I.

INTRODUCCION

El mtodo ms comnmente utilizado para la determinacin de nitrgeno

orgnico es el llamado mtodo Kjeldahl, que se basa en una volumetra cidobase. El procedimiento es directo, el material necesario es muy simple (aparato
de destilacin Kjeldahl), y es fcilmente adaptable al anlisis rutinario de un
gran nmero de muestras, en este caso el material biolgico fue la hoja de
yuca (Manihot esculenta)
Es una prctica de gran importancia para la agricultura y para nuestros
conocimientos en

nuestra carrera profesional; de ah la necesidad de

determinar el porcentaje de nitrgeno, seala que juega un papel importante en

su contenido de compuestos qumicos, ya siendo esto un producto de alto
consumo por las propiedades de carbohidratos.
El nitrgeno asimilable por los cultivos es de gran proporcin de origen
inorgnico. Los compuestos nitrogenados orgnicos de bajo peso molecular
aportando en grado menor el mencionado elemento. El nitrgeno puede llegar
al suelo gracias a los aportes de materia orgnica y a la fijacin bacteriana a
partir del aire.
Por tanto vale deducir que la muestra debe contener Nitrgeno, y otros
compuestos esenciales en sus hojas que son aportando en gran parte en la
naturaleza por aspectos bioqumicos, y para ello en la prctica analizaremos
con la obtencin del nitrgeno en la hoja de yuca.
Objetivos:
-

Conocer el fundamento del anlisis de nitrgeno por el mtodo de

Kjeldahl.
Determinar el porcentaje de nitrgeno en la hoja en yuca.
Realizar los procedimientos necesarios para la obtencin de los

resultados y con xitos.

Observar los distintos cambios qumicos (color) mediante el proceso del

mtodo de Kjeldahl.
Familiarizarse con los equipos e instrumentos de laboratorio para el
proceso de la prctica por el mtodo de Kjeldahl

II.
II.1.

REVISION DE LITERATURA
Mtodo de Kjeldahl

El Mtodo de Kjeldahl se utiliza en Qumica Analtica para la

determinacin del contenido del Nitrgeno en muestras ORGANICAS lo
cual es de gran importancia en mbitos de tanta transcendencia.
Desde 1883 en que John Kjeldahl presento sus trabajos, su mtodo
ha ganado una gran aceptacin y se aplica en una amplia variedad de
trabajos para los anlisis de alimentos, bebida, piensos, granos, carnes,
aguas residuales, suelos para cultivos y otros. Hoy por hoy es un mtodo
ms usado para el anlisis de protenas y se efecta mediante la
determinacin de nitrgeno orgnico. Esto es as por que los diferentes
tipos de protenas coinciden todas ellas en una proporcin similar de dicho
nitrgeno.
En esta tcnica se dirigen las protenas y otros compuestos
orgnicos de los alimentos en una mezcla, con cidos sulfricos con
presencia de catalizadores. El nitrgeno orgnico total se convierte en
sulfato de amonio mediante la digestin. La mezcla resultante se neutraliza
y se destila. El destilado se recoge en una solucin de cido brico. Los
aniones asi formado se titula con HCl estandarizado para determinar el N
contenido en la muestra.
II.2.

Procedimiento general del mtodo de Kjeldahl

El mtodo consta de tres etapas: DIGESTIN DESTILACIN

TITULACIN.
En la DIGESTIN se produce la descomposicin del nitrgeno que
contienen las muestras orgnicas utilizando una solucin de cido
concentrado. Esto se obtiene haciendo hervir la muestra en una
concentracin de cido sulfrico. El resultado es una solucin de sulfato de
amonio.
En la etapa de DESTILACIN se libera amoniaco, el cual es retenido
en una solucin con una cantidad conocida de cido brico. Inicialmente se
realiza una destilacin con vapor por el mtodo de arrastre de vapor de
agua, mediante la cual acelera la obtencin del destilado.

Al final, se utiliza la TITULACIN para valorar finalmente la cantidad

de amonio presente en la muestra destilada. (GrupoSelecta.2010)
II.3.

Descripcin de la Yuca
La Yuca es una planta Perenne, leosa que cuando se cultiva como

alimento, se mantiene en cultivo en 300 a 360 das (10 a 12 meses) su ciclo

vegetativo se prolonga cuando se cultivan con fines industriales de 480 a
720 das (16 a 24 meses), la planta puede alcanzar de cuatro a cinco
metros de altura, cuando se deja algunos aos. Pero cuando se cosecha
entre los 300 y 360 das despus de la plantacin, no sobrepasa los dos a
tres metros.
II.4.
Clasificacin Botnica
Reino: Planta
Divisin: Macrophillophita
Sub-Divisin: Magnoliofitina
Clase: Magnoliatae
Orden: Eufhorbiales
Familia: Eufhorbiaceae
Gnero: Manihot
Especie: Esculenta
La yuca ha constituido un alimento valioso desde la poca de
nuestros aborgenes, est especie ya se cultivaba en el continente
americano antes de la colonizacin. Segn Raynal.fue introducida
en Amrica latina desde el continente africano. En cambio Candelle planteo
que la yuca era originaria del continente americano. La yuca se encuentra
entre las principales plantas tuberosas que se cultivan en las tropicales y
subtropicales de Amrica Latina, frica y Asia lugares donde predominan
temperaturas y humedad altas. Constituye la cuarta fuente de energa en
la alimentacin humana y forma parte de la dieta de ms de 300 millones de
habitantes. Desde el punto de vista agronmico la yuca presenta la ventaja
de soportar largos periodos de sequa.
Biolgicamente la yuca tiene un gran potencial de rendimiento
en caloras, ofrece grandes perspectivas por sus altos rendimientos por
rea y sus diversos usos. En nuestro Pas se ha cultivado a travs de los

aos y se incluye dentro de los surtidos de races y tubrculos tropicales

que el pueblo cubano denomina vianda.
II.5.

Fijacin nitrgeno
En la naturaleza existen dos tipos principales de fijacin de nitrgeno:

fijacin simbitica: es consecuencia de la asociacin intima entre una planta

y una bacteria (en este caso), ninguna de las cuales puede fijar nitrgeno
aisladamente. Fijacin no simbitica: es poco significativa.
a) A partir del aire. El nitrgeno puede obtenerse del aire por simple
eliminacin del oxgeno. En el laboratorio, haciendo pasar el aire arriba de
cobre calentado, ste se apodera del oxgeno para formar xido cprico
slido, CuO. Si se quema fsforo en una campana invertida sobre agua se
forma fsforo pentaoxidado slido, que se disuelve en el agua y deja un
residuo que en su mayor parte es nitrgeno. Otro mtodo de obtencin
consiste en hacer burbujear aire en una solucin alcalina de pirogalol, que
absorbe al oxgeno.
En la industria el nitrgeno se obtiene a partir del aire lquido.
b) A partir de sus compuestos. El nitrgeno puede prepararse por
oxidacin del amonaco, por lo cual se hace pasar este gas sobre xido de
cobre calentado al rojo.Un mtodo ms conveniente consiste en la
descomposicin del nitrito de amonio, NH 4NO2. Este compuesto es inestable,
y se descompone y se descompone fcilmente en agua y da nitrgeno.
Cuando se calienta suavemente una disolucin que contiene una mezcla de
cloruro de amonio y nitrito de sodio, se desprende nitrgeno.
2.6. Elaboracin de reactivos.
a.- Mezcla Indicadora.- Prepare por separado los indicadores
verde de bromocresol al 0.1% y el rojo de metilo al 0.1% diluidos en alcohol al
95%. Mezcle 10 ml. de verde de bromocresol con 2 ml. de la solucin de rojo
de metilo en un frasco gotero.
b.- cido Brico al 2%.- Disuelva 10 g de cido brico (en
cristales) en 500 ml. de agua destilada. Despus de que se enfre transfiera la
solucin a un frasco tapado. Se conserva indefinidamente.

c.- cido Clorhdrico 0.01N.-Prepare un litro y valrela con una

solucin de NaOH de la misma normalidad.
d.-

Hidrxido de Sodio al 30%.-Disuelva 150g de perlas de

hidrxido de sodio en 350 ml. de agua destilada. Almacene la solucin en un

frasco mbar con tapn de vidrio.
f.- Catalizadores para la Digestin.- Mezcle 2.5g de dixido de
selenio (SeO2), 100g de sulfato de potasio (K2SO4) y 20 g de sulfato de cobre
pentahidratado (CuSO4. 5H2O).
2.6.1. Mtodo MICROKJELDAHL
Desde ms de 100 aos se ha utilizado el mtodo de kjeldahl para la
determinacin de nitrgeno en una amplia gama de muestras. La
determinacin del nitrgeno Kjeldahl se realiza en alimentos y bebidas,
carne, cereales forrajes y muestras orgnicas o vegetales. Tambin se
utiliza el mtodo de Kjeldahl para determinacin de nitrgeno en aguas
residuales, suelos y otras muestras. El mtodo de Kjeldahl sirve para
determinar el contenido en nitrgeno en muestras orgnicas e inorgnicas.
Los resultados se puede expresar en %N, % NH o en protena ( % N x
factor).

2.7.

FUNDAMENTO

Comprende las siguientes operaciones:

1) Digestin
Por ebullicin, la muestra orgnica con el cido sulfrico concentrado y
en presencia del respectivo catalizador, se oxida a CO2 y agua; mientras
que una parte del cido sulfrico se reduce a SO, segn la ecuacin:
M.O + H2SO4 ...CO2 + H2O + SO2
El nitrgeno de la muestra orgnica se transforma en amoniaco que al
combinarse con la otra parte del cido sulfrico forma el sulfato de amonio,
segn la siguiente ecuacin.

2NH3 + H2SO4.. (NH4)2SO4

2) Destilacin
En esta operacin el nitrgeno que se encuentra en forma de sulfato de
amonio, se ataca con un lcali fuerte a fin de liberar el amoniaco, tal como
se indica en la siguiente ecuacin:
(NH4)2SO4 + 2NaOH ------ 2NH3 + Na2SO4 + 2H2O
El amoniaco es arrastrado por el vapor de agua, que luego se condensa.
El condensado, hidrato de amonio, se recibe en un vaso que contiene la
mezcla indicadora, formando el borato de amonio, segn se indica:
H3BO3 + 3HCL------------- (NH4)3 BO3 + 3H2O

3) Titulacin
El borato de amonio se titula con una solucin estandarizada de HCL o
H2SO4 0.1000 N. La reaccin que se verifica es la siguiente:
(NH4)3 BO3 + 3HCL------------------- 3NH4CL + H3BO3

III.

MATERIALES Y METODOS

III.1.
Materiales e instrumentos
- Pipeta automtica
- Vasos de precipitado
- Probetas
- Digestor
- Equipo de destilacin
- Bureta
- Placa Petri
- Balanza analtica
- Estufa
- Soporte Universal
- Agitador de vidrio
- Gotero
- Pizeta
III.2.

Reactivos

cido Sulfrico cc.

Mezcla catalizadora
Hidrxido de sodio 50%
cido clorhdrico 0.1077N
cido Brico
Azul y rojo de metileno (mixto)

III.3. Muestra Biolgica

- Hoja de yuca

V.- PROCEDIMIENTO

Trabajo en preparado de la muestra

Primero recogemos la muestra, en este caso las hojas de yuca se recogi

frente del portn de salida de colegio Gmez arias Dvila del da 29/05/13, a
horas 5:40 AM. La cantidad de hojas recogidas tiene un peso de 55.0294g.
sabiendo que la caja Petri tiene un peso de 47.1306g.

A las 6:48 AM Se llev a la estufa, luego donde pasar hacer secado por unas
(24 horas) a 70 C, para eliminar toda la humedad.

FOTOS

Una vez secado se saca las hojas de la estufa para su respectiva trituracin.

Con la mano trituramos como se observa en la foto, hasta comprobar que

quede bien triturado y que tenga la apariencia de carbn desecho.
Fotos

Luego la muestra triturada pasamos a pesar la muestra seca en la balanza

electrnica.

Sabiendo que el peso de la muestra con la caja petri es de 44.6332g y teniendo

en cuenta que el peso de la caja petri es 42.5551g. Luego pesaremos la
muestra que ser analizada y para ello requiere pesar primero un pequeo
papel donde se ubicar la muestra, luego de pesar ambos, se le agregar un
catalizador en forma slida de color blanco.

Fotos

Luego pasamos a pesar el crisol vaco que tiene un peso de 9.9463g, y con la
muestra puesta tiene un peso de 10.6907g. en la cual procederemos a su
respectivo anlisis.
Fotos

ya una vez adicionado cido sulfhdrico, llevamos el baln y el crisol a la

hornilla que viene a ser el equipo de digestin, la digestin concluye cuando la
solucin se toma completamente cristalina o verde transparente.

Fotos

En un vaso de precipitado se adiciona 20 ml de H3BO3 y 3 gotas de indicador

rojo y azul de metil (mixto) y se lo lleva al equipo de destilacin. Luego
colocamos el baln en el equipo de destilacin y se agrega 5 ml de NaOH,
como el equipo ya estaba calentando. En el baln se tiene que observar un
color morado que indique su presencia.
Fotos

una vez abierto la lnea de vapor se inicia la destilacin. Se recibe el destilado

en el vaso, hasta que cese el paso del amoniaco con una subida de volumen a
40 ml y mostrando un color ms azulado.
Fotos

titular la solucin del vaso precipitado con 5.05 ml de una solucin

estandarizada de HCL (0.0927N) Fc: 0.1077 la cual se obtuvo un gasto de
2.65ml.
Fotos

PARA LA DETERMINACIN DE NITROGENO.

Pesamos el crisol con la ceniza que tiene un peso de 10.6907g.

FOTOS

Se adiciona al crisol cido clorhdrico concentrado hasta que las cenizas

queden cubiertas.

Fotos

Luego evaporar el cido clorhdrico en un bao de agua hasta la sequedad.

Fotos

Despus disolvemos con 3ml de cido ntrico al 10% y hervimos en el bao

de agua durante 5 minutos. Sin dejar que el residuo se seque.
Fotos

Filtramos la solucin.
Fotos

Lavamos con agua des-ionizada y aforamos a 25 ml la muestra en la fiola.

Fotos

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