Manual de Trabajos Practicos Parasitologia Medica

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL
FRANCISCO DE MIRANDA
AREA CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMA DE MEDICINA
U.C. MICROBIOLOGIA I
MANUAL DE TRABAJOS PRACTICOS DE

PARASITOLOGIA MDICA
REALIZADO POR: LIC. YOTSABETH SAUL GARCIA

SANTA ANA DE CORO 2009
INDICE
UNIDAD I: Generalidades.
Generalidades..
..
. 3
Normas de Bioseguridad.
. 4
Microscopio ptico
. 6
UNIDAD II: Protozoarios ...
.. 10
Pr
Prctica N1: Protozoarios Intestinales y Genitales
..... 11
Prctica
Prctica N2: Leishmania, sus vectores y las Leishmanio
Leishmanioisis.
. 21
Prctica
Prctica N3: Trypanosoma, sus vectores y las Tripanosomosis Americana
y Rangeliana ...
29
Prctica
Prctica N4: Plasmodium, SUS VECTORES Y LAS MALARIAS HUMANAS..
35
Prctica N 5: Toxoplasma gondii

gondii,, y toxoplasmosis y otras coccidiosis emergentes
en inmunosuprimidos. (Criptosporidiasis, Ciclosporiasis, Isosporiasis)
. 41
UNIDAD III: Helmintos .

Prctica N6: Geohelmintos y Geohelmintiasis .
Prctica N 7: Biohelmintos y Biohelmintiasis .
BIBLIOGRAFIA.
. 47
. 48
. 59
69
2
Realizado por: Lic Yotsabeth Sal Garca. U.C.: Microbiologa. Programa Medicina UNEFM. 2009
UNIDAD I
GENERALIDADES
3
Microbiologa I
Normas de Bioseguridad
Normas de Bioseguridad en el Laboratorio de Microbiologa

INTRODUCCIN
INTRODUCCIN
Todas las personas que trabajan con materiales
que contengan agentes infecciosos deben estar
conscientes de los peligros potenciales
asociados a su manipulacin; adems, deben
estar entrenadas en las prcticas y tcnicas
requeridas para manejar estos materiales
biolgicos de una manera segura.
Es por ello que antes de comenzar con
las actividades prcticas, todas las personas
involucradas (estudiantes,, personal tcnico y
profesores) tenemos la obligacin de conocer
cules son las normas de seguridad a seguir en
el laboratorio, de manera tal, que el trabajo se
realice con un riesgo mnimo de exposicin,
tanto para las personas que lo ejecutan como
para el medio ambiente y los dems seres vivos.
vivos
El objetivo general de esta lectura, es
ofrecerle al estudiante
nte una gua para que
realice sus actividades prcticas en el
Laboratorio de Microbiologa de una manera
adecuada y segura.
en el Laboratorio de Microbiologa, razn por

la cual debemos llevarlas a cabo con
precaucin, adems de tener un ambiente de
trabajo en el que seamos capaces de reconocer
y evitar los peligros involucrados con estas
actividades, para as poder evitar posibles
accidentes.
Infecciones Adquiridas en el Laboratorio:

Se dice que ocurre una contaminacin en un
Laboratorio Microbiolgico, cuando un
microorganismo, capazz de causar enfermedad,
entra al cuerpo de un individuo en una
concentracin suficiente y a travs de una ruta
determinada, siendo capaz de vencer las
defensas del individuo.
Una Infeccin Adquirida en el Laboratorio
(IAL) es aquella que resulta de una tarea
tar
realizada en el Laboratorio de Microbiologa,
tanto por el operador como por cualquier otra
persona que pudo quedar expuesta, como
resultado de la manipulacin de un
determinado agente infeccioso.
Vas de Infeccin
Los microorganismos pueden ingresar al
organismo a travs de: la boca, los pulmones, la
piel (intacta o lesionada), la conjuntiva, etc. En
las IAL, la ruta de entrada no es necesariamente
la misma que cuando la enfermedad se
adquiere en forma natural.
BIOSEGURIDAD
La seguridad biolgica o bioseguridad,
es la aplicacin del conocimiento, de las
tcnicas y de los equipos necesarios para
prevenir la exposicin del personal, del rea de
laboratorio y del medio ambiente a agentes
potencialmente infecciosos o Biopeligrosos.
Agentes Biopeligrosos:
Son todos aquellos agentes biolgicos y
materiales que son potencialmente peligrosos
para los seres humanos, los animales y las
plantas. Entre ellos podemos citar: bacterias,
virus, hongos, parsitos (helmintos y
protozoarios),,
productos
recombinantes,
alergenos, priones, etc.
Riesgo Microbiolgico:
En el Laboratorio de Microbiologa existen dos
d
fuentes principales de peligros biolgicos, uno
de ellos lo representa el procesamiento de
muestras provenientes de un paciente,
paciente y en
segundo lugar el manejo de cultivos de
microorganismos, los cuales pueden alcanzar
concentraciones muy elevadas y pueden
puede llegar
a provocar una infeccin si no son
manipulados con precaucin.
El Riesgo Microbiolgico se encuentra presente
cada vez que realicemos una actividad prctica
Las vas de contaminacin ms frecuentes

frecuente en el
laboratorio se dan a travs de:
o
La boca
Comer, beber y fumar en el laboratorio.
Realizar transferencias con pipetas sin utilizar
ningn tipo de proteccin.
Transferencia indirecta de microorganismos a
travs de los dedos o utensilios contaminados
(lpices, bolgrafos, etc.).
La piel
Inoculacin accidental con una aguja
hipodrmica u otros instrumentos punzantes o
de vidrio.
Cortaduras o rasguos.
Los ojos
Salpicaduras de materiales infecciosos.
Transferencia indirecta de microorganismos a
travs de los dedos contaminados.
4
Microbiologa I
Los pulmones
Inhalacin de microorganismos transportados
por el aire (aerosoles).
NORMAS DE SEGURIDAD EN EL
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
- Entrar al laboratorio en forma ordenada;
ordenada
dejar las carteras, libros y otros objetos
personales en el lugar que se les indique para
tal fin.
- Llevar puesta la bata de laboratorio en todo
momento. La misma debe permanecer
completamente cerrada.
- Limpiar y descontaminar las superficies de
trabajo con cloro diluido,, antes de comenzar y
al finalizar la sesin prctica.
- No usar ningn reactivo que no est
debidamente
identificado,
tificado,
verificar
las
etiquetas de los mismos y estar seguro de cmo
emplearlo.
- No devolver sustancias a sus envases
originales.
- Emplear la propipeta al medir lquidos
biopeligrosos.
- Realizar solamente aquellas actividades
indicadas por el Profesor, y no llevar a cabo
experimentos no autorizados.
- Reportar inmediatamente cualquier accidente
al Profesor
rofesor (derrame de material contaminado,
heridas, quemaduras, etc.), por lo que ninguno
debe ser catalogado como menor.
- Reducir al mnimo la formacin de aerosoles
durante la realizacin de cualquier trabajo
prctico.
- Extremar las precauciones cuando se utilicen
agujas y jeringas para evitar la inoculacin
accidental y la generacin de aerosoles durante
su manipulacin y desecho.
- Emplear tcnicas aspticas
ticas para el manejo de
cultivos de microorganismos.
MEDIDAS EN CASO DE EMERGENCIA
- Derrame de material biolgico sobre el
cuerpo: remover
emover la ropa inmediatamente.
Lavar vigorosamente el rea expuesta con agua
y jabn por un (1) minuto.
Reportar el incidente al Profesor.
rofesor.
Buscar atencin mdica si es necesario.
- La ropa contaminada debe ser colocada en
una solucin desinfectante antes de ser lavada.
- Salpicaduras en los ojos con materiales
biopeligrosos: lavar
avar inmediatamente el globo
ocular e interior de la superficie del prpado
con abundante agua durante 15 minutos
aproximadamente. Abrir el ojo para asegurar
Normas de Bioseguridad
efectivamente el lavado, comenzando por los

lo
prpados.
Reportar el incidente al profesor.
Buscar atencin mdica inmediatamente.
- Cortadas menores y heridas por pinchazo:
Lavar vigorosamente la herida con agua y
jabn por varios minutos.
rofesor.
Buscar atencin mdica inmediatamente.
- En el caso de derrames
rofesor.
Limpiar y desinfectar inmediatamente el rea.
La persona que realice la operacin debe llevar
puesto guantes. Para limpiar la porcin del
derrame, los trozos de vidrio rotos y/o cultivo
cu
deben cubrirse con toallas de papel
impregnadas en solucin desinfectante. Al cabo
de diez minutos debe limpiarse empleando
nuevas toallas de papel y desinfectante.
El material contaminado debe ser colocado en
un recipiente para material contaminado o
bolsa de desechos, la cual debe esterilizarse
junto con los guantes utilizados.
El xito de estas normas depende de la sinceridad, la

constancia, la participacin activa y cooperativa de
cada estudiante, por ello antes de asistir al
laboratorio, deben leer el fundamento y las
actividades a realizar, para as evitar posibles
accidentes, con el conocimiento y las tcnicas de
trabajo apropiadas.
BIBLIOGRAFA
- College of Egineering and Engineering
Technology. 2001. Laboratory Safety
Guidelines.
HHMI Lab Safety: Emergency Response
Guide: Personal Injury. 2001.
- Mahon, Conni and Manuselis, George.
2000.
Textbook
of
Diagnostic
Microbiology..
Second
edition.
W.B.
Saunders
Company.USA.
- Universidad de Alicante. Facultad de
Ciencias. Manual de Supervivencia en el
Laboratorio..
Marzo
2001.
http://www.ua.es/centros/ciencias/seguridad
/hab_seg_lab_biol.htmProf.
Alessandra Garcs
Octubre 2001
5
Microbiologa I
Microscopio ptico
MICROSCOPIO OPTICO
El microscopio es un instrumento de
ptica, que permite distinguir los objetos
que por su pequeez se hacen ms o
menos invisibles al ojo desnudo, aportando
de los
os mismos una imagen agrandada e
invertida. Consta de dos partes: una
mecnica y otra ptica.
La parte mecnica est constituida por:
- El tubo: soporta la parte ptica, tiene una
longitud variable segn el fabricante, en su
parte superior se encuentra el ocular y en
la inferior el revlver con la serie de
objetivos.
- La columna o brazo: se unen en su parte
superior con el tubo y en la inferior con el
pie; sirve de soporte a la platina. Posee los
tornillos macromtrico y micromtrico, los
cuales permiten
en el desplazamiento del
tubo.
- La platina: destinada a soportar las
preparaciones, es plana y presenta un
orificio central que permite el paso de los
rayos luminosos, posee pinzas que
aseguran
la
inmovilidad
de
las
preparaciones y un carro provisto de dos
d
tornillos para desplazarlas en direccin
lateral y antero-posterior,
posterior, con lo cual se
logra visualizar toda la preparacin.
- El pie: tiene forma variable y por su pese
da estabilidad al microscopio.
La parte ptica est formada por:
- Fuente de luz: puede ser un espejo mvil
con dos caras: una plana que se utiliza
para la iluminacin con luz solar y otra
convexa para luz artificial. Su funcin es
dirigir los rayos luminosos hacia el eje
ptico. En los microscopios con luz
incorporada, el sistema de iluminacin
i
se
encuentra en el mismo.
- El condensador: se encuentra colocado
exactamente en el eje ptico del
microscopio; su finalidad es condensar la

luz en un punto sobre la platina, donde va
a ser colocado el objeto. Est constituido
por un diafragma-iris
iris para controlar la
cantidad y el ngulo de los rayos
luminosos y por un sistema de lentes. Posee
un aparato enfocador, que consiste en un
pin y una cremallera, que permiten
bajar y subir el condensador por voluntad.
- Objetivos: es el primer elemento
aumentador del microscopio, su funcin es
formar la imagen del objeto; se encuentra
en el inferior del tubo en un revlver que
lleva adaptados 2-3
3 4 objetivos, lo que
permite el cambio de uno a otro con slo
girar el revlver. Cada objetivo est
marcado con su aumento, abertura
numrica y foco equivalente. El aumento o
poder de amplificacin es dimetros, est
indicado por un nmero seguido de una X
o de :1, por ejemplo: 10X 10:1, lo que
indica que tal objetivo aumenta 10
dimetros.
Hay dos tipos de objetivos: los secos, que
son aquellos construidos para ser usados
sin la interposicin de otro medio entre la
lente frontal del objetivo y el objeto, los
ms usados son de 10X, 40Z y 45X. los de
inmersin son los que se usan siempre
sumergidos en un medio para el cual estn
calculados, este medio generalmente es:
aceite, agua o glicerina y su aumento es de
97X y 100X.
- Ocular: constituye el segundo elemento
aumentador del microscopio, son lentes
colocados en la parte superior del tubo y
su funcin es aumentar la imagen dada
por el objetivo. Puede ser nico
(monocular) o doble (binocular) y los ms
usados son de 8X y 10X.
El aumento o magnificacin de la imagen
est dado por el producto de los aumentos
ocasionados por el objetivo y el ocular.
Ejemplo: Ocular= 10X y Objetivo= 40X,
proporciona un aumento de 400X.
(Fig. N 1)
6
Microbiologa I
Microscopio ptico
Fig. N1: Partes del Microscopio ptico

ptico
Disponible en: http://es.wikipedia.org/wiki/Desarrollo_del_microscopio
7
Microbiologa I
USO DEL MICROSCOPIO

Para
examinar
ar
correctamente
la
preparacin debemos estudiar su forma y
estructura general en primer trmino y
despus los muchos y finos detalles de que
est compuesta, para lo cual se requiere de
varios aumentos, ya que mientras ms bajo
es el aumento, mayor es el tamao del
campo que se observa, pero menores los
detalles de las diferentes estructuras y
viceversa.
Procedimiento:
1- Ajustar la iluminacin del campo de tal
forma que ste quede bien iluminado, para
lo cual se coloca el objetivo de menor
aumento, se abre
bre todo el diafragma-iris
diafragma
y
se sube totalmente el condensador.
2- Montar la preparacin sobre la platina,
fijarla de tal modo que el centro de la
preparacin coincida con el orificio
central de la platina por donde pasan los
rayos luminosos.
3- Observar lateralmente
ateralmente y con el tornillo
macromtrico, bajar el tubo hasta que el
objetivo de menor aumento quede muy
cerca de la preparacin.
4- Observar por el ocular, subir
lentamente el tubo con el tornillo
macromtrico hasta que aparezca la
preparacin y aclarar la imagen con el
micromtrico. Si una vez obtenida la
imagen, la iluminacin es muy intensa,
sta puede disminuirse cerrando el
diafragma-iris
iris del condensador hasta que
su margen sea igual al tamao del lente
posterior del objetivo. Con los objetivos
secos,
s, el condensador debe estar bajo y el
diafragma no muy abierto.
Al encontrar una parte del campo que
merezca mayor anlisis de detalles, se
cambiar para un aumento mayor de la
siguiente manera:
- Centrar en el campo la parte que desea
estudiar, ya que all cambiar el objetivo el
campo se reduce y se corre el riesgo de que
el objeto quede fuera del mismo.
- Girar el revlver hasta que el objetivo de
mayor aumento seleccionado quede en la
posicin indicada.
Microscopio ptico
- Enfocar la preparacin con el

micromtrico si no se ha movido el tubo, y
con el macromtrico si ste se movi,
procediendo de la misma forma que para
el enfoque con menor aumento.
En la medida que se incrementan los
aumentos, la cantidad de luz requerida va
siendo mayor por lo que debe corregirse el
diafragma-iris
iris y el condensador.
Cuando se desea utilizar el objetivo de
inmersin se procede as:
- Abrir el diafragma-iris
iris y subir al mximo
el condensador.
- Colocar una gota de aceite sobre la
preparacin.
- Colocar el objetivo de inmersin (100X)
en su posicin efectiva, siguiendo el eje
ptico.
- Bajar cuidadosamente el tubo por medio
del tornillo macromtrico, bajo control
visual lateral externo, hasta
has que el objetivo
entre en contacto con el aceite sin tocar la
lmina.
- Observar a travs del ocular y enfocar
con mucho cuidado con el tornillo
micromtrico hasta que sea posible ver
bien la preparacin.
Para lograr mayores aumentos se
proceder al cambio
io del ocular, usando
15X o 20X, en lugar de 8X o 10X.
CUIDADO DEL MICROSCOPIO
1. Cuando no se utiliza debe cubrirse con
una funda de tela que no deje pelusa, o
devolverlo a su estuche.
2. Cualquier suciedad o lquido que se
derrame sobre el microscopio debe
d
limpiarse de inmediato.
3. La parte mecnica debe limpiarse con
silicn para proteger la pintura; los
engranajes de la platina, condensador y
tornillo macro y micromtrico, deben
aceitarse peridicamente para mantener su
movilidad.
4. El aceite de inmersin
rsin debe limpiarse del
objetivo inmediatamente despus de usado,
para ello lo mejor es quitarlo con papel
seco especial para lentes o sustituirlo por
gasa o un pao suave que no deje pelusa;
luego limpiarlo con el mismo material pero
8
Microbiologa I
humedecido ligeramente
te con xilol y por
ltimo, secarlo con el mismo papel seco
especial.
5. Los oculares se limpian para quitar el
polvo cuidadosamente con papel seco
especial para lentes, gasa o pao suave.
Microscopio ptico
6. El microscopio, para ser trasladado,

deber sujetarse por la parte del brazo y
apoyarlo en la palma de la mano.
7. Cualquier desperfecto deber ser
corregido por personal especializado.
ACTIVIDAD:
En el dibujo anexo, identifique cada una de las partes indicadas.
9
UNIDAD II
PROTOZOARIOS
10
PRACTICAN1: PROTOZOARIOS INTESTINALES Y GENITALES

MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA DE AMIBAS
PARASITAS DEL HOMBRE:
Complejo Entamoeba histolytica/E. dispar:
dispar:
La especie E. histolytica es la que tiene la
capacidad de invadir tejidos y producir
enfermedad, mientras que la especie E.
dispar no es patgena. El examen
microscpico de las materias fecales no
permite diferenciar estas dos especies.
E. histolytica posee las caractersticas
nucleares del gnero Entamoeba que son:
cariosoma compacto, pequeo y cromatina
distribuida por la parte interna de la
membrana nuclear (Fig N2). La especie E.
histolytica se reconoce por tener el
cariosoma en el centro del ncleo y la
cromatina en grnulos de tamao uniforme
y regularmente dispuestos.
Trofozoito: o forma vegetativa mide de 20 a
40 micras de dimetro; cuando est mvil,
emite un seudpodo amplio, hialino y
transparente que se proyecta como un saco
herniario hacia el exterior de la clula, muy
fcilmente diferenciable del
d
resto del
citoplasma que es granuloso. Este
seudpodo es unidireccional, se forma a
partir del ectoplasma y mediante ste, el
trofozoito se desplaza ejerciendo traccin
sobre el resto de la clula. En el citoplasma
se
encuentran
vacuolas
digestivas,
eritrocitos
trocitos y rara vez otros elementos
fagocitados.
Los trofozoitos patgenos, generalmente
contienen eritrocitos fagocitados pero
presentan morfologa similar; por lo tanto,
cuando se usa microscopa de luz, el
reporte clnico es E. histolytica/E. dispar,
aun
n habiendo hemates fagocitados. Slo es
posible la diferenciacin a travs de
mtodos inmunolgicos.
Quiste: organismo redondeado u ovoide de
10 a 20 micras de dimetro, inmvil, con
una membrana qustica en va de
formacin, sin inclusiones citoplasmticas,
pero
ocasionalmente
con
cuerpos
cromatoides y vacuolas de glicgeno.
DIBUJO
DIBUJO
11
MICROBIOLOGIA I
Prctica N1: PROTOZOARIOS INTESTINALES Y GENITALES.

GENITALES.
Corte histolgico de pared intestinal

con
trofozoitos
de
Entamoeba
histolytica. : Se observa destruccin
parcial de la pared intestinal y
trofozoitos de forma redondeada con
ncleo compacto, rodeados de un halo
claro de lisis separados por zonas de
mucosa sana
DIBUJO
Entamoeba coli
Trofozoito:
En
coloraciones
permanentes presenta forma variada;
mide 20 a 50 micras; se observa
membrana fina, citoplasma granular
sin diferencia entre ecto y endoplasma,
ncleo esfrico rodeado por una
membrana tapizada internamente por
grnulos de cromatina gruesos e
irregularmente
distribuidos,
su
cariosoma es grande y excntrico.
DIBUJO
12
Realizado por: Lic Yotsabeth Sal Garca. U.C.: Microbiologa.
Microbiologa. Programa Medicina UNEFM. 2009
MICROBIOLOGIA I
GENITALES.
TALES.
Prctica N1: PROTOZOARIOS INTESTINALES Y GENI
Quiste: En coloraciones permanentes

presenta forma esfrica, mide de 10 a
30 micras, se observa pared qustica y
de 1 a 8 ncleos con las mismas
caractersticas que el ncleo de su
trofozoito. Los quistes inmaduros
presentan
cuerpos
cromatoides
filamentosos con extremos astillados.
DIBUJO
DIBUJO
MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA DE
Giardia lamblia (intestinalis)
Quiste: Es ovalado con membrana

gruesa, lisa que suele verse separada
del citoplasma, mide 8 a 14 micras de
largo por 6 a 10 micras de ancho,
contiene de 2 a 4 ncleos con
cariosoma grande y central, restos de
axonemas, cuerpos parabasales y
flagelos.
Trofozoito: Es piriforme, simtrico, con

extremo anterior redondeado y el
posterior afilado; mide 10 a 20 micras
de largo. En la extremidad anterior
presenta dos discos suctorios, uno a
cada lado de la lnea media, dos ncleos
ovalados con cariosoma grande,
grande central
y dos axonemas que recorren el eje
longitudinal del cuerpo, los cuales son
atravesados en el centro por dos
cuerpos parabasales en forma de coma.
Los cuatro pares de flagelos slo se
colorean con tinciones especiales.
DIBUJO
13
Realizado por: Lic Yotsabeth
Yotsabeth Sal Garca. U.C.: Microbiologa. Programa Medicina UNEFM. 2009
MICROBIOLOGIA I
GENITALES.
TALES.
Balantidium coli.
Quiste: es de forma ms redondeada, con

un dimetro de 40 a 60 micras, con doble
membrana gruesa, a travs de la cual puede
observarse el parsito, a veces con algn
movimiento. En el interior resalta el
macroncleo.
Trofozoito: Forma ovalada, con una

longitud promedio de 50 a 200 micras y 40
a 50 micras de ancho. Est rodeado de cilias
que le permiten desplazamiento rpido.
Posee en la parte anterior una boca
primitiva o citostoma con cilios largas que
le sirve para obtener alimento, el cual pasa
a vacuolas digestivas. Los restos alimeticios
son eliminados
dos por vacuolas contrctiles a
travs de una apertura en el extremo
posterior, llamada citopigio. Tiene 2
ncleos, uno mayor arrionado, llamado
macroncleo; el otro redondo y pequeo,
generalmente cerca de la concavidad del
anterior, denominado microncleo.
microncl
TECNICAS DIRECTAS DE
DIAGNOSTICO
COPROCOPRO-PARASITLOGICO:
DIBUJO
TECNICAS DIRECTAS DE DIAGNSTICO

CORPOCORPO-PARASITOLOGICO
DIBUJO
Obtencin
de
la
muestra
fecal:
Generalmente
la
muestra
emitida
espontneamente es adecuada para el
examen coprolgico. Debe recogerse en un
recipiente (frasco o caja plstica), seco y
limpio. La muestra fecal no debe mezclarse
con orina y debe enviarse al laboratorio
inmediatamente despus
us de obtenida. En
algunas circunstancias, en las cuales se
puede obtener muestras directamente de
14
MICROBIOLOGIA I
intestino, como sucede cuando se efectan

rectoscopias o se hace tacto rectal, este
material es adecuado para el estudio
parasitolgico. Son muestras inadecuadas
las que se han mantenido por ms de un da
a temperatura ambiente; las que se obtienen
despus de un estudio radiogrfico del tubo
digestivo, en el cual se usa bario; y las que
presentan abundante cantidad de algunas
sustancias que se han ingerido con fines
teraputicos,
como
aceite,
algunos
antidiarreicos con bismuto, etc.
Uso de laxantes: nicamente estn
indicados en casos de constipacin. No
deben utilizarse de rutina, pues en las heces
lquidas llevan a una mayor dilucin de los
huevos y quistes, lo que dificulta su
hallazgo.
Nmero de muestras: debe estudiarse ms
de una muestra fecal, cuando en el primer
estudio no se obtiene el resultado que
clnicamente se presume o cuando se
sospecha una parasitosis intestinal y
exmenes previos de laboratorio han sido
negativos. En amibiasis y giardiosis crnica
es aconsejable hacer dos o tres exmenes
irregulares en das diferentes, debido a la
eliminacin irregular de quistes.
Conservacin y envo de muestras fecales:
las muestras deben ser llevadas al
laboratorio la ms pronto posible despus
de obtenidas, pues los trofozoitos pierden,
en pocas horas, las caractersticas
morfolgicas.
La
putrefaccin,
por
multiplicacin bacteriana, puede hacer que
la muestra sea inadecuada despus de
tiempo prolongado. Las muestras con ms
de un da de obtenida, favorecen la
incubacin de algunos huevos de
helmintos,
lo
cual
dificulta
su
reconocimiento. Si es indispensable
conservar la muestra para envo o examen
posterior, se recomiendan varios mtodos:
a)
Refrigeracin: este es el mtodo ms
sencillo y prctico, cuando la conservacin
debe hacerse por algunas horas o por un
da. El frasco se debe colocar en el
refrigerador a 4 C, pero no en el
congelador.

GENITALES.
b)
Preparaciones selladas: pueden
hacerse con vaselina o barniz de uas,
aplicados en los bordes del cubre-objeto. Se
obtienen preparaciones semi-permanentes
con el mtodo de la doble laminilla, que
consiste en cubrir la muestra con una
laminilla pequea sobre la cual se aplica
blsamo y una laminilla de mayor tamao.
c)
Formol: se mezcla una cantidad
aproximada de 3 g de materias fecales por
cada 10 ml de formol diluido al 5 10%.
Este
mantiene
la
muestra
sin
descomposicin, disminuye el mal olor y
fija los parsitos para estudio posterior.
Con este mtodo se conservan bien los
huevos de helmintos y los quistes de
protozoos.
1. EXAMEN COPROLOGICO
DIRECTO:
a) Examen macroscpico: es importante

determinar la consistencia de las heces
y clasificarlas en lquidas, blandas o
duras. El color normalmente y con dieta
mixta, la deposicin es de color pardo o
marrn ms o menos oscuro en el
adulto.Con dieta lctea y en los lactantes es
amarillo canario. Con dieta crnea se hace
marrn oscuro. Una alimentacin rica en
verduras (espinacas especialmente) tie las
heces de un color verdoso, mientras que si
preponderan las patatas y el pan, las heces
se aclaran hacia un marrn amarillento. En
general, las heces duras de los estreidos
son ms oscuras que normalmente, y las
deposiciones diarreicas suelen ser ms
claras, aunque en esto ltimo hay
numerosas excepciones.
Las heces de color Blanco-grisceo, de color
ceniza, son las heces en la acolia de las
ictericias obstructivas.
Amarillentas, con diferentes matices, son las
heces en las "diarreas de fermentacin".
De color verde, por la biliverdina, aparecen
otras veces las deposiciones por paso rpido
global en las diarreas duodenales ("diarrea
yeyunal" de Nothnagel).
Rojizas,
irregularmente,
son
las
deposiciones que contienen sangre no
transformada, de origen bajo (hemorroides,
tumores de colon distal, etc.). La hematina
puede dar un color pardo-rojizo a las heces.
De color pardo suelen ser las diarreas
gastrgenos. Pardo oscuras son las heces de
putrefaccin que aparecen en distintos
15
MICROBIOLOGIA I
procesos (colitis, cncer, uremia, etc.), o las

debidas a pleiocromia por exceso de bilis,
en la ictericia hemoltica.
Negruzcas y pastosas, son tpicamente las
heces en las "melenas" -de
de ah su nombre-,
nombre
es decir, en las hemorragias digestivas
altas.
No hace falta recurrir al laboratorio cuando
la sangre inalterada es reconocible a simple
vista embadurnando la deposicin (sangre
de origen bajo: hemorroides, etc.), ni
tampoco en los casos de hemorragias altas
abundantes con heces negras.
La sangre en heces puede proceder de un
cncer de esfago, varices esofgicas
(cirrosis heptica), ulcus gastroduodenal,
carcinoma
gstrico,
ico,
ulceraciones
intestinales (tifoidea, tuberculosis, colitis
ulcerosa),
infarto
mesentrico,
invaginacin intestinal, cncer de colon,
poliposis, hemorroides.
Debe observarse si existe moco, sangre,
restos alimenticios o helmintos.
b) Examen microscpico:
microscpico: en un portaobjetos se coloca separadamente una gota
de solucin salina al 0.85% y otra de Lugol
(Fig N3). Se cubren con porta-objetos
porta
de
22x22 mm y se observa al microscopio con
objetivo de 10X y luego con 40X. La
cantidad de materia fecal se controla
control de tal
modo que se pueda leer a travs de la
preparacin; evitar preparaciones muy
gruesas o muy delgadas. Los parsitos
mviles se observan en solucin salina. Al
hacer la preparacin se usa un palillo o
aplicador que se descarta y no introducirlo
en la gota con Lugol.
El Lugol hace resaltar algunas estructuras,
como ncleos de protozoarios y da una
coloracin caf a los huevos y larvas.
Adems de las formas parasitarias, se deben
observar elementos de origen vegetal o
animal que son importantes de reconocer,
rec
o
que pueden semejar parsitos (Fig. N4).
GENITALES.
TALES.
Leucocitos: estas clulas en materia fecal,

generalmente se encuentran asociadas a
moco y se observan en diferentes
enfermedades
intestinales.
Los
polimorfonucleares
predominan
en
shigelosis; salmonelosis, excepto fiebre
tifoidea, colitis invasiva por E. coli y colitis
ulcerativa; en esta ltima existen tambin
eosinfilos en menor proporcin. Los
mononucleares
o macrfagos se
encuentran en mayor proporcin en fiebre
tifoidea. Algunos
macrfagos semejan
trofozoitos de amibas por tener pequeos
seudpodos; se identifican
can porque son
granulosos y por carecer de las
caractersticas de movilidad y morfologa
nuclear, que tienen las amibas.
Eritrocitos: se observan cuando hay
hemorragias del colon, hemorroides y
fisuras sangrantes, etc. Aparecen con
abundancia en el sndrome
ome disentrico.
Restos alimenticios de origen vegetal: los
almidones son frecuentes y se observan
como grnulos de forma y tamao
irregulares. Son fcilmente identificados,
porque en las preparaciones con Lugol
toman color rojo o azul violeta, segn el
e
grado de digestin que hayan sufrido; los
no digeridos son de color violeta. Las
clulas y fibras vegetales se ven, en
ocasiones, formando retculos en forma de
panal y a veces en forma de espiral. Estos
restos vegetales deben diferenciarse de
formas parsitarias
sitarias y aunque muchas veces
no tienen importancia, pueden aparecer en
sndromes de malabsorcin o asociarse a
diarreas.
Restos alimenticios de origen animal: son
principalmente grasas y fibras musculares.
Las primeras se presentan en forma de
gotas de diferente tamao, trasparentes o
amarillas y las segundas como rectngulos
amarillosos con estras transversales.
Flora bacteriana: siempre est presente de
manera normal. A veces est muy
aumentada, lo que no tiene importancia,
por lo cual no debe reportarse.
rtarse. Abundantes
bacilos cortos, delgados, con movimiento
16
MICROBIOLOGIA I
GENITALES.
TALES.
rpido en forma de tirabuzn, pueden

corresponder a Campylobacter, productor
de diarrea en cuyo caso se requiere de una
coloracin especial.
Levaduras:
pueden
observarse
en
condiciones normales, pero aumentan
notoriamente cuando existe desequilibrio
de la flora
ra bacteriana, especialmente en la
terapia con antibiticos. Son ovaladas,
algunas veces con gemaciones y de un
tamao aproximado de 2 a 4 micras. Slo
cuando estas blastoconidias se asocian a
seudomicelios, se deben reportar como
presencia de hongos.
Clulas
Clulas de descamacin y cristales: se
pueden ver al examen coprolgico y no
tienen significado especial.
17
MICROBIOLOGIA I
TECNICAS DE CONCENTRACION
DE DIAGNOSTICO
COPROCOPRO-PARASITOLOGICO:
Los mtodos de concentracin fecal tienen
como objetivo reunir en un pequeo
volumen los elementos parasitarios
inicialmente despersos en una gran masa de
heces. Se deben emplear en caso de que las
formas evolutivas parasitarias sean escasas
y no se observen
en en un examen al freco y
exista una sospecha clnica de una
infeccin parasitaria. Los mtodos de
concentracin son muy numerosos, pero
ninguno de ellos puede poner en evidencia
todos los parsitos que habitan el tracto
gastrointestinal. Cada mtodo tiene
tien sus
indicaciones precisas y la eleccin del
mtodo a implementar va a depender de los
datos clnicos disponibles.
GENITALES.
TALES.
centrifugado cambiando de agua y

mezclando nuevamente.
- Se mezcla el sedimento con 34ml de sulfato
de zinc al 33% (densidad 1.180).
- Se completa con el sulfato de zinc hasta
llegar a 1 cm del borde del tubo y se
centrifuga a 2.500 rpm durante un minuto,
sin frenar la centrfuga.
cuidadosamen en una
- Se coloca el tubo cuidadosamente
gradilla y se recoge el sobrenadante con un
asa de platino o una pipeta y se lleva al porta
objetos.
Los mtodos de concentracin se dividen en

dos grandes grupos:
1. Los mtodos fsicos: por flotacin,
sedimentacin, o por afinidad acuosa,
hidrofila, etc.
a) Tcnica de Faust o de flotacin con
sulfato de zinc: este es un mtodo en el cual
la materia fecal se diluye en un lquido de
alta densidad y los parsitos, que
proporcionalmente son ms livianos, van a
la superficie. Para esta tcnica se utiliza
sulfato de zinc (ZnSO4) al 33%, con
densidad 1.180.
Para prepararlo se aaden 331g de sulfato de
zinc a un litro de agua tibia. Una vez disuelto
el sulfato, se verifica con un densitmetro
que la densidad sea 1.180; si es preciso se
aadir aguaa o sulfato de zinc, segn el caso,
hasta obtener este valor. La tcnica utilizada
es la siguiente:
- Una cantidad de materia fecal de
aproximadamente 1g, se diluye en 10 ml de
agua y se filtra a travs de una gasa
cudruple.
- Se centrifuga a 2.500 rpm durante un
minuto.
- Se descarta el lquido sobrenadante. Si la
muestra es muy grasosa se repite el
Las preparaciones se montan en Lugol y

solucin salina y se llevan al microscopio
para buscar formas parasitarias. Como los
parsitos que flotan a la superficie de la
solucin vuelven a descender al cabo de
una hora, se deben hacer las preparaciones
en porta-objetos,
objetos, tan pronto como termine
la concentracin. El contacto prolongado
con el sulfato de zinc, puede deformar los
quistes
tes y dificultar su identificacin, por lo
tanto estas preparaciones deben ser
examinadas lo antes posible. Esta tcnica es
mejor para detectar quistes de protozoos
que para huevos y larvas de helmintos.
El xito depende de la exactitud en la

densidad
sidad del sulfato de zinc. Cuando la
materia fecal est fijada en formol al 55
18
MICROBIOLOGIA I
10%, debe usarse el sulfato de zinc con

densidad de 1.200.
b) Tcnica de WillisWillis-Molloy con solucin
salurada de cloruro de sodio (NaCl) : esta
tcnica no requiere centrfuga y es til,
principalmente, para huevos de uncinarias,
que flotan fcilmente; pero tambin sirve
para los otros parsitos incluyendo los
protozoarios. Se utiliza con mucha
frecuencia en parasitologa veterinaria, por
la facilidad de realizarse en el campo. El
procedimiento es como sigue:
- Se disuelve
isuelve sal de cocina en agua caliente,
hasta que haya saturacin; la solucin
debe tener, como mnimo, una densidad
de 1.200.
- Se mezcla aproximadamente 1 g de
materias fecales con 10-20
20 de la solucin
saturada.
- Se traslada la mezcla a un tubo, probeta o
caja de petri, que se llena con la solucin
hasta el borde, de modo que forme un
menisco.
- Se coloca una laminilla sobre el menisco
durante 10 o 15 minutos o se toma el
sobrenadante con asa o pipeta capilar.
- La laminilla
lla o el material recolectado, se
coloca en el porta-objetos,
objetos, para
observarlo directamente o con Lugol.
GENITALES.
TALES.
- Mezcle el sedimento con la pequea

cantidad de lquido que baja por las
paredes del tubo y haga preparaciones en
frescoo y con Lugol, para ver al microscopio.
c) Tcnica simplificada de formolformol-ter: es el

procedimiento
mas
utilizado
para
concentrar quistes de protozoos, huevos y
larvas de helmintos. El mtodo
mtod es el
siguiente:
- Tome en un tubo partes iguales de
solucin salina isotnica y formol al 10%
aproximadamente 10 ml.
- Agregue ms o menos 1 g de materia fecal
y mezcle bien.
- Filtre por gasa doble.
- Agregue 3 ml de ter, tape, agite fuerte y
destape cuidadosamente.
- Centrifugue 2 minutos a 2.000 rpm.
- Decante las tres primeras capas (ter,
restos de materia fecal y el formol salino).
(Fig. N5).
- Con un palillo afloje de las paredes del
tubo el anillo con restos de materias fecales
y cuidadosamente decante las tres capas
superiores.
19
MICROBIOLOGIA I

GENITALES.
Trichomona vaginalis.
Trofozoito: Es piriforme u ovoide, mide 10 a
30 micras de largo, presenta membrana,
citoplasma, y ncleo anterior grande y
alargado con grnulos de cromatina finos y
difusos, axostilo que se extiende del
extremo anterior al posterior el cual
rebasa, se observan
servan cuatro flagelos
anteriores y un flagelo recurrente que
forma la membrana ondulante y no llega al
extremo posterior.
DIBUJO
TECNICAS DE DIAGNOSTICO
PARASITOLOGICO
Las muestras a utilizar son secreciones
vaginales y uretrales. Para la toma
to
de la
muestra en las mujeres debe emplearse un
espculo estril y seco (no lubricado), la
paciente debe evitar todo lavado vaginal,
antes de realizarse la toma de la muestra y
en los hombres la misma se la toma el
mismo paciente haciendose presin en el
pene para obtener la secrecin La muestra
obtenida se coloca entre lamina y laminilla,
con solucin salina al 0,85% en caso de ser
necesario buscando T. vaginalis con sus
movimientos tpicos.
Se pueden utilizar colorantes de contraste
tales como rojo neutro y/o tinta china.
MUESTRA DE ORINA: La muestra
recomendada es la primera de la maana
ya que existe mayor concentracin de
trofozoitos.
Se debe recolectar en un envase limpio y
seco, tapar y llevarlo rpidamente al
laboratorio.
Procedimiento: la orina se mezcla
completamente y se pasan de 10 a 15 ml en
un tubo de centrfuga. Luego, se centrifuga
de 10 a 15 minutos a 1000 r.p.m. Se
descarta el sobrenadante y se transfiere el
sedimento a una lmina portaobjetos, la
cual ser observada
vada bajo el microscopio con
objetivo de 40X, buscando los trofozoitos de
Trichomonas vaginalis con sus movimientos
giratorios caractersticos.
Cuando la movilidad del microorganismo
comienza a disminuir, es posible observar
la membrana ondulante.
20
Prctica N 2: Leishmania, SUS VECTORES Y LAS LEISMANIOSIS

LEISMANIOSIS
Los agentes etiolgicos, parsitos del gnero
Leishmania,
son
protozoarios
que
pertenecen a la familia Trypanosomatidae
(clase Mastigophora, orden Kinetoplastida)
y al igual que los tripanosomas poseen
hospedadores vertebrados e invertebrados,
pero difieren
en de ellos porque en su ciclo
evolutivo slo aparecen formas amastigotas
y promastigotas.
Se presenta bajo dos formas fundamentales:
(Fig N 6) una aflagelada denominada
amastigota,
amastigota, encontrada en los tejidos del
hombre y de los animales vertebrados,
susceptibles
ptibles a la inoculacin del parsito y
una forma flagelada o promastigota que se
observa en el tubo digestivo del insecto
vector y en los medios artificiales de cultivo.
Los amastigotas son formas parasitarias
intracelulares,
apareciendo
a
la
microscopa ptica dentro de las clulas del
sistema fagoctico mononuclear como
organismos
ovoides
de
pequeas
dimensiones m por 1,5 a 2,5 m
dependiendo de la especie. Se distinguen los
siguientes elementos celulares: una
membrana
celular,
citoplasma
con
diferentes organelos un ncleo
y un
kinetoplasto. El ncleo generalmente se
halla adosado al margen de la clula o
hacia uno de los polos.
El kinetoplasto es una red fibrosa, que
contiene el 20%, aproximadamente del
ADN total del parsito, presente en su
mitocondria,
a, formada por la unin del
cuerpo parabasal y el blefaroplasto; el
primero es mas grande y el segundo es
puntiforme. Tiene forma baciliforme o de
bastoncito corto prximo al ncleo y a
veces sumamente aplicado a ste.
La forma flagelada o promastigota es fcil
de estudiar en material de cultivo de
laboratorio, son formas parasitarias
alargadas o fusiformes de 15 a 25 m por
1,5 a 3,5 m de ancho, con una extremidad
anterior ms gruesa de donde sale un solo
flagelo de unas 15 a 25 m de largo y una
extremidad
ad posterior afilada. El citoplasma
es abundantemente granular.
DIBUJO
DIBUJO
21
MICROBIOLOGIA I
Prctica N2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSIS

LEISHMANIOSIS
22
MICROBIOLOGIA I

LEISHMANIOSIS
MTODOS DE DIAGNOSTICO
PARASITOLOGICO
1. MTODOS DIRECTOS
DIRECTOS:
1.1. Raspado: En las lesiones cutneas
iniciales sin contaminacin bacteriana de
Leishmaniasis cutnea (LC), es posible
obtener una buena muestra de aspecto
granular, con clulas del tejido, con muy
poca sangre y en donde la coloracin
colorac
muestra con facilidad los amastigotes intra
y extracelulares.
El mtodo clsico consiste en hacer una
incisin en el reborde de la lcera, en la
lesin papular o nodular, para luego raspar
el tejido y obtener histiocitos o macrfagos
parasitados. La abundancia
undancia de sangre
indica que la muestra no es ideal y se
enmascara o dificulta el diagnstico.
Se considera que la muestra obtenida del
centro de la lcera, es poco eficiente para
hacer un buen diagnstico.
1.2. Impronta: Otro procedimiento,
especialmentee til para recolectar material
asptico para los cultivos, previa limpieza
del borde de la lesin, es una aspiracin por
puncin con jeringa y aguja delgada. En
este mtodo se inyecta 0.1 0.2 ml de
solucin salina amortiguada entrando por
el borde y rotando
ando la aguja varias veces
para macerar el tejido internamente y
desprender las clulas que luego se aspiran
(Fig N 7). Con el material obtenido por
cualquiera de los procedimientos, se hacen
cultivos o se extiende en un portaobjetos
para hacer uno o dos extendidos de un
centmetro de dimetro, que despus de
estar seco, se colorea con Giemsa, Wright u
otro colorante para clulas sanguneas.
Se deben tomar 2 3 preparaciones por
paciente y en cada muestra examinar un
minimo de 100 campos con objetivo de
100X.
Para el diagnstico parasitolgico de
Leishmaniasis Viceral (LV), la muestra de
eleccin se trata de puncin esplnica y de
mdula sea. Con el primer material
obtenido se hacen extendidos para buscar
formas amastigotes dentro de las clulas del
sistema retculoendotelial (segmentados,
macrfagos); la presencia de ncleo y

kinetoplasto,
es
la
caracterstica
morfolgica que distingue los amastigotes
de Leishmania de otros protozoarios u
hongos de localizacin intracelular (Ej.
Histplasma sp).
as de estos rganos se pueden
En las biopsias
observar nidos de parsitos intracelulares.
En sangre perifrica es raro encontrar
amastigotes.
Coloracin de Giemsa:
Procedimiento:
- Colocar la preparacin seca en posicin
horizontal, con el extendido hacia arriba.
- Fijar el extendido con alcohol metlico por
1-2 minutos.
- Botar el fijador y dejar secar la lmina en
posicin vertical.
- colocar la lmina en posicin horizontal y
cubrir con la solucin de Giemsa,
preparando una gota de colorante y 1 ml de
Buffer (aproximadamente 3 ml por cada
lmina).
- Dejar actuar por 30 45 minutos.
- Botar el colorante sobrante.
- Lavar con agua.
- Dejar secar al aire en posicin vertical o
en estufa a 37C.
- Observar la preparacin en el
microscopio ptico con objetivo de
inmersin.
2. MTODOS INDIRECTOS:
2.1. Cultivo: son adecuados para el
crecimiento y multiplicacin del parsito.
Los ms usados son: el medio de Novoy,
MacNeal y Nicole (NNN) y el de Infusin
de Hgado y Triptosa (LIT), que son bifsico
23
MICROBIOLOGIA I
Prctica N2: LEISHMANIA, SUS

SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSIS
y lquido respectivamente.
espectivamente. En la forma
superficial tienen poco valor, ya que no es
fcil obtener material en condiciones de
asepsia, adems cuando no hay parsitos al
examen directo, los cultivos difcilmente
son muy tiles en ciertos casos. En la forma
visceral, los ms usados son el cultivo de la
mdula sea (mielocultivo) y de la sangre
(hemocultivo). Estos cultivos se revisan
peridicamente por unas 6 semanas.
de
2.2.
Inoculacin
Inoculacin
Animales
Experimentales: es de mayor utilidad en la
leishmaniasis viceral. El animal utilizado es
el hmster (gnero Cricetus). En el caso de
las formas superficiales se prefiere la
inoculacin cutnea, en el ocico, cola y
planta de las patas (Fig. N8). En la visceral,
la va intraperitoneal es la utilizada. El
mtodo es demorado, pues la observacin
de los animales puede prolongarse por
varios meses, sobre todo en las leishmanias
superficiales. Los materiales
riales inoculados son:
triturados de piel en el caso de formas
cutneas (o mucosa enferma) y mdula
sea en la leishmaniasis visceral.
Tanto los cultivos, como la inoculacin en
animales sensibles, carecen de verdadero
valor prctico, pues no pueden ser
empleados como mtodos de rutina.
2.3. - Xenodiagnstico:
Xenodiagnstico: consiste en utilizar
vectores
naturales
(
(flebotominos)
mantenidos en colonias en el laboratorio y
libres de infeccin. Con ellos se hace picar a
los pacientes sospechosos u otros
hospedadores vertebrados; si en la sangre
ingerida existen formas parasitarias de
Leishmania, se obtiene su multiplicacin
dentro del tubo digestivo del flebotomino.

Este mtodo equivale a un cultivo de
leishmania en el intestino de los vectores. Se
prefieren ninfas, que hayan tenido algunas
semanas de ayuno y estn vidas de
alimentarse, para favorecer la ingestin de
buena cantidad
d de sangre. Cada insecto
ingiere entre 0.05 y 0.3 ml, segn el estado
evolutivo de la ninfa. Se colocan alrededor
de 10 a 12 ninfas dentro de una caja, con
una boca libre, cubierta con gasa; se
utilizan 4 de estas cajas sobre la piel de los
antebrazos o extremidades
xtremidades de los otros
vertebrados.
A travs de la gasa, los insectos efectan la

picadura y chupan sangre durante 20
minutos aproximadamente. Se debe tener
en cuenta que la susceptibilidad es
diferente en las distintas especies de
flebotominos, por loo cual se recomienda
utilizar el transmisor natural de la regin,
que en el caso de Venezuela es el Lutzomyia
longipalpis.
Para aumentar la sensibilidad del mtodo,
se repite en la misma persona cada 10 14
das, por 3 a 6 veces.
Se prefiere emplear el xenodiagnstico
x
artificial, utilizando sangre venosa citratada
en bolsas de ltex, a travs de las cuales los
vectores pueden ingerirla.
Despus de 15 a 45 das de la succin de
sangre, los vectores se examinan para
buscar tripomastigotes o epimastigotes en el
contenido intestinal. Generalmente, la
lectura del xenodiagnstico se hace a los
30,60 y 90 das despus de la
alimentacin. Para la obtencin del
contenido del tubo digestivo, se hace un
masaje abdominal a la ninfa, sin presionar,
24
MICROBIOLOGIA I

LEISHMANIOSIS
o se provoca una deyeccin

yeccin al colocarla
verticalmente, utilizando una pinza que
apriete la parte media. Tambin puede
macerarse el intestino de los vectores, con
el objeto de obtener mayor cantidad de
material para estudio. Las Leishmanias se
buscan microscpicamente y deben hacerse
coloraciones para diferenciarlos de otros
tripanosomatdeos. Se puede tratar de
aumentar el nmero de parsitos en
animales vertebrados susceptibles, como
ratnes o ratas, por inoculacin del
contenido intestinal o del macerado. En los
animales inoculados
oculados se examina la sangre,
se hacen estudios histopatolgicos y/o
xenodiagnsticos.
lesiones. Por otro lado, se ha reportado un

10%
de
positividad
de
la
intradermorreaccin de Montenegro
M
en
individuos de zonas endmicas sin
antecedentes de haber padecido la
enfermedad, en cuyo caso estara indicada
una cuidadosa evaluacin del paciente.
TECNICAS DE DIGANOSTICO
INMUNOLGICO Y MOLECULAR
1.1. INMUNOLOGICO:
1.1. Intradermorreaccin
Intradermorreaccin de Montenegro:
es un mtodo indirecto para el diagnstico
de la leismaniosis y corresponde a una
reaccin de hipersensibilidad tarda.
Consiste en la aplicacin de un antgeno
compuesto
to pos suspensin de promastigotes
procedentes de cultivos, el cual recibe el
nombre de Leishmanina. Estos parsitos
fenolizados se aplican intradrmicamente al
paciente en la cara interna del antebrazo y
entre 48 y 72 horas se hace la lectura. Es
positiva si se palpa un ndulo inflamatorio
de 5 mm o ms, semejante al observado con
la tuberculina.
Es una prueba de valor diagnstico, muy
til en los casos no recientes de infeccin de
las leishmaniasis cutnea o cutneacutnea
mucosa, precisamente cuando el hallazgo
de parsitos en las lesiones no es fcil. Una
reaccin positiva, en un paciente con lesin
cutnea
tnea o mucosa activa y sospechosa de la
enfermedad, procedente de zona endmica
es suficiente para considerar el caso como
leishmaniasis y proceder al tratamiento
especfico, sin embrago, esta prueba por si
sola, no es indicativo de un diagnstico
definitivo.
tivo. Pero, la reaccin permanece
positiva despus de la curacin clnica y se
cree que durante toda la vida del paciente,
por eso su valor disminuye en casos sin
1.2. Mtodos
Mtodos serolgicos: se han utilizado
diferentes tcnicas para el estudio
serolgico
ico de las leishmaniosis. La prueba
de inmunofluorescencia indirecta (IFI) es la
ms empleada, pero tambin se hacen otras
como
la pruebas de
ELISA, la
hemaglutinacin indirecta, la aglutinacin
directa, diferentes pruebas de precipitacin,
incluyendo variantes
antes de electroforesis,
redioinmunoensayo, etc. Aunque se
detectan anticuerpos circulantes, los ttulos
son muy bajos. La inmunofluorescencia
tiene poco valor en el diagnstico de las
formas cutneas de leishmaniosis, tiene
mayor importancia en la leishmaniosis
leishma
mucocutnea. Los ttulos varan entre 1:16
y 1: 1024, pero existe reaccin cruzada
entre las infecciones de las distintas
especies de Leishmania y con Tripanosoma,
que tambin es un Kinetoplastida y un,
Tripanosomatido. En algunas infecciones
activass no se logra detectar anticuerpos. El
uso de las pruebas serolgicas es
complementar
el
diagnstico,
especialmente cuando hay metstasis a
mucosas, para evaluar la infeccin latente,
en las recadas y en las infecciones
crnicas.
25
MICROBIOLOGIA I
1.3. Inmunofluorescencia
Inmunofluorescencia indirecta y la
prueba de ELISA : detectan la presencia de
anticuerpos circulantes. Tambin se han
utilizado otras reacciones como la fijacin
de complemento y la aglutinacin directa.
Todos estos procedimientos ayudan,
especialmente en los casos iniciales. Existe
hipergammaglobulinemia la cual se
demuestra por electroforesis de protenas;
las gammaglobulinas estn elevadas con
disminucin de la albmina.
1.4. Formol
Formol gelificacin: es una prueba
inespecfica pero con utilidad para el
diagnstico de leishmaniasis vicerales.
Consiste en la opacificacin y coagulacin
del suero, cuando se le aade 1 a 2 goras de
formol comercial (40%). Se acepta que la
inversin
en
la
relacin
albmina/globulina y, segn algunos
autores la aparicin de globulinas
anmalas, sean las causas de una reaccin
positiva. Se toma el tiempo hasta la
aparicin de opacidad y coagulacin. Slo
se da valor a las alteraciones ocurridas
durante la primera hora. La prueba es
inespecfica, pues varias enfermedades
pueden ocasionar las alteraciones proteicas
en el suero. En lo que respecta a Kalazar,
difcilmente es negativa despus de 3 meses
de enfermedad y una reaccin intensa antes
de 10 minutos, es muy probable que sea
por dicha enfermedad.
Criterio de valorizacin:
- =negativa, suero no alterado.
+=dudosa, coagulacin sin ipacificacin
++=positiva, coagulacin y opacificacin
discreta.
+++=positivo fuerte, coagulacin con
opacificacin acentuada no total.
enfermedad
cede.
Tiene
como
inconveniente la inespecificidad, pudiendo
ser positiva (cuando se usa antgeno
heterlogo), en TBC, lepra, Chagas crnico
y leishmaniasis tegumentaria a ttulos bajos.
2. Diagnstico Molecular:
2.1. PCR: utilizando los mtodos de la
biologa molecular es posible aplicar la
reaccin en cadena de la polimerasa (PCR
PCR)
PCR
para amplificar segmentos especficos de
ADN de los parsitos e identificar su
presencia en una muestra. Esta tcnica tiene
gran valor en tejidos en donde no ha sido
posible detectar parsitos, especialmente en
lesiones de mucosas y para comprobar la
infeccin en los flebotominos.
Si se practica una biopsia, el tejido puede
examinarse histolgicamente, lo cual va a
permitir el estudio anatomopatolgico.
Recientemente han sido usadas tcnicas
sofisticadas para deteccin de amastigotas
situ,
utilizando
anticuerpos
in
monoclonales
para
evidenciar
los
amastigotes,
mediante
pruebas
inmunocitoqumicas. Adems, se ha
utilizado la amplificacin del kDNA
mediante la reaccin en Cadena de la
Polimerasa (PCR), no solo para el
diagnstico sino tambin con fines
taxonmicos, caracterizando los parsitos
en los tejidos.
1.4. Reaccin de fijacin de complemento

(RFC): esta reaccin puede hacerse con
antgeno homlogo (L. chagasi de cultivo) o
antgeno heterlogo de bacilos cidoalcohol resistentes (M. tuberculosis y M.
butiricum), los cuales se han demostrado
ms tiles. Es altamente sesible (ms del
90%) y en Kalazar se hace positiva a las 3
4 semanas de comenzada la infeccin. Por
otro lado, tiene valor como criterio de
curacin, ya que se hace negativa cuando la
26
MICROBIOLOGIA I

LEISHMANIOSIS
MORFOLOGA Y ESTRUCTURA DE
FLEBOTOMINOS
(Lutzomyia spp.)
Los flebotominos son insectos nematceros

(antenas largas) que se caracterizan
primordialmente por presentar las hembras
hbitos hematofgicos y que se mueven
dando pequeos saltos, y desde el punto de
vista morfolgico por ser de tamao
tama
pequeo (1-4
4 mm), con antenas largas, alas
pilosas, erectas hacia arriba y hacia atrs y
poseen un radio con 5 ramas. Sus piezas
bucales son largas y se encuentran
adaptadas a la hematofagia, proceso hecho
por las hembras, las cuales tienen 2
espermatecas;
as; sus palpos maxilares estn
formados por 5 segmentos. As mismo, se
puede mencionar dentro de los rasgos
biolgicos ms resaltantes de los vectores de
Leishmania,
que
son
insectos
holometbolos, con un tipo de desarrollo
completo en que los estadios inmaduros
inm
son
diferentes a los adultos.
El ciclo vital comprende huevos aguzados,
4 estadios larvales de hbitos terrestres que
se alimentan de materia orgnica y ppas
ssiles, alimentndose los machos de
azcares de las plantas, necesitando las
hembras adems de sangre a stos ltimos
nutrientes,
es, cuya actividad picadora es
generalmente en horas crepusculares y
nocturnas. Es interesante mencionar, que
existen especies flebotominas que son
autgenas e inclusive partenogticas.
Fig. N12: Lutzomyia sp. Holtipo macho

macho
1:genitlia
(x400).2:bomba
omba
y
ductos
eyaculadores(x400).
(x400). 3: palpo (x400). 4: antena
(3segmento) (x400). 5: antena (5 segmento)
(x400). 6: ala (x100). Mem. Inst. Oswaldo
Cruz, Rio de Janeiro, Vol 82(3): 395-398
395
jul./set. 1987
Adulto Macho de Lutzomyia sp.
Fig. N13: Lutzomyia sp. Holtipo hembra 7:

cibrio (x400). 8: palpo (x400). 9: antena
(3segmento) (x400). 10: antena (5 segmento)
(x400).11:espermateca(x400). 12: espermateca
(x600). 13: ala (x100). Mem. Inst. Oswaldo
Cruz, Rio de Janeiro, Vol 82(3): 395-398
395
jul./set. 1987
Adulto Macho de Lutzomyia sp.
27
MICROBIOLOGIA I

LEISHMANIOSIS
TECNICAS DE CAPTURA DE
FLEBOTOMINOS
carpetas ad hoc para su transporte al

laboratorio.
Se realizan capturas diurnas y nocturnas de

flebotominos adultos en refugios naturales
(huecos de rboles, rocas, madrigueras de
animales, etc), en domicilios humanos y sus
alrededores (peridomicilio), abarcando,
asimismo, reas de cultivo.
Se emplean diferentes mtodos de captura:
trampa lumnica de Shannon, papel
aceitado, aspiracin directa, cebo humano,
trampa lumnica CDC (Communicable
Disease Center) y la trampa de Disney.
- La trampa CDC est compuesta por un

tubo acrlico, en cuyo interior se encuentra
centrado un motor pequeo de 6 voltios
para hacer girar una hlice pequea de
plstico acoplada en su parte inferior. Por
la parte de arriba del motor, se encuentra
acoplado un pequeo bombillo. El
funcionamiento tanto del motor y del
bombillo, se hace mediante batera de 6
voltios. En la regin superior de la trampa
se coloca un techo acrlico, que sirve de
proteccin contra la lluvia y para reflejar la
luz del foco; y en la parte inferior de la
CDC, se acopla una malla de tul para
caprurar los fleborominos, los cuales
fueron atrados por la luz y se succionaron
por el flujo de aire generado por la hlice.
- La trampa lumnica de Shannon emplea

una estructura rectangular (1,40cm x
1,40cm x 1,10cm) construida de tela
blanca de sbana, la cual se puede
suspender con cuerdas a rboles. En el
interior de la misma, se coloca una lmpara
de luz fluorescente con bateras internas
sobre dos soportes. Los insectos atrados, ya
sea a los colectores o hacia la fuente
lumnica, se posan sobre la sbana y se
succionan con aspiradores de boca.
- Para el empleo del mtodo de cebo
humano, las hembras flebotominas atradas
sobre los colectores se aspiran con los
capturadores de vidrio.
- El mtodo de aspiracin directa consiste
en realizar capturas manuales; los insectos
se capturan con capturadores o aspiradores
de boca, construidos a partir de tubos
rgidos de vidrio o plstico y un tubo de
goma o ltex flexible. Los insectos se
colectan en huecos de rboles, cuevas de
animales, paredes de viviendas, gallineros,
etc.
- Las trampas adhesivas denominadas papel
aceitado (sticky paper), se preparan con
hojas de papel bond (28 x 22 cm) que se
impregnan con aceite de ricino, las cuales
se sujetan mediante tachuelas en los sitios
donde se sospecha existen flebotominos (Ej:
huecos de rboles, refugios de anamales,
paredes de viviendas humanas, gallineros).
Al cabo de 1-2 das, los papeles aceitados se
retiran, y se colocan cuidadosamente en
- Para la trampa de Disney, se colocan

pequeos roedores (Ej: ratones albinos,
hmsteres) como cebos atrayentes dentro de
una jaula pequea (16,5cm x 18 cm x 18
cm), la cual se coloca sobre una bandeja
metlica (47cm x 47cm) y se sujetaron
mediante cable o alambre a un rbol. Sobre
la superficie de la bandeja se exparci
aceite de ricino, de manera tal de atrapar
los flebotominos que eran atrados hacia los
roedores. Al igual que con la tcnica del
papel aceitado, al cabo de 1-2 das las
bandejas deben ser transportadas al
laboratorio.
Los flebotominos capturados con las
tcnicas de papel aceitado y de Disney,
deben ser retirados cuidadosamente con
agujas entomolgicas.
Aquellos insectos capturados con las
restantes tcnicas, se transportan al
laboratorio en cavas de anime con alta
humedad, sacrificndose con vapores de
cloroformo.
En cuanto al montaje, todos los insectos se
clarifican en solucin de Nesbitt a
temperatura ambiente durante 24 horas y
deben ser montados sobre lminas
portaobjetos en lquido de Berlese.
28
PRACTICA N3: Trypanosoma, SUS VECTORES Y LAS TRIPANOSOMOSIS

AMERICANA Y RANGELIANA.
Tripomastigote Sangucola de Trypanosoma
cruzi: Esta forma flagelada de T. cruzi se
encuentra en sangre perifrica de humanos
o animales infectados (hospedadores
vertebrados). Es alargado, fusiforme y su
tamao alrededor de 20 micras de longitud.
Posee un ncleo grande cerca de la parte
central, y a lo largo de su cuerpo tiene una
membrana ondulante bordeada por un
flagelo, que se inicia en el Kinetoplasto, el
cual es post-nuclear
nuclear y grueso y sale del
parsito por el extremo anterior (Fig. N 14
y 15).
Nidos de Amastigotes tisulares: El

tripomastigote sangucola, en el husped
vertebrado, tiene predileccin por los
macrfagos,
clulas
del
sistema
retculoendotelial, tejido cardaco, muscular
estriado,
muscular
liso
y
menos
frecuentemente por tejido nervioso. Dentro
de estas clulas el tripomastigote sangucola
se transforma en amastigote, el cual se
caracteriza por ser redondeado u oval, con
kinetoplasto
ante-nuclear.
nuclear.
Miden
aproximadamente de 1.5 a 4 micras de
dimetro. No poseen flagelo libre. Los
amastigotas se aglomeran dentro de las
clulas formando nidos tisulares, similares
en su morfologa, a las formas amastigotas
del gnero Leishmania (Fig. N 16).
16)
DIBUJO
DIBUJO
Dentro de su ciclo celular, los vectores se

infectan al chupar la sangre del hombre o
huspedes vertebrados con tripomastigotes
sangucolas provenientes de sangre
perifrica.
Estas
formas
sufren
transformaciones a lo largo del tubo
digestivo
del
vector.
e
estudios
experimentales han permitido dividir su
evolucin en tres fases: formas redondeadas
29
Prctica N3: Trypanosoma, SUS VECTORES Y LAS TRIPANOSOMOSIS AMERICANA Y RANGELIANA.
en
el
estmago,
denominadas
esferomastigotes; epimastigotes en el
intestino medio, que se multiplican
intensamente por divisin binaria y
tripomastigotes metacclicos,
os, infectantes
para el husped vertebrado.
PARASITOLOGICO
El diagnstico diferencial de la enfermedad
de chagas vara de acuerdo a la forma
clnica en que se encuentre el paciente.
2- Tomar otro portaobjetos que sirve de

dispersor y apoyarlo sobre la superficie del
primer portaobjetos, con una inclinacin de
30 grados por delante de la gota de sangre,
deslizarlo hacia la gota para que ste se
extienda por el borde.
3- Deslizar el portaobjetos dispersor hacia
el extremo opuesto
esto para que la sangre se
extienda y forme una pelcula delgada.
4- Dejar secar y aplicar la coloracin de
Giemsa.
5- Observar en el microscopio con objetivo
de inmersin (100X).
METODOS PARASITOLOGICOS DIRECTOS:

Estos
stos procedimientos son de utilidad en los
perodos de parasitemia, como sucede en la
fase agudaa de la infeccin, pero los
resultados negativos no son excluyentes.
1. Examen en fresco: tiene por objeto
visualizar el tripomastigote sangucola en
una gota de sangre entre lmina y
laminilla. En la fase aguda se puede
encontrar el parsito hasta en un 90%.
Procedimiento:
- Colocar una gota de sangre en el centro
de una lmina portaobjetos.
- Cubrir con una laminilla cubreobjetos.
- Observar en el microscopio con objetivo
seca de mayor aumento.
Esta tcnica permite evidenciar la presencia
de parsitos vivos
vos provistos de movilidad,
pero no proporciona detalles morfolgicos
que garanticen la identificacin de la
especie observada.
2. Extendido coloreado: se utilizan
preferentemente
para
el
estudio
morfolgico del parsito, pero la deteccin
del parsito porr esta tcnica slo es posible
cuando se encuentra en nmero elevado.
Tiene la ventaja de que hay poca distorsin
de las estructuras parasitarias, pero la
desventaja es que debe examinarse muchos
campos microscpicos para evidenciar al
parsito.
Preparacin
n de un extendido:
1- Colocar una gota pequea de sangre
cerca del extremo de un portaobjetos,
limpio y desgrasado.
- Gota gruesa: tiene la ventaja de aumentar

la probabilidad de detectar
detecta las formas
evolutivas de los parsitos, pero distorsiona
su morfologa.
Procedimiento:
1- Colocar una gota grande o 3 gotas
pequeas de sangre sobre un portaobjetos
limpio y desgrasado.
2- Con el ngulo de otro portaobjetos se
extiende la sangre de manera uniforme,
formando un crculo de 1.5 cms, con el fin
de desfibrinar la muestra.
3- Dejar secar por 12 horas.
- Colocar el portaobjetos en agua destilada
para su hemlisis.
4- Dejar secar.
5- Colorear con Giemsa sin fijar con
alcohol metlico.
6- Lavar
ar con agua cuidadosamente.
7- Dejar secar al aire o en estufa a 37C.
8- Observar en el microscopio con objetivo
de inmersin.
30
METODOS
PARASITOLOGICOS
INDIRECTOS:
stos mtodos tienen por
INDIRECTOS: Estos
objeto multiplicar la cantidad de parsitos
en el laboratorio, a partir de diferentes
muestras del paciente (hospedadores
vertebrados) y son ms sensibles que los
mtodos directos; sin embargo, tienen el
inconveniente de que los resultados
res
se
demoran varias semanas. Se utilizan con
ms frecuencia en la fase crnica en la cual
la parasitemia es mas baja.
1.
Inoculaciones
en
animales
experimentales: los animales utilizados
deben proceder de colonias protegidas de
infecciones naturaless por tripanosomas. Los
principales animales de experimentacin
utilizados en el laboratorio son los ratones y
ratas. A stos se le inyecta 0.5 a 1 ml de
sangre venosa citratada de la capa de
clulas blancas despus de centrifugar, o
del
material
procedent
procedente
de
los
xenodiagnsticos, bien sea el contenido de
las deyecciones o el macerado de los
vectores. La inoculacin se debe hacer
intraperitoneal, subcutnea o a travs de la
conjuntiva. Despus de 3 a 5 das se inicia
el estudio de la parasitemia, el cual
contina
ontina hasta la sexta semana despus de
la inoculacin inicial. La bsqueda de los
tripomastigotes sangucolas se hace de la
misma manera descrita para los exmenes
en fresco coloreados. Este mtodo de
diagnstico no es de gran sensibilidad y se
recurre a l cuando se quiere diferenciar
las especies de tripanosomas visualizadas en
las deyecciones de los vectores. La
importancia mayor del mtodo radica en el
estudio de virulencia de las cepas de
Trypanosoma.
2. - Xenodiagnstico: consiste en utilizar
vectores
naturales
(triatominos),
mantenidos en colonias en el laboratorio y
limpios de infeccin. Con ellos se hace
picar a los pacientes sospechosos u otros

hospedadores
adores vertebrados; si en la sangre
ingerida existen formas parasitarias de
Tripanosoma
sp,
se
obtiene
su
multiplicacin dentro del tubo digestivo del
Triatomino.
debe tener en cuenta que la
Se
susceptibilidad es diferente en las distintas
especies de triatomneos,
atomneos, por lo cual se
recomienda utilizar el transmisor natural
de la regin, que en el caso de Venezuela es
el Rhodnius prolixus.
Los
tripanosomas
se
buscan
microscpicamente y deben hacerse
coloraciones para diferenciarlos de T.
rangeli o de otros tripanosomatdeos.
ipanosomatdeos.
METODOS DE DIAGNOSTICO
INMUNOLOGICO
1. Procedimientos serolgicos: los diferentes
procedimientos serolgicos que detectan la
presencia
de
anticuerpos,
indican
indirectamente la existencia, presente o
pasada, del parsito en el organismo. Estas
pruebas se utilizan especialmente en las
etapas latente y crnica de la infeccin,
cuando es difcil encontrar los parsitos.
Los antgenos se preparan de parsitos
completos o de fracciones antignicas. Con
stos se han desarrollado una gran
g
variedad
de reacciones. Los ttulos de anticuerpos
varan ampliamente, de acuerdo al tipo de
antgeno, purificacin de ste, especificidad
y sensibilidad de la reaccin; estos ttulos no
guardan relacin con la presencia o
gravedad de las manifestaciones
manifestacion clnicas, ni
con la extensin de las lesiones. En la fase
aguda se detectan anticuerpos IgM contra
T.
cruzi
que
son
reemplazados
progresivamente por los IgG a medida que
progresa la enfermedad. Slo en infecciones
recientes se encuentra reduccin o
negativizacin de los ttulos despus del
tratamiento con drogas tripanocidas.
2. Reaccin de fijacin del complemento
complemento
(RFC): tambin llamada reaccin de
Machado Guerreiro.
La reaccin consta de dos sistemas:
1. consta de cantidades exactas de suero del
paciente, el antgeno y el complemento (de
31
Realizado por: Lic Yotsabeth Sal Garca. U.C.:
U.C.: Microbiologa. Programa Medicina UNEFM. 2009
cobayo), los dos ltimos son dosificados y

diluidos de acuerdo con su ttulo.
2. se aade el sistema hemoltico, formado
por un antgeno (glbulos rojos de carnero)
ms su anticuerpo especfico o hemolisina
(sueros de conejo inmunizado con glbulos
rojos de carnero).
Si el antgeno reacciona con su anticuerpo
especfico (del paciente), el complemento se
fija sobre el complejo antgeno-anticuerpo
formado, as como tambin en la reaccin
del 2 sistema. Cuando el complemento se
fija en este primer sistema, no ocurre nada
visible en la reaccin, pero si se fija en el
segundo sistema, entonces ocurre la
destruccin de los glbulos rojos, es decir se
produce una hemlisis.
El segundo sistema acta como un
indicador de la fijacin o no del
complemento, en la reaccin no visible
entre un antgeno y su anticuerpo. En
consecuencia, en la reaccin negativa hay
hemlisis porque el complemento no fue
usado en el primer sistema y en la positiva
no hay hemlisis porque no hay
complemento, ya que fue empleado en el
primer sistema, es decir, en la reaccin
especfica entre el antgeno de T. cruzi y los
anticuerpos del suero del paciente.
3. Hemaglutinacin indirecta: esta reaccin
es ms sensible que la fijacin del
complemento. Esta tcnica se fundamenta
en la adherencia de antgenos especficos
sobre la superficie de glbulos rojos, que
luego se aglutinaran al producirse la
reaccin entre el antgeno y el anticuerpo
homologo existente en el suero del paciente.
Para facilitar la adherencia del antgeno a
la superficie de los glbulos rojos, estos son
tratados previamente con acido tnico.
4. Prueba de ELISA: Utiliza como antgenos
extractos del parasito o sus fracciones,
absorbidas en microplatos. Es una prueba
muy sensible para detectar anticuerpos IgG
o IgM, de especial utilidad para bancos de
sangre. Las pruebas de ELISA positivas se
confirman con la Inmunofluorescencia
Indirecta.
5. Inmunofluorescencia Indirecta (IFI): En

esta tcnica los epimastigotes fijados con
formol son antgenos estables y con ellos es
posible diferenciar anticuerpos IgM e IgG.
En algunas ocasiones muestra reacciones
cruzadas con infecciones por otros
protozoarios como los del genero
Leishmania; esa inespecificidad se acenta
en los ttulos bajos.
La prueba esta indicada para estudio de
recin nacidos con posible infeccin
congnita, por la posibilidad de detectar
tanto anticuerpos IgG como IgM, para
diferenciar
transmisin
pasiva
de
anticuerpos, de infeccin intrauterina.
La IFI se usa como prueba confirmatoria de
infeccin con T. cruzi cuando la prueba de
ELISA o hemaglutinacin esta positiva,
especialmente en los estudios de bancos de
sangre.
DIAGNOSTICO
DIAGNOSTICO MOLECULAR
Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR):
consiste en utilizar sondas de ADN capaces
de reconocer, por hibridacin molecular,
secuencias de nucletidos especificas del
ADN nuclear o del Kinetoplasto de T. cruzi ,
que estn presentes en el suero u orina de
pacientes. El resultado se observa al revelar
el marcador que lleva la sonda de ADN.
MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA DE LOS
TRIATOMINOS
Rhodnius prolixus
a. Adultos: tamao aproximado de 20 mm.
Color general pardo=amarillento con
manchas marrn oscuro en varias regiones
del cuerpo.
Cabeza: alargada hacia adelante cabeza
prognata?, ojos compuestos predominantes
y multifacetados. Por delante de los ojos
compuestos se extiende la regin
anteocular; en esta regin se implanta un
par de tuberculos anteniferos, que sirven de
base de sustentacin a las antenas. Los
tuberculos anteniferos se encuentran
situados en estos insectos cerca de la
32
MICROBILOGIA I
Prctica N4
N4: Plasmodium,
extremidad anterior de la regin

anteocular, lo cual caracteriza el genero
Rhodnius. Las antenas son siempre muy
visibles y estn formadas por cuatro
segmentos de los cuales el primero es muy
corto. La proboscide es recta y esta
integrada por tres segmentos. Cuando el
insecto no esta alimentndose, permanece
flexionada por debajo de la cabeza y su
extremidad descansa en una ranura del
torax surco estridulatorio? En medio del
primer par de patas. Por detrs
det
de los ojos
compuestosregion
postocular?,
se
observan los ojos simples ocelos?. Esta
regin se une al torax por un cuello.
Torax: visto por la cara dorsal, solamente se
observa el pronoto ya que el mesonoto y
metanoto estn ocultos por las alas
plegadas. El pronoto es aproximadamente
trapezoidal, con los angulos posteropostero
laterales proyectndose de manera que le
dan al chipo el aspecto
aspec
de poseer
hombros. En la superficie del pronoto se
ven unas saliencias denominadas carenas
longitudinales. Inmediatamente detrs del
pronoto esta un par de alas solo el par
anterior es normalmente visible?, plegadas
encima del abdomen y cubrindolo excepto
exc
en sus bordes laterales. Este primer par de
alas es conocido como hemielitros ya que
tienen una porcin basal dura, muy
quitinezada, llamada corion, y otra porcin
distal membranosa o membrana. Debajo de
los hemialitros, que se implantan en el
mesotrax,
ax, existe un segundo par de alas
enteramente membranosas. Del borde
posterior del pronoto sale una estructura
triangular el escutelo?, que se sita en
SUS VECTORES Y LAS MALARIAS HUMANAS.

HUMANAS.
medio de las bases de los hemielitros. Por

ultimo, del trax salen tres pares de patas
delgadas
elgadas terminadas en un par de uas.
Abdomen: es de forma oval y sus bordes
laterales aplanados presentan dibujos
utilizados para su clasificacin. Estos bordes
reciben el nombre de conexivo. En la
hembra el extremo posterior del conexivo
se interrumpe, dejando ver el ovipositor, en
cambio en el macho el conexivo no es
interrumpido (Fig. N 19).
b. Ninfas: en lneas generales, podemos
decir que las ninfas tienen una morfologa
muy parecida a la de los adultos,
diferenciandose de ellos principalmente,
por ser de menor tamao y carecer de alas.
En la ninfa de IV estadio comienzan a ser
vistos los rudimentos alares de los cuales
presentan un mayor desarrollo en el V
estadio.
Triatoma maculata: coloracin general

oscura con manchas amarillentas o color
naranja
ja plido en diversas partes del
cuerpo. La morfologa general es semejante
a la ya descrita para el R prolixus , pero
debe observarse que los tubrculos
anteniferos se sitan en la parte media de la
regin anteocular, lo cual es caracterstico
para todos los ejemplares pertenecientes al
gnero Triatoma (Fig. N20-a
N20 y 20-b).
Panstrogylus geniculatus: ejemplares ms

grandes
que
los
anteriores
aproximadamente 25=30 mm de largo?.
Coloracin general amarillo claro con
manchas negras en diversas partes del
33
cuerpo.
uerpo. Obsrvese que los tubrculos
anteniferos estn muy prximos a los ojos
compuestos, lo cual es caracterstico para
todos
los
ejemplares
del
genero
Panstrongylus. La especie P geniculatus
puede ser reconocida porque adems del
color amarillo claro, presenta
esenta sobre la parte
media del pronoto una mancha negra que
semeja un trbol de cuatro hojas y en el
borde posterior de dicho pronoto, hay una
franja transversal negra de margen anterior
ondulado.
34
PRACTICA N4: Plasmodium, SUS VECTORES Y LAS MALARIAS

HUMANAS.
que contiene pigmento malrico. La
cromatina se presenta como una masa
nica, algunas veces difusa, segn el sexo
del gametocito. Estos son redondeados, con
excepcin de P. falciparum que tiene
forma alargada o de media luna.
TECNICAS DE DIAGNSTICO
PARASITOLOGICO
Diferentes especies de Plasmodium

parasitan a diversos animales y cuatro (4)
especies al humano. Las 2 especies
principales que lo parasitan son P. vivax y
P. falciparum.
Morfolgicamente pueden diferenciarse
las 4 especies de Plasmodium cuando se
observan preparaciones coloreadas. En
sangre perifrica se deben diferenciar tres
formas parasitarias:
a- Trofozoito: consta de dos partes,
citoplasma que se colorea de azul y ncleo
o cromatina, de color rojo. El citoplasma
en los parsitos jvenes tiene forma de
anillo y en los adultos es ameboide o en
banda, segn la especie de Plasmodium. El
espacio sin teir en el anillo contiene la
vacuola digestiva que no toma los
colorantes. La cromatina siempre es una
masa nica compacta. El eritrocito
parasitado puede sufrir deformaciones y
presentar granulaciones rosadas, que en la
especies P. vivax se denominada de
Schffner; en P. falciparum se llaman de
Maurer.
b- Esquizontes: presentan 2 ms masas
de cromatina, segn el grado de
maduracin. Cada masa de cromatina est
rodeada de citoplasma. Los esquizontes
maduros al terminar de dividir su
cromatina estn constituidos por un
acmulo de merozotos, a veces en forma
de roseta y con el pigmento malrico de
color caf en la parte central del parsito.
Segn la especie de Plasmodium, los
eritrocitos parasitados presentan forma y
tamao y presencia o ausencia de grnulos
(Fig. N 21).
c- Gametocitos: ocupan casi todo el
eritrocito o pueden estar libres. Constan de
un citoplasma voluminoso de color azul
El mtodo ms prctico para un

diagnstico definitivo del paludismo, es la
demostracin del Plasmodium en la sangre
del paciente.
1- El examen de la sangre se realiza
habitualmente en extendido y/o gota
gruesa,
gruesa ambos teidos con Giemsa. El
extendido permite estudiar el parsito
dentro de los glbulos rojos y establecer el
diagnstico de la especie. La gota gruesa
facilita el diagnstico de la infeccin
malrica, principalmente cuando los
parsitos son escasos en sangre. La gota
gruesa rene en un espacio relativamente
pequeo, una mayor cantidad de sangre.
Se acostumbra practicar en una misma
lmina la gota gruesa y el extendido.
Individuos
experimentados
pueden
diagnosticar la especie del parsito en la
gota gruesa. Hay que recordar que con
este mtodo se destruyen los glbulos
rojos, no pudiendo utilizarse las
modificaciones de stos como ayuda
diagnstica.
En las infecciones producidas por P vivax
y P malaria se observan todos los estadios
en la sangre perifrica, pero en infecciones
por P falciparum slo se ven formas
anulares o trofozoitos jvenes y
gametocitos. Los plasmodios son ms
numerosos en la sangre perifrica durante
la fase final del acceso febril, mientras que
en los paroxismos, especialmente en
infecciones por P falciparum, se alojan en
su mayora dentro de los capilares de
rganos internos.
2- QBC (Quantitative Buffy Coat
Analysis) : consiste en la observacin de
muestras de sangre centrifugadas en tubos
de microhematocrito especiales que
35
MICROBILOGIA I
Prctica N4
N4: Plasmodium,

HUMANAS.
36
MICROBILOGIA I
Prctica N4
N4: Plasmodium,

HUMANAS.
37
MICROBILOGIA I
Prctica N4
N4: Plasmodium,

HUMANAS.
contienen
acridina.
Esta
le
da
fluorescencia al ncleo del parsito y as
son obervables al microscopio con luz
ultravioleta, directamente en el tubo
capilar, entre la capa de glbulos blancos
(buffy coat) y los glbulos rojos.
Demanda menos esfuerzo que el examen
del frotis de sangre y es ms rpido. Se
hace difcil diagnosticar la especie
parasitaria.
Para el diagnstico
iagnstico molecular existen
disponibles las tcnicas de PCR y las de
sondas de ADN y ARN, mediante
hibridizaciones
con
oligonucletidos
complementarios de regiones especficas
de especie del parsito y que se detectan
con
radioistopos
o
mtodos
inmunoenzimticos.
INMUNOLOGICO Y MOLECULAR
MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA DE LOS

ANOFELINOS (Anopheles)
Para el diagnstico
iagnstico serolgico se utilizan
mtodos
como
inmunofluorescencia
indirecta, hemaglutinacin indirecta,
i
ELISA. Se utilizan antgenos homlogos de
cepas de P. falciparum y de P vivax. Estas
tcnicas serolgicas deben considerarse
como un medio eficaz en la evaluacin
epidemiolgica o seleccin de posibles
donantes de sangre. En cambio, son menos
tiles
les en el diagnstico de casos.
Curpo delicado, patas largas, antenas con

varios
segmentos
(nematceros),
probscide alargada y presencia de
escamas en las alas.
Adultos: en posicin de reposo o picada, el
anofelino adulto adopta una posicin
oblcua caracterstica. Con respecto a la
superficie.
38
MICROBILOGIA I
Prctica N4
N4: Plasmodium,

HUMANAS.
a) Cabeza: (Fig. N 22)

- Ojos: compuestos y
hexagonales; no hay ocelos.
ommatidias
- Antenas: al igual que en los culicinos, se

implantan por delante de la concavidad
anterior del ojo correspondiente. Tienen
un escalpo reducido, un pedicelo o toro
globuloso y un flagelo formado por los 13
segmentos restantes (total 15 segmentos).
Las antenas son plumosas en los machos y
pilosas en las hembras.
- Palpos maxilares: estn formados por
cinco segmentos y siempre son largos en
ambos sexos. En la hembra tienen un
grosor uniforme y en el macho tienen la
extremidad distal ensanchada en forma de
esptula.
b) Torax: el segmento mas desarrollado es
el mesotrax ya que el protrax y
metatrax estn muy reducidos. Lo mas
caracterstico del trax de los anofelinos es
el escutelo, el cual presenta un borde
regularmente redondeado, semilunar, con
una hilera continua de cerdas pequeas
(excepto en el gnero Chagasia), a
diferencia de los culicinos que tienen el
borde posterior trilobulado con un
mechn de cerdas en cada lbulo.
c- Alas: las escamas que recubren las
nervaduras de als alas de los anofelinos
son de color blanco, crema y negro. Ellas
se agrupan formando manchas,
manchas a veces
tan constantes que permiten clasificar las
distintas especies (excepto el gnero
Chagasia que no tienen manchas). La
presencia de alas manchadas es la
caracterstica fundamental de la tribu
Anophelini.
Larvas: a diferencia de las larvas de los
culicinos, no poseen sifn respiratorio. La
respiracin se realiza a travs de
espirculos ubicados a todo lo largo de la
cara dorsal del abdomen, por lo que la
larva tiene que flotar en forma horizontal
con respecto a la superficie del agua,
ayudada por unas cerdas palmeadas,
ubicadas a todo lo largo del trax y del
abdomen. Esta posicin nos permite
fcilmente diferenciarlas de las larvas de
los culicinos (Aedes, Culex).
39
MICROBILOGIA I
Prctica N4
N4: Plasmodium,

HUMANAS.
40
PRACTICAN5: Toxoplasma gondii, Y TOXOPLASMOSIS Y OTRAS

PARASITOSIS EMERGENTES EN INMUNOSUPRIMIDOS
(CRISPTOSPORIASIS, CICLOSPOSIASIS, ISOSPORIASIS, BLASTOCISTOSIS)
MORFOLOGIA Y ESTRUCURA DE
Toxoplasma gondii
Taquizoito: formas parasitarias extraepiteliales que se multiplican rpidamente.
Su tamao es de 4 a 6 micras de longitud,
por 2 a 3 de ancho. Cuando se hacen
coloraciones
oloraciones con Wright o Giemsa,
adems de observar su forma arqueada,
con una membrana externa compuesta de
laminina unida a protenas y otra
membrana interna, ambas interrumpidas
en uno de sus lados por el microporo. En
el citoplasma se les visualiza el
citoesqueleto con lo microtbulos y en la
parte anterior se localizan las roptrias y los
anillos polares. Tienen adems, los
micronemas, mitocondrias, aparato de
Golgi y varios grnulos (Fig. N24,25 y
27).
Quistes Tisulares: poseen una membrana

propia y miden entre 20 y 200 micras, de
forma generalmente redondeada, algunas
veces alargada. En su interior se
encuentran
an cientos de formas parasitarias
conocidas como bradizotos, trmino que
seala los elementos extra-epiteliales
extra
que
se forman por multiplicacin lenta. Estos
parsitos
intraqusticos
miden
aproximadamente 7 micras de longitud
por 2 de ancho (Fig. N26 y 28).
2
41
Prctica N5: Tosoplasma gondii, Y TOXOPLASMOSIS Y OTRAS PARASITOSIS EMERGENTES EN INMUNOSUPRIMIDOS.
42
La toxoplasmosis es una enfermedad de

difcil diagnstico parasitolgico, pues no
es fcil demostrar el agente etiolgico y
establecer la relacin entre infeccin y
enfermedad.
PARASITOLOGICO
a. Demostracin directa del parsito:
Este puede encontrarse en LCR, ganglios
linfticos, mdula sea y ocasionalmente
en otros tejidos.
Cuando se obtiene material por puncin,
se busca el parsito en fresco o coloreado.
En los tejidos, las caractersticas
morfolgicas son difciles de precisar, pues
el estudio histopatolgico muestra formas
redondeadas o partes del parsito, segn
sea su posicin y se requiere mucho
tiempo, experiencia y cortes seriados para
poder identificarlo. Se confunden sus
estructuras con otros protozoarios,
hongos, polen, etc.
b. Inoculaciones: el parsito se puede
aislar de sangre, LCR, esputo y de los
tejidos infectados, msculo, placenta, ojos
enucleados y vsceras. El procedimiento
indicado para el aislamiento es la
inoculacin al ratn a nivel de laboratorio.
DIAGNOSTICO INMUNOLGICO
a. Reaccin de fijacin de complemento:
Fue la primera tcnica serolgica
empleada para el diagnstico de la
Toxoplasmosis. La interpretacin se hace
mediante la observacin directa de la
ausencia o presencia de la hemlisis,
indicativa de que hubo o no fijacin del
complemento por el complejo antgenoanticuerpo. La reaccin es de tipo
cuantitativa.
b. Reaccin de Sabin y Feldman: el suero
que contiene anticuerpos especficos
antitoxoplasmas,
al
actuar
sobre
toxoplasmas vivos in vitro , en presencia
de un suero normal conteniendo un
factor accesorio, impide que stos se
colorean con azul de metileno bsico. El
fenmeno tiene que ver aparentemente
con modificaciones de la estructura
citoplasmtica y no solamente de la
permeabilidad de la membrana, mediante
la cual el ARN sale de la clula o se
modifica al punto de no dar la tincin
caracterstica con el colorante. Es una
reaccin cualitativa y con diluciones
crecientes puede hacerse cuantitativa. El

ttulo est dado por la mxima dilucin del
suero en que permanece ms del 50% de
los toxoplasmas sin colorearse a la
observacin microscpica. Un mismo
suero puede presentar variaciones en su
ttulo, que no debera ir ms all de una
dilucin.
c. Reaccin de Hemaglutinacin Indirecta:
consiste en la aglutinacin de eritrocitos
de carnero, previamente tanizados y
sensibilizados con antgeno soluble de
Toxoplasma, en presencia de un suero con
anticuerpos especficos. La deteccin
precoz de la primo-infeccin se detecta
con ttulos muy altos (ms de 1/16.000)
en la fase temprana de la infeccin. Pero
como no detecta IgM, su interpretacin
est sujeta a repetir la prueba a diferentes
intervalos de tiempo y a la evaluacin de
la modalidad clnica de la infeccin.
d. Reaccin de Inmunofluorescencia
Indirecta: se utilizan taquizotos muertos
por formol o liofilizados. Los anticuerpos
de clase IgG presentes en el suero del
paciente se adhieren a la pared del
parsito, donde se detectan por medio de
gammaglobulina anti-humana conjugada
con isotiocianato de fluorescena. La
reaccin se lee al microscopio de luz
ultravioleta y se determina el ttulo en la
ltima dilucin del suero, en la cual se
encuentra fluorescencia de la pared del
parsito.
e. Intradermorreaccin: prueba cutnea
(Toxoplasmina) la reaccin es de
Hipersensibilidad retardada, consistente en
la inyeccin por va intradrmica de 0,1
ml de antgeno preparado de Toxoplasmas.
La lectura se hace a las 24, 48 72 horas,
evaluando el dimetro de la infiltracin
cutnea y no del eritema. Se recomienda el
uso de un segundo antgeno control
(protenas del ratn) para la deteccin de
falsos positivos.
Prueba positiva: infiltracin con un
dimetro mayor de 10 mm, indica que el
sujeto en estudio ha tenido una infeccin o
la tiene todava, pero no indica actividad
del proceso.
Prueba negativa: no permite excluir
infeccin reciente. El uso combinado de
sta con otras sero-reacciones, sirve de
orientacin diagnstica para el tipo de
infeccin (reciente o crnica), adems es
una prueba de gran utilidad en las
encuestas epidemiolgicas.
43
CRITERIOS CLINICOCLINICO-INMUNOLOGICOS
PARA EL DIAGNOSTICO DE LA
TOXOPLASMOSIS
Deteccin de
Interpretacin de los
anticuerpos
Resultados
IgG
IgM
+
- Fase temprana de la
infeccin aguda.
+
+
- Infeccin aguda
+
- No hay infeccin
aguda
(paciente inmune).
- No hay infeccin:
Paciente no inmune
Peligro de infeccin.
DIAGNNSTICO MOLECULAR
Deteccin de Antgenos: la reaccin en
cadena de la polimerasa (PCR) se usa para
amplificar ADN de T. gondii indicando la
presencia del parsito en los lquidos o
tejidos, inclusive en el lquido amnitico.
COCCIDEOS INTESTINALES.
observan grnulos
os similares a los cuerpos
tilacoides, mientras que la forma madura
contiene dos esporoquistes
quistes con dos
esporozotos, cada uno de ellos, con un
rea apical estructuralmente compleja,
similar al conoide de los coccidios, con
ropthrias y micronemas (Fig. N29).
N29
2. Cryptosporidium spp:
Oquiste:
quiste: esfricos o elipsoidales, en el
intestino presentan un tamao entre 2 y 6
m y se encuentran localizados en
vacuolas parasitforas. Los ooquistes
presentan cuatro esporozoitos, sin
esporoquistes son ovoides y pueden medir
entre 4,5 y 7,9 m (Fig. N: 30).
30)
1. Cyclospora cayetanensis:
quiste:
Oquiste
quiste: cido alcohol resistente, esfrico
y de 8-10
10 micras de dimetro, con una
gruesa pared de 50 nm de espesor que los
protegen del medio ambiente exterior.
Se ha demostrado la presencia de dos
formas: una inmadura, no esporulada y
otra madura, esporulada. Ambas formas
presentan una envoltura fibrilar de 63 nm
de espesor, por
or debajo de la cual se
localiza una pared de 50 nm de espesor.
Fig. N30: Las flechas sealan
Oquistes
quistes de Cryptosporidum spp,
cidocido-resistentes,
resistentes, ntese color rojo
brillante sobre fondo azul.
azul. Coloracin
de Kinyoun. Objetivo inmersin (100X).
Tomado de: Atlas de parasitologa mdica,
Rodriguez, E.
Fig N
N29: La flecha seala un oquiste
o quiste
acidoacido-resistente
resistente de C. cayetanensis,
cayetanensis, de
color rojo brillante sobre fondo azul.
azul.
Ntese
corpsculos
internos
que
corresponden a esporozotos. Muestra de
materia fecal. Coloracin de Kinyoun.
Objetivo de inmersin (100X). Tomado de:
Atlas parasitologa mdica Rodriguez,
odriguez, E.
En el interior de la forma inmadura, se
44
3. Isospora belli:
Ooquiste al examen al fresco de materias
fecales se observan transparentes, con
membrana delgada y de forma oval. Mide
aproximadamente 28 por 13 micras. En el
momento de la eliminacin contiene una
masa granulosa llamada esporoblasto, que
se divide en dos en el medio
dio ambiente,
cada una de las cuales produce
membrana,
para
constituir
dos
esporoquistes. En el interior de cada
esporoquiste se forman 4 esporozotos
fusiformes (Fig. N31).
Fig. N 31: Isospora belli. Oquiste

O quiste maduro.
Presenta dos esporoquistes (1)de pared
gruesa, en cuyo interior se observan
esporozoitos (2).Contraste de Fase. Tomado
de:www.tropeduweb.ch/images/isospora_
de:www.tropeduweb.ch/images/isospora_
belli._1.pg.jpg
La tcnica parasitolgica ms precisa es, la

coloracin por el mtodo de Ziehl-Neelsen
Ziehl
modificado
para
Crypstoporidium,
Cyclospora e Isospora (Mtodo de
Kinyoun); el cual consiste en:
- La muestra de materia fecal o esputo se
extiende en el portaobjetos en un rea
aproximada 1 cm de dimetro.
- Despus de secar la preparacin se fija 10
minutos con metanol.
- La coloracin se hace con carbol-fuccina
carbol
concentrada, con este colorante se deja 20
minutos.
- Luego lavar 2 minutos con agua corriente.
- Se decolora con con cido sulfrico al 7%,
para luego lavar durante 2 minutos con
agua corriente.
- El colorante de contraste es verde de
malaquita al 5%. Dejar 2 minutos.
Este colorante puede emplearse por azul de
metileno.
- Finalmente se lava
ava con agua corriente
durante 1 minuto y se deja secar a
temperatura ambiente antes de la
preparacin al microscopio.
Los oquistes se observan teidos de rojo
brillantes sobre fondo verde, mientras que
las levaduras se colorean de color azul. Son
redondeados
eados u ovalados de 3 a 5 micras de
dimetro. En algunos se logra ver los
corpsculos internos teidos ms oscuros
que corresponden a esporozotos.
Para
concentrar
oquistes
de
Cryptosporidium, se realizan las tcnicas de

Ritchie modificada que usa formol-ter
formol
y la
de Sheather que es una flotacin con
azcar. Ambas son similares en efectividad.
Es necesario tener precaucin en la
manipulacin de muestras de pacientes con
SIDA.
INMUNOLOGICO Y MOLECULAR.
PARASITOLOGICO
El diagnstico parasitolgico se hace por el
hallazgo de oquistes en las materias
fecales, esputo, lavado bronco-alveolar,
bronco
y/o
heces.
En las preparaciones con solucin salina y
lugol se pueden observar unas estructuras
redondeadas u ovoides de pared definida,
como huevos vacos, de tamao
uniforme, refringentes, algunas veces con
estructuras granulares internas, que no son
fciles de identificar.
Debido a que, frecuentemente,

temente, se asocia la
presencia de Cryptosporidium en los
pacientes con VIH, se han diseado
tinciones que detectan la presencia de
ambos parsitos. Existen mtodos de
deteccin de antgenos en heces por
inmunofluorescencia, hemaglutinacin y
ELISA que presentan
esentan buenos resultados,
incluso superiores a los mtodos
tradicionales. Tambin hay tcnicas de
inmunofluorescencia para la deteccin
conjunta
de C.
parvum y Giardia
intestinalis.
45
Se han descrito varios mtodos de

amplificacin, basados en la PCR, con la
utilizacin de cebadores especficos
para Cryptosporidium, que consiguen una
alta sensibilidad y especificidad en la
deteccin de este parsito en muestras
clnicas y ambientales. Tambin mediante
tcnicas de biologa molecular se ha
conseguido diferenciar las distintas especies
del gnero (amplificacin de un fragmento
y corte con el enzima de restriccin).
Para el diagnstico del parsito en los
pacientes inmunocompetentes es necesario
el procesamiento de tres muestras de heces
mientras que, en los pacientes infectados
por el VIH, podra examinarse una nica
muestra, recomendndose el procesamiento
de una segunda si la primera fuera negativa
y existiera una elevada sospecha clnica (Ej:
diarrea).
46
UNIDAD III
HELMINTOS
47
PRACTOCA N6:
N6: GEOHELMINTOS Y GEOHELMINTIASIS.
Los Helmintos o vermes, comnmente
llamados gusanos, son seres multicelulares,
ampliamente distribuidos en la naturaleza.
Muchos de ellos viven libremente y otros se
han adaptado a llevar vida parasitaria en
vegetales, animales o en el hombre.
intervienen huspedes intermediarios,

mientras que otros pueden transmitirse
directamente de persona a persona por
ingestin de huevos, a este grupo se les
denomina Biohelmintos.
Los helmintos
os de mayor importancia
mdica pertenecen a los Filum Nematoda y
Platyhelmintes.
ADULTOS:
ADULTOS: la hembra mide de 20 a 20 cm
de longitud y 3 a 6 mm de dimetro, el
macho de 15 a 20 cm de largo y 2 a 4 mm
de dimetro. Son de color rosado o blanco
amarilloso y los sexos se pueden diferenciar
macroscpicamente por la forma del
extremo posterior, que en la hembra
termina en forma recta, mientras que en el
macho presenta una curva en la cual
existen 2 espculas quitinosas retrctiles
que le sirven para la copulacin (Fig. N
32).
Ascaris lumbricoides:
Los nematodos y los plathelmintos difieren

morfolgicamente en que los primeros
poseen cuerpos cilndricos (gusanos),
cavidad corporal y tubo digestivo completo,
mientras que los segundos son aplanados,
sin cavidad corporal y aparato digestivo
muy rudimentario. Todos presentan un
sistema reproductor muy desarrollado y la
mayora de los plathelmintos son
hermafroditas. Muchos han adquirido
rganos de fijacin, con ganchos o
ventosas;
tosas; otros han formado una cutcula
resistente a los jugos digestivos del husped
y la mayora han adquirido un aparato
digestivo sencillo, pues toman el alimento
ya digerido por el husped. Muchos
helmintos, en especial las formas larvarias,
poseen glndulas
dulas que secretan sustancias
lticas para facilitar la penetracin de
tejidos.
El sistema excretor es sencillo, usualmente
constituido por tubos colectores que
desembocan al exterior del parsito. El
sistema nervioso es rudimentario y sirve
para originar el movimiento y la respuesta
a los estmulos. No hay propiamente
aparato locomotor, excepto en algunas
larvas que lo han desarrollado en diferentes
formas. No hay un sistema circulatorio
propiamente y carecen de aparato
respiratorio; la mayora son anaerobios
anaerob
facultativos.
De acuerdo al modo de transmisin de los
nematodos intestinales, predominan los
transmitidos a travs de la tierra, la cual se
contamina con huevos o larvas que salen en
las materias fecales; a este grupo de
parsitos se les denomina Geohelmintos.
Geoh
Algunos plathelmintos tienen ciclos de vida
generalmente complejos, en los que
El aparato digestivo est constituido por la

apertura bucal situada en el extremo
anterior (Fig.N33) rodeada por 3 labios
prominentes, por un corto esfago y por el
intestino, el cual se observa aplanado y de
color verdoso, que desemboca en el ano
situado en una cloaca cerca al extremo
posterior. La mayor parte de la cavidad
interior est ocupada por el aparato genital
que se observa como un ovillo de conductos
de diferente dimetro.
48
MICROBIOLOGIA I
PRACTICA N6:
GEOHELMINTIASIS.
En la hembra es notoria la presencia dos

ramas uterinas que desembocan en la
vagina, la cual se comunica con la vulva,
localizada entre el tercio anterior y medio
del cuerpo. En el macho los rganos
genitales desembocan con el intestino en la
cloaca. Los adultos no tienen rganos de
fijacin y viven en la luz del intestino
delgado sostenidos contra las paredes
debido a su musculatura.
Trichuris trichiura
ADULTOS:
Trichuris trichiura o tricocfalo, deriva su
HUEVOS:
Los huevos frtiles provienen de las
hembras fecundadas, tienen forma oval o
redondeada y miden aproximadamente 60
micras de dimetro mayor. Tienen 3
membranas, una externa mamelonada y 2
internas lisas, inmediatamente debajo de la
anterior. Estos huevos al ser examinados en
las materias fecales se observan de color
caf por estar colorados por la bilis y en su
interior presentan un material granuloso
que posteriormente dar origen a las larvas.
Los huevos infrtiles, observados menos
frecuentemente, provienen de hembras no
fecundadas,
ecundadas, son ms irregulares, alargados,
con protuberancias externas grandes o
ausentes y generalmente con una sola
membrana. Estos huevos no son infectantes
pero tienen importancia en el diagnstico y
como los frtiles, indican la presencia de
Ascaris hembras
embras en el intestino.
Cortesa PP Parasitologa. LUZ
nombre del trmino trico que significa

cabeza en forma de pelo. Es un gusano
blanco de aproximadamente 3 a 5 cm de
largo. La parte anterior que es delgada,
ocupa dos terceras partes del parsito. El
tercio posterior es ms grueso
grues y en conjunto
simula un ltigo. La hembra termina en
forma recta en su extremo posterior
mientras que el macho tiene una curvatura
pronunciada y est provisto en este extremo
de una espcula copulatriz (Fig. N 34).
Cerca de este rgano se encuentra la cloaca
donde desemboca el aparato genital
masculino. Los machos, como en casi todos
los nemtodos, son ms pequeos que las
hembras.
El tubo digestivo se inicia con la boca que es

pequea y provista de una lanceta
diminuta, contina con el esfago formado
f
por un tubo rodeado de glndulas
unicelulares en forma de cadena y le sigue
el intestino que termina en el ano cerca del
49
MICROBIOLOGIA I
extremo posterior. El esfago est en la

parte delgada del parsito, mientras que el
intestino y los rganos genitales ocupan la
parte gruesa del parsito. El aparato genital
es muy desarrollado, principalmente en las
hembras; el tero termina en una vagina
corta que desemboca en un orificio vulvar
situado cerca de la unin de la parte
delgada con la gruesa.
PRACTICA N6
GEOHELMINTIASIS.
sirven como rganos cortantes y de fijacin,

con ellos hieren la mucosa intestinal y
producen hemorragia (Fig. N 37).
HUEVOS:
Los huevos son muy caractersticos y fciles
de identificar, miden aproximadamente 25
micras de ancho por 50 de largo, de color
caf, membrana doble y tapones en los
extremos (Fig. N 34).
La cpsula bucal acta como una bomba

aspirante accionada por un fuerte esfago,
con un bulbo musculoso que se contrae
rtmicamente (Fig. N 39). A ste sigue un
intestino tubular que desemboca a la
cloaca. El interior de los vermes, adems del
aparato digestivo, contiene los rganos
genitales bien desarrollados.
Ancylostomydeos.
La anquilostomiasis es la parasitosis
ocasionada en el hombre por nematodos de
la familia Ancylostomidae, espefciamente
Necator americanus v Ancylostoma
Laa diferenciacin de las dos especies mas

importantes, estn resumidas en la tabla N
2.
duodenale.
La morfologa macroscpica de los adultos
es similar entre s. Son gusanos cilndricos
de aproximadamente 10 mm de longitud,
de color blanco, las hembras tienen 2 a 4
mm mas de longitud que los machos y son
un poco mas gruesas (Fig. N 35).
Es fcil diferenciar el sexo, pues los machos,
presentan en el extremo posterior un
ensanchamiento radial de la cutcula, con
prolongaciones en forma de dedos que le
sirven para sostener la hembra durante la
cpula, denominada bursa o bolsa
copulatriz (Fig.. N 36 y 38). Los dientes o
placas cortantes de la regin bucal, les
Fig. N 39: Cortesa PP PArastiloga. LUZ
50
MICROBIOLOGIA I
PRACTICA N6:
GEOHELMINTIASIS.
51
MICROBIOLOGIA I
PRACTICA N6:
GEOHELMINTIASIS.
52
MICROBIOLOGIA I
PRACTICA N6:
GEOHELMINTIASIS.
53
MICROBIOLOGIA I
PRACTICA N6
GEOHELMINTIASIS.
54
MICROBIOLOGIA I
HUEVOS: los huevos de las uncinarias que

parasitan al humano son indistinguibles
entre s. La forma es ovalada y miden 60
por 40 micras, son de color blanco con una
membrana nica muy uniforme y un
espacio entre ella y el contenido interior;
ste consiste en un granulado
ado fino en los
huevos recin puestos por el vermes y con
varios blastmeros al salir en las materias
fecales (Fig. N40).
PRACTICA N6
GEOHELMINTIASIS.
Fig. N 41:Adultos macho y hembra

de E. vermicularis
(Disponible en:
mx.geocities.com/images/nemato1.jpg
La envoltura externa es muy transparente y
permite ver el esfago con un bulbo
prominente (Fig. N 42 y 43), que se
contina
con el intestino, el cual
desemboca cerca del extremo posterior.
po
El
aparato genital es muy desarrollado y en
estado de gravidez se observa el tero
completamente lleno de huevos, ocupando
caso la totalidad del cuerpo del parsito
hembra. El tero tiene dos ramas que
confluyen en una vagina y vulva, que sale
al exterior un poco por delante de la mitad
del cuerpo. El macho mide la mitad de la
hembra (o.5 cm), tiene el extremo posterior
curvo, provisto de una espcula copulatiz y
raramente se encuentra, pues muere
despus de la cpula y es eliminado con las
materias fecales.
Enterobius vermicularis:
ADULTOS: es un gusano pequeo y delgado
de color blanco. La hembra mide
aproximadamente 1 cm de longitud,
longi
con el
extremo posterior recto y puntiagudo. Al
microscopio se ve un ensanchamiento
bilateral de la cutcula en el extremo
anterior, a manera de aletas (Fig. N 41). A
lo largo del cuerpo y bilateralmente, existen
dos engrosamientos de la cutcula en forma
de aristas triangulares, caractersticas de
este nematodo, especialmente cuando se
observa en cortes transversales.
55
MICROBIOLOGIA I
HUEVOS: los huevos son blancos, hialinos,

con un lado aplanado, por lo cual tienen
forma similar a la letra D, cuando se
observa en una posicin que muestre el
lado aplanado. Si esto no sucede se ven de
forma aplanada (Fig. N 44).
Poseen doble membrana y desde el
momento
que
salen
estn
muy
evolucionados, por lo cual es frecuente
observarlos con larva en
n su interior. Su
tamao es de aproximadamente 50 micras
de longitud por 25 de ancho.
Fig. N 44: Huevos de E. vermicularis

(Disponible en :
www.asm.org/division/c/parasite.htm )
PRACTICA N6:
GEOHELMINTIASIS.
DIAGNSTICO PARASITOLOGICO DE
E. vermicularis:
El diagnstico clnico diferencial de las
enterobiasis debe hacerse principalmente
con las entidades causantes de prurito anal,
a
y algunas veces genital en el sexo femenino.
Cuando el prurito anal o genital se presenta
en nios o nias, es en la mayora de los
casos debido a oxiuros, mientras que en los
adultos esta causa es menos frecuente. En
ellos puede ser producido por fisuras,
fis
hemorroides,
alergias
o
problemas
inflamatorios de ano y recto; en las mujeres
adultas el prurito genital puede ser debido a
candidosis,
tricomonosis,
infecciones
genitales, alergias, etc, y en menor grado a
enteroviasis.
El diagnostico de la oxiurosis
oxiuros se hace
generalmente por el mtodo oviscpico, el
cual consiste en el hallazgo de los huevos
en la regin perianal, perineal o vulvar,
utilizando el mtodo de la cinta engomada
transparente(Fig. N 45).
Las muestras deben tomarse en las
maanas, preferiblemente
riblemente antes de defecar
y sin previo lavado de la regin perianal.
Las cintillas deben observarse al
microscopio el mismo da, utilizando el
condensador bajo, para dar mejor
contraste, pues los huevos son de color
blanco y muy transparente. Es necesario
necesari
adquirir buena experiencia en este examen
de laboratorio, para evitar un diagnostico
errado, al confundirlos con artificios que se
pueden ver en la cinta. Para mayor
seguridad en el diagnstico, se recomienda
repetir el examen varias veces en das
diferentes,
entes, pues la salida de los parsitos
hembra a travs del ano, no siempre es
regular o constante. La positividad aumenta
cuando el nmero de muestras por paciente
es mayor y continuo.
El examen coproparasitolgico directo
corriente usado para el diagnstico
diagns
de otros
parsitos intestinales, no es efectivo para el
diagnstico de oxiuros. En pacientes con
56
MICROBIOLOGIA I
PRACTICA N6:
GEOHELMINTIASIS.
57
MICROBIOLOGIA I
PRACTICA N6
GEOHELMINTIASIS.
esta parasitosis se encuentran huevos en las

materias fecales en aproximadamente 5%.
Esto implica que si se confa nicamente
nica
en
el examen coproparasitolgico, pasarn sin
diagnosticar el 95% de los casos de
oxiurosis.
A veces el paciente mismo o la madre,
encuentra los gusanos en la ropa interior,
piyamas o en la piel perianal o perineal. La
simple observacin microscpica permitir
la identificacin, al observar los gusanos
con las caractersticas morfolgicas
descritas.
METODOS COPROCOPRO-PARASITOLOGICOS
DIRECTOS:
Mtodo cualitativo: en la mayora de las
helmintiasis intestinales, la bsqueda de
huevos en las materias fecales es el mtodo
ms simple y econmico de diagnstico. En
estas enfermedades es importante conocer
el nmero aproximado de gusanos que
existen en el intestino, basadoo en el nmero
de huevos que aparezcan en las materias
fecales. Los mtodos de recuento de huevos
hacen posible esta valoracin, la cual ha
permitido comprobar que la sintomatologa
est directamente relacionada con el
nmero de parsitos.
Mtodo cuantitativo:
cuantitativo: (Tcnica de KatoKatoKatz) este es el mtodo ms recomendado
en la actualidad y el que prefiere la OMS,
tanto
para
estudios
diagnsticos
individuales, como para investigaciones
epidemiolgicas.
La tcnica es la siguienteFig.
Fig. N 46)
- colocar sobre el papel
apel higinico la
muestra materias fecales.
- presionarla a travs de la tela metlica o
de nylon.
- Retirar las heces fecales que traspasan la
tela y transferirlas, con el auxilio del palillo,
al orificio de la placa que deber estar sobre
un porta-objetos.
- despus de llenar completamente el
orificio, retirarla cuidadosamente, dejando
las materias fecales sobre el porta-objetos.
porta
- cubrir las heces con la laminilla de papel
celofn, invertirla sobre una hoja de papel
de filtro o higinico y comprimirla
suavemente.
- esperar 1-2
2 horas y examinar al
microscopio.
El nmero de huevos encontrados en el
frotis fecal, multiplicado por 23,
corresponde al nmero por gramo de heces
(h.p.g.).
De igual forma, se pueden emplear mtodos

de flotacin como FAUST o WILLIS
MOLLOY (descritos en la prctica N 1),
para evidenciar huevos de geohelmintos de
inters mdico.
Tcnicas de coprocultivo para S. stercoralis:
Son pocoo utilizados en el diagnstico de
parasitosis intestinales. A pesar de esto, se
menciona la ms til en estudios especiales
o en investigacin de S. stercoralis.
S. stercoralis tiene en su ciclo de vida una

etapa de reproduccin de vida libre, la cual
se puede obtener en el laboratorio,
utilizando los medios adecuados. Estos
procedimientos tambin son tiles para
aislar larvas rhabditiformes y filariformes
de uncinarias y hacer la identificacin de
especie (Fig. N 47).
58
MICROBIOLOGIA I
PRACTICA N6
GEOHELMINTIASIS.
Mtodo con arena o carbn vegetal:

Se utiliza carbn vegetal molido, arena sola
o mezclada con tierra, previamente
esterilizadas,
ilizadas, las cuales se colocan en placas
de petri estriles.
- utilizando baja-lenguas
lenguas se mezcla
abundante cantidad de materia fecal con el
medio de cultivo.
- se agrega agua para humedecer sin
excesos y se tapa la placa.
- se deja a temperatura ambiente durante 2
a 7 das, agregando agua, si es necesario,
para mantener la humedad.
- a los 3 das pueden encontrarse larvas
filariformes de Strongyloides y a los 6 das
las de uncinarias. Se buscan en las gotas de
agua que se condensan en la tapa o donde
haya lquido acumulado en el cultivo.
Tambin puede utilizarse el mtodo de
Baermann para la separacin de larvas.
Mtodo de Baermann:
Esta tcncia se emplea en estrongiloidosis,
para concentrar las larvas a partir de
materiales fecales, cultivos o tierra. El
procedimiento es el siguiente:
- En un embudo colocado en un soporte
vertical, que tenga en el extremo un tubo
de caucho cerrado con pinza, se vierte agua
a temperatura de 40-42
42 C, hasta cerca del
borde.
- Se coloca sobre el embudo una malla
metlica o cedazo, cubierto con gasa doble
o cudruple, que debe hacer contacto con
el agua.
- Se ponen sobre la gasa 8-10
10 g de materias
fecales, tierra o material de cultivo, lo cual
se deja por 60-90 minutos.
- Las larvas, sedimentadas en el tubo de
caucho, se obtienen
ienen abriendo la pinza, para
obtener lquido en un tubo o gotas de
portaobjetos, que se examinan al
microscopio (Fig. N 48).
59
PRACTICA N7
N7: BIOHELMINTOS
BIOHELMINTOS Y BIOHELMINTIASIS.
Phylum: Platyhelminthes.
Clase: Cestoda
Taenia solium y Taenia saginata.
Adultos: T. solium y T saginata viven en el
intestino delgado del humano (hospedador
definitivo),
principalmente yeyuno,
adheridas por el esclex (Fig. N 49). Los
progltidos
grvidos
terminales
se
desprenden y salen espontneamente o
mezclados con las materias fecales (Fig. N
50). Ell contenido de ellos es esencialmente
el tero ramificado lleno de huevos, que
son redondeados o ligeramente ovalados, de
aproximadamente 30 a 40 micras de
dimetro, con doble membrana gruesa y
radiada que le da semejanza a una llanta,
son de color caf y presentan en su interior
el embrin hexacanto u oncsfera, con 3
pares de ganchos.
A simple vista los parsitos son aplanados y
se observan como una cinta blanca o
amarillosa (Fig. N 51), con un extremo
ms delgado que corresponde al esclex,
del tamao de una cabeza de alfiler, de 1-2
1
mm de dimetro. Al microscopio se
observan 4 ventosas del esclex en ambas
Taenias y en T. solium el rstelo est
provisto de una doble corona de ganchos en
nmero aproximado de 30. El esclex se
contina con un cuello an ms delgado, el
cual se va ensanchando hasta alcanzar el
tamao de 1 cm, con progltides
inmaduros. Le siguen los progltides
maduros, un poco ms anchos que largos y
en la parte terminal del parsito estn los
grvidos que son 3 veces ms largos que
anchos.
os. Las principales diferencias entre las
dos especies de Taenia, se enumeran en las
Tabla 3.
Fig. N 49: Esclex de una T. solium. Ntese

(A), y el rostro con
las cuatro ventosas (A),
Fig. N 50: Progltide grvido de T. solium

inyectado con tinta china a travs del poro
genital, para delinear el tero ramificado.
(Tomado de: Diagnstico Microbiolgico.
Koneman. 5 Edicin)
Fig. N 51: Taenia saginata adulta con el

pequeo esclex y el estrbilo, de varios
metros de longitud,
contiene una
longitud, que
larga cadena de progltides. (Tomado de:
Diagnstico Microbiolgico. Koneman. 5
Edicin )
hileras circulartes de ganchos caracterstico

de la especie (B).
(B).
60
61
MICROBIOLOGIA I
Huevos:
Tienen forma esfrica, muy pequeos,
miden de 30-40
40 m de dimetro, presentan
un color caoba y poseen: a) un contenido
granuloso con 3 pares de ganchos, es la
oncsfera o embrin hexacanto ; b) una
cscara gruesa o embiforo que rodea a la
oncsfera, mide cerca de 3 m de espesor,
que se presenta como una estructura
finamente estriada en sentido radial, debido
a la yuxtaposicin de elementos en forma
de bastonetes, unidos por una sustancia
cementante. En la prctica es imposible
distinguir un huevo de T. solium de uno de
T. saginata, por lo que los resultados de los
exmenes de heces se refieren como huevos
de Taenia sp.
PRACTICA N7
N7: BIOHELMINTOS
BIOHELMINTOS Y BIOHELMINTIASIS
BIOHELMINTIASIS.
HELMINTIASIS.
En estos tejidos el embrin crece, pierde sus

ganchos (en el caso de T. saginata) y al cabo
de un tiempo el embrin comienza a
invaginarse y vacuolizarse. Se forma as en
el fondo de esta invaginacin, una
estructura parecida a la de un ejemplar
adulto, 4 ventosas para T saginata y T.
solium, adems de un rstelo (Fig. N XX).
Fig.
Fig. N 53: Microfotografa biopsia de
cerebro. Cisticercosis humana por T. solium
en corte transversal.
(Tomado de: Diagnstico Microbiolgico.
Koneman. 5 Edicin).
Fig. N 52: Microfotografa de huevos
inmaduros de Taenia sp. Ntesela cubierta
con estras radiales. (Tomado de:
Diagnstico Microbiolgico. Koneman.
Koneman. 5
Edicin).
Edicin).
Metodologa de Anlisis
coprocopro-parasitolgico
Cisticerco:
Es la forma larvaria que se encuentra en el
hospedador
intermediario
y
cuya
denominacin vara tambin con la especie:
Cysticercus cellulosae para T. solium y
Cysticercus bovis para T. saginata (Fig. N
53).
Los cisticercos se alojan en tejidos
especficos, para
T. solium, el tejido
conjuntivo de los msculos masticadores,
lengua, corazn, diafragma, cerebro, ojos
del cerdo; para T. saginata, el tejido
conjuntivo de los msculos masticadores,
corazn y lengua del bovino.
La
orientacin principal para el
diagnstico se basa en la observacin por
parte del paciente, de los fragmentos
(progltides), que salen espontneamente o
en las materias fecales.
Al tamizar las materias fecales a travs de
una malla, se pueden
recuperar
progltides. El mtodo ms simple para
clasificar la especie, se basa en el nmero
de ramas uterinas principales, que salen a
casa lado del conducto uterino central del
progltide grvido, que son menos de 12 en
T. sollium y ms de 12 en T. saginata.
Para que el nmero de ramas pueda
observarse
rvarse bien, es necesario que los
62
MICROBIOLOGIA I
progltides sean grvidos. De otra manera

no se podr diferenciar entre las dos
especies.
Si se obtiene el esclex debe observarse al
microscopio para identificar los ganchos en
T. solium o confirmar la ausencia de ellos
en T. saginata
El examen de materias fecales es importante
para observar macroscpicamente la
presencia de fragmentos y para identificar
los huevos en el microscopio. No debe
confiarse en este estudio como mtodo
nico, pues es frecuente que no se observen
huevos al examen
en coprolgico, aunque el
paciente tenga la tenia en su intestino.
El mtodo de concentracin de formol-ter
formol
es recomendable (vase Prctica N 1), por
la posibilidad de que existan huevos en
poca cantidad.
Un importante avance inmunolgico en el
diagnstico
stico de teniosis, lo constituye la
deteccin de coproantgenos por el mtodo
de ELISA. Esta es una prueba colorimtrica
en materia fecal.
PRACTICA N7
N7: BIOHELMINTOS
BIOHELMINTIASIS.
HELMINTIASIS.
Fig. N 55: Huevo de F. heptica.

(Disponible en:
www.gefor.4t.com/.../fasciolahepatica11.jpg)
Clase: Trematoda
Fasciola heptica
Adulto: Es un gusano aplanado en forma de
hoja (Fig. N 54), de apariencia carnosa
carno y
color caf claro, con extremo anterior
saliente en forma de cono. Mide
aproximadamente de 2 a 3 cm de largo por
1 cm de ancho y en la parte anterior
presenta 2 ventosas. Son hermafroditas y
los rganos genitales masculino y femenino
(vitelaria), estn muy desarrollados,
ramificados y poseen un orificio o poro
genital cercano a la ventosa ventral. El
aparato digestivo consiste
en faringe,
esfago y el ciego dividido en dos tubos
ramificados.
El modo ms frecuente de establecer el
diagnstico etiolgico es por el hallazgo de
los huevos en bilis, contenido duodenal o
materias fecales. Existen diagnsticos falsos
positivos cuando se encuentran huevos al
coprolgico, en pacientes que han ingerido
hgado crudo o mal cocido, con los
gusanos; en estos casos el hombre no sufre
la infeccin sino que elimina los huevos
ingeridos.
Los parsitos adultos se encuentran en el
acto quirrgico y su identificacin
confirma la parasitosis.
En el diagnstico de laa enfermedad son
tiles los estudios radiolgicos, pruebas
hepticas, pruebas inmunolgicas, tales
como ELISA, hemaglutinacin indirecta y
reacciones de precipitacin. Recientemente
se ha utilizado pruebas modernas como
identificacin de antgenos y de complejos
co
inmunes circulantes.
Schistosoma mansoni
Huevos: Son ovalados y con un oprculo o
tapa en uno de sus extremos, miden
aproximadamente 150 mecas en su
longitud mayor, Tienen color caf debido a
la pigmentacin biliar (Fig. N 55).
Adultos: Son alargados, cilndricos y curvos

hacia la parte posterior, miden entre 1 y 2
cm en promedio, la hembra es ms larga y
delgada que el macho. Este ltimo posee
63
MICROBIOLOGIA I
PRACTICA N7
N7: BIOHELMINTOS
BIOHELMINTIASIS.
HELMINTIASIS.
64
MICROBIOLOGIA I
PRACTICA N7
N7: BIOHELMINTOS
BIOHELMINTIASIS.
HELMINTIASIS.
una apertura longitudinal llamada canal

ginecforo, en el cual aloja a la hembra en
determinados perodos. Ambos sexos
presentan 2 ventosas en la parte anterior,
una en el extremo o ventosa oral y la otra a
corta distancia, llamada ventosa ventral.
Estadios larvales:
Miracidio: Tiene forma ovalada y est
cubierto de cilias que le permiten moverse
activamente en el agua para buscar el
intermediario (Fig. N58), al cual penetran
activamente a travs de su cuerpo.
Fig. N 56: S. m
manosini.
anosini. Adultos macho y
hembra. 40X
Fig. N 58: Miracidio de S. mansoni.

Microscopio ptico 40X
Huevos: Son grandes, miden en promedio

de 100 a 150 micras, son ovalados y
presentan una caracterstica diferencial
importante que consiste en una espina
lateral grande (Fig.N 57).
Fig. N 57: Huevo de S. mansoni.

mansoni. La flecha
seala la espina lateral caracterstico de la
especie.
especie.
(Disponible en: www.seimc.org/control/revi_Para/esqui_img.gif )
Los huspedes intermediarios, pertenecen a

varios gneros de caracoles pulmonados,
segn la especie de Schistosoma, como por
ejemplo, Biomphalaria glabrata para S.
mansoni.
En los tejidos de estos caracoles, el
miracidio se transforma en una segunda
forma
larvaria
inmvil,
llamada
esporoquiste madre o primario, el cual
aumenta de tamao y se reproduce para
dar origen a una segunda generacin de
esporoquistess hijos o secundarios. Estos
ltimos tienen movimientos e invaden otros
sitios del caracacol y forman en su interior
las cercaras que salen del molusco (Fig. N
59). Estas son alargadas y de cola
bifurcada,
nadan
libremente
hasta
encontrar el husped definitivo
nitivo (Humano),
65
MICROBIOLOGIA I
al cual se adhieren y penetran a travs de la

piel utilizando secreciones lticas.
Fig. N 59: Cercaria de S. manson

mansoni.
Microscopio ptico. 40X
El mtodo mss comnmente usado para la
comprobacin de la parasitosis, es la
identificacin de los huevos de S. mansoni
en las materias fecales. Este mtodo no
siempre es suficiente para comprobar el
diagnostico, pues la cantidad de huevos que
salen al exterior es escasa. Por lo anterior se
recomienda los mtodos de concentracin,
especialmente la tcnica de Kato-Katz.
Kato
En la
esquistosomosiss intestinal es til la biopsia
de mucosa rectal, para lo cual se toma una
porcin pequea del tejido, para observar
directamente al microscopio entre lmina y
laminilla.
Las pruebas inmunolgicas pueden
contribuir al diagnstico. Las ms utilizadas
son intradermorreacin,
ntradermorreacin, para determinar
hipersensibilidad inmediata, fijacin de
complemento
e
Inmunofluorescencia
indirecta, estas dos ltimas muy especificas.
Tambin se han empleado otras reacciones
muy especficas como ELISA.
PRACTICA N7
N7: BIOHELMINTOS
BIOHELMINTIASIS.
HELMINTIASIS.
Morfologa del hospedador intermediario

de S. mansoni:
mansoni: Biomphalaria glabrata.
Presenta concha arrollada en espiral, plana,
generalmente con una depresin umbilical
en cada cara; animales con tentculos
cilndricos, largos y finos (Fig. N 60).
En cuanto a su morfologa interna,
presentan aparato dijestivo, respiratorio,
circulatorioo y una enorme glndula, el
hepato-pncreas,
pncreas, donde ocurre la mayor
parte del ciclo de Schistosoma.
Schistosoma El aparato
genital es hermafrodita, con una porcin
posterior comn (ovotestis) y una porcin
anterior propia para cada sexo, que se abre
en orificios separados.
Fig. N 60: Biomphalaria glabrata.

Hospedador intermediario de S. mansoni
Filarias: las filarias constituyen un

grupo de enfermedades en el humano y
en los animales, provocadas por
parsitos nemtodes de la super-familia
super
Filarioidea, a los cuales se les llama
comnmente filarias.
filarias
Onchocerca volvulus:
Adulto: Son gusanos blancos, opalescentes y
trasnparentes (Fig. N 61), con estriaciones
circulares en su cutcula. Se encuentran
fuertemente entrelazados en el interior del
ndulo de tejido conjuntivo del humano
infestado (husped definitivo). Los machos
miden de 2 a 4 cm de longitud por 150 a
200 m de ancho. La extremidad del macho
presenta una fuerte curvatura ventral. Las
hembras miden 30-50
50 cm por 250-400
250
m.
Dentro
de
la
cavidad
de
este
microorganismo se encuentran numerosas
microfilarias, que finalmente sern
liberadas a los tejidos circundantes. Las
microfilarias de O. volvulus no se
encuentran en sangre perifrica circulante.
66
MICROBIOLOGIA I
Fig. N 61: Adultos macho y hembra de

O. volvulus. Disponible en:
www.facmed.unam.mx/.../onchocercaadultsWHO.jp
g
Fig. N 62: Corte Histopatolgico de

Oncocercoma. Teido con HH-E. 50X
PRACTICA N7
N7: BIOHELMINTOS
BIOHELMINTIASIS.
HELMINTIASIS.
morfolgicas. La muestra se debe tomar de

piel cercana a los ndulos, si estos existen.
En caso de no haber ndulos debe
preferirse la regin escapular, cuello,
prominencias seas, como la piel de la
cresta iliaca y piel de muslos.
b) Biopsia de ndulo: El estudio
anotomopatolgico, tanto macro como
microscpico puede revelar la presencia de
parsitos adultos.
c)
Reacciones
inmunolgicas:
inmunolgicas:
Las
reacciones inmunolgicas para identificar
anticuerpos son poco especficas, pues
existe una gran homologa antignica entre
O. volvulus, las otras filarias y varios
helmintos. Por esta razn no se usan para
diagnostico. Cada vez ms se perfeccionan
pruebas
ruebas
para
demostrar
antgenos
parasitarios,
usando
anticuerpos
monoclonales o policlonales, aunque en la
actualidad la sensibilidad y la especificidad
no son muy buenas.
d) Observacin de microfilarias en el ojo:
Utilizando aparatos oftalmolgicos se
pueden
eden detectar microfilarias mviles en la
cmara anterior.
MORFOLOGIA EXTERNA DE SIMULIDOS
Adultos: los simlidos o jejenes son insectos
pequeos, robustos de 1-5
5 mm de tamao,
que se reconocen fcilmente por su trax
fuertemente jorobado, de antenas pequeas
en forma de cuernos, de patas cortas y
fuertes que le dan el aspecto caracterstico
de un pequeo bfalo (Fig. N 63 y 64).
a) Biopsia de piel: Ess un mtodo sencillo
que toma la parte superficial de la
epidermis, lo cual puede realizarse sin
anestesia, utilizando una cuchilla de afeitar,
tijeras curvas o un queratotmo. El material
debe partirse en pequeos fragmentos por
medio de agujas. Tambin se
s utiliza la
aplicacin directa del porta-objetos
porta
a la
epidermis expuesta, despus del corte. Las
preparaciones se observan con solucin
salina entre lmina y laminilla, empleando
objetivo de 10X, para buscar las
microfilarias mviles. Estos preparados
tambin
bin se pueden colorear con Wright,
Giemsa y hematoxilina, lo cual permite
identificar la especie por las caractersticas
Fig. N 63: Adulto de Simulium sp.

Disponible en:
www.monmsci.net/~kbaldwin/Dipterawww.monmsci.net/~kbaldwin/Diptera
Images/1.jpg
La cabeza es bastante libre, aparentando

nacer de la parte anteroventral del trax.
Los ojos compuestos, uniformes, en las
hembras estn separados por delante en la
lnea media y en los machos se unen sobre
67
el vrtex. Esta caracterstica sirve para

separar fcilmente los dos sexos.
exos.
El trax es arqueado, con apariencia de
joroba. Las alas son anchas, cortas,
transparentes, en general incoloras, de
forma acorazonada o triangular, sin pelos o
escamas visibles. Las patas son cortas y
fuertes, tarsos de 5 segmentos que terminan
en un par de uas, provistas o no de dientes
basales.
El abdomen es corto y ovalado, con 9
segmentos. En los segmentos III a VII se
observa los espirculos abiertos, bien
quitinizados.
Fig. N 64: Esquema representativo de un

Adulto de Simulium sp. Ntese forma
jorobada del trax.
Tomado de: www.bumblee.org.
68
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69

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MANUAL DE TRABAJOS PRACTICOS DE

REALIZADO POR: LIC. YOTSABETH SAUL GARCIA

UNIDAD II: Protozoarios ...

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en el Laboratorio de Microbiologa, razn por

Infecciones Adquiridas en el Laboratorio:

Las vas de contaminacin ms frecuentes

efectivamente el lavado, comenzando por los

El xito de estas normas depende de la sinceridad, la

microscopio; su finalidad es condensar la

Fig. N1: Partes del Microscopio ptico

Disponible en: http://es.wikipedia.org/wiki/Desarrollo_del_microscopio

USO DEL MICROSCOPIO

- Enfocar la preparacin con el

6. El microscopio, para ser trasladado,

PRACTICAN1: PROTOZOARIOS INTESTINALES Y GENITALES

Prctica N1: PROTOZOARIOS INTESTINALES Y GENITALES.

Corte histolgico de pared intestinal

Quiste: En coloraciones permanentes

Giardia lamblia (intestinalis)

Quiste: Es ovalado con membrana

Trofozoito: Es piriforme, simtrico, con

Quiste: es de forma ms redondeada, con

Trofozoito: Forma ovalada, con una

TECNICAS DIRECTAS DE DIAGNSTICO

intestino, como sucede cuando se efectan

Prctica N1: PROTOZOARIOS INTESTINALES Y GENITALES.

a) Examen macroscpico: es importante

procesos (colitis, cncer, uremia, etc.), o las

Leucocitos: estas clulas en materia fecal,

rpido en forma de tirabuzn, pueden

centrifugado cambiando de agua y

Los mtodos de concentracin se dividen en

Las preparaciones se montan en Lugol y

El xito depende de la exactitud en la

10%, debe usarse el sulfato de zinc con

- Mezcle el sedimento con la pequea

c) Tcnica simplificada de formolformol-ter: es el

Prctica N1: PROTOZOARIOS INTESTINALES Y GENITALES.

Prctica N 2: Leishmania, SUS VECTORES Y LAS LEISMANIOSIS

Prctica N2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSIS

Prctica N2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSIS

macrfagos); la presencia de ncleo y

Prctica N2: LEISHMANIA, SUS

dentro del tubo digestivo del flebotomino.

A travs de la gasa, los insectos efectan la

Prctica N2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSIS

o se provoca una deyeccin

lesiones. Por otro lado, se ha reportado un

Prctica N2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSIS

1.4. Reaccin de fijacin de complemento

Prctica N2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSIS

Los flebotominos son insectos nematceros

Fig. N12: Lutzomyia sp. Holtipo macho

Adulto Macho de Lutzomyia sp.

Fig. N13: Lutzomyia sp. Holtipo hembra 7:

Adulto Macho de Lutzomyia sp.

Prctica N2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSIS

carpetas ad hoc para su transporte al

Se realizan capturas diurnas y nocturnas de

- La trampa CDC est compuesta por un