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1. INTRODUCCIN
Antes de realizar un anlisis lo primero que tenemos que hacer
es la toma de muestra. Es importante que la muestra sea
representativa. Adems a nivel microbiolgico es importante que esa
muestra no se contamine ni en la toma de muestras, ni en la
manipulacin o transporte.
Primero cogemos las muestras para el anlisis microbiolgico,
para que no se contamine la zona donde estn las muestras.
En anlisis fsico-qumico el material simplemente tiene que
estar limpio. En cambio para el anlisis microbiolgico, el material
tiene que estar esterilizado. Se puede utilizar material de vidrio, boro
silicatado, o plstico.
El material de vidrio o plstico tiene que tener la apertura de
frasco perfectamente cerrada con un tapn esmerilado, o tapn de
rosca.
Cmo se puede esterilizar un bote de vidrio: En el autoclave, y
si es muy resistente en estufa (180 durante una hora). Si es de
plstico ya vienen esterilizados, se esterilizan con xido de etileno,
radiaciones gamma.
Cul es el volumen para una muestra de agua:
Dependiendo de la muestra, si es para filtracin por membrana
como mnimo una muestra de 500 ml, para el NMP sera de 250 ml.
Conceptos previos:
Muestreo simple: aquel que se coge en un momento
determinado y en un punto.
Muestreo compuesto: en el mismo sitio pero a diferentes
tiempos.
Anlisis de un pozo:
Bomba de aspiracin. Si lleva bomba, se bombea y se esteriliza.
Si no tiene bomba, cogemos un frasco con una cuerda. Agitamos la
superficie para homogenizar. Tienen que estar lastrados. Tambin hay
frascos que se cierran solos dependiendo de la presin.
Rpido.
Hacer el anlisis antes de 6 horas de la toma de
muestra. No se debe producir ningn tipo de cambio en la
muestra.
Introducimos la muestra de agua en una nevera. Los
microorganismos inhiben su crecimiento en una
temperatura de 4 5C. Se puede refrigerar un tiempo
mximo de 24 horas.
pH inferior a 7, crecen menos los microorganismos. Si el
agua tiene un pH bsico se tiene que echar algn tipo de
sustancia.
El oxgeno disuelto.
Temperatura.
pH.
Cloruros disueltos
privado acreditado.
Segundo: en el tiempo de cinco das, u perito, y en
Identificacin de la muestra.
Fichero de datos de la muestra: fecha, lugar, nombre y
direccin de la persona jurdica o fsica, nombre de la persona que ha
realizado la toma, sitio, fecha, hora, da, mes, ao. Un cdigo de
referencia para su identificacin, si ha ahabido algn tipo de anomala
2. MICROORGANISMOS INDICADORES
Coliformes totales.
Coliformes fecales.
Estreptococcus fecales
Escherichia coli
Salmonella.
Shigella.
Citrobacter.
Enterobacter.
Yersinia
Serratia.
Klebsiella.
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Edwarsiella.
Proteus.
Erwinia
Hafnia.
Cmo se filtra:
El embudo y la membrana deben estar esterilizados, al igual
que la probeta donde midamos la muestra de agua.
Para aguas potables se puede filtrar u volumen de 100ml, para
aguas envasadas 250 ml. Tambin se puede filtrar para volmenes
ms pequeos o hacer diluciones. Si se desconoce la procedencia del
agua tenemos que filtrar menos volumen.
PROCEDIMIENTO:
1. Flameamos la punta de las pinzas metlicas, no estriadas,
con alcohol etlico.
PRCTICAS EN CLASE:
COLIFORMES TOTALES
esterilizada.
Medio de cultivo: Agar m-Endo
Temperatura de incubacin: 37C
Tiempo: 24 horas.
Interpretacin de los resultados:
Los coliformes totales aparecern como colonias rojas con
brillo metlico.
COLIFORMES FECALES
esterilizada.
Medio de cultivo: Agar eosina azul de metileno (Agar
Levine).
Temperatura de incubacin: 44C
Tiempo: 24 horas.
Los dos indicadores inhiben el crecimiento de las bacterias
Gram positivo, inhiben el crecimiento de las bacterias que
no son coliformes.
No es un agar especfico de coliformes totales, solo
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ESTREPTOCOCOS FECALES
esterilizada.
Medio de cultivo: Agar Slanetz- Bartley
Temperatura de incubacin: 37C
Tiempo: 24 horas.
Interpretacin de los resultados: colonias rojas, prueba
positiva.
El medio lleva cida sdica, no se puede esterilizar, inhibe
el crecimiento de las Gram negativa. Tambin tiene
cloruro de tetrazodio (precipitado de color rojo en el
interior de la clula, las colonias se ven de color rojo).
RESULTADOS REPRESENTATIVOS
3. CLOSTRIDIUM SULFITO-REDUCTORES
Son bacilos Gram positivo, anaerobios estrictos, forman
esporas y son capaces de reducir el sulfito a sulfuro (con actividad
sulfito reductora)
Indican si hay contaminacin fecal o no. Los clostridium duran
mucho tiempo fuera de su hbitat, puede indicarnos una
contaminacin remota. Indicador de contaminacin fecal.
El medio de cultivo: SPS (Sulfito Polimixina Sulfadiazina). Los
dos ltimos inhiben el crecimiento de las Gram negativas. El sulfito
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Ambiente
Suelo.
Superficie de contacto de los alimentos
Del propio animal.
De los manipuladores
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= 0,1 = 10-1
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2. ENTEROBACTERIAS
La familia enterobacterias est compuesta por
microorganismos bacilares, Gram negativos, aerobios y anaerobios
facultativos, no esporulados, mviles e inmviles, fermentadores de
la glucosa, redutores de nitratos anitritos, oxidasa negativos y
capaces de crecer en medios con sales biliares.
Medio de cultivo:
Agar Mac Conkey
Las sales biliares y cristal violeta inhiben el crecimiento de las
Gram positiva. Es un medio selectivo y diferencial (entre coliformes y
no coliformes.
Tcnica de siembra: Extensin en placa
1. Cogemos tres placas con medio de cultivo de agar Mac
Conkey solidificado y fro.
2. Se utiliza la micropipeta o una pipeta esterilizada para tomar
0,1 ml de las diluciones seriadas 10-2, 10-3, 10-4 ( no se toma
de la suspensin madre)
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3. DETERMINACIN DE LA E.COLI
Medio de cultivo:
Agar Eosina Azul de Metileno (Agar Levine). Placas
grandes.
Material de siembra: el asa.
Tcnica de siembra:
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pipeta distinta.
Se cubre la superficie del caldo con vaselina estril
Prueba Confirmativa
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5. CLOSTRIDIUM SULFITO-REDUCTORES
Son bacilos Gram positivo, anaerobios estrictos, forman
esporas y son capaces de reducir el sulfito a sulfuro (con actividad
sulfito reductora)
Indican si hay contaminacin fecal o no. Los clostridium duran
mucho tiempo fuera de su hbitat, puede indicarnos una
contaminacin remota. Indicador de contaminacin fecal.
El medio de cultivo: SPS (Sulfito Polimixina Sulfadiazina). Los
dos ltimos inhiben el crecimiento de las Gram negativas. El sulfito
reduce a sulfuro y en presencia de una sal de hierro forma un
precipitado de color negro.
Tcnica:
1. Fundir el medio a 45C-50C.
4. Sembrar. Con una pipeta esterilizada cogemos 1 ml de la
suspensin madre hasta el fondo, sin soltar el lquido y conforme
vamos ascendiendo vamos saltando el lquido.
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6. DETERMINACIN DE SALMONELLA
La Salmonella es una enterobacteria, pero no es un coliforme.
Se realizan varias etapas:
1. Preenriquecimiento en medio lquido no selectivo
de la preparacin
Tcnica:
1. Se agita la suspensin madre tras 24 horas mximo
de incubacin y se traspasa 10 ml de la misma a 100ml del
medio CSC
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en superficie
Tiempo de incubacin: 37C durante 24-48 horas.
4. Prueba confirmativa
Prueba Kligler:
Tubo en pico de flauta, se siembra por estra en la
superficie del tubo y por picadura hacia el interior del
medio.
Tiempo de incubacin: 37C durante 24 horas.
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