http://www.actaodontologica.

com/ediciones/2005/2/bacterias_periodontopatogenas_en
fermedad_periodontal.asp
Bacterias periodontopatgenas bacilos anaerobios gram negativos como agentes
etiolgicos de la enfermedad periodontal
HOME > EDICIONES > VOLUMEN 43 N 2 / 2005 >
Recibido para arbitraje:218/08/2003
Aceptado para publicacin: 30/10/2003

Guilarte, C. Profesor Agregado. Ctedra de Microbiologa.

Perrone, M. Profesor Titular. Instituto de Investigaciones Odontolgicas "Ral

Vicentelli"
Facultad de Odontologa. Universidad Central de Venezuela.

Resumen:
El presente artculo es una revisin de la literatura sobre las principales caractersticas de las Bacterias
Anaerobias Gram Negativas: Porphyromonas, Prevotella, Bacteroides y Fusobacterium, el rol que juegan
estos microorganismos en la enfermedad periodontal, sus factores de virulencia, as como diferentes
estudios donde se reportan aislamientos de estas bacterias a partir de cultivos microbiolgicos e igualmente
se reportan de otros ensayos para la deteccin de estos microorganismos.
Abstract:
The present article is a revision of the literature on Gram Negative Anaerobic Bacteria: Porphyromonas,
Prevotella, Bacteroides y Fusobacterium, the principals characteristics, factors of virulence, the role of
these microorganisms in the periodontal diseases, and several studies that has been demonstrated isolated in
microbiological culture as other methods for the detection of these microorganism.
Palabras clave: Bacterias periodontopatgenas, Bacilos Anaerobios Gram Negativos, Porphyromonas,
Prevotella, Bacteroides y Fusobacterium.
Resumo
O artigo atual uma reviso da literatura no cano principal caractersticas das bactrias anaerbicas do
Gram negativo : Porphyromonas, Prevotella, Bacteroides e Fusobacterium, o rolo que estes
microorganismos na enfermidade peridental jogam, seus fatores do virulncia, si bem os estudos diferentes
de onde isolaes destas bactrias as cultivos microbiolgicos so relatados e tambm relatadas de outras
testes para a deteo destes microorganismos
Palavras chave: Bacterias periodontopatgenas, Bacilos Anaerobios Gram Negativos, Porphyromonas,
Prevotella, Bacteroides y Fusobacterium.

Desde el siglo pasado se han acumulado una cantidad de evidencias sobre la etiologa
de la periodontitis, pero pocos microorganismos, han sido hasta ahora denominados
patgenos periodontales, los cuales, estn relacionados con la iniciacin y progresin

de la enfermedad. Aunque hay mas de 300 especies que se aslan en los sacos
periodontales, solo un pequeo porcentaje de ellas se consideran etiolgicamente
importantes. El grupo de Bacilos Anaerobios Gram Negativos mayormente relacionados
en la etiologa de la enfermedad periodontal comprende los Gneros Porphyromonas,
Prevotella, Bacteroides y Fusobacterium, los cuales estn ubicados dentro de la familia
Bacteroidaceae, segn Bergey's Manual of Systemic Bacteriology (1994). La
clasificacin de estas bacterias ha sido difcil y por ello a lo largo de los aos han
emergido numerosas reclasificaciones taxonmicas, que posiblemente continen en el
futuro 1.
Gnero Porphyromonas
Las especies del Gnero Porphyromonas anteriormente ubicadas dentro del Gnero
Bacteroides 2, se caracterizan por ser bacilos pleomrficos o cocobacilos, inmviles, no
esporulados. Carecen de metabolismo fermentativo, por lo que son llamadas
asacarolticas, utilizan substratos nitrogenados como fuente de energa, no se
desarrollan en presencia de bilis y son sensibles a la vancomicina 1,3,4.
Actualmente el Gnero Porphyromonas comprende doce especies, pero solo tres se
han aislado de la cavidad bucal del hombre, P. gingivalis, P. endodontalis y P.
asaccharolytica. Estas especies se caracterizan, adems, por producir un pigmento
negro en sus colonias, caracterstica que se observa en medios de cultivo que
contienen sangre lisada, hemina y vitamina K 5,6. Dicha pigmentacin se debe a la
presencia de hemina y protoporfirina. La hemina, producto de la descomposicin de la
hemoglobina es un factor relevante para el crecimiento de estas bacterias tanto in vivo
como in vitro 1,3,4.
P. gingivalis, ha sido considerada una bacteria periodontopatgena por excelencia, se
asla del surco gingival especialmente cuando no existe una buena salud periodontal, y
se ha asociado especialmente con la progresin de la periodontitis crnica en el adulto
7
.
Van Winkelhoff (1988); Marhs (2000); Liebana (2002), refieren que P. gingivalis es el
microorganismo ms patgeno dentro del grupo de Bacilos Anaerobios Gram
Negativos. Ellos sealan que el poder patgeno de esta bacteria en la colonizacin,
destruccin del tejido periodontal y evasin de las defensas del hospedero, tiene
relacin con un gran nmero de factores de virulencia 7,8,9. Se ha demostrado que esta
bacteria posee elementos estructurales que favorecen su virulencia como: Fimbrias,
que se comportan como adhesinas, que intervienen en el proceso de adhesin a tejidos
del hospedero y en la coagregacin bacteriana; Hemaglutininas, que participan en la
aglutinacin de hemates en los inicios de la colonizacin tisular; Residuos proteicos,
glucdicos y de lipopolisacridos, que contribuyen a los procesos de adhesin a clulas
epiteliales, y a la coagregacin con otras bacterias; Cpsula, cuya accin es
fundamentalmente antifagoctica; Vesculas superficiales, que participan en la
captacin de nutrientes 9.
Al parecer una subunidad de las fimbrias de P. gingivalis, conocida como gen fim A,
clasificada en cinco genotipos (I,II,III,IV,V) basado en sus secuencias de nucletidos,
es el factor de virulencia ms importante involucrado en las interacciones bacterianas y
con el hospedero. Recientemente, estudios realizados por Nakagawa y col. (2002),
demostraron una fuerte relacin entre cepas de P. gingivalis que poseen genes fim A
tipo II-IV con la periodontitis crnica en el adulto y la progresin de la enfermedad 10.
Tambin esta bacteria, es capaz de producir una variedad de enzimas que causan
alteraciones directamente en los tejidos del periodonto. Entre stas, se encuentran: la

colagenasas o gingipainas, que acta sobre el colgeno del ligamento periodontal y

hueso alveolar; las enzimas trpsicas, que lo hacen sobre el colgeno alterado;
hialuronidasa, que acta sobre el cido hialurnico del tejido favoreciendo la difusin
del microorganismo; fosfatasa cida y alcalina, que determinan la prdida del hueso
alveolar, y otras enzimas como fosfolipasa A, heparinasa, desoxirribonucleasa,
condroitinsulfatasa, gelatinasa y queratinasa, que de alguna manera contribuyen a la
destruccin tisular 9.
Gnero Prevotella
Las especies que conforman el Gnero Prevotella, anteriormente clasificadas dentro del
Gnero Bacteroides; son bacilos cortos, pleomrficos, generalmente de 0,4um por 0,6
a 1um de longitud, inmviles, no esporulados. Capaces de producir pigmentos,
moderadamente fermentativos, sensibles a la bilis y resistentes a la vancomicina. Al
igual que Porphyromonas, son exigentes en cuanto a Vitamina K, hemina y sangre
para su crecimiento 11,12.
Atendiendo a la produccin de pigmento marrn oscuro o negro, caracterstica que se
observa de 2 a 3 semanas en sus colonias desarrolladas en agar sangre; las especies
de inters odontolgico se clasifican en dos grupos: 1 Especies pigmentadas: P.
intermedia, P. melaninogenica,P. loescheii, P. corporis, P. nigrescens, P. pallens, y, 2)
Especies no pigmentadas: P. bivia, P. buccae, P. buccalis, P. disiens, P. oralis, P. oris,
P. oulorum, P. veroralis, P. heparinolytica, P. zoogleoformans 3.
Todas estas especies, tienen su hbitat en la cavidad bucal, principalmente en el surco
gingival, y de todas ellas, P. melaninogenica y P. loescheii son las de mayor poder
fermentador; las dems especies slo poseen capacidad sacaroltica sobre un
determinado numero de azcares. Cabe resaltar que P. nigrescens, fenotpicamente
idntica a P. intermedia, es una nueva especie derivada de un grupo genotpicamente
diferenciado de cepas incluidas antiguamente en P. intermedia 3. Las especies ms
implicadas en la periodontitis son P. intermedia, P. loescheii y P. melaninogenica, en
las que se han descrito fimbrias, como adhesinas, que intervienen en la adhesin y
coagregacin bacteriana. Tambin se ha comprobado su capacidad para degradar
inmunoglobulinas, su accin txica sobre fibroblastos, su actividad fibrinoltica, y el
estmulo de su crecimiento por hormonas como estradiol y progesterona. Igualmente,
se ha demostrado in vitro que P. loescheii y P. melaninogenica tienen efecto
inmunosupresor por inhibir la proliferacin de linfocitos B e inmunoglobulinas. La
significacin patgena en el resto de especies no es bien conocida, por lo que se
relacionan en esta enfermedad unidas a otras bacterias, con carcter sinrgico y
polimicrobiano 12,13.
Gnero Bacteroides
Pertenecen a este Gnero una gran variedad de especies ubicadas en el Grupo
Bacteroides fragilis (B. fragilis, B. caccae, B. distansonis, B. eggerthii, B. merdae, B.
ovatus, B. stercoris, B. uniformis, B. vulgatus), aisladas con frecuencia en infecciones
de importancia clnica en el ser humano. Estas especies forman parte de la microflora
autctona del tracto gastrointestinal, pero raramente se encuentran en boca 3. En
cavidad bucal solo tienen inters las especies, B. capillosus, B. heparinolyticus, y B.
forsythus, que frecuentemente habitan en el surco gingival. Estas especies se
caracterizan por ser bacilos pleomrficos, anaerobios estrictos, inmviles, no
esporulados, no fermentativos y no crecen en bilis. Su crecimiento in vitro es difcil, sin
embargo, el desarrollo de sus colonias en placas de agar sangre es favorecido por la
presencia de N-acetilmuramato, hemina y vitamina K 1,3. Estas especies aunque se
incluyen en el Genero Bacteroides, no pertenecen al Grupo fragilis, ya que no cumplen

con todas las caractersticas que definen el mismo, siendo su situacin taxonmica
incierta y aun esperan por su reclasificacin 3.
B. forsythus, se ha asociado frecuentemente con periodontitis refractaria. Al parecer,
su virulencia est relacionada con la produccin de neuraminidasas y enzimas tripsicas
con especificidad sobre protenas con residuos de arginina 14.
Gnero Fusobacterium
Las bacterias que conforman el Gnero Fusobacterium, se caracterizan por ser bacilos
largos fusiformes, inmviles, no esporulados y generalmente no fermentativos. La
produccin de cido butrico como principal producto metablico permite diferenciar
Fusobacterium de Prevotella, Porphyromonas y Bacteroides 1,3.
Se han descrito varias especies que habitan en el surco gingival en la cavidad bucal,
entre ellas las ms comunes son F. nucleatum, F. naviforme, F. periodonticum, F.
alocis y F. sulci. Estas especies han sido relacionadas con la enfermedad periodontal,
sin embargo, su significacin como patgenos es dudosa, a excepcin de F. nucleatum
9
, especie que se ha sido aislado con mayor frecuencia en el surco gingival. Se han
descrito hasta los momentos cinco subespecies de esta especie bacteriana: F.
nucleatum nucleatum, F. nucleatum polymorphum, F. nucleatum fusiforme, F.
nucleatum vincentii y F. nucleatum animalis. De ellas F. nucleatum nucleatum, es
significativamente frecuente en la periodontitis 3,9,15. Su poder patgeno est asociado
a la presencia de fimbrias, lipopolisacridos, a la produccin de factores solubles
inhibidores de la quimiotaxis de los polimorfonucleares y a la elaboracin de
metabolitos que se comportan como compuestos txicos tisulares 9.
Mecanismos de patogenicidad.
El rasgo sobresaliente de la periodontitis crnica es la destruccin de los tejidos del
soporte del diente. La existencia de placa dental es fundamental en este proceso. La
colonizacin de los tejidos periodontales por especies bacterianas patgenas es el
primer paso para el desarrollo de esta enfermedad. Este proceso destructivo se debe a
la entrada de la bacteria o de sus productos bacterianos a los tejidos periodontales. En
consecuencia, la destruccin periodontal deriva de productos bacterianos que causan
directa o indirectamente dao en los mismos 7, 6.
Lindhe (2000), expresa que todos los tipos de enfermedad periodontal estn asociados
a la presencia de microorganismos patgenos en la placa subgingival, principalmente
por especies Anaerobias Gram Negativas, que colonizan y proliferan en el tejido
periodontal y a la susceptibilidad del hospedero. El resultado de esta interrelacin, en
el caso de la periodontitis, es la formacin de un saco periodontal y una reaccin
inflamatoria del tejido mediada por clulas fagocticas, plasmticas, linfocitos T y B, las
cuales podran daar estructuras del tejido conectivo y el hueso alveolar 17.
Marsh y Martin (2000), sealan que los determinantes de patogenicidad de los
periodontopatgenos comprenden factores que favorecen a una especie bacteriana
para colonizar e invadir el tejido periodontal, y mecanismos que permiten evadir las
defensas del hospedero y causar dao en el tejido periodontal 7.
1. Colonizacin e invasin de los periodontopatgenos en los tejidos:
La adherencia de bacterias a diferentes superficies del medio como placa, dientes y
tejidos, favorecen la colonizacin y posterior invasin de dichas bacterias a los tejidos
periodontales. Las bacterias que colonizan inicialmente el tejido periodontal
probablemente se fijan a la superficie dental, tal es el caso de A. viscosus que se

adhiere mediante fimbrias a protenas ricas en prolina presentes en las superficies

dentales 7,18.
De igual forma, las interacciones entre las especies bacterianas y diferentes superficies
determinadas por molculas especficas, llamadas adhesinas, son importantes en la
colonizacin del tejido periodontal. Socransky (1991), describe las interacciones entre
A. viscosus por medio de fimbrias a un receptor polisacrido de S. sanguis, entre P.
loescheii a travs de fimbrias a residuos de galactosil de S. sanguis y entre F.
nucleatum por medio de protenas de membrana externa a residuos de galactosil de P.
gingivalis que se encuentran en la masa de placa dental 19.
Moore (1991) y Kamma (1995), sealan que la colonizacin de los dientes por
Actinomyces sp. y Streptococcus sp. coagregados con F.nucleatum y otras especies,
producen irritacin de los tejidos, sangramiento y exudado, y a su vez estimula el
crecimiento de especies de Porphyromonas, Prevotella y de otros microorganismos
asociados con la destruccin del tejido, confirmando as el escenario para el desarrollo
de la enfermedad periodontal 20,21. Esta colonizacin podra ser un paso crtico en el
proceso de la invasin bacteriana y en consecuencia, permitir que P. gingivalis, P.
intermedia y F. nucleatum puedan fijarse a otras bacterias, a clulas epiteliales del
tejido, al fibringeno y fibronectina del tejido 22,23.
La invasin por parte de las bacterias o de sus productos metablicos a los tejidos del
periodonto es esencial para el desarrollo de la enfermedad periodontal. Las bacterias
pueden penetrar los tejidos a travs de ulceraciones en el epitelio del surco gingival o
del saco periodontal, por la penetracin directa de las bacterias al interior del tejido
conectivo del hospedero, y mediante la accin de enzimas como las colagenasas,
fibrinolisinas, hialuronidasa, entre otras 24.
Las especies bacterianas identificadas con capacidad para invadir los tejidos se asocian
firmemente con sitios enfermos. Investigaciones realizadas han demostrado la
capacidad de A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis y T. denticola de invadir
directamente las clulas del tejido del hospedero 24,25. Esta capacidad de invasin por
parte de las bacterias, se ha descrito como un como factor clave para distinguir las
especies patgenas Gram Negativas de otras no patgenas 26.
2. Mecanismos de evasin o alteracin de las defensas del hospedero:
La capacidad de las bacterias de adherirse a superficies, no permite que sea
desplazada por secreciones en los tejidos del hospedero, y la invasin por parte de
ellas a las clulas del tejido favorece la alteracin de las barreras naturales de defensa
de los tejidos del hospedero. Otros mecanismos mediante los cuales las bacterias
periodontales pueden evadir las defensas del hospedero se deben a la capacidad de
algunas patgenos de producir proteasas que degradan inmunoglobulinas producidas
por el hospedero, las cuales, operan para facilitar la fagocitosis de las bacterias o para
bloquear la adherencia fijndose a la superficie de la clula bacteriana 9.
Se ha demostrado que P. gingivalis, P. intermedia, P. melaninogenica y
Capnocytophaga, producen proteasas con capacidad de destruir las inmunoglobulinas
(IgA, IgM e IgG), factores del complemento (C3, C4 y C5), y otras protenas
plasmticas importantes en la iniciacin y control de la respuesta inflamatoria como 2 macroglobulina, inhibidor de C1, antitrombina, -2 antiplasmina y plasmingeno.
Asimismo, producen cambios en los polimorfonucleares, degradan protenas
transportadoras de hierro, como albmina haptoglobina, hemopoxina y transferrina
27,28
.

Diversos autores coinciden en sealar que las proteasas bacterianas pueden jugar un
papel crtico en la colonizacin y supervivencia de las bacterias en sitios subgingivales
y posterior progresin de la enfermedad periodontal. Estas enzimas alteran los
mecanismos de defensa del hospedero, degradan las protenas del mismo, incluyendo
componentes del tejido periodontal, sin embargo, aun no se precisa la funcin de las
proteasas bacterianas en la enfermedad, dado que enzimas similares en el medio
periodontal podran provenir de clulas de los tejidos del hospedero 13,29,30.
3. Mecanismos que inducen dao al tejido periodontal del hospedero:
Muchas de las investigaciones sobre los factores de virulencia de los patgenos
periodontales se han enfocado hacia las propiedades de las bacterias relacionadas con
la destruccin de los tejidos del hospedero. Dichas propiedades han sido clasificadas
como las que producen dao directamente a los tejidos y las que estimulan
indirectamente la liberacin de metabolitos biolgicamente activos a partir de las
clulas de los tejidos del hospedero 7.
Estudios realizados sealan que dentro del grupo de Bacilos Aanaerobios Gram
Negativos, P. gingivalis y P. intermedia, junto con otras especies menos patgenas,
producen una variedad de enzimas, tales como hialuronidasas, condroitin sulfatasa,
heparinasa, B-glucosidasa y N-acetilglucosaminidasa, mediante la cual pueden
hidrolizar componentes del tejido, lo que favorece la destruccin del mismo 9.
Es importante sealar la gran actividad colagenoltica que posee P. gingivalis, la cual le
permite degradar el colgeno, principal constituyente de los tejidos gingivales
humanos, favoreciendo as la colonizacin e invasin del microorganismo y posterior
destruccin del tejido. Asimismo, produce ciertas proteasas tiolticas y casenolticas,
conocidas como gingipainas, que contienen cistena y poseen especificidad sobre
protenas que contienen arginina o lisina. Estas proteasas se comportan como
colagenasas que actan, degradando el colgeno, en consecuencia produce dao en el
ligamento periodontal, tejido conectivo del diente y resorcin sea; destruyen los
eritrocitos para la obtencin de hierro; y provocan destruccin de las inmunoglobulinas
y protenas reguladoras de la respuesta inmune 27,29.
Grenier y Turgeon (1994), determinaron la presencia de bacterias proteolticas en
placa subgingival de pacientes adultos con periodontitis. P. gingivalis y P. intermedia,
fueron las especies ms frecuentes aisladas en sacos periodontales en 11 de 13
pacientes estudiados. Otras bacterias proteolticas encontradas fueron
Capnocythophaga sp., Actinomyces sp.,P. acnes y P. micros, las cuales pueden
contribuir significativamente a la actividad proteoltica en los sitios afectados. Los
resultados obtenidos de este estudio demuestran que las proteasas elaboradas por
estas bacterias, no solamente favorecen la progresin de la enfermedad, sino tambin
afectan la integridad del tejido y los mecanismos de defensa del hospedero 13.
Por otra parte, algunos periodontopatgenos producen ciertos metabolitos que
contribuyen con la destruccin del tejido periodontal, tales como: amonaco,
compuestos de sulfuro, cidos grasos, pptidos e indol. Estos metabolitos tambin
pueden inhibir la quimiotaxis leucocitaria, inducir la activacin policlonal de los
linfocitos B, ejercer una accin inhibidora de la proliferacin fibroblstica, e incluso
inducir a las clulas del hospedero a elaborar una procolagenasa, que determinara, en
ausencia de respuesta local del mismo, un fenmeno de autodestruccin 9.
Cabe destacar, que el sistema inmunolgico del individuo es una compleja red de

interacciones entre clulas y molculas reguladoras. Los productos bacterianos pueden

afectar dicho sistema, dando como resultado la inhibicin del mismo. Una interaccin
bien definida abarca la liberacin de interleuquina 1, factor de necrosis tumoral y
prostaglandinas de macrfagos y monocitos expuestos a la endotoxina bacteriana
(lipopolisacrido). Estas citocinas derivadas poseen el potencial de estimular la
reabsorcin sea y activar o inhibir otras clulas inmunitarias 7,9.
Mtodos de identificacin
Durante aos el diagnstico de la enfermedad periodontal se ha basado en las
mediciones clnicas y radiogrficas. Los parmetros de evaluacin como: inflamacin
de los tejidos, profundidad del surco gingival y evidencias radiogrficas de prdida de
hueso alveolar, permanecen como las bases en el diagnstico clnico de la enfermedad
en los pacientes 16.
Sobre la base de que algunos autores definen a la periodontitis como un proceso
infeccioso relacionado con la acumulacin de placa dental, as como tambin con la
presencia de microorganismos patgenos, siendo las bacterias anaerobias las
principalmente involucradas 7,31,32, se han realizado diferentes estudios con el objetivo
de mejorar las tcnicas para cultivar, reconocer y enumerar dichos patgenos. A partir
de 1960, las investigaciones realizadas dieron a conocer la existencia de
microorganismos especficos en la placa subgingival de pacientes con periodontitis,
diferentes a los microorganismos hallados en la placa subgingival de pacientes
periodontalmente sanos 33. Estas investigaciones permitieron la introduccin de
mtodos basados en tcnicas de laboratorio, mucho ms sensibles y especficas, para
la deteccin de patgenos especficos.
El desarrollo de las tcnicas microbiolgicas anaerobias durante los ltimos 30 aos, ha
permitido considerablemente la comprensin de la etiologa de las infecciones
periodontales; se sabe por diversos estudios, que las infecciones son polimicrobianas,
dominadas principalmente por especies de bacilos anaerobios 31. Es por ello, la razn
de utilizar mtodos apropiados con el fin de identificar este limitado nmero de
bacterias especficas que se encuentran en la placa dental subgingival de pacientes con
la enfermedad.
Las pruebas microbiolgicas convencionales para el aislamiento e identificacin de
bacterias periodontopatgenas incluyen, el empleo de medios de cultivos enriquecidos
y pruebas de fermentacin de azcares para la diferenciacin de las especies aisladas.
Estas pruebas son las nicas que permiten detectar un amplio nmero de bacterias, as
como tambin, la sensibilidad de los microorganismos aislados a los antibiticos 1,9,34.
Como medios de cultivos primarios para el aislamiento se recomiendan: Agar Base
Shaeldler, Agar Base Wilkins Chanlgren, Agar Base Columbia, Agar Base Brucella y
Agar Base Tripticasa, suplementados con cido nalidxico y vancomicina, adems de,
sangre, hemina y vitamina K, los cuales favorecen el crecimiento de especies de
Bacteroides, Fusobacterim y Prevotella 3,4,31,34,35. No obstante, debido a la dificultad de
cultivar y recuperar todos los microorganismos periodontopatgenos en los medios de
cultivos, y al tiempo prolongado de las pruebas, aproximadamente de tres semanas
para obtener los resultados; varios investigadores han probado otras tcnicas
microbiolgicas que permiten identificar y cuantificar bacterias especficas en los
diferentes tipos de periodontitis 5,6.
Como alternativa a los medios de cultivo enriquecidos, la microscopa de campo oscuro
es un mtodo sencillo y rpido, que puede emplearse para reconocer morfotipos

bacterianos difciles de cultivar, as como tambin, para determinar la movilidad de

algunas especies bacterianas. Sin embargo, la mayor parte de los periodontopatgenos
como A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis y P. intermedia son bacilos inmviles,
por lo tanto, no pueden detectarse a travs de este mtodo, adems, tampoco permite
diferenciar las diversas especies mviles de Treponema. Por estas razones, las
investigaciones realizadas sealan que este mtodo solo es til para distinguir grupos
bacterianos en pacientes con enfermedad periodontal y periodontalmente sanos o
tratados, y, relacionar la presencia de Treponema sp. con la profundidad de los sacos
periodontales 36,37,38.
Tambin hoy en da, se disponen de sistemas microbioqumicos enzimticos que
permiten la identificacin rpida de especies de bacterias anaerobias a partir de
cultivos puros de muestras de placa subgingival, como: API Zym, API ANADENT, API
20A, Rapid ID 32A 35,39,40,41 y substratos derivados del 4-metiyumbelliferone 42,43,44.
Por otra parte, debido a que la actividad enzimtica proteoltica ha sido considerada un
factor clave en la destruccin del tejido periodontal, Loesche (1986), propuso la
utilizacin de la reaccin BANA (N-benzoilo-D-L-arginina-2-naftilamida), que mide
directamente la actividad de la enzima tripsina en muestras de placa subgingival,
producida por B. forsythus, P. gingivalis, T. denticola y especies de Capnocytophaga .
La actividad de dicha enzima se mide al observar la hidrlisis del sustrato N-benzoiloD-L-arginina-2-naftilamida, que sirve como marcador de riesgo en el desarrollo de la
enfermedad periodontal 45.
Los ensayos inmunolgicos, tambin son usados para la deteccin de
periodontopatgenos especficos. Estos incluyen la utilizacin de anticuerpos
monoclonales dirigidos contra antgenos bacterianos o factores de virulencia, que solo
reaccionan con la especie bacteriana "blanco". Estas pruebas comprenden tcnicas de
inmunofluorescencia directa con substratos fluorognicos 44,46 y de inmunoabsorbencia
ligado a enzimas (Elisa) 47.
Adems de las pruebas microbiolgicas convencionales, enzimticas e inmunolgicas
antes mencionadas, existen otros mtodos para la deteccin de periodontopatgenos a
travs de fragmentos especficos de ADN de las bacterias. Estas pruebas incluyen,
Hibridrizacin de Sondas de ADN 40,,46, 48,49, Anlisis de Endonucleasas de Restriccin de
(AER) y la Reaccin en Cadena de la Polimerasa (RCP) 39,41. Las pruebas que utilizan
fragmentos de ADN para la deteccin de periodontopatgenos, son pruebas rpidas,
sensibles y especficas, en comparacin con la utilizacin de los medios de cultivos, sin
embargo, de acuerdo a la revisin realizada, se encuentran disponibles slo para unos
cuantos patgenos, no permiten conocer la sensibilidad de los microorganismos a los
antibiticos y requieren de equipos muy costosos, por lo que se utilizan principalmente
en laboratorios especializados de investigacin 48.
Estudios recientes en poblaciones humanas, sealan que determinaciones en suero de
ttulos de anticuerpos IgG ante bacterias periodontopatgenas, principalmente P.
gingivalis, sirven de indicadores para: a) el diagnstico de la enfermedad periodontal y
los perodos de destruccin activa del tejido periodontal, b) evaluar la respuesta al
tratamiento y el pronstico de la enfermedad 50,51.
Botero (1995), recomienda como mtodos diagnsticos para detectar la actividad de la
enfermedad periodontal, la deteccin de patgenos periodontales en cultivos
enriquecidos, la determinacin de anticuerpos IgG especficos contra patgenos
periodontales y anlisis de los componentes del fluido gingival crevicular, que contiene

derivados de la placa microbiana subgingival, del fluido intersticial y productos

derivados del hospedero 52.
Por lo anteriormente sealado, actualmente, se disponen junto con las tcnicas
convencionales de cultivo, de pruebas rpidas que permiten detectar bacterias
especficas provenientes de muestras de placas subgingival y sacos periodontales. De
manera general, todas estas pruebas constituyen una herramienta de ayuda en el
diagnstico de la periodontitis, que dependiendo del perfil bacteriano permiten, no slo
diferenciar los tipos de enfermedad, sino tambin, establecer que sitios periodontales
en los pacientes corren ms riesgo de sufrir destruccin activa, as como, la
erradicacin de microorganismos periodontopatognicos a travs de la implementacin
de un tratamiento adecuado.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1.

Holt, J.; Krieg, N.; Sneath, P.; Staley, J.1994: Bergeys Manual of Determinative Bacteriology.
Ninth Edition. Willians&Wilkins. Baltimore, USA.

2.

Shah, H. and Collins, M.1988: Proposal for Reclassification of Bacteroides asaccharolyticus,

Bacteroides gingivalis, and Bacteroides endodontalis in New Genus, Porphyromonas. Int. J. Syst.
Bacteriol. 38 (I): 128-131.

3.

Koneman, E.; Alien, S.; Janda, W.; Schreckenberger, P.; Winn, W. 1999: Diagnstico
Microbiologico.5ta. Edicin. Editorial Medica Panamericana. Buenos Aires, Argentina.

4.

Bartelt, M. 2000: Diagnostic bacteriology. Davis Company. Philadelphia, USA.

5.

Monbelli, A.; Mc Nabb, H.; Lang, N. 1991.a: Black- pigmenting Gram-negative bacteria in
Periodontal Disease. I Topografic distribution in the human dentition J. Periodont. Res. 26: 301307.

6.

Monbelli, A.; Mc Nabb, H.; Lang, N. 1991.b: Black- pigmenting Gram-negative bacteria in
Periodontal Disease. II Screening strategies for detection of P. gingivalis. J. Periodont. Res. 26:
308-313.

7.

Marsh, P.; Martin, M.2000: Oral Microbiology. Fourth edition. Wright. England.

8.

Van WinKelhoff, V.; Van Steenbergen, T. and De Graff, , J.1988: The role of black pigmented
Bacteroides in human oral infections. J. Clin Periodontol. 15:145-155.

9.

Liebana, J. 2002: Microbiologa Oral. 2da. Edicin. Mc Graw-Hill. Interamericana. Espaa.

10. Nakagawa, I.; Amano, A.; Ohara, Y.; Endoh, N.; Morisaki, I.; Kimura, S.; Hamada, S. 2002:
Identification of a new variant of fim A gene of Porphyromonas gingivalis and its distribution in
adults and disabled populations with periodontitis. J. Periodontol. Res. 37:425-432.
11. Shah, H. and Collins, M.1990. Prevotella , a New genus To Include Bacteroides melaninogenicus
and Related Species Formerly Classified in the Genus Bacteroides. Int. J. Syst. Bacteriol. 40 (2):
205-208.
12. Slots, J; Taubma, M. 1992: Comtemporary Oral.Microbiology and Inmunology. 1ed.St. Louis
USA. Editorial Mosby.

13. Grenier, D.; Turgeron, J. 1994: Ocurrence and identity of proteolytic bacteria in adult
periodontitis. J. Periodontol. Res. 29: 365 - 370.
14. Tanner, A Lisgarten , M; Ebersole, J., Strzempko, M. 1986: Bacteroides forsythus sp.nov., a Slow
Growing, Fusiform Bacteroides sp. from hhe Human Oral Cavity.Int. J.Syst. Bacteriol.36(2):213221.
15. Dzink, J.; Shennan, M.; Socransky, S . 1990: Proposal of Three Subspecies of Fusobacterium
nucleatum Knorrr 1992: F. nucleatum subsp. nucleatum, F. nucleatum subsp. polymorphum, F.
nucleatum subsp. vincentii. Int. J.Syst. Bacteriol. 40(1):74-78.
16. Carranza, F.; Newman, M. 1997: Periodontologa Clnica. 8va. Edicin. Ediciones Mc Graw- Hill
Interamericana. Mexico.
17. Lindhe, J. 2000: Is Periodontitis a unique disease entity. J.Clin.Periodontol. Suppl.1.27:11
18. Mergenhagen, S.; Sandberg, A.; Chassy, B. 1987: Molecular basis of bacterial adhesion in the oral
cavity. Rev.Infect. Dis.9:S467.
19. Socransky, S.; Haffajee, A. 1991: Microbial mechanisms in the patogenesis of destructive
periodontal disease..J. Periodontol. Res.26:195.
20. Moore, W.; Ranney, R.; Smibert, R., Burmeister, J., and Schenkein, H. 1991: The microflora of
periodontal sites showing active destructive progression. J. Clin. Periodontol. 18: 729-739.
21. Kamma, J.; Nakou, M.; Manti, F. 1995: Predominant microflora of severe, moderate and minimal
periodontal lesions in young adults with rapidly progressive periodontitis. J. Periodontol. Res. 30:
66-72.
22. Kinder, S; Holt, 1991:Carbohidrate receptor on Porphyromonas gingivalismediating coaggregation
with Fusobacterium nucleatum. J.Des.Res. 70:275.
23. Yamaguchi, T; Kasamo, K.; Chuman,M; Machisgashira, Minoue, M.; Sueda, T. 1998: Preparation
and characterization of an A.naeslundii aggregation factor that mediates coaggregation with
P.gingivalis. J. Periodontol. Res. 33: 460-468.
24. Meyer, D.; Sandberg, A.; Fives, T. 1991: Evidence of invasion of human oral cell line by
Actinobacillus actinomycetemscomitans. Infect.Immun. 59:2719.
25. Wang, B; Holt,S. 1993: Interacction of Treponema denticola. J.dent .Res. 72:324.
26. Loesche, W.1993: Bacterial mediators in periodontal disease. Clin .Infect. Dis. 16 (S4):203.
27. Gron, H.; Pike, R.; Potempa, J.; Travis, J.; Thogersen, I.; Enghild, J.; Pizzo, S.1997: The potencial
role of macroglobulin in the control of cisteine proteinases (gingipains) from Porphyromonas
gingivalis. J. Periodont. Res.32:61-68.
28. Preshaw, P.; Schifferle, R.; Walters, J. 1999: Porphyromonas gingivalis lipopolysacaride delays
human polymorphonuclear leukocyte apoptosas in vitro. J. Periodontal Res.34:197-202.
29. Curtis, M.1997: Analysis of the protease and adhesin domains of the PrpRI of Porphyromonas
gingivalis. J. Periodont. Res. 32: 133 - 139.

30. Gharbia, S. and Shah, H. 1994 Hidrolitic enzymes liberated by BlacK Pigmented Gram negatives
anaerobes . Immunol. Med. Microbiol. 6: 139 - 146.
31. Dahln, G. 1993: Role of Suspected Periodontopathogens in Microbiological Monitoring of
Periodontitis. Adv. Dent. Res. 7(2): 63- 164.
32. Listgarten, M., Wong, M.; Lai, C. 1995: Deteccion of Actinobacillus actinomicetemcomitans,
Porphyromonas gingivalis, and Bacteroides forsytus in positive Patient Population. J. Periodontol.
66: 58 - 164.
33. Loesche, W. 1976: Chemotherapy of dental plaqueinfections. Oral. Sci.Rev. 9:65.
34. Summanen, P.; Baron, B.; Citron, D.; Strong, C.; Wexler, H.; Finegold, S.1993: Wadsworth
Anaerobic Bacteriology Manual. Fifth Edition, Star Publishing, Belmont, California.
35. Timmerman, M.; Van der Weijden, G.; Arief, E.; Armand, S.; Abbas, F.; Winkel, E.; Van
Winkelhoff, A.; Van der Velden, U. 2001. Untreated periodontal disease in Indonesian
Adolescents. Subgingival microbiota in relation to experienced progression of periodontitis. J.
Clin Periodontol. 28: 617-627.
36. Listgarten,M.; Helldn, L.1978: Relative distribution of bacteria at clinically healthy and
periodontally disease sites in humans. J.Clin.Periodontol. 5:115-132.
37. Offenbacher, S.; Odle, B and van Dike, T. 1985: The microbial morphotypes associated with
periodontal health and adult periodontitis: composition and distribution. J.Clin. Periodontol.
12:736-749.
38. Loesche, W.; Lopatin, D.;, Stoll, J.; Van Poperin N.; Hujoel, P.1992: Comparison of various
detection methods for periodontopathic bacteria: Can culture be considered the primary reference
standard. J.Clin.Microbiol.30: 418-426.
39. Riggio, M.; Macfarlane, T.; Mackenzie, D.; Lennon, A. Smith, A.; Kinane, D.: 1996.
Comparacin of polymerase chain reaction and culture methods of Actinobacillus
actinomycetemcomitans and Porphyromonas gingivalis in subgingival plaque samples. J.
Periodontal Res. 31:496- 501.
40. Ali, R.; Johnnessen, A., Dahlen, G.; Socransky, S.; Skaug, N. 1997: Comparison of the
subgingival microbiota of periodontally haalthy and diseased adults in Northern Cameroon. J. Clin
Periodontol. 24: 830-835.
41. Teanpaisan, R; Douglas, C., Nittayananta, W. T.2001: Isolation and genotyping of pigmented
anaerobes from periodontal sites of HIV positive and noninfected sujects in Thailand. J. Clin.
Periodont 28:311-318.
42. Moncla, B; Brahan, P; Rabe, L; Hillier, S. 1991: Rapid Presuntive Identification of Black
Pigmented Gram-negative Anaerobic Bacteria by Using 4- Methylumbeeuferine. Derivates.
JClin.Microbiol. 29 (9):1955 -1958.
43. Fernndez, L.; Orduna, M.; Bianchini, H.; Smayevsky, J.1995: Presuntive identification of Gram
negative anaerobic rods (BNA) using 4-methylumbelliferone-derivate in Bacteroides fragilis
group (BFG) and pigmented rods. World Congress on Anaerobic Bacteria and Infections,
Resumen 9.15, p. 153, San Juan, Puerto Rico.

44. Maiden, M.; Tanner, A. and Maucuh., P. 1996: Rapid Characterization of Periodontal Bacterial
Isolates by Usig Fluorogenic Substrate Test. J. Clin Microbiol. 34 (2):376-384.
45. Loesche, W. 1986: The identification with bacteria associated with periodontal disease and dental
caries by enzimatic methods. Oral Microbiology and Inmunology. 1:65-70.
46. Tanner, A.; Maiden , M.; Zambon, J.; Thoren, G.; Kent, R. 1998: Rapid chair side DNA probe
assay of Bacteroides forsythus and Porphyromonas gingivalis. J Periodont.Res. 33: 105-117.
47. Tanaca, S.; Murakami, Y.; Ogiwara, T.; Shoji, M.; Seto, K.; Nagasaki, M.; Fujisawa, S. 2002:
Frequency of Reactivity for Porphyromonas gingivalis and Prevotella spp in Supra and
Subgingival Plaques and Periodontal Clinical parameters According to Subject Age. J.
Periodontol. 73:877-885.
48. Kojima, T; Yasui, S.; Ishikawa, I. 1993: Distribucin of Porphyromonas gingivalis in Adult
Periodontitis Patients. J. Periodontol. 64 (12): 1231-1237.
49. Komiya, A.; Kato, T.; Nakanagua, T.; Saito,A.; Takahashi, J.; Yamada, S.; and Okuda, K. 2000: A
rapid DNA Probe Method for Detection of Porphyromonas gingivalis and Actinobacillus
actinomycetemcomitans. J. Periodontol. 5(71):760-767.
50. Furuichi, Y.; Ito, H.; Izumi, Y.; matsuyama, T.; Yotsumoto, Y.; Mishige, Y.; Kojima, M.;
Yamashia, K.; Inoue, M. 2001: Periodontal status and serum antibody titers for Porphyromonas
gingivalis fimbriae in a rural population in Japan. J. Clin. Periodontol. 28: 264-269.
51. Craig, R.; Boylan, R.; Yip, J.; Mijares, D.; Iman, M.; Socransky, S.; Taubman, M.; Haffajee, A.
2002: Serum IgG antibody response to periodontal pathogens in minority populations:
relationsship to periodontal disease status and progression. J. Periodont. Res. 37:132-146.
52. Botero, L.; Alvear, F.; Echeverri, H.1995: Factores de riesgo en enfermedad periodontal. Rev. Fac.
Odont. Univ. Ant. 7 (1): 51-59.