SEMINARIO N 2

Prof. Mariane Lutz

Referencia:
Stevenson DE, Hurst RD. Polyphenolic phytochemicals just antioxidants or much
more? Cell Mol Life Sci 64: 2900 2916, 2007.

1) Qu son los polifenoles (PF)?

Los PF (o compuestos fenlicos) son metabolitos secundarios de las plantas que se caracterizan por la presencia de uno o ms anillos aromticos de 6 carbonos y dos o ms grupos
hidroxilo fenlicos. En un sentido estricto, los fenoles como el cido p-cumrico no son
polifenoles, pero como comparten algunas propiedades y caractersticas se les considera
como tales. Hay 5 clases principales de PF, todos los cuales se sintetizan a partir de
fenilalanina, que es convertida en cidos cinmicos y luego forman los diferentes compuestos,
hasta llegar a antocianinas. A partir de estos surgen diversas clases menores de compuestos,
mediante otras vas metablicas.
[Nota: para comprender el texto, ver las estructuras correspondientes en el paper original]

2) Funciones en las plantas

Los PF aportan color de las hojas, flores y frutos, son antimicrobianos, antifngicos, repelen
insectos, protegen de la radiacin UV solar, quelan metales pesados txicos, protegen de los
radicales libres (R*) generados durante procesos de fotosntesis. Las plantas poseen la enzima
polifenoloxidasa (PPO), que polimeriza los PF en presencia de oxgeno en el lugar donde la
planta est daada. Estos polmeros sirven para sellar los tejidos daados, evitando el ataque
de insectos. Esta enzima constituye un problema para la industria alimentaria, al provocar pardeamiento de los vegetales cuando se cortan o pelan, haciendo los jugos y extractos amargos
no palatables. Los PF tambin repelen a los animales superiores, evitando ser comidos. Por
ejemplo, algunos son muy amargos, como la naringina (flavonoide de los ctricos), los productos de la PPO y las procianidinas de bajo peso molecular (PM). Las procianidinas de alto
PM (taninos) precipitan protenas en el tracto digestivo de los mamferos y afectan la digestin.
Las procianidinas tienen una alta afinidad por las protenas altas en prolina, que abundan en la
saliva, que se cree que ayudan a detoxificar a los mamferos de estas procianidinas antes de
que entren al TGI. La corteza de los rboles posee niveles muy altos de procianidinas y los
animales que se las comen tienen una saliva muy rica en prolina.

3) Ingesta, biodisponibilidad, metabolismo

Diversos estudios han pretendido estimar el consumo diettico de PF. Sin embargo, los resultados dependen de la exactitud de los datos de las tablas de composicin qumica que se
hayan empleado, que generalmente son incompletos. Estudios en Gran Bretaa muestran un
consumo diario promedio de 780 y 1058 mg/da para mujeres y hombres, respectivamente.
Aproximadamente la mitad de la inges-ta corresponde a hidroxicinamatos, mientras que el
total de flavonoides es 20 25% y las antocianinas slo ~1%. La ingesta de antocianinas
puede ser muy alta en las personas que consumen berries o vino tinto, aunque estos no son
una clase importante de PF de la dieta.

La absorcin desde el TGI superior se produce por diferentes mecanismos, no todos los cuales
estn muy claros. Algunos glicsidos, especialmente los glucsidos, pero no los rutinsidos,
interactan con el transportador de glucosa (SGLT1), lactasa floridzin hidrolasa o -glucosidasa citoslica. Las agliconas, que son ms hidrofbicas, parecen pasar por difusin pasiva.
Slo 5 10% de los PF se absorben de esta forma, el resto pasa al colon. La microflora del
colon rompe los flavonoides y procianidinas en molculas ms simples, como derivados de los
cidos hidroxicinmico, hidrocinmico (fenilpropinico), fenilactico y benzoico. Estos
se pueden absorber desde el colon y aumentar los cidos fenlicos directamente absorbidos
desde la dieta. La concentracin de flavonoides en agua fecal humana (indicador de la concentracin en el colon) va de ~0.1 a 1 mM, mientras los cidos fenlicos se encuentran hasta 100
uM. Estudios recientes muestran que los metabolitos de bajo PM generados en el colon derivan
de PF y son biodisponibles.
El consumo de chocolate (alto en flavanoles y procianidinas) aumenta la excrecin urinaria
de cidos fenlicos en sujetos sanos. Voluntarios que ingieren 1 g/da de extracto de semilla de
uvas alto en procianidinas muestran un aumento de la excrecin de cido 3-hidroxifenilpropinico y otros metabolitos generados en el colon. Las procianidinas del cacao son estables durante el paso por el estmago y llegan al colon. Las clulas intestinales pueden glucuronidar los flavonoides y otros PF absorbidos y volver a excretar los conjugados al lumen. Este
fenmeno, combinado con la excrecin biliar, aumenta la proporcin de PF disponibles para la
microflora del colon.
Las procianidinas se absorben muy poco, y solo especies de muy bajo PM son detectables en
la circulacin a nivel de trazas. Parece que los cidos cinmicos y los cidos fenlicos producidos por la microflora del colon tienen una biodisponibilidad relativamente alta: en un ensayo clnico en orina de sujetos con dieta alta en PF, alrededor del 98% de los metabolitos de PF
eran cidos hidroxicinmicos (al menos algunos de ellos provenientes directamente de la
dieta) y muchos metabolitos seran generados en el colon.

4) Farmacocintica y metabolismo:
El hgado y el intestino contienen enzimas de fases I y II que hidroxilan y conjugan xenobiticos, respectivamente. No se ha reportado hidroxilacin de PF, pero s son altamente conjugados mediante glucuronidacin, sulfatacin y metilacin. Se estima que 90 95% de los
PF absorbidos son convertidos en los conjugados, lo cual modula o cambia radicalmente la
actividad biolgica de los PF in vitro.
Diversos estudios han intentado estimar la concentracin mxima que alcanzan los PF individuales en la circulacin, el tiempo requerido para alcanzarla y la vida media de desaparicin
desde la circulacin. El tiempo para alcanzar la concentracin mxima vara de ~1 a 6 h y la
concentracin alcanzada puede ser tan baja como 0,03 mM para antocianinas y cido
ferlico y tan alta como 2,56 mM para genistena o 4 mM para cido glico. La vida media
est entre 1,3 h para cido glico hasta 7,1 h para genistena y 19,9 h para rutina. El consumo de 270 g de cebollas fritas produjo la deteccin de glucurnidos de quercetina, sulfatos y
metilteres en el plasma. Las concentraciones peak de ~1 mM se alcanzaron ~30 min luego del
consumo y llegaron a cerca de 0 a las ~6 h. Al contrario, ratas con dosis de 8 mg/kg de
antocianinas de uvas rpidamente alcanzaron concentraciones peak de ~0.3 0.5 mM en
plasma y cerebro.
Estas concentraciones son significativamente mayores a las de estudios anteriores, posiblemente debido a que han mejorado las tcnicas de medicin de metabolitos de antocianinas. La
resistencia a mltiples drogas (MDR) asociada al eflujo de protenas puede limitar la absorcin
de epigalocatequingalato (EGCG, abundante en el t) y otros PF en diferentes clulas. Con
ello, la concentracin intracelular de PF puede ser menor que la circulante, limitando an ms
su actividad potencial in vivo. Las concentraciones circulantes mximas de PF totales (conjugados y no conjugados) se han estimado en el rango de 0,1 a 10 mM y de 3 a 22 mM. Como
estos valores son mximos y el clearance es similar a la absorcin, la concentracin mxima en
estado estacionario es raro que exceda ~1 5 mM, incluso con una dieta alta en PF.

Cualquier potencial beneficio in vivo de los PF de la dieta debe ser evaluado de acuerdo al
principio que es poco probable que sea significativo a menos que sea demostrable a concentraciones bajas (uM) para los conjugados, o nM de formas residuales no conjugadas. La excepcin a este principio es el TGI, en que las clulas pueden estar expuestas a concentraciones
varias veces mayores que las de la circulacin. Concentraciones mayores de agliconas de PF,
ej 10, 50 o 100 mM se utilizan a menudo en experimentos in vitro. Aunque no necesariamente
demuestran potenciales beneficios saludables, pueden aportar informacin valiosa acerca de
los mecanismos de accin. La administracin en animales o uso teraputico por inyeccin o
infusin evita la detoxificacin y permite alcanzar concentraciones de 50-100 mM de agliconas
de PF.

5) Efectos de concentraciones muy altas de PF:

Aunque no hay evidencia de que la ingesta normal de PF sea daina, un exceso puede resultar
txico. Al inyectar altas dosis de agliconas de PF en animales, se puede producir dao en hgado y rin. Una ingesta extremadamente alta y prolongada de cido cafeico puede causar
cancer de estmago en ratas. La administracin intraperitoneal de PF en ratones provoc dao
heptico. Altas dosis de PF pueden alterar la biodisponibilidad y el metabolismo de algunas
drogas, con un potencial dao indirecto al causar sobredosis. Los fitoestrgenos (principalmente las isoflavonas de la soya: genistena y daidzena) se toman como suplementos como
alternativas a la terapia de reemplazo hormonal femenina. Sin embargo, tambin exhiben
genotoxicidad in vitro, lo que indica un potencial para un efecto similar in vivo. Ratas macho
que ingieren cantidades grandes (75 150 mg/kg) de extracto de kiwi mostraron supresin de
niveles de testosterona y menor recuento de espermios. La silimarina, mezcla de PF, se usa
comnmente como tratamiento en condiciones hepticas como la cirrosis. Sin embargo, en un
estudio de su efecto sobre cancer se vio que aument el N de tumores de mama inducidos por
1-metil-1-nitrosourea y (+) el crecimiento de clulas MCF-7 de cancer de mama en cultivo.
Los PF de las plantas han evolucionado para ser txicos para los organismos que las
consumen. Se ha sugerido que los PF son toxinas a las que nos hemos vuelto relativamente
resistentes, que inducen mecanismos de proteccin endgena a niveles de ingesta moderada,
pero que a dosis altas no se conoce su eficacia e incluso pueden ser dainos. Los flavonoides
han mostrado diversas acciones teraputicas potenciales, pero muy pocos se ocupan con este
fin en la prctica. Al parecer la ingesta diettica puede ser tanto beneficiosa como daina ya
que nosotros hemos evolucionado con mecanismos de proteccin: Cuidado con los suplementos de dosis altas! Resulta paradojal que se recomiende aumentar el consumo de F y V
como una medida de mejorar la salud, pero justamente las plantas se han hecho poco
palatables y txicas para que no las comamos

6) Efectos antioxidantes de los PF:

Capacidad antioxidante (CA) convencional: al igual que otros antioxidantes (AOX), los PF
pueden actuar atrapando R* como perxidos quelar iones metlicos divalentes, reduciendo su
potencial oxidativo. En concentraciones relativamente altas y en presencia de otros AOX, como
tocoferoles y cido ascrbico, actan en la planta y en cualquier alimento en que se les incorpore. Se piensa que conservan los lpidos, evitando su degradacin oxidativa, aunque lo que
sucede in vivo puede ser muy diferente.
Hiptesis AOX: (Gay en 1987): seala que molculas pequeas (ej urato, ascorbato, tocoferoles) son AOX in vivo y en consecuencia ayudan a prevenir algunas enfermedades. Los PF
estaran incluidos entre los compuestos AOX in vivo, lo que se ha inferido de sus propiedades
in vitro. Diversos estudios de intervencin muestran que la suplementacin de la dieta con AOX
puede mostrar beneficios, no mostrar ningn efecto e incluso causar dao. En consecuencia, el
valor de la suplementacin con AOX exgenos es bastante cuestionado. Un meta anlisis de
estudios de suplementacin AOX concluy que el betacaroteno, la vitamina A y la vitamina E,
pero no as la vitamina C ni el selenio, aumentaron la mortalidad [Bjelakovic, G, Nikolova, D,
Gluud, LL, Simonetti, RG, Gluud, C. (2007) Mortality in randomized trials of antioxidant
supplements for primary and secondary prevention: systematic review and meta-analysis. J Am
Med Assoc 297, 842 857].

Los PF no parecen estar presentes en la circulacin en concentraciones suficientes como para

contribuir significativamente a la capacidad AOX. Si la concentracin total de molculas AOX
estimada en el plasma es cercana a 500 uM, los PF combinados llegan a un mximo de 10-20
uM, con un aumento de apenas 2-4%. Por ejemplo, el aumento de la capacidad AOX del
plasma luego del consumo de manzanas se ha explicado por el incremento de ~37% de la
concentracin de urato como consecuencia del metabolismo de la fructosa, sin relacin con los
PF de la manzana. La contribucin de los PF a la capacidad AOX del plasma es limitada an
ms por la conjugacin o metabolismo de fase II. Las agliconas de los flavonoides son lo
suficientemente hidrofbicas para pasar a la membrana celular y a los lpidos de las LP y
protegerlos de la oxidacin. La mayor parte de los PF circulantes, sin embargo, son conjugados, demasiado polares para interactuar con los lpidos.

7) Capacidad antioxidante indirecta activacin de mecanismos

endgenos:
Aunque los PF no parecen tener una actividad AOX significativa in vivo, diversos estudios
demuestran que son capaces de proteger a las clulas del estrs oxidativo in vitro en concentraciones fisiolgicas. Lo que se ha observado es que los PF pueden inducir la expresin de
enzimas AOX endgenas in vivo, y de esta manera ejercen un efecto AOX indirecto. Son,
entonces las enzimas superxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutatin peroxidasa
(GSH-PX) las que incrementan su actividad protectora. La GSH-PX cataliza la reduccin del
perxido de hidrgeno y de hidroperxidos lipdicos, usando GSH como fuente de equivalentes
reductores.
Las concentraciones de PF que se alcanzan en el lumen intestinal (1 100 mg/mL, ~3.5 350
mM equivalentes de catequina) son mucho mayores que las del plasma, por lo que a este nivel
su efecto es mas importante, incluso directo. Cabe destacar que los efectos indirectos de los
PF persisten an despus que las molculas se han degradado, o es posible que incluso los
metabolitos contribuyan en la proteccin, lo que demuestra que los productos pueden ser an
ms activos que las molculas nativas. Por ej, la glucuronidacin de PF genera compuestos
isomricos que a veces son diferentes a los originalmente ingeridos y que son activos a menores concentraciones que las tericamente necesarias para la proteccin qumica. Ello sugiere
que los PF pueden actuar contra el estrs oxidativo por mecanismos diferentes al atrapamiento
de radicales libres.
Cmo lo hacen? La evidencia indica que los PF pueden mediar estas acciones por su capacidad de actuar como prooxidantes y generar ROS. Por ejemplo, los PF del t verde son citotxicos y generan ROS en clulas hepticas in vitro, y luego de 2 h de incubacin disminuye el
GSH y aumenta el superxido. Ello indica que se requiere GSH para la actividad AOX de la
quercetina y que cuando el GSH se ha repletado la quercetina se vuelve prooxidante. Otros
estudios confirman que los PF generan ROS y perxido de hidrgeno en condiciones fisiolgicas, an en bebidas como t y caf y en clulas en cultivo. Asimismo, la EGCG puede reducir
el hierro (III) a hierro (II) lo que genera OH* a travs de la reaccin de Fenton, reduciendo la
viabilidad de las clulas y aumentando la actividad de caspasas. El perxido de hidrgeno es
una molcula seal por si misma, y puede ser mediadora de algunos efectos prooxidantes de
los PF. El perxido de hidrgeno a concentraciones 315 uM estimula el crecimiento celular; a
120150 uM se detiene el crecimiento por 46 h y aparece una respuesta de adaptacin en
que se expresan genes de proteccin del estrs oxidativo y reparacin de daos con un mximo a las 18 h. A dosis altas, de 0.51.0 mM se induce apoptosis y a 5.010.0 mM hay necrosis.
El estrs oxidativo genera una prdida del balance redox intracelular y ocasiona dao al DNA.
Si los PF pueden reducir el estrs oxidativo al inducir las enzimas AOX, este mecanismo puede
explicar su rol en la reduccin de la incidencia de cancer. Tanto el DNA como el RNA tienen
mltiples sitios de unin para las catequinas del t verde, lo que puede ocurrir para otros PF,
dando una explicacin a su capacidad de actuar sobre la expresin de enzimas AOX a nivel de
transcripcin.

8) Ensayos en humanos:
Diversos estudios muestran una relacin entre la ingesta de PF y menor incidencia de ECV y
cancer (detalles en el paper original)

9) Efectos reguladores de los PF en vas de seales celulares:

- Inflamacin: es un proceso normal de proteccin inducido por el dao tisular o infeccin y
permite combatir al agresor/invasor. El tejido afectado libera mediadores (citokinas) que incluyen TNF-a e IL-1. Los mediadores actan en cascada, regulando y modulando a otras molculas inflamatorias e Ig de leucocitos activados que a su vez actan sobre molculas de adhesin en el tejido inflamado. La fagocitosis de bacterias genera ROS para neutralizar a los
invasores y se activan otras enzimas como fosfolipasa A2, cicloxigenasa-2 (COX-2), 5lipoxigenasa (5- LOX), NO sintasa (iNOS) y el regulador central del proceso, factor nuclearkappa B (NF-kB). Los PF son moduladores del proceso inflamatorio, al reducir la expresin del
NF-kB, o de las enzimas a travs de las cuales se generan ROS o aumentando la capacidad
de la clula de atrapar los ROS.
La ECV es una enfermedad inflamatoria. Se sabe bastante de la capacidad de los PF de (-) la
oxidacin de LDL, factor esencial de la gnesis de ECV, en la que se generan placas en la
pared de los vasos, probablemente por la adhesin de leucocitos a la pared y su posterior
migracin al espacio subendotelial. El proceso es inducido por TNF-a y IL-1, cuya respuesta es
mediada por el NFkB. Muchos genes contienen sitios de unin para NF-kB, incluyendo los de
las molculas de adhesin como vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1), intercelular
adhesion molecule-1 (ICAM-1) and monocyte chemotactic protein (MCP). La fase crnica de la
ECV, en que se forman las placas, es seguida de una fase aguda con actividad trombtica en
el sitio de la lesin. La evidencia indica que los PF pueden ayudar a prevenir la ECV al reducir
el proceso inflamatorio, y adems contribuyen a reducir la presin sangunea.
La angiotensina es un oligopptido vasoconstrictor, que aumenta la presin. Deriva del precursor angiotensingeno y la accin de la enzima convertidora de angiotensina (ECA), importante
en la regulacin de la presin va sistema renina-angiotensina. Algunas procianidinas pueden
inhibir la ECA in vitro, contribuyendo a reducir la presin. En ratas hipertensas, la quercetina
oral redujo la presin, y normaliz los niveles de GSH, GSH-PX y NO.
El resveratrol protege las clulas endoteliales en cultivo de la citotoxicidad inducida por LDL
oxidada y la generacin posterior de ROS. Diversos PF pueden inhibir la expresin de molculas de adhesin inducidas por TNF-a en clulas de aorta, primera etapa de ateroesclerosis.
Tambin inhiben la induccin de la iNOS en cultivos celulares. La quercetina y la catequina
inhiben el efecto proinflamatorio de los productos de la glicacin en monocitos, con una potencial mejora de las complicaciones vasculares de la diabetes. La luteolina interfiere con las vas
de LPS, reduciendo la activacin de vas inflamatorias, por ej en la enfermedad periodontal, en
que la secrecin bacteriana de LPS es clave. Tambin se ha observado menor reaccin
alrgica y de asma asociada a inflamacin (ej procianidinas de manzana) al (-) la liberacin de
histamina.
- Cancer: muchas de las molculas que participan en la inflamacin como NFkB, activator
protein-1 (AP-1) o MAP kinasas, tambin participan en la regulacin de la proliferacin y diferenciacin celular. Los PF pueden modular las vas de sealizacin e (-) el desarrollo de cancer
o su progresin e inducir apoptosis en las clulas malignas. La EGCG bloquea cada etapa de
la carcinognesis al modular la transduccin de seales de proliferacin y transformacin, inflamacin, apoptosis, metstasis e invasin. El resveratrol es anti-proliferativo en clulas
cancerosas por diversos mecanismos como (-) MAP kinasas y otras, (+) apoptosis, (-) formacin de tumores, (-) angiognesis y reducen la formacin de tumores por (-) factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF).
- Neuroproteccin: los PF actuaran por una combinacin de mecanismos protectores de las
clulas neuronales del estrs oxidativo, aumentando las defensas AOX, modulando cascadas
de seales celulares, procesos apoptticos o la sntesis y degradacin del pptido beta
amiloide. En ratas alimentadas uvas se ha observado (+) de dopamina y mejor rendimiento

cognitivo en laberinto y funcin motora. Los PF podran mejorar los efectos neurodegenerativos del envejecimiento. Se ha comprobado que el cerebro posee receptores para PF con
constantes de unin nanomolares, que pueden estar all para ejercer neuroproteccin.
- Metabolismo energtico y salud GI: el sndrome metablico se asocia a menor sensibilidad
a insulina, sobreproduccin de insulina, defectos del metabolismo de glucosa. Es precursor de
diabetes tipo II y obesidad. El transportador activo de glucosa SGLT1 parece ser una va de
absorcin de los glucsidos de PF desde el intestino. Estos compuestos pueden inhibir el
transporte de glucosa especialmente la dihidrochalcona floridzin glucsido, que se encuentra en manzanas y frutillas, potencialmente reduciendo el ndice glicmico de una dieta. Los
glucsidos de PF pueden inhibir la amilasa y glicosilasas, reduciendo la liberacin de glucosa
desde el almidn y otros oligo o polisacridos.
Los PF del t verde pueden modificar el metabolismo energtico y las vas de biosntesis al (-)
la glutamato deshidrogenasa (GDH) que regula la secrecin de insulina, reduciendo sus niveles. El vino tinto (+) la funcin de la eNOS, cuya expresin baja se asocia a sndrome metablico. Como el 90 95% de los PF ingeridos no se absorben directamente y se acumulan en el
colon, los metabolitos generados (-) el crecimiento de bacterias patgenas. Se ha observado
mejora de la colitis ulcerativa y otras enfermedades inflamatorias intestinales con el consumo
de diversas plantas. La rutina, un glucsido de quercetina de baja absorcin, acta liberando
quercetina al intestino con efecto antiinflamatorio mediado por la (-) de la activacin de NF-kB.

DISCUSIN
1. Los PF son mucho ms que simples AOX. Al contrario, parecen ser prooxidantes que
ayudan a proteger del estrs oxidativo al inducir mecanismos enzimticos endgenos
protectores.
2. Modulan la transcripcin de diversos genes y las cascadas de seales celulares que
participan en la regulacin del crecimiento celular, inflamacin y otros procesos. Muchos de
sus efectos se producen a nivel gentico.
3. Su biodisponibilidad es baja, especialmente en su forma no conjugada, lo que dificulta la
interpretacin de los ensayos in vitro.
4. Se sabe poco de los efectos biolgicos de los conjugados de PF o los metabolitos que se
generan en el colon, a diferencia de cientos de estudios realizados con las agliconas.
5. Los metabolitos glucuronidos tienen efectos importantes, pero no necesariamente tienen
igual potencia o actividad que las molculas nativas.
6. Un rea importante de desarrollo en la investigacin de los efectos de los PF es combinar
la informacin farmacocintica con estudios basados en clulas en cultivo usando los conjugados in vivo.
7. Los mamferos tenemos millones de aos de exposicin a PF, por lo que hemos desarrollado sitios de unin que regulan genes y vas responsables de protegernos de estas
toxinas.
8. La evidencia experimental indica que los PF tienen un potencial efecto antioxidante in vivo,
a travs de diferentes mecanismos sutiles y actan a concentraciones ms bajas que las
que tradicionalmente se consideraban efectivas.
MLR/rev2014.