PRACTICA N3

Reconocimiento e Identificacin de cidos Nucleicos

Podemos extraer e identificar fragmentos de cidos nucleicos a partir de
distintas muestras naturales?

Introduccin.

Los cidos nucleicos son las biomolculas portadoras de la informacin

gentica. Tienen una estructura polimrica, lineal, cuyos monmeros son los
nucletidos. El grado de polimerizacin puede llegar a ser altsimo, con
molculas constituidas por centeneras de millones de nucletidos en una sola
estructura covalente.
Los cidos nucleicos son el cido desoxirribonucleico (ADN) y el cido
ribonucleico (ARN). El ADN porta la informacin gentica que comanda la
formacin de un organismo completo y, junto con el ARN, determinan las bases
del funcionamiento celular a travs de la expresin de la informacin que
contienen, sin importar si el organismo es unicelular o multicelular, procarionte
o eucarionte. Todos los organismos tienen el ADN como vehculo de su cdigo
gentico.
Los organismos formados por clulas que tienen ncleos verdaderos, es decir,
separados del citoplasma por una doble membrana bien diferenciada, se
denominan organismos eucariontes.
El ADN est organizado en estructuras llamadas cromosomas. Los organismos
eucariontes como los animales, plantas y hongos, almacenan la mayor parte de
su material gentico dentro del ncleo celular.
El ADN es una molcula de longitud gigantesca, que est formada por
agregacin de tres tipos de sustancias; un azcar (desoxirribosa), un grupo
fosfato y cuatro bases nitrogenadas distintas; adenina, timina, guanina y
citosina.
Estas bases nitrogenadas se enlazan a travs de puentes de hidrgeno,
formando as la estructura de doble hlice caracterstica de esta molcula.

MATERIALES:

REACTIVOS:

Mortero y pistilo

Frutas

Matraz de Kitazato de 250 mL

Higado

Embudo Bschner

NaCl
Lavalozas

Papel filtro
Pipeta graduada de 20 mL
Pipeta graduada de 5 mL

Etanol
Hielo
NH4OH

Propipeta

Ribosa

Gradilla

AgNO3

Tubos de ensayo

HNO3

Gotario

(NH4)6 Mo7O244H2O

Embudo de Gravitacin

Orcinol
HCl

Esptula

FeCl3

Vaso precipitado de 250 mL

Vidrio Reloj

Procedimiento.
I.
-

Extraccin de cidos nucleicos.

En el mortero colocar un trozo de frutas y moler con el pistilo hasta
formar una pasta
En un embudo Bschner con papel filtro coloca la pasta resultante y filtra
para obtener zumo (pulpa)
El zumo transferirlo a un vaso de precipitado y aadir la solucin de
NaCl (Preparacin: Masar 10 g de NaCl y agregar a un matraz
erlenmeyer y luego aforar con agua)
Extraer 10 mL de la mezcla y aadirla a un tubo de ensayo
Aadir al tubo de ensayo unas gotas de lavalozas
Verter 15 mL de etanol fro por las paredes del tubo de ensayo. Luego,
agitar el tubo suavemente para que precipite el ADN.
Extraer el ADN del tubo enrollando la masa gelatinosa en una pipeta y
depositarlo en el vidrio reloj con agua para conservarlo
Repetir la experiencia con las dems muestras.

II.
-

Identificacin de la pentosa.
Tomar 6 tubos de ensayo y agregar lo siguiente en cada uno de ellos:
Muestras (5). Ribosa (1).

III.
-

IV.
-

Agregar reactivo de Bial a cinco tubos de ensayo (1 para cada muestra

ms una ribosa)
Llevar a bao mara por 5 minutos los tubos de ensayo o hasta que
observe cambio de coloracin.
Repetir lo anterior, pero ahora con el reactivo de dische.
Llevar a bao mara por 15 minutos los tubos de ensayo o hasta que
observe cambio de coloracin.

Identificacin de bases nitrogenadas.

Agregar gotas de NH4OH concentrado hasta obtener un medio bsico y
aadir algunas gotas de una solucin de AgNO3 0.1 M a una cantidad
del precipitado obtenido que se ha colocado en un tubo de ensayo.

Identificacin de grupo fosfato

Agregar un poco del precipitado en un tubo de ensayo y aadir NH4OH
concentrado hasta obtener un medio bsico, acidifique con gotas de
HNO3 y agregue 1 mL de (NH4)6 Mo7O24 4H2O 0,5M

Cuestionario
1. Por qu razn se utiliza NaCl y lavalozas al momento de realizar la
extraccin del ADN de las muestras?
2. Qu funcin tiene el etanol en la obtencin del fragmento de ADN de
las muestras? Por qu debe estar a baja temperatura?
3. De qu manera ser posible corroborar que el producto obtenido es
realmente ADN y no otro cido nucleico?
4. El ADN puro es totalmente translcido, Por qu entonces presenta otra
coloracin al ser extrado?
5. Sera posible determinar la presencia de otras sustancias que estn
contaminando la muestra de ADN experimentalmente, como protenas
por ejemplo?