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Microbiologia
Ambiental
APRESENTAO
com satisfao que a Unisa Digital oferece a voc, aluno(a), esta apostila de Microbiologia Ambiental, parte integrante de um conjunto de materiais de pesquisa voltado ao aprendizado dinmico e autnomo que a educao a distncia exige. O principal objetivo desta apostila propiciar aos(s) alunos(as)
uma apresentao do contedo bsico da disciplina.
A Unisa Digital oferece outras formas de solidificar seu aprendizado, por meio de recursos multidisciplinares, como chats, fruns, aulas web, material de apoio e e-mail.
Para enriquecer o seu aprendizado, voc ainda pode contar com a Biblioteca Virtual: www.unisa.br,
a Biblioteca Central da Unisa, juntamente s bibliotecas setoriais, que fornecem acervo digital e impresso,
bem como acesso a redes de informao e documentao.
Nesse contexto, os recursos disponveis e necessrios para apoi-lo(a) no seu estudo so o suplemento que a Unisa Digital oferece, tornando seu aprendizado eficiente e prazeroso, concorrendo para
uma formao completa, na qual o contedo aprendido influencia sua vida profissional e pessoal.
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Unisa Digital
SUMRIO
INTRODUO................................................................................................................................................ 5
1 INTRODUO MICROBIOLOGIA............................................................................................. 7
1.1 Patgenos Procariontes e Eucariontes.....................................................................................................................7
1.2 Bactrias Tpicas e Atpicas............................................................................................................................................8
1.3 Nomenclatura....................................................................................................................................................................9
1.4 Microrganismos Procariticos e Eucariticos.....................................................................................................10
1.5 Principais Grupos de Microrganismos...................................................................................................................11
1.6 Resumo do Captulo.....................................................................................................................................................13
1.7 Atividades Propostas....................................................................................................................................................14
INTRODUO
Caro(a) aluno(a),
Iniciaremos aqui o estudo da microbiologia. Entendemos por microbiologia o estudo dos microrganismos, que correspondem a um grande grupo de seres vivos que vivem como clulas nicas ou agrupadas. Com exceo dos vrus, todos os microrganismos possuem estrutura celular, podendo ser encontrados em todos os ambientes dos ecossistemas e estar associados com organismos multicelulares.
Habitam o corpo humano de indivduos saudveis de forma benigna (por exemplo, a flora intestinal). Os
que so prejudiciais aos seres humanos produzem compostos txicos ou causam uma infeco direta,
sendo denominados patgenos.
Voc sabia que, apesar de acreditarmos que as bactrias so perigosas, elas tm uma grande importncia em nosso ecossistema? Algumas bactrias so fixadoras de nitrognio e devolvem esse importante elemento qumico ao solo. Muitas so utilizadas em processos para fabricao de alimentos
e bebidas, por meio de um processo denominado fermentao, contedo que ser estudado ao longo
desta apostila.
Voc aprender diferenciar as principais caractersticas dos seres procariontes e eucariontes, bem
como sua morfologia e estrutura, a evoluo dos seres vivos, os reinos existentes e os principais grupos
de microrganismos bactrias, algas, fungos e protozorios. Os vrus no so considerados seres vivos,
mas tambm sero estudados.
Classificaremos os seres vivos em relao ao seu tipo de nutrio e estudaremos as caractersticas
de um microrganismo e as tcnicas existentes para podermos cultiv-lo. Tambm importante abordarmos os fatores que interferem no crescimento microbiolgico. Abordaremos, ainda, as organelas citoplasmticas dos microrganismos e suas principais funes para entendermos o metabolismo desses
importantes seres vivos. Entenderemos por que existem vrios tipos de meio de cultura e qual devemos escolher para determinada situao. Por fim, saberemos como os microrganismos se reproduzem
e como fazem para obter energia suficiente para realizar suas funes vitais por meio dos processos de
respirao celular e fermentao.
Desejamos bons estudos e esperamos que aproveite ao mximo este material preparado com muita dedicao!
INTRODUO MICROBIOLOGIA
Caro(a) aluno(a),
Apresentaremos a seguir o conceito de microbiologia. Para que estud-la e compreender
melhor os microrganismos? Aproveite os seus
estudos, dedique-se o quanto for possvel e bom
aproveitamento!
Entendemos por microbiologia o estudo
dos microrganismos, que correspondem a um
grande grupo de seres vivos que vivem como
Fonte: profpaulosr.dynip.sapo.pt.
As bactrias tpicas so aquelas que apresentam formas que podem ser definidas como
bacilos, esferas ou espirais. Praticamente todas as
bactrias apresentam uma parede celular ao redor da membrana plasmtica, com exceo dos
micoplasmas. Por meio da parede celular, podemos classificar as bactrias como gram-positivas
e gram-negativas. A maioria das bactrias se multiplica por fisso binria, mas algumas podem
trocar informao gentica por meio dos plasmdeos, incluindo a informao para obter resistncia a determinado antibitico. Entre as bactrias
atpicas, encontramos o Mycoplasma, a Chlamydia e a Rickettsia. Apesar de serem procariontes,
no apresentam estruturas caractersticas ou metabolismos que os incluam nas bactrias tpicas.
Fungos
So organismos eucariontes no fotossintetizantes e geralmente saprofticos. Alguns so
apenas filamentos, sendo chamados bolores. Outros so unicelulares, sendo chamados leveduras.
Sua reproduo pode ser assexuada, sexuada ou
ambas e todos os fungos produzem esporos. As
doenas causadas por eles podem ser superficiais
(como micoses cutneas) ou profundas (micoses
profundas).
Algas
So organismos eucariontes, uni ou pluricelulares e fotossintetizantes. Podem viver em gua
doce ou marinha. Algumas apresentam parede
celular e outras no.
Protozorios
So eucariontes, unicelulares e no fotossintetizantes. Apresentam seres com vrias for-
Microbiologia Ambiental
1.3 Nomenclatura
Os microrganismos so classificados de
acordo com a taxonomia hierrquica, ou seja, reino, filo, classe, ordem, famlia, gnero e espcie. A primeira letra do nome do gnero sempre
escrita com letra maiscula e o nome da espcie
sempre se inicia com letra minscula. Os nomes
so grifados quando manuscritos ou itlicos
quando digitados.
Fonte: http://www.biomedicinapadrao.com/2012/02/classificacao-de-microrganismos.html.
Saiba mais
O reino protista foi proposto por Charles Darwin
e por Ernst H. Haeckel, um importante zoologista
alemo, pois, quando Linnaeus classificou os seres
vivos, adotou somente dois reinos: o plantae e o
animalia.
Com a descoberta do microscpio e o avano da microscopia eletrnica, muitos passos foram dados no estudo da microbiologia. Por volta
de 1940, descobriu-se que clulas poderiam ou
no apresentar seu material gentico envolvido
por uma membrana nuclear. As bactrias no
apresentam um envoltrio em seu material gentico e so chamadas clulas procariticas. Outras
clulas, como algas, fungos, protozorios, clulas
vegetais e animais, apresentam um envoltrio
nuclear e so denominadas clulas eucariticas.
Robert H. Whittaker, em 1969, props a classificao dos reinos dos seres vivos com base no
tipo de processo nutricional que o organismo utiliza em sua alimentao:
fotossntese: processo pelo qual a luz
fornece energia para converter o dixido de carbono
em gua e acares;
Nos reinos plantae (plantas verdes que realizam fotossntese e algas superiores), animalia
(animais que ingerem alimentos) e fungi (organismos que apresentam parede celular, mas no
clorofila, de modo que absorvem os alimentos),
esto os organismos eucariticos superiores.
Figura 2 Reinos.
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Microbiologia Ambiental
Fonte: http://proflilianem3.no.comunidades.net/index.php?pagina=1216861926.
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Microbiologia Ambiental
Ateno
Atualmente, sabemos que um ancestral comum originou as arqueobactrias, as eubactrias (que so os procariticos) e os eucariticos.
Caro(a) aluno(a),
Entendemos por microbiologia o estudo dos microrganismos, que correspondem a um grande
grupo de seres vivos que vivem como clulas nicas ou agrupadas. Com exceo dos vrus, todos os
microrganismos possuem estrutura celular, podendo ser encontrados em todos os ambientes dos ecossistemas e estar associados com organismos multicelulares. Habitam o corpo humano de indivduos saudveis de forma benigna (por exemplo, a flora intestinal). Os que so prejudiciais aos seres humanos
produzem compostos txicos ou causam uma infeco direta, sendo denominados patgenos.
Os microrganismos procariontes so classificados como bactrias e os eucariontes so os fungos,
as algas e os protozorios. Os vrus no so considerados seres vivos por no apresentarem clula, mas
estudaremos alguns de seus conceitos por causarem doenas nos seres humanos.
Os procariontes so divididos em dois grupos: eubactrias, em que encontramos todas as bactrias de importncia clnica, e arqueobactrias, em que encontramos alguns organismos evolutivamente
distintos.
As bactrias tpicas so aquelas que apresentam formas que podem ser definidas como bacilos,
esferas ou espirais.
Os fungos so organismos eucariontes no fotossintetizantes e geralmente saprofticos. Alguns
so apenas filamentos, sendo chamados bolores. Outros so unicelulares, sendo chamados leveduras
e algas. As algas so organismos eucariontes, uni ou pluricelulares e fotossintetizantes. Podem viver em
gua doce ou marinha. Algumas apresentam parede celular e outras no.
Os protozorios so eucariontes, unicelulares e no fotossintetizantes. Apresentam seres com vrias formas e tamanhos. Podem estar em vida livre ou ser parasitas de seres humanos, infectando seus
principais tecidos e rgos, sendo encontrados intra ou extracelular nas regies urogenital e intestinal. A
infeco por esse parasita ocorre por meio da ingesto de sua forma infectante ou por picada de inseto.
Os vrus so seres que no possuem estrutura celular, sendo parasitas celulares obrigatrios. Eles
so formados por uma molcula de DNA ou RNA envolvida por uma capa proteica. Tambm podem
apresentar um envelope originado da membrana plasmtica da clula hospedeira da qual foram liberados. Contm informaes genticas capazes de direcionar sua prpria replicao, mas no possuem as
organelas e maquinarias enzimticas que a fazem; devido a isso, escravizam as clulas hospedeiras para
sua replicao.
Os microrganismos so classificados de acordo com a taxonomia hierrquica, ou seja, reino, filo,
classe, ordem, famlia, gnero e espcie. A primeira letra do nome do gnero sempre escrita com le-
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tra maiscula e o nome da espcie sempre se inicia com letra minscula. Os nomes so grifados quando
manuscritos ou itlicos quando digitados.
Robert H. Whittaker, em 1969, props a classificao dos reinos dos seres vivos com base no tipo de
processo nutricional que o organismo utiliza em sua alimentao:
fotossntese: processo pelo qual a luz fornece energia para converter o dixido de carbono em
gua e acares;
absoro: captao de nutrientes qumicos dissolvidos em gua;
ingesto: entrada de partculas de alimentos no dissolvidas.
O reino monera formado por seres procariticos e, at recentemente, era considerado o reino
mais primitivo. Pela teoria da evoluo das espcies, acreditava-se que esse reino era o ancestral dos
eucariticos. Normalmente, esses seres obtm seus nutrientes por meio da absoro. Nesse reino, encontramos as arqueobactrias e as eubactrias.
O reino protista representado pelos seres eucariticos e unicelulares e possui os trs tipos nutricionais: as algas fazem fotossntese, os protozorios ingerem o seu alimento e os fungos inferiores (fungos limosos) nutrem-se por meio da absoro dos alimentos.
Nos reinos plantae (plantas verdes que realizam fotossntese e algas superiores), animalia (animais
que ingerem alimentos) e fungi (organismos que apresentam parede celular, mas no apresentam clorofila, de modo que absorvem os alimentos), esto os organismos eucariticos superiores.
Nesse raciocnio, os microrganismos foram classificados em trs dos cinco reinos: monera (bactrias), protista (protozorios e algas microscpicas) e fungi (fungos microscpicos, leveduras e bolores).
Atualmente, sabemos que um ancestral comum originou as arqueobactrias, eubactrias (que
so os procariticos) e eucariticos e que existem cinco reinos de classificao dos seres vivos: monera,
protista, fungi, plantae e animalia. Os principais grupos de microrganismos so as bactrias, as algas, os
fungos e os protozorios. Os vrus no apresentam clulas, mas causam importantes doenas nos seres
humanos e tambm devem ser estudados nesta apostila.
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CARACTERIZAO DOS
MICRORGANISMOS
Caro(a) aluno(a),
Para determinarmos as caractersticas de
um microrganismo, ele deve estar em cultura
pura. Entendemos por cultura pura um determinado espao no qual est presente um microrganismo e/ou outros originados por meio de sua reproduo. Esse conceito diferente do de cultura
mista, que um determinado espao ou ambiente ocupado por espcies diferentes.
Conseguimos, em laboratrios, cultivar microrganismos em material nutriente, denominado meio de cultura. Os meios de cultura podem
Fonte: www.fotonblog.com.
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tcnica de semeadura em superfcie: com o auxlio de uma ala de vidro, o inculo espalhado
na superfcie do gar;
Figura 5 Tcnica de semeadura em superfcie.
Fonte: www.biomedicinapadrao.com.
mtodo de pour plate: consiste na mistura do inculo em um gar fundido que tenha sido resfriado a 45 C e distribudo posteriormente em placas de Petri esterilizadas.
Figura 6 Mtodo de pour plate.
Fonte: www.vida-microscopica.blogspot.com.
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Microbiologia Ambiental
caractersticas metablicas: uma grande variedade de reaes qumicas ocorre no interior dos microrganismos, onde
molculas pequenas e simples podem
se transformar em grandes e complexas ou o contrrio. Esse processo conhecido como metabolismo. Por meio
de vrios testes laboratoriais, podemos
Unisa | Educao a Distncia | www.unisa.br
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Fonte: http://juliasarabioifes.wordpress.com.
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Microbiologia Ambiental
Fonte: http://magicnumbers-parussolo.blogspot.com.br.
espirilos: so bactrias que apresentam suas formas em estilo saca-rolha, espiral ou helicoidal.
Figura 9 Espirilos.
Fonte: http://es.wikipedia.org.
Arranjo
As diferentes espcies de bactria podem
se agrupar de algumas formas. Vejamos:
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Fonte: http://html.rincondelvago.com.
Fonte: http://thaisemoniquebioifes.wordpress.com.
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Microbiologia Ambiental
Figura 12 Ttrades.
Fonte: http://www.oocities.org.
Figura 13 Srcinas.
Fonte: http://www.microbiologiaja.blogspot.com.br.
Fonte: http://microdidatica.wordpress.com.
Fonte: http://wwwdiversidadevirtual22.blogspot.com.br.
Ateno
As bactrias so seres procariticos, sendo a sua
maioria unicelular e de forma simples.
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e refrativa (brilha muito com a luz do microscpio) e so muito resistentes s mudanas do meio
ambiente. A sua resistncia ao calor tem sido um
grande desafio aos microbiologistas. Acredita-se
que um processo de desidratao ocorrido durante a esporulao pode favorecer essa resistncia. Alm disso, a presena de cido dipicolnico
(DPA) tambm pode estar relacionada ao favorecimento dessa resistncia.
Os cistos so outro tipo de forma latente semelhante aos endsporos, mas no apresentam
alta resistncia ao calor, podendo ser mais facilmente eliminados por processos como a fervura.
Fonte: http://confece.blogspot.com.br/2010/09/vez-da-levedura.html.
bolores: multicelulares que aparecem como filamentos. Seu corpo ou talo consiste em um miclio e seus esporos latentes. O miclio formado por uma massa de filamentos denominada
hifa, formada por muitas clulas e apresentando uma parede rgida constituda por quitina,
celulose e glicana. As hifas podem ser classificadas como cenocticas, no possuindo septos
originadas por invaginao da parede celular e formando um longo filamento , ou como
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Microbiologia Ambiental
septadas, apresentando um septo que divide os filamentos em clulas diferentes com ncleo;
cada filamento com ncleo gera um novo organismo. Elas tambm podem ser de dois tipos:
rizoides, que necessitam absorver o alimento dos locais onde ficam penetradas (como pes
ou solo), ou reprodutivas, que crescem em contato com o ar para disseminar os esporos que
produzem. H tambm as hifas sem funo especializada, chamadas vegetativas, e aquelas
que se organizam em grandes estruturas para formar os fungos maiores, como cogumelo e
orelha-de-pau.
Figura 17 Bolores.
Fonte: http://www.not1.xpg.com.br/bolor-o-que-e-especie-de-fungo-fotos-e-caracteristicas/.
Alguns fungos patognicos podem apresentar dimorfismo, ora sendo leveduras, ora sendo bolores, dependendo de onde esto presentes.
Morfologia dos Eucariticos Algas
Apresentam grande variedade de tamanho
e forma. Podemos encontrar organismos unicelulares vistos apenas por meio do microscpio,
como tambm multicelulares com vrios metros
de comprimento. Os unicelulares podem ser bastonetes, esfricos, em forma de clavas ou fusiformes. Algumas algas podem se mover. O grau de
diversidade das algas em relao variedade de
forma muito grande. Podem ser encontradas
em colnias e em simples agregados de clulas
individuais, bem como podem ser de clulas com
tipos especializados.
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Esporos
Os fungos produzem dois tipos de esporo:
os sexuados e os assexuados. Os sexuados so
produzidos pelo encontro de gametas e geram
uma clula fertilizada. So em menor nmero do
que os assexuados e auxiliam na identificao da
espcie e classificao dos fungos. Os assexuados
so produzidos pelas hifas areas, sem o encontro
de gametas. Tm como funo a disseminao da
espcie. Geralmente, so brancos quando formados e depois adquirem uma colorao especfica
de sua espcie.
Fonte: http://www.jornallivre.com.br/179240/tudo-sobre-a-entamoeba-coli.html.
Os cistos de reproduo no apresentam
as mesmas condies de resistncia dos cistos de
proteo e no sofrem influncia ambiental para
seu desenvolvimento.
Figura 18 Esporos.
Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/Protozo%C3%A1rio.
Cistos
A maioria dos protozorios produz cistos.
H dois tipos: os cistos de proteo e os cistos de
reproduo. Os protozorios apresentam uma
forma vegetativa denominada trofozota, que
produz os cistos protetores, os quais oferecem
proteo contra dessecamento, ausncia de oxignio e alimento e acidez presente no estmago
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Microbiologia Ambiental
Caro(a) aluno(a),
Para determinarmos as caractersticas de um microrganismo, ele deve estar em cultura pura. Entendemos por cultura pura um determinado espao onde est presente um microrganismo e/ou outros
originados por meio de sua reproduo. Esse conceito diferente do de cultura mista, que um determinado espao ou ambiente ocupado por vrias espcies.
Conseguimos, em laboratrios, cultivar microrganismos em material nutriente, denominado meio
de cultura. Os meios de cultura podem ser preparados pelo prprio laboratrio por meio de ps desidratados ou ser comprados prontos. H diversos tipos de meio de cultura e sua escolha depende de muitos
fatores, como a espcie que o microbiologista espera cultivar, a origem do material que ser analisado,
suas necessidades nutricionais, entre outros. O gar um exemplo de nutriente para meio de cultura,
mas existem outros base de sangue e at mesmo bile.
Aps a inoculao do microrganismo em determinado meio de cultura, ele se multiplica e produz
um grande nmero de clulas, que, juntas, formam uma colnia. Elas podem ser vistas a olho nu e cada
colnia gerada de um nico ancestral.
Para caracterizar os microrganismos, existem variadas tcnicas laboratoriais, desde uma simples
microscopia at tcnicas mais complexas, como a anlise do material gentico. Veja:
caractersticas morfolgicas;
caractersticas nutricionais e culturais;
caractersticas metablicas;
caractersticas antignicas;
caractersticas patognicas;
caractersticas genticas.
Morfologia e Estrutura de Procariticos e Eucariticos
Morfologia dos procariticos bactrias
Tamanho: so invisveis a olho nu. Utilizamos, geralmente, a medida em micrmetros (m), que
so equivalentes a 10 mm. O tamanho varia de acordo com as espcies, mas a mdia considerada
de 0,5 a 1 m em dimetro ou largura. Considerando a medida de 1 m, 10 mil bactrias colocadas uma
ao lado da outra resultariam em apenas 1 cm. Em relao ao peso, estima-se que cerca de 1 trilho de
bactrias pesariam apenas 1 g. Quando comparamos a rea de uma clula bacteriana com o seu volume
(rea x volume), encontramos um resultado muito alto dessa relao. Isso garante uma chance maior de
absoro dos nutrientes, sendo responsvel pelo seu alto metabolismo e pelo rpido crescimento da
clula. Uma bactria pode sofrer uma diviso celular a cada 20 minutos.
Forma: as bactrias encontradas individualmente apresentam uma das trs seguintes formas: cocos, bacilos ou espirilos.
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Microbiologia Ambiental
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ESTRUTURAS DE PROCARITICOS E
EUCARITICOS
Caro(a) aluno(a),
Nas bactrias, podemos encontrar as seguintes organelas ou estruturas: flagelos, pelos,
glicoclice, parede celular, membrana plasmtica,
ribossomos e material gentico. J nas clulas eucariticas, podemos encontrar mais estruturas ou
organelas, por serem mais complexas: flagelos,
clios, parede celular, membrana citoplasmtica,
ncleo, Retculo Endoplasmtico (RE), complexo
de Golgi, mitocndria e cloroplastos. Vejamos as
estruturas e suas devidas funes.
Fonte: http://www.sobiologia.com.br/conteudos/Corpo/Celula.
php.
Permeabilidade celular
Membrana Plasmtica
Toda clula viva revestida por uma pelcula muito fina que isola as organelas do ambiente
externo. Essa camada tem cerca de 5 nm de espessura e recebe o nome de membrana celular.
A membrana celular formada por duas camadas de fosfolipdios, com molculas de protenas
espalhadas entre elas. Tanto a camada dupla de
fosfolipdios quanto as protenas movem-se sem
perder a estrutura de formao.
Endocitose e exocitose
Existem dois processos conhecidos de endocitose: a fagocitose e a pinocitose. A fagocitose ocorre quando uma clula captura uma
partcula geralmente grande por meio de invaginaes da membrana plasmtica. A pinocitose
um processo em que ocorre o englobamento de
lquido ou pequenas partculas.
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Citosol
Organelas do citosol
RE
uma rede de bolsas e tubos membranosos
presente nas clulas eucariontes e que preenche
grande parte do citosol. o local onde a maioria
dos componentes da membrana celular sintetizada. Ele pode ser de dois tipos: Retculo Endoplasmtico Liso (REL) ou no granuloso e Retculo
Endoplasmtico Rugoso (RER) ou granuloso.
Figura 21 RE.
Fonte: http://sorasoraia.blogspot.com.br/2012/03/reticulo-endoplasmatico-o-que-e-o.html.
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Microbiologia Ambiental
Fonte: http://doencasgenicas.blogspot.com.br/2008/02/organelo-celular-complexo-de-golgi.html.
Lisossomos
Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/Mitoc%C3%B4ndria.
Plastos
So organelas presentes apenas em clulas
de algas e plantas. Apresentam trs tipos bsicos:
leucoplastos (incolores), cloroplastos (verdes) e
cromoplastos (vermelhos ou amarelos).
Citoesqueleto
Mitocndrias
Vistas ao microscpio eletrnico, lembram
a forma de um verme. Esto presentes na maioria das clulas eucariontes e seu nmero na c-
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tubalina, podendo tambm conter queratina, actina e miosina. Tem variadas funes:
a) define a forma celular e organiza a sua
estrutura interna;
Pelos ou fmbrias
Fonte: http://www.sobiologia.com.br/conteudos/Citologia/
cito24.php.
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Microbiologia Ambiental
Figura 25 Quimiotrficos.
Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/Anexo:Taxonomia_do_
dom%C3%ADnio_Archaea.
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quimio-heterotrficos: aqueles que utilizam substncias orgnicas como fonte de energia e compostos orgnicos
como principal fonte de carbono;
fotoautotrficos: aqueles que utilizam
luz solar como fonte de energia e dixido de carbono como principal fonte de
carbono;
foto-heterotrficos: aqueles que utilizam luz como fonte de energia e compostos orgnicos como principal fonte
de carbono.
Fonte: http://www.portaleducacao.com.br/Artigo/Imprimir/15542.
Fonte: http://www.splabor.com.br/blog/estufa-de-cultura-bacteriologica/meios-de-cultura-o-que-e-um-meio-de-cultura/.
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Microbiologia Ambiental
Para o cultivo e rotina no laboratrio e tambm para o estudo de microrganismos heterotrficos, utilizam-se meios de cultura complexos, que
so obtidos a partir de produtos naturais. Estes
so quimicamente indefinidos, mas conseguem
simular ou at mesmo melhorar o ambiente de
crescimento desses seres vivos.
Normalmente, a substncia escolhida para
o crescimento de microrganismos em meio solidificado o gar, um polissacardeo extrado das
algas marinhas. Tambm existem os meios de cultura comerciais que permitem o crescimento de
vrios microrganismos ou somente de um especfico. Eles tambm podem indicar a mudana de
pH ou induzir a produo de endsporos ou cpsulas. Tudo ir depender de qual meio de cultura
foi escolhido.
Saiba mais
A maioria das bactrias pode ser cultivada em
laboratrio, utilizando meios de cultura.
Diferentes espcies de bactria apresentam uma
grande variedade quanto s exigncias mnimas
nutricionais.
Fonte: http://scienceblogs.com.br/meiodecultura/tag/meio-de-cultura/.
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Figura 29 Protozorio.
Fonte: http://entendendoumpoucodeciencias.blogspot.com.
br/2011/04/sesi-7-ano-protozoarios-e-algas.html.
Fonte: http://scienceblogs.com.br/meiodecultura/2012/05/
microrganismo-de-sexta-volvox/.
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Microbiologia Ambiental
pr-fabricados e fornecidos de forma desidratada. Para utiliz-los, fundamental a pesagem criteriosa da quantidade necessria ao volume desejado, seguida de dissoluo e esterilizao.
Os meios de cultura podem ser lquidos ou
caldos que promovem o crescimento indiscriminado com turvao do meio. Tambm podem ser
slidos, favorecendo o crescimento de colnias
isoladas, sendo muito utilizados para culturas puras. H tambm os semisslidos, que apresentam
uma menor adio de gar, o que favorece a mobilidade bacteriana.
Caro(a) aluno(a),
Nas bactrias, podemos encontrar as seguintes organelas ou estruturas: flagelos, pelos, glicoclice,
parede celular, membrana plasmtica, ribossomos e material gentico. J nas clulas eucariticas, podemos encontrar mais estruturas ou organelas, por serem mais complexas: flagelos, clios, parede celular,
membrana citoplasmtica, ncleo, RE, complexo de Golgi, mitocndria e cloroplastos. Vejamos as estruturas e suas devidas funes.
Membrana Plasmtica
Toda clula viva revestida por uma pelcula muito fina que isola as organelas do ambiente externo. Essa camada tem cerca de 5 nm de espessura e recebe o nome de membrana celular. A membrana
celular formada por duas camadas de fosfolipdios, com molculas de protenas espalhadas entre elas.
Tanto a camada dupla de fosfolipdios quanto as protenas movem-se sem perder a estrutura de formao.
A membrana plasmtica pode apresentar alguns envoltrios externos: o glicoclice e a parede celulsica.
Permeabilidade celular
Algumas substncias podem atravessar a membrana com facilidade, enquanto outras podem ter
a sua passagem bloqueada. Essa capacidade da membrana de selecionar a passagem de substncias
chamada permeabilidade seletiva ou semipermeabilidade.
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Endocitose e exocitose
Existem dois processos conhecidos de endocitose: a fagocitose e a pinocitose. A fagocitose ocorre quando uma clula captura uma partcula geralmente grande por meio de invaginaes da membrana plasmtica. A pinocitose um processo em que ocorre o englobamento de lquido ou pequenas
partculas.
A exocitose a capacidade que a clula tem de eliminar substncias previamente armazenadas em
bolsas citoplasmticas.
Citosol
Aps atravessar a membrana plasmtica, deparamo-nos com um gel aquoso, um fluido viscoso
que inicialmente recebeu o nome de citoplasma.
Organelas do citosol
RE
uma rede de bolsas e tubos membranosos presente nas clulas eucariontes e que preenche grande parte do citosol. Ele pode ser de dois tipos: REL ou no granuloso e RER ou granuloso.
Aparelho de Golgi, complexo golgiense ou complexo de Golgi
Este componente formado por 6 a 20 sacos membranosos achatados, empilhados uns sobre os
outros. Sua funo receber bolsas vindas do RER, contendo protenas.
Lisossomos
So bolsas que contm enzimas digestivas capazes de digerir vrias substncias. Eles podem agir
de duas maneiras:
a) por meio da digesto de substncias capturadas do meio externo celular por fagocitose ou
pinocitose;
b) por meio da digesto de algumas partes desgastadas da prpria clula.
Peroxissomos
So pequenas vesculas envolvidas por membranas que contm em seu interior diversos tipos de
oxidase. Sua principal funo na clula a oxidao dos cidos graxos, os quais sero utilizados para a
sntese do colesterol e de outros importantes componentes. Tambm participam do processo de respirao celular, o qual gera energia celular.
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Microbiologia Ambiental
Mitocndrias
Esto presentes na maioria das clulas eucariontes e seu nmero na clula varia de dezenas a centenas, dependendo da funo celular. As mitocndrias so organelas que contm seu prprio DNA e se
reproduzem dividindo-se em duas. Por meio da oxidao de molculas de alimentos, a mitocndria produz ATP, que fornece energia para a maioria das atividades celulares. Como nesse processo h consumo
de oxignio e liberao de dixido de carbono, ele ficou conhecido como respirao celular.
Plastos
So organelas presentes apenas em clulas de algas e plantas. Apresentam trs tipos bsicos: leucoplastos (incolores), cloroplastos (verdes) e cromoplastos (vermelhos ou amarelos).
Citoesqueleto
Presente apenas nas clulas eucariontes, uma estrutura dinmica localizada no citosol, constituda por tubos finssimos, chamados microtbulos, e filamentos proteicos da molcula tubalina, podendo tambm conter queratina, actina e miosina. Tem variadas funes:
a) define a forma celular e organiza a sua estrutura interna;
b) permite a adeso celular clula vizinha e a superfcies extracelulares;
c) permite o deslocamento de substncias intracelulares.
Clios, flagelos e centrolo
Centrolo um cilindro formado por nove conjuntos de trs microtbulos que so unidos por protenas adesivas. Exceto os fungos e as plantas, a maioria das clulas apresenta essa organela.
Clios e flagelos so estruturas com filamentos mveis originados a partir dos centrolos que migram para a periferia celular. Os flagelos geralmente so longos e poucos e desempenham um movimento de ondulao. Os clios so curtos e numerosos e desempenham um movimento de chicote. Sua
principal funo a movimentao celular.
Pelos ou fmbrias
Esto presentes principalmente em bactrias gram-negativas. Um dos pelos conhecido como F
e est relacionado com a reproduo sexual bacteriana. Outro tipo de pelo j estudado o que auxilia
a bactria a se fixar em algumas clulas superficiais que sero infectadas, como as geniturinrias, as do
trato respiratrio e as intestinais.
Os microrganismos so muito versteis e exigentes em relao sua nutrio. Alguns podem crescer com apenas algumas substncias orgnicas, enquanto outros necessitam de compostos orgnicos
mais complexos. Apesar dessa diferena, os organismos vivos compartilham uma necessidade nutricional em comum: carbono, nitrognio e gua.
39
O carbono um dos elementos qumicos mais importantes para o crescimento de bactrias e todos os organismos requerem carbono de alguma forma. O nitrognio tambm importante para o crescimento de microrganismos. Ele parte essencial dos aminocidos que formam as protenas. Algumas
bactrias fixam o nitrognio atmosfrico para a sntese celular, processo chamado fixao de nitrognio. Outras podem utilizar compostos nitrogenados orgnicos ou inorgnicos. Tambm so importantes
o hidrognio, o oxignio, o enxofre e o fsforo.
H duas classificaes bsicas:
quimiotrficos: aqueles que utilizam compostos qumicos para obter energia;.
fototrficos: aqueles que dependem primariamente da energia solar.
Com base nesses conceitos, temos algumas classes:
quimioautotrficos: so os organismos que utilizam substncias inorgnicas como fonte de
energia e dixido de carbono como principal fonte de carbono;
quimio-heterotrficos: aqueles que utilizam substncias orgnicas como fonte de energia e
compostos orgnicos como principal fonte de carbono;
fotoautotrficos: aqueles que utilizam luz solar como fonte de energia e dixido de carbono
como principal fonte de carbono;
foto-heterotrficos: aqueles que utilizam luz como fonte de energia e compostos orgnicos
como principal fonte de carbono.
Algumas espcies so versteis em relao sua necessidade nutricional e no podem, portanto,
ser classificadas como uma das possibilidades anteriores.
O cultivo de microrganismos importante para o estudo de suas particularidades, como velocidade de crescimento e identificao de espcie. Para isso, precisamos de meios de cultura adequados, que
so preparaes de nutrientes que favorecem o crescimento em laboratrios. Alguns podem crescer in
vitro, ou seja, em meios artificiais em laboratrio, e outros, in vivo ou em um hospedeiro vivo.
Entendemos por meios de cultura os conjuntos de substncias formuladas de maneira adequada
que so capazes de promover o crescimento de microrganismos em condies de laboratrio.
Geralmente, os meios de cultura escolhidos para o crescimento bacteriano so aqueles que se assemelham ao seu habitat. Se a bactria utilizar glicose, esta poder ser adicionada ao meio. Se necessitar de
nitrognio ou carbono, estes podero ser adicionados tambm. Existem, ainda, as bactrias fastidiosas,
que so aquelas que exigem cerca de 20 aminocidos e vrias vitaminas para crescer. Para elas, utilizamos os meios complexos, os quais contm uma grande variedade de substncias orgnicas preparadas
a partir de substncias naturais.
Os fungos absorvem os nutrientes do meio. Todos eles so heterotrficos. Em laboratrio, muitos
podem crescer em uma simples mistura contendo acar, nitrognio (orgnico ou inorgnico) e alguns
minerais, sendo que alguns poucos fungos necessitam da presena de algumas vitaminas. Por outro
lado, outros fungos s conseguem crescer em um meio complexo, que contenha uma boa variedade de
compostos orgnicos.
Para o crescimento de protozorios, necessitamos do ajuste de pH, que oscila entre 6 e 8. Por serem
heterotrficos aerbios, possuem exigncias nutricionais complexas e muito variadas entre as diferentes
espcies.
40
Microbiologia Ambiental
As algas utilizam luz para produzir energia e, portanto, necessitam somente de dixido de carbono,
gua e alguns ons inorgnicos solveis para o seu crescimento em um meio de cultura. Algumas algas,
como a euglena, so capazes de crescer na ausncia de luz solar, tornando-se heterotrficas, necessitando, assim, de uma pequena quantidade de substratos.
Existem alguns meios de cultura que chamamos especiais. So eles: meio de enriquecimento, meio
de transporte, meio seletivo, meio diferencial e meio indicador.
muito importante a escolha do meio de cultura ideal. Ela est condicionada flora patognica
desse local. Em geral, usado mais de um tipo de meio, com o objetivo de fornecer condies de crescimento a todos os patgenos que possam estar presentes no local de onde foi realizada a coleta.
Os meios de cultura podem ser lquidos ou caldos que promovem o crescimento indiscriminado
com turvao do meio. Tambm podem ser slidos, favorecendo o crescimento de colnias isoladas, sendo muito utilizados para culturas puras. H tambm os semisslidos, que apresentam uma menor adio
de gar, o que favorece a mobilidade bacteriana.
41
Caro(a) aluno(a),
Neste captulo, iremos entender por que
o cultivo de microrganismos muito importante para o estudo da microbiologia. Somente por
meio dele conseguimos fazer os microrganismos
viveis e crescerem para posterior estudo.
Em microbiologia, entendemos por crescimento o aumento do nmero de clulas e no
o aumento do tamanho celular. Muitos so os
fatores que podem interferir no crescimento de
microrganismos. As quatro principais condies
fsicas so temperatura, atmosfera gasosa, pH e
presso osmtica. Para obtermos sucesso em um
cultivo de microrganismos, alm da condio fsica ideal, necessria uma combinao de nutrientes apropriados.
Temperatura
Uma srie de reaes qumicas que ocorrem nos microrganismos sofre ao da temperatura; logo, entendemos por que este fator tem
uma grande importncia no seu cultivo.
Taxa de crescimento o nmero de divises celulares ocorridas por hora.
H trs tipos de temperatura para o crescimento microbiano: mnima, tima e mxima. Elas
so conhecidas como temperaturas cardinais e
podem variar dependendo do ciclo de vida da
espcie. Se a taxa de crescimento de uma determinada espcie de microrganismo rpida, dizemos que conseguimos obter a temperatura tima de crescimento.
43
microrganismos microaerfilos: so
aqueles que podem utilizar oxignio
nas reaes qumicas ocorridas em seu
interior para obter energia. No entanto,
ao contrrio dos aerbios, eles no resistem a nveis de oxignio de 21% presentes na atmosfera e crescem melhor
em nveis que variam entre 1 e 15%.
Esse fato est relacionado aos radicais
perxido e perxido de hidrognio que
so originados nas culturas de microrganismos incubadas em condies de
anaerobiose.
Atmosfera Gasosa
Para o crescimento ideal dos microrganismos, necessria a presena de quantidades
variadas de gases, como oxignio, dixido de
carbono, nitrognio e metano. Alguns gases so
essenciais para o crescimento, assim como outros
podem ser letais. O dixido de carbono e o oxignio so os principais gases que afetam diretamente o crescimento de clulas microbianas.
Podemos classificar os microrganismos em
quatro grupos em relao ao oxignio gasoso:
microrganismos aerbios: so assim
classificados os microrganismos que requerem oxignio para o seu crescimento e podem crescer em uma atmosfera
padro de 21% de oxignio, sendo denominados aerbios;
microrganismos facultativos: so aqueles que conseguem crescer na presena
do ar atmosfrico e tambm so capazes de crescer em anaerobiose. Eles
no requerem oxignio, mas podem
utiliz-lo para produo de energia em
reaes qumicas. Em condies anaerbias, eles obtm energia por meio de
um processo denominado fermentao;
microrganismos anaerbios: so aqueles que podem morrer na presena de
oxignio, no podem crescer na presena dele e no o utilizam para a produo de energia. Alguns anaerbios at
conseguem suportar pequenas quantidades de oxignio, mas os anaerbios
44
pH
O pH timo para o crescimento dos microrganismos baseado no valor mdio da variao
de pH em que o crescimento ocorrer. So realizadas medies que aceleram ou retardam o crescimento em relao aos diferentes valores de pH
e calculada uma mdia de pH ideal para o desenvolvimento de cada espcie de microrganismo.
Para crescer bem em um meio cido ou bsico, um microrganismo deve conseguir manter
o seu pH intracelular em torno de 7,5, independentemente do valor do pH externo. Uma clula
viva possui recursos prprios para manter seu pH
interno constante pela expulso ou absoro de
ons de hidrognio pela clula. Dessa forma, o pH
do meio externo tem que sofrer mudanas drsticas antes que o pH interno da clula seja afetado.
H uma extensa variao de pH na natureza
e tambm h microrganismos espalhados por todos os lugares. Conclumos que as diferentes espcies de microrganismo apresentam diferentes
tolerncias de pH e, por isso, podem se adaptar
a diversos habitats. So exemplos de pH de microrganismos: para a maioria da bactrias, a valor
mnimo est em torno de 4 e o mximo, em torno
de 9; os bolores e as leveduras apresentam uma
Microbiologia Ambiental
presso hidrosttica: aquela exercida nas clulas pelo peso da gua que
permanece em sua superfcie. Os microrganismos que crescem no fundo
dos oceanos tm a presso hidrosttica
exercida sobre eles e, se no for criado
um ambiente semelhante em laboratrio, seu crescimento no ser possvel.
Eles morrem em um meio com baixa
presso hidrosttica, pois possuem vesculas de gs que se expandem na descompresso, rompendo a clula. Os microrganismos dependentes de presso
so denominados barfilos.
A reproduo uma caracterstica presente em todos os seres vivos. ela quem define a
vida, sendo fundamental para a manuteno da
espcie. Como j foi estudado, os seres vivos s
surgem a partir de outros seres vivos iguais a
eles por meio da reproduo. A reproduo est
relacionada com a capacidade mpar do DNA de
se duplicar. Quem comanda e coordena todo o
Reproduo assexuada
Os seres vivos que surgem por reproduo
assexuada so geneticamente idnticos entre si.
Esses indivduos s tero patrimnio gentico
diferente se sofrerem algum tipo de mutao gnica, ou seja, se ocorrer alterao nas sequncias
de bases nitrogenadas de uma ou mais molculas
de DNA. Vrios seres vivos se reproduzem assexuadamente e tambm existem vrios tipos de
reproduo assexuada.
45
DNA e de todas as outras substncias e estruturas da clula. Est subdividida em trs perodos:
perodo G1: o perodo em que a clula est produzindo substncias. Ocorre
a produo de enzimas e tambm de
RNA. Neste perodo, a clula aumenta
de tamanho;
perodo S: perodo em que ocorrem a
sntese e produo do DNA;
Fonte: www.fcnoticias.com.br.
46
Microbiologia Ambiental
Fonte: www.fcnoticias.com.br.
Reproduo sexuada
Neste tipo de reproduo, um novo indivduo formado pela fuso de duas clulas sexuais
diferentes, denominadas gametas. Essas clulas
so originadas de pais de sexos diferentes ou tipos de relao sexuada. Quando os gametas se
encontram e se fundem, temos a fertilizao. A
clula formada no encontro recebe o nome de zigoto. Ele formado pela mistura do material gentico dos dois gametas. O zigoto sofre mitoses e
se torna um novo organismo.
Como se formam os gametas? Os gametas
so formados por meio de um processo chamado
meiose. Eles so haploides; isso quer dizer que
contm somente um cromossomo de cada par
de cromossomos presente nas clulas somticas,
conhecidas como 1n. Por exemplo, em humanos,
o nmero diploide ou 2n 46 e a haploide ou 1n
23.
Meiose
leptteno: inicia-se a individualizao dos cromossomos, estabelecendo a condensao (espiralizao), com maior compactao dos
cromonemas;
47
48
Fonte: www.lookfordiagnosis.com.
Microbiologia Ambiental
avaliam o nmero de clulas e os mais sofisticados tambm conseguem avaliar o peso celular.
Algumas tcnicas determinam a quantidade dos
constituintes celulares, como RNA, DNA e protenas.
Pode-se obter o crescimento de microrganismos por meio da cultura contnua. O volume
da cultura e a concentrao de clulas so mantidos por meio da adio de meio estril fresco na
mesma proporo em que se remove o meio utilizado contendo os microrganismos. Nessas condies, a taxa em que as clulas so produzidas e
eliminadas mantm-se constante e em equilbrio.
Em um ambiente normal, os microrganismos crescem de acordo com as condies favorveis a cada um. As clulas no crescem todas ao
mesmo tempo. Contudo, em laboratrio, pode-se
obter o crescimento de todas as clulas ao mesmo tempo, a chamada cultura sincrnica. Essa
sincronizao no crescimento celular pode ser
obtida pela mudana de seu meio fsico ou da
composio qumica do meio em que se encontra. Esse tipo de crescimento importante, pois
permite o estudo do crescimento microbiano, a
organizao e a morfognese durante algumas
fases do ciclo de reproduo dos microrganismos.
A medida do crescimento de uma determinada populao obtida por vrias tcnicas, das
mais simples s mais sofisticadas. Esses mtodos
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49
Quando conhecemos as estruturas das clulas procariticas, podemos estudar as atividades que capacitam os microrganismos a se desenvolver. Os processos realizados para manter a
vida deles envolvem e necessitam de um grande
nmero de reaes bioqumicas, desde as mais
simples at as mais complexas.
A maioria dos processos bioqumicos que
ocorrem nas bactrias tambm ocorre nos microrganismos eucariticos e nas clulas dos organismos pluricelulares, inclusive nos seres humanos.
No entanto, existem reaes bioqumicas que so
exclusivas das bactrias, que as condicionam
realizao de reciclagens que o ser humano no
pode realizar. So exemplos: a digesto da celulose e a utilizao de petrleo como nutriente. Devido presena desse metabolismo, as bactrias
so capazes de reciclar alguns elementos depois
que outros organismos utilizaram-nos. Algumas
bactrias tambm podem utilizar elementos
inorgnicos para se desenvolver, como dixido
de carbono, enxofre, ferro e hidrognio.
Ateno
Existem reaes bioqumicas que so exclusivas
das bactrias, que as condicionam realizao
de reciclagens que o ser humano no pode realizar.
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Microbiologia Ambiental
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Microbiologia Ambiental
inibidores no competitivos: so
aqueles que no competem com
o substrato pelo stio ativo da enzima. Eles agem de outra maneira:
se ligam com outra parte da enzima, provocando a chamada inibio alostrica. Essa ligao causa
modificao da conformao do
stio ativo. Dessa forma, ele se torna
no funcional e tem a sua atividade
enzimtica reduzida. As interaes
alostricas tambm podem servir
para ativar uma enzima.
Todas as reaes que ocorrem nas vias catablicas concentram energia dentro das ligaes
do ATP. O ATP conhecido como a molcula que
possui ligaes de alta energia, mas, na realidade, o termo mais apropriado provavelmente seja
ligaes estveis. A energia contida nessas ligaes pode ser liberada de modo rpido e fcil,
apesar de no se encontrar em alta quantidade,
suprindo prontamente a clula para que ocorram
as reaes metablicas. Para compreender melhor esse assunto, vamos estudar os aspectos gerais da produo de energia: o conceito de oxidao-reduo e os mecanismos de gerao do ATP.
Reaes de Oxidao-Reduo
A oxidao a remoo de eltrons de um
tomo ou molcula. Essa reao muitas vezes
produz energia. A reduo quando a molcula recebe um ou mais eltrons. As reaes de
oxidao e reduo ocorrem simultaneamente.
Cada vez que uma substncia oxidada, outra
reduzida. O pareamento dessas reaes chaUnisa | Educao a Distncia | www.unisa.br
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Figura 34 Oxidao-reduo.
Fonte: www.mundodaquimica.com.br
Figura 35 Oxidao-reduo.
Fonte: www.quimicasemsegredos.com.
Formao de ATP
54
fosforilao oxidativa: uma via metablica que utiliza energia liberada pela
oxidao de nutrientes, de maneira a
produzir ATP. O processo refere-se
fosforilao do ADP em ATP, utilizando,
para isso, a energia liberada nas reaes
de oxidao-reduo;
fotofosforilao: este processo ocorre
somente nas clulas fotossintticas, ou
seja, aquelas que contm pigmentos
que absorvem a luz, como a clorofila.
Microbiologia Ambiental
Figura 36 Fosforilao.
Fonte: www.sobiologia.com.br.
55
Respirao aerbica
Existem dois tipos de respirao: a anaerbica e a aerbica. Na respirao aerbica, o microrganismo utiliza o oxignio para sua sobrevivncia e o aceptor final de eltrons o oxignio.
J na respirao anaerbica, o microrganismo
no utiliza o oxignio e pode ser morto pela sua
presena; o aceptor final de eltrons uma molcula inorgnica, no sendo o oxignio, ou ainda
mais raramente uma molcula orgnica.
Ciclo de Krebs
O ciclo de Krebs tambm conhecido como
ciclo dos cidos tricarboxlicos (TCA) ou ciclo do
cido ctrico. Entendemos por ciclo de Krebs o
processo em que ocorre uma srie de reaes
bioqumicas nas quais uma grande quantidade
de energia qumica armazenada na acetil-CoA e
liberada por etapas.
Fonte: http://aprendendobiologia.criaforum.com.
56
Microbiologia Ambiental
Respirao anaerbica
Neste processo, o aceptor final de eltrons
uma substncia inorgnica, que no seja o oxignio. Algumas bactrias realizam respirao anaerbica e utilizam nitrato e sulfato como aceptores
finais. Esse processo realizado por elas fundamental para os ciclos do nitrognio e do enxofre
que ocorrem na natureza.
Somente uma parte do ciclo de Krebs funciona em condies anaerbicas e nem todos os
carreadores da cadeia de transporte de eltrons
participam desse tipo de respirao. Devido a
isso, a produo final de ATP nunca to elevada quanto na respirao aerbica. Consequentemente, os microrganismos anaerbicos crescem
mais lentamente que os aerbicos.
57
Fonte: www.wikipedia.org.
58
Apesar de o processo de fermentao ocorrer na ausncia de oxignio, alguns microrganismos so capazes de realiz-lo mesmo na pre-
Microbiologia Ambiental
59
O crescimento de uma espcie bacteriana em cultura pode ser caracterizado em termos quantitativos. Para tal, deve-se levar em considerao o nmero de geraes que se desenvolvem em um determinado perodo de incubao, bem como o tempo de gerao e a taxa de crescimento (que corresponde ao
nmero de geraes por hora). Os valores obtidos nos informam sobre a natureza das espcies.
Tambm relacionada ao crescimento, pode-se obter a curva de crescimento de um microrganismo.
Se as clulas microbianas crescem em um frasco ou tubo contendo meio de cultura lquido, dizemos que
elas esto em um sistema fechado. Isso porque nenhum nutriente novo adicionado e nenhum produto
de excreo removido. A partir desse sistema, podemos obter a curva de crescimento em um sistema
fechado.
Pode-se obter o crescimento de microrganismos por meio da cultura contnua. O volume da cultura e a concentrao de clulas so mantidos por meio da adio de meio estril fresco na mesma proporo em que se remove o meio utilizado contendo os microrganismos. Nessas condies, a taxa em que as
clulas so produzidas e eliminadas mantm-se constante e em equilbrio.
Em um ambiente normal, os microrganismos crescem de acordo com as condies favorveis a cada
um. As clulas no crescem todas ao mesmo tempo. Contudo, em laboratrio, pode-se obter o crescimento de todas as clulas ao mesmo tempo, a chamada cultura sincrnica. Essa sincronizao no crescimento
celular pode ser obtida pela mudana de seu meio fsico ou da composio qumica do meio em que se
encontra. Esse tipo de crescimento importante, pois permite o estudo do crescimento microbiano, a organizao e a morfognese durante algumas fases do ciclo de reproduo dos microrganismos.
Quando conhecemos as estruturas das clulas procariticas, podemos estudar as atividades que capacitam os microrganismos a se desenvolver. Os processos realizados para manter a vida deles envolvem
e necessitam de um grande nmero de reaes bioqumicas, desde as mais simples at as mais complexas.
Esto citadas a seguir as principais importncias do estudo do metabolismo microbiano:
relao existente entre microrganismos e doenas;
funo dos microrganismos na natureza;
importncia econmica dos microrganismos;
controle e cultivo dos microrganismos;
estudo e desenvolvimento de mtodos para diagnstico dos microrganismos;
estudo e controle dos processos de deteriorao de materiais;
reciclagem da matria orgnica.
Definimos metabolismo como o conjunto de todas as reaes qumicas que ocorrem dentro de um
organismo vivo. Como as reaes qumicas liberam ou requerem energia, o metabolismo pode ser interpretado como um ato de balanceamento de energia. Ele pode ser dividido em duas classes de reaes
qumicas: as que liberam energia e as que necessitam de energia.
Geralmente, nas clulas vivas, as reaes qumicas que so reguladas por enzimas que liberam energia so aquelas envolvidas no catabolismo ( a quebra de compostos orgnicos complexos em compostos
mais simples). Essas reaes so geralmente reaes hidrolticas, ou seja, utilizam gua para a quebra das
ligaes qumicas, e exergnicas, produzindo mais energia do que consomem. Outro fator que interfere
na ocorrncia de uma reao qumica a chamada taxa de reao.
So denominados catalisadores todas as substncias que podem acelerar uma reao qumica sem
que ela seja alterada. Nas clulas, as enzimas tm funo de catalisadores biolgicos. Cada enzima atua
em uma substncia especfica. Elas so chamadas substratos da enzima e cada uma catalisa apenas uma
60
Microbiologia Ambiental
reao. Quando uma enzima atua no substrato, forma-se um complexo, o chamado complexo enzima-substrato. Ele permite que as colises sejam mais eficientes e diminui a energia de ativao necessria
para que haja uma reao. As enzimas geralmente tm sua nomenclatura terminada em ASE. Elas podem
ser agrupadas em seis classes. Esse critrio de agrupamento baseado no tipo de reao qumica que elas
realizam ou catalisam.
Algumas enzimas so formadas inteiramente por protenas e outras podem apresentar uma poro
proteica denominada apoenzima e uma poro no proteica chamada cofator, que pode ser formada
por ons de zinco, ferro, magnsio ou clcio. A grande maioria das coenzimas derivada de vitaminas.
As enzimas atuam nas reaes qumicas e conseguem diminuir sua energia de ativao.
Vrios fatores podem influenciar a atividade de uma enzima. Entre os mais importantes, podemos
destacar a temperatura, a concentrao do substrato, o pH e a ausncia ou presena de inibidores.
Todas as reaes que ocorrem nas vias catablicas concentram energia dentro das ligaes do ATP.
O ATP conhecido como a molcula que possui ligaes de alta energia, mas, na realidade, o termo mais
apropriado provavelmente seja ligaes estveis. A energia contida nessas ligaes pode ser liberada de
modo rpido e fcil, apesar de no se encontrar em alta quantidade, suprindo prontamente a clula para
que ocorram as reaes metablicas.
A oxidao a remoo de eltrons de um tomo ou molcula. Essa reao muitas vezes produz
energia. A reduo quando a molcula recebe um ou mais eltrons. As reaes de oxidao e reduo
ocorrem simultaneamente. Cada vez que uma substncia oxidada, outra reduzida.
A maior parte da energia liberada durante as reaes de oxidao-reduo permanece armazenada
no interior da clula para a formao de ATP. Para form-lo, um grupo fosfato adicionado ao difosfato de
adenosina (ADP), com uma entrada de energia. Esse processo de adio de fosfato a um composto qumico chamado fosforilao.
Grande parte dos microrganismos oxida os carboidratos para utiliz-los como fonte primria de
energia celular. Entendemos por catabolismo de carboidrato a quebra de suas molculas para produo
de energia, processo que de grande importncia para o metabolismo celular. Entre os carboidratos mais
comuns como fonte de energia para os microrganismos, podemos citar a glicose. Os microrganismos podem realizar dois processos para obter energia por meio desse carboidrato: a respirao celular e a fermentao. Ambos os processos tm incio com a gliclise. Aps, seguem vias diferentes. O processo de
respirao, utilizando a glicose para obter energia, ocorre em trs principais passos: a gliclise, o ciclo de
Krebs e a cadeia de transporte de eltrons NADH e FADH2, que sofre oxidao.
Aps a quebra da glicose em cido pirvico (tambm conhecido com piruvato), esse cido pode ser
utilizado tanto no processo de fermentao quanto no de respirao celular. Entendemos por respirao
celular o processo gerador de ATP. Nela, molculas so oxidadas e o aceptor final de eltrons geralmente
uma molcula inorgnica. Uma caracterstica da respirao a ao de uma cadeia de transporte de eltrons.
Existem dois tipos de respirao: a anaerbica e a aerbica. Na respirao aerbica, o microrganismo
utiliza o oxignio para sua sobrevivncia e o aceptor final de eltrons o oxignio. J na respirao anaerbica, o microrganismo no utiliza o oxignio e pode ser morto pela sua presena; o aceptor final de eltrons uma molcula inorgnica, no sendo o oxignio, ou ainda mais raramente uma molcula orgnica.
O ciclo de Krebs tambm conhecido como ciclo de TCA ou ciclo do cido ctrico. Entendemos por
ciclo de Krebs o processo em que ocorre uma srie de reaes bioqumicas nas quais uma grande quantidade de energia qumica armazenada na acetil-CoA e liberada por etapas.
No processo de respirao anaerbica, o aceptor final de eltrons uma substncia inorgnica, que
no seja o oxignio. Algumas bactrias realizam respirao anaerbica e utilizam nitrato e sulfato como
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aceptores finais. Esse processo realizado por elas fundamental para os ciclos do nitrognio e do enxofre
que ocorrem na natureza.
Somente uma parte do ciclo de Krebs funciona em condies anaerbicas e nem todos os carreadores da cadeia de transporte de eltrons participam desse tipo de respirao. Devido a isso, a produo
final de ATP nunca to elevada quanto na respirao aerbica. Consequentemente, os microrganismos
anaerbicos crescem mais lentamente que os aerbicos.
Apesar de mencionarmos somente a glicose como molcula utilizada para a produo de energia,
os microrganismos tambm oxidam lipdios e protenas para a mesma finalidade. Todas essas reaes que
ocorrem no interior de suas clulas esto relacionadas.
As gorduras so denominadas lipdios, que so formados por cidos graxos e glicerol. Os microrganismos produzem uma enzima chamada lipase, cuja funo quebrar a gordura em suas menores unidades. Aps a ao dessa enzima, o cido graxo e o glicerol so metabolizados separadamente.
As protenas tambm so importantes fontes de energia celular, porm so muito grandes. Para entrarem na clula, as enzimas proteases e peptidases quebram-nas em unidades menores, os aminocidos.
Somente nessa forma conseguem atravessar a membrana plasmtica.
Outro destino do cido pirvico gerado na gliclise participar do processo chamado fermentao,
sendo transformado em um produto orgnico. Afermentao um processo anaerbio de produo de
ATP, no qual no h o envolvimento da cadeia respiratria. Nesse processo, o aceptor final de hidrognio
um composto orgnico. um mecanismo muito importante na produo deenergiaem condies anaerbicas.
Asbactrias podem realizar tanto o processo de fermentao quanto arespirao anaerbica. Para
algumas bactrias anaerbias, a simples presena do gs oxignio pode ser letal. Isso faz com que esses
microrganismos habitem solos profundos e regies onde o teor de oxignio praticamente zero. Os organismos com essas condies de sobrevivncia so conhecidos como anaerbios estritos. Na fermentao,
o cido pirvico metabolizado em vrios compostos, de acordo com o tipo de fermentao. H alguns
tipos de fermentao: fermentao lctica, fermentao alcolica e fermentao heterocclica.
Apesar de o processo de fermentao ocorrer na ausncia de oxignio, alguns microrganismos so
capazes de realiz-lo mesmo na presena de grandes concentraes de oxignio. As leveduras so um
exemplo.
62
CAPTULO 1
1. Entendemos por microbiologia o estudo dos microrganismos. Estes correspondem a um grande grupo de seres vivos que vivem como clulas nicas ou agrupadas. Com exceo dos vrus,
todos os microrganismos possuem estrutura celular. Eles podem ser encontrados em todos os
ambientes dos ecossistemas e estar associados com organismos multicelulares. Habitam o corpo humano de indivduos saudveis de forma benigna (por exemplo, a flora intestinal).
2. Quadro comparativo:
Fonte: profpaulosr.dynip.sapo.pt.
63
mtodo de pour plate: consiste na mistura do inculo em um gar fundido que tenha sido
resfriado a 45 C e distribudo posteriormente em placas de Petri esterilizadas.
2. Por meio de vrias tcnicas laboratoriais, podemos caracterizar os microrganismos de algumas
formas:
caractersticas morfolgicas: o arranjo da clula, seu tamanho e sua forma podem ser identificados por meio de vrios tipos de microscpio e com vrios mtodos de colorao. Dessa forma, podem-se estudar as estruturas celulares internas e externas;
caractersticas nutricionais e culturais: cada espcie de microrganismo pode apresentar caractersticas particulares em relao ao seu modo de se nutrir e formar culturas. O estudo
sobre esses assuntos ajuda muito na sua identificao. Se soubermos com qual microrganismo estamos trabalhando, fica mais fcil agrup-los e classific-lo nos grupos taxonmicos;
caractersticas metablicas: uma grande variedade de reaes qumicas ocorre no interior
dos microrganismos, onde molculas pequenas e simples podem se transformar em grandes e complexas ou o contrrio. Esse processo conhecido como metabolismo. Por meio
de vrios testes laboratoriais, podemos determinar a atividade metablica de um microrganismo e, dessa forma, conseguimos identificar qual espcie ele pertence;
caractersticas antignicas: conhecemos como antgeno a substncia que, quando injetada
em um organismo animal, estimula a sntese de seus anticorpos. As bactrias apresentam
vrias estruturas fsicas em sua superfcie e estas podem ter ao como se fossem antgenos, quando, em testes laboratoriais, estimulam a produo de anticorpos, que podem
ser utilizados para determinar a presena de antgenos nicos, caracterizando, assim, uma
espcie;
caractersticas patognicas: patognicos como chamamos os microrganismos que causam doenas. Os que no causam so chamados no patognicos. O organismo infectado
pelo patgeno chamado hospedeiro. Precisamos identificar se o microrganismo trabalhado ou no um patgeno;
caractersticas genticas: atualmente, podemos contar com a anlise gentica dos microrganismos. Existem alguns testes, como a sonda de DNA, por exemplo, que so comercializados em forma de kits para fins de pesquisa e diagnstico. Uma fita de DNA do microrganismo conhecido misturada com a fita de um desconhecido. Caso eles sejam da mesma
espcie, as duas fitas se combinam. No mercado, h atualmente o kit para identificao da
Salmonella sp.
3. Podemos encontrar vrias formas de bactria. As que so encontradas individualmente apresentam uma das trs seguintes formas:
cocos: so clulas esfricas ou arredondadas, podendo ser ovoides ou achatadas em um
dos lados (principalmente quando se encontram ao lado de outra clula);
bacilos: so clulas cilndricas ou em forma de basto. Entre as espcies de bacilos, h uma
diferena considervel de comprimento e largura. Alguns bacilos podem apresentar suas
pores terminais quadradas, arredondadas, afiladas ou pontiagudas;
espirilos: so bactrias que apresentam suas formas em estilo saca-rolha, espiral ou helicoidal.
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Microbiologia Ambiental
As formas apresentadas so as tradicionais, mas podem existir modificaes delas. Por exemplo, temos a Pasteuria, que se apresenta em forma de pera, e a Caryophanon, que tem forma
de discos distribudos como pilhas de moedas. Tambm existem as bactrias que possuem variaes de forma dentro de uma mesma espcie, chamadas pleomrficas, episdio conhecido
como pleomorfismo. Isso pode nos levar a confundir que uma cultura est contaminada por
outro tipo de bactria.
Arranjo
As diferentes espcies de bactria podem se agrupar de algumas formas. Vejamos:
diplococos: ocorrem quando um coco se divide em um plano;
estreptoccicos: ocorrem quando um coco se divide em um plano e permanece ligado
depois de vrias divises, formando uma cadeia.
Tambm podem ocorrer arranjos celulares mais complexos, formando ttrades (quando um
coco se divide no ngulo direito no primeiro plano de diviso), srcinas (quando ocorre uma
diviso adicional no terceiro plano, formando pacotes cbicos de oito clulas) e formas de
cacho de uva (quando ocorre diviso em trs planos de forma irregular, formando agrupamentos).
Em relao aos bacilos, eles formam arranjos em uma variedade de padres caractersticos,
mas existem algumas excees: arranjo de paliada (grupo de clulas alinhadas lado a lado,
como palitos de fsforo), roseta (lembra as flores penduradas em caules), cadeias (as clulas
ficam enfileiradas, mantendo uma pequena superfcie de contato) e tricomas (so similares s
cadeias, porm a superfcie de contato entre as clulas muito maior).
CAPTULO 3
1. Existem dois processos conhecidos de endocitose: a fagocitose e a pinocitose.
Fagocitose: ocorre quando uma clula captura uma partcula geralmente grande por meio
de invaginaes da membrana plasmtica.
Pinocitose: um processo no qual ocorre o englobamento de lquido ou pequenas partculas.
Exocitose a capacidade que a clula tem de eliminar substncias previamente armazenadas
em bolsas citoplasmticas.
2. Mitocndria uma organela citoplasmtica que est presente na maioria das clulas eucariontes e seu nmero na clula varia de dezenas a centenas, dependendo da funo celular. As
mitocndrias so organelas que contm seu prprio DNA e se reproduzem dividindo-se em
duas. Alm disso, contm duas membranas lipoproteicas, uma externa e uma interna, que tm
dobras e pregas denominadas cristas mitocondriais. Seu interior composto por um lquido
denominado matriz mitocondrial, no qual ficam o DNA, RNA, enzimas e ribossomos. Elas so
muito importantes para o estudo da microbiologia, porque so geradoras de energia qumica
para a clula. Por meio da oxidao de molculas de alimentos, a mitocndria produz ATP, que
fornece energia para a maioria das atividades celulares. Como nesse processo h consumo de
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oxignio e liberao de dixido de carbono, ele ficou conhecido como respirao celular, processo que muito estudado nesta disciplina.
3. Entendemos por meios de cultura os conjuntos de substncias formuladas de maneira adequada que so capazes de promover o crescimento de microrganismos em condies de laboratrio.
4. A seguir, esto descritos os meios de cultura especiais:
meio de enriquecimento: geralmente apresenta-se na forma lquida, com composio qumica rica em nutrientes. Sua finalidade permitir que as bactrias contidas em uma amostra clnica aumentem em nmero. Temos como exemplos: caldo BHI e caldo tetrationato;
meio de transporte: consiste em um meio isento de nutrientes. Nele, h um agente redutor,
que pode ser tioglicolato ou cistena. Geralmente, mantm o pH favorvel. Previne a desidratao de secrees durante o transporte. Evita a oxidao e autodestruio enzimtica
dos patgenos presentes. So exemplos: meio de Stuart, meio de Cary-Blair e caldo tioglicolato;
meio seletivo: sua finalidade selecionar as espcies que se deseja isolar e impedir o crescimento de outros microrganismos por meio da adio de corantes, antibiticos e outras
substncias com capacidade inibitria para alguns germes. So exemplos: gar manitol
salgado e gar SS;
meio diferencial: este meio possibilita a diferenciao entre vrios gneros e espcies de
microrganismo por possuir substncias especiais que permitem uma distino presuntiva,
evidenciada na mudana de colorao ou na morfologia das colnias. So exemplos: gar
EMB, gar McConkey e gar Hektoen;
meio indicador: utilizamos este meio para o estudo das propriedades bioqumicas das bactrias e isso auxilia na sua identificao. O mais simples aquele usado no estudo das reaes de fermentao. So exemplos: gar TSI e gar citrato de Simmons.
CAPTULO 4
1. Em microbiologia, entendemos por crescimento o aumento do nmero de clulas e no o aumento do tamanho celular. Muitos so os fatores que podem interferir no crescimento de microrganismos. As quatro principais condies fsicas so temperatura, atmosfera gasosa, pH e
presso osmtica. Para obtermos sucesso em um cultivo de microrganismos, alm da condio
fsica ideal, necessria uma combinao de nutrientes apropriados.
2. Definimos metabolismo como o conjunto de todas as reaes qumicas que ocorrem dentro
de um organismo vivo. As principais importncias do estudo do metabolismo microbiano so:
relao existente entre microrganismos e doenas; funo dos microrganismos na natureza;
importncia econmica dos microrganismos; controle e cultivo dos microrganismos; estudo
e desenvolvimento de mtodos para diagnstico dos microrganismos; estudo e controle dos
processos de deteriorao de materiais e reciclagem da matria orgnica.
3. Algumas enzimas so formadas inteiramente por protenas e outras podem apresentar uma
poro proteica denominada apoenzima e uma poro no proteica chamada cofator, que
pode ser formada por ons de zinco, ferro, magnsio ou clcio. Caso esse cofator seja uma molcula inorgnica, recebe o nome de coenzima. As pores formadas pela apoenzima e pelo
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Microbiologia Ambiental
cofator recebem o nome de holoenzima ou enzima completa ativa. Sem o cofator, a apoenzima no tem funo. Alguns cofatores so ons metlicos, incluindo cobre, ferro, magnsio,
mangans, clcio, cobalto e zinco. Eles podem auxiliar na catlise de uma reao para formao
de uma ponte entre a enzima e o substrato. Vrios fatores podem influenciar a atividade de
uma enzima. Entre os mais importantes, podemos destacar a temperatura, a concentrao do
substrato, o pH e a ausncia ou presena de inibidores.
4. Entendemos por catabolismo de carboidrato a quebra de suas molculas para produo de
energia, sendo esse processo de grande importncia para o metabolismo celular. Entre os carboidratos mais comuns como fonte de energia para os microrganismos, podemos citar a glicose. Os microrganismos podem realizar dois processos para obter energia por meio desse carboidrato: a respirao celular e a fermentao. Ambos os processos tm incio com a gliclise.
Aps, seguem vias diferentes. O processo de respirao, utilizando a glicose para obter energia,
ocorre em trs principais passos:
a gliclise o processo de oxidao da glicose em cido pirvico. Dessa reao, h a produo de algum ATP e NADH contendo energia;
o ciclo de Krebs a oxidao da acetil-CoA, que um derivado do cido pirvico, em dixido de carbono. Dessa reao, h a produo de algum ATP, NADH contendo energia e
outro produto que carreador de eltron reduzido, o FADH2;
a cadeia de transporte de eltrons NADH e FADH2 sofre oxidao. Nesse processo, os
eltrons que transportam os substratos so entregues para uma cascata de reaes de
oxidao-reduo envolvendo uma srie de carreadores adicionais de eltrons. A energia
liberada nessas reaes utilizada para formar uma quantidade considervel de ATP. No
processo de respirao, a maioria do ATP formada por esse terceiro passo.
5. Afermentao um processo anaerbio de produo de ATP, no qual no h o envolvimento
da cadeia respiratria. Nesse processo, o aceptor final de hidrognio um composto orgnico. um mecanismo muito importante na produo de energia em condies anaerbicas.
Asbactrias podem realizar tanto o processo de fermentao quanto arespirao anaerbica.
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