AGENTES OXIDANTES E ANTIOXIDANTES

Introduo
As molculas de oxignio diatmico na atmosfera terrestre so as maiores promotoras
de reaes nas clulas vivas. Exceto aqueles organismos que so especialmente adaptados para
viver sob condies anaerbicas, todos os animais e plantas requerem oxignio para uma
eficiente produo de energia (Halliwell & Gutteridge, 1989).
O surgimento do oxignio deve ter sido acompanhado pelo aparecimento da camada de
oznio (O3) na alta atmosfera, e a absoro dos efeitos danosos da radiao ultravioleta pela
camada de oznio provavelmente permitiu a evoluo dos mais complexos organismos
terrestres (Halliwell & Gutteridge, 1989). O oxignio o elemento que, na classificao
peridica dos elementos qumicos, pertence famlia 6A, cujo nmero atmico e massa atmica
so 8 e 16, respectivamente, e que possui 8 eltrons distribudos nas suas camadas orbitrias.

Metabolismo do oxignio
Normalmente, em torno de 95 a 98% do oxignio absorvido pelos organismos aerbicos
reduzido, formando-se gua na cadeia respiratria atravs do transporte de eltrons na
mitocndria, bem como no retculo endoplasmtico, onde o sistema enzimtico citocromo, no
processo de fosforilao oxidativa, procede a reduo tetravalente do O2 pelo sistema citocromo
oxidase, fornecendo simultaneamente 4 eltrons para o oxignio, que se reduz diretamente
gua:
O2 + 4H+ 4e- 2H2O
As fontes que cedem os ctions de hidrognio e os eltrons para a reao so,
basicamente, o NADH, o FADH e a ubiquinona ou coenzima Q (Halliwell & Gutteridge, 1989).
Todavia, como j referido, de 2 a 5% do O2 reduzido univalentemente, processo em que uma
molcula recebe apenas um eltron, o qual vai ocupar um dos orbitais externos, ao mesmo
tempo em que o outro continua no parelhado, produzindo intermedirios altamente reativos,
denominados Espcies Reativas de Oxignio - ERO, que algumas vezes constituem os radicais
livres. Forma-se ento a primeira espcie txica reativa de oxignio, o superxido, conforme
esquema:

Seminrio apresentado pelo aluno FERNANDO KUSS na disciplina BIOQUMICA DO TECIDO

ANIMAL, no Programa de Ps-Graduao em Cincias Veterinrias da Universidade Federal do Rio
Grande do Sul, no primeiro semestre de 2005. Professor responsvel pela disciplina: Flix H.D. Gonzlez.

O2 + e- O2-

Radical livre
Um Radical Livre nada mais do que qualquer tomo, molcula ou on que possui um
ou mais que um eltrons livres na sua rbita externa. Essas partculas, formadas por eltrons
livres ou no pareados tem uma instabilidade eltrica muito grande, e por esta razo, mesmo
tendo meia vida muito curta, apresentam grande capacidade reativa, o que pode acontecer com
qualquer composto que esteja prximo, a fim de captar um eltron desse composto para sua
estabilizao, independente de ser uma molcula, uma clula, ou tecido do organismo, a partir
do que, acontecem reaes em cadeia de leso celular. Devido a esta caracterstica,
denominado de substncia oxidante. O oxignio tem a sua atividade fundamental no
metabolismo celular aerbico. Desta forma, a formao de Radicais Livres pelo organismo em
condies normais inevitvel, pois so necessrios no processo de respirao celular que
ocorre nas mitocndrias ("usinas energticas") das clulas, a fim de gerar o ATP (energia).
Tambm os Radicais Livres, produzidos pelos macrfagos e neutrfilos (glbulos brancos de
defesa), so usados contra bactrias e fungos invasores do organismo, produzindo ao lesiva
estes microrganismos.
Um eltron desemparelhado pode se associar com tomos isolados (hidrognio ou ons
metlicos), ou, ainda, com molculas (acares, protenas, lipdeos, DNA), o que resulta em um
processo de relevncia biolgica (Slater, 1984; Halliwell, 1987). Por outro lado, os radicais
livres j foram relacionados a vrias doenas humanas e participam como componentes
fundamentais em muitas, o que mostra quo grande o dano oxidativo causado por eles
(Halliwell & Gutteridge, 1985).
A formao dos ERO se d primeiramente pelo o radical superxido (O2-), que pode ser
dismutado em perxido de hidrognio (H2O2) ou mesmo atravs de ao cataltica, pela atuao
da enzima superxido dismutase (SOD). No organismo existem duas SODs principais, uma
citoplasmtica, que a CuZnSOD e outra, mitocondrial, que a MnSOD, esta contendo
Mangans e aquela contendo Cobre-Zinco na mesma molcula. A importncia da SOD pode ser
demonstrada pelo fato de ser a enzima mais abundante do organismo, ao mesmo tempo em que
tambm a quinta protena mais abundante neste mesmo organismo (Halliwell & Gutteridge,
1989). O grfico seguinte demonstra como ocorre a formao das ERO.

Figura 1, Formao das EROS

SOD Superxido dismutase, Cat Catalase, O2- Superxido, O2 Oxignio, GSSH Glutationa
Oxidada, GSH Glutationa Peroxidase, H2O gua, OH Radical Hidroxila, GSH Glutationa
Reduzida, H2O2 Perxido de Hidrognio.

Tabela 1: Espcies reativas de oxignio (ERO).

O2-

nion superxido ou radical superxido

HO2

Radical perhidroxil

H2O2

Perxido de hidrognio

OH

Radical hidroxila

RO

Radical alcoxil

ROO

Radical peroxil

ROOH

Hidroperxido orgnico (ex.: lipoperxido)

Oxignio singlet

RO

Carbonila excitada

O2

Fonte: (Sies, 1991)

Antioxidantes
O organismo possui sistemas naturais de eliminao de Radicais Livres, enzimticos ou
no, que so os chamados "Varredores de Radicais Livres, produzindo a sua eliminao ou
ento impedindo sua transformao em produtos mais txicos para as clulas. O efeito
prejudicial dos Radicais Livres ocorre quando eles esto em quantidade excessiva no
organismo, ultrapassando a capacidade do organismo de neutraliz-los com os seus sistemas
naturais. Esses sistemas enzimticos de defesa so compostos pelas seguintes enzimas:
Glutation-Peroxidase (que necessita do Selnio), Catalase, Metionina-Redutase e SuperxidoDismutase (h vrios tipos, e os 2 principais necessitam de Zinco e Cobre, e Mangans), os
quais combatem, no organismo os seguintes Radicais Livres: Perxido de Hidrognio,
Superxido, Oxignio Single, on Hidroxila, xido Ntrico e xido Nitroso.
Os Antioxidantes no enzimticos, em sua maioria so exgenos, ou seja, necessitam
ser absorvidos pela alimentao apropriada. Os principais podem ser divididos em: Vitaminas
Lipossulveis (vitamina A, vitamina E, beta-caroteno), Vitaminas Hidrossolveis (vitamina C,
vitaminas do complexo B),e os oligoelementos (Zinco, cobre, selnio, magnsio etc.), os
bioflavonides (derivados de plantas), etc. Segue Tabela 2 das ERO relacionadas aos seus
respectivos antioxidantes.

Tabela 2. ERO e antioxidantes.

Antioxidantes
ERO
Endgenos
Superxido (O2-)

Exgenos

Superxido dismutase (SOD):

Vitaminas, zinco, cobre, mangans,

a) citoplasmtica: Zinco-Cobre

picnogenol, EDTA

b) mitocondrial: Mangans
Perxido de hidrognio

Catalase Fe2+

(H2O2)
Perxido lipdico (COOH-)

Glutationa peroxidase, selnio,

Vitamina E, selnio

cistena
Radical hidroxila (HO )

Vitamina C, picnogenol, dimetil

sulfxido, EDTA, cido dimercapto
succnico e manitol

Oxignio singlet (1O2)

Betacaroteno

Ao das ERO nos sistemas biolgicos

Peroxidao lipdica
A peroxidao lipdica o processo atravs do qual as ERO agridem os cidos graxos
polinsaturados dos fosfolipdeos das membranas das clulas, desintegrando-as e permitindo,
desta feita, a entrada dessas espcies nas estruturas intracelulares. A fosfolipase, ativada pelas
espcies txicas desintegra os fosfolipdeos, liberando os cidos graxos no saturados (Halliwell
& Gutteridge, 1989), resultando nas seguintes aes deletrias dos perxidos lipdicos:
Ruptura das membranas celulares (bombas NA/K e Ca/Mg);
Mutaes do DNA - cido desoxiribonuclico;
Oxidao dos lipdeos insaturados;
Formao de resduos qumicos como o malondialdedo;
Comprometimento dos componentes da matriz extracelular, proteoglicanos, colgeno e
elastina.
Os perxidos lipdicos possuem poder de ao maior do que as outras espcies txicas
primrias de O2 (O2-, H2O2, OH , O2), atingindo facilmente alvos mais distantes. A
lipoperoxidao deve ter tambm, um papel muito importante na proliferao celular,
especialmente em clulas tumorais. H autores que sugerem que os produtos da lipoperoxidao
esto envolvidos no controle da diviso celular, sendo que a peroxidao de lipdeos est
inversamente relacionada com o crescimento tumoral (Gonzalez, 1992).

Defesa antioxidante
Os antioxidantes que representam a defesa dos organismos contra as espcies reativas
de oxignio so divididos em dois tipos principais, os no enzimticos e os enzimticos.

Antioxidantes no-enzimticos
Alguns nutrientes essenciais podem atacar diretamente os radicais de oxignio. A
vitamina E (alfa-tocoferol) o maior antioxidante lipossolvel presente em todas as membranas
celulares e, portanto, atua na proteo contra a lipoperoxidao (Kay et al., 1986). Ela pode
reagir diretamente com uma variedade de oxiradicais, como o superxido, a hidroxila, etc., e
tambm com o oxignio singlet (Machlin & Bendich, 1987). A vitamina E foi primeiramente
relatada em 1922, nos Estados Unidos, por Evaris e Bishop, que demonstraram ser liposolvel e
tambm fator essencial para reproduo normal em ratos. A purificao deste fator revelou que
ele composto da famlia dos tocoferis. Quatro tocoferis so conhecidos, porm o alfatocoferol o mais importante biologicamente e os termos alfa-tocoferol e vitamina E so quase
intercambiveis na literatura (Halliwell & Gutteridge, 1989).

Primeiramente, o alfa-tocoferol inativo reage com o oxignio singlet e poderia, portanto,

proteger a membrana contra essa espcie. Durante a sua ao antioxidante (destruindo a cadeia
de lipoperoxidao) nas membranas, o alfa-tocoferol consumido e convertido em forma de
radical.A vitamina E pode tambm proteger contra a peroxidao modificando a estrutura da
membrana (Halliwell & Gutteridge, 1989).
A vitamina E, localizada perto do citocromo P-450 no fosfolipdeo da membrana, varre
os radicais livres formados no citocromo P-450. A seguir, a vitamina C reduz o radical tocoferil.
Os carotenides, principalmente o beta-caroteno, podem funcionar como precursores da
vitamina A. So absorvidos pelos intestinos, e devem tambm atuar como antioxidantes. Tm,
portanto, duplo papel, diminuem a formao do oxignio singlet in vivo, e ajudam a remover
aqueles j formados (Halliwell & Gutteridge, 1989).
A vitamina A tem pouca ao antioxidante e incapaz de agir sobre o oxignio singlet, mas seu
precursor, o beta-caroteno, o mais eficiente ligante desta forma reativa de oxignio encontrada
na natureza e pode agir como antioxidante. O beta-caroteno, um pigmento presente em todas as
plantas, pode ser encontrado em membranas celulares, inclusive nos lipossomos (Machlin &
Bendich, 1987).
A vitamina C (cido ascrbico), hidrossolvel e tambm age contra os radicais livres e
o oxignio singlet. O cido ascrbico participa ainda da regenerao da forma reduzida e
antioxidante da vitamina E (Halliwell & Gutteridge, 1985). O cido ascrbico puro slido,
branco, cristalino e muito solvel em gua. Plantas e animais podem sintetiz-lo, com exceo
de humanos, primatas e cobaias, que no conseguem e necessitam obt-lo na dieta (Halliwell &
Gutteridge, 1989). O cido ascrbico necessrio in vivo como cofator de vrias enzimas,
sendo as mais conhecidas a prolina-hidroxilase e a lisina-hidroxilase, envolvidas na biossntese
do colgeno. A deficincia do ascorbato na dieta humana causa o escorbuto. A mais
impressionante propriedade qumica do ascorbato a sua habilidade para agir como agente
redutor (doador de eltrons).
Existe, ainda, uma srie de outros antioxidantes no enzimticos que participam da
defesa contra as espcies reativas do oxignio nos sistemas biolgicos como, por exemplo, a
ubiquinona, a ceruloplasmina, o cido rico, a taurina, os flavonides e outros compostos
fenlicos de origem vegetal (Halliwell, 1990; Sies, 1991).
A glutationa (GSH) um marcador da sade celular e sua queda indicativa de leso
oxidante. Seu dficit acarreta diminuio da resistncia s drogas e radiaes, da capacidade de
reverso de tumores e da sntese do ascorbato em animais. A glutationa um tripeptdio
composto de aminocidos no essenciais, descrita como um importante agente antioxidante
(Halliwell & Gutteridge, 1985).

A melatonina um antioxidante conhecido, produzido pela glndula pineal e seu

principal hormnio foi descoberto por Lerner em 1958. Tambm produzido em outros tecidos,
tais como retina e intestino grosso (Guyton, 1973).
Recentemente, a melatonina foi descrita como participante da funo imune dos
organismos e como um potente antioxidante. Exercendo a funo de antioxidante, a melatonina
parece desencadear uma proteo substancial contra os radicais livres que so gerados em uma
variedade de situaes experimentais, incluindo a injria por esquemia/reperfuso. Por essa
razo, ela vem sendo utilizada terapeuticamente em cirurgias e transplantes (Reiter &
Maaestroni, 1999).
Alm destes, h vrios nutrientes essenciais de origem mineral, que participam do
processo antioxidante em associao com enzimas. So eles, zinco, cobre, mangans, selnio e
ferro (Halliwell & Gutteridge, 1985).

Antioxidantes enzimticos
Antioxidantes so quaisquer substncias que, quando presentes em pequenas
concentraes, comparadas com aqueles substratos oxidveis, significativamente retardam ou
inibem a oxidao deste substrato e podem agir em diferentes nveis da seqncia oxidativa. Em
1954, Gershman e Gilbert propuseram que a maioria dos efeitos danosos causados pelas
concentraes elevadas de oxignio nos organismos vivos podia ser atribuda formao de
radicais livres. Entretanto, essa idia no despertou interesse de muitos pesquisadores at a
descoberta, em 1968, de uma enzima que especfica para a remoo cataltica de um radical de
oxignio (Mc Cord & Fridovich, 1969). Essa enzima denominada superxido dismutase,
juntamente com outras duas catalase e glutationa peroxidase so as principais defesas
antioxidantes que atuam nos organismos superiores (Halliwell & Gutteridge, 1989).
possvel que a superxido dismutase (SOD) seja substncia com efeitos antienvelhecimento reais, podendo atuar positivamente sobre todos os processos degenerativos
(Hendler, 1990). A superxido dismutase (SOD) tem papel fundamental na defesa do organismo
contra as espcies reativas de oxignio, pois atua na remoo do radical superxido. Antes da
sua descoberta, a SOD j havia sido descrita por alguns autores como uma protena que contm
cobre, mas nenhuma atividade cataltica lhe havia sido atribuda (Halliwell & Gutteridge, 1985).
Aps o trabalho de McCord (1969), entretanto, com a determinao de sua funo na
dismutao do radical superxido (O2-), seu papel foi estabelecido, e at hoje, apesar de
inmeras pesquisas realizadas com esta enzima, nenhum outro substrato foi descrito, mostrando
a sua especificidade para o superxido (Halliwell & Gutteridge, 1985). A forma que contm
cobre e zinco, denominada de superxido dismutase cobre-zinco dependente (CuZnSOD),
muito estvel e parece estar presente em praticamente todas as clulas eucariticas (plantas ou
animais). A CuZnSOD tem um peso molecular de 32000 e constituda de duas subunidades

proticas idnticas, com um tomo de cobre e um de zinco em cada uma delas. O Zn no

funciona no stio cataltico, mas aparece para estabilizar a enzima. Essa concluso foi extrada
de experincias nas quais os metais foram removidos dos stios ativos e recolocados em outros,
sozinhos ou em conjunto (Halliwell & Gutteridge, 1985).
A superxido dismutase dependente do mangans (MnSOD) uma protena de cor rosa,
cujo peso molecular de 40.000 e que contm mangans nos stios ativos. A sua atividade
diminui em pH alcalino. No inibida pelo cianeto, nem pelo di-etil-di-hidrocarbonato.
destruda pelo clorofrmio + etanol (no sobrevive ao mtodos tpicos da purificao para a
CuZnSOD). A atividade da MnSOD em relao a CuZnSOD depende do tecido e das espcies
onde atuam. A remoo do Mn dos stios ativos causa perda da atividade cataltica, no podendo
ser reposto por nenhum on de transio, pois perde a sua atividade funcional. As seqncias de
aminocidos de todas as MnSOD, em todas as espcies, so parecidas e no esto relacionadas
com a CuZnSOD (Halliwell & Gutteridge, 1989). A forma CuZnSOD apresenta-se mais
resistente variaes de temperatura e desnaturao por substncias como cloreto de
guanidina, duodecil sulfato de sdio, ou uria (Halliwell & Gutteridge, 1985).
Quanto a enzima glutationa peroxidase (GPx), esta foi descoberta por Mills em 1959,
em tecidos de mamferos. No se observa sua presena em plantas ou bactrias, embora possa
ser encontrada em algumas algas e fungos (Halliwell & Gutteridge, 1985). As clulas animais
contm dois tipos de glutationa peroxidase, sendo que um deles selnio dependente, enquanto
o outro no.
O primeiro tipo capaz de reduzir qualquer hidroperxido orgnico, alm do H2O2.
Essa forma possui peso molecular de 81.000, uma protena tetramrica e possui um tomo de
selnio em cada subunidade. O segundo tipo, que no depende do selnio, tem peso molecular
de 35.000, dimrico e est apto a reduzir qualquer hidroperxido orgnico, menos o H2O2.
A GPx encontra alta atividade no fgado, moderada atividade no corao, pulmo e
crebro, e baixa atividade nos msculos (Halliwell & Gutteridge, 1989). Na maioria dos
animais, a enzima dependente de selnio responsvel pela maior parte da atividade da GPx,
mas a proporo entre as duas formas varia muito entre as diferentes espcies, bem como de
tecido para tecido em uma mesma espcie. Em ratos, a distribuio da GPx tem sido
extensamente estudada e, em hepatcitos a GPx selnio dependente est localizada
principalmente no citosol e na matriz mitocondrial (Mannervik, 1985). O pH timo para a GPx
prximo de 8,0, mas a enzima continua ativa com valores elevados. Sua atividade mnima
em pH abaixo de 6,0 (Mills, 1959).
A enzima catalase esta presente na maioria das clulas aerbicas, sendo que em animais
se encontra principalmente no fgado, rins e eritrcitos. rgos como crebro, corao e
msculo esqueltico contm, no entanto, pequenas quantidades da enzima (Halliwell &
Gutteridge, 1985). Os nutrientes mais importantes coadjuvantes da catalase so o ferro e os

tocoferis (vitamina E), que se acham distribuidos na membrana celular, na fase hidrofbica. A
catalase evita o acmulo de metahemoglobina e decompe e perxido de hidrognio, um
produto txico do metabolismo, em gua e oxignio molecular (Gaetani et al., 1989). Alm de
seu papel como espcie reativa de oxignio, e, portanto, causador de estresse oxidativo, o H2O2
em excesso causa oxidao da hemoglobina e, conseqentemente, diminuio das concentraes
de oxignio, o que pode acarretar infeces, formao de lceras e at necrose (Wieacker et al.,
1980).
A enzima catalase tem peso molecular de 240.000 e, quando purificada, apresenta
quatro subunidades, cada uma contendo um grupamento (Fe III protoporfirina), ligado ao seu
stio ativo (Wieacker et al., 1980). Com relao ao pH, pode-se observar uma diminuio da
atividade da enzima abaixo de pH 4,0. Na faixa de 4,0 a 8,5, a atividade da catalase permanece
constante, sendo que acima desse valor volta a decair (Chance, 1952). Experimentos tm sido
realizados para avaliar a competio entre as enzimas catalase e glutationa peroxidase em
eritrcitos. Segundo alguns autores, a catalase a enzima que se encarrega de fazer a converso
de altas concentraes de H2O2 em gua e oxignio. Quando o perxido de hidrognio est
presente em baixas concentraes (condies fisiolgicas normais), entretanto, a glutationa
peroxidase que se encarrega de transform-la em gua (Halliwell & Gutteridge, 1985).

Abreviaturas e smbolos
CuZn SOD = Superxido dismutase dependente de cobre e zinco
DNA = cido desoxiribonuclico
ERO = Espcies reativas de oxignio
GPx = Glutationa peroxidase
GSH = Glutationa reduzida
GSSG = Glutationa oxidada
H2O2 = Perxido de hidrognio
HO = Hidroxila
Mn SOD = Superxido dimutase dependente de mangans
NADP = Nicotinamida adenina dinucleotdeo fosfato, forma reduzida
NADPH = Nicotinamida adenina dinucleotdeo fosfato, forma oxidada
O2 = Dioxignio; oxignio molecular
O2- = Superxido
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O2 = Oxignio Singlet

RNAm = cido ribonucleico mensageiro

RO = Radical alcoxil
ROO = Radical Peroxil
ROOH = Hidroperxido Orgnico
SOD = Superxido dismutase

Literatura citada
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