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INDICE
1. PRESENTACION...PAG 2
2. INTRODUCCIONPAG 3
3. OBJETIVOPAG 4
4. MARCO TEORICO.PAG 5
5. SECUENCIA DE LA PRACTICAPAG 6
6. MATERIALES.PAG 7
7. CONTENIDO...PAG 8 29
8. ESTADISTICA.PAG 30
9. CONCLUSIONPAG 31
10. LOGROS.PAG 32
11. RECOMENDACIONES..PAG 33
12. BIBLIOGRAFIAPAG 34
PRESENTACIN
En esta oportunidad presentare el siguiente informe que rene fundamentos
tericos acerca de inmunologa los cuales nos ayudan a realizar diferentes
INTRODUCCIN
OBJETIVO
MARCO TERICO
INMUNOLOGA:
La palabra inmunologa deriva del latn immuzlis, que significa "sin carga",
entendindose por carga un impuesto, ley o enfermedad. Se dice que aquellos
individuos que no sucumben ante la enfermedad cuando se infectan, se hallan
inmunes, y este estado de resistencia especfica a una enfermedad se denomina
Inmunidad.
La Inmunologa es la rama de las ciencias biolgicas que se ocupa del estudio de
las respuestas de defensa a estmulos exgenos o endgenos y a sus desviaciones
patolgicas. Otra definicin es que la Inmunologa es la ciencia que estudia todos
los aspectos del sistema inmunitario normal y patolgico, aunque la delimitacin
anatmica y funcional del sistema inmunitario es algo an impreciso. Inmunologa es
una disciplina que trata del estudio, diagnstico y tratamiento de pacientes con
enfermedades causadas por alteraciones de los mecanismos inmunolgicos y de las
situaciones en las que las manipulaciones inmunolgicas forman una parte
importante del tratamiento y/o de la prevencin.
En Inmunologa se incluyen las enfermedades en las que los mecanismos
inmunitarios no actan adecuadamente, bien sea por razones genticas o
adquiridas (inmunodeficiencias, incluyendo el SIDA) o debido a la transformacin
neoplsica de clulas del sistema inmunitario (tumores linfoides) o donde la
actuacin de anticuerpos especficos y/o linfocitos sensibilizados, bien sea
directamente o a travs de varios sistemas efectores asociados, produce como
resultado lesiones tisulares en el hospedador (hipersensibilidad inmediata y
autoinmunidad). Tambin se ocupa la Inmunologa de las situaciones en las que las
lesiones pueden ser el resultado de la accin del sistema inmunitario en la defensa
contra microorganismos (infeccin e inmunidad) o durante el rechazo de aloinjertos
(transplantes y transfusiones). Por ltimo, tambin la inmunologa clnica incluye el
uso de la inmunoterapia.
El trabajo en esta especialidad hospitalaria incluye una tecnologa propia y requiere
de manera ineludible su prctica en laboratorios adecuadamente dotados, as como
tambin la asistencia a los enfermos mediante consultas con los mdicos que los
tengan a su cargo.
SECUENCIA DE LA PRCTICA
Informe de la Prctica Profesional
Reporte de resultados.
Tiempo de Practica:
Inicio: 1 abril del 2014
Final: 15 de mayo del 2014
MATERIALES
Placas (PCR,FR,ASO,Aglutinaciones)
Equipos de lector Elisa
Reactivos (PSA,TSH,T4,T3,FT4,PSALibre,BhCG,Hidatidosis)
Agua destilada
Gradillas
Estufa de incubacin
Refrigeradora
Centrifuga
Pipetas automticas de 25-50-500 ul
Vasos de precipitacin
Reloj
Cinta adhesiva
Papel toalla
CONTENIDO
LATEX)
Fundamento:
El
PCR-ltex
en
porta basada en la tcnica de Singer, para la deteccin directa y la semi
cuantificacin de la protena C reactiva en suero.
La determinacin se efecta ensayando una suspensin de ltex recubierto con
anticuerpos PCR, frente a los sueros problema.
La presencia de aglutinacin es indicativa de un aumento del nivel del PCR por
enzima del lmite superior del intervalo de referencia de las muestras ensayadas.
Tcnica:
Llevar los reactivos y el suero a temperatura ambiente.
Agitar el reactivo de ltex antes de usarlo.
a. Prueba Cualitativa:
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Depositar una gota (50 ul) de suero problema en uno de los crculos de la
tarjeta visualizadora.
En los crculos adicionales depositar una gota de control positivo y una
gota de control negativo.
Aadir a cada circulo una gota de reactivo de PCR ltex.
Efectuar la mezcla con ayuda de un palito desechable, extendindola de
forma que cubra por completo la superficie interior de cada anillo.
Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos.
Observar de inmediato con ayuda de una luz adecuada, la aparicin de
cualquier signo de aglutinacin.
Lectura:
Reaccin negativa: suspensin uniforme sin cambio visible alguno tal como se
presenta en el control negativo.
Reaccin
positiva:
macroscpicamente
aglutinacin
dbil
intensa,
fcilmente
visible
Significado Clnico:
La protena se reactiva es una protena de fase aguda presente normalmente en el
suero, que aumenta significativamente en una gran diversidad de lesiones tisulares,
infecciones bacterianas y vricas, inflamaciones as como en las neoplasias
malignas. La PCR contribuye a la defensa inmunolgica inespecfica de varias
formas entre ellas, mediante la activacin del complemento y la aceleracin de la
fagocitosis
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Fundamento:
El PR-ltex test es una prueba rpida de aglutinacin basada en una modificacin
de las tcnicas de Singer. Para la deteccin directa y la semi cuantificacin en porta
de los factores reumatoideos (FR) presentes en el suero.
La determinacin se efecta ensayando en una suspensin de partculas de ltex
recubiertas con gama globulina humana frente a los sueros problema. La presencia
o ausencia de aglutinacin visible es indicativa de la presencia o ausencia de FR en
las muestras ensayadas.
Tcnica:
Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
a. Prueba cualitativa
Depositar una gota (50 ul) de suero problema en uno de los crculos de la
tarjeta visualizadora.
En los crculos adicionales depositar una gota de control positivo y una
gota de control negativo.
Aadir a cada circulo una gota de reactivo de FR ltex.
Efectuar la mezcla con ayuda de un palito desechable, extendindola de
forma que cubra por completo la superficie interior de cada anillo.
Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos.
Observar de inmediato con ayuda de una luz adecuada, la aparicin de
cualquier signo de aglutinacin.
Lectura:
Reaccin negativa: suspensin uniforme sin cambio visible alguno tal como se
presenta en el control negativo.
Reaccin
positiva:
macroscpicamente
aglutinacin
dbil
intensa,
fcilmente
visible
Significado Clnico:
Los factores reumatoideos son un grupo de anticuerpos mayormente de la clase
IGM dirigidos contra determinantes de la porcin Fc de la inmunoglobulina IgG del
paciente. Aunque presentes en diversas enfermedades se han elevado
principalmente en pacientes con artritis reumatoidea.
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3. ANTI-ESTREPTOLISINA (ASLO-LATEX)
Fundamento:
El ASLO-ltex test es una prueba rpidamente de aglutinacin en porta para la
deteccin directa y la semi cuantificacin de niveles clnicamente significativos de
anticuerpos anti-estreptolisina o ASLO en suero.
La determinacin se efecta ensayando una suspensin de partculas de ltex
recubiertos con estreptolisina frente a los sueros problema. La presencia o ausencia
de aglutinacin visible es indicativa de la presencia o ausencia de ASLO en las
muestras ensayadas a niveles significativos.
Tcnica:
Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
a. Prueba cualitativa
Depositar una gota (50 ul) de suero problema en uno de los crculos de la
tarjeta visualizadora en un crculo adicionales depositar una gota de control
positivo y una gota de control negativo.
Informe de la Prctica Profesional
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Lectura:
Reaccin negativa: suspensin uniforme sin cambio visible alguno tal como se
presenta en el control negativo.
Reaccin
positiva:
macroscpicamente
aglutinacin
dbil
intensa,
fcilmente
visible
Significado Clnico:
Como respuesta a la infeccin por estreptococos hemolticos de los grupos A, C y G
productores de estreptolisina o (ASLO) que pueden ser determinados en el
laboratorio. La investigacin inmunolgica de estos anticuerpos especficos contra
los productos metablicos de los estreptococos proporciona una informacin valiosa
para el diagnstico de infecciones provocadas por estreptococos (fiebre reumtica,
glomrulo nefritis)
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El suero del paciente se pone en contacto con los antgenos especficos, en este
caso se utiliza suspensiones de salmonellas o brucellas muertas.
Si la muestra contiene los anticuerpos correspondientes se producirn una
aglutinacin macroscpicamente.
Tcnica:
Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
a. Prueba cualitativa
Colocar en una placa una gota de suero y agregarle una gota de suspensin
de antgeno (tfico O, H, paratfico A, B, Brucellas).
Mezclar y agitar la placa en forma circular durante 5 minutos.
Observar la presencia o ausencia de aglutinacin utilizando la luz indirecta
sobre el fondo oscuro.
Lectura:
Positivo (aglutinacin)
Negativo (homogeneidad)
Significado Clnico:
La salmonellas se consideran patgenos entricos obligados y su aislamiento en un
individuo implica la enfermedad o estado de portador.
La enfermedad puede presentar en tres formas distintas:
Gastroenteritis, septicemia o fiebre tifoidea.
En la brucelosis el periodo de incubacin puede extenderse en algunos das desde
algunos das hasta varios meses (generalmente 3 semanas).
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5. TIROXINA (T3)
Fundamento:
Inmuno ensayo competitivo de quimioluminiscencia (Tipo 5) Los reactivos
esenciales requeridos para un inmuno ensayo enzimtico de fase slida incluyen
anticuerpos inmovilizados, conjugado enzima antgeno y el antgeno nativo.
Despus de la mezcla del anticuerpo inmovilizado, el conjugado enzima antgeno y
el suero que contiene el antgeno nativo, se obtiene una reaccin de competencia
entre el antgeno nativo y el conjugado enzima antgeno para un nmero limitado de
sitios de unin insolubilizados.
Tcnica:
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Antes de seguir adelante con el ensayo, los reactivos, los sueros de referencias y
controles debern estar a temperatura ambiente (20-27C).
Formatee los pozos del micro placa para cada suero de referencia, control y
muestra de pacientes que deba ensayarse en duplicado. Colocar las tiras no
utilizadas de micro pozos nuevamente en la bolsa de aluminio, sellar y
almacenarlo de 2 8C.
Pipetee 0.050 ml (50ul) del suero de referencia apropiado, control o muestras
dentro del pocillo asignado.
Adicione 0.100ml (100ul) de Trazador de trabajo, solucin de conjugado
Enzima T3 a todos los pozos. (Ver seccin de preparacin de reactivos)
Agite suavemente la micro placa durante 20 30 segundos mezclar y cubrir.
Incube durante 45 minutos a temperatura ambiente.
Elimine el contenido del micro placa mediante decantacin o aspiracin. Si
se decanta, golpee la placa y squela con papel absorbente.
Adicione 350ul de buffer de lavado (ver Seccin Preparacin de Reactivos),
decante (golpear y secar) o aspire. Repetir 4 veces ms (4) para obtener un
total de 5 lavados. Se puede utilizar un lavador automtico o manual de
placas. Seguir las instrucciones del fabricante para asegurar el uso
apropiado. Si se utiliza un frasco de lavado, llene cada pozo oprimiendo el
recipiente (evitar la formacin de burbujas de aire) dispensar las solucin de
lavado. Decante la solucin de lavado y repita 4 veces ms.
Adicionar 50ul de sustrato A y adicionar 50ul de sustrato B.
Incubar por 15 minutos a temperatura ambiente.
Aadir solucin de stop 50ul a todos.
Esperar 30 minutos para la lectura en 620 a 630nm.
Valores de Referencia:
VR: 0.76 3.43 ug/dl
Significado Clnico:
Los niveles por encima de lo normal pueden indicar:
Enfermedad prolongada
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Valores de Referencia:
VR: 0.55 3.25 ng/dl
Significado Clnico:
Los niveles de T4 superiores a lo normal junto con niveles bajos de hormona
estimulante de la tiroides pueden deberse a afecciones que involucran una
hiperactividad de la tiroides, como:
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Valores de Referencia:
VR: 5.76 16.8 ug/dl
Significado Clnico:
Los niveles de T4 superiores a lo normal junto con niveles bajos de hormona
estimulante de la tiroides pueden deberse a afecciones que involucran una
hiperactividad de la tiroides, como:
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Desnutricin o ayuno
8. TIROTROPINA (TSH)
Fundamento:
Los reactivos esenciales sugeridos por un anlisis inmunoenzimometrico incluyen
alta afinidad y especificidad de anticuerpos, con diferentes y con reconocimiento
distinto del epitome, en exceso, y antgeno nativo.
En este procedimiento, la inmovilizacin toma lugar durante el anlisis en la
superficie del micro pozo a travs de la interaccin de streptavidin cubierto en el
pozo y el exgeno agregado biotinilado monoclonal al anticuerpo de anti-TSH.
Mezclando el anticuerpo monoclonal inmovilizado, conjugacin del enzima-antgeno
etiquetado y un suero que contiene el antgeno nativo y los anticuerpos sin
competencia o steric hidrance, para formar un sndwich complejo soluble.
Tcnica:
Valores de Referencia:
VR: 0.39 6.16 u lU/ml
Significado Clnico:
Los niveles por encima de lo normal pueden indicar:
Hipotiroidismo primario
Hipertiroidismo
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Deficiencia de TSH
Uso de algunos medicamentos, incluyendo agonistas de la dopamina,
glucocorticoides, anlogos de somatostatina y bexarote.
Significado Clnico:
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Infeccin urinaria.
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Valores Normales:
Leer en
absorbancia a 450
nm. Aos
PSA libre(ng/ml)
PSA complejo
40-49
0,5
1,0
0,7
0,7
1,5
60-69
1,0
2,0
70-79
1,2
3,0
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SOL. WASH
H2O
VOL. FINAL
0.75 ml
14.25 ml
15 ml
0.9 ml
17.1 ml
18 ml
10
1.5 ml
28.5 ml
30 ml
CT +
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Valores Normales:
CONTROL
Control positivo
Control negativo
Control cut off
D.O.
>0.9
<0.5
>0.55 y <1.5
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Fundamento:
Los reactivos esenciales sugeridos por un anlisis inmunoenzimometrico incluyen
alta afinidad y especificidad de anticuerpos, con diferentes y con reconocimiento
distinto del epitome, en exceso, y antgeno nativo.
En este procedimiento, la inmovilizacin toma lugar durante el anlisis en la
superficie del micro pozo a travs de la interaccin de streptavidin cubierto en el
pozo y el exgeno agregado biotinilado monoclonal al anticuerpo de anti-hCG.
Mezclando el anticuerpo monoclonal inmovilizado, conjugacin del enzimaetiquetado y un suero que contiene el antgeno nativo, resultados de la reaccin
entre el antgeno nativo y los anticuerpos, sin competicin u obstculo esterico, de
formar un complejo soluble de sndwich se ilustra con una ecuacin.
Tcnica:
Valores Normales:
1 semana
2 semana
3 semana
4 semana
2 & 3 mes
2 trimestre
3 trimestre
10-30 mlU/mL
30-100 mlU/mL
100-1000 mlU/mL
1000-10000 mlU/mL
30000-100000 mlU/mL
10000-30000 mlU/mL
5000-15000 mlU/mL
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Fundamento:
Inmuno ensayo cromatogrfico con partculas de oro coloidal, esta prueba es
cualitativa y detecta rpidamente la hormona gonodotropina corionica humana
presente en suero y orina.
Tcnica:
Significado Clnico:
En embarazos normales, la HCG puede detectarse en suero y orina desde 7 das
despus de la concepcin duplicando su concentracin cada 1.3 a 2 das. Para el
momento en que falta el primer periodo menstrual, la concentracin de HCG es
aproximadamente 100 mUI/ml observndose niveles pico de 200000 mUI/ml o ms
para el final del primer trimestre del embarazo.
30
250
200
150
100
50
31
CONCLUSIN
El procesamiento de las pruebas inmunolgicas como PCR, ASO, FR, T3, T4,
etc. Se realizan para el diagnstico de las diferentes patologas o el
tratamiento del paciente.
La funcin principal del rea de inmunologa es brindar apoyo al mdico de
diversas enfermedades.
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LOGROS
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RECOMENDACIONES
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BIBLIOGRAFA
http://es.scribd.com/doc/70598035/LABORATORIODE-INMUNOLOGIA
http://www.uco.es/grupos/inmunologiamolecular/inmunologia/tema01/etexto01.htm
http://www.slideshare.net/jujosansan/inmunologa12922529
http://www.monobind.com/immunoassays-fertilityprenatal-prl-accubind-elisa
http://www.wiener-lab.com