Procesos Biotecnolgicos II

Clase 8: Transferencia de Oxgeno

Hugo Menzella
Mayo de 2013

Sobre el trmino Fermentacin

Microbiologa

Se refiere a procesos de conversin

anaerbicos. Ej. produccin de etanol
Biotecnologa
Se refiere a todos los procesos incluidos los
aerbicos

Bioproceso aerbico
Stock de clulas

Materias primas

Erlenmeyer

Medio de cultivo

Fermentador
de inoculacin

Esterilizacin
Fermentador

Aire
Captura
Purificacin

Productos

Aireacin y Agitacin
Importancia del mezclado en la
fermentacin
Dispersar burbujas de gas para
asegurar transferencia de gases

Mantener clulas en suspensin

Mantener medio homogeneo

Favorecer la transferencia de calor

4

Aireacin

Aireacin hace referencia al proceso de

introducir aire para incrementar la concentracin
de oxgeno de los liquidos
Cumple adems la funcin de eliminar gases
txicos (CO2)

Aireacin de un lquido
Puede llevarse a cabo de distintas maneras:
1- Burbujeando aire en el lquido
2- Llevando a cabo un spray del lquido en aire
3- Agitando el para incrementar la superficie de
absorcin
4- Combinacin de las anteriores. Ej. Burbujeo +
agitacin
6

Oxgeno es el sustrato gaseoso ms importante

Existen mltiples factores que afectan la transferencia
de oxgeno
La eficiencia de la transferencia de oxgeno es
muchas veces el factor limitante de la produccin de
un proceso fermentativo
Los fermentadores y procesos de fermentacin estan
diseados para maximizar la transferencia de oxgeno
Satisfacer la demanda de oxgeno es una de las etapas
ms costosas de los procesos, tanto desde el punto de
vista operativo como de capital
7

Transferencia de masa e intercambio de

gases

Problema: baja solubiliad del oxigeno en agua,

solo ~8 ppm (mg/L), a 20 y 1 atm
Debido a la influencia de sales disueltas que
constituyen el medio de cultivo la solubilidad es
an menor que en agua pura.

La solubilidad de los gases sigue la ley de Henry

en el rango de presiones en el cual operan los
fermentadores.
8

Ley de Henry

Describe la solubilidad del O2 en un lquido en

relacin a la presin parcial del O2 en el gas en
contacto con la fase lquida
Po
C*
H

C* es la concentracin de saturacin en la
solucin nutriente, Po es la presin parcial de O 2
en la fase gaseosa y H es la cte de Henry,
especfica para para el gas y la fase lquida

Insuflando aire se logra una concentracin de 8

mg O2/L en agua, con oxgeno puro 43 mg O2/L.
9

Etapas de la transferencia de O2 desde la

burbuja a la clula

10

Etapas de la transferencia de O2 desde la

burbuja a la clula
1 - Difusin dentro de la burbuja hacia la interfase gas-lquido
2 Difusin a travs de la interfase gas-lquido
3 - Difusin a travs de la pelcula lquida en torno a la burbuja
4 Movimiento por difusin en el seno del lquido
5 - Difusin a travs de la pelcula lquida en torno al flculo
celular
6 Entrada al flculo celular
7 - Difusin a travs del flculo celular
8 Difusin a travs de la membrana celular
9 Reaccin de oxidacin
11

Etapas de la transferencia de O2
desde la burbuja a la clula
Etapa 1
Difusin dentro de la burbuja hacia la
interfase gas-lquido
Las molculas de gas se mueven rapidamente y
estan homogeneamente distribuidas
O2

12

Etapas de la transferencia de O2
desde la burbuja a la clula

Etapa 2 - Difusin a travs de la interfase gas-lquido

La resistencia es despreciable.
En sentido contrario el CO2 pasa del lquido a la burbuja

O2
CO2

O2
13

Etapas de la transferencia de O2 desde la

burbuja a la clula
Etapa 3- Difusin a travs de la pelcula lquida en torno a la
burbuja.
El movimiento es lento, es la etapa limitante y depende de:

Temperatura
Concentracin de oxigeno en la burbuja y el liquido
Viscosidad del medio de cultivo

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Etapas de la transferencia de O2 desde la

burbuja a la clula
Etapa 4 Movimiento por difusin en el seno del lquido
En general es rpida. Depende de:
La eficiencia del mezclado
La viscosidad del medio de cultivo

O2

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Etapas de la transferencia de O2 desde la

burbuja a la clula

Pasos 5 a 9

5 - Difusin a travs de la pelcula lquida en torno al flculo

celular
6 Entrada al floculo celular
7 - Difusin a travs del flculo celular
8 Difusin a travs de la membra celular
9 reaccin

Los pasos 5 y 7 son lentos. Las clulas aisladas son siempre

preferibles a aquellas que crecen en flculos (Ej.
microorganismos filamentosos) por su facilidad para captar
oxgeno

16

Etapas de la transferencia de O2 desde la

burbuja a la clula
Si el proceso utliliza clulas aisladas en
suspensin y el mezclado del lquido es eficiente:

El paso limitante del proceso de transferencia es

la etapa 3- Difusin a travs de la pelcula
lquida en torno a la burbuja

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Proceso de transferencia de oxgeno

Paso 3
La ecuacin para la transferencia de oxgeno en la
interfase:

N A kL a (C * CL ) OTR

NA = Transfrencia de masa (mMO2/Lh)

kL = Coeficiente de transferencia (m/h)
a = Superficie de intercambio por unidad de volumen (m-1)
kLa = Coeficiente volumtrico de transferencia de O2 (h-1)
C* = Valor de saturacin para la cc O2de en la interfase (aprox
igual a la solubildad de O2 en fase lquida) (mM/L)
CL = Concentracin de O2 en fase liquida (mM/L)

de aqu en adelante OTR = O2 Transfer Rate (mM O2/Lh)

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Parametros que influyen en la capacidad de

transferencia de oxgeno de un sistema de
fermentacin

Diseo del fermentador:

Turbinas
Baffles
Aireadores
Geometra
Organismo:
Morfologa

Medio de cultivo:
Solubilidad del oxgeno
Viscosiidad
Presencia de agentes tensoactivos

Parametros del proceso:

Veloc agitacin(RPM)
Caudal aireacin(VVM)
Presin parcial de O2 (pO2)

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Influencia de la Temperatura en la OTR

20

Influencia de la Temperatura en la OTR

>T < Solubilidad de O2

>T >Difusin
10C-40C: predomina >Difusin , aumenta OTR
>40C: predomina < Solubilidad de O2, disminuye OTR

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Influencia la morfologa y del medio de cultivo en

la OTR
Izquierda:

influencia de la viscosiad del medio en la OTR

Derecha: influencia de la efecto la la presencia de componentes del medio en la OTR

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Influencia de la agitacin y caudal de aireacin en OTR

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Influencia de la PO2 en la OTR

PO2 puede ser variada de distintas maneras:
1- Aumento de la presin en el tanque
2- Incremento de la concentracin de oxgeno en el gas suministrado

Importante:
Debe realizarse un
exhasutivo anlisis de
costo antes de
implementar el aumento
de presin o uso de
oxgeno puro

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Influencia del uso de agentes antespumantes

Son moleculas anfipticas

Se ubican en torno a las burbujas y disminuyen

la transferencia de O2

La formacin de espuma aumenta con el caudal

de aire suministrado. Caudales mayores a 1
v/vmin no pueden utilizarse en fermentaciones
de alta densidad de clulas
Cuando es posible se prefiere el uso de
dispositivos mecnicos rompe espuma

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Contenido de gas del fermentador y

tiempo de residencia de las burbujas
El O2 debe ser suministrado tratando que las burbujas
queden temporalmente retenidas en el seno del lquido
para que el O2 se transfiera a la fase lquida.
A > T residencia de burbuja > transferencia de O2 hasta el
punto en que la concentracin de O2 de la burbuja es muy
baja.
T residencia de Burbuja depende del tamao y de la
geometra del fermentador (a > h > Tr)

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Porque es importante determinar KLa

para un sistema de fermentacin?

Es un parmetro confiable que permite determinar la

maxima OTR de un fermentador, una de sus
caracteristicas ms importantes (la otra es la capacidad
de disipar el calor generado)
Puedo determinar que fermentador es adecuado para
escalar un proceso (scaling up)

Si debo desarrollar un nuevo proceso y adaptarlo a un

fermentador de gran escala preexistente, permite
conocer las las limitaciones que voy a tener en planta y
limitar el alcance de la etapa I+D (scaling down)
27

Mtodos para determinar KLa

1. Mtodo de oxidacin de sulfito (mtodo de Cooper)

2. Gassing out esttico
3. Gassing out dinmico

28

Mtodos para determinar KLa

1. Mtodo de oxidacin de sulfito
Mide la velocidad de conversin de una solucin 0.5 M de
sulfito de sodio a sulfato en presencia de cobre como
catalizador

Na2SO3 + 1/2 O2

Cu++ or Co ++

Na2SO4

La velocidad de oxidacin del sulfito es proporcional a la

transferencia de oxgeno
Desventajas

i) lento
ii) no considera reologa delmedio

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Mtodos para determinar KLa

Mtodo de Gassing out esttico

Utilizando la tcnica de gassing out se mide con una sonda

polarogrfica el incremento en O 2 disuelto de un medio de
cultivo del cual se ha eliminado el O 2

30

Mtodos para determinar KLa

Se elimina todo el O2 del medio por burbujeo de N2, luego se
administra aire y se grafca:
Y

Concentracin
de O2 disuelto

Tiempo

La OTR a tiempo X es igual a la pendiente de la tangente a la curva

31

Mtodos para determinar KLa

Ventajas del Mtodos de Gassing out esttico
Rpido

~15 mins
Puede utilizar medio de cultivo

Desventajas

En escala industrial se requieren grandes cantidades de N2 para

eliminar todo el oxigeno
Mide la transferencia de O2 n un unico punto del fermentador
El tiempo de respuesta del electrdo introduce errores
32

Mtodos para determinar KLa

Mtodo de Gassing out dinmico

Mide los niveles de O2 en cultivos que estan creciendo en el

fermentador

Se suspende la aireacin y el consumo de los

microorganismos reduce el nivel de O2

El incremento BC de O2 observado in el oxgeno disuelto es la

diferencia entre el OTR y el consumo de los microorganismos
(OUR)

33

Mtodos para determinar KLa

Mtodo de Gassing out dinmico para la dereminacin de Kla
La aireacin se suspende en el punto A y se reinicia en B
X

Concentracin
de O2 disuelto

Pendiente AB da RX
(Velocidad de respiracin)
Pte BC da dC/dt

B
Tiempo

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Mtodo de Gassing out dinmico

Expresado como ecuacin:
dC/dt = Kla (Csat - CL) - QO2.X
QO2 = veloc respiracin (mmoles of O2 g-1 biomass h-1),
X = Biomasa
Se suspende la aireacin, se mide O2 disuelto
dC/dt = - QO2.X ... La pte AB permite determinar QO2.X
Se reinicia la aireacin y se mide O2 disuelto ,
dC/dt
(pte BC)

= KLa

(Csat (tabulada)

CL)
(Observada)

- QO2.X
(pte AB)
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Mtodo de Gassing out dinmico

Ventajas
Puede determinar KLa durante una fermentacin real
Rpido
Desventajas
Puede trabajar en un rango limitado de concentraciones de
O2, el nivel no puede caer por debajo de la Ccrit
Dificil de aplicar en fermentaciones con alta demanda de
O2 (como la de nuestro TP!)
Mide OTR en un solo punto del fermentador, adonde se
aloja la sonda.
36

Niveles crticos de O2 disuelto

Para maximizar la produccin de biomasa se debe satisfacer la

demanda de O2 de las clulas en cultivo manteniendo el nivel
por encimaa de la Ccrit
Si la concentracin cae por debajo de Ccrit se altera el
metabolismo con el consecuente impacto en la productividad

Importante: el consumo de puede controlarse regulando la

velocidad de administracin de los sustratos oxidables, este es
el fundamento de las denominadas fermentaciones en batch
alimentado

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Estequiometra de la respiracin
Consideramos el uso de glucosa como fuente de carbono y energa;

C6H12O6 + 6O2

6H2O + 6CO2

PM glucosa =180
PM O2= 32

Para oxidar 180 g de glucosa se requiren 192 g de O2.

Si la velocidad de captacin de O2 de la biomasa (OUR) supera la
OTR se consume rapidamente todo el O2 y habr alteraciones
metabolicas
Pero puedo administrar la glucosa a una velocidad tal que el fermentador
pueda suministrar el O2 necesario para oxidarla. Esta es la razn mas
importante para establecer procesos en batch alimentado
38

Ccrit O2 para algunos microorganismos

Organism o

Temperatura
oC

Concentracin crtica
de O2
(mmoles dm -3)

Azotobacter sp.

30

0.018

E. coli

37

0.008

Saccharomyces sp.

30

0.004

Penicillium chrysogenum

24

0.022

Ccrit es la cc de O2 por debajo de la cual la velocidad de respiracion comienza a

disminuir, se relaciona con Km de oxidasas de cadena respiratoria
39

Concentracin de O2 vs Velocidad de respiracin (Veloc Cto)

El efecto de la concentracin de O2 disuelto en la velocidad de
respiracin la cual puede relacionarse directamente con la velocidad
de crecimiento puede describirse con una ec de Michaelis Menten

Veloc respiracin (QO2) = QO2 max . conc O2 / ( Ks + conc

O2 )
Vel cto especifico = max. C/ (Ks + C) donde C = conc O2
QO2 = mmoles O2 consumidos por gramo de peso seco de
biomasa
40

Effecto de la concentracin de O2 disuelto en el QO2 de un

microorganimo

QO2

Ccritical

concentracin de O2 disuelto
El consumos especifico de O2 se incrementa al aumentar la concentracin
de O2 disuelto hasta un cierto valor denominado Ccrit

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Factores que afectan la demanda de oxgeno

Velocidad de respiracin determinada por la afinidad de

oxidasas

Tipo de respiracin (aerbica vs anaerbica)

Tipo de sustrato (glucosa vs metano)

Otros factores ambientales (pH, temp etc.)

Relacion superficie/ volumen

Tamao (bacteria v clula animal)
Presencia de hifas, clogs, etc.

Naturaleza de la superficie (presencia de capsula, etc)

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Para recordar: balance entre demanda y

suministro de O2 al disear un bioproceso
El diseo de un proceso de fermentacin debe ser tal que
en todo momento el OUR sea menor al OTR
OUR = QO2.X
QO2 = O2 Veloc de captacion especfica, X = Biomasa

OTR = KLa(Csat - CL )
Adems la concentracin de O2 disuelto debe ser > Ccrit
en todo momento.

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Para recordar: balance entre demanda y

suministro de O2 al disear un bioproceso
La fermentacin tiene un OTR mximo dictado por los
factores descriptos anteriormente, por lo tanto si es
superada la OTR mxima debe reducirse la demanda
del bioproceso mediante:

Control de la concentracin de biomasa

Control de la QO2
Combinaciones de ambas

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