
molecular que a su
vez acta como
receptor de
electrones en la
parte terminal del
sistema de
transferencia de
electrones
El triptfano es un
aminocido
constituyente de
muchas peptonas,
este aminocido
puede ser oxidado
por algunas
bacterias para
formar indol que a
su vez se combina
con el aldehdo del
reactivo de Kovac o
de Erlich

Positivo: Color
azul marino
Negativo: sin
cambio en el
color

Los colorantes
pfenilendiamina
son aminas
aromticas
primarias
derivadas,
diamino del
benceno; el
citocromo no
reacciona
directamente
con el reactivo
pero a travs
de oxidaciones
indirectas
oxida al
reactivo de
fenilendiamina

---

Discos con N,
N, N, ,Ntetrametil-pfenilendiamin
a

Las colonias
bacterianas
con actividad
del citocromo
en segundos
toman un
color azul
intenso

Utilizar palillos
de madera
para evitar
falsos
positivos, con
estos palillos
agregar
reactivo a las
colonias a
identificar

Pasteurella multocida

---

Reactivo de
Kovacs o de
Erlich,
Tripteina,
Peptona,
Sulfato de
amonio y
hierro,
Tiosulfato de
sodio

El desarrollo
de un color
rojo-fucsia en
la interfase
del reactivo y
pasado medio
segundo al
haber
agregado el
reactivo de
Kovacs
indica la
presencia de
indol por lo
tanto una
prueba
positiva

Inocular al
medio
realizando
siembra por
picadura hasta
la mitad del
medio a partir
del cultivo del
microorganism
o en estudio,
incubar 24
horas a 37 C,
al finalizar
aadir 5 gotas
del reactivo de
Kovacs por la
pared del tubo

Movilidad:
*Escherichia coli
* Proteus mirabilis
*Salmonella
typhimurium
* Salmonella enteritidis
Indol
*Escherichia coli
Acido Sulfrico
* Proteus mirabilis
*Salmonella
typhimurium
* Salmonella enteritidis

SIM.

Para el H2S
Positivo: color
negro
Negativo: sin
cambio
Para movilidad
Positivo:
presencia de
turbidez o
crecimiento
mas all de la
lnea de
siembra con un
anillo rojo en la
superficie
Negativo:
crecimiento

Microorganism
os que dan
positivo.

solamente en la
lnea de
siembra sin
cambio en el
color