Estudios de toxicidad crnica y Subcrnica

Introduccin
Los organismos estn ms frecuentemente expuestos por periodos prolongados
en un espacio a dosis ms bajas de las letales pero que, ejercen una toxicidad a
largo plazo, por lo que es necesario llevar a cabo estudios que recreen estas
condiciones, con estudios a corto plazo (subagudo y subcrnico) y largo plazo
(crnico). Generalmente los estudios subagudos duran 2 a 4 semanas y dan una
directriz para el rango de dosis que se puede usar en los estudios subcrnicos,
que duran 90 das o ms, como lo descrito en (Wouterson et al, 1984) donde se
realiza una comparacin entre los niveles de efecto mnimo y sin efecto
observable en ratas expuestas a 82 compuestos va oral.
Los objetivos de los estudios son examinar la toxicidad a nivel celular, determinar
la variacin de la respuesta entre especies a repetidas exposiciones, demostrar
los efectos acumulativos, observar los cambios fsicos, morfolgicos y funcionales
de los rganos afectados y predecir la dosis en las que se presentaran efectos
adversos a la salud en el humano.
Diseo experimental
Es importante sealar que la duracin de los estudios, crnico a aguda, depende
de la esperanza de vida de la especie usada, y se deben ajustar dichos tiempos
segn esta. Para las ratas, la esperanza de vida es de dos aos por lo que un
estudio crnico debera durar dos aos, sin embargo la duracin de los estudios
es variable de acuerdo a las agencias reguladoras y el objetivo del estudio, como
el caso de la carcinognesis, que es estudiada con el estudio crnico y se
manipula la dieta de los animales para que vivan un periodo de tiempo ms
prolongado.
A. Niveles de dosificacin del agente probado
El rango de dosis usada depende del objetivo toxicolgico del estudio, es decir la
presencia o ausencia de un efecto y la obtencin de datos para construir una
curva dosis-respuesta significativa. Las guas actuales establecen el uso de 3

dosis, adems del control porque la relacin no es linear y estos tres puntos
podran dar una idea de la pendiente de la curva. Los estudios agudos dan una
idea de cmo es la farmacocintica de la sustancia, considerando que es
equivalente a la del humano, y puede ser usada como punto de partida para la
seleccin de la dosis, generalmente debajo de la DL50. Sin embargo no hay un
solo criterio para la determinacin del rango de dosis, por lo que se debe realizar
estudios preliminares de dosis repetidas para validar la eleccin de dichas dosis.
Para los estudios de carcinognesis, los estudios de 90 das o 104 das pueden
dar como resultado la dosis mxima tolerada.
B. Nmero de animales
Se debe tomar en cuenta un nmero adecuado de animales para la estimacin de
la toxicidad potencial del agente probado, como se menciona en Zbiden (1973)
para detectar los efectos txicos que ocurren al 0.01% de la poblacin es
necesario utilizar casi 3000 animales, la probabilidad se mejor usando un rango de
dosis pero no es suficiente, generalmente usar ms de 10 animales por grupo no
es adecuado y no mejor la estimacin estadstica. Los animales deben ser
eutanizados cuando presentan caquexia con enfermedades bacterianas o virales,
anorexia, debilitamiento de las funciones de los rganos y dolor. Cada caso debe
estar bien documentado, y pueden dar una idea de lo que puede pasar en los
dems animales que no eran tan susceptibles, a dosis ms altas. El diseo
experimental que incluye las 3 dosis y el grupo control requiere 200 animales entre
machos y hembras y de los cuales se elegirn subgrupos que se eutanizaran a los
30, 60 y 90 dias despus de la administracin para observar cambios fisiolgicos,
morfolgicos y bioqumicos en los rganos y tejidos. Al trmino del tratamiento,
algunos animales deben sobrevivir para observar la reversibilidad de los efectos
txicos, y de igual manera se escoger al azar un subgrupo y se eutanizar para
estudiarlo. Se consideran 5 individuos para eutanizar. Dado que los animales
vivirn un tiempo prolongado, se debe asegurar que los efectos observados sean
por el txico y no por condiciones de almacenamiento, por lo que deben estar en
un ambiente limpio, bien identificados en cada caja, y todas las condiciones

controladas en las que deben encontrarse. Periodicamente se obtendrn muestras

de sangre, orina y materia fecal para analizarse.
C. Parmetros medidos durante el estudio
Un importante aspecto de los estudios crnicos y subcrnicos es la observacin
diaria de los animales, cualquier cambio en el comportamiento, el aspecto fsico,
irritabilidad, etc., si las condiciones son las adecuadas, debe tomarse como
efectos provocados por el agente. Los parmetros bioqumicos, fisiolgicos y
morfolgicos no solo se miden para detectar toxicidad en el rgano diana, sino
tambin para prever efectos txicos. Un parmetro importante que hay que tomar
en cuenta es el peso de los animales, medido dos veces por semana y graficado
durante el periodo del tratamiento y puede dar una idea de cmo el txico modifica
la ingesta de alimento o agua y si la variacin de peso depende de la dosis
administrada. Como en el estudio de (Borzelleca et al, 1989) se prob el efecto
carcinognico de dos sustancias usadas en la industria como colorantes en la
industria alimenticia, se observ el cambio de peso durante todo el ciclo de vida de
las ratas y se lleg a la conclusin de que no se haba producido efectos
carcinognicos por las sustancias, pero si por el envejecimiento de los animales,
sobre todo al final del tratamiento, donde se observa un marcado descenso del
peso, por lo que es importante descartar el efecto geritrico natural de la especie
de los efectos medidos durante el estudio.
Los parmetros bioqumicos estn enfocados a determinar daos a nivel celular,
ya que al incrementarse valores en sangre de algunas enzimas en sangre, como
el caso de la ALT y AST, significa que hay una alteracin en el rgano diana, en
este caso del hgado, ya que al daarse los hepatocitos, liberan estas enzimas y
llegan al torrente sanguneo. Otro parmetro que se mide, pero en orina es la
medicin de los niveles de creatinina, esto con el fin de comprobar si hay toxicidad
renal pero a nivel de reabsorcin tubular. Al final de la prueba, en la necropsia, se
pesa cada rgano y se miden, de cada uno se toma una muestra de tejido que
ser analizada con microscopia electrnica e incluso siendo marcada con
biomarcadores celulares y subcelulares siempre comparando con el grupo control.

D. Duracin del estudio

La duracin de los estudios subcrnicos es de aproximadamente el 10% de la
esperanza de vida de la especie, para la rata es aproximadamente de 21 a 90
das. Sin embargo para los estudios crnicos se ha ido disminuyendo la duracin,
de dos aos a 1 ao, y ms recientemente de 6 a 12 meses, para estudios de
carcinognesis se requiere 12 meses y los estudios en no roedores duran tambin
1 ao, sin embargo existe controversia ya que varias cientficos mencionan que el
efecto observado en el primer ao de tratamiento no es diferente al observado en
el segundo ao, adems el deterioro normal de la funcin de los rganos decae en
el periodo geritrico del animal, lo que conduce a efectos ms evidentes. Sin
embargo, los estudios a corto plazo no pueden sustituir a los estudios a largo
plazo, como en el trabajo de (Woutersen et al, 1984) en el que se estudi la
toxicidad subaguda y subcrnica de 82 compuestos y mostr que el nivel de
efectos no observables (NOEL) era ms bajo en los estudios subcrnicos que en
los subagudos para el 44%. El estudio de (Parkinson et al, 1995) muestra que no
se obtiene informacin relevante de realizar estudios crnicos en perros por 1 ao
para 117 compuestos, por lo que solo para los estudios se aceptan 6 meses
aunque la FDA an requiere 12 meses.
III. Evaluacin de los resultados
Una serie de curvas dosis respuestas son generadas a partir de los resultados
obtenidos, de las cuales se calculan las pendientes para diferentes puntos y se
calcula la dosis por periodo de tiempo que ejerce efectos txicos. Si las dosis
fueron elegidas correctamente, la dosis alta debe ejercer un efecto txico franco o
FEL, la dosis intermedia debera ejercer efectos menores o nivel ms bajo de
efectos adversos observados (LOAEL) una dosis menor debera ejercer el efecto
ms bajo observable (LOEL) o es posible que ya no se observe efectos, entonces
se le conoce como nivel sin efectos adversos observables o NOAEL y NOEL el
nivel sin efectos observables. Estos parmetros son fundamentales para
determinar la dosis mxima a la que se puede exponer un individuo durante un
periodo de tiempo.

Bibliografa

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