FACULTAD DE QUMICA

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

CURSO BACTERIOLOGA

MICOBACTERIAS

Carlos A. Eslava Campos

Mycobacterium

El gnero Mycobacterium es el nico que pertenece a la familia Mycobacteriaceae

orden Actynomicetales.
Las especies de este gnero presentan un elevado contenido de G+C (61-71%) en
su ADN.

Esto es compartido por otros gneros relacionados que tambin poseen cidos
miclicos en la pared celular, como son Gordona, Tsukamurella, Nocardia y
Rhodococcus.

Mycobacterium

Bacilo 0.2 a 0.6 X 1 a 10 m.

Inmobiles*

No forma esporas*
No encapsulados
Bacilos estrictamente aerobios

* Con excepcin de M. marinum, es mvil dentro del macrfago (Jaydip, PNAS; 2009).

Estructura de la pared celular de Mycobacterium

1.

Lipidos externos
(6,6dimicolato)

2.

cidos miclicos

3.

Polisacaridos
(arabinogalactano).

4.

Peptidoglicano

5.

Membrana plasmtica

6.

Lipoarabinomanano (LAM)

7.

Fosfatidilinositol mansido

8.

Esqueleto de la pared celular

Propiedades que confiere a

Mycobacterium la pared celular

Resistencia a la desecacin
Desarrollan muy lentamente
Altamente hidrofobica
Resistencia a bactericidas
No se tien fcilmente por mtodos convencionales
Resisten la decoloracin por alcohol cido

Robert Koch

1881. A partir de tuberculos, tie

la muestra con azul de metileno
y aplica marrn de Bismarck como
contraste.
Logra aislar la bacteria utilizando suero
sanguneo coagulado
Obtiene bacilos puros, desafiando conejos
observando que todos ellos mueren con
los mismos sntomas de la tuberculosis
El 24 de marzo de 1882, en una ponencia
en la Sociedad de Fisiologa de Berln,
hace publico sus resultados.
Desde entonces a la fecha se celebra
el da Mundial de la Tuberculosis

CONOCIMIENTO ACTUAL DE Mycobacterium tuberculosis

Tincin de Ziehl Neelsen (BAAR)

Descrita por los Alemanes: Franz Ziehl

(1859-1926), bacterilogo y Friedrich
Neelsen (1854-1894) patlogo.
Utilizan carbol fuscina de Ziehl para
teir los bacilos, los cuales resisten la
decoloracin con alcohol-cido.
Como colorante de contraste utilizan
azul de metileno.

Tuberculosis (TB)
La TB es una enfermedad infecciosa,
causada por diversas especies del
genero:
M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum,
M. canetti, M. microtti.
TB es una enfermedad predominante
de los pulmones, pero puede
diseminarse a:
SNC, Sistema linftico, circulatorio,
genitourinario, gastrointestinal, huesos,
articulaciones y la piel.
Signos y sntomas ms frecuentes: tos
con flema (> 15 das), sudoracin
nocturna, escalosfros y prdida de peso.
La Miseria. Cristbal Rojas (1886)

Transmisin de TB

La TB se transmite a travs de partculas

expelidas por un paciente bacilfero, con la
tos, estornudos, hablando, cantando,
escupiendo, etc.

En un estornudo se pueden producir

alrededor de 400, 000 gotas infecciosas de
dimetro 0.5 a 5 m.
Cada
gota
microorganismo,
baja.

puede
transmitir
el
cuya dosis infectiva es

Influencia de M. tuberculosis en la maduracin de fagosomas y endosomas

1. El colesterol sirve como
sitio de anclado, en la
interaccin inicial entre
M. tuberculosis y
diferentes receptores
de macrfagos

2. M. tuberculosis inhibe la
Acidificacin del fagosoma
y previene su fusin
3. La maduracin de los
fagosomas es promovida
y activada principalmente
despus de la estimulacin
por IFN

CR, receptor del complemento

FcR, receptor para la regin
constante de inmunoglobulinas
LAMP-1, Protena de membrana 1
asociada al lisosoma
LBPA, cido lisobifosftico
MR, receptor de manosa
Rab7, miembro de la familia de GTPasas pequeas
SPR, receptor de protena surfactante
TLR, receptor tipo Toll
VH+ATPase, ATPasa vacuolar dependiente de bomba de
protones

Expresin de TACO en Macrfagos infectados con Mycobacterium

TACO

Tryptophane Aspartatecontaining COat protein

Patognesis de M. tuberculosis
Bacteria penetra dentro de macrfagos alveolares no activados y se replica libremente.
El macrfago es destruido y las bacterias inician nuevamente el ciclo de infeccin
a nuevas clulas fagociticas (macrfagos alveolares, circulantes y linfocitos).
Las caractersticas histolgicas de este foco es formado por clulas multinucleadas o
gigantes de macrfagos fusionados (clulas de Langhans )
La replicacin intracelular de la micobacteria activan clulas T (CD4 y CD8).
Clulas T CD4 produce anticuerpos que son ineficientes para el control de
M. tuberculosis
Las clulas T liberan interfern-gamma y otras citocinas que activan macrfagos,
que pueden engullir y matar bacterias.
Clulas T CD8 pueden lisar clulas fagocticas que contienen micobacterias, con un
dao mnimo al tejido. GRANULOMA.

Granuloma

Bacterologa. Fac. Qumica 26.Oct.2010

Tuberculosis Pulmonar

Pulmones infectados por Mycobacterium tuberculosis

Patognesis de M. tuberculosis

En la mayora de las personas las bacterias son controladas por macrfagos

activados, permaneciendo estas en el interior de granulmas en estado latente
PRIMOINFECCIN
En algunas personas la infeccin no se controla y se produce TB primaria por
ruptura de algn foco primario de infeccin.

Algunas lesiones se resuelven por fibrosis.

Hay liberacin de mediadores inmunologicos TNF-, que produce fiebre,
astenia, perdida de peso, disnea.
Los bacilos pueden pasar a torrente sanguneo y diseminarse en el cuerpo formando
Numerosos granulomas especialmente en pacientes con SIDA. TB MILLIAR

Tuberculosis pulmonar

Esta radiografa muestra una sola lesin (ndulo pulmonar) en la parte superior del
pulmn derecho (se puede observar como un rea clara al lado izquierdo de la
imagen). El ndulo tiene bordes bien definidos y es uniforme en cuanto a densidad.

Tuberculosis Pulmonar Crnica

reas claras
(opacidades) de
diferentes tamaos,
unidas unas con
las otras
(coalescencia).

Opacidades calizadas
en el rea superior de
los pulmones, vistas
desde la parte
posterior.

Radiografias de Torax anteroposterior y lateral

Tomografa Computarizada que muestra una sola

lesin (ndulo pulmonar) en el pulmn derecho.

Tuberculosis Renal

Factores de Virulencia de M. tuberculosis

Factor Cordn o Serpentina (Micsidos 6,6-dimicolato de tetralosa)

Altamente toxico para leucocitos.
Sulfolpidos
Impiden la fusin fago-lisosoma y potencian actividad del factor cordn.
Lipoarabinomananos (LAM)
Suprime la proliferacin de clulas T, bloquea la transcripcin de genes
inducibles por IFN-gamma.
SOD/Catalasa
Neutralizan el poder oxidante de especies reactivas de oxgeno en fagolisosoma

CPF-10 y ESAT-6
Protenas antignicas
Posible funcin en la transmisin de seales

Mycobacterium tuberculosis

Pilis de M. tuberculosis
Christopher J. Alteri et al., PNAS, 2007; 104:51455150

Diagnstico de TB

DETECCIN
Prueba en la piel (Tuberculina)
Microscopia
Tincin con carbol fuchsina alcohol-cido resistente
Tincin de los cidos grasos con fluorocromo
PCR
Cultivos
Medios a base de huevo o agar solido
Medios basado en ambos
IDENTIFICACIN
Propiedades morfolgicas
Reacciones bioqumicas
Anlisis de la pared
Pruebas de cidos nucleicos
Secuenciacin de DNA.

Interpretacin e informe de la microscopia (baciloscopia) para la

deteccin de bacilos cido-alcohol resistentes (BAAR).

Tipo de tincin, aumento ptico y n de BAAR observados

Informe

Fucsina
(x 1.000)

Fluorocromo
(x 250)

Fluorocromo
(x 450)

Dudoso (repetir)

1-2 / 300 campos

(3 barridos)

1-2 / 30 campos
(1 barrido)

1-2 / 70 campos
(1,5 barridos)

Positivo 1 +

1-9 / 100 campos

(1 barrido)

1-9 / 10 campos

2-18 / 50 campos
(1 barrido)

Positivo 2 +

1-9 / 10 campos

1-9 / campo

4-36 / 10 campos

Positivo 3 +

1-9 / campo

10-90 / campo

4-36 / campo

Positivo 4 +

>9 / campo

>90 / campo

>36 / campo

No BAAR

Prueba de la tuberculina
Realizado con derivados proteicos purificados (PPD)
Se obtienen a partir de varias colonias de M. tuberculosis que se suspenden en SSI
y se destruyen por calor.
La suspensin se filtra y las protenas se precipitan con sulfato de amonio.

0.1 g (5 unidades de tuberculina) se inoculan va subcutnea en el antebrazo.

Resultado positivo: aparicin de eritema por lo menos 5mm de dimetro en el sitio de inoculacin
en 48 horas.

Falsos positivos: por la administracin previa de la vacuna BCG.

Falsos negativos: causados por anergia presentes con frecuencia en pacientes con SIDA.
Utilidad:
Establecer si una vacunacin cumpli con su finalidad (realizada cuando menos
8 semanas antes).
Detectar si un individuo no vacunado ha adquirido la primoinfeccin.
No es til para diagnostico de la enfermedad

Cultivo de Muestras Biolgicas

El cultivo puede hacerse en medio Lwenstein-Jensen constituido por

Huevo (albumina, lpidos) (coagula y e da solidez).
Verde de malaquita (inhibe otras bacterias).
Glicerol (fuente de carbono).
Asparagina (fuente de nitrgeno).

Otros medios utilizados : American Thoracic Society (ATS), Petroff, Petragnani,

Kichner, Coher-Middlebrook (7H9, 7H19 y 7H11).

Tiempo de generacin muy largo aproximadamente 20h (E. coli 20 min).

Tiempo de desarrollo de colonias visibles entre 15 y 25 das.
Requiere atmsfera hmeda con 5 a 10% de CO, debido a la necesidad de
sntesis de lpidos.

Frmacos de primera lnea

Frmacos de segunda lnea

Nuevos Frmacos

Vacuna BCG

Bacilo de Calmette y Gurin (BCG).

Se prepara a partir de un extracto atenuado de M. bovis que ha perdido su virulencia

en cultivos artificiales (231 acasiones, 13 aos), manteniendo su poder antignico.

Administracin intradrmica.

Se produce ulceracin en el sitio de inoculacin, despus de 4 semanas, que

resuelve la cicatrizacin queloide.

Protege en el mejor de los casos a un 80% de los individuos por unos 15 aos.

Bacterologa. Fac. Qumica 26.Oct.2010

La primera y ltima comunin. Cristbal Rojas. 1888

Epidemiologa de TB

Afecciones estimadas de tuberculosis por cada 100,000 habitantes. 2007 OMS

Cada ao, 8 millones de personas se enferman de tuberculosis, y 2 millones mueren de la

enfermedad a escala mundial. (OMS.2007).
La tuberculosis es la principal causa de muerte en mujeres en edad reproductiva y personas
Con VIH/SIDA.

Morbilidad y Mortalidad por TB Pulmonar en Mxico

Mycobacterium leprae

Lepra

Afecta las partes fras del cuerpo (piel, mucosa, y vas respiratorias superiores)
y rganos internos.
Se adquiere por inhalacin del bacilo o por escoreaciones de la piel.
El hombre es el nico husped natural.
El tiempo de incubacin es de 3 a 5 aos.

Clasificacin de Ridley y Jopling

Lepra tuberculoide

Lepra tuberculoide indeterminada

Lepra indeterminada
Lepra lepromatosa indeterminada
Lepra lepromatosa

Manifestaciones clnicas

Ndulos subcutneos en forma lepromatosa

Predominantemente en la cara (Facies leonina)

Parestesias (adormecimiento u hormigeo)

Anestesia
En casos avanzados hay paresis
(perdida parcial del movimiento) y parlisis
en cara manos y pies dando lugar a la mano
de garra o pie colgante

Bacterologa. Fac. Qumica 26.Oct.2010

Patogenia

Produce:

Lesiones granulomatosa crnicas con clulas epiteloides y gigantes

pero sin caseificacin

Afinidad del microorganismo por tejido cutneo y nervioso.

Respuesta del husped tipo celular.

Lepra tuberculoide: buena respuesta celular TCD4+.
Lepra lepromatosa: deficiente respuesta celular TCD8+.

Infeccin y Transmisin

Reservorio- el hombre
Fuente de infeccin
lesiones abiertas
mucosa nasal
Va de transmisin
secreciones respiratorias.

Diagnstico

OMS. Serologa
Aislamiento del BAAR
No se cultiva in vitro, pero puede inocularse en armadillo, ratones, ratas
y hamsteres. Tiempo de generacin 12 das.
Reaccin Mitsuda.
Se aplica intradermicamente de 4 a 6 millones de bacilos en 0.1 ml.
La lectura se hace a las 4 semanas.
En Lepra lepromatosa. Esta prueba es negativa
Reaccin de Fernndez
Es la misma prueba, pero la lectura se realiza a las 48 72 horas.

Otras Micobacterias

Micobacterias diferentes a Mycobacterium tuberculosis

Since the discovery of Mycobacterium leprae by Armauer Hansen in 1873 and

M. tuberculosis by Robert Koch in 1883 more than one century ago,
149 mycobacterial species have been validly described.
The most common NTM isolated from humans include: M. avium, M. intracellulare,
M. abscessus, M. gordonae, M. chelonae, M. fortuitum, M. kansassi and
M. mucogenicum.

PROCEDIMIENTOS PARA LA IDENTIFICACIN DE Mycobacterias

IDENTIFICACIN CROMATOGRFICA
Cromatografa en capa fina (TLC).
Cromatografa de gases (GLC).
Cromatografa lquida de alta presin (HPLC).
IDENTIFICACIN MOLECULAR
Sondas de cidos nucleicos.
Sondas comerciales de ADN (AccuProbe) no radiactivas
hibridacin con el ARN ribosmico
M. tuberculosis, el grupo M. avium-intracellulare, M. avium,
M. intracellulare, M. kansasii y M. gordonae.
MICOBACTERIFAGOS

PROCEDIMIENTOS PARA LA IDENTIFICACIN DE Mycobacterias

Amplificacin de secuencias especficas de DNA
gen hsp65 codifica la proteina micobacteriana de 65 KDa
(heat shock) y regiones de la subunidad ribosmica 16S.
Regin intergentica 16S-23S ribosomal y los elementos de insercin
Sistemas comerciales de amplificacin gentica para la deteccin
directa del complejo M. tuberculosis en la muestra clnica
Nombre comercial

Mtodo de
amplificacin

Diana

Volumen
de
muestra
(l)

Tcnica de deteccin

Automatizacin

Control
interno

FDA

AMTD2

TMA

16S rRNA

450

Quimioluminiscencia

NO

NO

SI

AMPLICOR

PCR

16S rRNA

100

Colorimtrica

SI

SI

SI

DTB

SDA

IS6110 / 16S
rRNA

500

Fluoromtrica (ET)

SI

SI

NO

LiPA

Nested PCR

rpoB

500

Colorimtrica

SI

NO

NO

Real Time
PCR

16S rRNA

10

Fluoromtrica

SI

SI

NO

RealArt MTB

Ndulos eritemato-marronceos de distribucin esporotricoide en dorso

de mano y antebrazo debidos a infeccin por M. Marinum.

Fuentes de transmisin de micobacterias

diferentes a Mycobacterium tuberculosis

Among the 69 potable water samples analysed, NTM were identified in 36 (52%)
samples: 17 isolates were from kitchen tap water, 11 from patients bathroom showers
and 8 were from the cistern.

Of the 36 NTM, 33 (91.7%) were identified as: M. mucogenicum (n=29),

M. rhodasiae (n=2), M. peregrinum (n=1) and M. fortuitum (n=1), and 3 (8.3%)
corresponded to Mycobacterium spp.

M. mucogenicum has been associated with several nosocomial outbreaks, from

patients with bacteraemia, sepsis, pneumonia, peritonitis, central nervous system
infections, granulomatous hepatitis and Crohns disease3 revealing its high capacity
as an infectious agent.
Fernandez-Rendon E.et al., 2011; enviado a publicacin