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Monosacridos:
La forma ms bsica o simple de un carbohidrato es el monosacrido. La frmula
emprica de un monosacrido es (CH2O)n donde n es un valor entre 3 y 9.
El alto nmero de grupos hidroxilos (OH) presentes en los monosacridos hace
que la mayora de ellos sea soluble en agua. Los monosacridos dentro de un
espcimen de tejido se pierden durante la fijacin y el procesamiento, debido al
pequeo tamao y a la solubilidad de estas molculas.
Las propiedades o caractersticas de los polisacridos y los glicoconjudados estn
determinadas en gran parte por el tipo de monosacridos que constituyen estas
molculas, as como diversos grupos reactivos dentro de los monosacridos.
Polisacridos:
Un polisacrido es una larga macromolcula compuesta por mltiples
monosacridos unidos por enlaces covalentes conocidos como enlaces
glicosdicos.
El enlace glicosdicos alfa1-4 (tambin existe el enlace glicosdicos alfa1-6) es el
predominante entre los polisacridos glicgeno y almidn. Adems algunas de las
unidades de glucosa de esos polisacridos pueden participar en ms de un enlace
glicosdico, formando de esta manera un tipo de ramificacin de la estructura.
El glicgeno sirve como una forma importante de las reservas de energa
almacenadas en humanos. Los carbohidratos absorbidos despus de una comida
se convierten en glicgeno por los hepatocitos del hgado. El glicgeno ocupa un
volumen importante en el citoplasma de los hepatocitos e incluso pueden formar
inclusiones intranucleares. Clulas de musculo esqueltico y cardiaco tambin
almacenan importantes cantidades de glicgeno.
Hay una serie de procesos de la enfermedad o condiciones patolgicas en donde
la evaluacin histoqumica del contenido o acumulacin de glicgeno puede ser de
valor diagnostico (PNET, rabdomiosarcoma, sarcoma de Ewings, seminoma, etc).
Hay varias enfermedades de almacenamiento de glicgeno bien caracterizadas,
las cuales son el resultados de defectos heredados en una o ms de las enzimas
involucradas en la sntesis o ruptura del glicgeno. En la mayora de estos
desordenes, el hgado muestra acumulacin masiva de glicgeno. En algunas
enfermedades, la acumulacin de glicgeno tambin se observa en musculo
cardiaco (Enfermedad de Pompe) y esqueltico.
Mucinas:
Las mucinas, como los proteoglicanos, consisten en cadenas covalentemente
unidas a un core proteico. Una estructura que define a las mucinas epiteliales es la
presencia de repeticiones en tndem de secuencias aminoacidicas dentro del core
proteico.
Los grupos sulfatos y carboxilatos del condritin, dermatan, heparan sulfato y cido
hialuronico a pH 2.5 y por lo tanto poseen una carga negativa. Esto da cuenta de
que los componentes proteoglicanos/cido hialuronico del tejido conectivo y
cartlago con alcian blue. De la misma manera las mucinas cidas epiteliales como
las sialomucinas y las sulfomucinas del intestino grueso son reactivas a pH 2.5.
Las mucinas neutras tales como las de la mucosa gstrica y las glndulas de
Brunners no son reactivas con alcian blue.
Mtodos metacromticos:
Metacromasia puede ser definida como la tincin del tejido o de los componentes
del tejido, de manera tal que el complejo de colorante unido al tejido difiere
significativamente del color del complejo original del colorante para dar un
marcado contraste.
Azul de metileno, Azur A y Azul de toluidina son colorantes catinicos planares
pequeos que tpicamente tien tejidos de azul. En condiciones de metacromasia,
estos colorantes tien componentes de tejidos purpura/rojos. El uso de tales
colorantes para identificar mucinas cargadas y proteoglicanos es uno de las ms
antiguas tcnicas histoqumicas para carbohidratos.
Se cree que la metacromasia resulta de una forma especfica de agregacin del
colorante, que est caracterizada por la formacin de nuevos enlaces
intramoleculares entre molculas del colorante adyacentes. Los enlaces entre las
molculas del colorande solo suceden entre situaciones en las cuales las
molculas son atradas en estrecha proximidad entre una y la otra. En el caso de
las mucinas acidas o proteoglicanos, los grupos anionicos de los carbohidratos
actan orientando las molculas del colorante catinico. En pocas palabras, la
estructura del carbohidrato anionico sirve como molde para inducir la formacin de
una estructura colorante polimrica en la cual las molculas del colorante
probablemente se unen una a otra a travs de puentes de hidrogeno o fuerzas de
van der Waals.
Para que ocurra la metacromasia, es necesario un cierto patrn de distribucin y
densidad de las estructuras anionicas repetidas. Los proteoglicanos altamente
anionicos con grupos sulfatos y carboxilatos alternantes cumplen ese criterio y
producen tinciones metracomaticas con colorantes tales como azul de toluidina,
azul de metileno y azur. En general, los proteoglicanos ms fuertemente cidos o
altamente sulfatados producirn la metacromasia ms fuerte y ms estable.
Metilacin:
Hay una serie de variaciones de esta tcnica que se han utilizado para identificar
el tipo (carboxilo o sulfato) de grupos cidos en las mucinas. Sin embargo, todas
esas tcnicas estn basadas en el tratamiento de los especmenes con una
solucin de metanol acidificado. En esta tcnica las secciones estan expuestas a