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UNIVERSIDAD AUTNOMA DEL ESTADO DE MORELOS

Conocimiento al Servicio de la Salud

MANUAL DE LABORATORIO DE
BIOQUMICA CLNICA

ELABORADO POR
_M. en C. Leticia Arellano M. _______
_L. F. Blanca Estela Duque Montao_
_Dra. Claudia Hallal Calleros ______

Fecha de elaboracin: Febrero 2005


ltima revisin: __Julio 2007____
Fecha de validacin: ___________
(Consejo Tcnico)

PONDERACIN Y OBJETIVO GENERAL DEL LABORATORIO

SEMESTRE

N Hrs/sem

N Crditos

-OBJETIVO GENERAL DEL LABORATORIO


Presentar al alumno la informacin general acerca de algunas determinaciones de
rutina empleadas en Bioqumica Clnica, as como la importancia de llevar un control
de calidad abarcando la fase pre-analtica, analtica y post-analtica.
El alumno relacionar los resultados sobre el buen funcionamiento metablico del
organismo, as como, la alteracin del mismo, causando diversas patologa. Adems,
deber adquirir conciencia sobre los riesgos que se corren al trabajar en un laboratorio
clnico, a fin de prevenirlos y evitarlos.

-NORMAS Y REGLAMENTOS ESPECFICOS.


Reglamento de seguridad de Laboratorios
Norma Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002
Norma Oficial Mexicana NOM-166-SSA1-1997.
Norma Oficial Mexicana NOM-009-STPS-1993
Norma Oficial Mexicana NOM-012-STPS-1993
Norma Oficial Mexicana NOM-114-STPS-1994.

CONTENIDO

Pr-N
1

Ttulo de la Prctica

Objetivo de la Prctica

Garanta de Calidad en el Conocer y familiarizarse con los


laboratorio de Bioqumica conceptos bsicos sobre control
Clnica.
de calidad,
exactitud, precisin,
grficos
de
Levey-Jennings,
garanta y aseguramiento de
calidad.
Obtencin y conservacin de Conocer la forma correcta de
muestras sanguneas.
realizar una extraccin de sangre
por puncin venosa y capilar, y
adiestrarse en la conservacin de
muestras sanguneas, para la
obtencin de suero o plasma.
Citometra
El alumno realizar el montaje y
conteo
de
eritrocitos,
determinacin de la concentracin
de
hemoglobina
e
ndices
eritrocitarios, e identificar las
clulas presentes en sangre
perifrica
de
un
individuo,
relacionando estos parmetros con
el estado de salud del mismo.
Carbohidratos
Conocer la importancia que tiene
la determinacin de glucosa en
sangre para la evaluacin del
metabolismo de carbohidratos.
Protenas
Conocer la importancia de las
protenas en el organismo.
Determinar
su
concentracin
plasmtica
y
asociarla
con
posibles alteraciones en los
rganos
encargados
de
metabolizarlos.
Compuestos nitrogenados no Conocer
la
importancia
de
proteicos.
determinar
los
compuestos
nitrogenados no proteicos y su
asociacin con alteraciones en el
metabolismo de protenas y
aminocidos, as como con
problemas renales.
Metabolismo de Lpidos
Conocer la importancia de los
lpidos en el organismo, as como
las alteraciones que se pueden
presentar en su metabolismo y la
manera de identificarlas.
Examen General de Orina
En base a la composicin normal

Hrs

Pg.

Electrolitos

10

Enzimas

Medidas de seguridad en el
Laboratorio. Manejo de RPBI

de la orina, detectar alteraciones


en vas urinarias o poner de
manifiesto
la
existencia
de
alteraciones
metablicas
de
diversa etiologa.
Conocer la importancia de los
electrolitos en el organismo y los
mtodos
empleados
para
cuantificarlos.
Conocer la importancia de las
enzimas de inters clnico en el
organismo.
Dar a conocer al alumno las
medidas bsicas de seguridad en
el laboratorio clnico.
Almacenamiento y Eliminacin de
los RPBI segn NOM 087 Ecol.

PRACTICA No.
1

TEMA (O UNIDAD)
GARANTA DE CALIDAD EN EL
LABORATORIO DE BIOQUMICA CLNICA

FECHA

ALUMNO
OBJETIVO: Conocer y familiarizarse con los conceptos bsicos sobre control de
calidad, exactitud, precisin, grficas de Levey Jennings, garanta y aseguramiento
de calidad.
1- INTRODUCCIN.
Para utilizar los estudios de laboratorio apropiadamente es necesario disponer
de la apreciacin de la validez tcnica de una prueba (precisin y exactitud); de su
valor diagnstico (sensibilidad y especificidad); de la adecuada obtencin de la
muestra por analizar, as como de las fuentes potenciales de error que pueden influir
en los resultados. Los procesos de control de calidad aseguran la precisin y la
reproducibilidad de los resultados del laboratorio.
Los conceptos antes mencionados permiten calificar la eficiencia del proceso de
medicin de las sustancias cuya concentracin se mide en diversos especimenes:
sangre, orina, lquido cefalorraqudeo, etctera.
La precisin la conocemos con los parmetros estadsticos de desviacin estndar y
el coeficiente de variacin calculados. La exactitud la conocemos con el %E
calculado.
La sensibilidad y especificidad de una prueba o determinacin de laboratorio
que emite resultados cuantitativos pueden representarse en forma de curvas de
distribucin gaussiana.
Levey y Jennings introducen la idea de analizar un material de control
conjuntamente con cada serie de muestras de paciente y expresar los resultados
mediante grficos de control. Un eje es el tiempo o procesos numerados
secuenciales. El otro eje es el valor de cada resultado de control de calidad. Los
grficos permiten a los analistas ver los resultados de control de calidad durante
semanas o meses.
Garanta y aseguramiento de Calidad
La garanta de calidad en los servicios de salud puede valorarse y controlarse,
puede ser optimizada, y sus beneficios superan sus costes y su objetivo es
suministrar a los pacientes servicios y productos de calidad.
El aseguramiento de la calidad contempla cuatro aspectos:
1.- Control preanaltico y postanaltico.
2.- Control interno de la calidad.
3.- Control externo de la calidad.
4.- Estandarizacin.
2- EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPO Y MATERIALES
cantidad
Descripcin
cantidad
1
Gradilla
500 ml
1
Pipeta graduada de vidrio de
1.0 ml
1
Pipeta graduada de vidrio de

REACTIVOS
descripcin
Agua destilada

1
1
5
1
4
1

2.0 ml
Pipeta graduada de vidrio de
5.0 ml
Pipeta graduada de vidrio de
10.0 ml
Tubos de ensaye de 13 x 100
Vaso de precipitados de 25 ml
Balanzas electrnicas de
precisin
Termmetro

3- MTODOS Y/0 PROCEDIMIENTOS.


I. Determinacin de la Precisin y Exactitud Analtica de un Pipeteo.
1. Colocar un vaso de precipitados de 25 ml en el platillo de una balanza
electrnica de precisin.
2. Tarar la balanza.
3. Con una pipeta de vidrio de 1 ml, ir aadiendo sucesivamente, en el vaso de
precipitados, 1 ml de agua destilada, hasta alcanzar 10 ml de sta.
4. Anotar sucesivamente los pesos medidos.
5. Realizar por triplicado.
6. Calcular el peso que corresponda a cada ml aadido.
7. Repetir los pasos 1 a 5 utilizando: primero una pipeta de 2 ml, despus una de 5
ml y finalmente una pipeta de 10 ml.
8. Calcular el coeficiente de variacin para cada una de las series de valores de
peso de 1 ml de agua destilada.
9. Buscar el valor de la densidad del agua a la temperatura de trabajo en el
laboratorio.
10. Teniendo en cuenta el valor de la densidad del agua a la temperatura de trabajo,
calcular el peso terico de 1 ml de agua a esa temperatura. Este ser el valor
real de peso de 1 ml de agua.
11. Calcular la exactitud de la media de cada una de las series de valores de peso,
con respecto al valor real calculado tericamente.
5- PROCESAMIENTO DE LOS DATOS
Elaboracin de una grfica de Levey-Jenning.
1.- Realizar 20 anlisis repetidos sobre un suero control normal, de la siguiente
manera:
2.- Enumerar 20 para determinar su concentracin de hierro. Los resultados

3.- Con estos valores trazar una grfica de Levey-Jennings. En las abcisas graficar.
En das sucesivos se intercala el suero control patolgico entre las muestras
analizadas cada da, obtenindose los siguientes resultados:
Da

Resultado

49

51
6

3
50
13
50
23
50
4
50.5
14
49
24
49.5
5
48.5
15
51.5
25
50
6
49
16
52
26
51
7
49
17
48
27
51.5
8
50
18
51.5
28
52
9
49.5
19
47.5
29
52.5
10
55
20
52.5
30
53.5
11
51
21
48
31
54
Da
Resultado
22
49
12
50
Da
Resultado
X
S
cv
Estos ltimos valores han de ser debidamente reseados en la grfica previamente
trazada.
Grafica de Resultados (L-J)A
1. Partir de estos valores de concentracin de hierro obtenido en el anlisis previo
del suero control, calcular la media y la desviacin estndar de los mismos.
2. Trazar una lnea continua horizontal en el centro de la hoja de papel milimtrico.
3. Trazar en la misma hoja, tres lneas discontinuas a cada lado de la lnea recta
central, de forma que todas las rectas sean paralelas y equidistantes entre s, y
que las ms perifricas estn cercanas al borde superior e inferior de la hoja.
4. Anotar en ordenas, es decir, en el extremo izquierdo de las rectas:
El valor de la media, a nivel de la lnea central
El valor de media, ms o menos una desviacin estndar, respectivamente, a
nivel de las lneas inmediatamente superior e inferior a la central.
El valor de la media, ms o menos dos DE, respectivamente, a nivel de las lneas
inmediatamente superior e inferior a las anteriores.
El valor de la media, ms o menos tres DE, respectivamente, a nivel de las lneas
inmediatamente superior e inferior a las anteriores.
5. Anotar en abscisas, es decir, en el borde inferior de la hoja, la sucesin de das
en los que se practica el anlisis del suero control simultneamente al de las
muestras.
6. Marcar con un punto, cada uno de los valores de concentracin de hierro,
obtenidos en el anlisis de los sueros control intercalados entre las muestras.
7. Estos puntos se han de situar en la interseccin entre la cifra que corresponde a
cada valor (reflejado en ordenadas) y el da en el que fue obtenido (reflejado en
abscisas.)
Nota, Considerar como:
- Lmite de aviso, a las lneas que tienen asignado el valor de la media +/-1 DE.
Este lmite establece un nivel de confianza del 67%, es decir, de cada 100
veces que se realiza un anlisis, 67 resultados deben estar dentro de este
lmite.
- Lmite de alarma, a las lneas que tienen asignado el valor de la media +/- 2
DE. Este lmite establece un nivel de confianza del 95%.
- Lmite de accin, a las lneas que tienen asignado el valor de media +/- 3 DE.
Este lmite establece un nivel de confianza del 99.7% (aproximadamente, del
100%).

4- RESULTADOS
Clculos

Interpretacin de resultados de la grafica.


Si un resultado est fuera del lmite de alarma (el de la media +/- 2 DE) pero el
siguiente est dentro de este lmite, el sistema analtico est bajo control
estadstico y no se requiere emprender ninguna accin.
Si dos resultados consecutivos se encuentran fuera del lmite de alarma pero
dentro del de accin, se debe revisar el sistema analtico y solucionar los
problemas que se encuentren.
Si un resultado est fuera del lmite de accin, el sistema analtico est fuera de
control, por lo que no deben ser considerados vlidos los valores obtenidos en
las muestras, en ese momento y a partir de l, y se tiene que actuar para
remediar esta situacin.
Se considera que la situacin de falta de control est corregida cuando se
obtienen tres nuevos resultados consecutivos que se encuentran dentro del lmite
de alarma.
6- CUESTIONARIO
1. En qu consiste la fase preanaltica?
2. En qu consiste la fase posanaltica?
3. Qu es el control de calidad?
4. Qu informacin nos proporcionan las grficas de Levey-Jennings?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.

PRACTICA No.
2

TEMA (O UNIDAD)
OBTENCION Y CONSERVACIN DE
MUESTRAS SANGUNEAS

FECHA

ALUMNO

OBJETIVOS
Conocer la forma correcta de realizar una extraccin de sangre por puncin venosa
y capilar, y adiestrarse en la conservacin de muestras sanguneas, para la
obtencin de suero o plasma.
1. INTRODUCCION
Toma de muestra
La sangre de un paciente es una de las muestras ms empleadas en las
determinaciones de bioqumica clnica, por ello es de gran valor el aprender a
realizar una correcta extraccin de sangre. La toma de muestra sangunea debe
considerar los siguientes aspectos:
1. El personal encargado de realizar la extraccin. Se requiere de personal con
suficiente destreza, confianza en s mismo, tica profesional, paciencia y
comprensin.
2. El paciente. El estado fsico, la edad y el sitio de puncin son caractersticas del
paciente que hay que tomar en cuenta cuando se realiza una extraccin de sangre.
3. El material. Contar con un espacio confortable para el paciente, en el cual pueda
estar relajado y con el material estril o asptico necesario (en buen estado), son
otro factor que influye en una correcta toma de muestra.
4. La tcnica de extraccin. Las tcnicas de extraccin de sangre no se aprenden en
un da, es un arte que debe desarrollarse mediante estudio, observacin y prctica,
para adquirir una destreza y confianza adecuadas.
5. Las determinaciones que se realizarn. Es importante conocer las
determinaciones que se realizarn, ya que dependiendo del nmero y tipo de
determinaciones que se realizarn, ser la cantidad de muestra a extraer.
Casi todas las muestras de sangre se extraen por puncin venosa, que es un
mtodo relativamente fcil y adecuado para obtener volmenes de 1 a 20 ml de
sangre. La extraccin de sangre venosa generalmente se realiza en las venas del
antebrazo aunque tambin puede realizare en las venas del dorso de la mano,
yugular, femoral o safena. La sangre puede extraerse con una jeringa o bien
empleando tubos al vaco con tapn de goma adaptados a una aguja de doble filo
que permite por un lado, puncionar la vena del paciente y por el otro perforar el
tapn del tubo al vaco. Para realizar las punciones con jeringa, se emplean agujas
hipodrmicas de diferentes calibres, los calibres ms empleados son: 20x32, 21x32
y 22x32. El sistema de tubos al vaco emplea diferentes tubos que se identifican por
el color de su tapn y se eligen en funcin de la prueba que se vaya a realizar; este
sistema emplea agujas de los siguientes calibres: 22x38, 21x38 y 20x38.
En bioqumica clnica existen determinaciones que requieren cantidades mnimas de
puncin se lleva a cabo con una lanceta que provoca una herida de una profundidad
estandarizada y puede realizarse en la yema de un dedo de la mano, en el lbulo de
la oreja o en el taln (en el caso de los neonatos). Existen en el mercado lancetas
automticas (vacutainer) como la amarilla con profundidad controlada de 2.4 mm en
9

la incisin, para puncin capilar en taln de bebs y la azul con profundidad


controlada de 1.9 mm en la incisin, para puncin capilar en yema de dedo adulto.
Procesamiento y conservacin de las muestras
Cuando se desea trabajar con sangre entera o plasma, se requiere el uso de un
anticoagulante. Los anticoagulantes ms empleados en bioqumica clnica son:
EDTA (sal disdica o dipotsica): Es el anticoagulante ms utilizado en las tcnicas
hematolgicas a concentraciones de 1 - 2 mg/ml de sangre. La coagulacin se evita
por eliminacin de calcio de la sangre.
Citrato de sodio: Es el anticoagulante de eleccin para los estudios de coagulacin.
Se utiliza a la concentracin de una parte de Citrato sdico 0.11M (3.8 %) por nueve
partes de sangre total. Evita la coagulacin al unirse al calcio de la sangre en un
complejo soluble.
Heparina: Se utiliza a una concentracin de 0.2 ml de Heparina saturada por 1.0 ml
de sangre total. La coagulacin se evita por neutralizacin de la trombina.
Oxalato de amonio y potasio (oxalato doble): Se compone de 6 partes de oxalato de
amonio y 4 partes de oxalato de potasio. Se utiliza a una concentracin de 2 mg por
ml de sangre total. La coagulacin se evita por la eliminacin del calcio en la sangre.
Todas las muestras deben conservarse bien cerradas. Las muestras obtenidas por
puncin venosa o capilar, pueden emplearse enteras (anticoaguladas) o bien
separar los componentes celulares de la parte lquida y obtener suero (en caso de
que la muestra se deje coagular) o plasma (en caso de haber utilizado
anticoagulante). La separacin puede llevarse a cabo por sedimentacin (muestra
anticoagulada) o retraccin del cogulo (muestra coagulada). En ambos casos
puede acelerarse la separacin centrifugando a 2500rpm/5min. En el caso de las
muestras enteras se recomienda trabajarlas de inmediato o bien conservarlas a 4C
por un tiempo mximo de 24 horas. Si lo que se requiere es suero o plasma, una vez
separados deben verterse en un contenedor limpio y procesarlos inmediatamente,
en caso necesario pueden conservarse a 4C por 24 horas o bien a 20C o -70C
por tiempos prolongados.
2. EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPO Y MATERIALES
REACTIVOS
cantidad
Descripcin
cantidad
Descripcin
1
Gradilla
100 ml Alcohol etlico al 70%
1
Jeringa de 5 ml
1
Torundero
MATERIAL BIOLOGICO
1
Ligadura
cantidad
Descripcin
1
Aguja de doble filo para tubo al
5 ml
Sangre total
vaco
2
Tubos de ensaye de 13 x 100
2 ml
Suero
2
Tubos de ensaye de 12 x 75
1
Tubo al vaco tapn lila
1
Tubo al vaco tapn rojo
1
Tubo microtainer
1
Tubo capilar
1
Lanceta
2
Pipetas pasteur
1
Bulbo gotero
1
Centrfuga
1
Barra de plastilina chica
10

3. PROCEDIMIENTO
I. Obtencin de Sangre por Puncin Venosa
a) Utilizando jeringa
1. Identificar el sitio de puncin
2. Verificar que el mbolo de la jeringa no se trabe (esto sin romper el empaque que
la contiene), asegurar la aguja para que no se separe.
3. Con una torunda impregnada de alcohol al 70%, limpiar la zona a puncionar con
un movimiento circular
4. Colocar la ligadura a unos 10 cm por arriba del sitio de puncin.
5. Quitar el tapn de la aguja y con el bisel hacia arriba introducir la aguja en la vena
en un ngulo de 15. Cuando aparezca una gota de sangre en el interior del portaaguja, jalar el mbolo hasta completar la cantidad de sangre deseada.
6. Retirar la ligadura cuidando de no lastimar al paciente.
7. Una vez obtenida la cantidad de sangre deseada, extraer la aguja y con otra
torunda limpia, aplicar presin en el sitio de puncin, al cabo de 2 o 3 minutos
retirar la torunda.
b) Utilizando tubos al vaco
1. Identificar sitio de puncin.
2. Armar el sistema: Conectar la aguja de toma mltiple al soporte de plstico.
3. Con una torunda impregnada de alcohol al 70%, limpiar la zona a puncionar con
un movimiento circular
4. Colocar la ligadura a unos 10 cm por arriba del sitio de puncin.
5. Quitar el tapn de la aguja y con el bisel hacia arriba introducir la aguja en la vena
en un ngulo de 15. Sosteniendo con firmeza el soporte de plstico, presionar el
tubo al vaco contra el extremo posterior de la aguja hasta conseguir que sta
perfore el tapn de goma del tubo. El tubo se va llenando de sangre debido a la
succin producida por el vaco que existe en el mismo.
6. Retirar el tubo cuando ste se haya llenado casi por completo con sangre. Si se
requiere, siguiendo el procedimiento indicado, llenar un segundo tubo de sangre.
7. Retirar la ligadura cuidando de no lastimar al paciente.
8. Extraer la aguja y con una torunda limpia aplicar presin en el sitio de puncin,
al cabo de 2 o 3 minutos retirar la torunda.
9. Tapar la aguja de extraccin, retirarla del soporte plstico y proceder a
desecharla. Limpiar el soporte plstico y guardarlo.
II. Obtencin de sangre por puncin capilar
1. Seleccionar un punto adecuado para la puncin.
2. Calentar la zona de puncin con una compresa hmeda (42C).
3. Limpiar la zona de la puncin con una torunda impregnada con alcohol al 70%.
4. Dejar secar la piel.
5. Llevar a cabo la puncin con una lanceta estril, realizando un nico movimiento
con el instrumento.
6. Desechar la primera gota de sangre enjugndola con una gasa estril.
7. Regular el flujo de sangre mediante presin con el pulgar.
8. Recoger la muestra en un microtubo y en un tubo capilar
9. La recolecta en el tubo capilar, deber sellarse uno de los extremos
introducindolo en plastilina.
10.Etiquetar el recipiente de la muestra con los datos completos del paciente.
III. Separacin de Suero
1. En caso de haber obtenido la muestra con jeringa, retirar la aguja de la jeringa,
verter la sangre a un tubo seco y limpio, dejar resbalar la sangre por las paredes

11

del tubo, evitando que se forme espuma. Este paso no es necesario en el caso de
tubos al vaco.
2. Dejar el tubo con sangre en bao de agua a 37C por 10-15 minutos ( a esta
temperatura la coagulacin se hace con mayor rapidez y la retraccin del cogulo
es mxima).
3. Cuando la coagulacin sea completa, con un aplicador de madera limpio y seco,
desprender el cogulo por las paredes del tubo, cuidando de no romperlo.
4. Centrifugar el tubo durante 5 minutos a 2500 r.p.m., despus de este proceso se
obtiene un lquido limpio, transparente y libre de hemlisis (el suero).
5. Separar el suero con una pipeta Pasteur y colocarlo en otro tubo limpio y seco.
IV. Separacin de Plasma
1. Si la muestra fue obtenida con jeringa, retirar la aguja de la jeringa, verter la
sangre en un tubo con anticoagulante. En el caso del tubo al vaco, este ya
contiene el anticoagulante.
2. Con suavidad invertir el tubo varias veces, con el fin de mezclar uniformemente la
sangre con el anticoagulante, cuidando de no agitar para que no se presente
hemlisis de la sangre.
3. Para separar la capa globular centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 minutos.
4. Terminada la centrifugacin, separar el sobrenadante (plasma) con una pipeta
Pasteur y colocarlo en otro tubo limpio.
Notas:
1. En caso de que la vena no haya podido ser puncionada al primer intento, utilice el
dedo ndice para localizarla de nuevo, puede ser que el pinchazo no haya sido lo
suficientemente profundo, o que la aguja se haya desviado ligeramente de la
vena.
2. Es muy importante presionar el lugar de puncin sin frotar para evitar la formacin
de hematomas (derrame de sangre en los tejidos).
3. Cuando se emplea jeringa para extraer la muestra, se debe evitar la inyeccin de
aire en la vena, comprobar que el mbolo se encuentre completamente hasta el
fondo del cuerpo de la jeringa antes de la puncin.
4. Una vez puncionada la vena, jalar suavemente el mbolo de la jeringa, nunca
aspirar bruscamente ya que esto puede hemolizar la muestra.
5. Cuidar el retroceso del mbolo, la fuerza de retroceso puede hacer que la pared
venosa se pegue sobre el bisel de la aguja y detenerse el flujo de sangre o bien la
aguja puede deslizarse inadvertidamente fuera de la vena.
4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:
ANALITO
SUERO

Edad:______.

ASPECTO

OBSERVACIONES

PLASMA
SANGRE
TOTAL

12

5. CUESTIONARIO
1. Cules son las ventajas y desventajas de la puncin venosa, puncin capilar y
puncin arterial?
2. Cul es el fundamento de la obtencin de suero y de plasma en una muestra
sangunea?
3. Cul es la ventaja del uso de plasma sobre el suero?
4. Cmo puede interferir la hemlisis en los resultados?
5. Cules son las recomendaciones para mantener conservadas las muestras
sanguneas?
6. REPORTE TCNICO.
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.

13

PRACTICA No.
3
ALUMNO

TEMA (O UNIDAD)
CITOMETRA

FECHA

OBJETIVO
El alumno realizar el montaje y conteo de eritrocitos, determinacin de la
concentracin de hemoglobina e ndices eritrocitarios, e Identificar las clulas
presentes en sangre perifrica de un individuo, relacionando estos parmetros con el
estado de salud del mismo.
1. INTRODUCCION
La biometra hemtica (citometra) comprende una serie de estudios que permiten
tener una visin bastante precisa del estado de todos los elementos formes de la
sangre, incluye la cuantificacin de hemoglobina, determinacin de hematocrito,
conteo eritrocitario, leucocitario y diferencial e ndices eritrocitarios.
La hemoglobina (Hb) es una protena conjugada con peso molecular de
64,5450 daltones, cuya funcin es transportar bixido de carbono (CO2) de los
tejidos a los pulmones y oxgeno (O2) de los pulmones a los tejidos. La Hb
totalmente saturada contiene alrededor de 1.34 ml de oxgeno por gramo de Hb. La
masa de eritrocitos de un adulto contiene 600g de Hb capaz de transportar 800 ml
de O2.
El hematocrito de una muestra de sangre es la relacin del volumen de
eritrocitos con el de la sangre total y se expresa como un porcentaje (%). El valor del
hematocrito es una cuantificacin de uso frecuente y de carcter fidedigno que se
practica junto con los estudios de Hb y recuento eritroctico, para calcular los ndices
eritrocticos.
El recuento de eritrocitos se expresa como concentracin (clulas por unidad
de volumen de sangre). La unidad de volumen para los recuentos celulares se
expres originalmente como milmetros cbicos (mm3) debido a las dimensiones
lineales de la cmara hemocitomtrica, pero puede expresarse tambin en litros.
ndices eritrocitarios. VCM, HCM y CMHC
Volumen corpuscular medio (VCM), es el valor medio del volumen de los hemates.
Se calcula a partir del hematocrito (HCT) y del recuento del nmero de hemates
(RBC).
Hemoglobina corpuscular media (HCM), es el valor medio del contenido en
hemoglobina de los hemates. Se calcula a partir de la concentracin de
hemoglobina (Hb) y del nmero de hemates.
Concentracin de hemoglobina corpuscular media (CHCM), es el valor de la
cantiodad de hemoglobina (en g) contenida en un dl de hemates. Se calcula a partir
de la concentracin de hemoglobina y del hematocrito.
El examen de la extensin de sangre es una parte importante de la evaluacin
hematolgica. La fiabilidad de la informacin obtenida depende en gran parte de lo
bien teidas que estn las extensiones. La extensin de sangre una vez preparada
se tie con colorante de Wright que permite estudiar la morfologa de las clulas
hemticas y establecer la frmula leucocitaria. Los ncleos y algunas otras
estructuras de las clulas sanguneas se tien con los colorantes bsicos y se
denominan basfilos, las estructuras celulares que se tien con los colorantes cidos
14

se denominan acidfilas (eosinfilas), las estructuras de las clulas sanguneas que


se tien por una combinacin de ambos colorantes se denominan neutrfilas.
2. EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPO Y MATERIALES
cantidad
Descripcin
1
Tubo al vaco tapn lila
1
Ligadura

cantidad
100 ml
100 ml

Torundero

Ajuga de doble filo para tubo al


vaco

100 ml

Jeringa de 5 ml

100 ml

Tubo al vaco con EDTA

100 ml

1
1

Tubo de wintrobe
Pipeta de Thoma para
recuento de eritrocitos
Manguera de succin con
boquilla
Gradilla
Cmara de Neubauer
Microscopio
Pipeta de Sahli
centrfuga
Espectrofotmetro
Contador de clulas

MATERIAL BIOLGICO
cantidad
Descripcin

1
1
1
1
1
1
1
1

100 ml

REACTIVOS
Descripcin
Alcohol etlico al 70%
Reactivo de Drabkin
(Ferricianuro, cianuro de
potasio)
Solucin de Hayem (Sulfato
de sodio, cloruro de sodio,
cloruro de mercurio y agua
destilada)
Solucin de Turk (Acido
actico glacial, azul de
metileno)

5 ml

Colorante de Wright (Eosina,


azul de metileno, metanol)
Solucin amortiguadora de
fosfatos pH 6.6

Sangre total

3. PROCEDIMIENTO
I. Determinacin de Hemoglobina
Principio: El ferricianuro de potasio oxida la hemoglobina a metahemoglobina y el
cianuro de potasio proporciona los iones cianuro (CN-) para formar
cianometahemoglobina, que tiene una absorcin mxima a una longitud de onda de
540 nm.
1. Poner 5 ml de reactivo de Drabkin en un tubo de ensaye de 13 x 100 mm.
2. Con la pipeta de Sahli tomar 0.02 ml de sangre y agregar al tubo que contiene
el reactivo de Drabkin. Mezclar bien.
3. Mantener a temperatura ambiente durante al menos 3 minutos.
4. Leer en el espectrofotmetro a 540 nm frente al blanco de reactivos
5. Criterio de lectura: La absorbancia del problema x 36.8, corresponder a la
concentracin de Hb en g/dl.
15

Nota: Se debe tener cuidado con la solucin de Drabkin ya que las soluciones de
cianuro son venenosas.
II. Determinacin de Hematocrito
Principio: Al centrifugar la sangre con anticoagulante en un tubo capilar, los
eritrocitos se sedimentan y el plasma queda como sobrenadante, con lo cual se
puede conocer el porcentaje total de glbulos rojos.
Procedimiento
1. Llenar un tubo capilar con sangre, hasta aproximadamente las partes de su
capacidad.
2. Sellar el capilar por la parte contraria al llenado del tubo.
3. Centrifugar a 3,500 r.p.m. durante 30 minutos.
4. Terminada la centrifugacin leer y anotar el resultado.
Criterio de lectura: El volumen ocupado por los eritrocitos entre el volumen total de
sangre corresponde al % de hematocrito.
Nota: Si el tubo de hematocrito es sellado en forma incompleta el resultado ser
errneo y anormalmente bajo ya que al girar los tubos en la centrfuga se produce
una prdida de hemates que es mayor que la prdida de plasma.
III. Conteo de eritrocitos
Principio: La sangre se diluye con la solucin de Harem en solucin salina a
0.85% que conserva los eritrocitos y destruye el resto de las clulas, permitiendo
cuantificar el nmero de eritrocitos por mm3 (l) de sangre entera.
Procedimiento
1. Con la pipeta de Thoma para glbulos rojos, aspirar sangre hasta la marca de 0.5.
2. Con la pipeta inclinada 45, llenar con el lquido diluyente hasta la marca de 101.
3. Tapar los extremos de la pipeta con papel parafilm.
4. Agitar por 1-2 minutos en agitador para pipetas.
5. Con la muestra diluida, llenar la cmara de Neubauer. Dejar reposar durante un
minuto.
6. Colocar la cmara de Neubauer en la platina del microscopio, localizar la
cuadrcula central (con el objetivo 10X) y con el objetivo 40 X contar los eritrocitos en
5/25 cuadros (de la cuadrcula central).
Criterio de lectura: El nmero de eritrocitos/mm3, ser igual al nmero de clulas
contadas x el factor de correccin (No. de clulas contadas x 10000).
Nota: El lquido diluyente no debe contener restos de sangre u otros factores que
puedan alterarlo. Tanto las pipetas de Thoma, como la cmara de Neubauer y el
cubreobjetos deben estar escrupulosamente limpios.
IV. Conteo Leucocitario
Principio: La sangre se diluye con la solucin de Turk, la cual lisa a los eritrocitos y
conserva a los leucocitos, permitiendo cuantificar stos ltimos mm3 de sangre
completa.
Procedimiento
Con la pipeta de Thoma para glbulos blancos, aspirar sangre hasta la marca de
0.5.
Con la pipeta inclinada 45, llenar con el lquido diluyente hasta la marca de 11
Tapar los extremos de la pipeta con papel parafilm.
Agitar durante 1-2 minutos en agitador para pipetas.
Llenar la cmara de Neubauer. Dejar reposar durante un minuto.
Colocar la cmara de Neubauer en la platina del microscopio. Con el objetivo 10x
localizar la cuadrcula y con el objetivo 40x contar los leucocitos en las cuatro
cuadrculas de los extremos.

16

Criterio de lectura: El nmero de leucocitos/mm3, ser igual al nmero de clulas


contadas x el factor de correccin (No. de clulas contadas x 50).
Notas: Es importante evitar la contaminacin del lquido diluyente con sangre ya que
pequeas cantidades de ella, pueden afectar la precisin del recuento y hacer difcil
la diferenciacin de los leucocitos.
El recuento debe hacerse lo ms rpido posible. Si transcurre demasiado tiempo, el
lquido de la cmara puede comenzar a evaporarse, con lo que los resultados no
sern confiables.
V. Determinacin Morfolgica de las Clulas Sanguneas (Frotis Sanguneo)
Principio: Cuando una extensin de sangre es teida con el reactivo de Wrigth, los
ncleos y algunas otras estructuras de las clulas sanguneas se tien con el
colorante bsico (azul de metileno) y se denominan basfilos; las estructuras
celulares que se tien con el colorante cido (eosina), se denominan eosinfilas, y
las estructuras de las clulas sanguneas que se tien por una combinacin de
ambos colorantes se denominan neutrfilas. Lo anterior permite identificar y
diferenciar las clulas sanguneas, dadas la morfologa y caractersticas cidobsicas de cada una.
Procedimiento
Colocar una gota de sangre en un portaobjetos.
Con otro portaobjetos de borde liso hacer un ngulo de 45 y recorrerlo hasta que el
borde toque la gota. Dejar que por capilaridad, la muestra se extienda entre los dos
portaobjetos
Con un movimiento suave hacer la extensin de sangre lo ms delgada posible.
Secar al aire y cubrir la extensin con colorante de Wright, durante 4 minutos.
Sin eliminar el colorante, aadir sobre el portaobjetos un volumen igual de solucin
amortiguadora de fosfatos y dejar reposar durante 7 minutos.
Lavar con agua corriente, limpiar el dorso del portaobjetos con un pedazo de papel
secante y dejar secar.
Observar al microscopio con el objetivo de inmersin (100X).
Contar 100 clulas blancas, anotando el nmero de eosinfilos, basfilos, neutrfilos
segmentados, linfocitos, neutrfilos en banda y monocitos encontrados. Revisar
tambin la morfologa eritrocitaria (anotando anormalidades) y plaquetas.
Criterio de lectura: El nmero de cada tipo celular contado, corresponder al
porcentaje de ese tipo de clulas en la muestra.
Notas:
Los portaobjetos deben estar escrupulosamente limpios.
La extensin debe efectuarse tan pronto como la gota de sangre se deposite sobre
el portaobjetos ya que si se deja ms tiempo la distribucin de los leucocitos en la
extensin no ser uniforme.
Un mal lavado del portaobjetos para eliminar la mezcla del colorante y la solucin
amortiguadora causar precipitados en la extensin.
4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:
FORMULA ROJA

Edad:______.

RESULTADO

VALORES DE
REFERENCIA

HEMOGLOBINA
17

HEMATOCRITO
ERITROCITOS
C.M.H.C.
C.M.H.
V.C.M.
Mtodo:
Observaciones:

5. PROCESAMIENTO DE LOS DATOS


Valores de referencia
Hombres
Mujeres
Parmetro
Hemoglobina
14 18
12 16
Hematocrito
42 54
38 46
Leucocitos
5,000-10,000
5,000-10,000
Eritrocitos
4.0 6.2 x 106 4.0 5.5 x 106
VCM
80 100
fl
HCM
27 31
pg
CHCM
32 - 36
g/dl
Conteo Diferencial
Adultos
Basfilos
0.3 2
Eosinfilos
0.3 0.7
Linfocitos
16 43
Monocitos
0.6 9.6
Neutrfilos segmentados
47 78
Neutrfilos en banda

Unidades
g/dl
%
Leucocitos/mm3
Eritrocitos/mm3

%
%
%
%
%
%

Clculos:

Interpretacin de resultados
Hemoglobina: Aumento: Hemoconcentracin o deshidratacin. Disminucin:
Anemia, hemorragia reciente o retencin de lquidos.
Hematocrito: Aumento: Policitemia o hemoconcentracin. Disminucin: Anemias o
hemodilucin.
18

Eritrocitos: Aumento: Policitemia, deshidratacin. Disminucin: Anemias,


sobrecarga de lquidos o hemorrgia reciente.
VCM: Si es menor de 80 fl, se dice que hay una microcitosis. Si es mayor de 100 fl,
se habla de macrocitosis.
HCM: Si es menor de 27 pg, se dice que hay una tipocroma. Si es mayor de 31 pg,
se habla de hipercroma relativa.
CHCM: Si es mayor de 36 g/dl se habla de hipercroma absoluta. Disminucin:
hidrocitosis o estomatocis congnita. Aumento: esferocitosis hereditaria,
deshidratacin eritrocitoria o xerocitosis.
Leucocitos: Aumento (Leucocitosis): Infeccin, absceso, meningitis, apendicitis,
leucemia o infarto. Disminucin (Leucopenia): Depresin de mdula sea dada por
infecciones vrales o reacciones txicas como las que aparecen despus de
tratamientos con antineoplsicos, ingestin de mercurio u otros metales pesados,
fiebre tifoidea o hepatitis infecciosa.
Neutrfilos: Aumento: Infecciones, necrosis (por infarto del miocardio, quemaduras
o carcinoma), trastornos metablicos o en enfermedades inflamatorias. Disminucin:
Depresin de la mdula sea por radiacin o citotxicos, infecciones, deficiencia de
cido flico o vitamina B12
Eosinfilos: Aumento: Trastornos alrgicos, parasitosis, dermatosis, enfermedades
neoplsicas. Disminucin: Estrs por traumatismo (quemaduras, ciruga o
alteraciones mentales), sndrome de Cushing.
Basfilos: Aumento: Policitemia vera, enfermedad de Hodghkin, mixidema, colitis
ulcerosa, nefrosis. Disminucin: Hipertiroidismo, ovulacin, embarazo, estrs.
Monocitos: Aumento: Infecciones, endocarditis bacteriana subaguda, tuberculosis,
hepatitis, paludismo, artritis reumatoide, carcinomas, leucemia monocitica, linfomas.
Linfocitos: Aumento: Infecciones, leucemia linfoctica, enfermedades
inmunolgicas. Disminucin: Enfermedades debilitantes graves (insuficiencia
cardiaca congestiva, insuficiencia renal y tuberculosis avanzada), defectos de
circulacin linftica, niveles elevados de corticoides suprarrenales, inmunodeficiencia
por accin de inmunosupresores.

6. CUESTIONARIO.
1. Qu importancia tiene el determinar la hemoglobina a un paciente?
2. Qu es la anemia, y cmo es que esta puede producirse?
3. Qu indica un valor de VCM menor de 80 fl?
4. Al aumentar la concentracin de anticoagulante en una muestra de sangre
qu sucede con el valor del hematocrito? Explique.
5. En qu circunstancias puede disminuir el hematocrito?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.

19

PRACTICA No.
4
ALUMNO

TEMA (O UNIDAD)
CARBOHIDRATOS

FECHA

OBJETIVO
Conocer la importancia que tiene la determinacin de glucosa en sangre para la
evaluacin del metabolismo de carbohidratos.
1. INTRODUCCION
Los carbohidratos, compuestos orgnicos formados por carbono, oxgeno e
hidrgeno, son fuente importante de energa; funcionan como reserva energtica y
sirven de base para la formacin de otras estructuras. Se ingieren en la dieta en
forma de polisacridos, disacridos o monosacridos y una vez digeridos son
absorbidos a nivel intestinal en forma de monosacridos. Cuando el monosacrido
absorbido no es glucosa, se transforma en ella a nivel heptico. Por tanto, el
metabolismo de los carbohidratos, es en ltima instancia el metabolismo de la
glucosa, que se encuentra regulado a nivel hormonal, mediante la insulina,
glucagn, glucocorticoides, catecolaminas y la hormona del crecimiento.
Tras la absorcin de la glucosa ingerida en la dieta, esta pasa a sangre y
entonces, los niveles normales (70 110 mg/dl) se elevan hasta valores de 120-150
mg/dl o ms. En las personas cuyo metabolismo hidrocarbonado funciona
adecuadamente, stos niveles de glucosa bajan enseguida de manera que entre una
y media o dos horas, regresa a los valores obtenidos en ayunas. Los estudios que
miden la tolerancia del organismo respecto a los carbohidratos, esto es, la capacidad
de metabolizarlos, tienen gran importancia clnica y constituyen algunas de las
pruebas de laboratorio que se realizan con mayor frecuencia. Las alteraciones ms
importantes en el metabolismo de los carbohidratos, son aquellas en las que se
altera la tolerancia y que conducen a un aumento del nivel de glucosa en sangre,
ocasionando un sndrome clnico denominado diabetes mellitus, del cual los niveles
altos de glucosa plasmtica es solo su expresin ms caracterstica.
La disminucin en los niveles plasmticos de glucosa, se produce como
consecuencia de un desequilibrio entre la glucosa que llega al torrente sanguneo
(proveniente de la absorcin intestinal, glucogenolisis y gluconeognesis) y la que
sale del mismo como consecuencia del consumo por parte de los tejidos. Las
pruebas diagnsticas ms utilizadas para evaluar el metabolismo de la glucosa son:
glucemia en ayunas, glucemia posprandial y pruebas de sobrecarga de glucosa.
Valores de glucosa en ayunas superiores a 130 mg/dl, son idicativos de diabetes
mellitus, mientras que los que se encuentran entre 110-120 mg/dl, se consideran
valores dudosos y hay que confirmarlos mediante alguna prueba de sobrecarga de
glucosa. La determinacin de la glucemia postprandial, se realiza cuando la
determinacin de glucosa en ayunas no aporta un diagnstico definitivo. Consiste en
determinar los niveles de glucosa un una muestra de sangre obtenida dos horas
despus de haber ingerido una dosis conocida (100 g) de glucosa.
Previo al anlisis, es importante llevar a cabo una dieta rica en carbohidratos
(mnimo 300 g diario) e interrumpir medicamentos que puedan interferir con el
metabolismo de carbohidratos. Cuando la prueba posprandial no aporte datos

20

suficientes para el diagnstico, se requiere realizar la de sobrecarga oral, realizando


determinaciones de glucosa sangunea a intervalos regulares de tiempo.
Principio de la determinacin
La determinacin de glucosa puede llevarse a cabo por diferentes mtodos. Uno de
los ms empleados es el mtodo enzimtico con glucosa oxidasa (GOD).
La glucosa es oxidada por la enzima glucosa oxidasa (GOD) liberando perxido de
hidrgeno, este reacciona con fenol y 4-aminofenazona en presencia de peroxidasa
(POD), dando un color rojo-violeta de antipirilquinonimina en cantidad proporcional a
la glucosa presente en la muestra.
2. EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPO Y MATERIALES
cantidad
Descripcin
cantidad
1
Gradilla
1
1

Jeringa de 5 ml

1
1
1

Torundero
Ligadura
Aguja de doble filo para tubo
al vaco
Tubos de ensaye de 13 x 100
Tubos de ensaye de 12 x 75
Tubo al vaco tapn rojo
Pipetas pasteur
Bulbo gotero
Micropipeta graduable con
puntas
Pipeta de vidrio graduada de
1.0 ml
Pipeta de vidrio graduada de
5.0 ml
Guantes de latex
Centrfuga
Incubadora
Espectrofotmetro

2
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1

REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial para
determinacin de Glucosa
1
Estandar de Glucosa: 100
mg/dl
100 ml
Agua destilada
1
Suero control
MATERIAL BIOLOGICO

cantidad
2 ml

Descripcin
Suero

3. PROCEDIMIENTO
I. Glucosa Plasmtica en Ayunas
1. Indicar al paciente que debe de tener un ayuno de 8 a 12 horas.
2. Tomar una muestra de sangre y procesarla para obtener suero. (como se ndica
en la prctica No.2). Separar el suero y pasarlo a un tubo limpio y seco.
3. Para la cuantificacin de glucosa, se deben seguir los procedimientos indicados
por el profesor, ya que las cantidades de muestra y reactivos a emplear, varan
dependiendo de la marca de los reactivos. Sin embargo, puesto que la mayora
de las determinaciones se realizan por espectrofotometria, se debe proceder
como sigue:
4. Preparar una serie de 3 tubos y rotularlos de la siguiente manera: Tubo 1=
Blanco, Tubo 2= Estndar, Tubo 3= Muestra problema.
21

5.

Con las pipetas adicionar en cada tubo la cantidad indicada (X) de: agua
destilada, solucin estndar y suero problema. A continuacin, adicionar la
cantidad de reactivo (Y) indicada para cada determinacin, como se muestra a
continuacin:
Tubo 1
X ml
_____
_____
Y ml

Tubo2
_____
X ml
_____
Y ml

Tubo3
_____
_____
X ml
Y ml

Agua destilada
Solucin estndar
Suero del paciente
Reactivos
indicados
Nota: todos los tubos debern contener el mismo volumen final = X + Y.
6. Mezclar cada tubo, como lo indique el profesor.
7. Seguir las condiciones de incubacin indicadas.
8. Conectar y poner en marcha el espectrofotmetro.
9. Elegir la longitud de onda de acuerdo a la determinacin que se vaya a realizar.
10. Calibrar el espectrofotmetro a cero de absorbancia. Esto se hace empelando el
contenido del tubo 1.
11. Realizar las lecturas de los tubos 2 y 3, anotando las absorbancias de cada uno.
12. Realizar por triplicado las lecturas.
13. Terminadas las lecturas, verificar que no quede ninguna celda dentro del
espectrofotmetro, apagar el equipo y revisar que no queden celdas sucias.
14. Realizar los clculos correspondientes para obtener la concentracin de glucosa
en la muestra.
Notas
1. Para la obtencin de resultados exactos y precisos, seguir estrictamente la
metodologa propuesta.
2. Se debe tener cuidado de no hemolizar la muestra, ya que la hemlisis interfiere
en los resultados.
3. Preparar siempre un blanco y patrn para tener una lectura confiable.
4. La concentracin de glucosa plasmtica disminuye a una velocidad aproximada
del 5 % por hora en los casos en que no se realiza de inmediato la separacin
del cogulo.
Las pipetas y el material de vidrio empleados debern ser lavadas y enjuagadas
perfectamente, con agua destilada.

4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:

Edad:______.
RESULTADO

VALORES DE
REFERENCIA

GLUCOSA

Mtodo:

22

Observaciones:

5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia
Glucosa basal: 70 110 mg/dl
Repeticiones

Glucosa
Absorbancia del
estndar

Absorbancia de la
muestra

1
2
3
Media
DE
C.V.
%E
Clculos
Interpretacin de resultados
El incremento en los valores normales de glucosa indica diabetes mellitus, por
deficiencia absoluta de insulina o con relativa sensibilidad de los rganos efectores a
esta hormona. El diagnstico de diabetes mellitus implica reconocer un mayor riesgo
del paciente para tener enfermedades coronarias, padecimientos cerebrovasculares, complicaciones durante el embarazo, enfermedad renal, edema,
hipertensin, cataratas, glaucoma, ceguera.
6. CUESTIONARIO
1. Cmo se determina la glucosa posprandial?
2. Cmo se determina la curva de tolerancia a la glucosa?
3. En qu tipo de pacientes se debe realizar la prueba de glucosa posprandial
y la curva de tolerancia a la glucosa?
4. Cul es la finalidad de la prueba de hemoglobina glicosilada?
5. Si llega un(a) paciente solicitando una curva de tolerancia a la glucosa con
una carga de 75 g, se le toma la muestra para glucosa basal y se obtiene una
concentracin de 180 mg/dl, le dara la carga? Por qu?
6. Qu factores pueden influir en los resultados de la concentracin de
glucosa?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.

23

PRACTICA No.
5
ALUMNO

TEMA (O UNIDAD)
PROTENAS

FECHA

OBJETIVO: Conocer la importancia de las protenas en el organismo, determinar su


concentracin plasmtica y asociarla con posibles alteraciones en los rganos
encargados de metabolizarlos.
1. INTRODUCCION
Las protenas son macromolculas constituidas por las polimerizacin de
aminocidos, que se unen entre si por medio de enlaces peptdicos. Las protenas
pueden ser clasificadas en funcin de aspectos tan diversos como su composicin,
disposicin espacial, funcin biolgica y localizacin. Atendiendo a su composicin,
pueden ser simples (albmina) o conjugadas (nucleoprotenas, glucoprotenas, etc.).
De acuerdo a sus funciones biolgicas, pueden clasificarse en: estructurales, de
transporte, catalizadores biolgicos, mensajeros qumicos y de defensa
inmunolgica. Por ltimo, en funcin de su localizacin pueden clasificarse en
hsticas y hemticas.
Las protenas presentes en el suero (que son los componentes que ms
abundan en dicho lquido) poseen enorme importancia en el diagnstico, debido a
las funciones que desempean; de entre cuales destacan: fuente de nutricin para
los tejidos, participacin activa en el metabolismo osmtico, amortiguadores
fisiolgicos, transporte de diversas sustancias dentro del organismo, unin a
frmacos y destoxicacin de los mismos, sntesis de anticuerpos, enzimas y
hormonas y conservacin de la estabilidad fsica de la sangre. Las principales
protenas del suero son la albmina (comprende ms del 50% de las protenas en el
suero) y las globulinas (alfa1, alfa2, beta y gamma). El hgado sintetiza casi toda la
albmina, as como las globulinas alfa y beta. El sistema retculo endotelial y los
plasmocitos inmaduros en bazo, ganglios linfticos y mdula sea, producen las
gammaglobulinas. El fibringeno, que es la principal protena del plasma, no aparece
en el suero, porque es transformado en fibrina durante la coagulacin.
La determinacin de protenas totales puede proporcionar cierta informacin
sobre el estado nutricional del paciente o la presencia de alguna enfermedad. Aparte
de la determinacin de protenas totales, resulta de gran importancia clnica, la
determinacin cualitativa y cuantitativa de los diferentes tipos de protenas presentes
en el plasma. Los fraccionamientos posteriores aportan una informacin clnica
mucho ms precisa. La cuantificacin adicional de albmina ofrece informacin en
relacin a la capacidad sinttica del hgado. Adems la diferencia entre las protenas
totales y la albmina, informa sobre el valor de todas las globulinas. Finalmente, la
determinacin del patrn electrofortico de una paciente (proteinograma) es de
utilidad para diagnosticar un gran nmero de trastornos metablicos.
Principio de las determinaciones
Protenas Totales
El procedimiento clnico ms generalizado para la medicin de la concentracin de
protenas totales en el suero es sin duda la tcnica de Biuret.
La determinacin se basa en que las protenas y sus pptidos, a diferencia de otros
compuestos nitrogenados, forman, en solucin alcalina con iones cobre, un complejo

24

qumico de color violeta (reaccin de Biuret) que es proporcional a la concentracin


de protenas en el suero.
Albmina
Entre las tcnicas para la medicin de albmina, la ms empleada es la que se basa
en la fijacin de ciertos colorantes a sta protena.
Cuando la Albmina del suero se encuentra en un medio amortiguador y a pH
adecuado, tiene la propiedad de unirse a travs de puentes de hidrgeno y fuerzas
de Van der Waals a ciertos colorantes e indicadores como el verde de bromocresol,
formando complejos coloridos cuya intensidad es proporcional a la concentracin de
la albmina presente en suero.
Globulinas
La fraccin globulnica en el suero puede determinarse de manera sencilla, por la
simple diferencia entre las concentraciones de protenas totales (PT) y albmina (A).
De este modo la concentracin de globulinas (G) ser: G = PT - A
2. EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPO Y MATERIALES
cantidad
Descripcin
cantidad
1
Gradilla
1

Jeringa de 5 ml

1
1
1

Torundero
Ligadura
Aguja de doble filo para tubo al
vaco
Tubos de ensaye de 13 x 100
Tubos de ensaye de 12 x 75
Tubo al vaco tapn rojo
Pipetas pasteur
Bulbo gotero
Micropipeta graduable con
puntas
Pipeta de vidrio graduada de
1.0 ml
Pipeta de vidrio graduada de
5.0 ml
Guantes de latex
Centrfuga
Incubadora
Espectrofotmetro

2
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1

1
1
1
100 ml

REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial para
determinacin de Protenas
totales y Albmina.
Estandar de protenas totales:
100 mg/dl
Estandar de Albmina:
Suero control
Agua destilada

MATERIAL BIOLOGICO
cantidad
Descripcin
2 ml
Suero

3. PROCEDIMIENTO
Al igual que en la determinacin de glucosa, se deben seguir los procedimientos
indicados por el profesor, ya que las determinaciones varan dependiendo de la
marca de los reactivos.
1. Indicar al paciente que debe de tener un ayuno de 8 horas.
2. Tomar una muestra de sangre y procesarla para obtener suero. (como se ndica
en la prctica No.2). Separar el suero y pasarlo a un tubo limpio y seco.
25

3. Para cada determinacin, preparar una serie de tubos rotulados: blanco,


estndar y muestra problema. Para la cuantificacin de protenas totales y
albmina, se deben seguir los procedimientos indicados por el profesor, ya que
las cantidades de muestra y reactivos a emplear, varan dependiendo de la
marca de los reactivos.
4. Con las pipetas adicionar en cada tubo la cantidad indicada (X) de: agua
destilada, solucin estndar y suero problema. A continuacin, adicionar la
cantidad de reactivo (Y) indicada para cada determinacin, como se muestra a
continuacin:
Tubo 1
X ml
_____
_____
Y ml

Tubo2
_____
X ml
_____
Y ml

Tubo3
_____
_____
X ml
Y ml

Agua destilada
Solucin estndar
Suero del paciente
Reactivos
Nota:
todos los tubos
indicados
debern
contener
el
mismo volumen final = X + Y.
5. Mezclar cada tubo, como lo indique el profesor.
6. Seguir las condiciones de incubacin indicadas.
7. Conectar y poner en marcha el espectrofotmetro.
8. Elegir la longitud de onda de acuerdo a la determinacin que se vaya a realizar.
9. Calibrar el espectrofotmetro a cero de absorbancia. Esto se hace empelando el
contenido del tubo 1.
10. Realizar las lecturas de los tubos 2 y 3, anotando las absorbancias de cada uno.
11. Realizar por triplicado las lecturas.
12. Terminadas las lecturas, verificar que no quede ninguna celda dentro del
espectrofotmetro, apagar el equipo y revisar que no queden celdas sucias.
13. Realizar los clculos correspondientes para obtener la concentracin de glucosa
en la muestra.
Notas
1. Para evitar la contaminacin de las soluciones reactivas, se recomienda vaciar
en otro recipiente la cantidad requerida para uso.
2. Preparar siempre un blanco y patrn para tener una lectura confiable.
3. Tener en cuenta los valores de linearidad en caso de obtener valores
incrementados.
4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:

Edad:______.

RESULTADO

VALORES DE
REFERENCIA

PROTENAS TOTALES
ALBMINA
GLOBULINAS
26

Mtodo:

Observaciones:

5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia
Parmetro
Protenas totales
Albmina
Globulinas

ANALITO

Concentracin srica
6.7 8.7 g/dl
3.6 5.1 g/dl
1.8 3.6 g/dl

Absorbancia del
estndar
1

Absorbancia de
la muestra
problema
1
2
3

Clculos
estadsticos
M

D.E C.V. %E

Protenas totales
Albmina
Globulinas

Clculos:

Interpretacin de resultados
Protenas totales
El aumento en la concentracin total de protenas srica se relaciona por lo general
con deshidratacin o con el aumento de una de las fracciones globulnicas.
La baja concentracin de las protenas totales del suero se pude presentar en el
sndrome nefrtico o en casos de desnutricin.
Albmina
La hipoalbuminemia es un hallazgo caracterstico de las enfermedades hepticas
evolucionadas, el sndrome nefrtico o desnutricin.
Globulinas
Un aumento de globulinas es caracterstico de inflamaciones agudas, en tanto que
su disminucin esta relacionada con problemas hepticos o inmunosupresin.

27

6. CUESTIONARIO
1. Qu datos nos ofrece la determinacin de protenas en suero sobre las
siguientes
alteraciones:
gastrointestinales,
hepticas,
hematolgicas,
inmunolgicas y renales?
2. En qu consiste el estudio electrofortico de protenas?
3. Qu es un proteinograma?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.

28

PRACTICA No.
6

TEMA (O UNIDAD)
COMPUESTOS NITROGENADOS NO
PROTICOS

FECHA

ALUMNO
OBJETIVO: Conocer la importancia de determinar los compuestos nitrogenados no
proteicos y su asociacin con alteraciones en el metabolismo de protenas y
aminocidos, as como con problemas renales.
1. INTRODUCCION
El metabolismo es la suma de los procesos bioqumicos que tienen lugar en el
interior de una clula viva; para que se lleve a cabo es necesario que surjan una
serie de fenmenos (metabolismo intermediario) a fin de que los diversos sustratos
lleguen y se incorporen a las clulas. El mecanismo de incorporacin es complejo y
con numerosas variantes. En el organismo, las clulas seleccionan los sustratos que
van a utilizar, almacenan los que requieren y eliminan los que no pueden aprovechar
(productos finales del metabolismo). Los productos finales del metabolismo de
importancia clnica son: Urea, creatinina y cido rico.
La urea constituye el principal producto de excrecin del metabolismo
proteico. Es sintetizada en el hgado a partir de los aminocidos, de all pasa a
sangre y finalmente es eliminada va renal en la orina. La urea constituye el 80 - 90
% del nitrgeno excretado (el nitrgeno ureico constituye aproximadamente el 45%
del nitrgeno no protenico total del suero o plasma). La concentracin de nitrgeno
ureico en la sangre representa el equilibrio entre la velocidad de sntesis de la urea
en el hgado y la de excrecin de esta sustancia por el rin. Los niveles sanguneos
de urea incrementan (uricemia) cuando la excrecin glomerular disminuye, por lo
que constituye un indicador de insuficiencia renal. Los mtodos para la
determinacin de urea pueden clasificarse en dos grupos:
a) Mtodos directos: los cuales consisten en la condensacin de la urea con diacetilo
para formar un cromgeno cuantificable (medible).
b) Mtodos Indirectos: consisten en la determinacin de amonio resultante de la
reaccin de la ureasa sobre la urea.
La creatinina es un producto final que deriva de la creatina (compuesto
nitrogenado no proteico, que se encuentra en forma de fosfocreatina) del tejido
muscular. Durante el ejercicio la fosfocreatina es desfosforilada, manteniendo el
aporte de ATP que es la fuente inmediata de energa para la contraccin muscular.
La creatinina libre, no se utiliza en el metabolismo y funciona nicamente como
producto de excrecin de la creatina. Tras pasar a la sangre, se elimina en su
mayora a nivel renal. Por lo tanto, todas las causas de lesin renal pueden ser
responsables de la elevacin de creatinina srica, ya que evitan su excrecin. La
medicin de la excrecin de creatinina es una medicin especfica, muy til para
determinar funcin renal, en especial la filtracin glomerular. la mayora de los
mtodos para la determinacin de cratinina se basan en la reaccin de Jaff,
desafortunadamente este mtodo tan simple es inespecfico, existiendo algunas
sustancias en la sangre que tambin reaccionan con el reactivo.
El cido rico es un cido orgnico dbil que constituye el producto terminal
de la degradacin de las purinas, procedentes del catabolismo de los cidos
nucleicos. En el organismo existen alrededor de 1200 mg de cido rico, se
encuentra en sangre y articulaciones como sal de sodio, urato monosdico.
29

Diariamente son elminados unos 700 mg de cido rico, el 60% lo hace a travs de
la orina y el resto es eliminado con la bilis (va heptica) y los jugos gstrico y
pancretico. La elevacin en los nivles sricos de cido rico (hiperuricemia), puede
estar originada por: incremento en la sntesis de cido rico (hiperuricemia
metablica) o un dficit de su excrecin a nivel renal (hiperuricemia renal); lo anterior
trae como consecuencia el depsito de cido rico en forma de uratos, que provocan
una reaccin inflamatoria en diversas localizaciones (gota). El cido rico se mide
en sangre, orina u otros lquidos corporales mediante tcnicas colorimtricas o bien
por mtodos enzimticos.
Principio de las determinaciones
Urea (mtodo enzimtico)
La hidrlisis de la urea, por la enzima ureasa produce amonaco y cido carbnico;
el amonaco se cuantifica por medio de la cetoglutarato catalizada por la enzima
glutamato
aminacin reductiva del deshidrogenasa, con la oxidacin simultnea
del nicotinamin-adenin-dinucletido reducido (NADH) (Fig. ). La disminucin en la
extincin debida al consumo de NADH, es directamente proporcional a la
concentracin de urea presente en la muestra.
Creatinina (reaccin de Jaff)
La creatinina y otros cromgenos presentes en el plasma; en medio alcalino,
reaccionan con el in picrato dando un complejo de color amarillo. La concentracin
del complejo colorido producido en un determinado tiempo de reaccin corresponde
a la concentracin de creatinina.
cido rico (mtodo enzimtico)
El cido rico se transforma en presencia de oxgeno y la enzima uricasa, en
alantona y perxido de hidrgeno. Este ltimo reacciona simultneamente con el
cido 2-OH-3,5-diclorobencensulfnico (2-OH-3,5-DCBS) y con 4-aminoantipirina (4AAP), formando una quinonimina roja. La absorbancia de la quinonimina producida
es proporcional a la concentracin de cido rico presente en la muestra.
2. EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPO Y MATERIALES
cantidad
Descripcin
cantidad
1
Gradilla
1
1

Jeringa de 5 ml

Torundero

1
1

Ligadura
Aguja de doble filo para tubo al
vaco
Tubos de ensaye de 13 x 100
Tubos de ensaye de 12 x 75
Tubo al vaco tapn rojo
Pipetas pasteur
Bulbo gotero
Micropipeta graduable con
puntas
Pipeta de vidrio graduada de
1.0 ml

1
1

2
2
1
1
1
1
1

1
1
100 ml

REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial para
determinacin de urea
Equipo comercial para
determinacin de creatinina
Equipo comercial para
determinacin de cido rico
Estandar de urea
Estandar de creatinina
Estandar de cido rico
Suero control
Agua destilada

30

1
1
1
1

Guantes de latex
Centrfuga
Incubadora
Espectrofotmetro
MATERIAL BIOLOGICO
cantidad
Descripcin
2 ml
Suero
3. PROCEDIMIENTO
1. Indicar al paciente que debe de tener un ayuno de 8 horas.
2. Tomar una muestra de sangre y procesarla para obtener suero. (como se ndica
en la prctica No.2). Separar el suero y pasarlo a un tubo limpio y seco.
3. Para cada determinacin, preparar una serie de tubos rotulados: blanco,
estandar y muestra problema. Para la cuantificacin de urea, creatinina y cido
rico se deben seguir los procedimientos indicados por el profesor, ya que las
cantidades de muestra y reactivos a emplear, varan dependiendo de la marca de
los reactivos.
4. Con las pipetas adicionar en cada tubo la cantidad indicada (X) de: agua
destilada, solucin estndar y suero problema. A continuacin, adicionar la
cantidad de reactivo (Y) indicada para cada determinacin, como se muestra a
continuacin:
Tubo 1
Tubo2
Tubo3
Agua destilada
X ml
_____
_____
Solucin estndar
_____
X ml
_____
Suero del paciente _____
_____
X ml
Reactivos
Y ml
Y ml
Y ml
indicados
Nota: todos los tubos debern contener el mismo volumen final = X + Y.
5. Mezclar cada tubo, como lo indique el profesor.
6. Seguir las condiciones de incubacin indicadas.
7. Conectar y poner en marcha el espectrofotmetro.
8. Elegir la longitud de onda de acuerdo a la determinacin que se vaya a realizar.
9. Calibrar el espectrofotmetro a cero de absorbancia. Esto se hace empelando el
contenido del tubo 1.
10. Realizar las lecturas de los tubos 2 y 3, anotando las absorbancias de cada uno.
11. Realizar por triplicado las lecturas.
12. Terminadas las lecturas, verificar que no quede ninguna celda dentro del
espectrofotmetro, apagar el equipo y revisar que no queden celdas sucias.
13. Realizar los clculos correspondientes para obtener la concentracin de glucosa
en la muestra.
Notas
1. Para evitar la contaminacin de las soluciones reactivas, se recomienda vaciar
en otro recipiente la cantidad requerida para uso.
2. Preparar siempre un blanco y patrn para tener una lectura confiable.
3. Tener en cuenta los valores de linearidad en caso de obtener valores
incrementados.
4. RESULTADOS
Nombre:
31

Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:

Edad:______.
RESULTADO

VALORES DE
REFERENCIA

CREATININA
UREA
ACIDO URICO
Mtodo:

Observaciones:

5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia en suero
Parmetro
Urea
Cratinina
cido rico

ANALITO

Absorbancia del
estndar
1

Resultado
20 - 40 mg / dl
0.5 1.5 mg / dl
2.5 - 7.3 mg / dl

Absorbancia de
la muestra
problema
1
2
3

Clculos
estadsticos
M

D.E C.V. %E

Urea
Creatinina
cido rico

Clculos:
32

Interpretacin de resultados
Urea
Aumentado: Causas prerenales (descompensacin cardica, deshidratacin
ocasionada por ingesta reducida o prdida excesiva de agua, aumento del
catabolismo proteico). Causas renales (glomerulonefritis aguda, nefritis crnica,
rin poliqustico, necrosis tubular). Causas postrenales: Cualquier tipo de
obstruccin del tracto urinario.
Disminuido: Es menos frecuente y ocurre primariamente en enfermedad heptica
avanzada.
Creatinina
La concentracin de creatinina en suero es una excelente prueba para valorar la
funcin renal. En pacientes con nefropatas conocidas, la existencia de
concentraciones permanentes de 2.5 a 4.9 mg/dl. significa una grave disminucin de
la funcin renal. Las concentraciones de 5.0 a 9.9 mg/dl demuestran la existencia de
enfermedad renal muy grave. Las concentraciones por encima de 100 mg/dl ponen
en evidencia que es el momento de considerar el tratamiento de reemplazo crnico
ya sea bajo la forma de dilisis permanente o de un transplante renal.
Acido rico
Aumentado: Gota, leucemia, anemia
Disminuido: Acromegalia, tratamiento de salicilatos. Orientacin hacia el diagnstico
de enfermedades primarias como: trastornos de los tbulos proximales del rin; en
enfermedad de Wilson. Deficiencia hereditaria de xantinaoxidasa
6. CUESTIONARIO
1. Qu refleja el incremento de urea y creatinina en el suero de un paciente?
2. Qu padecimientos incrementan los valores de creatinina y de urea?
3. Qu factores influyen en los resultados de un examen de cido rico?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.

33

PRACTICA No.
7
ALUMNO

TEMA (O UNIDAD)
METABOLISMO DE LPIDOS

FECHA

OBJETIVO: Conocer la importancia de los lpidos en el organismo, as como las


alteraciones que se pueden presentar en su metabolismo y la manera de
identificarlas.
1. INTRODUCCION
Los lpidos son un grupo heterogneo de compuestos, que tienen la
propiedad comn de ser relativamente insolubles en agua y solubles en los
solventes no polares como el ter, cloroformo y benceno. Los principales lpidos en
la bioqumica corporal son: triglicridos, cidos grasos, colesterol y fosfolpidos.
Entre las variadas funciones de los lpidos destacan: fuente energtica del
organismo, forma de almacenamiento de energa, constituyentes de las membranas
celulares y de las lipoprotenas plasmticas, agentes emulsificantes (del colesterol,
proceden los cidos biliares), compuestos funcionales (hormonas esteroides,
prostaglandinas, vitaminas, etc.). Los lpidos, para ser transportados en el cuerpo,
deben combinarse con protenas plasmticas formando un complejo lpido-protenico
(lipoprotena). De este modo, los cidos grasos libres se unen a albmina, en tanto
que el colesterol libre y esterificado, triglicridos y fosfolpidos se unen a una
globulina.
La alteracin en las fracciones de lpidos circulantes en el torrente sanguneo,
es un fiel reflejo de una serie de alteraciones orgnicas de diversa etiologa y
gravedad, cuya importancia clnica est relacionada fundamentalmente con la
arterioesclerosis. En la actualidad, ha quedado bien establecido que las alteraciones
en el metabolismo de lpidos, constituyen el factor causal ms importante en el
origen de las enfermedades cardivasculares. En general, las determinaciones a
realizar para el estudio de los lpidos son: colesterol, triglicridos y lipoprotenas
(colesterol-HDL y colesterol-LDL).
La mayor parte del colesterol del cuerpo se origina por sntesis (cerca de 1
g/da) mientras la dieta promedio, suministra 0.3 g/da; prcticamente todos los
tejidos son capaces de sintetizar colesterol, teniendo particular importancia el hgado
e intestino. El colesterol es el precursor de las hormonas esteroides y de los cidos
biliares, as como un constituyente esencial de las membranas celulares. El
colesterol, circula en la sangre unido a las lipoprotenas: las LDL transportan el 35 45% del colesterol, las HDL del 15 20% y el resto circula unido a las VLDL y los
quilomicrones.
Los triglicridos, tambin llamados grasas neutras, son steres de cidos
grasos y glicerol; constituyen alrededor del 95% del tejido adiposo y representan la
principal forma de almacenamiento de lpidos. Los triglicridos son transportados en
el plasma fundamentalmente en forma de quilomicrones y lipoprotenas de muy baja
densidad (VLDL).
Las lipoprotenas, son macromolculas compuestas por: triglicridos,
colesterol, fosfolpidos y protenas (apoprotenas). La proporcin en que se
encuentran cada uno de sus componentes, determina las propiedades
fisicoqumicas y funcionales de las lipoprotenas. En base a su densidad, las
lipoprotenas se han clasificado en: quilomicrones (Q), lipoprotenas de muy baja
densidad (VLDL), lipoprotenas de baja densidad (LDL) y lipoprotenas de alta
34

densidad (HDL). La densidad y composicin de cada una de las lipoprotenas se


muestran en el siguiente cuadro:
Densidad
Composicin %
Lipoprote
g./ml
Protenas Triglicrid Colesterol Fosfolpidos
na
os
Q
< 0.950
0.5-2.0
80.0-95.0
2.0-5.0
3.0-6.0
VLDL
0.950-1.006
12.0
40.0-80.0 10.0-40.0 15.0-20.0
LDL
1.006-1.063
25.0
10.0
45.0
20.0
HDL
1.063-1.210
50.0
1.0-5.0
20.0
30.0
El colesterol en las lipoprotenas de baja y alta densidad es la fraccin ms
importante, pues se ha demostrado que dicho alcohol en stas lipoprotenas guarda
relacin con el riesgo a presentar arteriopata coronaria.
Principio de las determinaciones
Colesterol
El colesterol y sus steres se librearan de las lipoprotenas por los detergentes. La
colesterol-estearasa hidoliza los steres. A continuacin se lleva a cabo la oxidacin
enzimtica por la colesterol-oxidasa, con la produccin de H2O2. El peroxido
formado, por accin de la peroxidasa, reacciona con 4-aminoantiporina y fenol,
dando origen al colorante 4- (p-benzoquinona-monoamino)-fenazona, cuya
formacin es proporcional a la cantidad de colesterol presente en la muestra.
Triglicridos
Se han desarrollado una amplia gama de mtodos para medir los triglicridos
plasmticos, pero los ms utilizados con fines clnicos son los basados en la
hidrlisis de los triglicridos y la determinacin del glicerol liberado en la reaccin.
Las reacciones pueden llevarse a cabo qumica o enzimticamente.
Los triglicridos son hidrolizados enzimticamente con lipasas a glicerol y cidos
grasos libres. El glicerol liberado, en presencia de glicerol cinasa (GC) y ATP,
produce glicerol-3-fosfato, que a su vez en presencia de la glicerol-fosfato-oxidasa
(GPO), produce dihidoxiacetona fosfato ms perxido. El perxido formado, en
presencia de peroxidasa (POD), por reaccin con 4-aminoantipirina y 2-clorofenol,
forman el colorante: 4- (o-benzoquinona-monoamino)-fenazona, cuya formacin es
proporcional a la cantidad de triglicridos presentes en la muestra.
Colesterol HDL y LDL
La determinacin de lipoprotenas de alta y baja densidad, se puede realizar por
separacin de las mismas, empleando un reactivo precipitante (cido fosfotngstico
o policationes) y la posterior determinacin de colesterol ( por tcnica enzimtica).
Aunque tambin existen equipos para la determinacin de colestero-HDL sin
precipitacin, empleando mtodo colorimtrico.
2. EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPO Y MATERIALES
cantidad
Descripcin
cantidad
1
Gradilla
1
1

Jeringa de 5 ml

Torundero

Ligadura

REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial para
determinacin de triglicridos
Equipo comercial para
determinacin de colesterol
Equipo comercial para
determinacin de LDL y HDLcolesterol
Estandar de triglicridos
35

1
2
2
1
1
1
1

Aguja de doble filo para tubo al


vaco
Tubos de ensaye de 13 x 100

Tubos de ensaye de 12 x 75
Tubo al vaco tapn rojo
Pipetas pasteur
Bulbo gotero
Micropipeta graduable con
puntas
1
Pipeta de vidrio graduada de
1.0 ml
1
Pipeta de vidrio graduada de
5.0 ml
1
Guantes de latex
1
Centrfuga
1
Incubadora
1
Espectrofotmetro
MATERIAL BIOLOGICO
cantidad
Descripcin
2 ml
Suero

Estandar de colesterol

Estandar de LDL y HDLcolesterol


Suero control
Agua destilada

1
100 ml

3. PROCEDIMIENTO
1. Indicar al paciente que debe de tener un ayuno de 12 horas.
2. Tomar una muestra de sangre y procesarla para obtener suero. (como se
ndica en la prctica No.2). Separar el suero y pasarlo a un tubo limpio y seco.
3. Para cada determinacin, preparar una serie de tubos rotulados: blanco,
estandar y muestra problema. Para la cuantificacin de triglicridos,
colesterol, LDL y HDL-colesterol se deben seguir los procedimientos
indicados por el profesor, ya que las cantidades de muestra y reactivos a
emplear, varan dependiendo de la marca de los reactivos.
4. Con las pipetas adicionar en cada tubo la cantidad indicada (X) de: agua
destilada, solucin estndar y suero problema. A continuacin, adicionar la
cantidad de reactivo (Y) indicada para cada determinacin, como se muestra
a continuacin:
Tubo 1
X ml
_____
_____
Y ml

5.
6.
7.
8.
9.

Tubo2
_____
X ml
_____
Y ml

Tubo3
_____
_____
X ml
Y ml

Agua destilada
Solucin estndar
Suero del paciente
Reactivos
indicados
Nota: todos los tubos debern contener el mismo volumen final = X + Y.
Mezclar cada tubo, como lo indique el profesor.
Seguir las condiciones de incubacin indicadas.
Conectar y poner en marcha el espectrofotmetro.
Elegir la longitud de onda de acuerdo a la determinacin que se vaya a
realizar.
Calibrar el espectrofotmetro a cero de absorbancia. Esto se hace empelando
el contenido del tubo 1.
36

10. Realizar las lecturas de los tubos 2 y 3, anotando las absorbancias de cada
uno.
11. Realizar por triplicado las lecturas.
12. Terminadas las lecturas, verificar que no quede ninguna celda dentro del
espectrofotmetro, apagar el equipo y revisar que no queden celdas sucias.
13. Realizar los clculos correspondientes para obtener la concentracin de
glucosa en la muestra.
Notas
1. Para evitar la contaminacin de las soluciones reactivas, se recomienda vaciar
en otro recipiente la cantidad requerida para uso.
2. Preparar siempre un blanco y patrn para tener una lectura confiable.
3. Tener en cuenta los valores de linearidad en caso de obtener valores
incrementados.
4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:

Edad:______.
RESULTADO

VALORES DE
REFERENCIA

COLESTEROL
TRIGLICRIDOS
HDL- colesterol
LDL- colesterol
Mtodo:

Observaciones:

5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia
Colesterol
150 - 250 mg/dl
Para la determinacin del riesgo de hipercolesterolemia se considera:
Sospechoso a partir de 220 mg/dl
Elevado a partir de 260 mg/dl
Triglicridos
10 150 mg/dl
Para la determinacin del riesgo de hipertrigliceridemia se considera:
37

Sospechoso a partir de 150 mg/dl


Elevado a partir de 200 mg/dl
Lipoprotenas
HDL-coelsterol 29 77 mg/dl
LDL-coelsterol 62 185 mg/dl

ANALITO

Absorbancia del
estndar
1

Absorbancia de
la muestra
problema
1
2
3

Clculos
estadsticos
M

D.E C.V. %E

Colesterol
Triglicridos
HDL- colesterol
LDL- colesterol
Clculos:

Interpretacin de resultados
Colesterol
Hipercolesterolemia: Puede denotar riesgo de arteriopata coronaria as como de
hepatitis insipiente, trastorno de lpidos, bloqueo de conductos biliares, pancreatitis e
hipotiroidismo.
Hipocolesterolemia: Suele guardar relacin con desnutricin, necrosis celular del
hgado e hiperiroidismo.
Triglicridos
Niveles elevados de triglicridos se consideran riesgo extraordinario de sufrir
arteriopata coronaria. El incremento moderado puede significar obstruccin de vas
biliares, diabetes o sndrome nefrtico. Los niveles extraordinariamente
incrementados pueden significar hiperlipoproteinemia congnita.
La disminucin de los niveles sricos es rara y se observa en casos de desnutricin
o abetalipoproteinemia.
Lipoprotenas
Los niveles elevados de LDL aumentan el riesgo de arterioparia coronaria. Niveles
altos de HDL indican menor frecuencia a sufrir la cardiopata antes sealada, pero
tambin pueden denotar hepatitis crnica, cirrosis biliar o alcoholismo.
38

6. CUESTIONARIO
1. Cules son las vas del metabolismo de los lpidos?
2. En qu condiciones debe presentarse el paciente al laboratorio para realizar la
determinacin de lpidos?
3. Cmo puede interferir en los resultados una muestra hemolizada, ictrica y
lipmica?
4. Por qu el suero es la muestra de eleccin para realizar la determinacin de
lpidos?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.

39

PRACTICA No.
8
ALUMNO

TEMA (O UNIDAD)
EXMEN GENERAL DE ORINA

FECHA

OBJETIVOS: Con base en la composicin normal de la orina, detectar alteraciones


en vas urinarias o poner de manifiesto la existencia de alteraciones metablicas de
diversa etiologa, realizando un examen general de orina, teniendo en cuenta todos
los cuidados que requiere el estudio, desde la toma de muestra hasta la obtencin e
interpretacin de resultados.
1. INTRODUCCION
El tracto urinario representa la va de eliminacin de los derivados metablicos y
qumicos no esenciales disueltos en agua. De las estructuras que constituyen el
tracto urinario, los riones son los de mayor inters, stos poseen la notable
propiedad de seleccionar y retener las sustancias esenciales, excretando al mismo
tiempo los productos de desecho del metabolismo y el exceso de los ingeridos con la
dieta; mantienen el equilibrio del agua y los electrolitos, contribuyendo de manera
fundamental en la homeostasia cido-bsica.
El Examen General de Orina es el conjunto de pruebas que se realizan para
descubrir sustancias o componentes que normalmente no se encuentran en la
misma. El estudio de muestras de orina puede plantearse desde dos puntos de vista:
diagnstico y tratamiento de enfermedades metablicas o sistmicas, no
directamente relacionadas con el sistema urinario. El examen general de orina
incluye la evaluacin de sus caractersticas fsicas (color, olor, aspecto, densidad),
estudio qumico (pH, protenas, glucosa, cuerpos cetnicos, sangre, bilirrubina,
urobilingeno, nitritos) y la evaluacin microscpica del sedimento urinario (clulas,
cristales, cilindros).
Para el estudio rutinario de la orina, es mejor una muestra concentrada que
una diluida, la concentracin de solutos y de elementos formes vara a lo largo del
da y depende de la ingesta de lquidos. La primera orina eliminada por la maana,
al levantarse, suele ser la ms concentrada, ya que el paciente no ha bebido agua;
en consecuencia es la ms adecuada para el estudio. Para realizar un examen
general de orina deben emplearse muestras recientes (dentro de la primera hora de
la miccin) o bien refrigerarlas y estudiarlas tan pronto como sea posible. La muestra
de orina debe ser colectada en un recipiente limpio de boca ancha, tomando en
cuenta las siguientes consideraciones:
Sexo masculino: Si no presenta circuncisin, desplazar hacia atrs el prepucio, y
limpiar la porcin anterior del glande (desde el orificio uretral hacia fuera). Desechar
la primera porcin de orina en el migitorio y recoger directamente en el recipiente,
una muestra de 20 a 50 ml.
Sexo femenino: Colocarse en cuclillas o parada a horcajadas sobre el excusado.
Separar con los dedos los labios menores, de manera que exponga el meato uretral.
Limpiar la zona alrededor del meato (desde el orificio del meato hacia fuera). Orinar
manteniendo la separacin de los labios y se desechar la porcin inicial de orina,
dejndola caer en el interior del excusado. Colocar el recipiente para la recoleccin
de la muestra bajo el chorro y recoger de 20 a 50 ml de orina. Liberar los labios
menores y se desechar el resto de la orina en el excusado.
En nios que todava no han adquirido el control sobre la miccin, se utilizan
mtodos especiales que proporcionen muestras aceptables, evitando en lo posible
40

tcnicas invasivas. El mtodo ms empleado consiste en utilizar bolsas de


poliestireno estril, que se adhieren a la piel perineal envolviendo completamente los
genitales externos del nio.
2. EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPO Y MATERIALES
cantidad
Descripcin
1
Gradilla
2
1
1
1
1 caja
1 caja
1

cantidad
1

REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial de tiras
reactivas para urianlisis
Agua destilada

Tubos de ensaye de 13 x
100 ml
100
Guantes de latex
MATERIAL BIOLOGICO
Centrfuga
cantidad
Descripcin
Microscopio
50 ml
Orina reciente
Portaobjetos
Cubreobjetos
Frasco
estril
para
recoleccin de orina

3. PROCEDIMIENTO
I. Examen fsico
1. Homogeneizar perfectamente la muestra.
2. Anotar el volumen obtenido de la muestra.
3. En un tubo limpio y seco, colocar 10 ml de orina y observarla a contraluz.
4. Reportar el color, olor y aspecto observados.
II. Anlisis qumico
Principio: El anlisis se basa en el empleo de la qumica seca, mediante el uso de
tiras reactivas multipruebas de lectura visual. Las tiras reactivas comerciales
contienen en los cojines de prueba indicadores que al entrar en contacto con la
muestra de orina, permiten identificar la presencia diversos metabolitos.
Procedimiento
1. Retirar una tira reactiva del frasco, cerrando enseguida el mismo.
2. Sumergir la tira en un tubo de ensaye que contenga 10 ml de la muestra de orina,
procurar que se cubran todas las reas reactivas y retirar la tira inmediatamente
para evitar la disolucin de los reactivos. Eliminar el exceso de orina rasando el
canto de la tira en el borde del tubo.
3. Mantener la tira en posicin horizontal para evitar la mezcla de las sustancias
qumicas en reas adyacentes.
4. Comparar las reas reactivas con los correspondientes cuadros de color en la
carta de lectura que acompaa al frasco.
5. Sostener la tira reactiva lo ms cerca posible de la carta de colores y comparar
cuidadosamente, en el tiempo que se indica. Evitar tocar la carta de colores con la
tira, ya que esto ocasiona contaminacin.
6. Registrar sus resultados.
Notas:
1. La lectura de la tira reactiva al tiempo exacto es esencial para obtener ptimos
resultados.
2. El empleo de orina de reciente emisin, bien mezclada y sin centrifugar es muy
importante para el buen desarrollo de la prueba.
3. El reporte es cualitativo o semicuantitativo, reportndose con cruces que van
desde una hasta cuatro como mximo.
41

III. Anlisis de sedimento


1. Centrifugar 10 ml de orina a 2000 r.p.m. durante 5 minutos.
2. Descartar todo el sobrenadante, dejando en el tubo un volumen no mayor de 0.5
ml.
3. Resuspender el sedimento residual.
4. Montar una preparacin en fresco, colocando en un portaobjetos una gota del
sedimento resuspendido.
5. Cubrir con un cubreobjetos, evitando la formacin de burbujas.
6. Observar la muestra al microscopio con el objetivo 40X. Es necesario emplear
intensidad lumnica media, para ayudar a localizar los diferentes tipos de
estructuras en la muestra. Revisar 10-15 campos y registrar sus observaciones.
Nota
Los portaobjetos y cubreobjetos deben estar escrupulosamente limpios, para permitir
una mejor identificacin de las estructuras contenidas en la muestra.
4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:
EXAMEN FISICO-QUIMICO

Edad:______.
RESULTADO

VALORES DE
REFERENCIA

COLOR
OLOR
ASPECTO
DENSIDAD
pH
EXAMEN MICROSCOPICO
LEUCOCITOS POR CAMPO
ERITROCITOS POR
CAMPO
CELULAS EPITELIALES
CILINDROS POR CAMPO
CRISTALES
FILAMENTO MUCOSO
LEVADURAS
BACTERIAS
PARSITOS
EXAMEN QUMICO
PROTENAS
GLUCOSA
CUERPOS CETNICOS
HEMOGLOBINA
UROBILINGENO
BILIRRUBINA
NITRITOS

Mtodo:
Observaciones:

42

5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia
Parmetro
Color
Olor
Aspecto
Densidad
PH
Protenas,
glucosa,
cuerpos
cetnicos,
sangre,
bilirrubina,
nitritos.
Urobilingeno
Eritrocitos
Leucocitos
Clulas epiteliales
Cilindros
Cristales
Levaduras
Parsitos

Resultado
Amarillo claro
Caracterstico
Cristalino
transparente
1.025 1.030
4.5 8.0

Negativo

0.1 - 1.0 mg/dl


0 3 / campo 40x
0 4 / cmapo 40x
Escasas
Ocasionales
Ocasionales
Negativo
Negativo

Interpretacin de Resultados
Color: El color de la orina puede ser afectado por componentes como pigmentos,
colorantes, sangre u otras sustancias.
Aspecto: La orina normal de reciente emisin es usualmente clara o transparente.
Una apariencia turbia o lechosa, indica alguna alteracin por enfermedad.
Densidad: La densidad y el ndice de refraccin permiten apreciar la concentracin
relativa de solutos en la orina. Estos datos constituyen indicadores bastante precisos
del equilibrio hdrico y osmtico del organismo cuya conservacin es la principal
funcin del rin. Una densidad baja se presenta en casos de diabetes inspida,
glomerulonefritis e insuficiencia renal entre otros. Una densidad alta puede
presentarse en casos de trastornos hepticos, insuficiencia congestiva cardiaca o
deshidratacin.
PH: Acido: Sndrome de Fanconi, alcalosis metablica o respiratoria.
Alcalino: Tuberculosis renal, pirexia, fenilcetonuria.
Urobilingeno: Aumentado: Anemia hemoltica, anemia perniciosa, malaria,
hepatitis infecciosa, hepatitis txica, cirrosis portal, insuficiencia cardiaca congestiva,
mononucleosis infecciosa. Disminuido: Obstruccin parcial o total de los conductos
biliares (colelitiasis, enfermedades inflamatorias, enfermedades neoplsicas, terapia
antibitica).

43

Leucocitos: En abundancia denotan inflamacin de vas urinarias, especialmente


cistitis y pielonefritis. Generalmente se ven neutrfilos en infecciones, donde el
urocultivo generalmente es positivo. Se pueden observar eosinfilos y linfocitos,
donde la presencia de eosinfilos indicara nefritis intersticial aguda, y de los ltimos,
una infiltracin renal, como en la enfermedad tbulo-intersticial crnica.
Clulas epiteliales: El nmero excesivo de clulas epiteliales denota la fuerte
posibilidad de degeneracin tubular activa en casos de necrosis tubular. Son
producto del barrido que hace la orina por el tracto urinario. Son de relevancia clnica
las clulas epiteliales de los tbulos renales, que son generalmente 1.5 a 3 veces
ms grandes que las clulas de la serie blanca, y tienen un gran ncleo redondo.
Debido a que es difcil distinguir las clulas de origen tubular, de aquellas que se
originan en el tracto urinario inferior, slo es relevante el hallazgo de cilindros de
clulas epiteliales para indicar el origen renal de las clulas. stos sugieren mltiples
enfermedades, entre las que se incluye necrosis tubular aguda, pielonefitis y Sd.
nefrtico.
Cilindros: Son aglomeraciones de protenas que se forman en los tbulos renales
(lo que les da la forma cilndrica). Tienen una matriz orgnica, compuesta
principalmente de las mucoprotenas Tamm-Horsfall. Hay muchos tipos, algunos de
ellos pueden verse en individuos sanos, mientras que otros pueden ser diagnstico
de enfermedad renal.
Cilindros hialinos: No son indicadores de enfermedad, y se observan en personas
post ejercicio, fiebre, deshidratacin, uso de diurticos y mtodos de contraste. Se
observan poco refringentes, de bordes rectilneos, y extremos redondeados.
Cilindros hemticos: Estn formados por eritrocitos o restos de ellos. Son
diagnsticos de glomerulonefritis aguda o vasculitis.
Cilindros de glbulos blancos: Se forman por leucocitos principalmente. Se originan
en enfermedades tbulo-intersticiales o pielonefritis aguda. Pueden verse en
alteraciones glomerulares tambin.
Cilindros de clulas epiteliales: Se asocian a necrosis tubular aguda y
glomerulonefritis aguda en los cuales se descaman las clulas epiteliales de los
tbulos renales.
Cilindros grasos: Generalmente son cilindros de clulas epiteliales que en sus
citoplasmas poseen gotas de colesterol o colesterol ester, o se pueden ver libres en
la orina. Se observan en varias glomerulopatas, especialmente en Sd. nefrtico.
Cilindros granulosos: Son cilindros de protenas agregadas o de clulas antiguas
que se han desintegrado. Se ven principalmente en necrosis tubular aguda.
Cilindros creos: Son la ltima etapa de degeneracin de los cilindros granulosos, y
de observa en nefrones con flujo muy disminuido, por lo que se asocian a
insuficiencia renal avanzada.
Cristales: En general la presencia de cristales en la orina reviste poca importancia
clnica. Aunque en abundancia permanente pueden sugerir presencia de clculos
renales, para la identificacin exacta de los cristales es importante conocer el pH,
esto es til para la separacin preliminar. El hecho que se formen cristales en la
orina dependen de muchos factores, como el grado de sobresaturacin de sus
constituyentes, pH, la presencia de inhibidores de cristalizacin, etc. Hay muchos
tipos de cristales que pueden ser observados en pacientes con distintas
alteraciones:
Cristales de cido-rico: se observan solo en orinas cidas, que favorece la
conversin de sales ricas relativamente solubles en cido rico que es insoluble.
Tienen forma romboidea o de rosetas, y se ven en pacientes con gota, o con
nefropata aguda y crnica por uratos.
44

Cristales de fosfato de calcio u oxalato de calcio: la formacin de los cristales de


oxalato de calcio no depende del pH de la orina, en cambio los de fosfato de calcio
se forman en orina alcalina. Su formacin es idioptica y se asocia a variados
factores de riesgo, como son bajo volumen urinario, hipercalciuria, hiperuricosuria,
factores dietticos como baja ingesta de lquidos y calcio, alta ingesta de sal y
protenas, y antecedentes de clculos de calcio, entre otros.
Cristales de fosfato de magnesio: cuando aumenta el pH de la orina (en infecciones
de bacterias que producen ureasa como Klebsiella o Proteus) disminuye la
solubilidad del fosfato lo que causa la cristalizacin del fosfato de magnesio.
Levaduras: Los elementos levaduriformes indican una moniliasis urinaria
especialmente en pacientes con diabetes mellitus.
Parsitos: Usualmente Trichomona vaginalis causando vaginitis.
Bacterias (bacteriuria): La orina normal no contiene, si se utiliz la tcnica
adecuada para obtener la muestra y si se protegi de una contaminacin; la
presencia de cantidades importantes (bacteriuria) indica infeccin del tracto urinario.
Proteinuria: Indica Nefropatas (glomerulonefritis aguda o crnica, rin poliqustico,
insuficiencia renal aguda o crnica).
Eritrocitos (hematuria): La presencia de ms de eritrocitos (hematuria) puede
indicar enfermedad renal, tambin se pueden encontrar despus del ejercicio
exagerado, del paso de clculos, o por contaminacin menstrual. Se puede observar
orina de color cef-rojiza sin la presencia de eritrocitos, como es en el caso de
hemoglobinuria y mioglobinuria. La hematuria microscpica se define como la
presencia de ms de 5 eritrocitos por campo microscpico de gran aumento. Se
puede originar en cualquier segmento del tracto urinario. Cuando se presenta con
dolor son causadas por nefrolitiasis, infarto renal o ITU. Se presentan en forma sin
dolor si son por coagulopatas, tumores (en cualquier parte del tracto), enfermedad
poliqustica, enfermedades glomerulares o tubulares, dao post traumtico, post
ejercicio, entre otras. Por todas estas causas es que el significado de hematuria
aislada vara segn el contexto clnico. La evaluacin de las formas de los eritrocitos
puede ayudar en un paciente con hematuria. Generalmente en enfermedades
glomerulares adquieren forma dismrfica, con prdida segmentaria de la membrana
celular resultando en variadas formas celulares y en una disminucin del tamao
celular.
Hematuria: Traumatismo de rin o aparato urinario, enfermedades hemorrgicas,
tratamiento con anticoagulantes, esfuerzo excesivo
Glucosuria: Diabetes mellitus, sndrome de Cushing, hipertensin intercraneal
Cetonuria, Diabetes mellitus, inanicin, diarrea, vmito.
Bilirrubinuria: Obstruccin de flujo biliar (clculos en coldoco y carcinoma en
pncreas), fibrosis, inflamacin peritoneal, tumefaccin de los hepatocitos, hepattis
vrica aguda y colestasis por frmacos.
Sd. Nefrtico: orina en escasa cantidad, densidad alta o normal, proteinuria mayor
de 3.5 gramos, cilindros escasos, aunque pueden ser de tipo hialino, granuloso o
graso, lipiduria y glucosuria discreta.
Sd. Nefrtico: orina en escasa cantidad, densidad normal-alta, proteinuria leve
(menor a 3.5 g/24 horas), cilindros hemticos, hematuria macro o microscpica.
Infeccin (ITU): aspecto turbio y mal oliente, leucocitos urinarios, placas de pus y
bacteriuria. El origen alto o bajo de la infeccin estar dado por la clnica, aunque la
presencia de cilindros leucocitarios indica que la infeccin compromete el
parnquima renal. La presencia de nitritos indica un origen bacteriano.
Diabetes Mellitus: orina en gran cantidad, con densidad elevada, de color normal o
ligeramente oscuro. Puede existir glucosuria. Se encuentra cetonuria en casos de
45

diabetes descompensada (generalmente tipo 1). Se encuentra microalbuminuria en


casos de nefropata inicial, y proteinuria si es ms avanzada.

6. CUESTIONARIO
1. Qu es la orina?
2. Describa la composicin qumica de la orina normal.
3. Defina cada uno de los trastornos siguientes: gota, glomerulonefritis, pielitis,
pielonefritis, cistitis, nefrosis, riones poliqusticos, insuficiencia renal e
infecciones de las vas urinarias.
4. Cmo puede influir en los resultados las siguiente condiciones:
- Muestra de orina recolectada en frasco no estril. Por ejemplo frascos
gerber, topers, botellas de refresco.
- Muestra de orina refrigerada por un lapso de 3-5 horas.
- Muestra de orina recolectada directamente del inodoro.
- Ingesta de medicamentos al momento de la recoleccin.
- Muestra de orina con residuos de semen y con la menstruacin.
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.

46

PRACTICA No.
9
ALUMNO

TEMA (O UNIDAD)
ELECTROLITOS

FECHA

OBJETIVO: Conocer la importancia de los electrolitos en el organismo y los mtodos


empleados para cuantificarlos.
1. INTRODUCCION
De todas las sustancias disueltas en los distintos compartimientos corporales, los
iones libres (electrolitos), contribuyen de forma decisiva al mantenimiento de la
composicin del medio interno (homeostasis), regulando la osmolaridad, el estado
de hidratacin y el pH del mismo.
Los electrolitos son sustancias que se disocian en iones cuando se disuelven en la
sangre. Los que poseen carga positiva se denominan cationes y los que tienen
carga negativa, aniones. Fuera de la clula los electrolitos ms importantes son:
sodio (catin ms abundante), cloruro (anin ms numeroso), calcio y bicarbonato.
Los principales electrolitos intracelulares son: potasio (catin ms abundante),
magnesio y fosfato (anin que se encuentra en mayor proporcin).
El organismo funciona adecuadamente slo si los riones y pulmones, con la
participacin de hormonas, conservan el equilibrio de electrolitos entre los
compartimientos intra y extracelular. Los riones pueden intercambiar hidrgeno por
sodio o potasio, y absorber o excretar iones de bicarbonato o de cloruro para
conservar el pH adecuado. Adems, las concentraciones sricas de electrolitos
influyen en la entrada y salida de lquidos de los compartimentos corporales.
En condiciones normales, existe un estado de neutralidad elctrica, de manera que
todo aumento en un determinado anin, va acompaado de la disminucin de otro, o
de un aumento en uno o ms cationes. El mantenimiento del equilibrio hidroelectroltico, depende sobre todo, del equilibrio entre ingresos y prdidas. Agua y
electrolitos ingresan normalmente en el organismo con la comida y la bebida y son
excretados con la orina, las heces, el sudor y el aire expirado.
Por su gran accesibilidad, el suero, es el fluido biolgico de eleccin para evaluar
aniones y cationes del organismo. Las determinaciones de electrolitos se pueden
hacer empleando tcnicas colorimtricas o bien empleando fotometra de llama (muy
empleado en las determinaciones de sodio y potasio).
El principio que sirve de base a la fotometra de llama implica la excitacin de los
electrones de un tomo por la energa trmica de una llama. Los electrones, al
resultar inestables en este estado excitado, ceden su exceso de energa al ambiente
al pasar de un estado de mayor energa (excitado) al de menor. Si la energa se
disipa en forma de luz, sta puede constar de uno o ms niveles de energa y, por
tanto, poseer diferentes longitudes de onda o lneas de espectro, que resultan
individualmente caractersticas para cada elemento. Los metales alcalinos son
relativamente fciles de excitar en la llama de un mechero del laboratorio. En una
llama, el litio produce un color rojo, el sodio un color amarillo, el potasio un color
violeta y el magnesio un color azul. En condiciones constantes y controladas, la
intensidad luminosa de la onda tpicamente producida por cada uno de los tomos
resulta directamente proporcional al nmero de tomos que emiten energa lo cual a
su vez es directamente proporcional a la concentracin del electrolito en la muestra.
47

2. EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS


EQUIPO Y MATERIALES
cantidad
Descripcin
cantidad
1
Gradilla
1

Jeringa de 5 ml

1
1
1

Torundero
Ligadura
Aguja de doble filo para tubo al
vaco
Tubos de ensaye de 13 x 100
Tubo al vaco tapn rojo
Pipetas pasteur
Bulbo gotero
Pipeta de vidrio graduada de
1.0 ml
Pipeta de vidrio graduada de
5.0 ml
Guantes de latex
Centrfuga
Incubadora
Espectrofotmetro

6
1
1
1
5
5
1
1
1
1

REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial para
determinacin de electrolitos:
Na, Cl, K, Ca y P.
1
Equipo comercial de
estndares de electrolitos:
Na, Cl, K, Ca y P.
1
Suero control
100 ml. Agua destilada
MATERIAL BIOLOGICO

cantidad
2 ml
Suero

Descripcin

3. PROCEDIMIENTO
1. Indicar al paciente que debe de tener un ayuno de 8 horas.
2. Tomar una muestra de sangre y procesarla para obtener suero. (como se
ndica en la prctica No.2). Separar el suero y pasarlo a un tubo limpio y seco.
3. Para cada determinacin, preparar una serie de tubos rotulados: blanco,
estandar y muestra problema. Para la cuantificacin de los electrolitos se
deben seguir los procedimientos indicados por el profesor, ya que las
cantidades de muestra y reactivos a emplear, varan dependiendo de la
marca de los reactivos.
4. Con las pipetas adicionar en cada tubo la cantidad indicada (X) de: agua
destilada, solucin estndar y suero problema. A continuacin, adicionar la
cantidad de reactivo (Y) indicada para cada determinacin, como se muestra
a continuacin:
Tubo 1
Tubo2
Tubo3
Agua destilada
X ml
_____
_____
Solucin estndar
_____
X ml
_____
Suero del paciente _____
_____
X ml
Reactivos
Y ml
Y ml
Y ml
indicados
Nota: todos los tubos debern contener el mismo volumen final = X + Y.
5. Mezclar cada tubo, como lo indique el profesor.
6. Seguir las condiciones de incubacin indicadas.
7. Conectar y poner en marcha el espectrofotmetro.
48

8. Elegir la longitud de onda de acuerdo a la determinacin que se vaya a


realizar.
9. Calibrar el espectrofotmetro a cero de absorbancia. Esto se hace empelando
el contenido del tubo 1.
10. Realizar las lecturas de los tubos 2 y 3, anotando las absorbancias de cada
uno.
11. Realizar por triplicado las lecturas.
12. Terminadas las lecturas, verificar que no quede ninguna celda dentro del
espectrofotmetro, apagar el equipo y revisar que no queden celdas sucias.
13. Realizar los clculos correspondientes para obtener la concentracin de
glucosa en la muestra.
Notas
1. Para evitar la contaminacin de las soluciones reactivas, se recomienda vaciar
en otro recipiente la cantidad requerida para uso.
2. Preparar siempre un blanco y patrn para tener una lectura confiable.
3. Tener en cuenta los valores de linearidad en caso de obtener valores
incrementados.

4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:
ELECTROLITO

Edad:______.
RESULTADO

VALORES DE
REFERENCIA

SODIO
CLORO
POTASIO
CALCIO
FOSFORO
Mtodo:

Observaciones:

49

5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia

ANALITO

Sodio

1.6 2.6 mg/dl

Cloro

98 109 mmol/l

Potasio

3.6 5.5 mmol/l

Calcio

8.5 10.5 mg/dl

Fsforo

1.6 5.6 mg/dl

Absorbancia del
estndar
1

Absorbancia de
la muestra
problema
1
2
3

Clculos
estadsticos
M

D.E C.V. %E

Sodio
Cloro
Potasio
Calcio
Fsforo

Clculos:

Interpretacin de Resultados
Hiponatremia. Concentracin anormalmente baja de sodio en sangre. Se
caracteriza por debilidad muscular, dolores de cabeza, hipotensin taquicardia y
choque circulatorio.
Hipocalemia. Dficit de potasio en sangre, puede derivarse de vmito, diarrea,
ingestin excesiva de sodio, neuropatas y uso de algunos diurticos.
Hipocloremia. Dficit de cloro en sangre, suele derivarse de vmito excesivo,
deshidratacin y uso de ciertos diurticos.
50

Hipomagnesemia. Concentracin subnormal de magnesio en sangre. Abarca


aumento de irritabilidad neuromuscular y del SNC originando temblores, tetania y
posibles convulsiones.
Hipermagnesemia. Concentracin excesiva de magnesio en sangre. Se acompaa
de depresin del sistema nervioso, coma e hipotensin.

6. CUESTIONARIO
1. Defina los conceptos de sustancia no electroltica y electrolito. Indique ejemplos
especficos de cada una.
2. Cmo se expresa la concentracin de iones en un lquido?
3. Calcule la concentracin inica de sodio en un lquido corporal.
4. Indique el mecanismo de regulacin de los electrolitos.
5. Defina el concepto de edema. Cules son algunas de sus causas?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.

51

PRACTICA No.
10
ALUMNO

TEMA (O UNIDAD)
ENZIMAS

FECHA

OBJETIVO: Conocer la importancia de las enzimas de inters clnico en el


organismo.
1. INTRODUCCION
Las enzimas, son protenas especializadas que catalizan innumerables reacciones
bioqumicas necesarias para conservar a las clulas vivas y con sus funciones. Los
diferentes tipos de clulas del organismo, producen enzimas distintas, y casi todos
los tejidos contienen sustancias de muy diversa ndole de esta categora.
Cuando los tejidos sufren lesin por enfermedad o por algn defecto, liberan
enzimas especficas en la corriente sangunea, sitio en el que pueden detectarse
fcilmente. Por ejemplo, en caso de infarto al miocardio, hepatitis infecciosa y otras
enfermedades, la salida de enzimas desde las clulas en trance de muerte es la
causa de su incremento en suero. El nivel de una sola enzima en el suero,
posiblemente no identifique el sitio de origen, pero la comparacin de los niveles de
varias enzimas puede aportar datos diagnsticos significativos. Algunas
enfermedades que producen sntomas semejantes ocasionan anormalidades
perfectamente discernibles en algunas enzimas, razn por la cual la determinacin
de stas ltimas puede ser til en el diagnstico diferencial.
En la determinacin de enzimas, es sumamente importante el procesamiento
adecuado de las muestras, a fin de garantizar la integridad de la estructura proteica.
En general no se determina la concentracin de las enzimas en los tejidos, sino su
actividad. El motivo es que la concentracin de las enzimas en el suero (muestra
biolgica ms comnmente usada) es baja. Sin embargo, dada su elevada
capacidad cataltica, es posible determinar su actividad con fiabilidad y, se
presupone que, por lo general, la actividad es proporcional a la concentracin.
Para determinar la actividad de las enzimas es necesario conocer: La
estequiometra de la reaccin que cataliza, si necesita o no cofactor, la
concentracin mnima se sustrato y cofactor para alcanzar la mxima velocidad de
reaccin, las condiciones ptimas de reaccin (pH, tiempo de incubacin, procesado
de la muestra y los reactivos, temperatura) y las caractersticas de la tcnica
analtica. La actividad enzimtica se puede determinar analizando: la aparicin de
algn producto, la desaparicin del sustrato y la variacin del cofactor o de algn
componente de la reaccin en el transcurso de la misma.
Existen enzimas que aparecen en formas mltiples (isoenzimas) difiriendo en
detalles moleculares, pero sin perder su identidad bsica. Algunos rganos o tejidos
contienen cantidades mayores o menores de una isoenzima en vez de otra, razn
por la que la determinacin de las isoenzimas aporta mayor informacin, que medir
todo un grupo enzimtico.
Las isoenzimas pueden ser separadas y cuantificadas por mtodos de
laboratorio como electroforesis, cromatografa en columna, termoestabilidad,
alteraciones del sustrato y empleo de inhibidores. Las tcnicas aprovechan algunas
de las propiedades fisicoqumicas de la molcula de la isoenzima.
Dentro de las enzimas de inters diagnstico se encuentran: la aspartato
aminotransferasa (ASAT), alanino amino transferasa (ALAT), gama glutamil
52

transpeptidasa, alfa-amilasa, lipasa, fosfatasa alcalina, fosfatasa cida, lactato


deshidrogenasa (LDH) y cratin fosfocinasa (CPK), las dos ltimas con sus
respectivas isoenzimas.
2. EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPO Y MATERIALES
cantidad
Descripcin
cantidad
1
Gradilla
1
1

Jeringa de 5 ml

Torundero

Ligadura

10

Tubos de ensaye de 13 x 100

1
1
1
5

Tubo al vaco tapn rojo


Pipetas pasteur
Bulbo gotero
Pipeta de vidrio graduada de
1.0 ml
Pipeta de vidrio graduada de
5.0 ml
Guantes de latex
Centrfuga
Incubadora
Espectrofotmetro

1
1
1
1

REACTIVOS
Descripcin
Equipo comercial para
determinacin de TGO.
Equipo comercial para
determinacin de TGP.
Equipo comercial para
determinacin de FA.
Equipo comercial para
determinacin de TGG
Equipo comercial para
determinacin de LDH
Estandar de TGO
Estandar de TGP
Estandar de FA
Estandar de TGG

Estandar de LDH

5
1
1
1
1

100 ml.

Agua destilada
MATERIAL BIOLOGICO
cantidad
Descripcin
2 ml
Suero

3. PROCEDIMIENTO
1. Indicar al paciente que debe de tener un ayuno de 8 horas.
2. Tomar una muestra de sangre y procesarla para obtener suero. (como se ndica
en la prctica No.2). Separar el suero y pasarlo a un tubo limpio y seco.
3. Para cada determinacin, preparar una serie de tubos rotulados: blanco,
estandar y muestra problema. Para la cuantificacin de los enzimas se deben
seguir los procedimientos indicados por el profesor, ya que las cantidades de
muestra y reactivos a emplear, varan dependiendo de la marca de los
reactivos.
4. Con las pipetas adicionar en cada tubo la cantidad indicada (X) de: agua
destilada, solucin estndar y suero problema. A continuacin, adicionar la
cantidad de reactivo (Y) indicada para cada determinacin, como se muestra a
continuacin:
Tubo 1
X ml
_____
_____
Y ml

5.

Tubo2
_____
X ml
_____
Y ml

Tubo3
_____
_____
X ml
Y ml

Agua destilada
Solucin estndar
Suero del paciente
Reactivos
indicados
Nota: todos los tubos debern contener el mismo volumen final = X + Y.
Mezclar cada tubo, como lo indique el profesor.
53

6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.

Seguir las condiciones de incubacin indicadas.


Conectar y poner en marcha el espectrofotmetro.
Elegir la longitud de onda de acuerdo a la determinacin que se vaya a realizar.
Calibrar el espectrofotmetro a cero de absorbancia. Esto se hace empelando el
contenido del tubo 1.
Realizar las lecturas de los tubos 2 y 3, anotando las absorbancias de cada uno.
Realizar por triplicado las lecturas.
Terminadas las lecturas, verificar que no quede ninguna celda dentro del
espectrofotmetro, apagar el equipo y revisar que no queden celdas sucias.
Realizar los clculos correspondientes para obtener la concentracin de glucosa
en la muestra.

Notas
1. Para evitar la contaminacin de las soluciones reactivas, se recomienda vaciar
en otro recipiente la cantidad requerida para uso.
2. Preparar siempre un blanco y patrn para tener una lectura confiable.
3. Tener en cuenta los valores de linearidad en caso de obtener valores
incrementados.

4. RESULTADOS
Nombre:
Fecha de toma:
Fecha de anlisis:
Analito:
ENZIMA

Edad:______.

RESULTADO

VALORES DE
REFERENCIA

TGO
TGP
FA
TGG
LDH

Mtodo:

Observaciones:

54

5. PROCESAMIENTO DE DATOS
Valores de referencia
ASAT: 12- 37 U / L (37C)
ALAT: 12 - 31 U / L (37C)
Fosfatasa alcalina: 0 138 U / L (37c)
LDH: 90 187 U/L (38C)
TGG: HOMBRES 5 32 U/L (37C)
MUJERES 9 52 U/L (37C)

ANALITO

Absorbancia del
estndar
1

Absorbancia de
la muestra
problema
1
2
3

Clculos
estadsticos
M

D.E C.V. %E

TGO
TGP
FA
TGG
LDH
Clculos:

6. CUESTIONARIO
1. A qu se debe el aumento de la concentracin de las enzimas en el plasma?
2. Cul es la finalidad de las pruebas de funcionamiento heptico?
3. Qu enzimas al aumentar indican dao celular heptico?
4. Qu enzimas al aumentar indican obstruccin del sistema biliar?
5. Buscar la clasificacin de las enzimas sricas segn su utilidad clnica
6. En qu unidades se expresa la actividad enzimtica?
7. REPORTE TCNICO
a)- MARCO TERICO.
b)- DESCRIPCIN BREVE DE LOS MTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
c)- RESULTADOS
d)-DISCUSIN DE RESULTADOS.
e)- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
f)- BIBLIOGRAFA.

55

MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO


El trabajo en cualquier laboratorio siempre implica un cierto grado de riesgo
para la salud. Los principales riesgos a los que se expone el personal que trabaja en
el laboratorio son: Incendio y explosin, infecciones, salpicadura de productos
corrosivos, irradiacin, inhalacin de vapores txicos, exposicin a agentes
cancergenos, cortaduras y pinchazos.
Existen reactivos y disolventes que son inflamables, corrosivos, teratognicos
o carcinognicos, de manera que se deben manipular con precaucin. En todos los
laboratorios se desechan residuos txicos, cuya eliminacin se debe realizar por
cauces que reduzcan su peligrosidad, para el operador, la poblacin en general y el
ambiente.
Una de las maneras de minimizar los riesgos en el laboratorio, es establecer
en el personal hbitos higinicos y seguros en su quehacer diario as como
mantener una actitud de alerta y celo en la prctica de laboratorio para evitar los
riesgos hacia uno mismo y hacia los dems. Sin normas especficas en el trabajo de
laboratorio, se adquieren malos hbitos o vicios en la manipulacin de muestras y
reactivos, que luego son muy difciles de corregir y que aumentan el riesgo al que se
expone el individuo y el resto del personal del laboratorio o incluso el resto de la
poblacin, cuando la mala prctica afecta el desecho de residuos.
Por lo anterior, resulta de gran importancia ser responsable y exigir el
cumplimiento de algunas normas bsicas dentro del laboratorio de anlisis clnicos:
1. Debe usarse bata blanca de manga larga (de algodn) y cambirsela con
frecuencia.
2. Las superficies de trabajo deben limpiarse y desinfectarse diariamente, al inicio y
al final de la jornada de trabajo.
3. Se debe evitar inhalar, ingerir o tener contacto directo con los reactivos.
4. Esta prohibido pipetear con la boca, debiendo usar pipeteadores manuales o
automticos y tener cuidado de no dejar reactivos destapados o mal cerrados.
5. Los procedimientos que entraen riesgo de salpicadura deben realizarse en
cabinas de seguridad.
6. Se pondr especial cuidado en el material punzo cortante, el cual deber ser
desechado en contenedores especiales.
7. Todos las muestras biolgicas se consideran infecciosas y para su manipulacin
se requiere el uso obligatorio de guantes de ltex; protegindose en especial de
cortes y rozaduras. Si se llegase a tener contacto con las muestras, se deben
lavar las manos y superficies expuestas, con jabn desinfectante y agua
abundante.
8. Esta prohibido fumar, comer o beber dentro del laboratorio.
9. No se permite cambiarse o ponerse lentes de contacto en el laboratorio.
10. El vaciado de muestras biolgicas debe realizarse con pipetas Pasteur u otro tipo
de pipeta.
11. Los residuos deben descontaminarse antes de su desecho.
12. Se debe desechar el material que ha estado en contacto con muestras
infecciosas. En caso de re usarlo, debe lavarse cuidadosamente. Una infeccin
no se confirma de forma inmediata, por tanto, las medidas de prevencin deben
de ser estrictas y exigir su riguroso cumplimiento.
Procedimientos de aseo.
Siguiendo un esquema por escrito, se debe descontaminar todo el equipo y
superficies de trabajo con un germicida como por ejemplo cloro diluido al 10%:
56

1.
2.
3.
4.

Despus de finalizar los procedimientos especificados.


Cuando las superficies estn ostensiblemente contaminadas.
Inmediatamente despus del derrame de cualquier material
potencialmente infecciosos.
Al final de cada turno de trabajo.

Deben instruirse los procedimientos de limpieza rutinarios para el manejo de


recipientes de basura y otros envases. La cristalera rota que puede estar
contaminada se maneja usando medios mecnicos para desecharlos en forma
apropiada.
Los derrames de material biolgico se descontaminan tan pronto como sea
posible con material absorbente como toallas de papel o gasas, inundando el rea
contaminado con cloro o frotndola con una toalla humedecida en cloro y limpiando
entonces con gasas o toallas limpias. Todos los artculos contaminados son
colocados en bolsas para materiales de riesgo biolgico y desechados de acuerdo a
los lineamientos del laboratorio. La limpieza de derrames requiere del uso de equipo
de proteccin personal.
Disposicin de desechos
Los desechos mdicos regulados (desechos infecciosos) deben ser eliminados de
acuerdo con las regulaciones locales y estatales. Los materiales contaminados
deben ser clasificados al momento de uso en categoras tales como objetos con
agujas y otros objetos filosos. Los recipientes deben ser a prueba de fugas y
cerrados cuando el contenido llegue a de su capacidad. Cualquier desecho de
riesgo biolgico que se desinfecta por medio de la autoclave est exento de estas
regulaciones, y puede ser eliminado por los procesos estndar. Hay ahora varios
sistemas disponibles para el tratamiento de desechos que los reduce a un producto
irreconocible; estos incluyen procesos de pulverizacin o alto calentamiento. La
legalidad de los mismos esta determinada por cada estado.
Referencia:
United States department of health and Human services: Recommendations
for prevention of HIV transmisin in health care setting, morbidity, Mortality Weekly
Report 56(25), Aug 21, 1987.
Norma Oficial Mxicana 878 (NOM 0878 Ecol.)

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