Bioqumica

ENZIMAS

DEFINICIN:
Los enzimas son catalizadores biolgicos, un catalizador incrementa la
velocidad de una reaccin sin sufrir cambios y sin modificar la posicin de
equilibrio del proceso, son ms efectivos que los catalizadores inorgnicos y no
dan lugar a subproductos de la reaccin.
-Son protenas que catalizan reacciones qumicas en las clulas.
-Tienen alta especificidad: determinada por el centro activo de la enzima
donde se hallan los grupos qumicos responsables de la catlisis. Un enzima
solo cataliza una reaccin en la que intervienen unos sustratos determinados,
en ocasiones tan solo un estereoismero.
-No alteran el equilibrio de las reacciones que catalizan.
-No se consumen ni se alteran durante la catlisis.
-Actan sobre molculas denominadas sustratos en soluciones acuosas, con
pH suaves y temperaturas moderadas.
-Todos son protenas con excepcin de los RNAs catalticos.
-Tienen masas moleculares desde 12000Da hasta ms de 1millon.
-Muchos enzimas necesitan co-factores para cumplir su funcin.
Metlicos: Fe2+,Mg2+ Mn2+ Zn2+
Orgnicos: coenzimas generalmente derivados de vitaminas.
Cuando el coenzima esta unido de manera muy fuerte al
enzima se le llama grupo prosttico
-Tienen alto poder cataltico (por ejemplo la catalasa descompone el agua
oxigenada 106 veces ms rpido que la reaccin espontnea).
-Estn sujetos a regulacin, ya sea inhibicin, a modificadores alostricos, a
modificaciones covalentes, etc.
-Los enzimas no modifican el valor de la constante de equilibrio, puesto que no
modifican la variacin de energa libre de la reaccin, G.
-Los enzimas disminuyen el tiempo que tarda la reaccin en alcanzar el
equilibrio.

Bioqumica

NOMENCLATURA Y CLASIFICACIN:
Se clasifican por nombres sistemticos y cdigos numricos, aunque es
frecuente el uso de nombres vulgares terminados en asa o en ina.

Cada enzima se identifica mediante un cdigo de 4 nmeros, separados por

puntos, que indican lo siguiente.

El 1 muestra a cul de las 6 clases principales pertenece el enzima.

El 2 la subclase

El 3 la sub-subclase

El 4 el n de serie dentro de la sub-subclase

Ejemplo:

NATURALEZA DE LOS ENZIMAS:

Son protenas activas y RNAs catalticos (muy escasos). Cuando son
protenas pueden estar activadas de por s o bien necesitar un cofactor.
Dependiendo de la naturaleza de este cofactor se le denomina coenzima (si es
una molcula orgnica) o simplemente cofactor (si se trata de una molcula
inorgnica).Los cofactores unidos muy fuertemente a la protena se denominan
grupos prostticos. La mayora de los coenzimas son derivados de las
vitaminas, por ejemplo el NAD y el NADP derivan de la B3 y el FAD de la B2.

Bioqumica

CATLISIS ENZIMTICA:
Se logra una elevada velocidad de reaccin con una estereoespecifidad
de sustrato. Se produce en el centro activo del enzima y el intermediario de la
reaccin es un complejo enzima-sustrato. No se producen subproductos y el
rendimiento de la reaccin es el 100%.
Los enzimas aceleran las reacciones aumentando el valor de la
constante de velocidad, para ellos disminuyen le energa de activacin
necesaria para llevar los sustratos a un estado de transicin al estabilizar este
estado por medio de la formacin de los complejos enzima-sustrato.

EL CENTRO ACTIVO:
Es una regin relativamente pequea de la enzima en la cual hay hoyos o
hendiduras con residuos hidrofbicos y algunos polares. El agua est excluida
salvo que sea un componente de la reaccin
Son entidades tridimensionales que por tanto implican a residuos alejados en la
estructura primaria. Los sustratos se unen al centro activo por interacciones
dbiles del tipo puentes de hidrgeno o electrostticas.
La especificidad de la interaccin requiere una forma que permita la
unin del sustrato al menos por tres puntos, existen dos modelos de centro
activo, el de llave-cerradura y el de ajuste inducido, que son aplicados
dependiendo de la enzima y del sustrato.

Bioqumica

MECANISMOS DE CATLISIS
Catlisis cido-base general Se refiere a transferencias de protones
facilitadas por molculas diferentes del agua en las que las cadenas laterales
de aminocidos pueden actuar como dadores o aceptores de protones en el
sitio activo de un enzima. Por ejemplo, la quimotripsina y la tripsina utilizan un
residuo de histidina como un catalizador bsico para incrementar el poder
nucleoflico de la serina. Por ello, ambas pertenecen al grupo de las sern
proteasas.
Catlisis covalente ( Implica la formacin de un enlace covalente transitorio
entre enzima y el sustrato.)
Catlisis por iones metlicos (Los metales pueden participar de diferentes
maneras en catlisis. Ayudan a orientar a un sustrato para que reaccione.
Pueden facilitar reacciones de oxidacin-reduccin)

CINTICA DE LAS REACCIONES MONOSUSTRATO. MODELO

DE MICHAELIS-MENTEN
La cintica se encarga del estudio de la velocidad de las reacciones y de
los factores que la afectan. En una reaccin sencilla, la velocidad se define
como el cambio de concentracin de un reactante por unidad de tiempo. En los
estudios de cintica se consideran velocidades iniciales ya que sino habra que
tener tambin en cuenta la reaccin contraria del equilibrio.
La accin cataltica de un enzima, es decir su actividad enzimtica se
estima en funcin de la velocidad de la reaccin que cataliza en condiciones
ptimas de pH, temperatura y concentracin de sustrato saturante. Esto explica
que las unidades de actividad enzimtica tengan dimensiones de velocidad
1 Unidad enzimtica (U): es la cantidad de enzima capaz de
transformar 1mol de sustrato por minuto en condiciones ptimas de pH,
temperatura y concentracin de sustrato saturante.
En el SI se mide en katal (kat)=1 mol/s. Es la cantidad de enzima que cataliza
la conversin de 1 mol de sustrato por segundo en condiciones optimas.
1 kat = 60 x 106 U
El
rasgo
caracterstico
de
las
reacciones enzimticas es la saturacin por
sustrato. Michaelis y Menten propusieron que
la reaccin enzimtica tena lugar en dos
etapas y que la segunda etapa era la limitante
de la velocidad.
Se asume que:
La concentracin de ES es constante (Estado estacionario)
El producto P no revierte a ES

Bioqumica
De las proposiciones de Michaelis y Menten se obtiene la ecuacin del
mismo nombre en la cual Vmax es la velocidad de la reaccin a
concentraciones de sustrato saturantes y K m es la concentracin de
sustrato a la cual la velocidad es la mitad de la velocidad mxima (tiene
por tanto dimensiones de concentracin). Por tanto es un indicativo de la
afinidad de la enzima por el sustrato correspondiente. Una K m baja indica que
el enzima es muy afn y una Km alta que el enzima tiene poca afinidad.
ECUACIN M-M

Debido al caracter hiperblico de la representacin grfica de la

ecuacin de Michaelis y Menten, es dificil determinar el valor de Km, por lo que
existen modificaciones de esta ecuacin que permiten una obtencin de la K m
ms sencilla.

Bioqumica

SIGNIFICADO DE LA K2 (KCAT) Y DE KCAT/KM:

Cuando la concentracin de sustrato es saturante la velocidad mxima
es K2 por la concentracin de enzima total, por lo que el nmero de recambio o
de actividad molecular del enzima se define como la cantidad de moles
transformados por minuto a condiciones ptimas (concentracin de
sustrato saturante, de pH y de temperatura). El inverso de la k cat es el tiempo
que se tarda en cada ciclo cataltico.
Por otra parte la eficacia cataltica es el resultado de combinar la
velocidad de accin de una enzima con la afinidad por su sustrato. Eficacias
catalticas de 108 o 109 representan la perfeccin cataltica.

LA INHIBICIN ENZIMTICA:
Los inhibidores son compuestos que interfieren, de forma reversible o
irreversible, en la accin de los enzimas.
Los irreversibles se unen al enzima (ya sea covalentemente o no) de
modo permanente (inactivacin). Un ejemplo es el mecanismo de actuacin de
los gases neurotxicos, que se unen a una serina del centro activo de la acetilcolinesterasa inhibiendo el impulso nervioso.
Los inhibidores reversibles, por otra parte, forman un equilibrio de unindisociacin con el enzima, existiendo diversos tipos de inhibidores reversibles
dependiendo de su modo de unin al enzima:
COMPETITIVOS:
Compiten con el sustrato por unirse a la enzima, por lo que suelen ser
muy similares a ste, en la unin del inhibidor influye la concentracin del
mismo y la afinidad del enzima por l.
La constante que determina las proporciones del equilibrio es la K i, al
igual que la Km cuanto menor sea su valor mayor ser la afinidad.

Un inhibidor competitivo reduce las velocidades iniciales pero no la

velocidad mxima, ya que a concentraciones de sustrato saturantes y
6

Bioqumica
concentraciones de inhibidor fijas acaba desapareciendo el efecto del inhibidor.
En este tipo de inhibicin el factor de la ecuacin alterado es el de la Km, por lo
que se obtiene un nuevo valor, la KmAP.

NO COMPETITIVOS:
El inhibidor se une a una zona del enzima diferente al centro activo.
Debido a esto, no se afecta a la K m sino a la Vmax. Al igual que en los
competitivos se obtiene un nuevo parmetro fruto de la accin del inhibidor, en
este caso la VmAP.

Bioqumica
ACOMPETITIVOS:
Tan solo se unen al complejo enzima-sustrato. En este caso se modifica
tanto la Km como la Vmax en la misma proporcin (cabe destacar que aumentan
la afinidad de la enzima por el sustrato, ya que disminuyen la K m).

MIXTOS:
En ellos la constante para los dos equilibrios que
se dan en los no competitivos es diferente, por lo que la
cintica se complica mucho.

Bioqumica

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

NECESIDAD DE LA REGULACIN:
El mantenimiento de los sistemas vitales requiere la coordinacin de
mltiples sucesos (a veces contrapuestos), en los que generalmente
intervienen los enzimas. Los mecanismos de regulacin son necesarios para
mantener un orden en el sistema, ahorrar recursos, conservar energa y
responder a las variaciones ambientales.
Existen mltiples mecanismos de control:
Regulacin de la concentracin de enzima en la clula. Son los
mismos mecanismos que controlan la sntesis y degradacin de cualquier
protena. La compartimentalizacin es tambin muy importante, ya que evita
que enzimas de diferentes rutas metablicas se mezclen y tambin est
controlada genticamente.
Regulacin de la velocidad enzimtica. En funcin de la posicin en
la ruta metablica de la molcula reguladora, se pueden considerar varios tipos
de regulacin:

A) Control a nivel de sustrato.

B) Control por retroalimentacin (feed-back)

Bioqumica

REGULACIN DE LA VELOCIDAD ENZIMTICA EN FUNCIN

DEL MECANISMO DE ACCIN:
EL CONTROL ALOSTRICO:
Suele ejercerse sobre los enzimas reguladores de las rutas metablicas.
Los enzimas alostricos son protenas gigantes formadas por n subunidades
con ms de un centro activo. Presentan subunidades catalticas donde estn
los centros activos catalticos y subunidades reguladoras que presentan
centros alostricos sobre los que actan los reguladores. La cintica de estas
enzimas no se ajusta a la de Michaelis y Menten, sino que se asemeja a la de
la hemoglobina. Es una cintica sigmoidea.
La unin no covalente de una molcula (modulador o efector alostrico) a
un enzima alostrico provoca un cambio conformacional que afecta a la
actividad enzimtica, aumentndola o disminuyndola.
Aumento de actividad: Activador alostrico o regulador alostrico
positivo.
Disminucin de actividad: Inhibidor alostrico o regulador
alostrico negativo.
TIPOS DE ALOSTERISMO
a) Homoalosterismo o cooperatividad. En un enzima con cooperatividad
positiva (o negativa), la unin de una molcula de sustrato provoca un cambio
conformacional que afecta al enzima aumentando (o disminuyendo) la unin de
otras molculas de sustrato.

10

Bioqumica
b)Heteroalosterismo. La unin de una molcula distinta del sustrato a un sitio
distinto del centro activo produce un cambio en la actividad enzimtica.
Este tipo de control alostrico implica la existencia de efectores alostricos, que
pueden ser activadores o inhibidores. Si un enzima puede existir en dos
estados conformacionales, T (tenso) y R (relajado), que difieren
significativamente en la afinidad por el sustrato o en el nmero de recambio, su
cintica puede modularse por cualquier sustancia que, al unirse a la protena,
desplace el equilibrio hacia la forma T o hacia la forma R.
T(menos activo) R (ms activo)
Los activadores alostricos desplazan el equilibrio hacia la forma R (enzima
ms activo).
Los inhibidores alostricos desplazan el equilibrio hacia la forma T (enzima
menos activo).

Ejemplo: Regulacin de la aspartato transcarbamilasa.

La aspartato transcarbamilasa cataliza el primer paso de la ruta de
sntesis del CTP, una ruta muy cara energticamente hablando que est
regulada por el enzima ya citado, que al ser alostrica queda desactivada por
retroinhibicin por el producto final de la ruta y es activada por el ATP, lo cual
permite mantener unos niveles de CTP celulares proporcionales a la cantidad
de energa disponible

11

Bioqumica
.
MODIFICACIN COVALENTE:
En ella, al enzima se unen covalentemente, sustancias de diferente
naturaleza , generalmente por formacin de enlaces ster con cadenas
laterales de aminocidos con grupos hidroxilo (serina, tirosina y treonina).
La unin covalente reversible de una molcula a un enzima provoca
un cambio conformacional que modifica la actividad del enzima, bien
aumentndola (activacin), bien disminuyndola (inhibicin).

MODIFICACIN COVALENTE POR FOSFORILACIN:

Se produce por medio de protein quinasas que transfieren el grupo
fosforilo terminal del ATP a residuos de serina y treonina (sern-treonn
quinasas), o residuos de
tirosina (tirosn-quinasas)
de las protenas diana,
siendo
mucho
ms
abundantes las primeras.
La desfosforilacin la
llevan a cabo protein
fosfatasas.
Las fosforilaciones se llevan a cabo en las llamaas secuencias
consenso que son partes de la estructura primaria entre las que se encuentra
el residuo a fosforilar y que sirven a la quinasa para reconocer la posicin del
mismo.
Es un mecanismo de regulacin muy eficaz porque:
Un grupo fosforilo provoca un cambio estructural muy acusado en el enzima ya
que aade 2 cargas negativas a la protena, que pueden modificar las
interacciones electrostticas. Puede formar 3 puentes de H y es un cambio muy
voluminoso. Este cambio conformacional puede afectar a la unin del sustrato y
a la actividad cataltica. Es reversible
Adems, genera a menudo seales muy amplificadas. Una sola molcula de
protein quinasa activada puede fosforilar miles de molculas diana en muy
poco tiempo (Amplificacin de seal en cascada).
12

Bioqumica

Ejemplo: Ruta de degradacin del glucgeno.

El proceso de conversin de glucgeno en glucosa ha de ser controlado
para activarse o desactivarse dependiendo de los niveles de glucosa en
sangre, para lograr una gran velocidad de activacin se produce una cascada
que amplifica la seal hormonal logrando mas eficacia.

Cuando el nivel de
glucosa
desciende
se
produce una liberacin de
glucagn, cuando alcanza
el receptor en la membrana
se libera cAMP (que
tambin se produce por
descargas de adrenalina)
que activa por liberacin de
dos
monmeros
reguladores a la protein
quinasa A, a su vez esta
protein quinasa A activa
por fosforilacin a la
fosforilasa quinasa, es esta
enzima la que modifica a la
glucgeno fosforilasa; por
otra parte el cAMP al
activar la protein quinasa A
produce la fosforilacin y
consiguiente desactivacin
de la glucgeno sintasa.
Por otra parte la
insulina, hormona contraria
al glucagn, activa las fosfatasas inactivando la degradacin del glucgeno y
activando su sntesis

13

Bioqumica

REGULACIN POR MODIFICACIN COVALENTE IRREVERSIBLE

(PROTEOLISIS)
Los enzimas que son regulados por proteolisis se sintetizan como precursores
inactivos (proenzimas o zimgenos) y se transforman en enzima activo por
accin de una proteasa, que hidroliza un enlace peptdico especfico.
Zimgeno (Proenzima) Propptido+enzima activo
Esta activacin es irreversible.
Es muy frecuente en los sistemas biolgicos:
Enzimas digestivos
Coagulacin sangunea
Precursores de hormonas
Procolgeno
Activacin proteoltica:
Se sintetizan las protenas como precursores inactivos. En el caso de las
enzimas a los precursores se les denomina zimgenos y se acumulan en
vesculas para que se activen todos a la vez.
Por ejemplo el quimotripsingeno posee 245 residuos con varios
puentes disulfuro intracatenarios. La tripsina, enzima proteoltica activadora de
zimgenos por excelencia, corta esta cadena liberando un pptido de 15
residuos dando como resultado quimotripsina que posteriormente se corta a
s misma dando lugar a tres cadenas unidas por los puentes disulfuro ya
citados, la quimotripsina o madura.
Otro ejemplo de activacin enzimtica por proteolisis es el proceso de
coagulacin sangunea, en el que unas proteasas activan a otras
desencadenando la escisin de fracciones del fibringeno por la trombina, que
pasa a convertirse en fibrina, cuando muchas de estas fibras se fibrina se unen
son estabilizadas por una transaminasa
formando la base del cogulo. La activacin
de protrombina a trombina se lleva a cabo
gracias a la vitamina K, que interviene en la
carboxilacin del primer glutmico de la
protrombina, que logra as captar calcio y
unirse a la membrana celular donde pasa a
ser trombina.
La hemofilia es una patologa molecular que afecta a la cascada de la
coagulacin.
**ISOENZIMAS:
Son protenas distintas (codificadas en genes diferentes y no formas allicas de
la misma protena) que catalizan reacciones iguales pero que tienen distintas
afinidades por los sustratos y se encuentran en diferente proporcin en los
tejidos.

14

Bioqumica

ENZIMAS UTILIDAD E IMPLICACIONES CLNICAS

-La inhibicin competitiva de la alcohol deshidrogenasa por etanol se utiliza
como terapia para tratar el problema de la ingestin de metanol, que el enzima
convierte en formaldehdo txico.
-Las diferencias en el contenido de isozimas de los tejidos pueden utilizarse
para evaluar el momento y extensin de una lesin cardiaca debida a un infarto
de miocardio.
-La intolerancia a la lactosa de la leche suele ser causada por una deficiencia
en lactasa. La alteracin del metabolismo de la galactosa ( galactosemia que
causa defectos en el desarrollo, cataratas etc) es comnmente debida a la
deficiencia hereditaria en la actividad galactosa 1-fosfato uridil transferasa.
-La aspirina y otros antiinflamatorios no esteroideos inhiben la actividad de
enzimas implicados en la sntesis de prostaglandinas y tromboxanos, lpidos
(los icosanoides) que intervienen en la inflamacin, el dolor y la fiebre.

15