Captulo 13

13

Captulo
Perguntas
1
Um estudante desenvolveu vrios passos para
purificar a ribonuclease, uma protena que possui
massa molecular aproximadamente de 13 000 Da.
Quando analisou uma fraco precipitada com
sulfato de amnio por electroforese em gis de
poliacrilamida contendo SDS, observou a presena
de dois polipptidos contaminantes. O polipptido
A com massa molecular de 14 000 e o polipptido
B com massa molecular 75 000. A anlise dos polipptidos por focagem isoelctrica revelou que o
polipptido A possui um ponto isoelctrico 4 unidades mais acdico do que o da ribonuclease,
enquanto que o polipptido B possui um pI idntico ao da protena que se pretende purificar. Que
tcnicas sugeriria ao seu colega para a separao
eficiente da ribonuclease das protenas contaminantes? Fundamente a sua resposta com base nos
princpios das tcnicas que escolheu.
n

No entanto, as condies de pH do tampo no

se encontram especificadas e o aluno encontra-se
indeciso quanto ao pH a utilizar. Que tampo
utilizaria, a pH 3, pH 6 ou pH 9? Explique porqu.

3
A massa molecular duma protena desconhecida foi
analisada por cromatografia de excluso numa coluna
de Sephacryl S-300. Como padres utilizaram-se as
seguintes protenas: albumina de soro bovino (66 000),
aldolase (158 000), catalase (210 000), ferritina (440 000)
e tiroglobulina (670 000). Os volumes de eluio (em ml)
obtidos encontram-se no rectngulo em baixo:

13,6

22,5

LIDEL EDIES TCNICAS

20,0

Um estudante pretende repetir a experincia

de um colega em que se tinha separado a urease
(pI = 5,0) da mioglobina (pI = 7,0) por cromatografia de troca inica, cujo cromatograma se encontra na figura.

16,2
18,4

a) Numa tabela, apresente a correspondncia

entre os volumes de eluio e os padres que
lhes correspondem.
b) O volume de eluio da protena desconhecida de 19,0 ml. Calcule a massa molecular
relativa desta protena.

BIOQUMICA Organizao Molecular da Vida

n

4
Aps purificao parcial de uma protena, encontraram-se na amostra analisada por electroforese bidimensional quatro spots com as seguintes caractersticas:
POLIPPTIDO

MASSA MOLECULAR

PI

15 kDa

15 kDa

53 kDa

6,6

22 kDa

6,6

Faa um esquema com o arranjo relativo que

estaria espera de encontrar no gel bidimensional.

Um grupo de investigao em fisiologia vegetal

descobriu uma nova protena que expressa nos
cotildones do termoceiro. Isolaram a protena e
produziram anticorpos policlonais especficos contra essa protena em coelho. Um dos problemas
cientficos que um novo estagirio tem para resolver descobrir se esta protena tambm expressa nos cotildones de outras espcies vegetais.
Qual o mtodo que melhor se adequaria a fazer
tal estudo?