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MANUAL DE LABORATORIO DE
BIOQUMICA CLNICA
ELABORADO POR
_M. en C. Leticia Arellano M. _______
_L. F. Blanca Estela Duque Montao_
_Dra. Claudia Hallal Calleros ______
SEMESTRE
N Hrs/sem
N Crditos
CONTENIDO
Pr-N
1
Ttulo de la Prctica
Objetivo de la Prctica
Hrs
Pg.
Electrolitos
10
Enzimas
Medidas de seguridad en el
Laboratorio. Manejo de RPBI
PRACTICA No.
1
TEMA (O UNIDAD)
GARANTA DE CALIDAD EN EL
LABORATORIO DE BIOQUMICA CLNICA
FECHA
ALUMNO
OBJETIVO: Conocer y familiarizarse con los conceptos bsicos sobre control de
calidad, exactitud, precisin, grficas de Levey Jennings, garanta y aseguramiento
de calidad.
1- INTRODUCCIN.
Para utilizar los estudios de laboratorio apropiadamente es necesario disponer
de la apreciacin de la validez tcnica de una prueba (precisin y exactitud); de su
valor diagnstico (sensibilidad y especificidad); de la adecuada obtencin de la
muestra por analizar, as como de las fuentes potenciales de error que pueden influir
en los resultados. Los procesos de control de calidad aseguran la precisin y la
reproducibilidad de los resultados del laboratorio.
Los conceptos antes mencionados permiten calificar la eficiencia del proceso de
medicin de las sustancias cuya concentracin se mide en diversos especimenes:
sangre, orina, lquido cefalorraqudeo, etctera.
La precisin la conocemos con los parmetros estadsticos de desviacin estndar y
el coeficiente de variacin calculados. La exactitud la conocemos con el %E
calculado.
La sensibilidad y especificidad de una prueba o determinacin de laboratorio
que emite resultados cuantitativos pueden representarse en forma de curvas de
distribucin gaussiana.
Levey y Jennings introducen la idea de analizar un material de control
conjuntamente con cada serie de muestras de paciente y expresar los resultados
mediante grficos de control. Un eje es el tiempo o procesos numerados
secuenciales. El otro eje es el valor de cada resultado de control de calidad. Los
grficos permiten a los analistas ver los resultados de control de calidad durante
semanas o meses.
Garanta y aseguramiento de Calidad
La garanta de calidad en los servicios de salud puede valorarse y controlarse,
puede ser optimizada, y sus beneficios superan sus costes y su objetivo es
suministrar a los pacientes servicios y productos de calidad.
El aseguramiento de la calidad contempla cuatro aspectos:
1.- Control preanaltico y postanaltico.
2.- Control interno de la calidad.
3.- Control externo de la calidad.
4.- Estandarizacin.
2- EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPO Y MATERIALES
cantidad
Descripcin
cantidad
1
Gradilla
500 ml
1
Pipeta graduada de vidrio de
1.0 ml
1
Pipeta graduada de vidrio de
REACTIVOS
descripcin
Agua destilada
1
1
5
1
4
1
2.0 ml
Pipeta graduada de vidrio de
5.0 ml
Pipeta graduada de vidrio de
10.0 ml
Tubos de ensaye de 13 x 100
Vaso de precipitados de 25 ml
Balanzas electrnicas de
precisin
Termmetro
3.- Con estos valores trazar una grfica de Levey-Jennings. En las abcisas graficar.
En das sucesivos se intercala el suero control patolgico entre las muestras
analizadas cada da, obtenindose los siguientes resultados:
Da
Resultado
49
51
6
3
50
13
50
23
50
4
50.5
14
49
24
49.5
5
48.5
15
51.5
25
50
6
49
16
52
26
51
7
49
17
48
27
51.5
8
50
18
51.5
28
52
9
49.5
19
47.5
29
52.5
10
55
20
52.5
30
53.5
11
51
21
48
31
54
Da
Resultado
22
49
12
50
Da
Resultado
X
S
cv
Estos ltimos valores han de ser debidamente reseados en la grfica previamente
trazada.
Grafica de Resultados (L-J)A
1. Partir de estos valores de concentracin de hierro obtenido en el anlisis previo
del suero control, calcular la media y la desviacin estndar de los mismos.
2. Trazar una lnea continua horizontal en el centro de la hoja de papel milimtrico.
3. Trazar en la misma hoja, tres lneas discontinuas a cada lado de la lnea recta
central, de forma que todas las rectas sean paralelas y equidistantes entre s, y
que las ms perifricas estn cercanas al borde superior e inferior de la hoja.
4. Anotar en ordenas, es decir, en el extremo izquierdo de las rectas:
El valor de la media, a nivel de la lnea central
El valor de media, ms o menos una desviacin estndar, respectivamente, a
nivel de las lneas inmediatamente superior e inferior a la central.
El valor de la media, ms o menos dos DE, respectivamente, a nivel de las lneas
inmediatamente superior e inferior a las anteriores.
El valor de la media, ms o menos tres DE, respectivamente, a nivel de las lneas
inmediatamente superior e inferior a las anteriores.
5. Anotar en abscisas, es decir, en el borde inferior de la hoja, la sucesin de das
en los que se practica el anlisis del suero control simultneamente al de las
muestras.
6. Marcar con un punto, cada uno de los valores de concentracin de hierro,
obtenidos en el anlisis de los sueros control intercalados entre las muestras.
7. Estos puntos se han de situar en la interseccin entre la cifra que corresponde a
cada valor (reflejado en ordenadas) y el da en el que fue obtenido (reflejado en
abscisas.)
Nota, Considerar como:
- Lmite de aviso, a las lneas que tienen asignado el valor de la media +/-1 DE.
Este lmite establece un nivel de confianza del 67%, es decir, de cada 100
veces que se realiza un anlisis, 67 resultados deben estar dentro de este
lmite.
- Lmite de alarma, a las lneas que tienen asignado el valor de la media +/- 2
DE. Este lmite establece un nivel de confianza del 95%.
- Lmite de accin, a las lneas que tienen asignado el valor de media +/- 3 DE.
Este lmite establece un nivel de confianza del 99.7% (aproximadamente, del
100%).
4- RESULTADOS
Clculos
PRACTICA No.
2
TEMA (O UNIDAD)
OBTENCION Y CONSERVACIN DE
MUESTRAS SANGUNEAS
FECHA
ALUMNO
OBJETIVOS
Conocer la forma correcta de realizar una extraccin de sangre por puncin venosa
y capilar, y adiestrarse en la conservacin de muestras sanguneas, para la
obtencin de suero o plasma.
1. INTRODUCCION
Toma de muestra
La sangre de un paciente es una de las muestras ms empleadas en las
determinaciones de bioqumica clnica, por ello es de gran valor el aprender a
realizar una correcta extraccin de sangre. La toma de muestra sangunea debe
considerar los siguientes aspectos:
1. El personal encargado de realizar la extraccin. Se requiere de personal con
suficiente destreza, confianza en s mismo, tica profesional, paciencia y
comprensin.
2. El paciente. El estado fsico, la edad y el sitio de puncin son caractersticas del
paciente que hay que tomar en cuenta cuando se realiza una extraccin de sangre.
3. El material. Contar con un espacio confortable para el paciente, en el cual pueda
estar relajado y con el material estril o asptico necesario (en buen estado), son
otro factor que influye en una correcta toma de muestra.
4. La tcnica de extraccin. Las tcnicas de extraccin de sangre no se aprenden en
un da, es un arte que debe desarrollarse mediante estudio, observacin y prctica,
para adquirir una destreza y confianza adecuadas.
5. Las determinaciones que se realizarn. Es importante conocer las
determinaciones que se realizarn, ya que dependiendo del nmero y tipo de
determinaciones que se realizarn, ser la cantidad de muestra a extraer.
Casi todas las muestras de sangre se extraen por puncin venosa, que es un
mtodo relativamente fcil y adecuado para obtener volmenes de 1 a 20 ml de
sangre. La extraccin de sangre venosa generalmente se realiza en las venas del
antebrazo aunque tambin puede realizare en las venas del dorso de la mano,
yugular, femoral o safena. La sangre puede extraerse con una jeringa o bien
empleando tubos al vaco con tapn de goma adaptados a una aguja de doble filo
que permite por un lado, puncionar la vena del paciente y por el otro perforar el
tapn del tubo al vaco. Para realizar las punciones con jeringa, se emplean agujas
hipodrmicas de diferentes calibres, los calibres ms empleados son: 20x32, 21x32
y 22x32. El sistema de tubos al vaco emplea diferentes tubos que se identifican por
el color de su tapn y se eligen en funcin de la prueba que se vaya a realizar; este
sistema emplea agujas de los siguientes calibres: 22x38, 21x38 y 20x38.
En bioqumica clnica existen determinaciones que requieren cantidades mnimas de
puncin se lleva a cabo con una lanceta que provoca una herida de una profundidad
estandarizada y puede realizarse en la yema de un dedo de la mano, en el lbulo de
la oreja o en el taln (en el caso de los neonatos). Existen en el mercado lancetas
automticas (vacutainer) como la amarilla con profundidad controlada de 2.4 mm en
9
3. PROCEDIMIENTO
I. Obtencin de Sangre por Puncin Venosa
a) Utilizando jeringa
1. Identificar el sitio de puncin
2. Verificar que el mbolo de la jeringa no se trabe (esto sin romper el empaque que
la contiene), asegurar la aguja para que no se separe.
3. Con una torunda impregnada de alcohol al 70%, limpiar la zona a puncionar con
un movimiento circular
4. Colocar la ligadura a unos 10 cm por arriba del sitio de puncin.
5. Quitar el tapn de la aguja y con el bisel hacia arriba introducir la aguja en la vena
en un ngulo de 15. Cuando aparezca una gota de sangre en el interior del portaaguja, jalar el mbolo hasta completar la cantidad de sangre deseada.
6. Retirar la ligadura cuidando de no lastimar al paciente.
7. Una vez obtenida la cantidad de sangre deseada, extraer la aguja y con otra
torunda limpia, aplicar presin en el sitio de puncin, al cabo de 2 o 3 minutos
retirar la torunda.
b) Utilizando tubos al vaco
1. Identificar sitio de puncin.
2. Armar el sistema: Conectar la aguja de toma mltiple al soporte de plstico.
3. Con una torunda impregnada de alcohol al 70%, limpiar la zona a puncionar con
un movimiento circular
4. Colocar la ligadura a unos 10 cm por arriba del sitio de puncin.
5. Quitar el tapn de la aguja y con el bisel hacia arriba introducir la aguja en la vena
en un ngulo de 15. Sosteniendo con firmeza el soporte de plstico, presionar el
tubo al vaco contra el extremo posterior de la aguja hasta conseguir que sta
perfore el tapn de goma del tubo. El tubo se va llenando de sangre debido a la
succin producida por el vaco que existe en el mismo.
6. Retirar el tubo cuando ste se haya llenado casi por completo con sangre. Si se
requiere, siguiendo el procedimiento indicado, llenar un segundo tubo de sangre.
7. Retirar la ligadura cuidando de no lastimar al paciente.
8. Extraer la aguja y con una torunda limpia aplicar presin en el sitio de puncin,
al cabo de 2 o 3 minutos retirar la torunda.
9. Tapar la aguja de extraccin, retirarla del soporte plstico y proceder a
desecharla. Limpiar el soporte plstico y guardarlo.
II. Obtencin de sangre por puncin capilar
1. Seleccionar un punto adecuado para la puncin.
2. Calentar la zona de puncin con una compresa hmeda (42C).
3. Limpiar la zona de la puncin con una torunda impregnada con alcohol al 70%.
4. Dejar secar la piel.
5. Llevar a cabo la puncin con una lanceta estril, realizando un nico movimiento
con el instrumento.
6. Desechar la primera gota de sangre enjugndola con una gasa estril.
7. Regular el flujo de sangre mediante presin con el pulgar.
8. Recoger la muestra en un microtubo y en un tubo capilar
9. La recolecta en el tubo capilar, deber sellarse uno de los extremos
introducindolo en plastilina.
10.Etiquetar el recipiente de la muestra con los datos completos del paciente.
III. Separacin de Suero
1. En caso de haber obtenido la muestra con jeringa, retirar la aguja de la jeringa,
verter la sangre a un tubo seco y limpio, dejar resbalar la sangre por las paredes
11
del tubo, evitando que se forme espuma. Este paso no es necesario en el caso de
tubos al vaco.
2. Dejar el tubo con sangre en bao de agua a 37C por 10-15 minutos ( a esta
temperatura la coagulacin se hace con mayor rapidez y la retraccin del cogulo
es mxima).
3. Cuando la coagulacin sea completa, con un aplicador de madera limpio y seco,
desprender el cogulo por las paredes del tubo, cuidando de no romperlo.
4. Centrifugar el tubo durante 5 minutos a 2500 r.p.m., despus de este proceso se
obtiene un lquido limpio, transparente y libre de hemlisis (el suero).
5. Separar el suero con una pipeta Pasteur y colocarlo en otro tubo limpio y seco.
IV. Separacin de Plasma
1. Si la muestra fue obtenida con jeringa, retirar la aguja de la jeringa, verter la
sangre en un tubo con anticoagulante. En el caso del tubo al vaco, este ya
contiene el anticoagulante.
2. Con suavidad invertir el tubo varias veces, con el fin de mezclar uniformemente la
sangre con el anticoagulante, cuidando de no agitar para que no se presente
hemlisis de la sangre.
3. Para separar la capa globular centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 minutos.
4. Terminada la centrifugacin, separar el sobrenadante (plasma) con una pipeta
Pasteur y colocarlo en otro tubo limpio.
Notas:
1. En caso de que la vena no haya podido ser puncionada al primer intento, utilice el
dedo ndice para localizarla de nuevo, puede ser que el pinchazo no haya sido lo
suficientemente profundo, o que la aguja se haya desviado ligeramente de la
vena.
2. Es muy importante presionar el lugar de puncin sin frotar para evitar la formacin
de hematomas (derrame de sangre en los tejidos).
3. Cuando se emplea jeringa para extraer la muestra, se debe evitar la inyeccin de
aire en la vena, comprobar que el mbolo se encuentre completamente hasta el
fondo del cuerpo de la jeringa antes de la puncin.
4. Una vez puncionada la vena, jalar suavemente el mbolo de la jeringa, nunca
aspirar bruscamente ya que esto puede hemolizar la muestra.
5. Cuidar el retroceso del mbolo, la fuerza de retroceso puede hacer que la pared
venosa se pegue sobre el bisel de la aguja y detenerse el flujo de sangre o bien la
aguja puede deslizarse inadvertidamente fuera de la vena.
4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:
ANALITO
SUERO
Edad:______.
ASPECTO
OBSERVACIONES
PLASMA
SANGRE
TOTAL
12
5. CUESTIONARIO
1. Cules son las ventajas y desventajas de la puncin venosa, puncin capilar y
puncin arterial?
2. Cul es el fundamento de la obtencin de suero y de plasma en una muestra
sangunea?
3. Cul es la ventaja del uso de plasma sobre el suero?
4. Cmo puede interferir la hemlisis en los resultados?
5. Cules son las recomendaciones para mantener conservadas las muestras
sanguneas?
6. REPORTE TCNICO.
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.
13
PRACTICA No.
3
ALUMNO
TEMA (O UNIDAD)
CITOMETRA
FECHA
OBJETIVO
El alumno realizar el montaje y conteo de eritrocitos, determinacin de la
concentracin de hemoglobina e ndices eritrocitarios, e Identificar las clulas
presentes en sangre perifrica de un individuo, relacionando estos parmetros con el
estado de salud del mismo.
1. INTRODUCCION
La biometra hemtica (citometra) comprende una serie de estudios que permiten
tener una visin bastante precisa del estado de todos los elementos formes de la
sangre, incluye la cuantificacin de hemoglobina, determinacin de hematocrito,
conteo eritrocitario, leucocitario y diferencial e ndices eritrocitarios.
La hemoglobina (Hb) es una protena conjugada con peso molecular de
64,5450 daltones, cuya funcin es transportar bixido de carbono (CO2) de los
tejidos a los pulmones y oxgeno (O2) de los pulmones a los tejidos. La Hb
totalmente saturada contiene alrededor de 1.34 ml de oxgeno por gramo de Hb. La
masa de eritrocitos de un adulto contiene 600g de Hb capaz de transportar 800 ml
de O2.
El hematocrito de una muestra de sangre es la relacin del volumen de
eritrocitos con el de la sangre total y se expresa como un porcentaje (%). El valor del
hematocrito es una cuantificacin de uso frecuente y de carcter fidedigno que se
practica junto con los estudios de Hb y recuento eritroctico, para calcular los ndices
eritrocticos.
El recuento de eritrocitos se expresa como concentracin (clulas por unidad
de volumen de sangre). La unidad de volumen para los recuentos celulares se
expres originalmente como milmetros cbicos (mm3) debido a las dimensiones
lineales de la cmara hemocitomtrica, pero puede expresarse tambin en litros.
ndices eritrocitarios. VCM, HCM y CMHC
Volumen corpuscular medio (VCM), es el valor medio del volumen de los hemates.
Se calcula a partir del hematocrito (HCT) y del recuento del nmero de hemates
(RBC).
Hemoglobina corpuscular media (HCM), es el valor medio del contenido en
hemoglobina de los hemates. Se calcula a partir de la concentracin de
hemoglobina (Hb) y del nmero de hemates.
Concentracin de hemoglobina corpuscular media (CHCM), es el valor de la
cantiodad de hemoglobina (en g) contenida en un dl de hemates. Se calcula a partir
de la concentracin de hemoglobina y del hematocrito.
El examen de la extensin de sangre es una parte importante de la evaluacin
hematolgica. La fiabilidad de la informacin obtenida depende en gran parte de lo
bien teidas que estn las extensiones. La extensin de sangre una vez preparada
se tie con colorante de Wright que permite estudiar la morfologa de las clulas
hemticas y establecer la frmula leucocitaria. Los ncleos y algunas otras
estructuras de las clulas sanguneas se tien con los colorantes bsicos y se
denominan basfilos, las estructuras celulares que se tien con los colorantes cidos
14
cantidad
100 ml
100 ml
Torundero
100 ml
Jeringa de 5 ml
100 ml
100 ml
1
1
Tubo de wintrobe
Pipeta de Thoma para
recuento de eritrocitos
Manguera de succin con
boquilla
Gradilla
Cmara de Neubauer
Microscopio
Pipeta de Sahli
centrfuga
Espectrofotmetro
Contador de clulas
MATERIAL BIOLGICO
cantidad
Descripcin
1
1
1
1
1
1
1
1
100 ml
REACTIVOS
Descripcin
Alcohol etlico al 70%
Reactivo de Drabkin
(Ferricianuro, cianuro de
potasio)
Solucin de Hayem (Sulfato
de sodio, cloruro de sodio,
cloruro de mercurio y agua
destilada)
Solucin de Turk (Acido
actico glacial, azul de
metileno)
5 ml
Sangre total
3. PROCEDIMIENTO
I. Determinacin de Hemoglobina
Principio: El ferricianuro de potasio oxida la hemoglobina a metahemoglobina y el
cianuro de potasio proporciona los iones cianuro (CN-) para formar
cianometahemoglobina, que tiene una absorcin mxima a una longitud de onda de
540 nm.
1. Poner 5 ml de reactivo de Drabkin en un tubo de ensaye de 13 x 100 mm.
2. Con la pipeta de Sahli tomar 0.02 ml de sangre y agregar al tubo que contiene
el reactivo de Drabkin. Mezclar bien.
3. Mantener a temperatura ambiente durante al menos 3 minutos.
4. Leer en el espectrofotmetro a 540 nm frente al blanco de reactivos
5. Criterio de lectura: La absorbancia del problema x 36.8, corresponder a la
concentracin de Hb en g/dl.
15
Nota: Se debe tener cuidado con la solucin de Drabkin ya que las soluciones de
cianuro son venenosas.
II. Determinacin de Hematocrito
Principio: Al centrifugar la sangre con anticoagulante en un tubo capilar, los
eritrocitos se sedimentan y el plasma queda como sobrenadante, con lo cual se
puede conocer el porcentaje total de glbulos rojos.
Procedimiento
1. Llenar un tubo capilar con sangre, hasta aproximadamente las partes de su
capacidad.
2. Sellar el capilar por la parte contraria al llenado del tubo.
3. Centrifugar a 3,500 r.p.m. durante 30 minutos.
4. Terminada la centrifugacin leer y anotar el resultado.
Criterio de lectura: El volumen ocupado por los eritrocitos entre el volumen total de
sangre corresponde al % de hematocrito.
Nota: Si el tubo de hematocrito es sellado en forma incompleta el resultado ser
errneo y anormalmente bajo ya que al girar los tubos en la centrfuga se produce
una prdida de hemates que es mayor que la prdida de plasma.
III. Conteo de eritrocitos
Principio: La sangre se diluye con la solucin de Harem en solucin salina a
0.85% que conserva los eritrocitos y destruye el resto de las clulas, permitiendo
cuantificar el nmero de eritrocitos por mm3 (l) de sangre entera.
Procedimiento
1. Con la pipeta de Thoma para glbulos rojos, aspirar sangre hasta la marca de 0.5.
2. Con la pipeta inclinada 45, llenar con el lquido diluyente hasta la marca de 101.
3. Tapar los extremos de la pipeta con papel parafilm.
4. Agitar por 1-2 minutos en agitador para pipetas.
5. Con la muestra diluida, llenar la cmara de Neubauer. Dejar reposar durante un
minuto.
6. Colocar la cmara de Neubauer en la platina del microscopio, localizar la
cuadrcula central (con el objetivo 10X) y con el objetivo 40 X contar los eritrocitos en
5/25 cuadros (de la cuadrcula central).
Criterio de lectura: El nmero de eritrocitos/mm3, ser igual al nmero de clulas
contadas x el factor de correccin (No. de clulas contadas x 10000).
Nota: El lquido diluyente no debe contener restos de sangre u otros factores que
puedan alterarlo. Tanto las pipetas de Thoma, como la cmara de Neubauer y el
cubreobjetos deben estar escrupulosamente limpios.
IV. Conteo Leucocitario
Principio: La sangre se diluye con la solucin de Turk, la cual lisa a los eritrocitos y
conserva a los leucocitos, permitiendo cuantificar stos ltimos mm3 de sangre
completa.
Procedimiento
Con la pipeta de Thoma para glbulos blancos, aspirar sangre hasta la marca de
0.5.
Con la pipeta inclinada 45, llenar con el lquido diluyente hasta la marca de 11
Tapar los extremos de la pipeta con papel parafilm.
Agitar durante 1-2 minutos en agitador para pipetas.
Llenar la cmara de Neubauer. Dejar reposar durante un minuto.
Colocar la cmara de Neubauer en la platina del microscopio. Con el objetivo 10x
localizar la cuadrcula y con el objetivo 40x contar los leucocitos en las cuatro
cuadrculas de los extremos.
16
Edad:______.
RESULTADO
VALORES DE
REFERENCIA
HEMOGLOBINA
17
HEMATOCRITO
ERITROCITOS
C.M.H.C.
C.M.H.
V.C.M.
Mtodo:
Observaciones:
Unidades
g/dl
%
Leucocitos/mm3
Eritrocitos/mm3
%
%
%
%
%
%
Clculos:
Interpretacin de resultados
Hemoglobina: Aumento: Hemoconcentracin o deshidratacin. Disminucin:
Anemia, hemorragia reciente o retencin de lquidos.
Hematocrito: Aumento: Policitemia o hemoconcentracin. Disminucin: Anemias o
hemodilucin.
18
6. CUESTIONARIO.
1. Qu importancia tiene el determinar la hemoglobina a un paciente?
2. Qu es la anemia, y cmo es que esta puede producirse?
3. Qu indica un valor de VCM menor de 80 fl?
4. Al aumentar la concentracin de anticoagulante en una muestra de sangre
qu sucede con el valor del hematocrito? Explique.
5. En qu circunstancias puede disminuir el hematocrito?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.
19
PRACTICA No.
4
ALUMNO
TEMA (O UNIDAD)
CARBOHIDRATOS
FECHA
OBJETIVO
Conocer la importancia que tiene la determinacin de glucosa en sangre para la
evaluacin del metabolismo de carbohidratos.
1. INTRODUCCION
Los carbohidratos, compuestos orgnicos formados por carbono, oxgeno e
hidrgeno, son fuente importante de energa; funcionan como reserva energtica y
sirven de base para la formacin de otras estructuras. Se ingieren en la dieta en
forma de polisacridos, disacridos o monosacridos y una vez digeridos son
absorbidos a nivel intestinal en forma de monosacridos. Cuando el monosacrido
absorbido no es glucosa, se transforma en ella a nivel heptico. Por tanto, el
metabolismo de los carbohidratos, es en ltima instancia el metabolismo de la
glucosa, que se encuentra regulado a nivel hormonal, mediante la insulina,
glucagn, glucocorticoides, catecolaminas y la hormona del crecimiento.
Tras la absorcin de la glucosa ingerida en la dieta, esta pasa a sangre y
entonces, los niveles normales (70 110 mg/dl) se elevan hasta valores de 120-150
mg/dl o ms. En las personas cuyo metabolismo hidrocarbonado funciona
adecuadamente, stos niveles de glucosa bajan enseguida de manera que entre una
y media o dos horas, regresa a los valores obtenidos en ayunas. Los estudios que
miden la tolerancia del organismo respecto a los carbohidratos, esto es, la capacidad
de metabolizarlos, tienen gran importancia clnica y constituyen algunas de las
pruebas de laboratorio que se realizan con mayor frecuencia. Las alteraciones ms
importantes en el metabolismo de los carbohidratos, son aquellas en las que se
altera la tolerancia y que conducen a un aumento del nivel de glucosa en sangre,
ocasionando un sndrome clnico denominado diabetes mellitus, del cual los niveles
altos de glucosa plasmtica es solo su expresin ms caracterstica.
La disminucin en los niveles plasmticos de glucosa, se produce como
consecuencia de un desequilibrio entre la glucosa que llega al torrente sanguneo
(proveniente de la absorcin intestinal, glucogenolisis y gluconeognesis) y la que
sale del mismo como consecuencia del consumo por parte de los tejidos. Las
pruebas diagnsticas ms utilizadas para evaluar el metabolismo de la glucosa son:
glucemia en ayunas, glucemia posprandial y pruebas de sobrecarga de glucosa.
Valores de glucosa en ayunas superiores a 130 mg/dl, son idicativos de diabetes
mellitus, mientras que los que se encuentran entre 110-120 mg/dl, se consideran
valores dudosos y hay que confirmarlos mediante alguna prueba de sobrecarga de
glucosa. La determinacin de la glucemia postprandial, se realiza cuando la
determinacin de glucosa en ayunas no aporta un diagnstico definitivo. Consiste en
determinar los niveles de glucosa un una muestra de sangre obtenida dos horas
despus de haber ingerido una dosis conocida (100 g) de glucosa.
Previo al anlisis, es importante llevar a cabo una dieta rica en carbohidratos
(mnimo 300 g diario) e interrumpir medicamentos que puedan interferir con el
metabolismo de carbohidratos. Cuando la prueba posprandial no aporte datos
20
Jeringa de 5 ml
1
1
1
Torundero
Ligadura
Aguja de doble filo para tubo
al vaco
Tubos de ensaye de 13 x 100
Tubos de ensaye de 12 x 75
Tubo al vaco tapn rojo
Pipetas pasteur
Bulbo gotero
Micropipeta graduable con
puntas
Pipeta de vidrio graduada de
1.0 ml
Pipeta de vidrio graduada de
5.0 ml
Guantes de latex
Centrfuga
Incubadora
Espectrofotmetro
2
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial para
determinacin de Glucosa
1
Estandar de Glucosa: 100
mg/dl
100 ml
Agua destilada
1
Suero control
MATERIAL BIOLOGICO
cantidad
2 ml
Descripcin
Suero
3. PROCEDIMIENTO
I. Glucosa Plasmtica en Ayunas
1. Indicar al paciente que debe de tener un ayuno de 8 a 12 horas.
2. Tomar una muestra de sangre y procesarla para obtener suero. (como se ndica
en la prctica No.2). Separar el suero y pasarlo a un tubo limpio y seco.
3. Para la cuantificacin de glucosa, se deben seguir los procedimientos indicados
por el profesor, ya que las cantidades de muestra y reactivos a emplear, varan
dependiendo de la marca de los reactivos. Sin embargo, puesto que la mayora
de las determinaciones se realizan por espectrofotometria, se debe proceder
como sigue:
4. Preparar una serie de 3 tubos y rotularlos de la siguiente manera: Tubo 1=
Blanco, Tubo 2= Estndar, Tubo 3= Muestra problema.
21
5.
Con las pipetas adicionar en cada tubo la cantidad indicada (X) de: agua
destilada, solucin estndar y suero problema. A continuacin, adicionar la
cantidad de reactivo (Y) indicada para cada determinacin, como se muestra a
continuacin:
Tubo 1
X ml
_____
_____
Y ml
Tubo2
_____
X ml
_____
Y ml
Tubo3
_____
_____
X ml
Y ml
Agua destilada
Solucin estndar
Suero del paciente
Reactivos
indicados
Nota: todos los tubos debern contener el mismo volumen final = X + Y.
6. Mezclar cada tubo, como lo indique el profesor.
7. Seguir las condiciones de incubacin indicadas.
8. Conectar y poner en marcha el espectrofotmetro.
9. Elegir la longitud de onda de acuerdo a la determinacin que se vaya a realizar.
10. Calibrar el espectrofotmetro a cero de absorbancia. Esto se hace empelando el
contenido del tubo 1.
11. Realizar las lecturas de los tubos 2 y 3, anotando las absorbancias de cada uno.
12. Realizar por triplicado las lecturas.
13. Terminadas las lecturas, verificar que no quede ninguna celda dentro del
espectrofotmetro, apagar el equipo y revisar que no queden celdas sucias.
14. Realizar los clculos correspondientes para obtener la concentracin de glucosa
en la muestra.
Notas
1. Para la obtencin de resultados exactos y precisos, seguir estrictamente la
metodologa propuesta.
2. Se debe tener cuidado de no hemolizar la muestra, ya que la hemlisis interfiere
en los resultados.
3. Preparar siempre un blanco y patrn para tener una lectura confiable.
4. La concentracin de glucosa plasmtica disminuye a una velocidad aproximada
del 5 % por hora en los casos en que no se realiza de inmediato la separacin
del cogulo.
Las pipetas y el material de vidrio empleados debern ser lavadas y enjuagadas
perfectamente, con agua destilada.
4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:
Edad:______.
RESULTADO
VALORES DE
REFERENCIA
GLUCOSA
Mtodo:
22
Observaciones:
5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia
Glucosa basal: 70 110 mg/dl
Repeticiones
Glucosa
Absorbancia del
estndar
Absorbancia de la
muestra
1
2
3
Media
DE
C.V.
%E
Clculos
Interpretacin de resultados
El incremento en los valores normales de glucosa indica diabetes mellitus, por
deficiencia absoluta de insulina o con relativa sensibilidad de los rganos efectores a
esta hormona. El diagnstico de diabetes mellitus implica reconocer un mayor riesgo
del paciente para tener enfermedades coronarias, padecimientos cerebrovasculares, complicaciones durante el embarazo, enfermedad renal, edema,
hipertensin, cataratas, glaucoma, ceguera.
6. CUESTIONARIO
1. Cmo se determina la glucosa posprandial?
2. Cmo se determina la curva de tolerancia a la glucosa?
3. En qu tipo de pacientes se debe realizar la prueba de glucosa posprandial
y la curva de tolerancia a la glucosa?
4. Cul es la finalidad de la prueba de hemoglobina glicosilada?
5. Si llega un(a) paciente solicitando una curva de tolerancia a la glucosa con
una carga de 75 g, se le toma la muestra para glucosa basal y se obtiene una
concentracin de 180 mg/dl, le dara la carga? Por qu?
6. Qu factores pueden influir en los resultados de la concentracin de
glucosa?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.
23
PRACTICA No.
5
ALUMNO
TEMA (O UNIDAD)
PROTENAS
FECHA
24
Jeringa de 5 ml
1
1
1
Torundero
Ligadura
Aguja de doble filo para tubo al
vaco
Tubos de ensaye de 13 x 100
Tubos de ensaye de 12 x 75
Tubo al vaco tapn rojo
Pipetas pasteur
Bulbo gotero
Micropipeta graduable con
puntas
Pipeta de vidrio graduada de
1.0 ml
Pipeta de vidrio graduada de
5.0 ml
Guantes de latex
Centrfuga
Incubadora
Espectrofotmetro
2
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
100 ml
REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial para
determinacin de Protenas
totales y Albmina.
Estandar de protenas totales:
100 mg/dl
Estandar de Albmina:
Suero control
Agua destilada
MATERIAL BIOLOGICO
cantidad
Descripcin
2 ml
Suero
3. PROCEDIMIENTO
Al igual que en la determinacin de glucosa, se deben seguir los procedimientos
indicados por el profesor, ya que las determinaciones varan dependiendo de la
marca de los reactivos.
1. Indicar al paciente que debe de tener un ayuno de 8 horas.
2. Tomar una muestra de sangre y procesarla para obtener suero. (como se ndica
en la prctica No.2). Separar el suero y pasarlo a un tubo limpio y seco.
25
Tubo2
_____
X ml
_____
Y ml
Tubo3
_____
_____
X ml
Y ml
Agua destilada
Solucin estndar
Suero del paciente
Reactivos
Nota:
todos los tubos
indicados
debern
contener
el
mismo volumen final = X + Y.
5. Mezclar cada tubo, como lo indique el profesor.
6. Seguir las condiciones de incubacin indicadas.
7. Conectar y poner en marcha el espectrofotmetro.
8. Elegir la longitud de onda de acuerdo a la determinacin que se vaya a realizar.
9. Calibrar el espectrofotmetro a cero de absorbancia. Esto se hace empelando el
contenido del tubo 1.
10. Realizar las lecturas de los tubos 2 y 3, anotando las absorbancias de cada uno.
11. Realizar por triplicado las lecturas.
12. Terminadas las lecturas, verificar que no quede ninguna celda dentro del
espectrofotmetro, apagar el equipo y revisar que no queden celdas sucias.
13. Realizar los clculos correspondientes para obtener la concentracin de glucosa
en la muestra.
Notas
1. Para evitar la contaminacin de las soluciones reactivas, se recomienda vaciar
en otro recipiente la cantidad requerida para uso.
2. Preparar siempre un blanco y patrn para tener una lectura confiable.
3. Tener en cuenta los valores de linearidad en caso de obtener valores
incrementados.
4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:
Edad:______.
RESULTADO
VALORES DE
REFERENCIA
PROTENAS TOTALES
ALBMINA
GLOBULINAS
26
Mtodo:
Observaciones:
5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia
Parmetro
Protenas totales
Albmina
Globulinas
ANALITO
Concentracin srica
6.7 8.7 g/dl
3.6 5.1 g/dl
1.8 3.6 g/dl
Absorbancia del
estndar
1
Absorbancia de
la muestra
problema
1
2
3
Clculos
estadsticos
M
D.E C.V. %E
Protenas totales
Albmina
Globulinas
Clculos:
Interpretacin de resultados
Protenas totales
El aumento en la concentracin total de protenas srica se relaciona por lo general
con deshidratacin o con el aumento de una de las fracciones globulnicas.
La baja concentracin de las protenas totales del suero se pude presentar en el
sndrome nefrtico o en casos de desnutricin.
Albmina
La hipoalbuminemia es un hallazgo caracterstico de las enfermedades hepticas
evolucionadas, el sndrome nefrtico o desnutricin.
Globulinas
Un aumento de globulinas es caracterstico de inflamaciones agudas, en tanto que
su disminucin esta relacionada con problemas hepticos o inmunosupresin.
27
6. CUESTIONARIO
1. Qu datos nos ofrece la determinacin de protenas en suero sobre las
siguientes
alteraciones:
gastrointestinales,
hepticas,
hematolgicas,
inmunolgicas y renales?
2. En qu consiste el estudio electrofortico de protenas?
3. Qu es un proteinograma?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.
28
PRACTICA No.
6
TEMA (O UNIDAD)
COMPUESTOS NITROGENADOS NO
PROTICOS
FECHA
ALUMNO
OBJETIVO: Conocer la importancia de determinar los compuestos nitrogenados no
proteicos y su asociacin con alteraciones en el metabolismo de protenas y
aminocidos, as como con problemas renales.
1. INTRODUCCION
El metabolismo es la suma de los procesos bioqumicos que tienen lugar en el
interior de una clula viva; para que se lleve a cabo es necesario que surjan una
serie de fenmenos (metabolismo intermediario) a fin de que los diversos sustratos
lleguen y se incorporen a las clulas. El mecanismo de incorporacin es complejo y
con numerosas variantes. En el organismo, las clulas seleccionan los sustratos que
van a utilizar, almacenan los que requieren y eliminan los que no pueden aprovechar
(productos finales del metabolismo). Los productos finales del metabolismo de
importancia clnica son: Urea, creatinina y cido rico.
La urea constituye el principal producto de excrecin del metabolismo
proteico. Es sintetizada en el hgado a partir de los aminocidos, de all pasa a
sangre y finalmente es eliminada va renal en la orina. La urea constituye el 80 - 90
% del nitrgeno excretado (el nitrgeno ureico constituye aproximadamente el 45%
del nitrgeno no protenico total del suero o plasma). La concentracin de nitrgeno
ureico en la sangre representa el equilibrio entre la velocidad de sntesis de la urea
en el hgado y la de excrecin de esta sustancia por el rin. Los niveles sanguneos
de urea incrementan (uricemia) cuando la excrecin glomerular disminuye, por lo
que constituye un indicador de insuficiencia renal. Los mtodos para la
determinacin de urea pueden clasificarse en dos grupos:
a) Mtodos directos: los cuales consisten en la condensacin de la urea con diacetilo
para formar un cromgeno cuantificable (medible).
b) Mtodos Indirectos: consisten en la determinacin de amonio resultante de la
reaccin de la ureasa sobre la urea.
La creatinina es un producto final que deriva de la creatina (compuesto
nitrogenado no proteico, que se encuentra en forma de fosfocreatina) del tejido
muscular. Durante el ejercicio la fosfocreatina es desfosforilada, manteniendo el
aporte de ATP que es la fuente inmediata de energa para la contraccin muscular.
La creatinina libre, no se utiliza en el metabolismo y funciona nicamente como
producto de excrecin de la creatina. Tras pasar a la sangre, se elimina en su
mayora a nivel renal. Por lo tanto, todas las causas de lesin renal pueden ser
responsables de la elevacin de creatinina srica, ya que evitan su excrecin. La
medicin de la excrecin de creatinina es una medicin especfica, muy til para
determinar funcin renal, en especial la filtracin glomerular. la mayora de los
mtodos para la determinacin de cratinina se basan en la reaccin de Jaff,
desafortunadamente este mtodo tan simple es inespecfico, existiendo algunas
sustancias en la sangre que tambin reaccionan con el reactivo.
El cido rico es un cido orgnico dbil que constituye el producto terminal
de la degradacin de las purinas, procedentes del catabolismo de los cidos
nucleicos. En el organismo existen alrededor de 1200 mg de cido rico, se
encuentra en sangre y articulaciones como sal de sodio, urato monosdico.
29
Diariamente son elminados unos 700 mg de cido rico, el 60% lo hace a travs de
la orina y el resto es eliminado con la bilis (va heptica) y los jugos gstrico y
pancretico. La elevacin en los nivles sricos de cido rico (hiperuricemia), puede
estar originada por: incremento en la sntesis de cido rico (hiperuricemia
metablica) o un dficit de su excrecin a nivel renal (hiperuricemia renal); lo anterior
trae como consecuencia el depsito de cido rico en forma de uratos, que provocan
una reaccin inflamatoria en diversas localizaciones (gota). El cido rico se mide
en sangre, orina u otros lquidos corporales mediante tcnicas colorimtricas o bien
por mtodos enzimticos.
Principio de las determinaciones
Urea (mtodo enzimtico)
La hidrlisis de la urea, por la enzima ureasa produce amonaco y cido carbnico;
el amonaco se cuantifica por medio de la cetoglutarato catalizada por la enzima
glutamato
aminacin reductiva del deshidrogenasa, con la oxidacin simultnea
del nicotinamin-adenin-dinucletido reducido (NADH) (Fig. ). La disminucin en la
extincin debida al consumo de NADH, es directamente proporcional a la
concentracin de urea presente en la muestra.
Creatinina (reaccin de Jaff)
La creatinina y otros cromgenos presentes en el plasma; en medio alcalino,
reaccionan con el in picrato dando un complejo de color amarillo. La concentracin
del complejo colorido producido en un determinado tiempo de reaccin corresponde
a la concentracin de creatinina.
cido rico (mtodo enzimtico)
El cido rico se transforma en presencia de oxgeno y la enzima uricasa, en
alantona y perxido de hidrgeno. Este ltimo reacciona simultneamente con el
cido 2-OH-3,5-diclorobencensulfnico (2-OH-3,5-DCBS) y con 4-aminoantipirina (4AAP), formando una quinonimina roja. La absorbancia de la quinonimina producida
es proporcional a la concentracin de cido rico presente en la muestra.
2. EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPO Y MATERIALES
cantidad
Descripcin
cantidad
1
Gradilla
1
1
Jeringa de 5 ml
Torundero
1
1
Ligadura
Aguja de doble filo para tubo al
vaco
Tubos de ensaye de 13 x 100
Tubos de ensaye de 12 x 75
Tubo al vaco tapn rojo
Pipetas pasteur
Bulbo gotero
Micropipeta graduable con
puntas
Pipeta de vidrio graduada de
1.0 ml
1
1
2
2
1
1
1
1
1
1
1
100 ml
REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial para
determinacin de urea
Equipo comercial para
determinacin de creatinina
Equipo comercial para
determinacin de cido rico
Estandar de urea
Estandar de creatinina
Estandar de cido rico
Suero control
Agua destilada
30
1
1
1
1
Guantes de latex
Centrfuga
Incubadora
Espectrofotmetro
MATERIAL BIOLOGICO
cantidad
Descripcin
2 ml
Suero
3. PROCEDIMIENTO
1. Indicar al paciente que debe de tener un ayuno de 8 horas.
2. Tomar una muestra de sangre y procesarla para obtener suero. (como se ndica
en la prctica No.2). Separar el suero y pasarlo a un tubo limpio y seco.
3. Para cada determinacin, preparar una serie de tubos rotulados: blanco,
estandar y muestra problema. Para la cuantificacin de urea, creatinina y cido
rico se deben seguir los procedimientos indicados por el profesor, ya que las
cantidades de muestra y reactivos a emplear, varan dependiendo de la marca de
los reactivos.
4. Con las pipetas adicionar en cada tubo la cantidad indicada (X) de: agua
destilada, solucin estndar y suero problema. A continuacin, adicionar la
cantidad de reactivo (Y) indicada para cada determinacin, como se muestra a
continuacin:
Tubo 1
Tubo2
Tubo3
Agua destilada
X ml
_____
_____
Solucin estndar
_____
X ml
_____
Suero del paciente _____
_____
X ml
Reactivos
Y ml
Y ml
Y ml
indicados
Nota: todos los tubos debern contener el mismo volumen final = X + Y.
5. Mezclar cada tubo, como lo indique el profesor.
6. Seguir las condiciones de incubacin indicadas.
7. Conectar y poner en marcha el espectrofotmetro.
8. Elegir la longitud de onda de acuerdo a la determinacin que se vaya a realizar.
9. Calibrar el espectrofotmetro a cero de absorbancia. Esto se hace empelando el
contenido del tubo 1.
10. Realizar las lecturas de los tubos 2 y 3, anotando las absorbancias de cada uno.
11. Realizar por triplicado las lecturas.
12. Terminadas las lecturas, verificar que no quede ninguna celda dentro del
espectrofotmetro, apagar el equipo y revisar que no queden celdas sucias.
13. Realizar los clculos correspondientes para obtener la concentracin de glucosa
en la muestra.
Notas
1. Para evitar la contaminacin de las soluciones reactivas, se recomienda vaciar
en otro recipiente la cantidad requerida para uso.
2. Preparar siempre un blanco y patrn para tener una lectura confiable.
3. Tener en cuenta los valores de linearidad en caso de obtener valores
incrementados.
4. RESULTADOS
Nombre:
31
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:
Edad:______.
RESULTADO
VALORES DE
REFERENCIA
CREATININA
UREA
ACIDO URICO
Mtodo:
Observaciones:
5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia en suero
Parmetro
Urea
Cratinina
cido rico
ANALITO
Absorbancia del
estndar
1
Resultado
20 - 40 mg / dl
0.5 1.5 mg / dl
2.5 - 7.3 mg / dl
Absorbancia de
la muestra
problema
1
2
3
Clculos
estadsticos
M
D.E C.V. %E
Urea
Creatinina
cido rico
Clculos:
32
Interpretacin de resultados
Urea
Aumentado: Causas prerenales (descompensacin cardica, deshidratacin
ocasionada por ingesta reducida o prdida excesiva de agua, aumento del
catabolismo proteico). Causas renales (glomerulonefritis aguda, nefritis crnica,
rin poliqustico, necrosis tubular). Causas postrenales: Cualquier tipo de
obstruccin del tracto urinario.
Disminuido: Es menos frecuente y ocurre primariamente en enfermedad heptica
avanzada.
Creatinina
La concentracin de creatinina en suero es una excelente prueba para valorar la
funcin renal. En pacientes con nefropatas conocidas, la existencia de
concentraciones permanentes de 2.5 a 4.9 mg/dl. significa una grave disminucin de
la funcin renal. Las concentraciones de 5.0 a 9.9 mg/dl demuestran la existencia de
enfermedad renal muy grave. Las concentraciones por encima de 100 mg/dl ponen
en evidencia que es el momento de considerar el tratamiento de reemplazo crnico
ya sea bajo la forma de dilisis permanente o de un transplante renal.
Acido rico
Aumentado: Gota, leucemia, anemia
Disminuido: Acromegalia, tratamiento de salicilatos. Orientacin hacia el diagnstico
de enfermedades primarias como: trastornos de los tbulos proximales del rin; en
enfermedad de Wilson. Deficiencia hereditaria de xantinaoxidasa
6. CUESTIONARIO
1. Qu refleja el incremento de urea y creatinina en el suero de un paciente?
2. Qu padecimientos incrementan los valores de creatinina y de urea?
3. Qu factores influyen en los resultados de un examen de cido rico?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.
33
PRACTICA No.
7
ALUMNO
TEMA (O UNIDAD)
METABOLISMO DE LPIDOS
FECHA
Jeringa de 5 ml
Torundero
Ligadura
REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial para
determinacin de triglicridos
Equipo comercial para
determinacin de colesterol
Equipo comercial para
determinacin de LDL y HDLcolesterol
Estandar de triglicridos
35
1
2
2
1
1
1
1
Tubos de ensaye de 12 x 75
Tubo al vaco tapn rojo
Pipetas pasteur
Bulbo gotero
Micropipeta graduable con
puntas
1
Pipeta de vidrio graduada de
1.0 ml
1
Pipeta de vidrio graduada de
5.0 ml
1
Guantes de latex
1
Centrfuga
1
Incubadora
1
Espectrofotmetro
MATERIAL BIOLOGICO
cantidad
Descripcin
2 ml
Suero
Estandar de colesterol
1
100 ml
3. PROCEDIMIENTO
1. Indicar al paciente que debe de tener un ayuno de 12 horas.
2. Tomar una muestra de sangre y procesarla para obtener suero. (como se
ndica en la prctica No.2). Separar el suero y pasarlo a un tubo limpio y seco.
3. Para cada determinacin, preparar una serie de tubos rotulados: blanco,
estandar y muestra problema. Para la cuantificacin de triglicridos,
colesterol, LDL y HDL-colesterol se deben seguir los procedimientos
indicados por el profesor, ya que las cantidades de muestra y reactivos a
emplear, varan dependiendo de la marca de los reactivos.
4. Con las pipetas adicionar en cada tubo la cantidad indicada (X) de: agua
destilada, solucin estndar y suero problema. A continuacin, adicionar la
cantidad de reactivo (Y) indicada para cada determinacin, como se muestra
a continuacin:
Tubo 1
X ml
_____
_____
Y ml
5.
6.
7.
8.
9.
Tubo2
_____
X ml
_____
Y ml
Tubo3
_____
_____
X ml
Y ml
Agua destilada
Solucin estndar
Suero del paciente
Reactivos
indicados
Nota: todos los tubos debern contener el mismo volumen final = X + Y.
Mezclar cada tubo, como lo indique el profesor.
Seguir las condiciones de incubacin indicadas.
Conectar y poner en marcha el espectrofotmetro.
Elegir la longitud de onda de acuerdo a la determinacin que se vaya a
realizar.
Calibrar el espectrofotmetro a cero de absorbancia. Esto se hace empelando
el contenido del tubo 1.
36
10. Realizar las lecturas de los tubos 2 y 3, anotando las absorbancias de cada
uno.
11. Realizar por triplicado las lecturas.
12. Terminadas las lecturas, verificar que no quede ninguna celda dentro del
espectrofotmetro, apagar el equipo y revisar que no queden celdas sucias.
13. Realizar los clculos correspondientes para obtener la concentracin de
glucosa en la muestra.
Notas
1. Para evitar la contaminacin de las soluciones reactivas, se recomienda vaciar
en otro recipiente la cantidad requerida para uso.
2. Preparar siempre un blanco y patrn para tener una lectura confiable.
3. Tener en cuenta los valores de linearidad en caso de obtener valores
incrementados.
4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:
Edad:______.
RESULTADO
VALORES DE
REFERENCIA
COLESTEROL
TRIGLICRIDOS
HDL- colesterol
LDL- colesterol
Mtodo:
Observaciones:
5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia
Colesterol
150 - 250 mg/dl
Para la determinacin del riesgo de hipercolesterolemia se considera:
Sospechoso a partir de 220 mg/dl
Elevado a partir de 260 mg/dl
Triglicridos
10 150 mg/dl
Para la determinacin del riesgo de hipertrigliceridemia se considera:
37
ANALITO
Absorbancia del
estndar
1
Absorbancia de
la muestra
problema
1
2
3
Clculos
estadsticos
M
D.E C.V. %E
Colesterol
Triglicridos
HDL- colesterol
LDL- colesterol
Clculos:
Interpretacin de resultados
Colesterol
Hipercolesterolemia: Puede denotar riesgo de arteriopata coronaria as como de
hepatitis insipiente, trastorno de lpidos, bloqueo de conductos biliares, pancreatitis e
hipotiroidismo.
Hipocolesterolemia: Suele guardar relacin con desnutricin, necrosis celular del
hgado e hiperiroidismo.
Triglicridos
Niveles elevados de triglicridos se consideran riesgo extraordinario de sufrir
arteriopata coronaria. El incremento moderado puede significar obstruccin de vas
biliares, diabetes o sndrome nefrtico. Los niveles extraordinariamente
incrementados pueden significar hiperlipoproteinemia congnita.
La disminucin de los niveles sricos es rara y se observa en casos de desnutricin
o abetalipoproteinemia.
Lipoprotenas
Los niveles elevados de LDL aumentan el riesgo de arterioparia coronaria. Niveles
altos de HDL indican menor frecuencia a sufrir la cardiopata antes sealada, pero
tambin pueden denotar hepatitis crnica, cirrosis biliar o alcoholismo.
38
6. CUESTIONARIO
1. Cules son las vas del metabolismo de los lpidos?
2. En qu condiciones debe presentarse el paciente al laboratorio para realizar la
determinacin de lpidos?
3. Cmo puede interferir en los resultados una muestra hemolizada, ictrica y
lipmica?
4. Por qu el suero es la muestra de eleccin para realizar la determinacin de
lpidos?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.
39
PRACTICA No.
8
ALUMNO
TEMA (O UNIDAD)
EXMEN GENERAL DE ORINA
FECHA
cantidad
1
REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial de tiras
reactivas para urianlisis
Agua destilada
Tubos de ensaye de 13 x
100 ml
100
Guantes de latex
MATERIAL BIOLOGICO
Centrfuga
cantidad
Descripcin
Microscopio
50 ml
Orina reciente
Portaobjetos
Cubreobjetos
Frasco
estril
para
recoleccin de orina
3. PROCEDIMIENTO
I. Examen fsico
1. Homogeneizar perfectamente la muestra.
2. Anotar el volumen obtenido de la muestra.
3. En un tubo limpio y seco, colocar 10 ml de orina y observarla a contraluz.
4. Reportar el color, olor y aspecto observados.
II. Anlisis qumico
Principio: El anlisis se basa en el empleo de la qumica seca, mediante el uso de
tiras reactivas multipruebas de lectura visual. Las tiras reactivas comerciales
contienen en los cojines de prueba indicadores que al entrar en contacto con la
muestra de orina, permiten identificar la presencia diversos metabolitos.
Procedimiento
1. Retirar una tira reactiva del frasco, cerrando enseguida el mismo.
2. Sumergir la tira en un tubo de ensaye que contenga 10 ml de la muestra de orina,
procurar que se cubran todas las reas reactivas y retirar la tira inmediatamente
para evitar la disolucin de los reactivos. Eliminar el exceso de orina rasando el
canto de la tira en el borde del tubo.
3. Mantener la tira en posicin horizontal para evitar la mezcla de las sustancias
qumicas en reas adyacentes.
4. Comparar las reas reactivas con los correspondientes cuadros de color en la
carta de lectura que acompaa al frasco.
5. Sostener la tira reactiva lo ms cerca posible de la carta de colores y comparar
cuidadosamente, en el tiempo que se indica. Evitar tocar la carta de colores con la
tira, ya que esto ocasiona contaminacin.
6. Registrar sus resultados.
Notas:
1. La lectura de la tira reactiva al tiempo exacto es esencial para obtener ptimos
resultados.
2. El empleo de orina de reciente emisin, bien mezclada y sin centrifugar es muy
importante para el buen desarrollo de la prueba.
3. El reporte es cualitativo o semicuantitativo, reportndose con cruces que van
desde una hasta cuatro como mximo.
41
Edad:______.
RESULTADO
VALORES DE
REFERENCIA
COLOR
OLOR
ASPECTO
DENSIDAD
pH
EXAMEN MICROSCOPICO
LEUCOCITOS POR CAMPO
ERITROCITOS POR
CAMPO
CELULAS EPITELIALES
CILINDROS POR CAMPO
CRISTALES
FILAMENTO MUCOSO
LEVADURAS
BACTERIAS
PARSITOS
EXAMEN QUMICO
PROTENAS
GLUCOSA
CUERPOS CETNICOS
HEMOGLOBINA
UROBILINGENO
BILIRRUBINA
NITRITOS
Mtodo:
Observaciones:
42
5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia
Parmetro
Color
Olor
Aspecto
Densidad
PH
Protenas,
glucosa,
cuerpos
cetnicos,
sangre,
bilirrubina,
nitritos.
Urobilingeno
Eritrocitos
Leucocitos
Clulas epiteliales
Cilindros
Cristales
Levaduras
Parsitos
Resultado
Amarillo claro
Caracterstico
Cristalino
transparente
1.025 1.030
4.5 8.0
Negativo
Interpretacin de Resultados
Color: El color de la orina puede ser afectado por componentes como pigmentos,
colorantes, sangre u otras sustancias.
Aspecto: La orina normal de reciente emisin es usualmente clara o transparente.
Una apariencia turbia o lechosa, indica alguna alteracin por enfermedad.
Densidad: La densidad y el ndice de refraccin permiten apreciar la concentracin
relativa de solutos en la orina. Estos datos constituyen indicadores bastante precisos
del equilibrio hdrico y osmtico del organismo cuya conservacin es la principal
funcin del rin. Una densidad baja se presenta en casos de diabetes inspida,
glomerulonefritis e insuficiencia renal entre otros. Una densidad alta puede
presentarse en casos de trastornos hepticos, insuficiencia congestiva cardiaca o
deshidratacin.
PH: Acido: Sndrome de Fanconi, alcalosis metablica o respiratoria.
Alcalino: Tuberculosis renal, pirexia, fenilcetonuria.
Urobilingeno: Aumentado: Anemia hemoltica, anemia perniciosa, malaria,
hepatitis infecciosa, hepatitis txica, cirrosis portal, insuficiencia cardiaca congestiva,
mononucleosis infecciosa. Disminuido: Obstruccin parcial o total de los conductos
biliares (colelitiasis, enfermedades inflamatorias, enfermedades neoplsicas, terapia
antibitica).
43
6. CUESTIONARIO
1. Qu es la orina?
2. Describa la composicin qumica de la orina normal.
3. Defina cada uno de los trastornos siguientes: gota, glomerulonefritis, pielitis,
pielonefritis, cistitis, nefrosis, riones poliqusticos, insuficiencia renal e
infecciones de las vas urinarias.
4. Cmo puede influir en los resultados las siguiente condiciones:
- Muestra de orina recolectada en frasco no estril. Por ejemplo frascos
gerber, topers, botellas de refresco.
- Muestra de orina refrigerada por un lapso de 3-5 horas.
- Muestra de orina recolectada directamente del inodoro.
- Ingesta de medicamentos al momento de la recoleccin.
- Muestra de orina con residuos de semen y con la menstruacin.
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.
46
PRACTICA No.
9
ALUMNO
TEMA (O UNIDAD)
ELECTROLITOS
FECHA
Jeringa de 5 ml
1
1
1
Torundero
Ligadura
Aguja de doble filo para tubo al
vaco
Tubos de ensaye de 13 x 100
Tubo al vaco tapn rojo
Pipetas pasteur
Bulbo gotero
Pipeta de vidrio graduada de
1.0 ml
Pipeta de vidrio graduada de
5.0 ml
Guantes de latex
Centrfuga
Incubadora
Espectrofotmetro
6
1
1
1
5
5
1
1
1
1
REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial para
determinacin de electrolitos:
Na, Cl, K, Ca y P.
1
Equipo comercial de
estndares de electrolitos:
Na, Cl, K, Ca y P.
1
Suero control
100 ml. Agua destilada
MATERIAL BIOLOGICO
cantidad
2 ml
Suero
Descripcin
3. PROCEDIMIENTO
1. Indicar al paciente que debe de tener un ayuno de 8 horas.
2. Tomar una muestra de sangre y procesarla para obtener suero. (como se
ndica en la prctica No.2). Separar el suero y pasarlo a un tubo limpio y seco.
3. Para cada determinacin, preparar una serie de tubos rotulados: blanco,
estandar y muestra problema. Para la cuantificacin de los electrolitos se
deben seguir los procedimientos indicados por el profesor, ya que las
cantidades de muestra y reactivos a emplear, varan dependiendo de la
marca de los reactivos.
4. Con las pipetas adicionar en cada tubo la cantidad indicada (X) de: agua
destilada, solucin estndar y suero problema. A continuacin, adicionar la
cantidad de reactivo (Y) indicada para cada determinacin, como se muestra
a continuacin:
Tubo 1
Tubo2
Tubo3
Agua destilada
X ml
_____
_____
Solucin estndar
_____
X ml
_____
Suero del paciente _____
_____
X ml
Reactivos
Y ml
Y ml
Y ml
indicados
Nota: todos los tubos debern contener el mismo volumen final = X + Y.
5. Mezclar cada tubo, como lo indique el profesor.
6. Seguir las condiciones de incubacin indicadas.
7. Conectar y poner en marcha el espectrofotmetro.
48
4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:
ELECTROLITO
Edad:______.
RESULTADO
VALORES DE
REFERENCIA
SODIO
CLORO
POTASIO
CALCIO
FOSFORO
Mtodo:
Observaciones:
49
5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia
ANALITO
Sodio
Cloro
98 109 mmol/l
Potasio
Calcio
Fsforo
Absorbancia del
estndar
1
Absorbancia de
la muestra
problema
1
2
3
Clculos
estadsticos
M
D.E C.V. %E
Sodio
Cloro
Potasio
Calcio
Fsforo
Clculos:
Interpretacin de Resultados
Hiponatremia. Concentracin anormalmente baja de sodio en sangre. Se
caracteriza por debilidad muscular, dolores de cabeza, hipotensin taquicardia y
choque circulatorio.
Hipocalemia. Dficit de potasio en sangre, puede derivarse de vmito, diarrea,
ingestin excesiva de sodio, neuropatas y uso de algunos diurticos.
Hipocloremia. Dficit de cloro en sangre, suele derivarse de vmito excesivo,
deshidratacin y uso de ciertos diurticos.
50
6. CUESTIONARIO
1. Defina los conceptos de sustancia no electroltica y electrolito. Indique ejemplos
especficos de cada una.
2. Cmo se expresa la concentracin de iones en un lquido?
3. Calcule la concentracin inica de sodio en un lquido corporal.
4. Indique el mecanismo de regulacin de los electrolitos.
5. Defina el concepto de edema. Cules son algunas de sus causas?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.
51
PRACTICA No.
10
ALUMNO
TEMA (O UNIDAD)
ENZIMAS
FECHA
Jeringa de 5 ml
Torundero
Ligadura
10
1
1
1
5
1
1
1
1
REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial para
determinacin de TGO.
Equipo comercial para
determinacin de TGP.
Equipo comercial para
determinacin de FA.
Equipo comercial para
determinacin de TGG
Equipo comercial para
determinacin de LDH
Estandar de TGO
Estandar de TGP
Estandar de FA
Estandar de TGG
Estandar de LDH
5
1
1
1
1
100 ml.
Agua destilada
MATERIAL BIOLOGICO
cantidad
Descripcin
2 ml
Suero
3. PROCEDIMIENTO
1. Indicar al paciente que debe de tener un ayuno de 8 horas.
2. Tomar una muestra de sangre y procesarla para obtener suero. (como se ndica
en la prctica No.2). Separar el suero y pasarlo a un tubo limpio y seco.
3. Para cada determinacin, preparar una serie de tubos rotulados: blanco,
estandar y muestra problema. Para la cuantificacin de los enzimas se deben
seguir los procedimientos indicados por el profesor, ya que las cantidades de
muestra y reactivos a emplear, varan dependiendo de la marca de los
reactivos.
4. Con las pipetas adicionar en cada tubo la cantidad indicada (X) de: agua
destilada, solucin estndar y suero problema. A continuacin, adicionar la
cantidad de reactivo (Y) indicada para cada determinacin, como se muestra a
continuacin:
Tubo 1
X ml
_____
_____
Y ml
5.
Tubo2
_____
X ml
_____
Y ml
Tubo3
_____
_____
X ml
Y ml
Agua destilada
Solucin estndar
Suero del paciente
Reactivos
indicados
Nota: todos los tubos debern contener el mismo volumen final = X + Y.
Mezclar cada tubo, como lo indique el profesor.
53
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
Notas
1. Para evitar la contaminacin de las soluciones reactivas, se recomienda vaciar
en otro recipiente la cantidad requerida para uso.
2. Preparar siempre un blanco y patrn para tener una lectura confiable.
3. Tener en cuenta los valores de linearidad en caso de obtener valores
incrementados.
4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:
ENZIMA
Edad:______.
RESULTADO
VALORES DE
REFERENCIA
TGO
TGP
FA
TGG
LDH
Mtodo:
Observaciones:
54
5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia
ASAT: 12- 37 U / L (37C)
ALAT: 12 - 31 U / L (37C)
Fosfatasa alcalina: 0 138 U / L (37c)
LDH: 90 187 U/L (38C)
TGG: HOMBRES 5 32 U/L (37C)
MUJERES 9 52 U/L (37C)
ANALITO
Absorbancia del
estndar
1
Absorbancia de
la muestra
problema
1
2
3
Clculos
estadsticos
M
D.E C.V. %E
TGO
TGP
FA
TGG
LDH
Clculos:
6. CUESTIONARIO
1. A qu se debe el aumento de la concentracin de las enzimas en el plasma?
2. Cul es la finalidad de las pruebas de funcionamiento heptico?
3. Qu enzimas al aumentar indican dao celular heptico?
4. Qu enzimas al aumentar indican obstruccin del sistema biliar?
5. Buscar la clasificacin de las enzimas sricas segn su utilidad clnica
6. En qu unidades se expresa la actividad enzimtica?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.
55
1.
2.
3.
4.
57