MEDICIN DE LA CINTICA ENZIMTICA DE LA

GLUCOSA-OXIDASA
Alejandra Daz, Julin Gmez, Paola Prieto y Nathalie Suarez
RESUMEN
Los estudios de las reacciones biolgicas
catalizadas por enzimas, son de gran
importancia a nivel de salud, debido a que
varias de estas pueden desencadenar diversos
trastornos metablicos como la diabetes, si el
organismo no responde de manera adecuada.
Con el fin de encontrar tratamientos que
diagnostiquen de manera oportuna y que
permitan controlar la concentracin de sustratos
en fluidos corporales, se han desarrollado
investigaciones para analizar la cintica
enzimtica de una gran variedad de reacciones
biolgicas. Es por esto, que en el presente
laboratorio, se estudi la reaccin de oxidacin
de la glucosa en presencia de glucosa oxidasa
como enzima catalizadora. Para esto, se realiz
un anlisis espectrofotomtrico para calcular la
concentracin de glucosa en el tiempo,
alterando factores como la cantidad de sustrato,
el pH de la muestra y la presencia de un
inhibidor, que nos permitieran concluir sobre el
efecto que tienen estas variables en la reaccin
enzimtica en estudio. Fue as como se lleg al
resultado de que en presencia de una cantidad
significativa de inhibidor, la velocidad a la que
vara la concentracin de glucosa en el tiempo
disminuye, al igual que al alterar el pH de la
solucin. Adems, se lograron calcular los
parmetros Km y Vmax de esta reaccin al
ajustarla a la cintica Michaelis-Menten,
obteniendo valores para estos de 0,1051 y -4,78
respectivamente.

INTRODUCCIN
Las enfermedades generadas por altos y bajos
niveles de glucosa en la sangre afectan a una
gran cantidad de personas a nivel mundial. Un
ejemplo de esto es la diabetes, que se produce
cuando la insulina que secreta el pncreas es
insuficiente, impidiendo que esta hormona
controle el azcar que se encuentra en la sangre

(Organizacin Mundial de la Salud, 2014),

aumentando los niveles de glucosa disuelta en
este fluido fisiolgico. Por el contrario, la
hipoglucemia es la enfermedad que se origina
por el descenso de nivel de glucosa en la sangre
generalmente por malos hbitos alimenticios
(The Scott Hamilton CARES Initiative, 2015).
Segn las estadsticas del 2014 de la
Organizacin Mundial de la Salud (OMS), en el
mundo hay ms de 347 millones de personas
con diabetes, mientras que de acuerdo con el
estudio Donelli Staldiabement llevado a cabo en
el 2005, 42.9% de las personas que padecen de
diabetes presenta hipoglucemia (NTR, 2014).
Es por esto, que la determinacin de la
concentracin de glucosa en fluidos fisiolgicos
es relevante, ya que permite el diagnstico
oportuno de estas alteraciones en el organismo.
Actualmente, existen 3 mtodos mdicos para
cuantificar el nivel de glucosa, que son la
prueba de tolerancia oral a la glucosa, la prueba
de glucosa sangunea en ayuno y la prueba de
glucosa sangunea a cualquier hora del da (BD,
2015). Sin embargo, para obtener los resultados
de estas pruebas se requiere de varias horas,
incluso das. Es por esto, que se estn
intentando desarrollar nuevos mtodos para
determinar la concentracin de glucosa en
fluidos corporales, que permitan obtener
resultados
en el menor tiempo posible,
utilizando una cantidad reducida de reactivos y
con la ventaja de poder automatizar los
procesos (Medicin de la cintica enzimtica de
la glucosa-oxidasa, 2015).
Un ejemplo de lo anterior, es el desarrollo de
biosensores, que son dispositivos bioqumicoselectrnicos capaces de identificar, transformar
y cuantificar una situacin biolgica (Lpez
Rodriguez).Existen biosensores de enzima, que
combinan un transductor y una capa delgada
enzimtica, los cuales son usados generalmente
para cuantificar la concentracin de un sustrato
debido a que a travs de la reaccin enzimtica
se convierte al sustrato en un producto que

puede ser detectado por el transductor (Lpez

Rodriguez).
Sin
embargo,
como
la
concentracin de la sustancia se cuantifica
teniendo en cuenta la influencia que genere su
presencia a la velocidad de reaccin enzimtica
(Lpez Rodriguez), se deben analizar los
parmetros Km y Vmax , propios de este tipo
de reacciones, para poder predecir la
concentracin del sustrato en el tiempo.
Fue as, como en el presente laboratorio se
busc medir la cintica enzimtica de la
oxidacin de glucosa en presencia de glucosa
oxidasa partir de la reaccin Trinder, la cual ha
sido
ampliamente
utilizada
para
la
determinacin de glucosa en fluidos biolgicos
en laboratorios clnicos (AccuLine Plus):

cantidad de inhibidor (azida de sodio), con el

fin de determinar su efecto en la reaccin en
estudio.
Para determinar los parmetros de la cintica
deseados, es decir Km y Vmax, se ajust la
cintica enzimtica de la oxidacin de la
glucosa a la expresin de la forma MichaelisMenten, que logra explicar la mayora de las
reacciones catalizadas por enzimas:

r s=

Donde Km y Vmax estn dados por:

V max =k 3 C w C et (2)
K m=

Imagen 1. (2015.). Recuperado en March 30, 2015, de:

https://sicuaplus.uniandes.edu.co/webapps/blackboard/execute/
displayLearningUnit?
course_id=_56925_1&content_id=_1108941_1&framesetWrap
ped=true

Como se puede observar en esta imagen, la

glucosa oxidasa acta como catalizador en la
reaccin de oxidacin de glucosa que genera
como productos cido glucnico y perxido de
hidrogeno. Este ltimo compuesto conlleva a la
oxidacin de la o-dianisidina en presencia de
peroxidasa, para dar lugar a un tinte de
quinonimina rojo que colorea la muestra, y cuya
intensidad
vara
dependiendo
de
la
concentracin de glucosa en la solucin
(AccuLine Plus). Esta se puede cuantificar a
partir de una anlisis espectrofotomtrico a
545nm, dado que la oxidacin de la odianisidina
absorbe
fuertemente
luz
monocromtica
a esta longtud de onda
(Medicin de la cintica enzimtica de la
glucosa-oxidasa, 2015). Adems, en esta
prctica se modificaron factores como la
concentracin de sustrato (Glucosa), pH en el
que se da la reaccin (adicionando HCl) y

V max Cs
(1)
C s+ K m

k 2+ K 3 C w
(3)
K1

Teniendo en cuenta que la reaccin enzimtica

que se llev a cabo en el presente laboratorio,
pudo ser planteada a partir del siguiente
mecanismo, donde S corresponda al sustrato, E
la enzima libre, ES el complejo sustrato
enzima, W agua y P el producto (Medicin de la
cintica enzimtica de la glucosa-oxidasa,
2015), se pudo establecer la concentracin total
de enzima

C et , ya que se supuso que esta

era constante al igual que la concentracin de

agua (Cw):

Imagen 2. (2015.). Recuperado en March 30, 2015, de:

https://sicuaplus.uniandes.edu.co/webapps/blackboard/execute/
displayLearningUnit?
course_id=_56925_1&content_id=_1108941_1&framesetWrap
ped=true

C et=Ce +
Donde

K 1 Ce C s
(3)
K 2+ k 3 C w

C e=

C et ( K 2+ K 3 C w )
(4)
K 2 + K 3 Cw + k 1 C s

Por otro lado, teniendo en cuenta que la relacin

estequiometrica entre la o-dianisidina oxidasa
(CDO) y la glucosa era 1 a 1, se pudo calcular la
cantidad de glucosa consumida en la reaccin a
partir de la formacin de o-dianisidina oxidasa
(Medicin de la cintica enzimtica de la
glucosa-oxidasa, 2015), ya que como se
mencion
anteriormente
el
anlisis
espectrofotomtrico se realiz a la longitud de
onda que absorbe este sustancia. Por tanto se
pudo hacer uso del modelo de Beer-Lambert:

A ( t ) A blanco =L C DO (5)
Donde

A (t)

en el tiempo,

corresponda a la absorbancia

A blanco

a la absorbancia del

blanco, el coeficiente de extincin de

sustancia analizada, L la longitud de la celda
que generalmente es de 1 cm y

C DO

era la

concentracin del producto rosado (Medicin

de la cintica enzimtica de la glucosa-oxidasa,
2015).
A nivel industrial se debe tener sumo cuidado
con los reactivos y productos, ya que la azida de
sodio (NaN3), es extremadamente reactiva y
puede llegar a ser fatal si es ingerida o
absorbida por la piel. (Universidad de Sonora,
2001). De igual forma por ser una sustancia
mutagenica se la debe tratar como un posible
carcingeno y por tanto el lmite recomendado
de exposicin segn la National Institute for
Occupational Safety and Health (NIOSH) no
debe exceder 0,3mg/m3 (Departamento de Salud
y Servicios para Personas Mayores de New
Jersey, 1986).
En cuanto al cido clorhdrico (HCl), se sabe
que a concentraciones altas del gas, es
altamente corrosivo a la piel y membranas
mucosas, generando dificultad para respirar.
Por tanto se recomienda que sus niveles se
encuentren por debajo de 7mg/m3 (Hoja de
Seguridad III- Acido Clorhidrico). De igual

forma si pone en contacto el lquido o los

vapores de esta sustancia con los ojos, puede
causar quemaduras y hasta prdida total de la
visin. Por otro lado, el reactivo trinder podra
ser fatal si es ingerido o si se pone en contacto
con la piel, ya que es un toxico de nivel 4
(Sigma- Aldrich, 2013). Es por esto, que se
debe procurar realizar los anlisis en
laboratorios
ventilados,
preferiblemente
manejando los reactivos en cabinas de
extraccin, tener en los laboratorios kits de
derrames, almacenar los reactivos teniendo en
cuenta las incompatibilidades y la MSDS de
cada uno (Ministerio de Trabajo e Inmigracin,
1997) y utilizando el material de seguridad
obligatorio, es decir, batas, gafas, guantes y si
es necesario mascaras para evitar inhalar gases
y vapores.
En cuanto al impacto ambiental generado por
este tipo de anlisis qumico, se puede
establecer que se encuentra ms relacionado
con los ecosistemas acuferos. Esto se debe a
que la azida de sodio y el Trinder son toxicas
para los organismos que viven en el agua, ya
que a pesar de la dilucin, el compuesto
produce mezclas peligrosas con esta sustancia.
Adems, la NaN3 tiene efecto herbicida y
nematicida,
que
puede
alterar
significativamente la cadena trfica (Favela
Pro).Por tanto, para mitigar estos efectos, se
debe procurar no desecharlos por las tuberas ni
drenajes, tampoco deben ser enviados a la
atmosfera o ser enterrados debido al riesgo de
ser nuevamente liberados, sino que se debe
procurar antes de desecharlos, reducir su
toxicidad en el laboratorio a partir del
conocimiento de las propiedades qumicas del
compuesto. De igual forma, se podra intentar
incinerar los lquidos en un equipo adecuado, en
el que se puedan retener por aspiracin los
vapores a travs de un filtro de gran eficacia
(Gadea Carrera).
METODOLOGIA
El mtodo usado en esta prctica de laboratorio
fue la espectrofotometra, ya que a partir de este
se puede determinar la cantidad de luz
monocromtica que absorbe una muestra en
estudio, y por ende le concede al operador

conocer la concentracin de determinada

sustancia en dicha solucin. Esto, se pude ver
representado en la siguiente imagen:

Imagen 3. Chirinos, A., Guarenas, A., & Sanchez, M. (n.d.).

Calidad del Agua. Recuperado en March 29, 2015,
de:http://www.monografias.com/trabajos40/calidad-aguamiranda/calidad-agua-miranda2.shtm

Como se observa en la imagen 3, el

espectrofotmetro cuenta con una lmpara, un
lente, un monocromador, un detector y un
amplificador. Estos elementos permiten que el
equipo arroje en su pantalla el valor de la
absorbancia de la muestra, ya que, en primer
lugar, al ingresar la longitud de onda por el
operario, el quipo emite un haz de luz por
medio de un bombillo, que luego se
descompone por el monocromador, el cual asla
las radiaciones de longitud de onda deseada que
inciden o se reflejan desde el conjunto (Juanto,
2005). Teniendo en cuenta que la muestra en
estudio ya se encuentra dentro del equipo, esta
comienza a absorber fotones de luz, y aquellos
que logran atravesar la muestra son
cuantificados por el detector, quien enva la
seal al amplificador para que se logre mostrar
en la pantalla la absorbancia de la solucin que
se encuentra en la celda, y as determinar la
concentracin de la misma a partir de la Ley de
Beer.

consista en agua desionizada, utilizando una

longitud de onda fija durante toda la
experimentacin de 545nm. A continuacin, se
adicion a una cubeta de plstico de 3mL,
1.8mL de la solucin de concentracin
desconocida y 0.2mL de Trinder, que es un
reactivo indicador colorimtrico (Nutrianalisis,
s.f.), y se procedi a introducir esta cubeta y el
blanco en el espectrofotmetro. De esta manera
se registr la absorbancia de la solucin cada 30
segundos por 15 minutos y luego cada minuto
hasta completar 30 minutos o hasta que se
estabilizara la medida (Medicin de la cintica
enzimtica de la glucosa-oxidasa, 2015). Este
procedimiento se repiti para la solucin de
50mg/L de glucosa y para la solucin de la
misma concentracin pero con 2 gotas de HCl.
Para la segunda sesin se llev a cabo el mismo
procedimiento que en la sesin anterior, pero
utilizando dos soluciones diferentes. Ambas con
1.8mL de glucosa 50mg/L y 0.2mL de Trinder,
pero con la variacin de que la primera solucin
contena 0,5mL de Azida de sodio como
inhibidor, mientras que a la segunda se le
adicion 0,2mL de esta misma sustancia.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Con el objetivo de obtener la grfica de la
concentracin de la glucosa con respecto al
tiempo, se realiz la curva de calibracin
mostrada en la introduccin de la gua de la
prctica de laboratorio, utilizando los datos que
se encuentran en la tabla 1 de ese documento,
con el que se obtuvo la siguiente grfica:

Esta prctica de laboratorio se dividi en 2

sesiones; la primera consista en determinar el
efecto que tena la concentracin de sustrato y
el pH en la reaccin en estudio, mientras que la
segunda tena como objetivo establecer la
influencia de un inhibidor en la misma reaccin.
Para esto, en la primera sesin se prepararon 3
soluciones de glucosa en balones aforados, una
de ellas con una concentracin desconocida de
este sustrato, otra de concentracin 50mg/L de
glucosa, y la ultima de la misma concentracin
pero adicionndole 2 gotas de HCl. Luego, se
calibr el espectrofotmetro con el blanco, que

Grfica 1. Curva de calibracin: Absorbancia (545 nm) Vs.

Concentracin de glucosa (mg/L)

Para realizar la lnea de tendencia, se prob, en

primer lugar, una regresin lineal; sin embargo
el R2 que alcanz fue de 0,9185. Luego, llevo a
cabo una regresin polinmica, y al visualizar
que se ajustaba un poco mejor a los datos, se
modific el orden de ste hasta que se encontr
que la curva que mejor se adecuaba a estos era
polinmica de grado 3, ya que el R 2 que se
obtuvo fue de 0,9902 como se puede ver en la
grfica 1.
A partir de la ecuacin obtenida en la grfica
anterior, se pudo determinar la concentracin de
la glucosa, ya que en trminos de las variables
en estudio, esta queda:

As mismo, se puede observar que el primer

valor de concentracin registrada se encontraba
en 6.56mg/L mientras que el siguiente fue de
10.41mg/L, por lo que se puede decir que en los
primeros segundos de la toma de datos de la
absorbancia, la concentracin de glucosa en la
muestra cambio abruptamente. Esto, se pudo
generar, porque la azida no se encontraba, en
principio, bien mezclada en la solucin, por lo
cual se pens en descartar este dato, para
realizar los clculos que se muestran ms
adelante.

En cuanto a la curva que corresponde a una

solucin de glucosa de 50mg/L, se puede
observar
que la velocidad a la que cambiaba la
3
Absorbancia ( t )=9 106 [ glucosa ] 0,0007 [ glucosa
] 2+ 0,0221 [ glucosa
] +0,0146era
(6) elevada,
concentracin
de glucosa
alcanzando valores finales altos cercanos a
40mg/L, comportamiento semejante al de la
Para conocer la concentracin de la glucosa en
curva correspondiente a la solucin con 0.2mL
el tiempo, se realiz un solver para cada uno de
de azida. Adems, como se observa en la
los valores de la tabla 15 en la que se
grfica 2, existe una discontinuidad entre la
encuentran registradas las absorbancias
concentracin de glucosa registrada a los 45 y
obtenidas experimentalmente correspondientes
46 minutos, ya que la diferencia entre estos dos
a un tiempo especfico, obteniendo como
valores era mucho mayor en comparacin con
resultado los valores para la concentracin de
los datos registrados hasta ese momento. Este
glucosa en el tiempo para cada uno de los casos
error, se pudo generar porque los valores de
en estudio (ver tablas 1-5). Esto, permiti
absorbancia registrados en la tabla 15 de
obtener la grfica que se muestra a
anexos, no se tomaron exactamente en el
continuacin:
tiempo estipulado sino unos segundos despus,
debido a que el espectrofotmetro no arrojaba el
valor en el momento preciso en que se hunda el
botn para que la pantalla mostrara el dato
correspondiente.

Grfica 2. Concentracin de glucosa Vs tiempo

Como se puede observar, la solucin de glucosa

50mg/L que contiene 0.2mL de azida, es la que
presenta una variacin de concentracin de
glucosa ms rpida en comparacin con las
otras 4 muestras, ya que en los primeros 28
minutos, aproximadamente, crece de manera
rpida mientras que despus de este tiempo la
concentracin varia a una tasa constante, como
estabilizndose alrededor de los 46 minutos.

Para la curva que representa la solucin de

glucosa de 50mg/L con HCl, se puede visualizar
que la velocidad a la que vara la concentracin
de glucosa es menor con respecto a las dos
curvas analizadas anteriormente. De igual
forma, como se logra observar en la grfica 2, el
tiempo que tarda en estabilizarse esta curva es
mayor en comparacin con las otras 4
soluciones.
Las curvas que representan las soluciones de
concentracin desconocida y de 50mg/L con
0,5mL de azida tienen un comportamiento
similar. Esto se puede afirmar, debido a que
como se observa en la grfica anterior, la forma
de crecimiento de la concentracin de glucosa

tiene la misma forma en ambas, por lo que se

podra decir que la tasa a la que cambia la
concentracin con el tiempo es la misma, pese a
que los valores de concentracin sean
diferentes. Aunque en la grfica 2, se observe
que las curvas se encuentren representadas
hasta los 46 minutos, no quiere decir que a ese
tiempo se logren establecer, sino que el tiempo
de experimentacin solo nos permiti tomar
datos por este tiempo para ambas muestras.
A partir de lo anterior, se puede decir que se
presenta un problema con la solucin de
glucosa de 50mg/L con 0,2 mL se azida, ya que
tericamente se esperaba que al adicionar a la
solucin de glucosa el inhibidor, se disminuyera
la actividad enzimtica, es decir que la
velocidad a la que cambiara la concentracin de
glucosa disminuyera, como est estipulado
tericamente. Esta discrepancia, tendra como
posible explicacin que el volumen adicionado
de azida en esta muestra, es decir 0,2mL no fue
el suficiente para reducir la actividad
enzimtica, ya que para la muestra en la que se
agreg 0,5mL del inhibidor s se logr
disminuir la tasa a la que la concentracin
variaba con el tiempo. Adems, se puede decir
que la presencia del pH en la reaccin afecta
directamente la concentracin de glucosa en el
tiempo, ya que como se observa en la grfica 2,
la solucin de 50mg/L con 2 gotas de HCl
disminuye la tasa de crecimiento de la
concentracin de sustrato en la muestra.
Lo anterior tambin se puede evidenciar en la
siguiente grfica de velocidad vs concentracin:

En la grfica 3, la solucin de 50mg/L con 2

gotas de HCl, la reaccin inicia con un
incremento acelerado en la velocidad de la
reaccin. Posteriormente, cuando sobrepasa
una
concentracin
de
17
mg/L
aproximadamente, demuestra una cada
rpida en la velocidad de reaccin, por lo cual
se obtiene una concentracin menor en
comparacin a la reaccin de la misma
solucin de glucosa, pero en ausencia de HCl.
Al comparar estos resultados con la teora,
encontramos que son congruentes, ya que la
actividad enzimtica es muy sensible a los
cambios en el pH y cada protena tiene un
valor ptimo de operacin, o si no se puede
provocar su desnaturalizacin (Maas, s.f.).
Para el caso de la glucosa oxidasa, su valor
ptimo de pH oscila entre 3 6,5 (Sosa
Romero & Galvis Franco, 2010), por lo que
se puede concluir que al adicionar HCl a la
solucin, el pH descendi a valores cercanos
a 3.
Luego de calcular la velocidad de reaccin para
los casos de concentracin
es posible
determinar
los
parmetros
cinticos
correspondientes a velocidad mxima terica de
la reaccin (Vmx) donde se asume que todas las
molculas de enzima estn unidas al sustrato y
constante de Michaelis (Km) que refleja la
afinidad de la enzima por el sustrato (Cintica
enzimtica, 2009) a travs de diversos
diagramas1 tales como Lineweaver-Burk, EadieHofstee , Hanes- Woolf y regresin no lineal .
La utilidad de estos diagramas radica en que se
facilita el clculo de los parmetros cinticos
antes mencionados. (Bioqumica, 2005)

Grfica 3. Velocidad de reaccin vs concentracin de glucosa

(50 Mg/L) con presencia y ausencia de HCl

Lineweaver-Burk

1 Cada grfica proporciona la

ecuacin de su regresin
correspondiente, sin embargo en la
parte de anexos en la Tabla 6 se
encuentra un resumen con estas
ecuaciones

Se hizo un ajuste a una regresin lineal teniendo

en cuenta el conjunto de ecuaciones (7)
graficando

1
1
vs
V [S] .

50 mg /L

0,6226

-1,9794

Eadie-Hofstee

Para determinar los parmetros cinticos a

travs del diagrama de Eadie-Hofstee
nuevamente se hace un ajuste a una regresin

KM
V Max
( 7 ) Intercepto eje y= 1
KM
1
Intercepto eje x=
V Mx
Pendiente=

lineal donde se grfica

V vs V /[S ] , esta

vez tomando el conjunto de ecuaciones (8) que

Pendiente=K M
Intercepto eje y=V Mx
(8)
V Mx
Intercepto eje x=
KM

Grfica 4. Diagrama de Lineweaver-Burk para concentracin

desconocida de glucosa
Grfica 6 Diagrama de Eadie-Hofstee para concentracin
desconocida de glucosa

Grfica 5 Diagrama de Lineweaver-Burk para concentracin

de glucosa 50 mg/L
Tabla 7 Parmetros cinticos determinados por diagrama de
Lineweaver-Burk
Concentracin
glucosa
Desconocida

de

VMx

KM

0,1051

-4,78

Grfica 7 Diagrama de Eadie-Hofstee para concentracin de

glucosa 50 mg/L

Tabla 8 Parmetros cinticos determinados por el

diagrama de Eadie-Hofstee
Concentracin
glucosa
Desconocido
50 mg/L

de

VMx

KM

0,144
0,654

4,078
1,764

Regresin no lineal

Grfico de Hanes-Woolf

Nuevamente se hace una regresin no lineal a

partir del grfico obtenido por

[S]
V

vs [S]

por el conjunto de ecuaciones (10)

Al realizar una regresin no lineal graficando la

velocidad de reaccin y la concentracin sobre
los datos obtenidos experimentalmente se
obtienen las siguientes grficas asumiendo que:

V Mx
=K M (9)
2

( 10 )

Pendiente=

V Mx
KM
Intercepto eje y=
V Mx
Intercepto eje x=K M

Grfica 8 Regresin no lineal para concentracin de glucosa

desconocida

Grfica 10 Grfica de Hanes-Woolf para concentracin

desconocida de glucosa

Grfica 9 Regresin no lineal para concentracin de glucosa

50 mg/L
Tabla 9 Parmetros cinticos determinados por regresin no
lineal
Concentracin
glucosa
Desconocida
50 mg/L

VMx

KM

0,44
1,0378

13,1938
37,9431

Grfica 11 Grfica de Hanes-Woolf para concentracin

glucosa 50 mg/L

Tabla 10 Parmetros cinticos determinados por el

grfico de Hanes-Woolf
Concentracin
glucosa
Desconocido
50 mg/L

de

VMx

KM

0,0737
0,525

-6,402
-40,805

Para establecer cul de estos mtodos se ajusta

ms a los datos experimentales se usan los
parmetros cinticos calculados para cada
mtodo y se reemplazan en la ecuacin (1).
De esta manera se obtienen los diferentes
valores para la velocidad de reaccin a partir de
los parmetros cinticos de Vmx y Km
calculados por los mtodos mencionados
anteriormente.
Grfica 13 Comparacin mtodos para concentracin de
glucosa 50 mg/L

Contrario al caso anterior, para la concentracin

de glucosa 50 mg/L el mtodo que ms se ajusta
a los datos experimentales es el diagrama de
Lineweaver-Burk. Nuevamente el diagrama de
Eadie-Hofstee y la regresin no lineal muestran
similitudes.
Para el caso del inhibidor se grafica la
concentracin y el tiempo con el fin de obtener
una regresin lineal que modela el
comportamiento para los casos de las dos
muestras con volmenes de 0.5 y 0.2 mL de
azida
de
sodio.
Grfica 12 Comparacin
desconocida glucosa

mtodos

para

concentracin

Se puede decir que para la concentracin

desconocida de glucosa, ningn mtodo se
ajusta a los datos experimentales, los diagramas
de Hanes-Woolf y Lineweaver-Burk muestran
ciertas similitudes entre s al igual que la
regresin no lineal y el diagrama de EadieHofstee.

Grfica 14 Regresin no lineal Concentracin vs tiempo 0.5

ml de azida de sodio

Grfica 15 Regresin no lineal Concentracin vs tiempo 0.2

ml de azida de sodio

Al derivar estas ecuaciones es posible obtener la

velocidad de reaccin y haciendo uso del
diagrama de Lineweaver- Burk es posible
determinar los parmetros cinticos Vmx y Km
ya que este modelo tiene en cuenta la
inhibicin.

Grfica 17 Diagrama de Lineweaver-Burk para muestra con

0.2 mL de azida de sodio
Tabla 11 Parmetros cinticos para los volmenes de azida de
sodio
Volumen
(mL)
0.5
0.2

azida

VMx

KM

6,211
0,291

72,58
10,395

Grfica 18 Comparacin entre mtodos muestra azida de

sodio 0.5 mL
Grfica 16 Diagrama de Lineweaver-Burk para la muestra con
0.5 mL de azida de sodio

A partir de esta grfica puede verse que para

concentraciones muy pequeas se ajusta el
diagrama de Lineweaver-Burk .

Utilizando la funcin Ode45 de MatLab, para

las condiciones temporales del reactor se
observa en la Grfica 20, la concentracin
desconocida de glucosa. Aun as tal
concentracin se fij en el programa como la
concentracin de estabilizacin obtenida en la
Grafica 2 para la sesin 1, la cual es
16,173mg/L.

Grfica 19 Comparacin entre mtodos muestra azida de

sodio 0.2 mL

Puede decirse que el diagrama de Lineweaver

Burk no se ajusta en lo absoluto para la muestra
de azida 0.2 mL.
Simulando en la herramienta computacional
Matlab, una conversin en el tiempo para un
Reactor Batch, de glucosa en cido gluconico.
Para la simulacin del reactor se sabe que:

dX
N Ao
=r A . .V (11)
dt
dCA
=r A (12)
dt

Grfica 20 Conversin de Glucosa con concentracin 16,173

hallada experimentalmente.

En la Grfica 21, se observa la simulacin de

reaccin para una concentracin inicial de
glucosa de 50mg/L.

Lo que quiere decir, se toma la simulacin para

la velocidad de reaccin, con el fin de
determinar la conversin para el tiempo de
experimentacin. Asimismo, se sabe que la
velocidad de reaccin para esta prctica, es la
de Michails-Menten:

r s=

V max Cs
(1)
C s+ K m

C S=C so (1X ) (13)

De esta forma, se procede a hacer la simulacin
para todos los mtodos con los cuales se
hallaron los parmetros cinticos para la
reaccin con el fin de observar diferencias en la
simulacin, las concentraciones experimentales
y el efecto en la concentracin inicial del
sustrato.

Grfica 21 Conversin de Glucosa con concentracin de

50mg/L

En la Grfica 22 se observa la simulacin para

la concentracin inicial de 50 mg/L e glucosa
con la presencia del inhibidor azida en
diferentes cantidades.

concentracin desconocida que para la solucin

de 50mg/L, esto puede ser gracias a que la
mezcla con respecto a la glucosa est ms
diluida el reactivo de Trinder puede no tener los
mismos efectos a la reaccin debido a un
exceso en la mezcla, asimismo puede atribuirse
un error experimental donde la mezcla no est
completamente mezclada y por lo tanto el
espectrofotmetro arroje valores de absorbancia
errados, y por lo tanto concentraciones erradas.

Grfica 22 Conversin de Glucosa con presencia de inhibidor

azida.

De esta forma, es posible ver la conversin para

cada una de las sesiones y experimentacin con
y sin inhibidor en la reaccin.
Analizando las tres graficas presentadas del
clculo de conversin para una concentracin
desconocida, se puede ver como para el mismo
tiempo de experimentacin el mtodo de
Lineweaver y Regresin no lineal convergen a
una conversin cercana de 0,6, en tanto los
mtodos de Hofstee y Woolf llegan solo a
conversiones de 0,35 y 0,5 respectivamente.
En tanto para una concentracin inicial de
50mg/L el mtodo de Woolf no converge a una
solucin concreta, por lo que se puede descartar
como un comportamiento acertado de la
conversin de glucosa en el tiempo. Para los
mtodos de Lineweaver, Hofstee y Regresin
no lineal se obtienen valores de conversin de
aproximadamente
0,8;
0,75
y
0,6
respectivamente.
Lo que quiere decir, que la conversin mxima
de la concentracin de 16,173mg/L puede ser la
mnima conversin alcanzada para la
concentracin de 50 mg/L.
Tambin, se puede analizar el efecto de la
concentracin inicial de sustrato en la celda,
para la solucin de concentracin desconocida
de glucosa, se sabe experimentalmente que es
menor a la solucin de concentracin de 50
mg/L. Dado que los resultados de conversin
sin inhibidor son menores para la solucin de

Asimismo, se analiza la grfica de conversin

en presencia del inhibidor, en la cual se
esperara una menor conversin a mayor
cantidad de inhibidor. Sin embargo, dado que se
tienen tanto enzima como sustrato e inhibidor se
podra deducir que el exceso de inhibidor en la
celda pueda favorecer la conversin en la
reaccin, lo que resulta en una competencia
entre el sustrato y el inhibidor por el sitio activo
de la enzima, es decir una reaccin en paralelo,
de esta forma se observa una alta conversin en
los resultados. Tambin, puede atribuirse a la
mezcla incompleta en la celda o que los datos
de cintica por regresin no se ajustaron a los
resultados como debera, arrojando los
resultados obtenidos por la simulacin.
A partir de la simulacin se obtienen los datos
de conversin para un tiempo aproximado al
tiempo de experimentacin, dada la ecuacin de
Cs, se pueden hallar las concentraciones finales
de glucosa y ser comparadas con respecto a las
experimentales con el fin de analizar qu
modelo
cintico
se
acomoda
a
la
experimentacin. De esta forma se puede ver
para la Concentracin de Glucosa desconocida
en Anexos Tabla 12, asimismo en Tabla 13 se
observa para la concentracin inicial de glucosa
50mg/L. Por ultimo en Tabla 14 para la
comparacin en presencia de inhibidor.
Segn los resultados mostrados en las
comparaciones se observa que el modelo q
mejor se acomoda en la simulacin a la
experimentacin es el de Linewaver para la
solucin de concentracin de glucosa
desconocida.
Finalmente se presentan los resultados del
docking molecular realizado en SwissDock:

Imagen 4. Estructura molecular de protena glucosa oxidasa

Recuperado
de:
http://www.swissdock.ch/docking/view/swissdockd_rRNAzm_
FH9C915W2JVSA6W4UK1N

Imagen 5. Estructura molecular de protena glucosa oxidasa

Recuperado
de:
http://www.swissdock.ch/docking/view/swissdockd_rRNAzm_
FH9C915W2JVSA6W4UK1N

oxidasa. En ambas imgenes es posible

identificar los plegamientos de las hlices alfa
(color morado imagen 5) y las lminas beta
(color amarillo imagen 5) y las cadenas de
aminocidos de la estructura primaria. En la
imagen 4 se destacan los radicales libres de los
aminocidos, con los cuales la protena puede
formar diferentes conformaciones. En la imagen
6 se localizan los principales clusters, es decir
las aglomeraciones de tomos, donde es
energticamente posible que surja la unin con
el ligando. Sin embargo es en la imagen 5
donde se localiza el cluster ms probable de
acoplamiento. De un total de 41(ver archivos
anexos correspondientes al docking de glucosa),
el cluster 0 posee el menor valor de G, -9.60
kcal/mol aproximadamente y un FullFitness de
-2210.10 kcal/mol (ver imagen 1 en anexos).
Un ligando puede ser cualquier molcula que se
una especficamente a una protena (Bioquibi).
Partiendo de la anterior definicin, se encontr
que existe un grupo de ligandos, denominados
PPAR, que se acoplan perfectamente con la
glucosa. stos, son reconocidos como factores
de transcripcin que cuya activacin da lugar a
la proliferacin de peroxisomas. PPAR es
altamente expresado en diferentes partes del
cuerpo, principalmente en el hgado, pues es
donde se da la principal regulacin de energa.
All este ligado se une con la glucosa para
permitir su metabolismo y as mantener la
homeostasis de la energa heptica (King,
2014).
De la glucosa oxidasa es importante mencionar
que esta protena slo puede catalizar la
oxidacin de la glucosa a b-D-gluconolactona,
sin que pueda reaccionar junto con otro azcar
natural
(Riani).

Imagen 6. Clusters de protena glucosa oxidasa Recuperado

de:http://www.swissdock.ch/docking/view/swissdockd_rRNAz
m_FH9C915W2JVSA6W4UK1N

En las imgenes 4 y 5, se observa la estructura

molecular de la cadena A de la protena glucosa

que le permita cumplir su funcin de reaccin

metablica.

Imagen 7. Estructura molecular de fuctose-1,6-bisphosphate

aldolase
Recuperado
de:
http://www.swissdock.ch/docking/view/swissdockd_rRNAzm_
FH9C915W2JVSA6W4UK1N

Imagen 9. Clusters fructose-1,6-bisphosphate aldolase

Recuperado
de:
http://www.swissdock.ch/docking/view/swissdockd_rR
NAzm_FH9C915W2JVSA6W4UK1N

En la imagen 9, es posible observar los

principales clusters donde sera posible la unin
de la protena, de los 78 posibles (ver resultados
del docking de fructosa en los documentos
adjuntos al informe y la imagen 11 en anexos),
el cluster 0 se encuentra como el favorable,
debido a que posee el menor valor de

G ,7.19 kcal /mol aproximadamente y

un fullfitness de
Imagen 8. Estructura molecular de fuctose-1,6-bisphosphate
aldolase
Recuperado
de:
http://www.swissdock.ch/docking/view/swissdockd_rRNAzm_
FH9C915W2JVSA6W4UK1N

En las imgenes 7 y 8, se observa la estructura

molecular de la fructosa, azcar que se
seleccion para realizar del docking. En ambas
imgenes se identifican claramente los
plegamientos de las hlices alfa (color morado
imagen 8) y las lminas beta (color amarillo
imagen 8), estructuras predominantes en la
protena. En la imagen 7 se destacan los
radicales libres de los aminocidos, con los
cuales la protena puede formar diferentes
conformaciones. En especial resalta el ligando,
sealado con color verde, el cual tambin se
observa en su estructura molecular, en el centro
de la protena de la imagen 8. Esta estructura,
est unida al centro activo de la protena, para

1663.55 kcal /mol (ver

imagen 12 en anexos). Estos resultados son

congruentes con la ubicacin del ligando
descrito en el prrafo anterior, pues se ubica en
el cluster 0, localizacin energticamente
favorable.

CONCLUSIONES
Una conversin alta en la reaccin de Trinder
(cercana a 1) con 0.5 mL de azida de socdio,
analizada bajo el modelo de parmetros
cinticos, se obtiene cuando la tasa de consumo
de los reactivos es casi similar a la
concentracin inicial del espectrofotmetro.
Aunque los resultados de las conversiones
obtenidas fueron menores a 1, estos valores
pueden llevar consigo una incertidumbre

acumulada, debido a errores experimentales al

manipular
los
equipos
y
materiales
(espectrofotmetro, balanza, etc.) y en las
simulaciones, como en los mtodos de
calibracin. Por lo tanto varios de los mtodos
de calibracin no se acomodan a lo obtenido
experimentalmente.
Para una solucin de glucosa diluida su nivel
de conversin en el tiempo disminuye, dado que
la velocidad de reaccin decrece como
consecuencia de una baja concentracin de
sustrato en la celda al inicio, por lo que hay
exceso de enzima.

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El mtodo de Lineware, para una solucin de

concentracin de glucosa desconocida fue el
que tuvo un mejor ajuste de los datos de
cintica y conversin con respecto a los
obtenidos en la experimentacin.
Un docking molecular es una herramienta de la
bioinformtica que permite determinar cul ser
la conformacin preferida de una molcula en
unin con otra, siguiendo los principios
bioqumicos y bajo las leyes de la
termodinmica, donde siempre se van a
favorecer los procesos espontneos, es decir con
un menor delta de energa de Gibbs

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ANEXOS

Concentracin de glucosa en el tiempo:

Sesin 1

Tabla 1 Concentracin de glucosa en el tiempo para la

solucin de glucosa de concentracin desconocida
Glucosa [] desconocida
Absorbancia
Concentraci
Tiempo (min)
(545 nm)
n glucosa

3,5

0,13

6,41916

0,131

6,48964

4,5

0,131

6,48964

0,133

6,63171

0,135

6,7753

0,5

0,085

3,57086

5,5

0,103

4,64171

0,136

6,84768

1,5

0,11

5,08106

6,5

0,142

7,29038

0,122

5,86814

0,144

7,44129

0,146

7,59395

0,148

7,7484

2,5

0,128

6,27929

7,5

0,129

6,34904

8,5

0,149

7,82631

45

0,227

16,173

0,152

8,06287

46

0,227

16,173

9,5

0,154

8,22299

10

0,156

8,38512

10,5

0,158

8,5493

11

0,16

8,7156

11,5

0,162

8,88407

12

0,164

9,05479

12,5

0,166

9,22783

13

0,17

9,58112

Tabla 2 Concentracin de glucosa en el tiempo para la

solucin de glucosa 50mg/L
Glucosa [50 mg/L]
Absorbancia
Concentraci
Tiempo (min)
(545 nm)
n glucosa
0,5

0,071

2,7897

0,08

3,28704

0,082

3,3999

13,5

0,173

9,85272

1,5

14

0,174

9,94457

0,092

3,97781

14,5

0,176

10,1303

2,5

0,102

4,58005

15

0,178

10,3188

0,11

5,08106

0,116

5,46899

16

0,182

10,7047

3,5

17

0,185

11,0021

0,127

6,2099

18

0,188

11,3069

4,5

0,127

6,2099

19

0,192

11,7254

0,128

6,27929

0,129

6,34904

20

0,194

11,9401

5,5

21

0,197

12,2694

0,131

6,48964

22

0,198

12,3812

6,5

0,133

6,63171

23

0,199

12,494

0,135

6,7753

0,137

6,92045

24

0,201

12,7228

7,5

25

0,203

12,956

0,139

7,06719

26

0,205

13,1938

8,5

0,141

7,21557

27

0,207

13,4363

0,148

7,7484

0,15

7,90469

28

0,209

13,6838

9,5

29

0,211

13,9365

10

0,152

8,06287

30

0,213

14,1946

10,5

0,156

8,38512

31

0,214

14,3257

11

0,16

8,7156

0,164

9,05479

32

0,215

14,4583

11,5

33

0,217

14,7278

12

0,168

9,40324

34

0,218

14,8649

12,5

0,172

9,76153

35

0,22

15,1437

13

0,174

9,94457

0,179

10,4142

36

0,221

15,2856

13,5

37

0,221

15,2856

14

0,183

10,803

38

0,222

15,4291

14,5

0,187

11,2045

39

0,223

15,5743

15

0,191

11,6194

0,198

12,3812

40

0,223

15,5743

16

41

0,224

15,7213

17

0,206

13,3145

42

0,225

15,87

18

0,213

14,1946

43

0,226

16,0206

19

0,221

15,2856

16,0206

20

0,229

16,4836

44

0,226

21

0,235

17,4644

1,5

0,084

3,51365

22

0,242

18,7112

0,092

3,97781

23

0,248

19,878

2,5

0,1

4,45754

24

0,254

21,1419

0,109

5,01744

25

0,26

22,5022

3,5

0,114

5,33847

26

0,265

23,7011

0,118

5,60076

27

0,271

25,1952

4,5

0,118

5,60076

28

0,276

26,4592

0,118

5,60076

29

0,281

27,7118

5,5

0,118

5,60076

30

0,286

28,9284

0,119

5,66712

31

0,29

29,8632

6,5

0,12

5,7338

32

0,294

30,7575

0,121

5,80081

33

0,298

31,6086

7,5

0,123

5,93581

34

0,302

32,4161

0,125

6,07216

35

0,304

32,8038

8,5

0,13

6,41916

36

0,307

33,366

0,133

6,63171

37

0,309

33,7283

9,5

0,136

6,84768

38

0,312

34,2538

10

0,138

6,99362

39

0,315

34,7588

10,5

0,142

7,29038

40

0,316

34,9228

11

0,145

7,5174

41

0,318

35,2446

11,5

0,148

7,7484

42

0,319

35,4024

12

0,151

7,98354

43

0,32

35,5582

12,5

0,154

8,22299

44

0,321

35,7121

13

0,157

8,46695

45

0,322

35,8642

13,5

0,16

8,7156

46

0,333

37,4225

14

0,164

9,05479

47

0,333

37,4225

14,5

0,168

9,40324

48

0,334

37,5548

15

0,173

9,85272

49

0,336

37,815

16

0,179

10,4142

50

0,337

37,9431

17

0,186

11,1029

51

0,338

38,0698

18

0,192

11,7254

52

0,339

38,1952

19

0,198

12,3812

53

0,34

38,3193

20

0,209

13,6838

54

0,341

38,4421

21

0,21

13,8095

55

0,341

38,4421

22

0,216

14,5923

23

0,221

15,2856

24

0,226

16,0206

25

0,231

16,8021

26

0,236

17,6354

27

0,241

18,5258

Tabla 3 Concentracin de glucosa en el tiempo para la

solucin de glucosa 50mg/L con HCl
Glucosa [50 mg/L] con HCl
Absorbancia
Concentraci
Tiempo (min) (545nm)
n glucosa

28

0,245

19,2828

0,5

0,062

2,3086

29

0,249

20,0819

0,077

3,11937

30

0,253

20,9244

31

0,257

21,8104

32

0,261

22,7377

33

0,265

23,7011

34

0,269

24,6925

35

0,272

25,4476

36

0,276

26,4592

37

0,279

27,2138

38

0,282

27,9587

0,5

0,03

0,7127

39

0,286

28,9284

0,034

0,90337

40

0,288

29,4005

1,5

0,039

1,14499

41

0,291

30,0907

0,044

1,39046

42

0,293

30,5379

2,5

0,053

1,84254

43

0,296

31,1885

0,055

1,94487

44

0,298

31,6086

3,5

0,055

1,94487

45

0,3

32,0178

0,055

1,94487

46

0,302

32,4161

4,5

0,055

1,94487

47

0,305

32,9938

0,055

1,94487

48

0,306

33,1812

5,5

0,056

1,99629

49

0,308

33,5484

0,056

1,99629

50

0,31

33,9058

6,5

0,057

2,04789

51

0,312

34,2538

0,058

2,09967

52

0,313

34,4244

7,5

0,059

2,15163

53

0,315

34,7588

0,06

2,20377

54

0,316

34,9228

8,5

0,062

2,3086

55

0,318

35,2446

0,063

2,36129

56

0,319

35,4024

9,5

0,064

2,41417

57

0,32

35,5582

10

0,066

2,52049

58

0,322

35,8642

10,5

0,067

2,57394

59

0,323

36,0143

11

0,069

2,68143

60

0,324

36,1627

11,5

0,071

2,7897

61

0,325

36,3093

12

0,073

2,89877

62

0,326

36,4541

12,5

0,075

3,00866

63

0,327

36,5973

13

0,077

3,11937

64

0,328

36,7388

13,5

0,078

3,17505

65

0,329

36,8786

14

0,08

3,28704

66

0,329

36,8786

14,5

0,084

3,51365

15

0,085

3,57086

16

0,089

3,80199

17

0,093

4,0369

18

0,096

4,21565

19

0,1

4,45754

20

0,104

4,70364

21

0,108

4,95412

Sesin 2

Tabla 4 Concentracin de glucosa en el tiempo para la

solucin de glucosa 50mg/L con 0,5mL de azida
0,5 mL de azida
Absorbancia
(545nm)

Tiempo (min)

Concentracin
glucosa

22

0,112

5,20917

6,5

0,214

14,3257

23

0,116

5,46899

0,217

14,7278

24

0,12

5,7338

7,5

0,221

15,2856

25

0,123

5,93581

0,226

16,0206

26

0,127

6,2099

8,5

0,231

16,8021

27

0,131

6,48964

0,233

17,129

28

0,134

6,70331

9,5

0,237

17,8088

29

0,138

6,99362

10

0,242

18,7112

30

0,141

7,21557

10,5

0,244

19,0897

31

0,141

7,21557

11

0,249

20,0819

32

0,147

7,67095

11,5

0,252

20,7097

33

0,15

7,90469

12

0,256

21,5849

34

0,154

8,22299

12,5

0,259

22,2691

35

0,156

8,38512

13

0,262

22,9754

36

0,157

8,46695

13,5

0,265

23,7011

37

0,161

8,79956

14

0,269

24,6925

38

0,164

9,05479

14,5

0,273

25,7004

39

0,165

9,14102

15

0,274

25,9534

40

0,167

9,31523

16

0,278

26,9631

41

0,168

9,40324

17

0,282

27,9587

42

0,17

9,58112

18

0,286

28,9284

43

0,171

9,67101

19

0,291

30,0907

44

0,173

9,85272

20

0,295

30,9744

45

0,174

9,94457

21

0,299

31,8146

46

0,178

10,3188

22

0,304

32,8038

23

0,307

33,366

24

0,311

34,081

25

0,315

34,7588

26

0,316

34,9228

27

0,319

35,4024

28

0,322

35,8642

29

0,325

36,3093

30

0,326

36,4541

31

0,328

36,7388

32

0,329

36,8786

33

0,331

37,1536

34

0,332

37,2888

35

0,334

37,5548

36

0,335

37,6856

37

0,337

37,9431

38

0,338

38,0698

39

0,34

38,3193

40

0,341

38,4421

Tabla 5 Concentracin de glucosa en el tiempo para la

solucin de glucosa 50mg/L con 0,2mL de azida
0,2 mL de azida
Concentracin
Absorbancia(545nm) glucosa

Tiempo (min)
0,5

0,132

6,56048

0,179

10,4142

1,5

0,183

10,803

0,185

11,0021

2,5

0,187

11,2045

0,189

11,4102

3,5

0,191

11,6194

0,193

11,8322

4,5

0,195

12,0489

0,201

12,7228

5,5

0,205

13,1938

0,209

13,6838

41

0,342

38,5637

44

0,345

38,9214

42

0,343

38,6841

45

0,346

39,0383

43

0,344

38,8034

46

0,347

39,1541

Tabla 6 Resumen ecuaciones regresiones obtenidas para cada grfica

# Grfica

Experimento

Diagrama

LineweaverBurk
LineweaverBurk
Eadie-Hofstee

13

Concentracin
desconocida de glucosa
Concentracin glucosa
50 mg/L
Concentracin
desconocida de glucosa
Concentracin glucosa
50 mg/L
Concentracin
desconocida de glucosa
Concentracin glucosa
50 mg/L
Concentracin
desconocida de glucosa
Concentracin glucosa
50 mg/L
Solucin azida 0.5 mL

14

Solucin azida 0.2 mL

15

Solucin azida 0.5 mL

16

Solucin azida 0.2 mL

4
5
6
7
8
9
10

Tipo de
Ecuacin
regresin
Lineal y=45.484 +9.506
Lineal

y=3.179+1.606

Lineal

y=4.078+0.144

Eadie-Hofstee

Lineal

y=1.764+ 0.654

Regresin no
lineal
Regresin no
lineal
Hanes-Woolf

No lineal

y=0.0002 x3 +0.0031 x 2+ 0.5711

No lineal

y=0.0001 x20.00887 x+1.0317

Lineal

y=13.564 x86.844

Hanes-Woolf

Lineal

y=1.904 x77.725

Concentracin
vs Tiempo
Concentracin
vs Tiempo
LineweaverBurk
LineweaverBurk

No lineal

y=0.0001 x3 +0.0071 x 20.0707+1.2

No lineal

y=0.0002 x3 0.0075 x 21.3748+ 6.7

Lineal

y=11.686 x 0.161

Lineal

y=35.677 x3.462

Tabla 12 Comparacin concentraciones de glucosa

experimental contra simulacin en Matlab. De
concentracin inicial desconocida

Tabla 13 Comparacin concentraciones de glucosa

experimental contra simulacin en Matlab. De
concentracin inicial 50mg/L

Tabla 14 Comparacin concentraciones de glucosa

experimental contra simulacin en Matlab. De
concentracin inicial 50mg/L y en presencia de inhibidor.

Imagen 10.

Imagen 11.

Imagen 12.