ANTECEDENTES

Acuicultura
La palabra acuicultura significa "cultivo en el
agua". Designa a todas las actividades que
involucren el cultivar plantas o animales en el
agua, tomando al agua como soporte y medio
nutricio. Esta actividad agrupa el cultivo de
organismos tanto de agua dulce como de agua
salada (Hispanica, 1990).
Desde tiempos muy remotos han sido muchos
los pueblos interesados en el cultivo de animales
acuticos, sin embargo slo recientemente se ha
valorado en su justa medida la importancia de la
acuicultura, tanto desde el punto de vista
econmico como del alimentario. El hombre,
agricultor y ganadero desde hace miles de aos se
ha desempeado en el medio terrestre, sin embargo
en las ultimas dcadas ha iniciado el cultivo en los
ocanos y las costas (Hotsman, 1985).
La acuicultura intensiva, pretende obtener una
gran produccin en un espacio reducido, para lo
cual dispone de mltiples recursos tecnolgicos. En
el desarrollo de la acuicultura se requiere prestar
atencin a los costos de produccin, donde el
sector alimenticio es lo ms importante.

Los requerimientos nutricios de los animales han de conocerse a la

perfeccin, para que la alimentacin sea la adecuada y el crecimiento
resulte ptimo. (Hispanica 1990; Sukenik y Col., 1991; 2Carie' y Col.,
1993).
El cultivo de las algas constituye potencialmente la forma ms
interesante de acuicultura ya que pueden sintetizar sus propios
alimentos de manera similar a las plantas de origen terrestre y adems
son la fuente primaria de alimentacin de la mayora de los organismos
marinos (Dawes, 1986; Marshall, 1987).
Las algas microscpicas se desarrollan en tanques de distinta
capacidad, a los que se aaden todas las sustancias inorgnicas y
orgnicas requeridas por el vegetal. En estos tanques se controla la luz,
el pH, la salinidad, la temperatura y el resto de los factores vitales que
intervienen en el proceso. Parece imposible controlar la totalidad de los
factores que rigen el desarrollo de una especie, pero cuanto ms se
controlen, ms se acerca al ideal. (Cousteau, 1982; Hispanica, 1990).
Generalidades de las Microalgas
Las microalgas son organismos que pueden vivir en estado libre, y
pueden formar agregados y colonias en lo que constituye un
rudimentario principio de organizacin superior (Marshall, 1987).
Son plantas microscpicas fotosintticas, no vasculares que
contienen clorofila "a"; poseen estructuras reproductoras simples y

flotan libremente, pero con movilidad limitada (Cousteau, 1982; Dawes,

1986; Marshall, 1987 e Hispanica, 1990).
3

Las microalgas pueden ser: auttrofas, auxtrofas y hetertrofas de

acuerdo a la obtencin de sus nutrimentos. Se denominan auttrofas
cuando son capaces de satisfacer sus requerimientos nutricios solo de
fuentes inorgnicas y de luz como fuente de energa para su desarrollo.
Auxtrofas son aquellas incapaces de crecer sin un suministro de
compuestos orgnicos especficos que no pueden sintetizar por ellas
mismas como las vitaminas por ejemplo la vitamina Bn. Hetertrofas
son aquellas que obtienen el carbono y tal vez el nitrgeno, el fsforo
y el azufre que requieren a partir de fuentes orgnicas disueltas. Pueden
ser fagocticas, absorbiendo partculas enteras de comida por medio de
visceras para la digestin o pueden ser osmotrficas absorbiendo
sustancias solubles a travs de la membrana plasmtica, son saprfitas
si lo obtienen del material muerto y parsitas si lo obtienen a expensas
de otro (Rost y Col., 1985; Dawes, 1986).
La reproduccin de las algas puede ser asexual, por divisin

longitudinal o transversal, o por medio de esporas, como ocurre en las

algas unicelulares; sexual, en la que dos clulas, o gametos,

procedentes de individuos distintos se unen

para dar una clula huevo (Campbell, 1992).
Clasificacin de Algas
La primera clasificacin de algas se bas en la
pigmentacin. Su importancia an se considera
cuando se habla de los distintos tipos de algas
verdes o pardas. Actualmente se consideran las
siguientes caractersticas para definir los principales
grupos de algas: presencia o ausencia de flagelos,
caractersticas de los flagelos (nmero, longitud,
punto de insercin, presencia o ausencia de pelos o
escamas), composicin de la pared celular, tipo de
producto sinttico almacenado y el tipo de clorofila
(Rost y Col., 1985; Marshall, 1987).
Hasta la fecha debido a los diferentes factores
que afectan la clasificacin de microalgas como son
su bioqumica, citologa y hbitat, ha constituido un
tema de discusin ya que existen casi tantos
esquemas de clasificacin como autores sobre el
tema (Sumich, 1982; Rost y Col., 1985; Dawes,

1986 e Hispanica, 1990). En la Figura 1 se

muestra la divisin, clase y orden a la cual
pertenece la especie de Isochrysis.
En general, las clases de algas que ms se
utilizan en el campo de la acuicultura son las
diatomeas (Chaetoceros gracilis, Skeletonema costatum,
Phaeodactylum
tricomutum),
Cloroficeas
(Dunaliella
tertiolecta,

Figura 1Divisin, clase y orden a la cual pertenece la

y Haptoficeas

especie de Isochrysis sp.Tetraselmis

chuii)

(Pavlova

(Voltolina y Col.,

lutheri, Isochrysis

1991).

galbana)

Generalidades de

Isochn/sis

sp.

sp.
pertenece
a
la
clase
Prymnesiophyceae (Haptoficeas), la cual es
comnmente cultivada como fuente de alimento
para la produccin comercial en acuicultura. Es un
fitoflagelado de color amarillo, de alto valor
nutricio; su tamao va desde 6 a 8 mieras. Como
Isochrysis

se aprecia en la Figura 2 consta de dos flagelos

mviles y de dos cloroplastos laminados por clula.
Posee escamas orgnicas. Su rgano ms
importante es el haptonema circundado por
pequeos
microtbulos.
Habita
en
climas
templados, su crecimiento ptimo esta dentro de un
rango de temperatura de 16 a 20C, a una
salinidad de 25 a 28% y una iluminacin de 4000
lux aproximadamente. Esta alga ha sido utilizada
por muchos investigadores en estudios de cintica,
nutricin, bioqumica y en acuicultura como
alimento para adultos y estadios larvarios de
moluscos, principalmente ostiones, ya que es
fcilmente digestible debido a que es un flagelado
desnudo y a que su tamao es pequeo (Voltolina
y Col, 1991; Dawes, 1986 y Sukenik y Col,
1991).

Figura 2.- Dibujo simplificado de una

Isochrysis

.Usos de las Microalgas

Desde la antigedad se utilizan las microalgas

como parte de la alimentacin humana y como
medicina en varias partes del mundo. Los aztecas
en Mxico utilizaban las microalgas para enriquecer
sus dietas. Los japoneses la consumen desde el ao
274 a.C. como un complemento saludable y
sabroso de su dieta a base de arroz. En China
desde hace miles de aos que emplean varios tipos
de algas como alimento. Hoy se usan las
microalgas como complementos alimenticios
aceptados ampliamente por los naturistas (Rost,
1985; Dawes, 1986).
En los ltimos aos se ha promovido el cultivo
de algas unicelulares, cuyas aplicaciones son
mltiples, tanto como alimento de crustceos,
moluscos y peces herbvoros como para la
obtencin de metano y otras sustancias qumicas
importantes, por ejemplo a nivel industrial para la
obtencin de ficocoloides, como cido alginico,
carragenina, agar, laminarina y alginato entre otros
y en la agricultura es utilizado para la produccin
de forrajes para la alimentacin animal, otra

aplicacin es la obtencin de inculos de suelos

como son acondicionadores y fertilizantes
(Hortsman, 1985; Rost, 1985 e Hispanica 1990).
El rea donde la utilizacin de las microalgas ha
alcanzado mayor auge es en la acuicultura en la

produccin de alimentos para organismos marinos

principalmente en estadios larvario (Hortsman,

1985; Ben-Amotz y Col., 1987; Carie', y Col.,

1992; O'Connor, y Col., 1992; Wikfors, y Col.,

1992; Csavas, 1993). En la Figura 3 se puede

apreciar un esquema sobre el uso de las microalgas

en la alimentacin de diferentes organismos

acuticos. Actualmente se han hecho trabajos

experimentales donde ha tenido xito el utilizar

dietas artificiales en forma de microencapsulados

proteicos para soportar el crecimiento de larvas de

ostin, pero hasta el momento no se ha logrado

reemplazar comercialmente a las microalgas por

alimento artificial ya que este ltimo carece de

flotabilidad, y debe tener una relacin adecuada de

nutrientes, siendo por esta razn que la acuicultura

a nivel comercial depende de la produccin y uso
de algas unicelulares como alimento de larvas de
crustceos y moluscos bivalvos. (Jones y Col.,

1975; Chu y Col., 1982; Millamena y Col., 1988 y

Epifanio, 1983; Walford, 1991)

Microalgas

12

Figura 3.- Esquema sobre el uso de

microalgas.Composicin Qumica de las Microalgas

La composicin qumica de las microalgas es
muy variable debido a factores tales como especie,
poca del ao, nutrimentos, temperatura, fotoperiodo,
salinidad, fuente de carbono, intensidad y color de la
luz entre otros (Fabregas y Col., 1987 y Sukenik y
Col., 1993).
En el trabajo hecho por Ben-Amotz y Col.
(1987) se estudiaron 5 diferentes microalgas y su
composicin qumica fue en promedio para protena
30 %, carbohidratos 25 %, Lpidos 21 % y el resto
de otros compuestos no clasificados. En particular la
composicin qumica de Isochrysis galbana es para
protena 34.9 %, carbohidratos 11.0 % lpidos 20.1
% y de otros compuestos 34 %.
Protenas

13

Los aminocidos constituyen un 90-98% del

total de protena. El valor nutricio de la protena esta
determinado por su contenido y disponibilidad de
aminocidos. Las proporciones de aminocidos
individuales no varan entre las diferentes especies
de algas. (Webb y Col., 1983 y Dortch y Col.,
1981; citado en Brown y Col., 1989).
La composicin de aminocidos del alga es
totalmente similar a la protena del huevo de gallina
(la que es considerada de alta calidad nutricio para
el humano), sin embargo este ltimo es rico en
metionina y bajo en arginina. (Teshima y Col.,
1986).
Algunos aminocidos pueden ser indisponibles
en la digestin animal, ya que la seccin de
absorcin de la molcula puede estar enlazada por
otra molcula. Por ejemplo el grupo de aminocidos
libres de lisina puede algunas veces estar enlazado
con carbohidratos. Esto ocurre comnmente en el
secado de algas y debe ser tomado en cuenta cuando
se utilizan algas secas como alimento animal

14

(Walford, 1990).
La produccin de protenas depende de los
requerimientos de la especie en particular y se ve
afectado conforme aumenta o disminuye la cantidad
de nitrgeno en el medio de cultivo, debido a la
relacin nitrgeno:fsforo (N:P) (Fabregas y Col.,
1989). El contenido de protenas de la microalgas
decrece
tambin
proporcionalmente
con
el
incremento de la edad del cultivo (Mykelestad y
Huag, 1972).
La protena en la especie Isochrysis galbana no se
ve afectada por la intensidad de luz, permanece
estable en un rango de 6.9 pg de protena/clula en
un rango entero de irradiacin (Sukenik y Col.,
1991).
Carbohidratos
La composicin de carbohidratos en las especies
de algas no es muy detallado (Chu, 1982; Whyte,

15

1990). Los monosacridos y oligosacridos

constituyen del 45-90% de la fraccin total de
carbohidratos. Los principales azcares son glucosa,
galactosa, maosa, y ribosa, con otros azcares en
proporciones variables. El perfil de carbohidratos
vara grandemente en las diferentes especies de algas
(Whyte, 1990).
Los carbohidratos presentes en clulas de
diatomeas son reservas de polisacridos y
constituyentes de la pared celular (Myklestad y
Haug, 1972).
Fabregas y Col., (1989), encontraron que
fuente y concentracin de nitrgeno, afectan
contenido de carbohidratos por clula. Cuando
concentraciones de nitrgeno se incrementan,
contenido total de carbohidratos de los cultivos
incrementa proporcionalmente a la concentracin
nitrgeno.

la
el
las
el
se
de

La intensidad de luz es otro factor que afecta la

16

composicin bioqumica de las algas, se ha

observado que la produccin de carbohidratos se
incrementa de manera proporcional a la intensidad
de la luz (Bustillos-Hurtado, 1992).
Lpidos
Gran parte de los lpidos de las microalgas son
steres de glicerol y cidos grasos. La composicin
de los lpidos puede variar por diversos factores
como son la combinacin de luz, nutrientes,
nitrgeno (nitratos) y temperatura (Sukenik y
Wahnon, 1991). En estudios realizados al respecto,
se han encontrado que las deficiencias de nitratos y
fosfatos afecta directamente el contenido de este
componente (Bustillos- Hurtado, 1992).
La fraccin de lpidos puede ser dividida en dos
categoras: lpidos polares (los cuales incluyen los
fosfolpidos y fracciones glicolpidas) y los lpidos
neutrales (los cuales incluyen los triglicridos,
diglicridos, hidrocarburos, alquenones, esterles y

17

pigmentos) (Brown y Col., 1989).

Pigmentos
Los pigmentos mayoritarios de muchas algas son
la clorofila verde y amarilla y los carotenoides
anaranjados o rojos, los cuales contribuyen entre 0.55% del peso seco de la clula (Ben-Amotz y Col.,
1985; Fabregas y Col., 1986; citado en Brown y
Col., 1989).
La clorofila "a" es el principal pigmento
fotosinttico en todas las algas, su complemento es
la clorofila "b" que es fundamental junto con la
clorofila "a" en las algas verdes, la clorofila "c"
junto con la clorofila "a" se encuentran en las algas
cafs. El pigmento celular contenido en la especie
Isochtysis galbana decrece en forma exponencial al
incrementar la intensidad de luz (Sukenik y Wahnon,
1991).

18

Minerales
La fraccin mineral del alga puede constituir
una proporcin del peso seco, en un rango del 6 al
39%. Las algas proporcionan una fuente de
minerales a los animales de cultivo, aunque tambin
contienen trazas y iones de metales pesados, los
cuales pueden tener desventajas si estos metales son
txicos. Entre los iones de mayor importancia
bioqumica que se encuentran en las microalgas son
el fsforo, slica (diatomeas) magnesio, calcio, sodio,
potasio, cloro, fierro y zinc, manganeso, cobre y
cobalto se presenta en cantidades traza (Lee y Col.,
1982; Kanazawa, 1983; Nose, 1972; Stowe, 1987;
citado en Brown y Col., 1989).
Vitaminas
Las algas son fuente significativa de casi todas
las vitaminas. Las vitaminas que generalmente
contienen las microalgas son tiamina (Bi), riboflavina
(B2), piridoxina (B), cobalamina (B12), biotina,

19

cido ascrbico (C), cido nicotnico, cido

pantotnico, colina, inositol, tocoferol (E), y
/Carotenos (provitamina A). La vitamina K ha sido
detectada en cantidades traza. Los precursores de la
vitamina D tambin han sido aislados de las algas
(Hollick, 1984; citado en Brown y Col., 1989).
Muchas
algas
requieren
vitaminas,
particularmente tiamina, cianocobalamina y biotina
(Valenzuela-Gomez y Ocao-Fuentes, 1993). En la
especie Isochrysis galbana las vitaminas son un factor
clave para su crecimiento (Anaya y Gmez; 1993).
Condiciones de Extraccin de Protenas

20

Todos
los
mtodos
espectrofotomtricos
necesitan una extraccin previa de la protena a
partir del paquete celular de las algas, lo cual es
comnmente llevado a cabo mediante el tratamiento
de las muestras con hidrxido de sodio diluido
durante un rango de tiempo y a temperatura
constante. Normalmente se observa que todos los
procedimientos son reproducibles manteniendo
constantes la temperatura, tiempo de extraccin y la
normalidad del hidrxido de sodio. En la prctica, se
ha comprobado que cada especie requiere de
condiciones especficas de extraccin debido a sus
caractersticas morfolgicas en especial a los
componentes de la pared celular en las diversas
clases de algas.
En trabajos anteriores se intent cuantificar
protenas, pero el contenido determinado fue
reducido debido a los extensivos pretratamientos y al
largo tiempo de extraccin (Raush, 1981).

21

En la Tabla 1 se muestran las diferentes

condiciones ptimas de extraccin para algunas
microalgas.
Mtodos de Determinacin de Protenas
Existen cuatro opciones para la determinacin
del contenido de protena en algas: 1) Ensayo
fluoromtrico, 2) La estimacin por alfaaminocido-nitrgeno despus de una hidrlisis
cida, 3) La evaluacin por el contenido total de
nitrgeno despus de la digestin Kjeldahl, 4) La
medicin espectrofotomtrica de protena. Esta
ltima posibilidad es
Tabla 1.-Diferentes condiciones de extraccin de
varios tipos de microalgas.

22

FUENTE: Rausch, 1981; Lopez-Elas, 1990yLpez-Elas, 1992.

la ms utilizada ea acuicultura y puede referirse al

mtodo de Lowry, de Bradford o a la medicin por
la reaccin de Biuret (Dorsey, 1977; Peterson, 1979;
Harrison y Col., 1988).
Mtodo de Kjeldahl
El mtodo Kjeldahl es el ms aceptado para la
determinacin de protenas. En este el nitrgeno de
las protenas y de otros compuestos orgnicos, se
convierten a sulfato de amonio por medio de la

23

digestin con cido sulfrico en ebullicin en

presencia de un ion metlico como catalizador (cobre
o mercurio). El residuo de la digestin se enfra, se
diluye con agua y se le agrega hidrxido de sodio.
El amonio presente se desprende y a la vez se
destila y se recibe en una solucin de cido brico
que luego se valora con una solucin cida
estandarizada (Coombs, y Col. 1988).
Mtodo de Lowry
Este es el mtodo ms utilizado para la
determinacin de protenas debido a su simplicidad,
sensibilidad y precisin. La principal desventaja de
ste mtodo es la falta de especificidad ya que
existen sustancias que pueden interferir con la
reaccin al momento de la determinacin, aunque
son pocas las que se encuentran al realizar el
mtodo; otras desventajas menos serias incluye el
rango relativamente lento de reaccin y la no
linealidad de la curva estndar a ms de 100
microgramos (Peterson, 1979; Peterson, 1983;

24

Harrison y Col., 1988).

El mtodo de Lowry y Col. est basado en el
reactivo Folin-Fenol propuesto por Folin y
Ciocalteau. El constituyente activo es la mezcla de
cido fosfomolbdico-tungstnico que es una mezcla
cromgena.
La reaccin se fundamenta en la reduccin que
efectan las protenas del cido perdiendo 1, 2 3
tomos de oxgeno con lo cual se produce una o
varias especies reducidas del cido las cuales tienen
un color caracterstico azul (con una longitud de
onda mxima de 745-750 nm y una mnima de 405
nm). El cobre es agente quelante en la estructura
peptdica y facilita la transferencia de electrones a la
mezcla de cidos cromognicos, particularmente en
la vecindad de los grupos de aminocidos esenciales,
por eso se incrementa la sensibilidad de la protena
(Peterson, 1979; Coombs y Col., 1988).

25

Los grupos cromognicos en la protena para los

cuales el mtodo de Lowry y Col. es sensible fue
estudiado por Chow Goldstein (citado en Malara y
Charra, 1972). Los principales aminocidos
cromognicos son tirosina y triptfano y un poco
menos utilizados cisterna, cistina e histidina. El color
desarrollado por la protena en este mtodo por la
protena en este mtodo depender de tirosina y
triptfano (Malara y Charra, 1972; Peterson, 1979).
Aunque la valoracin del color de la mezcla de
los aminocidos libres es aditiva, el color producido
en los pptidos puede ser ms o menos que la suma
de los componentes de aminocidos libres
dependiendo de la secuencia, largo de la cadena y la
disposicin del grupo funcional (Peterson, 1979).
Mtodo de Biuret
En solucin fuertemente alcalina todos los
compuestos que contienen dos o ms enlaces
pptidos reaccionan con sales de cobre para dar un

26

color violeta. Esta reaccin se utiliza para un ensayo

cualitativo de protena. Cuando se cuantifica
proporciona una medicin colorimtrica til de la
protena (Coombs y Col., 1988).
Mtodo de Biuret-Folin

Este mtodo es simple, combina el Mtodo de

Biuret y el reactivo de Folin para dar la
especificidad del mtodo de Biuret y la sensibilidad
del mtodo de Lowry y tiene la caracterstica de ser
igualmente cromognico con el nitrgeno de las
diferentes protenas. Tiene la desventaja de no tener
una linealidad absoluta cuando se emplean rangos
grandes de absorbancia y de que los resultados no se
obtienen rpidamente ya que requiere de un
calentamiento de 100 min. (Dorsey y Col., 1978).
Mtodo de Bradford
En este mtodo la protena es teida con el
colorante Coomasie azul brillante. Se basa en que el
pico de absorcin mxima de este colorante se
encuentra entre los 465 a 595 nm cuando el
colorante se encuentra unido a la protena. Es un
mtodo muy sencillo y tiene una gran sensibilidad
(aproximadamente cuatro veces el mtodo de
Lowry), la desventaja que presenta este mtodo es

que no da una respuesta lineal con las diferentes

protenas, especialmente cuando la concentracin de
stas es mayor a 60 mg (Harrison y Thomas, 1988).