1) Comente sobre a aplicao industrial da biotecnologia?

A biotecnologia a aplicao industrial de microrganismos e de

sistemas biolgicos na produo de bens e servios. Aplicao da
biotecnologia na indstria de alimentos.

Produo de pes, Iogurte, Queijos, lcool e Vinagre.

Alm da produo de bens de consumo, os microrganismos so

tambm utilizados em processos de tratamento de resduos e efluentes
urbanos e industriais, na recuperao de metais, tais como cobre,
chumbo e urnio, ou em processos de biorremediao de solos
contaminados. Os principais produtos da Biotecnologia podem ser
agrupados de acordo com o seu uso, em produtos da indstria
farmacutica (antibiticos, hormnios, vacinas, vitaminas e protenas
teraputicas humanas), da indstria de alimentos (aminocidos,
flavorizantes, polissacardeos e gomas xantana) e da indstria qumica
(etanol, acetona, butanol, glicerol, cido lctico, cido ctrico, polisteres,
inseticidas microbianos).
2) Quais os principais microrganismos utilizados nos processos
biotecnolgicos?
Procariticos: Bactrias.
Morfologia e estrutura das bactrias: Parede celular rgida: peptideoglicano

Exemplos: Bactrias acticas, bactrias lticas e cianobactrias

Eucariticos: Protistas (algas, fungos, protozorios e bolores)
Fungos e algas; Fungos: S. cerevisiae: bebidas alcolicas.
3) Descreva o processo de propagao de um inoculo para dar
incio a um processo fermentativo.

Esta primeira etapa conhecida como upstream. Esta etapa

consiste na preparao do microrganismo com nutrientes adequados,
conforme fonte de carbono, nitrognio e oxignio para o crescimento
do MO.
Nesta etapa o mosto preparado tem-se o ajuste do BRIX,
necessrio colocar os nutrientes necessrios para o MO, logo este ir
iniciar o crescimento, mas necessrio ter o cuidado de colocar o
nutrientes na quantidade correta, demais causa a morte do MO.
Curva de crescimento microbiano

Fase lag (A): esta fase de crescimento ocorre quando as clulas so

transferidas de um meio para outro ou de um ambiente para outro.
Esta a fase de ajuste e representa o perodo necessrio para
adaptao das clulas ao novo ambiente. As clulas nesta fase
aumentam no volume total em quase duas ou quatro vezes, mas no
se dividem. Tais clulas esto sintetizando DNA, novas protenas e
enzimas, que so um pr-requisito para diviso.
Fase exponencial ou log (B): nesta fase, as clulas esto se dividindo
a uma taxa geomtrica constante at atingir um mximo de

crescimento. Os componentes celulares como RNA, protenas, peso

seco e polmeros da parede celular esto tambm aumentando a uma
taxa constante. Como as clulas na fase exponencial esto se
dividindo a uma taxa mxima, elas so muito menores em dimetro
que as clulas na fase Lag. A fase de crescimento exponencial
normalmente chega ao final devido depleo de nutrientes
essenciais, diminuio de oxignio em cultura aerbia ou acmulo de
produtos txicos.
Fase estacionria (C): durante esta fase, h rpido decrscimo na
taxa de diviso celular. Eventualmente, o nmero total de clulas em
diviso ser igual ao nmero de clulas mortas, resultando na
verdadeira populao celular estacionria. A energia necessria para
manter as clulas na fase estacionria denominada energia de
manuteno e obtida a partir da degradao de produtos de
armazenamento celular, ou seja, glicognio, amido e lipdeos.
Fase de morte ou declnio (D): quando as condies se tornam
fortemente imprprias para o crescimento, as clulas se reproduzem
mais lentamente e as clulas mortas aumentam em nmeros
elevados. Nesta fase o meio se encontra deficiente em nutrientes e
rico em toxinas produzidas pelos prprios micro-organismos.
4) O que cultura pura?
Quando microrganismos crescem em meios de laboratrios, d-se a eles
o nome de culturas.
Cultura pura: condio artificial, obtida em laboratrio, onde apenas uma
espcie esta se multiplicando no meio de cultura. Obtida aps uma
sequncia de procedimentos laboratoriais.
5) Faa o fluxograma de um processo fermentativo industrial
genrico e explique todas as fases.

A fermentao a etapa principal e envolve grande necessidade de

controle de todos os fatores que influenciam a qualidade do vinho,
controlando a temperatura, a presso, se as bactrias que realizam a
fermentao so adequadas, a correta quantidade delas e se esto
devidamente alimentadas; alm disso, a higiene do material que recebe o
mosto de uvas deve ser estritamente verificada;
A temperatura deve estar sempre de acordo com os padres de
crescimento das bactrias, pois uma temperatura muito alta ou baixa pode
acelerar o crescimento da populao de leveduras em quantias indesejveis
ou at matar as bactrias j existentes.
A maioria das leveduras normalmente utilizadas se desenvolvem bem
em temperaturas de 25, mas acima dos 30 as bactrias podem morrer.
Geralmente um termostato controla a temperatura automaticamente.
medida que o processo ocorre, os acares da uva so convertidos
em lcool, e h variao na densidade e na temperatura, ficando mais leve
e diminuindo sua temperatura.
Antes da fermentao tem a preparao do inoculo onde fornecido
uma quantidade pequena de glicose para a levedura para que ela cresa,
esse processo tambm conhecido como p de cuba.
Em paralelo feito o preparo do mosto, no caso o suco de uva, este
mosto medido o BRIX e se necessrio feito a chaptalizao.
Estas duas etapas, preparao do inoculo e do mosto so conhecidas
como upstream. Aps o mosto e o p de cuba so misturados em um
fermentador (Dorna).
6) O que so operaes de upstream e downstream?
Exemplifique.
upstream

downstrea
m

Upstream envolve as etapas antes do processo fermentativo, no

caso o preparo no inoculo (p de cuba) e o preparo do mosto.
Downstream envolve as etapas posteriores do processo
fermentativo, separao do produto e purificao.

O grau de purificao depende do destino do produto, no caso do produto

for para uso farmacutico, exige uma purificao de alta resoluo.
7) Diferencie micro-organismos autotrficos e heterotrficos
quanto aos processos de obteno de energia?

8) Quais os macro e micronutrientes utilizados no cultivo de MO?

Componentes bsicos:
MACRONUTRIENTES: Fonte de carbono, nitrognio, oxignio e fsforo.
Fonte de carbono orgnica: glicose, frutose, amido.
Fonte de carbono inorgnico: CO2
Fonte de nitrognio orgnico: Cevada, farinha de aveia.
Fonte de nitrognio inorgnico: NO2 e NO3.
MICRONUTRIENTES: K, Ca, Fe, Mn, Mg, Zn, Cl, Co, Cu, Mb e Se.
Nutrio dos microrganismos
Os microrganismos necessitam de um ambiente propcio com todos os
constituintes fsicos e qumicos necessrios para seu crescimento.
As substncias ou elementos retirados do ambiente so utilizados como
blocos para a construo da clula.
Requeridos em grande quantidades.

Requeridos em pequenas quantidades.

9) Diferencie
subtratos
diretamente
fermentescveis
de
substratos indiretamente fermentescveis. Exemplifique e
indique formas de disponibilizar as matrias-primas ricas em
amido e celulose para o micro-organismo utilizar como fonte
de energia.
O amido e a celulose so ambos polmeros de carboidratos, e para obtermos
quebrarmos este polmero e obtermos a glicose necessrio fazer uma
hidrlise. Os amidos podem ser hidrolisados por via qumica (cidos, calor e
presso) ou por via enzimtica. A celulose hidrolisada por via cida e
enzimtica.
10)
Como
podem
ser
classificados
os
processos
fermentativos quanto conduo dos processos? Compare os
tipos de processos apresentando vantagens e desvantagens.
Formas de conduo de um processo fermentativo.

Descontnuo

Com um inculo por tanque.

Com recirculao de clulas.
Descontnuo alimentado
Sem recirculao de clulas.
Com recirculao de clulas.

Semi-contnuo
o

Sem recirculao de clulas.

Com recirculao de clulas.

Contnuo

Fermentao descontnua ou fermentao em batelada;

Processo fermentativo caracterizado pela inoculao e incubao de
microrganismos, de tal forma, a permitir que a fermentao ocorra sob
condies timas. Neste tipo de produo, nada adicionado, exceto
oxignio (processo aerbio), cido ou base (controle de pH) ou
antiespumante.
Descontnuo simples batelada - Sem recirculao de clulas
Vantagens:
-Fcil operao;
-Menor risco de contaminao;
-Construo e instrumentao simples e barata;
-Processo adequado para curtos perodos de tempo;
-Versatilidade de usos;
Desvantagens:
-Esgotamento do meio de cultivo e acmulo de compostos txicos ou
degradao do produto;
-Menor produtividade volumtrica;
-Preparo do reator entre uma batelada e outra reduz tempo til e aumenta
custos.
Descontnuo com recirculao de clulas
H o reaproveitamento como inculo, o microrganismo da batelada
anterior (comum em destilarias de lcool):
Sedimentao no fermentador (cervejarias)
Centrifugao do meio fermentado Tendncia em aumentar o nmero de
contaminantes a cada nova batelada Leite de lvedo (suspenso altamente
concentrada) com gua e cido sulfrico 2 a 3 h sob agitao: elimina
contaminantes e clulas que j se apresentem em fase de degenerao.
Processo Semicontnuo sem recrculos de clulas.

Semicontnuo com recirculao de clulas

Quando o meio retirado do fermentador na operao 2, pode-se
centrifug-lo e reaproveitar as clulas adicionando-as junto ao novo meio na
operao 3.

Semicontnuo Vantagens:
a)Possibilidade de operar o biorreator por longos perodos de tempo (meses)
sem que seja necessrio preparar um novo inculo;
b)Possibilidade de, uma vez conhecidas as melhores condies de operao,
conseguir produtividade significativamente maior do que a obtida em
processo descontnuo
Descontnuo alimentado Batelada alimentada (fed-batch)
Fermentao descontnua continuamente alimentada com nutrientes

Vantagens:
-Controle de oferta de substratos s clulas:
1)Permite alta concentrao de substratos indutores;
2)Impede o efeito de represso catablica (presena de alta concentrao
de substrato inibe
a sntese de compostos de interesse ocorre muito com enzimas e
antibiticos);
3)Mantm baixa concentrao de substratos inibitrios para formao de
produto (cido ctrico)
-Permite obteno de alta concentrao celular
Desvantagens:
-Maior risco de contaminao
-Maior necessidade de controle do processo (adio nutrientes)

Contnuo
Bioprocessos Mais utilizados em bancada para desenvolvimento de
processos, no so muito usados industrialmente. So mais usados no
tratamento de resduos onde no h preocupao com contaminao !
Contnuo
Vantagens
- Maior produtividade volumtrica
- Controle da velocidade de crescimento e manuteno da atividade
metablica celular por longos perodos de tempo;
- Menor perda de tempo til.
11)
Como
podem
ser
classificados
os
processos
fermentativos em estado slido e submerso? Apresente
caractersticas de cada um.
Classificao referente ao modo de cultivo (quantidade de gua no meio).
Biorreatores para fermentao submersa e fermentao semi-slida.
Fermentao submersa;

MO introduzido em um meio slido na forma de inoculo

Utiliza meio fermentativo lquido, com nutrientes solveis.
Fermentadores com controle de agitao e aerao, medidores de
pH, T e concentrao de oxignio dissolvido.

Fermentao semi slida; aproveitamento de resduos.

Cultura de MO sobre ou dentro de partculas em matriz slida, onde o
contedo de lquido ligado a ela est a um nvel de atividade de gua que
assegure o crescimento e metabolismo das clulas e no exceda a mxima
capacidade de ligao da gua com a matriz slida.
O termo fermentao em estado slido, ou fermentao semi-slida, ou
fermentao em meio semi-slido aplica-se ao processo de crescimento de
microrganismos sobre substratos slidos sem a presena de gua livre. A
gua presente nesses sistemas encontra-se ligada fase slida, formando
uma fina camada na superfcie das partculas (Raimbault, 1998).
A FSS, tambm, apresenta as seguintes caractersticas:
A fase slida atua como fonte de carbono, nitrognio e demais
componentes, alm de servir como suporte para o crescimento das clulas
microbianas.
O ar, necessrio ao desenvolvimento microbiano, deve atravessar os
espaos vazios do meio a presses relativamente baixas. O substrato no
deve apresentar aglomerao das suas partculas individuais.

 O crescimento microbiano ocorre em condies mais prximas s dos

habitats naturais.
O meio apresenta alta heterogeneidade e os substratos no esto
completamente acessveis ao microrganismo
12)
Que biorreatores so mais utilizados para a fermentao
em estado slido e submerso? Apresente caractersticas de
cada um.
Reatores em fase aquosa (fermentao submersa);
Clulas/ enzimas livres;
Reatores agitados mecanicamente (STR Stirred tank reactor) ou
reatores de mistura.
Reatores agitados pneumaticamente.

Coluna de bolhas.
Reatores air lift.

Reatores de fluxo pistonado.

Reatores agitados mecanimente: agitao mecnica favorece a
homogeneizao, suspenso de slidos, disperso gs-lquido
aerao e a transferncia de calor e massa.
Reatores agitados pneumaticamente:
Air-lift: Possui duas regies de escoamento, uma para cima e uma
para baixo, estes canais possibilitam a circulao de lquido em
grande escala em torno do reator. Aplicao delicada em funo da
ampliao de escala mais flexvel s mudanas de processo que o
STR, mas ele reduz o perigo de contaminao, facilita a limpeza e
esterilizao porque no tem partes mecnicas mveis.
Biorreatores coluna de ar/bolha;
Ponto de vista construtivo mais simples cilindro com fundo e tampas
abauladas serpentinas de resfriamento internas ou externas entrada
de ar pelo fundo.
Exemplo de aplicao: produo de cido ctrico at antibiticos.
Reatores de fluxo pistonado
O fluxo contnuo e o tempo dentro do reator curto, por isso
utilizado para reaes rpidas.
Altas vazes so empregadas.
Clulas imobilizadas em suportes.

Usam a estrutura fsica de confinamento, obrigando as clulas a

permanecerem em uma regio particular do biorreator.
Reatores com menor tamanho quando comparado com reator com
enzima livre.
Tipos de biorreatores;
Reatores com leito fixo (Reator de leito recheado); impede a
movimentao relativa das partculas, clulas ou enzimas
imobilizadas. um tubo vertical empacotado com partculas de um
biocatalizador.
Reatores com leito fluidizado: movimentao intensa de partculas,
fluidizao por injeo de ar ou recirculao de lquido no interior do
reator.
Vantagens:

Alta taxa de transferncia e homogeneizao;

Baixo atrito;

No h problemas de entupimento

Boa produtividade volumtrica;

FERMENTAO SEMI SLIDA OU F. EM ESTADO SLIDO;

Reatores em fase no aquosa;

Reatores estticos ( com bandejas);

Reatores com agitao ( tambor rotativo);

Reatores com leito fixo;

Reatores com leito fluiidizado;

Reatores com bandejas; so bastantes limitados no que se refere a

condies de transferncia de oxignio e controle de condies ambientais
do processo.
Reatores com agitao ( Tambor rotativo);
O reator tipo tambor rotativo apresenta uma melhor transferncia de
oxignio e homogeneizao do meio atravs de agitao.

13)
Quais as vantagens e desvantagens da fermentao em
estado slido?
Vantagens
Acelerao taxa reao
Volume reator menor
Aerao acessvel ao MO
Produto final concentrado
Agitao leve
Custos menores
Substrato simples
Recuperao do produto
Menor produo de resduos

Desvantagens
Dificuldade de dissipar calor
Dificuldade de ampliao de escala
Maior
gasto
energtico
para
agitao
Dificuldade
para
controle
de
processo
Grande quantidade de inoculo
Dificuldade de coleta de amostra
Uso limitado de MO
Controle de Temperatura crtico
Pr tratamento do substrato.

14)
Diferencie biorreatores
pneumaticamente?

agitados

mecanicamente

O Reator Air-lift ( agitado pneumaticamente) mais flexvel s

mudanas de processo que o STR.

Pneumaticamente o risco de contaminao menor, pois a limpeza

facilitada, porque no tem partes mecnicas mveis.

Agitao pneumaticamente realizado por meio de adio de ar.

Agitao mecanicamente Auxlio de ps.

15)
Qual a fase da curva de crescimento microbiano em
que deve ser realizada a transferncia de um biorreator para
o outro, durante o preparo do inoculo?
Explique essa fase.