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de hematologa XE-2100
Diapositiva 1: Esta es una versin traducida al espaol de la presentacin hecha por la doctora
Cheryl Ginsburg quien es profesora en el Departamento de Medicina de Laboratorio, Divisin de
Patologa y Medicina de Laboratorio en la Universidad de Texas, en el Centro Anderson para
Cncer. Ella ha publicado numerosos artculos sobre una variedad de tpicos incluyendo el
diagnstico de leucemia aguda. Su ms reciente investigacin se ha enfocado en la fraccin de
plaquetas inmaduras, tambin conocidas como IPF por sus siglas en ingls. Este trabajo ha sido
presentado en las reuniones de la Sociedad Internacional para el Laboratorio de Hematologa
(ISLH por sus siglas en ingls) de 2009 y 2010.
Veremos a detalle su trabajo titulado Evaluacin del parmetro fraccin de plaquetas inmaduras
en el analizador automatizado de hematologa XE-2100 de Sysmex en la prediccin de la
recuperacin plaquetaria en pacientes con trombocitopenia inducida por quimioterapia
A continuacin la traduccin de la presentacin de la doctora Ginsburg.
Diapositiva 2: Antes de comenzar debo aclarar que recib honorarios de la corporacin Sysmex
por la actividad educacional del da de hoy.
Diapositiva 3: Agradezco al Dr. Ian Giles y a la Corporacin Sysmex por patrocinar este
proyecto y por permitirme regresar a la investigacin. Me gustara citar varios artculos que me
ayudaron para analizar los datos. El primero es Las plaquetas reticuladas, una medicin
confiable para reducir la transfusin profilctica de plaquetas despus de una quimioterapia
intensa el cual us como modelo para ver la recuperacin plaquetaria despus de la
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Diapositiva 9: En nuestro hospital muchos pacientes, aun con leucemia aguda, son monitoreados
como pacientes externos cada dos a cuatro das. Usualmente reciben una transfusin profilctica
si el conteo de plaquetas cae por debajo de 20,000. Esto puede ocasionar problemas logsticos
para el paciente y el personal del laboratorio.
Diapositiva 10: La forma en que uno maneja los riesgos y dificultades de una transfusin es
realizndolas solo cuando son necesarias. La siguiente pregunta, y la principal, que tratar de
responder con mi estudio es sera posible disminuir las transfusiones profilcticas si se predijera
la recuperacin inminente de la mdula sea?
Diapositiva 11: La pregunta es cmo se predice la recuperacin inminente de plaquetas? Deben
tener una forma de monitorear la cintica de la recuperacin plaquetaria. Una forma de hacerlo
es buscar en circulacin las plaquetas ms inmaduras producidas por la mdula sea. La forma
tradicional de hacerlo es buscar las plaquetas reticuladas, una prueba realizada en el laboratorio
de citometra de flujo. Otra manera, que se compara mucho, es buscar la fraccin de plaquetas
inmaduras, que est disponible en el canal de reticulocitos y plaquetas pticas de los analizadores
hematolgicos automatizados de alto rendimiento XE-2100 y XE-5000 de Sysmex.
Diapositiva 12: Ambos mtodos se basan en la tincin fluorescente del cido ribonucleico
residual de las plaquetas. Las plaquetas reticuladas pueden necesitar un tubo separado para ser
enviado a un laboratorio distinto y requiere muchos pasos incluyendo fijacin, tincin e
incubacin de la muestra que toma hasta una hora. Por el contrario, la fraccin de plaquetas
inmaduras es realizada fcilmente en el analizador hematolgico en cuestin de minutos; tan
rpido como un conteo de reticulocitos.
Diapositiva 13: La pregunta es son comparables estos resultados? Si revisamos estas grficas
del artculo de Chou y colaboradores, las plaquetas reticuladas muestran tres fases. Una es el
nadir, que es el punto ms bajo para las plaquetas reticuladas. La siguiente fase es la de
recuperacin inminente que es cuando las plaquetas reticuladas estn en su punto mximo y por
ltimo la fase de autonoma plaquetaria que es cuando ocurre la recuperacin de las plaquetas.
Como podemos ver en uno de nuestros pacientes, se observan las mismas tres fases: el nadir
donde el conteo de plaquetas y fraccin de plaquetas inmaduras estn en su nivel ms bajo, el
punto que he marcado como recuperacin inminente de plaquetas (IPR por sus siglas en ingls),
donde la fraccin de plaquetas inmaduras est en su nivel mximo, aunque el conteo de plaquetas
est an reducido y la fase de recuperacin donde los conteos de plaquetas han comenzado a
incrementar y el IPF est cayendo a su nivel basal.
Diapositiva 14: Para la fase inicial de mi estudio, tomamos cinco pacientes con sarcoma que
estaban recibiendo ciclos de quimioterapia sucesivos. Estas muestras fueron procesadas en el
analizador XE-2100 obtenindose el conteo de plaquetas y porcentaje de la fraccin de plaquetas
inmaduras; calculamos el valor absoluto de la misma. Los ciclos de quimioterapia fueron
repetidos cada tres semanas despus de la recuperacin hematolgica; escogimos estos pacientes
por varias razones. La primera porque queramos monitorear la cintica de los pacientes que
usualmente no requieren transfusin y la segunda porque estos pacientes tambin fueron parte de
otro estudio de mi co investigador que tuvo inters en las plaquetas reticuladas y agentes
trombopoyticos.
Diapositiva 15: Comenzamos a recolectar datos al momento de la ltima dosis de quimioterapia
y comenzamos a monitorear los conteos de plaquetas y resultados de la fraccin de plaquetas
inmaduras. Estos pacientes fueron monitoreados constantemente hasta que el conteo de plaquetas
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estuvo por debajo de 50,000. Despus se les realizaron hemogramas seriales diariamente,
incluyendo conteo de plaquetas, que fueron realizados hasta que este recuper un nivel mayor de
50,000 por microlitro. Establecimos que cada paciente debera tener no menos de cinco conteos
plaquetarios y el punto final principal sera cuando dicho conteo dejara de bajar y comenzara a
incrementar. En la diapositiva se incluye nuestro mtodo de anlisis de datos.
Diapositiva 16: El analizador hematolgico XE-2100 utiliza citometra de flujo fluorescente con
un colorante de polimetina. Grafica la dispersin frontal, que indica el tamao celular, y la
intensidad de fluorescencia, que corresponde al contenido de cidos nucleicos. En el
dispersograma se puede determinar el conteo de plaquetas pticas y el porcentaje de plaquetas
inmaduras, que son aquellas con la mayor fluorescencia debida al acido ribonucleico residual.
Aqu se observa un dispersograma de plaquetas pticas con las plaquetas inmaduras marcadas en
color verde.
Diapositiva 17: Como resultado de esta fase del estudio se observ que todos los pacientes
presentaron una relacin inversa importante entre el conteo de plaquetas y el porcentaje de la
fraccin de plaquetas inmaduras. Tambin hubo una asociacin importante entre el conteo de
plaquetas en sangre perifrica y el valor absoluto de la fraccin de plaquetas inmaduras.
Diapositiva 18: Esta es una grfica representativa para muchos de los ciclos de quimioterapia en
la mayora de los pacientes donde se observa una relacin inversa entre la fraccin de plaquetas
inmaduras y el nmero de plaquetas de tal forma que cuando uno estaba en su nadir el otro
estaba en su pico.
Diapositiva 19: Esto es anlogo a los patrones observados por Kuter cuando examin conejos
con trombocitopenia inducida por busulfan. Administr busulfan en los das uno y tres y not
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Diapositiva 22: Mis conclusiones preliminares son: nuestro estudio indica que el porcentaje de
la fraccin de plaquetas inmaduras es inversamente proporcional al conteo de plaquetas en
sangre perifrica. Sin embargo, pudimos demostrar, en unos cuantos ciclos de tiempo
apropiados, que la quimioterapia puede perturbar temporalmente esta relacin natural. Una cosa
que descubr es que necesitamos repetir estos estudios y empezar la recoleccin de datos cuando
comienza la quimioterapia. Esa pareca ser la clave para identificar esa fase en que el conteo de
plaquetas y la fraccin de plaquetas inmaduras estn disminuyendo simultneamente. Tambin
necesitamos recolectar datos de pacientes quienes pueden desarrollar una trombocitopenia ms
severa y requerir una transfusin profilctica de plaquetas si queremos tener una idea de que la
fraccin de plaquetas inmaduras puede predecir cundo ya no se requiere una transfusin.
Diapositiva 23: Para la siguiente etapa del estudio se observaron a 25 pacientes con leucemia
aguda. Algunos estaban en remisin, como se puede observar en la parte superior de esta tabla, y
otros tenan la enfermedad inactiva. Para poder hacer esta tabla un poco ms fcil de entender
todos los conteos plaquetarios estn en color rosa, todos los valores de fraccin de plaquetas
inmaduras en color azul y los das en color blanco; contando los das entre el nadir y el inicio de
la quimioterapia o los das despus de la ltima transfusin. La columna verde son tambin das
pero entre el inicio de la quimioterapia y la ltima transfusin requerida o el nadir del conteo de
plaquetas si no se requiri una transfusin. Algo que hay que sealar en esta tabla es que hay tres
pacientes de los que no hay informacin despus de los das en que se lleg al nadir de la
fraccin de reticulocitos inmaduros. El paciente 16, que despus de su nadir se le dio
seguimiento en otra institucin. Los pacientes 12 y 28 que nunca recuperaron su conteo de
plaquetas durante el tiempo en el que fueron estudiados; uno se estudi por 26 das y el otro por
39 das. La observacin final de esta tabla es que inclu informacin acerca de la fraccin de
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reticulocitos inmaduros basada en preguntas que recib despus de presentar mis datos de los
pacientes con sarcoma donde alguien me pregunt cmo corresponde la fraccin de reticulocitos
inmaduros a la fraccin de plaquetas inmaduras. Pienso que es interesante porque, a medida que
estudi ms pacientes, fue claro que la fraccin de reticulocitos inmaduros puede ser un
indicador importante en la recuperacin de la mdula sea.
Diapositiva 24: Cuando se analizaron los datos de los pacientes de la diapositiva anterior, not
tres diferentes patrones. En uno de ellos haba varios pacientes que comenzaron la quimioterapia,
alcanzaron el nadir de la fraccin de plaquetas inmaduras y luego, en el punto ms alto del IPF,
alcanzaron el nadir del conteo de plaquetas y despus mostraron una recuperacin rpida, con o
sin transfusin; en otras palabras, sus concentraciones disminuyeron drsticamente una vez,
fueron transfundidos o no requirieron transfusin y luego se recuperaron; eso est ejemplificado
por el paciente 6.
Diapositiva 25: Aqu estn los datos de anlisis sucesivos del paciente 6 en los que pueden ver
valores en color rojo lo que corresponde al nadir de la fraccin de plaquetas inmaduras, el conteo
de plaquetas y la fraccin de reticulocitos inmaduros. El nadir de la fraccin de plaquetas
inmaduras en el da 180 y el nadir de las plaquetas en el da 184 que tambin fue el nadir para la
fraccin de reticulocitos inmaduros.
Diapositiva 26: El segundo patrn fue ejemplificado por el paciente 7 quien present un nadir en
su fraccin de plaquetas inmaduras pero no tuvo una recuperacin rpida en su nmero de
plaquetas y requiri de varias transfusiones durante varios das antes de alcanzar un nivel de
recuperacin independiente de plaquetas.
Diapositiva 27: Estos son los datos de ese paciente. Alcanz el nadir de su fraccin de plaquetas
inmaduras en el da 187 y despus alcanz un nadir en su conteo de plaquetas antes de
transfundirlo en el da 195 seguido de un nadir real en el da 202 en el conteo de plaquetas y el
nadir en su fraccin de reticulocitos inmaduros en el da 204. El da en que finalmente no
requiri de transfusin fue el da 211 en color azul.
Diapositiva 28: El ltimo patrn que observamos se vio en el paciente 28 quien en realidad
nunca lleg a la recuperacin inminente de plaquetas por lo que necesit varias transfusiones
durante el estudio. Una cosa importante es que este paciente demuestra lo que sucede cuando un
paciente ha recibido transfusiones y en muchos de los ciclos se present una disminucin en la
fraccin de plaquetas inmaduras despus de una transfusin; este es un patrn que se ha
encontrado anteriormente cuando las plaquetas transfundidas se unen a la trombopoyetina
dejando poca de esta libre para estimular a la fraccin de plaquetas inmaduras. Por lo tanto,
existe la incgnita de que si realizar demasiadas transfusiones suprime ms a la mdula sea y
retardar la recuperacin aparente de la misma.
Diapositiva 29: Estos son los datos del paciente 28. Comenz en el estudio cuando su conteo de
plaquetas era de 26,000 y su fraccin de plaquetas inmaduras de 3.6, que fue el punto bajo antes
de la transfusin. Pero pueden ver en este paciente que despus de las transfusiones, digamos en
el da 200 donde el conteo de plaquetas es 19 y la fraccin de plaquetas inmaduras es 5, las
plaquetas fueron transfundidas despus de recibir ese reporte y, aunque su conteo de plaquetas el
siguiente da fue de hasta 23,000, la fraccin de plaquetas inmaduras disminuy a 3.3%,
mostrando una supresin definitiva de la fraccin de plaquetas inmaduras relacionada con la
transfusin de plaquetas y esto ocurri durante varios ciclos ms; de hecho, el da 211 su conteo
de plaquetas fue de 42 y la fraccin de plaquetas inmaduras de 48. Fue transfundido y esta vez el
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conteo de plaquetas no aument pero el IPF disminuy hasta 1.5. Debe existir un problema al
hacer demasiadas transfusiones.
Diapositiva 30: La conclusin de esta etapa del estudio es que hay una diferencia estadstica
entre el tiempo para llegar al nadir de la fraccin de plaquetas inmaduras y el tiempo para llegar
al nadir de las plaquetas, que era el punto estadstico que tratamos de clarificar. No hay
correlacin aparente entre el valor de la fraccin de plaquetas inmaduras antes de la recuperacin
inminente de plaquetas y el cambio en el nmero de plaquetas cuando se ve todo el juego de
datos. Sin embargo, si solo vemos a los pacientes que estn en remisin, puede haber una
correlacin dbil entre los valores de la fraccin de plaquetas inmaduras antes de la recuperacin
inminente de plaquetas y el cambio en el nmero de plaquetas en los pacientes en remisin.
Diapositiva 31: Aqu hay una grfica de la fraccin de plaquetas inmaduras frente al cambio en
el nmero de plaquetas viendo todo el grupo de datos.
Diapositiva 32: Cuando observamos la fraccin de plaquetas inmaduras frente al cambio en el
nmero de plaquetas en pacientes con enfermedad activa, parece haber una pequea correlacin
entre el porcentaje de la fraccin de plaquetas inmaduras y el cambio en el nmero de plaquetas.
Diapositiva 33: Sin embargo, en pacientes en remisin, existe una correlacin dbil entre el
porcentaje de la fraccin de plaquetas inmaduras y el cambio en el nmero de plaquetas.
Diapositiva 34: El hallazgo de esta dbil correlacin origin otra etapa de la investigacin. Si
solo vemos las plaquetas de los pacientes en remisin la pregunta es, hay correlacin entre la
fraccin de plaquetas inmaduras y el aumento en el conteo de plaquetas despus de la ltima
transfusin o despus del nadir de las plaquetas? En otras palabras, si solo nos fijamos en los
pacientes que estn en remisin cuando estaban bajo terapia de consolidacin, podramos
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plaquetas inmaduras sucedi antes que el nadir de las plaquetas y que por s solo, el punto bajo
en la fraccin de plaquetas inmaduras no necesariamente predijo cuando ocurrira la
recuperacin plaquetaria. Pero la fraccin de reticulocitos inmaduros pareci indicar mucho
mejor el punto en donde se tuvo verdadera supresin de la mdula sea causada por la
quimioterapia y el paciente pudo salir de esa supresin. Siento que es importante ver ambos
factores ya que la fraccin de plaquetas inmaduras por si sola puede dejar de disminuir debido a
que el conteo de plaquetas est disminuyendo as que el porcentaje de plaquetas inmaduras
constituye un porcentaje mayor de plaquetas totales mientras que la fraccin de reticulocitos
inmaduros parece moverse cuando est ocurriendo una recuperacin de la mdula sea. He visto
la fraccin de plaquetas inmaduras y la fraccin de reticulocitos inmaduros solo como valores
absolutos pero tambin quera ver como estos valores cambiaron en relacin a los obtenidos
previamente asumiendo que si los mdicos comenzaran a estudiar la fraccin de plaquetas
inmaduras y la fraccin de reticulocitos inmaduros, los nmeros absolutos y su relacin con los
valores obtenidos previamente podran hacer la diferencia. As que ajust el anlisis estimativo,
tom un promedio de la fraccin de plaquetas inmaduras, el cambio del IPF e IRF y si este
cambio fue un valor positivo o negativo y obtuve los valores en la parte baja de la tabla como el
promedio.
Diapositiva 37: En esta tabla se presentan todos los ciclos donde los pacientes alcanzaron un
conteo bajo de plaquetas y despus fueron transfundidos. Sin embargo, en este ciclo, no
alcanzaron la recuperacin plaquetaria independiente. Viendo un promedio de la fraccin de
plaquetas inmaduras, la fraccin de reticulocitos inmaduros y el cambio en dichas fracciones,
estos nmeros fueron, en general, ms bajos que los de la tabla anterior. Sin embargo el cambio
ms aparente fue en la fraccin de reticulocitos inmaduros en la recuperacin y el cambio de los
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anteriores que haba sido positivo en la grfica anterior pero que ahora fue negativo; esos valores
estn resaltados en color rojo. Esto sugiere que, en general, en este grupo de muestras la fraccin
de reticulocitos inmaduros continu disminuyendo aun cuando el paciente estaba siendo
transfundido y que este patrn en donde la fraccin de reticulocitos inmaduros no se estabiliz
puede ser predictivo en la recuperacin de la mdula sea.
Diapositiva 38: A dnde vamos? Yamaoka y colaboradores sugirieron que el pico de la
fraccin de plaquetas inmaduras mayor a 10% predijo una recuperacin ms rpida del paciente
o de las plaquetas. Definieron la recuperacin plaquetaria como un conteo de plaquetas mayor a
30,000; esto en pacientes que tenan trombocitopenia inducida por quimioterapia y los que
fueron sometidos a un trasplante de mdula sea. Un buen nmero de estos pacientes tuvieron un
pico mayor al 10% pero algunas veces esto fue despus de la ltima transfusin y otras veces fue
antes. Un conteo de plaquetas mayor a 30,000, aunque puede ser bueno para confirmar que el
trasplante de mdula sea funcion, puede no ser tan importante en nuestro caso porque los
pacientes, en general, no son transfundidos cuando las plaquetas pasan de 20,000. Es a este valor
de plaquetas al que se le debe poner atencin ya que es el valor a partir del cual los mdicos
deciden si se transfunde o no. Aunque el estadista tiene que confirmar estos datos, parece que
hay una diferencia real en el cambio de la fraccin de reticulocitos inmaduros de los ciclos
exitosos y de los no exitosos; con el promedio en los no exitosos ms propenso a mostrar una
disminucin de los valores previos. Quizs algunos umbrales de la fraccin de plaquetas
inmaduras ms una tendencia de la fraccin de reticulocitos inmaduros sern predictores de la
recuperacin de la mdula sea y se podrn evitar transfusiones plaquetarias adicionales.
Finalmente, un artculo publicado por Takami y colaboradores menciona dos artculos que
indican que en presencia de infeccin la fraccin de plaquetas inmaduras puede aumentar sin que
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