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Sociedade de Ensino Superior Piauiense - SESPI


Faculdade Piauiense FAP
Diretoria Acadmica DA
Curso de Nutrio e Enfermagem

MANUAL DE AULAS PRTICAS DA DISCIPLINA DE BIOQUMICA

Professor: Jos Roberto da Cunha Lima


Bloco I

Parnaba Piau

SUMRIO

PRTICA 1:
DO ESTUDO E USO DO LABORATRIO DE QUMICA,
BIOQUMICA, BIOFSICA E FISIOLOGIA

Prtica 1: Do estudo e uso do laboratrio de qumica,


bioqumica, biofsica e fisiologia

01

Prtica 2: Vidrarias e equipamentos

10

RECOMENDAES GERAIS
a) De Ordem Pessoal

Prtica 3: pH e tampes
Prtica 4: Determinao da concentrao das protenas

15
19

laboratrio;

Use calados e avental de mangas compridas fechadas;

Use sempre culos de segurana no laboratrio;

Use EPIs apropriados nas operaes que apresentarem riscos

Prtica 5: Caracterizao de triacilgliceris em leo vegetal 25


BIBLIOGRAFIA

27

Trabalhe com ateno e NO FUME, COMA OU BEBA dentro do

potenciais;

No use roupas de tecido sinttico, facilmente inflamveis;

No coloque reagentes de laboratrio no seu armrio de roupas;

No picote nenhum tipo de produto com a boca;

No leve as mos boca ou aos olhos quando estiver trabalhando


com produtos qumicos;

No use lentes de contato quando estiver trabalhando em


laboratrios;

No se exponha a radiaes ultravioleta, infravermelho etc;

Feche todas as gavetas e portas que abrir;

Leia o roteiro, atenciosamente, antes de executar a prtica;

Planeje o trabalho a ser realizado;

Em caso de derramamento de produtos txicos, inflamveis ou corrosivos,

Trabalhe com quantidades indicadas de substncias evitando o

tomar as seguintes precaues:

desperdcio dos reagentes, gs, luz e outros.

parar o trabalho, isolando na medida do possvel a rea;

Verifique as condies de aparelhagem;

advertir pessoas prximas sobre o ocorrido.

Em caso de incndio NUNCA USE EXTINTOR EM HUMANOS;

s efetuar a limpeza aps consultar a ficha de emergncia do

Conhea as periculosidades dos produtos qumicos que voc


manuseia.

b) Referentes ao Laboratrio

produto;

alertar a chefia;

verificar e corrigir a causa do problema;

no caso do envolvimento de pessoas, lavar o local atingido com

Mantenha as bancadas sempre limpas e livres de materiais

gua corrente e procurar o servio mdico.

estranhos ao trabalho;

Faa limpeza prvia, com material apropriado, aps esvaziar um

EQUIPAMENTOS DE SEGURANA

frasco de reagentes, antes de coloc-los para lavagem;

Os seguintes equipamentos de segurana devem estar ao alcance de

Rotule os reagentes ou solues preparadas e as amostras

todos:

coletadas;

luvas e aventais;

Jogue papis usados e materiais inservveis no lixo somente

protetores faciais;

quando no apresentar riscos de contato com produtos qumicos

culos de segurana;

oxidantes;

mscaras contra gases e ps;

Use pinas e materiais de tamanho adequado e em perfeito

extintores de incndio;

chuveiros de emergncia;

lavador de olhos;

cobertores de segurana.

estado de conservao;

Utilize a capela ao trabalhar com reaes que liberam fumos


venenosos ou irritantes;

Evitar descartar produtos qumicos nas pias de laboratrio.

Use-os corretamente, em caso de dvidas, consulte o seu PROFESSOR

Inspecione-os quando em operao;

OU TECNICO DO LABORATORIO.

No deixe equipamentos eltricos ligados no laboratrio, fora do


expediente normal, sem avisar a Superviso de turno e anotao

USO DE EQUIPAMENTOS E APARELHAGEM EM GERAL

em livro de avisos ou dispositivo similar;

Planeje as operaes com novos equipamentos;

Leia previamente as instrues sobre o equipamento a ser

utilizado;

Remova

frascos

de

inflamveis

do

local

onde

ir

usar

equipamentos eltricos ou fonte de calor;

Saiba de antemo o que fazer em uma situao de emergncia.

Enxugue qualquer lquido derramado no cho antes de operar


com equipamentos eltricos.

USO DE EQUIPAMENTOS ELTRICOS

Chapas ou Mantas de Aquecimento

Instrues Gerais:

S opere equipamentos eltricos quando:

Use chapas ou mantas de aquecimento, para evaporao ou


refluxos de produtos inflamveis, dentro da capela;

fios, tomadas e plug estiverem em perfeitas condies;

o fio terra estiver ligado;

tiver certeza da voltagem compatvel entre equipamentos e

No ligue chapas ou mantas de aquecimento com resduos


aderidos sobre suas superfcies;

Use termo-isolantes sob chapas ou mantas de aquecimento.


(Amianto ou similar).

circuitos;
No instale nem opere equipamentos eltricos sobre superfcies midas;

Verifique periodicamente a temperatura do conjunto plug-tomada;

Caso esteja anormal desligue-o e comunique ao PROFESSOR;

No use equipamentos eltricos sem identificao de voltagem.

No

confie

completamente

equipamentos eltricos;

no

controle

automtico

Use chama na capela ou nos locais onde for permitido.

No acenda o bico de Bunsen sem verificar e eliminar os seguintes


problemas:

Solicite ao Departamento competente que faa a identificao.

USO DE CHAMA EM LABORATRIO

de

Vazamentos;

dobra no tubo de gs;

ajuste inadequado entre o tubo de gs e conexes;

No coloque o rosto dentro da capela;

existncia de inflamveis ao redor;

O sistema de exausto somente deve ser desligado 10 a 15

Fechar o registro da linha de gs aps seu uso;

minutos aps o trmino dos trabalhos, para permitir limpeza do

No acenda maaricos, bico de Bunsen, etc, com a vlvula de gs

sistema. (gases txicos).

combustvel muito aberta;

No deixe o bico de Bunsen aceso quando no estiver sendo


utilizado.

OPERAO EM CAPELAS

Observe os seguintes cuidados, ao sinal de paralisao do exaustor de


capelas:

pare a anlise imediatamente;

feche ao mximo a janela da capela;

coloque mscara contra gases, quando houver risco de exposio

A capela s oferecer mxima proteo se for adequadamente utilizada.


OPERAO EM CAPELA COMUM

a gases e vapores;

avise o supervisor e o pessoal do laboratrio;

s reinicie a anlise no mnimo 5 minutos aps a normalizao de

Nunca inicie um servio em capelas, sem que:

exausto;

O sistema de exausto esteja operando;

Piso e janela estejam limpos;

contaminantes (gases, fungos e poeiras), a uma distncia maior

As janelas estejam funcionando perfeitamente;

que 20 cm da face da capela;

Nunca inicie qualquer trabalho que exija aquecimento, sem

Deixe na capela apenas a poro de amostra a analisar, remova


todo o material desnecessrio, principalmente produtos txicos. A

Proteja o tampo da capela com folha plstica ou similar, quando


manusear cido fluordrico;

remover produtos inflamveis da capela;

Procure instalar os equipamentos, vidros, dispositivos que gerem

Nunca utilize a capela comum para cido perclrico ou


substncias radioativas.

capela no local de armazenamento de reagentes ou solues;

Mantenha as janelas das capelas com o mnimo de abertura

RESDUOS

possvel, para maior proteo e maior velocidade facial do ar;

Definio

Toda substncia, no desejvel, resultante de um processo qumico no


qual ocorre transformao.
Cuidados

No jogue fora nenhum tipo de resduo sem antes verificar o local


adequado para faz-lo;

Para cada tipo de resduo existe uma precauo quanto a sua


eliminao, em funo da sua composio qumica e/ou biolgico.
Ex.:

no jogue produtos corrosivos concentrados na pia, eles s


podem ser descartados depois de diludos ou neutralizados;

no descarte lquido inflamveis no esgoto

descarte

os

materiais

biolgicos

em

local

adequado

(DESCARTEX).
RECOMENDAES FINAIS
Tenha este Guia sempre mo no laboratrio e releia-o periodicamente. O
risco de acidente maior quando nos acostumamos a conviver com o
perigo e passamos a ignor-lo.
A segurana de um laboratrio est apoiada na determinao de cada um
de seus elementos:
VOC TAMBM RESPONSVEL
193 BOMBEIROS.
192 SAMU

INSTRUES GERAIS PRIMEIROS SOCORROS (BSICOS)


cido na pele
Lave imediatamente com soluo de bicarbonato de sdio.
Aplique glicerina com Mg (OH)2 a 10%.
Bata esta mistura at obter uma pasta homognea.
Passe sobre a queimadura.
cido na boca
Faa bochecho com leite de magnsia. Aps, lavar com bastante gua.
cido nos olhos
Lave imediatamente com soluo de bicarbonato de sdio 1%.
lcali na pele
Lave o local com soluo de cido actico 0,1 mol/L ou vinagre.
lcali nos olhos
Lave os olhos com soluo de cido brico 2%.
lcali na boca
Faa bochecho com soluo de vinagre 1: 4
Slido nos olhos ou ouvidos
Pingue algumas gotas de leo de cozinha.
Queimadura na pele (fogo, gordura, metais quentes, etc).
Aplique uma pasta de Picrato de Butesin sobre o local.

RISCO

A
G
E
N
T
E
S
C
A
U
S
A
D
O
R
E
S

QUMICO
(VERMELHO)

FSICO
(VERDE)

BIOLGICO
(MARROM)

ERGONMICO
(AMARELO)

Fumos metlicos e
vapores

Rudo e ou som muito


alto

Microorganismos
(Vrus, bactrias,
protozorios)

M postura do corpo em
relao ao posto de
trabalho

Gases asfixiantes H,
He, N e CO2

Oscilaes e vibraes
mecnicas

Lixo hospitalar,
domstico e de animais

Trabalho estafante e ou
excessivo

Pinturas e nvoas em
geral

Ar rarefeito e ou vcuo

Esgoto, sujeira, dejetos

Falta de Orientao e
treinamento

Risco de queda de nvel,


leses por impacto de
objetos

Solventes (em
especial os volteis)

Presses elevadas

Objetos contaminados

Jornada dupla e ou
trabalho sem pausas

Mau planejamento do
layout e ou do espao
fsico

cidos, bases, sais,


alcois, -teres, etc.

Frio e ou calor e
radiao

Contgio pelo ar e ou
insetos

Movimentos repetitivos

Cargas e transportes em
geral

Picadas de animais
(ces, insetos, rpteis,
roedores, aracndeos,
etc.)

Lixo em geral, fezes e


urina de animais,
contaminao do solo e
gua

Equipamentos
inadequados e no
ergonmicos

Risco de fogo,
detonao de
explosivos, quedas de
objetos

Aerodispersides no
ambiente (poeiras
vegetais e minerais)

Alergias, intoxicaes e
queimaduras causadas
por vegetais

Fatores psicolgicos
(no gosta do trabalho,
presso do chefe, etc)

Risco de choque eltrico


(corrente contnua e
alternada)

Reaes qumicas

Ingesto de produtos
durante pipetagem
DIAMANTE DE HOMMEL

ACIDENTES
(AZUL)
Equipamentos
inadequados,
defeituosos ou
inexistentes
Mquinas e
equipamento sem
Proteo e ou
manuteno

4 - Gases inflamveis, lquidos muito volteis, materiais pirotcnicos


(<22C)
3 - Produtos que entram em ignio a temperatura ambiente (<37C)
2 - Produtos que entram em ignio quando aquecidos moderadamente
(<93C)
1 - Produtos que precisam ser aquecidos para entrar em ignio (>93C)
0 - No inflamvel
Azul - Perigo para Sade:
4 - Produto Letal
3 - Produto extremamente txico
2 - Txico
1 - Ligeiramente txico
0 - Produto no perigoso ou de risco mnimo
Amarelo - Reatividade:
OXY Oxidante Forte
ACID cido Forte
ALK - Alcalino (Base) Forte
COR - Corrosivo
W - No misture com gua
Vermelho Inflamabilidade:

4 - Podem explodir
3 - Podem explodir com choque mecnico ou calor
2 - Reao qumica violenta
1 - Instvel se aquecido
0 Estvel

RELATRIOS

Os valores tm sentido? Que informaes importantes podemos tirar?


Que implicaes esses resultados podem ter?

Os relatrios, quando solicitados, devero ser entregues nas datas


combinadas, para no haver diminuio de nota. Eles devero ser escritos
de acordo com o modelo apresentado a seguir, que tambm se baseia nas
normas da ABNT.
O relatrio dever apresentar a seguinte estrutura:
(1) Capa Deve identificar, de forma clara e organizada, a autoria do
trabalho, a instituio na qual ele foi realizado e o ttulo do mesmo. Os
itens que devem constar da capa so:
(a) Nome da Universidade; (b) Centro de Cincias...; (c) Curso; (d)
disciplina; (e) ttulo; (f) aluno; (g) professor; (h) local; (i) data. Nesta ordem.
Deve conter ainda:
Introduo uma espcie de carto de visitas e deve conter uma breve
apresentao do trabalho, a problemtica e os objetivos sem distino em
itens, ou seja, tudo isso presente no mesmo item
Introduo. Deve conter, tambm, a fundamentao terica, se esta no
vier em um tpico parte.
Metodologia Deve responder s seguintes perguntas: (a) Que
materiais, reagentes etc. voc usou e (b) o que e como voc fez?
Resultados e Discusso Voc expe os dados obtidos, os valores
determinados e deve discutir esses resultados a luz dos pressupostos
tericos, das previses feitas e dos objetivos. Nessas discusses
buscamos responder a perguntas do tipo: Os resultados eram esperados?

Concluses um tpico mais resumido, deve ser objetivo e trazer


apenas aquilo que foi obtido.
Bibliografias Relaciona todas as fontes que voc usou para
fundamentar seu trabalho, buscar mtodos que foram usados etc. Deve
seguir as normas ABNT. Caso no tenha sido usado nenhum livro ou outra
fonte, colocar: Manual fornecido pelo professor.
Da Introduo em diante, todos os itens devem vir em sequncia
corrida. Isso quer dizer que voc no deve separar em pginas diferentes
os diferentes itens, ou seja, terminado um item, j escrever o item
seguinte, na mesma pgina se couber, com separao de dois espaos
(duas vezes a tecla Enter).

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PRTICA 2:
VIDRARIAS E EQUIPAMENTOS

Possui volume definido e utilizado para o preparo de solues em


laboratrio.

ALMOFARIZ COM PISTILO


Usado na triturao e pulverizao de slidos.
BECKER

BALO DE FUNDO CHATO


Utilizado como recipiente para conter lquidos ou solues ou mesmo
fazer reaes com desprendimento de gases. Pode ser aquecido
sobre o TRIP com TELA DE AMIANTO.

de uso geral em laboratrio. Serve para fazer reaes entre


solues, dissolver substncias slidas, efetuar reaes de
precipitao e aquecer lquidos. Pode ser aquecido sobre a
TELA DE AMIANTO.

BURETA
BALO DE FUNDO REDONDO
Utilizado principalmente em sistemas de refluxo e evaporao
vcuo, acoplado a ROTAEVAPORADOR.

BALO VOLUMTRICO

Aparelho utilizado em anlises volumtricas.

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CADINHO

Usado para guardar substncias em atmosfera com baixo


ndice de umidade.

Pea geralmente de porcelana cuja utilidade aquecer


substncias a seco e com grande intensidade, por isto
pode ser levado diretamente ao BICO DE BUNSEN.

ERLENMEYER
CPSULA DE PORCELANA

Utilizado em titulaes, aquecimento de lquidos e para dissolver


substncias e proceder reaes entre solues.

Pea de porcelana usada para evaporar lquidos das


solues.

FUNIL DE BUCHNER
CONDENSADOR

Utilizado em filtraes a vcuo. Pode ser usado com a funo de


FILTRO em conjunto com o KITASSATO.

Utilizado na destilao, tem como finalidade condensar


vapores gerados pelo aquecimento de lquidos.

FUNIL DE SEPARAO
DESSECADOR

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Utilizado na separao de lquidos no miscveis e na extrao


lquido/lquido.

FUNIL DE HASTE LONGA


Usado na filtrao e para reteno de partculas slidas. No deve
ser aquecido.

Utilizada para medir pequenos volumes. Mede volumes variveis.


No pode ser aquecida.

PIPETA VOLUMTRICA

KITASSATO
Utilizado em conjunto com o FUNIL DE BUCHNER em
FILTRAES a vcuo.

PIPETA GRADUADA

Usada para medir e transferir volume de lquidos. No pode ser


aquecida, pois possui grande preciso de medida.

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PROVETA OU CILINDRO
GRADUADO
Serve para medir e transferir volumes de lquidos. No pode ser
aquecida.

Para a medida de massa de slidos e lquidos no


volteis com grande preciso.

TUBO DE ENSAIO

BICO DE BNSEN

Empregado para fazer reaes em pequena escala, principalmente


em testes de reao em geral. Pode ser aquecido com movimentos
circulares e com cuidado diretamente sob a chama do BICO DE
BNSEN.

a fonte de aquecimento mais utilizada em laboratrio.


Mais contemporaneamente tem sido substitudo pelas
MANTAS E CHAPAS DE AQUECIMENTO.

VIDRO DE RELGIO
Pea de Vidro de forma cncava usada em anlises e
evaporaes. No pode ser aquecida diretamente.

ESTANTE PARA TUBO DE ENSAIO


usada para suporte dos TUBOS DE ENSAIO.

GARRA DE CONDENSADOR
ANEL OU ARGOLA
Usado como suporte do funil na filtrao.

BALANA DIGITAL

Usada para prender o condensador haste do suporte


ou outras peas como bales, erlenmeyers etc.

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PINA DE MADEIRA
SUPORTE UNIVERSAL
Usada para prender o TUBO DE ENSAIO durante o
aquecimento.

Utilizado em operaes como: Filtrao, Suporte para


Condensador, Bureta, Sistemas de Destilao
etc. Serve tambm para sustentar peas em geral.

PINA METLICA
Usada para manipular objetos aquecidos.
TELA DE AMIANTO
Suporte para as peas a serem aquecidas. A funo do
amianto distribuir uniformemente o calor recebido
pelo BICO DE BUNSEN.
PISSETA OU FRASCO LAVADOR

TRIP
Usada para lavagens de materiais ou recipientes
atravs de jatos de gua, lcool ou outros solventes.

Sustentculo para efetuar aquecimentos de solues


em vidrarias diversas de laboratrio. utilizado em
conjunto com a TELA DE AMIANTO.

15

PRTICA 3:

Como consequncia, este equilbrio desloca-se para a esquerda, e com

pH E TAMPES

isso a basicidade da soluo no aumenta e o pH no sofre variao.


Perceba que no ir faltar o on B + para que o equilbrio acima se

Introduo
Soluo tampo ou soluo tamponada aquela que, ao adicionarmos
uma pequena quantidade de cido ou base, mesmo que fortes, mantm o
seu pH praticamente invarivel.

provvel

que

observao

destes

fatos

leve

ao

seguinte

questionamento:
Como as solues tampo conseguem manter o seu pH praticamente
constante?
Vamos imaginar uma soluo tampo constituda por uma base fraca
(BOH) e um sal (BA) derivado desta base.
Nesta soluo, ocorrem os seguintes fenmenos:
-Pequena dissociao da base (Conceito de Bronsted):

desloque para a esquerda, uma vez que a dissociao do sal BA B+ +


A- fornece uma boa reserva deste on.
Se juntarmos soluo tampo um cido qualquer, este ir se ionizar
colocando ons H+ em soluo. Estes ons H+ sero consumidos pelos
ons OH- resultantes da dissociao da base, e, desta forma, a acidez no
aumenta e o pH no muda.
H+ + OH- H2O
Perceba que no iro faltar ons OH - para reagir com o H+ do cido, pois a
base BOH fraca, e o estoque de frmulas BOH que continuar se
dissociando e fornecendo OH- muito grande.
Desta forma, conseguimos compreender que a soluo tampo s
resistir s variaes de pH at que toda base BOH ou todo sal BA sejam
consumidos. A resistncia que uma soluo tampo oferece s variaes

(Na soluo predominam frmulas da base BOH)


-Dissociao total do sal:

de pH recebe o nome de efeito tampo.


Caso a soluo tampo fosse constituda por um cido fraco e um sal

BA B+ + A(Na soluo predominam ons B+ e A-)


Observao: Note que o on B+ comum base e ao sal.
Ao juntarmos a esta soluo uma base forte, esta ir liberar ons OH -, que
sero consumidos pelo equilbrio:

derivado deste cido, a explicao para o comportamento desta soluo


seria semelhante anterior.
Conclumos, ento, que uma soluo tampo usada sempre que se
necessita de um meio com pH praticamente constante e preparada
dissolvendo-se em gua:
um cido fraco e um sal derivado deste cido;
uma base fraca e um sal derivado desta base.

16

CLCULO DO pH DE UMA SOLUO TAMPO


Vamos supor uma soluo tampo constituda por um cido fraco (HA) e
um sal (BA) derivado deste cido.
Neste caso, teremos:

Para uma soluo tampo de base fraca e um sal derivado desta base,
podemos demonstrar que:
Como pH + pOH = 14, neste caso ficamos com: pH = 14 - pOH
Com isso teremos:

Deduzindo a expresso da constante do equilbrio para o cido fraco,


temos:
Para determinar o pH de uma soluo com indicadores de pH, adicionamComo o cido fraco, a sua concentrao praticamente no varia durante

se algumas gotas de soluo de um ou dois indicadores e compara-se a

a ionizao, e a quantidade de on A- produzida muito pequena. Por

cor desenvolvida com a cor de uma srie de solues-tampo de pH

outro lado, o sal se dissocia totalmente, produzindo quase todo on A-,

conhecido e contendo a mesma quantidade de indicador.

presente na soluo.

Os indicares universais so misturas de vrios indicadores, cujos pK in se


[HA] [CIDO] e [A-] [SAL]

Portanto, a expresso da constante de equilbrio ficar:

sobrepem, o que permite abranger um intervalo de pH. Os papis


indicadores so papis impregnados de um indicador ou de indicadores
usados para determinao aproximada do pH. Veja a tabela abaixo:

Aplicando logaritmo aos dois membros da equao, teremos:

INDICADOR
Azul de timol
Amarelo de Metila
Alaranjado de Metila
Azul de bromofenol
Verde de Bromocresol
Vermelho de Metila
Vermelho de clorofenol
Prpura de Bromocresol
INDICADOR

pKa
1,7
3,3
3,5
4,0
4,7
5,0
6,0
6,2
pKa

INTERVALO DE PH E COR
1,2 Vermelho 2,8 Amarelo
2,9 Vermelho 4,0 Amarelo
3,1 Vermelho 4,4 Laranja
3,8 Amarelo 5,4 Azul
3,8 Amarelo 5,4 Azul
4,2 Vermelho 6,3 Amarelo
5,1 Amarelo 6,7 Vermelho
5,2 Amarelo 6,8 Roxo
INTERVALO DE PH E COR

17

Azul de Bromotimol
Vermelho de fenol
Vermelho de cresol
Azul de timol
Fenolftalena
Indicador Universal (Laranja de
metila+Vermelho de metila+Azul
de bromotimol+Fenolftalena)

Papel de tornassol
Papel vermelho de congo
Papel Indicador Universal

7,1
7,8
8,3
8,9
9,4

6,1 Amarelo 7,7 Azul


7,0 Amarelo 8,6 Vermelho
7,4 Amarelo 9,0 Vermelho
8,0 Amarelo 9,6 Azul
8,3 Incolor 10,0 Vermelho
3,0-Vermelho;
4,0Alaranjado;
5,0-Laranja;
6,0-Amarelo; 7,0-Verde; 8,0Verde azulado; 9,0- Azul;
10,0-Violeta;
11ou
+
prpura.
4,5-Vermelho-8,3-Azul
3,0-Azul-4,5-Vermelho

convulses. A acidose e a alcalose podem ser "respiratria", resultando de


mudanas na concentrao de H2CO3 ou "metablicas", resultando de
mudanas na concentrao de HCO3-.
A acidose e a alcalose podem resultar de mudanas na concentrao de
HCO3-. Acidose metablica, ou baixa concentrao de HCO 3-, pode
resultar de desidratao severa ou de diabetes mellitus no tratada.
Alcalose metablica, ou alta concentrao de HCO 3-, pode resultar de
vmito ou overdose de anticidos.
A tabela seguinte resume as mudanas que ocorrem em cada uma destas
quatro condies:
CONDIO

DISTRBIO

pH

ACIDOSE E ALCALOSE

Acidose respiratria

P(CO2) sobe

diminui

O pH dos fludos corporais deve permanecer dentro de limites prximos. A

Alcalose respiratria

P(CO2) cai

aumenta

morte pode resultar de aumentos ou diminuies relativamente pequenos


de pH. A razo para nossa sensibilidade ao pH depende das enzimas que

Acidose metablica
Alcalose metablica

HCO diminui
3

HCO aumenta

diminui
aumenta

catalisam as reaes qumicas do corpo. Sua atividade cai rapidamente

Para diagnosticar a condio cido-base de um paciente, uma amostra de

quando o pH muda. Uma vez que as enzimas desempenham papel to

sangue arterial retirada. Medidas de pH, P (CO 2) e CO2(H2CO3) total so

crucial, sua inativao pode ser fatal.

ento realizadas.

Os tampes do plasma sanguneo so as primeiras defesas do corpo

Resumindo temos:

contra as mudanas do pH interno. Seu papel manter o pH sanguneo

SOLUO TAMPO

dentro dos limites 7,35 a 7,45. Se o pH do sangue de uma pessoa cai

Tampo H2CO3/HCO3-

abaixo de 7,35, diz que ela est com acidose, ou baixo pH sanguneo. A
acidose causa desorientao, coma e finalmente morte. Se o pH sobe
alm de 7,45, diz-se que ela est com alcalose, ou baixo pH sanguneo. A
alcalose pode causar respirao fraca e irregular, cibras musculares e

18

- Responsvel pela manuteno do pH do sangue.

TUBO 3: adicionar 2 gotas de HCl 0,1 mol/L.


TUBO 4: adicionar 2 gotas de HCl 0,1 mol/L.

Objetivos

- Determinar o pH de solues utilizando os mtodos colorimtricos

Observar a mudana de cor, determinar o pH e anotar o resultado na


tabela.

(indicadores de pH);

Continuar a adio de HCl ao tubo 4, gota a gota, at a cor 3.

- Relacionar os conhecimentos adquiridos ao funcionamento dos tampes

Determinar quantas gotas de HCl devem ser adicionadas at que se

de importncia biolgica

obtenha a mesma colorao de tubo 3.

Procedimento

pH

a) Experimento 1
Preparar uma bateria de 4 tubos de ensaio
TUBO 1: 5 gotas de indicador universal + 10mL de gua destilada
TUBO 2: 5 gotas de indicador universal + 1mL do tampo fosfato + 9mL de
gua destilada
TUBO 3: 5 gotas de indicador universal + 10mL de gua destilada
TUBO 4: 5 gotas de indicador universal + 1mL do tampo fosfato + 9mL de
gua destilada
Determinar o pH de cada soluo e anotar o resultado.
b) Experimento 2
TUBO 1: adicionar 1 gota de NaOH 0,1 mol/L.
TUBO 2: adicionar 1 gota de NaOH 0,1 mol/L.

Observar a mudana de cor, determinar o pH e anotar o resultado na


tabela.

Antes

Depois

TUBO 1
TUBO 2
TUBO 3
TUBO 4
N de gotas______ para obter pH=3

19

PRTICA 4:
DETERMINAO DA CONCENTRAO DAS PROTENAS
Introduo

A chamada radiao luminosa corresponde a uma gama de comprimentos


de onda que vai desde o ultravioleta ao infravermelho no espectro da
radiao eletromagntica (Fig. 2).

Os mtodos espectroscpicos baseiam-se na absoro e/ou emisso de


radiao eletromagntica por muitas molculas, quando os seus eltrons
se movimentam entre nveis energticos. A espectrofotometria baseia-se
na absoro da radiao nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e
o infravermelho (Fig. 1).
O espectro do visvel est contido essencialmente na zona entre 400 e
800 nm (Tabela 1).
Tabela 1: Comprimentos de onda da luz visvel.

Figura 1. Espectro eletromagntico. A espectrofotometria utiliza a radiao


compreendida entre o ultravioleta (ultraviolet) e o infravermelho (infrared).

Um espectrofotmetro um aparelho que faz passar um feixe de luz


monocromtica atravs de uma soluo, e mede a quantidade de luz que

20

foi absorvida por essa soluo (Fig. 3). Usando um prisma o aparelho
separa a luz em feixes com diferentes
comprimentos de onda (tal como acontece no arco-ris com a separao
das cores da luz branca). Pode-se assim fazer passar atravs da amostra
um feixe de luz monocromtica (de um nico comprimento de onda, ou
quase). O espectrofotmetro permite-nos saber que quantidade de luz
absorvida a cada comprimento de onda.

Fig. 4. Espectros de absoro de absoro de diferentes substncias (1:


bacterioclorofila; 2: clorofila a; 3: clorofila b; 4: ficoeritrobilina; 5: betacaroteno). A substncia 1, por exemplo, absorve pouco na regio do
Fig. 3. Espectrofotmetro. A luz dividida em feixes de diferentes
comprimentos de onda por meio de um prisma ptico e passa atravs da
amostra, contida numa cubeta ou clula de espectrofotmetro.
1. Espectros de absoro
O conjunto das absorbncias aos vrios comprimentos de onda para um
composto chamasse espectro de absoro e varia de substncia para
substncia. Se uma substncia verde, por exemplo, ento deixa passar
ou reflete a cor nesse comprimento de onda, absorvendo
mais a luz na regio do vermelho. A seguir podem ver-se espectros de
vrias substncias diferentes (Fig. 4).

visvel, logo deve ser praticamente incolor para os nossos olhos.


Uma vez que diferentes substncias tm diferentes padres de absoro,
a espectrofotometria permite-nos, por exemplo, identificar substncias
com base no seu espectro. Permite tambm quantific-las, uma vez que a
quantidade de luz absorvida est relacionada com a concentrao da
substncia, como vamos ver adiante. s vezes uma substncia, quando
alterada quimicamente, pode passar a apresentar um espectro de
absoro diferente. Quando isto acontece, temos uma maneira de detectar
essas mesmas alteraes. Por exemplo, o NADH reduzido absorve a 340
nm, enquanto que a forma oxidada no tem absorbncia significativa a
esse comprimento de onda (Fig. 5).

21

Essas diferenas de espectro podem ser utilizadas laboratorialmente para


seguir o percurso de reaes que se esteja a estudar, por exemplo,
reaes metablicas que envolvam a oxidao do NADH ou a reduo do
NAD+.

2. A absoro da luz tanto maior quanto maior for a distncia percorrida


pelo feixe luminoso atravs das amostras:

Fig. 5. Espectros de absoro do NAD+ e do NADH.


3.2. Espectrofotometria e quantificao
3.2.1. Princpios de absoro da luz:
1. A absoro da luz tanto maior quanto mais concentrada for a
soluo por ela atravessada:
Juntando (1) e (2), temos a lei de Beer-Lambert:

22

Com alguma frequncia necessrio quantificar substncias em misturas


complexas, ou que no absorvem significativamente a luz a nenhum
comprimento de onda. Nestes casos utilizam-se os chamados mtodos
colorimtricos - o composto a quantificar posto em contacto com um
reagente especfico, de modo a desenvolver uma cor cuja intensidade
diretamente proporcional concentrao da substncia na mistura
original.
Por exemplo, para quantificar protenas numa soluo pura pode medir-se
a absorbncia a 280 nm, sendo esta proporcional concentrao de
protena. Mas se quisermos saber a concentrao de protena num extrato
impuro, este mtodo j no pode ser utilizado, porque outras substncias,
como por exemplo, os cidos nuclicos, tambm absorvem a este
comprimento de onda. Neste caso podemos utilizar, por exemplo, o
reagente de Biureto, que reage de modo quantitativo com as protenas,
originando um complexo violeta, que absorve fortemente a radiao a 540
Normalmente usam-se cubetas com 1 cm de comprimento, de modo que a

nm.

equao fica:

Para quantificar espectrofotometricamente uma substncia necessria,


obviamente, saber o valor de e. Para isso necessrio preparar uma srie

Ou seja, a absorbncia da luz a cada comprimento de onda l


diretamente proporcional concentrao da soluo contida na
cubeta. Esta linearidade deixa de ocorrer a concentraes muito elevadas
da substncia, podendo nesses casos diluir previamente a amostra a
medir.
3.2.2. Mtodos colorimtricos

de solues do composto a quantificar, de concentrao conhecida, fazlas contactar com o reagente e medir as absorbncias ao comprimento de
onda adequado (Fig. 8).

23

Muitas vezes o mtodo s linear at certa concentrao da substncia.


Nesse caso, utiliza-se a zona em que a relao linear, diluindo a soluo
a medir, sempre que necessrio, de modo a que a absorbncia resultante
esteja contida no intervalo da reta de calibrao.
Objetivos
Elaborar curvas de calibrao e trabalhar o conceito de sensibilidade de
um mtodo fotocolorimtrico;
Relacionar os mtodos vistos s aplicaes prticas;
Resolver problemas de clculo de diluies e de concentraes.
Materiais, Equipamentos e Reagentes
Fig. 8. Calibrao de um mtodo colorimtrico. A absorbncia ao
comprimento

de

onda

escolhido

diretamente

proporcional

concentrao do composto na soluo.


No exemplo da Fig. 8, h uma relao linear perfeita entre a concentrao
da substncia (expressa em molaridade, M) e a absorbncia ao
comprimento de onda l de medida. Podemos assim obter uma reta do tipo
Al= el.c (ou Al= el.c + b, caso a reta no passe na origem)
em que Al a absorbncia ao comprimento de onda l de medida, c a
concentrao em M e el a constante de proporcionalidade. Sabendo esta
relao, podemos fazer corresponder uma absorbncia medida, a uma
concentrao de substncia na soluo a analisar.

7 Tubos de ensaio;
6 Bqueres de 100
Pipetas de 1, 2 e 5 ml (prximas aos reagentes);
7 Pipetas de 2 5 ml;
1 Estante p/ tubos de ensaio;
1 Proveta de 100 ml;
Fotocolormetro (com cubetas).
Reativo do Biureto:
Sulfato de cobre cristalizado (pentahidratado) - 1,5g;
Tartarato duplo de sdio e potssio - 6,0g;
gua destilada - 500 ml;

24

Adicionar 300 ml de soluo de NaOH a 10% (p/v) (114,9 g/litro de NaOH)

DETERMINAO

sob constante agitao e completar para 1 litro com gua destilada.

AMOSTRA PROBLEMA

Soluo de casena a 5 % em gua;

- Separar dois tubos de ensaio e identific-los.

gua destilada.

- Adicionar os reagentes conforme tabela abaixo:

Procedimento:

Tabela 1 Distribuio de reagentes em diferentes propores

CURVA DE CALIBRAO

Reagentes (mL)
Amostra
gua destilada
Reagente do Biureto

- Numerar 6 tubos de ensaio de 1 a 6;


- Adicionar os reagentes conforme a Tabela 1:
Reagentes

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

Tubo 5

Tubo 6

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,0

0,8

0,6

0,4

0,2

5,0

5,0

5,0

(mL)
Soluo
Padro de
Protena
(5mg/mL)
gua
destilada
Reagente

Biureto
5,0
5,0
5,0
- Agitar e deixar em repouso por 10 minutos.

DA

- Utilizar o tubo 1 para calibrar o espectrofotmetro: 100% de


transmitncia em 540 nm (ou o fotocolormetro com filtro verde.
- Determinar a absorbncia das solues dos tubos 2 a 6.
- Calcular a curva padro construindo o grfico: Concentrao final de
protena (mg/mL) na ordenada e Absorbncia (A) nas abscissas.

CONCENTRAO

TUBO 1
1,0
5,0

DE

PROTENAS

TUBO 2
0,5
0,5
5,0

NA

25

PRTICA 5:

Os sabes so molculas anfipticas, apresentando em sua estrutura uma

CARACTERIZAO DE TRIACILGLICERIS EM LEO

longa cadeia hidrocarbonada (cauda apolar) e um grupo carboxilato

VEGETAL

(cabea polar). Formam solues coloidais estveis em gua, j que as


molculas se associam por interaes hidrofbicas entre as caudas
apolares formando micelas, apresentando grupos carboxilato carregados

Introduo

negativamente na superfcie das mesmas. Na superfcie da gua, as

Os lipdeos se caracterizam por sua insolubilidade em gua e em

molculas de sabo se orientam em uma camada onde as cabeas

presena solubilidade em solventes orgnicos como clorofrmio, ter,

polares interagem com a gua e as caudas apolares permanecem fora do

benzeno, mistura de Folch (clorofrmio:metanol). A grande maioria dos

lquido. Esta disposio provoca o abaixamento da tenso superficial da

lipdeos apresenta cidos graxos esterificados em sua estrutura,

gua. Os cidos graxos dos sabes podem ser precipitados pela adio

abrangendo os acilgliceris ou glicerdeos, os cerdeos, os fosfolipdeos e

de cidos fracos (cido actico).

os glicolipdeos. Estes compostos, mediante aquecimento em presena de

SABES INSOLVEIS

bases fortes como KOH e NaOH, produzem sais de sdio ou potssio de

Os sabes de metais alcalinos terrosos (Ca +2) so insolveis porque se

cidos graxos ou sabes alcalinos. Devido a esta propriedade, estes

encontram praticamente no dissociados.

lipdeos so denominados de lipdeos saponificveis j que podem ser

CAPACIDADE EMULSIFICANTE

caracterizados pela saponificao.

Os sabes tambm possuem poder emulsificante visto que quando

Exemplo:

agitados com leo ou gordura, em meio aquoso, interagem com os


mesmos atravs das caudas apolares produzindo gotculas carregadas
que se mantm em emulso.
Objetivos
- Caracterizar os triacilgliceris atravs de hidrlise alcalina (reao de
saponificao);

26

- Analisar a composio desses lipdios atravs de reaes de

2. Registrar o ocorrido.

saponificao e precipitao.

3. Dividir o contedo em 3 tubos de ensaio;

Materiais e Reagentes:

4. Adicionar cido actico concentrado em outro tubo de ensaio, gota a gota,

- leo de vegetal (1 mL em cada tubo);

at notar a presena de precipitado branco insolvel que so cidos

- 1 bquer;

graxos com baixo grau de dissociao;

- 3 tubos de ensaio;

5. Registrar o ocorrido.

- 1 Basto de vidro;

6. Adicionar gotas de CaCL2 e agitar at a formao do precipitado branco,

- Soluo de Hidrxido de potssio 40% em etanol (1:1);

que so os sabes de clcio;

- Soluo de cloreto de clcio;

7. Registrar o ocorrido.

- Soluo saturada de cloreto de sdio;

8. Ao ltimo tubo adicionar soluo de Cloreto de sdio saturada e observar

- Banho-maria;

a formao de um precipitado de sabo por excesso de sais neutros

- cido actico concentrado (CAPELA);

(efeito do on comum);

- 3 pipetas (p/ medir volumes).

9. Registrar o ocorrido.
10. Explicar o processo de solubilizao dos lipdios.

Procedimentos

11. Explicar o mecanismo da reao de saponificao.


12. Discutir como poderiam ser analisados os cidos graxos.

Saponificao:
1. Colocar 15 gotas do leo em um tubo de ensaio;
2. Colocar 5 mL de KOH 40%;
3. Aquecer o tubo a aproximadamente 90C por 30 minutos;
4. Registrar os dados.

REAGENTES
soluo de sabo*
soluo de NaCl
soluo de H3CCOOH
soluo de CaCl2

Anlise de caractersticas de sabes:


1. Agitar o tubo e verificar a formao de espuma;

Questionrio

TUBO 1
2 ml
5 gotas
-

TUBO 2
2 ml
5 gotas
-

TUBO 3
2 ml
5 gotas

27

1) Escrever a reao de hidrlise do triglicerdeo Trinolena.

UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS, Apostila da Disciplina

2) Por que se utiliza etanol na reao de saponificao?

Bioqumica Celular (s.n.t).

3) Explicar a ao detergente dos sabes.

UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIOSA (MG). Roteiros de Aulas

4) Explicar a precipitao de sabes por excesso de eletrlitos.

Prticas de Bioqumica. Departamento de qumica, (s.n.t).


UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARAN. Bioqumica: aulas prticas, 2

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U.F.V., 1998, 574p.

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ALFENAS, A. C.; PETERS, I.; BRUNE, W.; PASSADOR, G. C.


Eletroforese de protenas e lisozimas de fungos e essncias

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