Clase 1

MICROBIOLOGA
Microbiologa 1
II Ctedra
Facultad de Medicina (UBA)

BACTERIOLOGA

BACTERIAS
Microorganismos unicelulares que presentan un tamao
de algunos m de largo y diversas formas
Son procariontes y por lo tanto no tienen ncleo, ni
organelas citoplasmticas

Poseen una pared compuesta de peptidoglicano

Muchas de ellas poseen flagelos u otro sistema de
desplazamiento y son mviles
Son organismos de vida libre (excepto Chlamydia y
Rickettsia)
Se dividen por fisin binaria

Diferencias entre Procariontes y Eucariontes

CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS

Fenotpica: (propiedades reales y expresadas)
morfologa microscpica, morfologa macroscpica,
biotipo, serotipo, antibiograma.

Genotpica: (propiedades potenciales) hibridacin

ADN, anlisis de secuencias de nucletidos, anlisis
plsmidos, anlisis fragmentos de ADN
cromosmico.
Analtica: anlisis pared celular, lpidos pared,
protenas de sostn, enzimas celulares.

TAXONOMA Y NOMENCLATURA
BACTERIANAS
Taxonoma = Clasificar
Criterios genticos:
- Homologa ADN
- Homologa ARN
ribosmico de
subunidad 16S

Nomenclatura = Poner nombre

Criterios muy diversos
Primera palabra hace referencia
al Gnero (maysculas)
Segunda palabra hace referencia
a la especie (minsculas)
Se escriben siempre en cursiva
o subrayado (Ej.: Staphylococcus
aureus)

MORFOLOGA BACTERIANA

ULTRAESTRUCTURA BACTERIANA
Estructuras citoplasmticas: ADN cromosmico, ARNm,
ribosomas y metabolitos.

Envoltura Celular:
Cpsula, matriz exopolisacarida
Membrana Externa (solo Gram -)
Pared Celular
Espacio Periplasmico (solo Gram -)
Membrana Citoplasmtica

Otras estructuras: Flagelos, Pili, Fimbrias

RECORDAR!

Cromosoma Bacteriano: ADN doble cadena circular y superenrrollado que

se encuentra en el nucleiode.
Tiene funcin de replicacin, recombinacin y expresin de genes.

COMPARACIN ENTRE LAS ENVOLTURAS DE Gram + y Gram -

LTA = Acido Lipoteicoico

Formas Bacterianas libres de pared

Cuando las bacterias se tratan
1) con enzimas lticas que degradan la pared celular, por
ejemplo: lisozima, o
2) con antibiticos que interfieren con la biosntesis de
peptidoglicanos,
se producen bacterias libres de pared celular.
Generalmente estos tratamientos generan organismos no
viables, pero que son tiles en la experimentacin in vitro.
A las bacterias libres de pared que no pueden replicar se les
llama esferoplastos (cuando la membrana externa an esta
presente) o protoplastos (si la membrana externa ya no est
presente). Ocasionalmente estos tratamientos generan
formas de bacterias libres de pared que pueden replicar (las
formas L).

RECORDAR
Las estructuras bacterianas pueden ser
proteicas, hidrocarbonadas o lipdicas, o
combinadas.
Recordar cul es la estructura
bioqumica permite entender su
antigenicidad y su resistencia al calor

BLANCO DE ACCION
DE LOS ANTIBIOTICOS

MECANISMOS DE RESISTENCIA
ANTIBITICA

Inhibicin enzimtica
Alteracin del blanco ribosomal
Modificacin de la permeabilidad de la pared
Extraccin del antibitico
Alteracin de los sistemas de transporte
Modificacin de los precursores de la pared
Mutacin de las enzimas
Cambio de la estructura de las protenas blanco

Es posible terminar con las

enfermedades infecciosas?
La era antibitica moderna se inici hace ms de 60 aos
con el descubrimiento de la penicilina y otras sustancias
similares, capaces de eliminar las bacterias.

Tras los primeros y extraordinarios resultados, la

humanidad concibi la idea de eliminar las enfermedades
infecciosas
Sin embargo, hoy en da, dicha meta sigue siendo una
aspiracin difcil de alcanzar e incluso poco probable a la
luz de las sorprendentes estrategias desarrolladas por las
bacterias para sobrevivir y hacerse resistentes a la accin
de un gran nmero de compuestos antibacterianos.

Es posible terminar con las

enfermedades infecciosas?
Mayor rapidez la aparicin de cepas poco o nada sensibles, incluso
a los compuestos de ltima generacin, como vancomicina.
Los primeros reportes de resistencia fueron publicados, casi
simultneamente en 1940, por varios grupos de investigadores
independientes.
Para 1947, un alto porcentaje de las cepas de estafilococos
aisladas en los hospitales de Estados Unidos y varios pases
europeos eran insensibles a penicilina G.
La respuesta de la comunidad cientfica al surgimiento de
grmenes resistentes, fue la acelerada produccin y utilizacin de
nuevos frmacos.

Bases genticas de la
resistencia bacteriana
Segn la teora de la seleccin
natural, la variabilidad gentica de
los organismos vivientes es
esencial para su evolucin y en el
caso de las bacterias, este
fenmeno es el resultado de tres
mecanismos
las mutaciones puntuales
los cambios estructurales en el
material gentico
la adquisicin de fragmentos de
ADN procedentes de otras
bacterias.

GENETICA
BACTERIANA

 Clon: conjunto de bacterias que derivan de un ancestro

en comn, como resultado de una misma cadena de
replicacin.

Especie bacteriana: circunscribe un grupo

genticamente similar de cepas individuales (una
especie bacteriana se compone de diferentes clones).

Variacin Gentica
Fenotpicas:
modificacin
de
una
o
varias
caractersticas como respuesta a estmulos presentes
en el medio ambiente (mecanismo de adaptacin).
Genotpicas:
variacin
del
material
gentico
(mutaciones).

Mecanismos de regulacin de la expresin

de genes
Regulacin por reordenamiento: amplificacin, variacin
de fase, variacin antignica.
Regulacin transcripcional: activacin y represin de
genes.
Regulacin post transcripcional: modificacin que hace
activa una molcula inactivada. Por ejemplo: activacin
por proteolisis de protenas.

Recombinacin Homloga
Se produce entre secuencias de ADN estrechamente
relacionadas y que en general se sustituye una secuencia
por otra.

Divisin Celular

Plsmidos
ADN circular extracromosomal, que se replica de forma
autnoma con respecto al cromosoma bacteriano.
Su funcin es contener informacin para la adaptacin de
la bacteria al medio y para su evolucin (Ej: resistencia a
ATB)

Transposones: segmentos

de ADN con capacidad de

movilizarse de forma
autnoma en el genoma y que
contiene genes estructurales
(Ej: factores de virulencia y
para adaptacin al medio).
Mutan y se integran a
cromosomas o plasmidos.

Las bacterias pueden

intercambiar material gentico
mediante tres mecanismos:

Transformacin (DNA desnudo)

Conjugacin (Contacto bacteriano)

Transduccin (Bacterifago)

TRANSFORMACIN

CONJUGACIN

Bacterifagos

Conocidos tambin como "fagos", son parsitos

intracelulares (virus) de bacterias.
Estn constituidos por DNA o RNA y protenas. Si lisan a
la bacteria infectada se habla de una infeccin ltica; si se
integran al genoma bacteriano y se encuentran en estado
quiescente (profagos con el potencial de producir fagos)
se habla de una bacteria en estado lisognico.

TRANSDUCCION

RELACIN HUSPED BACTERIA

CONCEPTOS BSICOS SOBRE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS

MODO DE ENTRADA DE LOS ORGANISMOS

EN UN HUESPED
Mucosas
Piel

Va Parenteral

Entrada, Transmisin y Salida

Entrada, Transmisin y Salida

Flora normal y patgena

Los patgenos se pueden clasificar en:

Primarios: producen enfermedad en individuo sano

Oportunistas: necesitan de una condicin predisponente
Componentes flora normal del husped

Patogenicidad Bacteriana
Adherencia
adhesinas o ligandos que se fijan especificamente a
receptores de superficie.
fimbrias

Mecanismos de evasin de las defensas del

husped
Mecanismos de los patgenos bacterianos
para daar las clulas husped

Patogenicidad Bacteriana
Mecanismos de evasin de las defensas del husped
Cpsulas: resiste las defensas del husped porque altera la
fagocitosis.
Componentes de la pared celular: ej. protena M en Streptococcus
pyogenes contribuye a resistencia bacteriana a la fagocitosis leucocitaria.

Enzimas: exoenzimas
coagulasas : coagulan el fibringeno en la sangre.
quinasas: degradan la fibrina (fibrolisina)
hialuronidasa: hidrolizan el cido hialurnico (polisacrido que une clulas del tejido
conectivo).
colagenasa: degrada el colgeno del tejido conectivo de los msculos.
IgA (algunos patgenos producen IgA proteasa)

Variacin antignica
Penetracin del citoesqueleto de la clula husped

Invasinas,
modifican los filamentos de actina cercanos al citoesqueleto celular (usan tambin una
glucoprotena cadherina como puente entre clulas)

Patogenicidad Bacteriana
Mecanismos de Dao de las clulas del husped

Utilizacin de los nutrientes del husped: Siderforos

Dao directo en la cercana inmediata de la invasin

Produccin de toxinas
Induccin de reacciones de hipersensibilidad

Factores: toxinas, exoezimas

Producidos por la bacteria

Evasin

DAO

Signos y sntomas

Producidos por el husped

Inflamacin

ENFERMEDAD

Hipersensibilidad
Autoinmunidad

Infeccin vs. Enfermedad Infecciosa

FISIOLOGA
BACTERIANA

Requerimientos nutritivos
Macronutrientes:
Carbono, Nitrgeno, Fsforo, Azufre,
Potasio, Magnesio, Hierro, Agua

Micronutrientes:
Cobalto, Zinc, Cobre, Manganeso
Factores de crecimiento:
Aminocidos, Vitaminas y Bases
nitrogenadas

GRUPOS NUTRICIONALES
Grupo
nutricional

Fuente de
carbono

Fuente de
energa

Fotoauttrofos

CO2

Luz

Fotohetertrofos

Compuesto
orgnico

Luz

Sales
Quimioauttrofos
CO2
inorgnicas
Compuesto Compuesto
Quimiohetertrofos
orgnico
orgnico

TIPOS DE REACCIONES METABLICAS

Reacciones energticas

Reacciones de biosntesis
Reacciones de polimerizacin
Reacciones de ensamblaje

REACCIONES ENERGTICAS:
FASES
Digestin extracelular
Paso a travs de la envoltura:
Difusin simple
Difusin facilitada
Transporte activo

Degradacin y obtencin de energa

REACCIONES ENERGTICAS
Va glucoltica de Embder
Meyerhof
Va pentosa fosfato
Ciclo de Krebs

Va de Entner Doudoroff

REACCIONES ENERGTICAS
Fermentacin:
Aceptor final de e- compuesto orgnico
1 glucosa/2 ATP

Respiracin:
Aceptor final de e- compuesto inorgnico
1 glucosa/38 ATP

Produccin
Catalasa
Superoxido
Aerobio Anaerobio dismutasa
(SOD)
Crecimiento

Tipo de
bacteria
Aerobia
estricta
Anaerobia
estricta

Va
metablica

Respiracin

Fermentacin

Facultativo

Respiracin/
Fermentacin

Indiferente/
Aerotolerante

Fermentacin

Microaerfilo

(+)

(+)

Fermentacin

REACCIONES DE BIOSNTESIS
Formacin de elementos estructurales:
cidos grasos
Azcares
Aminocidos
Nucletidos

REACCIONES DE POLIMERIZACIN Y
ENSAMBLAJE
Formacin de macromolculas:
ADN, ARN, protenas,
peptidoglicano, fosfolpidos,
LPS
Formacin de las distintas
estructuras celulares

REGULACIN DEL METABOLISMO

Regulacin de la actividad
enzimtica
Regulacin de la sntesis
enzimtica:
Represin
Induccin

Supervivencia Bacteriana:
por procesos de esporulacin,
motilidad y quimiotaxis

ESPORAS
Ms pequeas que
clula vegetativa
Metabolismo
limitado
No se reproducen
Ms resistentes a la
accin de agentes
fsicos y qumicos

ESPORULACIN
Bacteria

Septacin

vegetativa

asimtrica

ENDOCITOSIS

FORMACIN DE
LA ENDOSPORA

Lisis clular.
Liberacin de
la espora

Sntesis de
la cubierta

Formacin del
cortex

CRECIMIENTO BACTERIANO:
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
Segn su estado fsico:
- Lquidos o caldos
- Slidos (Agar al 1.5-2%)
- Semislidos

Segn crecimiento que permitan:

-

Enriquecidos
De enriquecimiento
Selectivos
Diferenciales

CRECIMIENTO BACTERIANO:
FACTORES
1.
2.
3.
4.

Temperatura
pH
Medio de cultivo
Inculo

TEMPERATURA

pH

A. Acidfilos
B. Neutrfilos
C. Alcalfilos

ESTUDIO CUALITATIVO DEL

CRECIMIENTO BACTERIANO
Medios lquidos:
Turbidez

Medios slidos:
Colonias

COLONIAS BACTERIANAS. TIPOS

Forma
Superficie

Bordes

CIRCULAR

IRREGULAR

CONVEXA

REDONDEADO ONDULADO

FILAMENTOSA

RIZOIDE

PLANA UMBILICADA CRATERIFORME

FILAMENTOSO

ESPICULADO

LOBULADO

1: alfa-hemlisis
Colonias aisladas

alfa-hemlisis

Cultivo cofluente

2: beta-hemlisis
Colonias aisladas

beta-hemlisis

DIAGNOSTICO
BACTERIOLOGICO

Para realizar un diagnostico microbiolgico, se

deben seguir secuencialmente los siguientes pasos:
1- Toma de muestra
2- Microscopa
3- Aislamiento en cultivo del agente etiolgico
4- Identificacin
5- Prueba de sensibilidad a los ATB

TOMA DE MUESTRA
Muestra directa: se extrae directamente del rgano o
cavidad infectada. Son sitios que en condiciones
normales son estriles como pulmn, LCR, pleura.

Muestra indirecta: orina, esputo, que se emiten de

manera espontnea y que atraviesan una regin que
contiene flora normal.

Muestra en sitios con flora normal: intestino y

faringe. Se investigan bacterias que normalmente no se
encuentran en personas sanas. Ej: Salmonella, Shigella,
S.pyogenes.
Seleccionar medio de transporte
adecuado y conservacin de la muestra !!!

MICROSCOPIA
Observacin en fresco
Extendidos Teidos
Tincin de Gram
Tincin de Ziehl Neelsen

Microscopio de fluorescencia
Microscopio de contraste de fase
Microscopio de campo oscuro

Tincin de Gram

Tincin de Ziehl Neelsen

Microscopia de contraste de fase

Microscopia de Fluorescencia

Microscopia de campo oscuro

CULTIVO
Medios slidos (agar)
Medios lquidos (caldos)
El objetivo es recuperar y aislar el microorganismo
responsable de la patogenia
Tener en cuenta los siguientes parmetros:
temperatura, pH, Oxigeno

Identificacin por pruebas bioqumicas

Consiste en bateras de pruebas bioqumicas que determinan la
capacidad de un aislamiento bacteriano de utilizar determinados
sustrato, de producir un metabolito particular, de fermentar azucares,
descarboxilar, hidrolizar o desaminar aminocidos

Prueba de oxidasa
Prueba de catalasa
Prueba de manitol
Reaccin de CAMP
Prueba de ureasa
Prueba de coagulasa

Identificacin por pruebas serolgicas

Consiste en detectar antgenos especificos de las
bacterias
Permiten diferenciar entre especies microbianas y entre cepas
dentro de una misma especie
Cepas con diferentes antgenos se denominan SEROTIPOS,
SEROVARIEDADES (serovares) o BIOVARIEDADES (biovares)
Se puede detectar por ELISA, Aglutinacin, Western Blot

Identificacin por Fagotipia

Consiste en enfrentar la bacteria aislada a
diferentes bacterifagos
Se producen reas de lisis

Perfiles de cidos grasos

Citometria de flujo
Composicin de bases del ADN
Huellas del ADN (Fingerprint) Microbiologa forense
PCR
RFLP (polimorfismo de longitud de fragmentos de restriccion)
Hibridacin del acido nucleico (Southern Blot)
Micromatrices (chips) del ADN
Ribotipificacion y secuenciacin del ARN ribosmico (rRNA)
Hibridacin fluorescente in situ (FISH)
Claves dicotmicas
Cladogramas
Bioinformatica

Pruebas de sensibilidad a ATB

(Antibiograma)
Mtodos de difusin en agar (Mtodo Kirby Bauer)
(Cualitativo)

Mtodos de dilucin de antimicrobiano

(cuantitativo)
Concentracin Inhibitoria Minima (CIM): minima
concentracin de ATB que inhibe el crecimiento bacteriano

Concentracin Bactericida Minima (CBM): minima

concentracin de ATB para eliminar el 99.9% de bacterias en
24hs.

Kirby Bauer

CIM

SEROLOGIA
La serologa nos permite determinar el ttulo de
anticuerpos presentes en el suero del paciente
Se emplea generalmente cuando:
El agente etiolgico no es cultivable
Requiere cultivos especficos no disponibles en la
mayora de los laboratorios
El paciente se encuentra en una etapa de la infeccin en
la cual el agente etiolgico no es viable.