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II:
ESTUDIO
ES PECTROFOTOM TRICO
Y
ESP ECTROF LUORIMTRICO
E
LA
TRANSICIN
AL CALINA
DEL
CIT OCROMO C
Intro duccin
El c tocromo c humano,
es una pr otena que juega un doble pap el en diferentes
com partimentos
celulares . Por un a
parte,
transfiere electrones
en la ca dena
respiratoria mitocondrial y por otra
acta
como induct or de
la
apoptosis
en el
citoplasma. En el intervalo de pH de 1 a 12, el citocromo c oxidado
exhibe al m enos
cinc conformaciones diferentes debidas a cambios en los ligandos a xiales del grupo
hemo y/o al propio plegamiento de la protena.
tener un efecto directo so bre la funci n de la protena se m uestra como ejemplo e las
mltiples aplicaciones de l as tcnicas espectrofotomtricas.
La prctica
Mate rial
Disolucin ferricianuro 50 mM
Disolucin de NaOH 0.1M
Disolucin de HCl 0.2 M
Tir s indicadoras de pH
- Vidrios de reloj (para depositar trozos de 5 mm de tiras de pH) -Par afilm (mezclar
reactivos en la cubeta por inv ersin, no a gitar)
Proc edimiento
- Hacer un blan co muestr omitida (s in cit c) con 996 L d e tampn fosfato y 4 l de ferric
ianuro. Realizar un e s pectro entre 600 y 75 0 nm: TEC LA F1 (CO RRECCIN DE LNE A
DE BASE). De esta forma se s alva y alm acena este espectro c omo blanco para
- Adicionar la c
ntidad de NaOH propuesta en la tabla a con tinuacin, comprobar el pH
y re
istrar de
uevo el e specto y lu ego la A69 9 nm de la muestra.
- Repetir el paso anterio a los pH: 7; 8; 9; 9.2; 9.4; 9.6 9.8; 10; 10.5; 11.
Referencias