UNIVERSIDAD ATONOMA METROPOLITANA

UNIDAD IZTAPALAPA

INSTITUYO MEXICANO DEL PE'ROLEO

REPORTE DE SERVICIO SOCIAL
ESTUDIO DEL EFECTO DE TRES BIOCIDAS COMERCIALES SOBRE EL
DESARROLLO DE BACTERIAS SULFATO-REDUCTORAS Y HONGOS
AISLADOS DEL AGUA D E INYECCIONDELCOMPLEJO ABKATUN.

ASESORES: BIOL. JUAN MANUELROMERODOMINGUEZ

Q.B.P. RAFAEL GARCIA ESQUIVEL
M. EN C. ABELSENTIES GRANADOS

."..
. ...

. ..

r . 1

INTRODUCCION

Cuandoseagotalaenergapropiadeunyacimientopetrolfero,esnecesario
inyectarle un fluido a fin de proporcionarle energa adicional aumentando la produccin y
la recuperacin final de hidrocarburos; a este proceso se le llama recuperacih secundaria
y se lleva a cabo utilizando varios mhtodos, entre
los que se pueden mencionar:
Inyeccindeagua,inyeccindegasnatural,inyeccibndeaguaconpolimeros,
inyeccin de gas inerte (nitrgeno y C02 ), etc (IMP-1982). En la actualidad el mtodo
ms usual en nuestro pas es la inyeccin de agua por su disponibilidad y bajo costo. Dicho
mtodo se aplica tanto en tierra como en zona marina, en esta ltima se ubica el complejo
Abkatun.
La inyeccin de agua se hace a travs de tuberas de acero que llevan
un flujo a
presin,dichastuberassonsusceptiblesdepresentarenalgnmomentofenmenosde
corrosin y10 incrustacin. Una de las causas de corrosin en las tuberas es la fijacin
y
crecimiento de microorganismos entre los que se puede mencionar a las bacterias sulfatoreductoras,bacteriasdelfierro,bacteriasdel
limo, algas,hongos, etc.Poresta
razn
se han creadoprogramasdecontrolquecontrarrestenelcrecimientomicrobiolgico.
DichoprogramaseestllevandoacaboenelcomplejoAbkatun,entre'personalde
PEMEX y delaLineadeInvestigacindetratamientodefluidos,delaGerenciade
Ingeniera de Produccin del Instituto Mexicano del Petrleo.
El controldelcrecimientomicrobiolgicoes
solo unapequeiiapartedetodoel
programa de control de la corrosin que se lleva a cabo en el complejo de inyeccin de
agua, sin ser por esto de poca importancia. La forma ms comn de tratar este problema
es
mediante
el
suministro
de
productos
que
inhiben
o anulan
el
crecimiento
de
microorganismos, a estos productos se les llama biocidas.
Los biocidassonproductosqumicosqueinteractanconlasclulasde
organismos al estar en contacto con ellos, afectndolas hasta que mueren.

mixtos.

Por su composicin qumica los biocidas se clasifican en: orgnicos, inorgnicos

De acuerdo a su mecanismo de accinlos biocidas se dividen en:

1

los

MECANISMO DE ACCION

MICROBIOCIDA
NO OXIDANTES
Metales pesados

Atraviesanlaparedcelular
y penetran al
citoplasma destruyen protenas.

Surfactantes

Reducen la permeabilidad de la clula.

Sales cuaternarias de amonio

Reaccionanquimicamenteconlascargas
negativas asociadas con la pared celular.

Compuestos fenlicos clorados

Primero atacan la pared celular y despus

penetran,
formando
suspensin
una
coloidal con el citoplasma.
Inhiben
la
reaccin
metablica
enzimasustrato. Reaccionanen forma competitiva
por
la
enzima
en
lugar
del
metabolito
normal.
Atacan
tambin
otros
sitios
enzimticos.

Compuestos rgano sulhrados

Sales de cobre

Son
alguicidas
y bactericidas
pero
no
afectan a los hongos.

Aminas

Son alguicidas efectivos

OXIDANTES
Cloro

Se dfinde a travs de la pared celular de

los
microorganismos,
reacciona
con el
citoplasma y produce enlaces estables con
el nitrgeno de las protenas.

Propionamidas brominadas

Reacciona con ciertos grupos de protenas,

lo cual detiene la xido reduccin.
2

Los biocidas pueden ser de amplio espectro o para un grupo especfico (bacterias,
algas, hongos).
La eficienciadelosbiocidasestenfbncindevariosfactorestalescomo:el
tiempo de exposicin de los organismos al biociday la concentracin del mismo.
La concentracin y tiempo de exposicin del biocida en un complejo de inyeccin
y hacer un monitoreodela
deagua,sedeterminandespusdehaberlodosificado
poblacinmicrobiolgica. A partirdeestosdatosseplanean
los periodos y tiempode
dosificacin, as como la concentracin del biocida (Nalco,1979).

No se deben utilizar altas concentraciones de biocida porque contaminaran el flujo

que los transportay por otro lado por el alto costo que implicara
En ellaboratoriosepuedeconocerlaeficienciade
un biocidateniendolas
siguientes ventajas:
a) Conocer si el biocida es de amplio espectroo solo especfico para un
grupo de microorganismos
b) Conocer la concentracin ptima del biocida para su mayor eficiencia
c) Determinar si la accin del biocida es inmediata
o requiere de tiempo para
actuar.

PROBLEMAS CAUSADOS POR L A S BACTERIAS SULFATO-REDUCTORAS Y

HONGOS EN UN SISTEMA DE INYECCION DE AGUA.

El acercamientodelasbacteriashacialasuperficiedelalneadetransportede
agua,seproducepormediodefberzasdenaturalezafisicoqumicadeatraccin
y
repulsin
(Fuerzas
de
London-Vander
Waals, movimiento
browniano,
atraccin
electrostticaeinteraccioneshidrfobas)
y seguidamenteseestablecencontactospor
mediodepolmerosextracelulares
. Este procesodefijacinesirreversible
y puede
realizarse en forma permanente, o temporal si hay algn agente que lo elimine (Ramrez,
1992):

El desarrollo de una comunidad de microorganismos sobre superficies en contacto

con el agua es un proceso secuencial iniciado con la formacin de
UM pelcula llamada
"biofilm" o biopelcula . Esta biopelcula est compuesta por una intrnseca asociacin de
microorganismos, sus productos de secreciny partculas de materia orgnicae inorghica
(Ramrez, 1992).
3

La matriz que incluye las clulas de cada uno de estos organismosy los adhiere a la
superficiedelmetal,estbsicamenteformadaporpolmerosaninicospolisacridos
altamente hidratados, que contienen largas cadenas de cidos urnicos
La biopelcula(biofilm)sedesarrollacomo
un procesonatural,entodoslos
sistemasacuticos. Y lasreasinternasdelmismo,tiendenaseranaerbicasanen
sistemas aerobios (Costerton,1988). Al establecerse la anaerobiosis en las partes internas
delbiofilm,lasbacteriassulfato-reductorasencuentran
un ambientefavorablepara
reproducirse, y esto gradualmente produce microcolonias de cblulas cerca de la superficie
del metal.
Algunasmicrocoloniasnopermanecenconunasolaespecie
y lasprimeras
colonizadoras atraen a segundas colonizadoras por sus productos metablicos. Esta unin
metablicabombeamolculas
y/o protonesalsustratoparacolonizarlasuperficie
metlica.
Una vez que las bacterias sulfato-reductoras ssiles se establecen en la superficie
del metal, comienza el proceso de formacin de celdas de corrosin
y es posible que se
lleguen aformardesdecavidadeshastaprohndaspicaduras.
La generacinde H2S
producidoporlassulfato-reductorasaumentalacorrosividaddelaguacuandofluye
a
travs de los ductos(PEMEX-I.M.P., 1990).
Conrespecto al efectodeloshongosenlacorrosindemetalesseencuentran
trabajosrecientescomo los deAylln (1988), Pope (1984) y McKenzie(1977) que
reportan que algunas especies de hongos tienen efecto corrosivo sobre el aluminio.
Por otro lado Videla (1988) realiz un estudio sobre el efecto de contaminacin
por hongos en tanques de keroseno, en dicho estudio report6 que cuando no se controla el
pHenelmedio,loshongostienen
un efectocorrosivosobreelacero
similar al k i d 0
ctrico. Este es uno de los pocos trabajos donde se menciona la influencia de los hongos en
la corrosin del acero.

OBJETIVOS

1.Conocer la eficiencia de tres biocidas comerciales utilizados para el control de

hongos y bacteriassulfato-reductorasenelsistemadeinyeccibndeaguadelcomplejo

Abkatun.

2. Establecer o adecuar una tcnica que permita evaluar la eficiencia de biocidas en

hongos y bacterias sulfato-reductoras.

3. Formar una coleccin de cepas de hongos para que sirvan de material de trabajo
en el Laboratorio de Bacteriologa de la linea de Investigacin de tratamiento de fluidos.
gl

b"

4. Identificar si es posible las especies de hongos que

heron aislados del agua de
mar, valindose de tcnicas de microcultivos y microscopa.

OBJETIVOS ESPEClFICOS
1.Practicar tcnicas de aislamiento y cultivo de microorganismos, como bacterias
y hongos.

2. Comparar la eficiencia de tres biocidas que se

complejo Abkatun.

esth usando actualmente en el

3. Manejar el equipo que se usa en el Laboratorio de Microbiologa.

4. Colaborar en las actividades que se requieran en el laboratorio de Bacteriologa,
de la Linea de Investigacin de tratamiento de fluidos.

AREA DE ESTUDIO
El complejo de Inyeccin de agua Abkatun, se encuentra localizado en la sonda
de Campeche a 19O 15' 42"Latitud Nortey a 92' 12' 24" Longitud Oeste.

Dicho complejo se ubica a 43.65 millas naticas de Cd del Carmen, Camp.

millas naticas del puerto de
Dos Bocas,Tab.

y a 74

Est constituidoactualmenteporochoplataformasde
las cuales, cinco son
propiamente las de hyeccibn de agua,. conocidas como pIatafonnas satdites, ABK N,
ABK R, ABK Q,ABK S y AJ3K P , ademb una de tratamiento y bombeo (PTB), una de
control y servicios (PCS) y la que constituye la habitacional.

Este complejo pertenece a Petrleos Mexicanos. En el diagrama 1 se muestra la

situacingeogrhficadelcomplejo,
y eneldiagrama
2 seobservaladistribucibndel
complejo.

DIAGRAM2 1.
93'

COMPLEJOABKATUN

SITUACION GEOGRAFICA
92'

,/y

0.

Bar,

*ABKATW

1 9

de

T6rminnc

153846

DIAGRAMA 2. COMPLEJO ABKATUN

ABKR

ABKP

DISTRIBUCION GENERAL

ANTECEDENTES
El uso debiocidasenlaIndustriadelPetrleoesrelativamenterecientesi
consideramos que uno de los primeros trabajos es
el de Paul Pena que report6 algunos
biocidasquedestruyenbacterias
y hongos.Dondesedaba
aconocerlaexistenciade
productos que se podanusar a nivel industrial para el control de microorganismos.
En 1982 Smith public su artculo " Biocides in Fuels ". En el ai0 de 1981 Garcia
" Estudio Microbiolgico del
Esquive1 realii como trabajo de tesis el proyecto titulado
aguadelossistemasdeenfriamientodelcomplejoPetroqumicode
Pajaritos,Ver. y
evaluacin de biocidas".

A partir de esta fecha los trabajos hacen ms nfasis en la comparaci6n de biocidas

en cuanto a su eficiencia. En 1988 Costerton report la relacin entre el monitoreo de la
corrosin con los Biofilms Bacterianos
y las estrategias deuso de biocidas
Posteriormentelosestudiosrealizadosloselaboraronen
1994 Sweenycon "A
novelnonoxidizingbiocideforcoolingwatersystems",
y Rupi quepublica su artculo
"Biocide comparison: aldehyde versus mixtureof aldehyde and quaternaq amine".

METODOS

El presente estudio se llev a cabo en dos etapas.

La primera consisti en aislar
bacteriassulfato-reductoras y hongosdemuestrasdeaguadelComplejoAbkatunpara
utilizarlos posteriormente en las pruebas de laboratorio. Dichas
muestras se tomaron en
losmismospuntosqueactualmentese
usan enelprogramadecontrolde
la corrosin
siendo los siguientes:
Captacin, salida de filtros, salida de planta
y plataformas satlites.
La segunda etapa consisti en realizar las pruebas de eficiencia de los biocidas en
el laboratorio de Bacteriologa, dentro del Instituto del Petrleo.
El aislamiento de bacterias sulfato-reductoras se llev a cabo "in situ", tomando un
mlde agua del flujo de cada punto de muestre0 e inoculndolo en
fiascos ampoviales con
mediodecultivosegnlanorma
API RP 38. Los hongosseaislaronapartirde
un
concentradodeagua
, obtenidomediantelafiltracindelamisma
a travsdeuna
membrana Millipore de 48 mm dedimetro y 0.45 pm de abertura de poro, despus se
sembr en agar dextrosay papa.
Los hongosqueseaislaron
keron sembradosconlatbcnicademicrocultivo,
despus se hicieron preparaciones semipermanentes para observarlosal microsc6pio.

EFICIENCIA DE LOS BIOCIDAS

Se utilizaron tres biocidas denominados BIO-1, BIO-2, y BIO-3. Para probar su
eficiencia con bacterias sulfato-reductoras, se us medio de cultivoAPI lquido en fiascos
ampoviales (NACE, 1990). A partirde un cultivo reciente, se tomaron 3 alcuotaspara
usarlascomoblancosdecadaunodelosbiocidasyotras
3 seusaronparaelaborar
cultivoscondosificacionesde 40, 80, 120 y 200 ppmdecadaunode
los biocidas. Se
monitore el crecimiento bacteriano cada 2 hrs. durante 8 horas, y despus a las 24 hrs. y
a las 72 hrs.
En el caso de los hongos se hicieron tres pruebas , que son modificaciones de una
, yaquela
tcnicaqueactualmenteseestusandoenelLaboratoriodeBacteriologa
norma que se consult no especifica el procedimiento exacto que se debe usar
(ASTM E
645-91). La primera consisti en agregar dosificaciones de25, 50, 100,250 y 350 ppm de
cada biocida al agarydespusdequesolidificenlascajasdepetri,sesembraronlos
hongos mediante picadura con asa (Fig. 1).
9

En la segunda prueba se inocul caldo nutritivoal 50 % con esporas de un hongo,

despus se inocularon en matraces con caldo nutritivo al 50 % ;donde se tom uno como
blanco y alosotrosselesdosificelbiocidaalasmismasconcentracionesqueenla
primera prueba (Fig. 2).
La tercera prueba h una adecuacin basada en los resultados anteriores, primero
seinocul un matrazconcaldonutritivoal
50 % y apartirdeesteseinocularon
5
matraces con agua de mar estril con 0.1 % de caldo nutritivo, uno se tom como blanco
y a losotrosselesdosificelbiocidaaconcentracionesmayoresqueenlaspruebas
anteriores (400, 800, 1000 y 1500 ppm), como se muestra en la Fig.3..

sigue:

La eficiencia de un biocida se reporta en porciento y los clculos se hacen como

Para bacterias sulfato-reductoras:
% Eficiencia = Q?. inicial P. final 1 x 1
0
0
P. inicial

P. inicial poblacin inicial

P. final. - poblaci6n final

Para los hongos se tom en cuenta la presencia

en la caja de petri..

o ausencia y el &ea de cobertura

En las figuras 1, 2 y 3 se muestran las pruebas que se hicieron para la eficiencia

de los biocidas con hongos.
En lafigura 4 seobservalapruebadeeficienciadelosbiocidas
con bacterias
sulfato-reductoras.

En el anexo 1 se detallan las t6cnicas utilizadas.

10

HG.1 PRIMERA PRUEBA DE EVALUACION DE UN BIOCIDA CON HONGOS

AGAR CON DOSlFlCAClONES DE BlOClDA
50 PPI

AGAR DEXTROSA Y
PAPA ESTERIL

BLANCO

SIEMBRA DE HONGOS MEDIANTE PUNTEO

AGAR DEXTROSA
PAPA

11

"

..

FIG.2 SEGUNDA PRUEBA DE EVALUACION DE UN BIOCIDA CON HONGOS.

CALDO NUTRITIVO CON BIOCIDA

lrnl

PLACAS CON AGARDEXTROSA

CALDO

IIYTIITIVO

IMOCULADO

CON

AL

Y PAPA

30s

E8COIA8

DE

BLANCO

HOY008

SIEMBRA

24 HRS

INCUBACION A
55 'C

lrnl

YONITOREO CADA 2 H R L D U W T E 10 HRS.

AGARDEXTROSA
PAPA

12

POR

72

e
4

FIGURA 4, DISENO DE LA PRUEBADELOSBIOCIDASCONBACTERIASSULFATO-REDUCTORAS

1 m1
1 m1

DE

SULFATO4EDUCTORAS

1 ml

1 ml

MEDIO A.P.I. CON LAS DOSIFICACIONES DE LOS BlOClDAS

\
*h

1 ml

*
lml

1 mi

1 ml

REPETIR E l PROCEDIYIENTO PARA LAS CUATRO COWCENTRACIOIIES

I

14

RESULTADOS
Aislamiento y Cuantificaci6n de Microorganismos.

En la primera etapa del trabajo se llev a cabo el aislamiento

y cuantificacin de
los organismos que se utilizaron para la prueba, durante
un ciclo semestral. La figura 11
muestra el nmero de especies de hongos que se aislaron mensualmente.
En total eron
11 diferentes de especies las que se obtuvieron.
La figura 12 muestra el promedio mensual de bacterias sulfato-reductoras aisladas
en el mismo ciclo y sepuede observar que en los meses de Octubre de 1993 y Febrero de
1994 fi donde se increment la poblacin.
Evaluaci6n de Biocidas con Hongos

Se llevaron a cabo tres pruebas para determinar la eficiencia de

los biocidas con
hongos. En la primera prueba se utiliz el biocida BIO-03 a concentraciones de 25, 50,
100,250 y 350 ppm. En esta prueba se esteriliz el agar dextrosay papa con las diferentes
concentraciones de biocida, luego de que se solidific se sembraron los hongos por medio
depunteocon un asadesiembra,distribuidosencuatrocuadrantes,esperandoquepor
cadacuadranteendondehubieracrecimientosetomaracomo
25 5 deefeicienciadel
biocida. Los resultados se muestran en la figura5, donde de los nueve tipos de hongos que
se utilizaron solo uno present inhibicin de crecimiento
a 50 ppm. Antes de probar los
otros biocidas se decidi modificar el mtodo por razones que se explican en la discusin
de resultados.
La segundapruebaserealizexponiendolasesporas
a un mediolquidocon
nutrientes y con concentraciones conocidas del biocida, para posteriormente monitorear el
crecimientoconrespectoaltiempo.
Los resultados esth enlafigura
6, dondeel
crecimiento para todas las concentraciones en un lapso de 8 horas fbC del 100% del kea
de la caja.La eficiencia se tom en ncin de la densidad de crecimiento encaja.
la
La tercera prueba se realiz exponiendo esporas en agua de mar estril con una
concentracin mnima de nutrientes y con concentraciones de biocida mucho mayores que
lasusadasenlaspruebasanteriores.Ademssemonitoreelcrecimiento
a las 24 y 72
horasdehaberdosificadoelbiocida.
En lafigura 7 semuestranlasgrhficasdel
crecimientodeloshongosconrespectoaltiempoparalasdiferentesconcentraciones
utilizadas.
15

. . ) .I - . .

._,.

La eficiencia de los biocidas con hongos solo se tom6 en base a la presencia

o
ausencia y a la cobertura de crecimiento en la caja.
De acuerdo a esto los biocidasBIO-01
y BIO-03 fincionaron mejor a1500 ppm en un tiempo de 2 hrs. de exposici6n . En el caso
del BIO-03 solo inhibi el crecimiento por unashoras.
Evaluaci6n de los Biocidas con Bacterias sulfato-reductoras.
Las figuras 8, 9 y 10 corresponden a los resultados del crecimiento de bacterias
sulfato-reductoras expuestas a los tres biocidas. Tambin se monitore el crecimiento de
las bacterias a las 24 y 72 horas. La eficiencia de los biocidas BIO-O1 y BIO-02 fi del
100% para todas las concentraciones,y del BIO-03 fu del 0% para una concentracin de
40 ppm y del00 % paralasdemsconcentraciones.
En ladiscusinderesultados
se
explica las posibles causas de estos resultados.

Hongos aislados
En las fotografias 1-14 se observa el aspecto general de las colonias de las especies
queseaislaron,paraalgunasdeellassemuestrauna
vista de sus estructurasde
reproduccincon
un aumentode 40x. Porfalta detiempono
fb posiblehacerla
identificacin de las especies.

16

FIG, 5 PRIMERAPRUEBADE LOS BIOCIDAS CON HONGOS (BIO.03)

25

50

1O 0

250

350

CONCENTRACION DEL BlOClDA EN ppm

*8 ESPECIES * 1 ESPECIE

17

FIG, 6 SEGUNDAPRUEBA DE LOS BIOCIDAS CON HONGOS(BIO~O1)

120%

100%

E
z

80%

60%

E!

z
Ya
z

o
U
a
W

40%

20%

0%
O

CONCENTRACION DEL BlOClDA EN ppm

*25,50,100,250 Y 350 pm +BLANCO

18

FIG. 7 TERCERA PRUEBA DE LOS BIOCIDAS CON HONGOS.

..
REOULAR

"

..

C A N NULO

CAM NULO"

NULO

NULO

10

72

24

10

'

'

24

TIEMPOEN HORAS

TIEMPO EN HORAS

+466pprnt80Oppm*1oO0ppm*15ooppm*cBLANco

*400ppmt800ppm*1000ppm*1506ppm*BUNCO

BIOCIDA BI0.01 CON HONGOS,

BIOCIDA BIO-02 CON HONGOS,

IO

24

72

TIEMPO EN HORAS
+
4
a
o
p
p
m

+aOappm O
+
lO
O
p
p
m*15Wppm *BLANCO

BIOCIDA BIO-03 CONHONGOS,

19

BIO-O1
CON BSR

FIGURA 8. BIOCIDA
1.000E+07

1.000E+06

1.000E+05

1.000E+04-s

10

24

72

TIEMPO EN HORAS
-40,80,120 Y 200 ppm +BLANCO

20

FIGURA 9. BIOCIDA BIO-02 CON BSR

1.000E+01

10

24

72

TIEMPO EN HORAS

*40,80,120 Y 200 ppm *BLANCO

21

FIGURA 10. BIOCIDA BIO-03 CON BSR

TIEMPO EN HORAS

*40 ppm '80,120

22

Y 200 ppm *BLANCO

FOTOGRAFIAS DE LAS COLONIAS DE LOS HONGOS AISLADOS

DEL COMPLEJO ABKATUN

23

ESPECIE # 5

24

ESPECIE# 7

40 X

ESPECIE # 8

25

ESPECIE # I1

26

40 x

DISCUSION DE RESULTADOS
AISLAMIENTO DE ORGANISMOS
El aislamiento de hongos y bacterias sufito reductoras se llev a cabo solo para
tenerejemplaresdeorganismosquesedesarrollanenlascondicionesambientalesdel
ComplejoAbkatun,queesdondeinteresatener
un control microbiolgico y por tanto
conocimientodelaeficienciade
un biocida. El a n a s i s delacantidaddeorganismos
encontrados mensualmente est en fbncin de los periodos en que se suministr biocida en
la planta de tratamientoy bombeo.
EVALUACIN DE LOS BIOClDAS CON HONGOS

En la primera prueba que se realiz con hongos, se utiliz el biocidaBIO-03 , cuyo

componente activo son compuestos de sales de cuaternario de amonio. El crecimiento de
las nueve especies utilizadas se'consider como del 100% del kea de la caja. Analizando
lasposiblescausashaydosrazones:laprimeraesquelasconcentracionesutilizadas
heron muy bajasparahongos,lasegunda
fb queelm&odonocuentaconlasbases
suficientes para poder ver la eficiencia de
un producto. Se tena la idea de que al colocar el
biocida en el agar y despus sembrar con asa los hongos, se poda ver la eficiencia por el
readecrecimientoencuatrocuadrantesenlosquesedividila
caja; sinembargo,es
posible y lgico que las condiciones en los cuatro cuadrantes son exactamente las mismas,
entonces no hay razn para que los hongos solo crezcan en un cuadrante.

A partirdeesteanlisissedisefi
UM pruebaenlacuallasesporasestuvieran
expuestas al biocida y desde donde se pudieran monitorear cada determinado tiempo.Esta
h la base de la segunda prueba con hongos (Fig. 2), en donde se utiliz el BIO-O1y an
as crecieron en toda la caja con una densidady apariencia igual a la del blanco. La ltima
posibilidaderaaumentarlaconcentracindelbiocida
y mantener losprincipiosdela
pruebaanterior. Los resultadosfberonlosesperados,ycomoseobservaenlafig.
7a
mayorconcentracindelbiocidaelcrecimientoesmenor.
En estaltimapruebase
utilizaron los tres biocidas propuestos y la fig. 7 muestraque BIO-O1 y BIO-02 tienen
mayor eficiencia a 1500 ppm, entantoque BIO-03 la tiene a 1000 ppmperoalverla
concentracin de 1500 ppm se ve que el crecimiento reincide y que el biocida solo acta
como un fbngistato as queesposiblequelomismosucedera
con las 1000 ppm si se
hubiera monitoreado ms tiempo.
27

Estos resultadosdemuestranquelosbiocidasque
fbngicida, y de los tres an menos elBIO-03.
EVALUACION
DE
REDUCTORAS

LOS

se utilizaronnotienenpoder

BIOClDAS
CON
BACTERIAS
SULFATO-

En las figuras 8 y 9 se puede observar que los biocidas BIO-O1

y BIO-02 tienen
unaeficienciadel 100 % , peroentrminosdeevaluacinde
un productoestonoes
confiable; enprimerlugarlasconcentracionesqueseusarondebieronserdelrango
inferior y superior a 40 ppm que fi en donde ya no hubo crecimiento de bacterias desde
la hora en que se dosific el biocida, y por otro lado se debi6 monitorear en espacios de
tiempo m& cortos, sin descartarlosmonitoreosalas
24, 48 y 72 horasdehaber
dosificado el biocida.Estos ltimos monitoreos nosdan la pauta paraanalizar si el biocida
fbnciona como talo solo es un biostato. La finalidad era encontrar una curva de la tasa de
mortalidad con losparhetros de concentracin y tiempo.
Para el caso del biocida BIO-03 se encontr que no es eficiente a 40 ppm pero a
partirde 80 ppm lamuertedelasbacteriasestotal.Igualqueen
el caso de los otros
biocidas las concentraciones debieron ser cercanas a 40 ppm para establecer la curva de
mortalidad,estassugerenciassonposiblesdellevaracaboenellaboratoriopero,por
cuestin de tiempo ya no se hicieron

Con respecto a la eficiencia del BIO-03 tanto en hongos y BSR es claro que fi
menorconrespectoalosotros.Prasad
(1994) establecequeelglutaraldehidoes
mb
eficientequeloscompuestosdeamoniocuaternario(componenteactivode
BIO-03), y
aunque no se conoce cual es el activo de BIO-O1 y BIO-02 si se puede pensar que no es
el mismo que el de BIO-03.

CONCLUSIONES

1.La eficiencia de los biocidas utilizados es

muy diferente en hongos y en bacterias sulfatoreductoras, mientras que a las bacterias l a s controla a concentraciones bajas, los hongos
necesitan concentraciones altas.
2. El control
microbiolgico
en
el
complejo
de
Inyeccin
de
agua
debiera
combinaciones de biocidas para los diferentes tipos de organismos.

28

usar

3. Antes
de
iniciar
una
evaluacin
de
biocidas

con determinados
organismos,
es
conveniente hacer prueba preliminares tanto del mtodo como de las concentraciones a
usar.
4. En el
caso
de
las
bacterias,
sulfato-reductoras
sera
conveniente

utilizar una

cuantificacin en placa para no trabajar con rangos de poblacin, que es lo que se obtiene
con fiascos ampovialesy es una solo una aproximacin del nmero de organismos.
5. Cuando se dosifique un biocida es importante realizar pruebas de bioensayos con otros

organismos,yaquesiendoproductosfabricadospara
matar, pudierantener un efecto
nocivo para la flora y fauna de las zonas
a l e d m a un complejo de inyeccin de agua.

29

BIBLIOGRAFIA

ASTM, 1991, "Standard test method for efficacy of microbicides used in cooling
systems", E 645-91,2 p.

Aylln E.S. , 1988, "Corrosion of AA 7075 Aluminum

Alloy
contaminated with CladosDorium resinae",Corrosion Science, 44(9):638-643.

in media

American PetroleumInstitute,1965, "Recomended practice for Biological Analysis

of subsurface Injection waters",APIRP 38, 7pp.
Costerton J.W., 1988, Bacterial
Biofilms
in relation to internal
corrosion
monitoring and biocide strategies,Material Performance,27(4):49-53.
Garcia Esquive1 Rafael, 1981, "Estudio Microbiolgico del agua de los sistemas de
enfriamientodelcomplejoPetroqumicode
Pajaritos,Ver. y evaluacindebiocidas".
Tesis, Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas del IPN.
Instituto Mexicano del Petrleo,1982, "Tratamiento de agua de Inyeccin",
Divisin de Produccin , Subdireccin de Tecnologa de Explotacin, Cap.1, pig.l .
McKenzie P., A.S. Akbar and J.D. Miller, 1977, "Fungal corrosion o f aircraft fuel
tankalloys",Univ.Manchester.Inst.
Sci. Technol.Symp. (B. P. Res. Cent.) Inst. Pet.
Lond., pap.N. IP 77-001,37-50 pp.
NACE, 1990, "Review of currentpractices for monitoringbacterialgrowth
oilfield systems", ## 54281, 15 p.

in

Nalco Chemical Company, Kemmer F. N. y J.McCallion, 1979, Manual del Agua

su naturaleza, tratamiento y aplicaciones. McGraw-Hill, Cap.43 14-19.

30

Prasad Rupi, 1994, "Biocide comparison: aldehyde versus mixture

of aldehyde and
quaternary amine",Corrosion (NACE), pap. N 273, 13 p.
Ramrez D.R.,1992, "La comunidad bacteriana y su influencia en la corrosibn de
los sistemas de enfiiamiento abiertos",Corrosidn (AMIC) ,3(27): 1 1-21.
Smith R. N. and B. Crook, 1982, "Biocides in Fuels", Inst. Pet. Lond. "Biocides
oil Ind" Symp. Proc. 69-79.

Sweeny P. G. and F.J. Himpler, 1994, "A novel nonoxidizing biocide for cooling
water systems", Corrosion (NACE), paper 450.
Videla H. A. , 1988, "Effects of fbngal and bacterial contaminants
of Kerosene
fuels on the corrosion of storage and distribution systems",
Corrosion ,pap. N 91,20 p.

31

ANEXO 1

TECNICAS UTILIZADAS

TECNICAS UTILIZADAS

HONGOS
Aislamiento
1. Se colecta
la
muestra
de
agua,
dejndola
fluir durante 30 minutos
aproximadamente a travs de una membrana millipore de 0.45 p m de dimetro
de abertura de poroy 48 mm de dimetro.

2. La membrana se coloca despus dentro de un fiasco de vidrio con un poco de

agua tomada del mismo flujoy se cierra para ser transportadaal Laboratorio.

Siembra
1. Prepararagardextrosa y papa, al mismo tiempopreparar una solucibnde
tcido tartluico. Esterilizarambos a 15 Lbs de presi6n por 15 minutos.

2. Ajustar el pH del medio de cultivo a 3.5, vaciar 15 mlde agar a cada caja de
petri y dejar que solidifique.
3. Agitarvigorosamentelamuestra,despustomaraproximadamente
1ml de
ella y vaciarsobreelagar.Conayudade
un tringulodevidrio,esparcirel

lquido sobre la superficie.

4. Dejar en la incubadoray revisar cada 24 hrs.

5. Cuando ya crecieron las colonias, se toma una porcin de la colonia que est
enla caja de petri con ayuda de un asa de siembra, y en otra caja con agar, se
punteaparaquelas hifas o esporasquedenenelmediodecultivo.Repetiren
una caja diferenteparacadatipodehongoquesedesarrolleenla
caja de
aislamiento.

6. Se dejan en incubacin, revisando el cultivo cada 24 hrs.

33

MICROCULTNO
1. En labasedeuna
caja depetriquecontengaPDA&lido,hacercon
marcador una cuadrcula da aproximadamente1 cm de lado

2.. Con un bisturmojadoenalcohol

lineas marcadas en el vidrio

un

y flameado, cortar elagarsiguiendolas

3. Con el mismo bisturcolocar un cuadrito de agar sobre un portaobjetos dentro

deuna caja estrilconmaterialparamicrocultivo(varillade
U, cubre y
portaobjetos).

4. Con el asa de siembra previamente flameada

y doblada en hgulo recto, tomar
un pequefio fiagmento de la colonia de las cajas de siembra e inocular un lado
del cuadrito del agar. Hacer lo mismo en lostres lados restantes
5. Con unas pinzas flameadas ponerun cubreobjetos est6ril sobre el agar.

6 . Con el mango del asa presionar ligeramente sobre el cubreobjetos con el fin de
que se adhiera al agar.

7 . Conunapiptaestril,vaciar
10 ml deghcerolal 10 % enla caja depetri
procurando no mojar el microcultivo.
8 . Incubar
32OC,
a revisandocada
24 hrs. hastaobservarcrecimiento
y
esprulacin . Usar un microscpio estereoscpico para mayor precisin en las
observaciones.

9. Con una pipeta Pasteur desechar el glicerol y substituirlo por una solucin de
formo1 al 10 %. Dejar actuar por unao dos horas.
10. Hacer una preparaciny observarla al microscpio.

TECNICA PARA HACER UNA PREPARACION SEMIPERMANENTE

1. Colocar una gota de azul de
algodnlactofenolenelcentrode
portaobjetos limpio.
2. Conunaspinzassepararelcubreobjetosdelmicrocultivo
quitar con una aguja de diseccin los restos de agar.
34

un
y siesnecesario

3. Poner el cubreobjetos sobre la gota de colorante

y presionar un poco sobre 61
con el fin de eliminar las burbujas de aire.
4. Sellarlapreparaci6nconsprayMerckoglas

transparente.

o bienconesmaltede

uAas

5. A partirdelportaobjetossepuedeobtener
otra preparacibn,quitandoel
cuadro de agar con ayuda de la aguja de disecci6n, poner una gota de colorante
enelcentrodelcrecimiento
y colocar un cubreobjetoslimpio,presionarpara
eliminar burbujas de aire.

BACTERIAS SULFATO-REDUCTORAS
Aislamiento
1. Se dejacorrerelagua(drenado)durante
muestra.

5 minutosantesde

colectarla

2. Se tomalamuestraenbolsas
o recipientesesterilizados , evitandolo
siguiente:contaminaci6nporcontacto
con lamuestra,turbulenciaexcesiva
dentro del contenedor de la muestra, espacios de aire.
3. Inocular "in situ"lamuestraenlos

fiascos ampovialespormediodeuna

jeringa estkril.

4. Incubar durante 14 dias a una temperatura de 35 -37'~.

Los fiascos ampoviales se hacen de acuerdo a la normaA P I RP38.

35