UADY

FACULTAD DE
QUMICA.
Campus de Ciencias
De la Salud

LABORATORIO DE MTODOS INSTRUMENTALES

PRCTICA 1:
DETERMINACIN DE FSFORO EN BEBIDAS DE COLA POR
ESPECTROFOTOMETRA UV-VIS

EQUIPO 2
DURAN GARCIA YAMILE DEL ROCIO
DZUL CANCHE EDWIN ISRAEL
MARTIN CHE CARLOS PATRICIO
QUINTAL RIVERA CRISTIAN MARTIN

SALN 8

MRIDA, YUCATN, MXICO

24 de Enero de 2013

INDICE

ANTECEDENTES

OBJETIVOS

METODOLOGIA

RESULTADOS

DISCUSIONES

CONLUSIONES

REFERENCIAS
Antecedentes
El estudio a nivel bioqumico de cualquier molcula requiere la utilizacin de
tcnicas analticas que permitan su determinacin cualitativa y cuantitativa, as
como su caracterizacin fsico-qumica y biolgica. Uno de los mtodos ms
sencillos, accesibles, tiles y utilizados es la espectroscopia, en general, y la
espectroscopia ultravioleta-visible, en particular. Se puede identificar y
cuantificar biomoleculas en solucin y en muestras biolgicas, con el empleo

de reactivos especficos que reaccionan con el compuesto a analizar y forman

un producto coloreado que permite detectarlo en muestras complejas. 1
El fundamento de la espectroscopia se debe a la capacidad de las molculas
para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UVvisible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una molcula puede
absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura
atmica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza inica,
constante dielctrica), por lo que dicha tcnica constituye un valioso
instrumento para la determinacin y caracterizacin de molculas. 1
Las molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla en forma de
energa interna. Cuando la luz (considerada como energa) es absorbida por
una molcula se origina un salto desde un estado energtico basal o
fundamental, a un estado de mayor energa (estado excitado) figura#1 y slo
se absorber la energa que permita el salto al estado excitado. 1

Figura#1. La absorcin de energa hace que la molcula pase de estado

basal a estado excitado

Cada molcula tiene una seria de estados excitados (o bandas) que la

distingue del resto de las molculas. Como consecuencia, la absorcin que a
distintas longitudes de onda presenta una molcula esto es su espectro de
absorcin, constituye una seal de identidad de la misma. Por ltimo, la
molcula en forma excitada libera la energa absorbida hasta el estado
energtico fundamental.

La ley de Lambert-beer expresa la relacin entre absorbancia de la luz

monocromtica (de longitud de onda fija) y concentracin de un cromforo en
solucin: 1
A=bc

A= absorbancia =
coeficiente de extincin
molar c= concentracin

La absorbancia de una solucin es directamente proporcional a su

concentracin a mayor nmero de molculas mayor interaccin de la luz con
ellas, tambin depende de la distancia que recorre la luz por la solucin a igual
concentracin.1
La medicin de absorbancia de la luz por las molculas se realiza en unos
aparatos llamados espectrofotmetros. Aunque pueden variar en diseo, en
especial con la incorporacin de ordenadores para el anlisis de datos, todos
los espectrofotmetros constan, segn se indica la figura#2 de:1
1) Una fuente de energa radiante: lmpara de deuterio y tungsteno
2) Un monocromador para la seleccin de radiaciones de una determinada
longitud de onda: filtros, prismas, redes de difraccin.
3) Un compartimiento donde se aloja un recipiente transparente (cubetas o
tubos) que contenga la muestra pueden ser de vidrio, cuarzo o plstico
transparente. Para medir en UV se deben usar las de cuarzo o slice
fundido, porque el vidrio no transmite la radiacin UV.
4) Un detector de luz y un amplificador convertidor de las seales
luminosas en seales elctricas.
5) Un registrador o sistema de lectura de datos. 1

Figura#2 partes de
un espectrofotmetro

Objetivos

Conocer las partes que conforman un espectrofotmetro de UV-VIS y la

funcionalidad del equipo.

Realizar una curva de calibracin para cuantificar la concentracin de

fosforo en una muestra obtenida en bebidas de cola mediante la tcnica
de UV-VIS.

Metodologa
Se prepar 100 ml de la solucin stock de P 2O5 a 100 ppm a partir de KH 2PO4
se pes 0.0192 g y se aforo hasta 50 ml en un matraz de aforo, despus se
prepar una solucin de 25 ml a 4 ppm de la solucin anterior. Seguidamente
se procedi a preparar la solucin reductora a partir de pesar 0.159 g de
molibdato de amonio y disolvindolo en 5 ml de agua destilada, se pes 0.2190
g de cido ascrbico que se disolvi en 10 ml de agua destilada y se prepar
una disolucin de H2SO4 concentrado en 15 ml de agua destilada, luego se
mezclaron las tres mezclas en el orden de preparacin y luego aforar a 50 ml.
Se prepar una curva de titulacin con alcuotas tomadas de la solucin de
trabajo de 4 ppm en 1, 2, 3, 4 y 5 ml, las cuales se le agregaron 4 ml de la
solucin reductora y se aforaron hasta 10 ml con agua destilada.
Teniendo la muestra, Coca Cola , se tom 10 ml de esta, los cuales fueron
desgasificados utilizando un bao de ultrasonido, de la muestra ya
desgasificada se tom una alcuota de 1 ml y se le agrego 4 ml de la solucin
reductora y se le aforo hasta 10 ml con agua destilada, la preparacin de la
muestra se realiz por duplicado, a la par se prepar un blanco.
Las soluciones preparadas fueron calentadas a bao mara a 50 C durante 30
minutos, ya cumplido con el tiempo de calentamiento se retiraron del bao para
dejarlas enfriar. Las soluciones de trabajo junto con el blanco que en total
resultaron 9 fueron depositadas en celdas de plstico para su anlisis. Las
muestras ya dispuestas en la celdas ya analizaron en el espectrofotmetro
Genesys 10S UV-Vis Spectrophotometer-ThermoScientific. Se realiz un
barrido entre el intervalo de 700 a 850 nm para determinar la longitud de onda
mxima en esa regin se deseaba cuantificar la concentracin de fosforo en la
muestra.
RESULTADOS-DISCUSIONES

1. Para la preparacin de la solucin stock de 100 mL con una

concentracin de 100 ppm, se prepar a partir del KH 2PO4, ya que el
P2O5 no existe en la naturaleza; para lo cual se hicieron los siguientes
clculos a partir del KH2PO4:
100 ppm = 100 mg = 0.1 mg/mL
1000 mL

(0mg/mL)(100mL)(1g/1000 mL) = 0.01g de P2O5

0.01g de P2O5 X 1 mol de P2O5 X 4 mol KH2PO4 X 136.08g de KH2PO4 =

141.9446g de P2O5

2 mol de P2O5

1 mol KH2PO4

= 0.0191 g KH2PO4
Al realizar la pesada de 0.0191 g de KH 2PO4 la cantidad vari por
diezmilsimas, nuestro valor real del peso fue de: 0.0192 g de KH 2PO4
0.0191g de KH2PO4

0.01g de P2O5

0.0192g de KH2PO4

X = 0.01005 g de P2O5
Al variar la cantidad del peso, tambin la concentracin se ve afectada,
por lo tanto nuestra nueva concentracin fue la siguiente:
1g

---------------- 1000 mg

0.01005 g ----------- X

ppm = 10.05 mg = 100.5 ppm

X = 10.05 mg de P 2O5

0.1 L
2. Para la preparacin de una solucin de trabajo de 25 mL con una
concentracin de 4 ppm, se tom 1 mL de la solucin stock; debido al aumento
de la concentracin de la solucin stock, tambin se ven afectadas las
concentraciones de las siguientes alcuotas:
(100.5 ppm)(1 mL) = (25 mL)(ppm2)
ppm2 = (100.5 ppm)(1 mL) / 25 mL
ppm2 = 4.02 ppm
Concentraciones de las alcuotas:
(1 mL)(4.02 ppm) = (10 mL)(ppm)
ppm = (1 mL)(4.02 ppm) / 10 mL
ppm = 0.402 ppm

Alcuota de 1 mL

ppm = (2 mL)(4.02 ppm) / 10 mL

ppm = 0.804 ppm

Alcuota de 2 mL

ppm = (3 mL)(4.02 ppm) / 10 mL

ppm = 1.206 ppm

Alcuota de 3 mL

ppm = (4 mL)(4.04 ppm) / 10 mL

ppm = 1.608 ppm

Alcuota de 4 mL

ppm = (5 mL)(4.02 ppm) /10 mL

ppm = 2.01 ppm

Alcuota de 5 mL

Valores obtenidos en el espectrofotmetro:

Tabla 1. Valores de la curva de calibracin

Solucin

de

10

Alcuotas mL

mL Concentracin de P2O5

Absorbancia

(ppm)

835 nm

0.402

0.099

0.804

0.280

1.206

0.467

1.608

0.649

2.010

0.767

CARACTERISTICAS DE LA CURVA DE CALIBRACION DADAS POR EL

EQUIPO
AJUSTE DE CURVA

LINEAL
Desviacin estndar: 2.41x10 -02

Pendiente: 0.424

Coeficiente de correlacin: 9.97x10 -01

Intercepto: - 0.0591

Tabla 2. Absorbancia y concentracin de la muestra

Muestra

Absorbancia a 835 nm

Concentracin (ppm)

0.232

0.686

0.367

1.005

Niveles de fsforo presentes en las muestras de cola a partir de las

concentraciones en ppm de P2O5 utilizando el factor gravimtrico:
ppm P2 = (X ppm de P2O5) (50) (10) (62 g de P2 / 142 de P2O5)
Muestra 1
ppm P2 = (0.686 ppm) (50) (10) (0.4366)
ppm P2 = 149.75 mg/L
Muestra 2
ppm de P2 = (1.005 ppm) (50) (10) (0.4366)
ppm de P2 = 219.39 mg/L
Para determinar la presencia de fosforo en la bebida de cola se realiza con un
mtodo llamado azul de molibdeno. Para ello el fosforo pasa de un estado
inorgnico a un complejo fosfmolibdato. Durante la determinacin no se
determina el fosforo directamente ya que no es posible, el complejo formado es
el que se cuantifica y basndose en la absorbancia del complejo fosfomolibdato
debe ser proporcional a la cantidad de fosforo presente en la bebida. 3
Los resultados obtenidos se puede observar un incremento exponencial de la
absorbancia conforme aumenta la concentracin ya que segn la ley de
Bouguer-Beer la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin
de la muestra.2

Ley de Bouguer-Beer2
A=bC

donde: A=absorbancia

=coeficiente de extincin molar

b

b= densidad ptica
C=concentracin

El contenido de fosforo en la muestra en la segunda muestra fue de 219 ppm,

de acuerdo a la literatura el contenido de fosforo en Coca Cola es de 215
ppm. La diferencia se puede deber a longitud de onda utilizada ya que en el
laboratorio se us una longitud de onda de 835 nm y en la literatura se usa una
longitud de 830 nm, estos pudo influir en la variacin de resultados, de igual
forma se pudo cometer errores durante la medicin de la muestra o al momento
de aforar. Otra posible interferencia pudo ser la solucin reductora, en la
literatura nos menciona que la solucin reductora se tiene que almacenar por lo
menos una semana antes de usarla.

Conclusin:
Se logr el objetivo de conocer las partes del espectrofotmetro de UV-Vis y de
igual se logr realizar un curva de calibracin de UV-Vis para la determinacin
de fosforo en la bebida de cola. Se lleg a la conclusin de que la cantidad de
fosforo en el refresco de cola no presenta peligro para el cuerpo ya que no se
encuentra en grandes cantidades.
Referencias
1) Daz N, A., Ruiz A, B., Reyes E, F., Cejudo A, G., Novo J, J., Fiana I, T,
espectrofotometra: espectros de absorcin y cuantificacin colorimtrica
de biomoleculas. Departamento de bioqumica y biologa molecular,
campus universitario de rabanales, facultad de medicina.
2) A. L. Underwood. R. A. Day, Jr. Qumica Analtica y Cuantitativa.
Espectrofotometra, editorial Pearson Educacin. 5ta edicin. Pp 469473.
3) http://www.linear.es/ficheros/archivos/1148010C.pdf
2013)

(revisado

enero

4) Cavazos, N.; Zrate, L.; Torres, E.; Determinacin de fsforo y cafena

en bebidas de cola. Educacin Qumica. 2001, 12, 2. Pp. 116-120