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Objectivos
Pretende-se que os estudantes adquiram a capacidade de planear,
dimensionar e analisar a operao de reactores com clulas (em particular,
microbianas) em suspenso e em agregados celulares (incluindo biomasssa
fixa). Esta unidade curricular tambm visa dotar os estudantes de
conhecimentos de anlise e dimensionamento de unidades complementares
de processos fermentativos.
Mtodos
Exposio formal dos fundamentos tericos e metodologias de abordagem,
usando videoprojector e material online acessvel atravs na Internet, e
resoluo de problemas, acompanhados de alguns exemplos de aplicao.
Sero propostos para estudo individual a resoluo de problemas mais
complexos que podem exigir, em alguns casos, suporte informtico
(Microsoft Excel ou plataforma similar; SuperPro Designer; Berkeley
Madonna). Propem-se exemplos de dimensionamento de bio-reactores,
onde se aplicam regras fundamentais de modelao e projecto.
Programa
1. Integrao do biorreatores em processos industrial; Esquema geral de um
processo fermentativo; Caractersticas gerais de microrganismos e meios de
cultura utilizados industrialmente.
2. Fundamentos de balanos de material (balanos de massa a um ou mais
componentes; balanos em mltiplas unidades; balanos em unidades com
reciclagem bypass e purga). Biorreatores de clulas microbianas: classificao;
reactores com biomassa suspensa e com biomassa fixa. Modos de operao de
biorreatores (batch, fed-batch, contnuo). Caractersticas fsicas do equipamento.
3. Modelao e simulao de processos em biorreatores microbianos: exemplos
ilustrativos; utilizao de software especfico.
4. Agitao e arejamento (Conceito de transferncia de massa; Coeficiente de
correlao de transferncia de massa; Quantificao da rea interfacial;
Determinao da taxa de absoro/transferncia de oxignio; Correlaes para
KLa; Conceito de hold-up).
5. Esterilizao (Mtodos de esterilizao; Cinticas de morte trmica; Esterilizao em
descontnuo e em contnuo; Esterilizao de ar).
6. Conceitos gerais de variao de escala em biorreatores.
3
Avaliao
Modo de avaliao dos conhecimentos: avaliao distribuda com exame final.
A classificao final ser calculada de acordo com os seguintes componentes de
avaliao:
Bibliografia recomendada
Bailey J.E., Ollis D.F. (1987). Biochemical Engineering Fundamentals.
McGraw-Hill.
Lee J.M. (2001). Biochemical Engineering. Prentice-Hall Inc.
Lopes A.M., Fonseca A. (1996). Biologia microbiana. Universidade aberta.
Ferreira W.F.C., de Sousa J.C.F. (1998). Microbiologia. Volume 1. Lidel
edies Tcnicas, Lda.
Classificao de Bioprodutos
Os bio-produtos podem ser classificados grosseiramente nas seguintes categorias: pequenas
molculas, consistindo em compostos qumicos simples e antibiticos, hormonas,
aminocidos e vitaminas; macromolculas: protenas, polissacridos e cidos nucleicos;
outros produtos: clulas, esporos, lipossomas, organelos celulares.
Sumrio da previso (2000-2010) de rendimento da industria biotecnolgica nos Estados Unidos da
Amrica por sectores chave (adaptado de Harrison et al. 2003)
100
75
50
25
0
E nzim as aplicao
industrial
Diagnstico
Teraputica
Nutrientes
Arrefecimento
11
12
13
14
15
16
Equilbrio
Uma reaco qumica no equilbrio dada pela expresso:
A+B
C
E pode ser caracterizada pela constante de equilbrio (Keq):
Keq = [C]/[A]+[B], com a concentrao em molar ou molaridade.
17
Fenmenos de Transporte
O fluxo de um determinado fluido pode ser descrito pela expresso:
Fluxo = coeficiente fora motriz
Em que o coeficiente representa a permeabilidade ou o inverso da resistncia, dependendo
das propriedades do meio. O fluxo e a fora motriz tm unidades iguais.
Da expresso acima descrita obtm-se a Lei de Ohm:
Je = C E
Em que Je a densidade de corrente, C a condutividade elctrica (propriedade do meio) e
E o gradiente de potencial elctrico.
A Lei de Fick aplica-se a fluxo devido ao gradiente de concentraes (dc/dx) numa
dimenso:
Je = Ddc
dx
Em que D o coeficiente de difuso, uma propriedade do meio, em alguns casos calculado
pela expresso de Stokes-Einstein para esferas:
D = kT
6a
Em que k constante de Boltzmann, T a temperatura absoluta, a viscosidade e a o raio da
partcula.
A Lei de Darcy de grande interesse para sistemas porosos:
Jw = Lp p
Em que Jw o fluxo de fluido, Lp o coeficiente de permeabilidade de Darcy e p a queda
de presso atravs do meio poroso (por exemplo filtro ou resina absorvente, sistemas
18
frequentemente utilizados em bioprocessos).
Psicrfilos;
Mesfilos;
Termfilos.
19
Aerbios;
Facultativos;
Anaerbios.
Relativamente ao pH do meio extracelular, podem ser:
Acidfilos;
Neutrfilos;
Basfilos.
Em termos de presso osmtica e concentrao de gua no interior da clula (relacionado
com as concentrao de sais no meio), as clulas podem ser:
Osmfilas;
Halfilas;
Xerfilas.
20
Quimiotrofos
Litotrofos
Fototrofos
Organotrofos
Classificao em termos de fonte de carbono
Organismos
Autotrofos
Heterotrofos
21
22
1.
2.
3.
4.
5.
Sais minerais e metais, para melhorar o crescimento (PO4-2, SO4-2, Ca+2, Mg+2, Fe+2,
Mn+2 e metais);
6.
7.
8.
23
Modelos de crescimento
microbiano
24
25
2
3
4
5
6
S
Diagrama dos modelos matemticos que descrevem a relao entre a taxa especfica de crescimento ou a
taxa especfica de utilizao de substrato e a concentrao limitante de substrato. 1-Cintica de Monod; 2Cintica de Monod com inibio pelo substrato; 3- Cintica de Monod com inibio pelo substrato a
concentraes elevadas de biomassa; 4 Semelhante a 3 e com inibio pelo produto; 5 Semelhante
26a 4
e com metabolismo endgeno; 6 Semelhante a 4 e com metabolismo sequencial de dois substratos; 7
Fase de transio (por exemplo fase de latncia).
dX
= . X
dt
taxa especfica de crescimento.
O valor de obtido pela relao de Monod:
m ax.S
S + KS
27
(normalmente assume valores entre 10-5 a 10-6 mol/L, variando significativamente com a estirpe utilizada).
ln X = ln X 0 + .(t t 0)
X0 concentrao de biomassa para t0.
X = X 0. exp( .t )
A partir desta expresso possvel determinar o tempo de duplicao de uma cultura
microbiana (td). A lei exponencial de crescimento s aplicvel quando as condies de
crescimento permanece constantes.
td =
ln 2
28
Os efeitos de diferentes nutrientes na taxa de crescimento celular pode ser comparado com
base na concentrao que suporta metade da taxa mxima de crescimento. Este valor ser a
constante de saturao (KS), assumindo um valor entre 10-5 a 10-6 M, correspondendo a
uma concentrao de glucose entre 20 e 200 mg/L. Geralmente, o valor de KS para
enzimas respiratrias, associadas com o metabolismo de aucares, inferior ao valor de KS
para enzimas hidrolticas, associadas com o consumo de substratos primrios.
A constante de saturao para a levedura Saccharomyces cerevisiae em glicose de 25
mg/L, para as bactrias Escherichia coli em lactose e Pseudomonas fluorescens em metanol
de 20 mg/L e 0.7 mg/L, respectivamente. A taxa especfica mxima de crescimento (max)
atingida quando S >>> KS, mantendo-se as concentraes de todos os nutrientes essenciais
constantes.
O efeito da concentrao elevada de nutrientes ou produtos pode ser expressa de uma
forma emprica:
max .KI
KI + I
difcil determinar com rigor o valor exacto de KS. Estes valores encontram-se abaixo dos
limites de deteco dos mtodos analticos disponveis. Tambm difcil definir as condies
ambientais de modo a ter resultados comparveis. Tal como referido anteriormente, o valor
de KS varia com a estirpe utilizada.
Teisser (1936)
= max(1 e
S / KS
Moser(1958)
Contois (1959) e
Fujimoto (1963)
Powell (1967)
S
= max
n
KS + S
S
= max
KS . X + S
S
= max
( KS + KD ) + S
31
Equao de Monod
= max
Linearizao de Lineweaver-Burke
(ajuste cintica enzimtica)
S + KS
=
max S
1
S
S + KS
max
KS
max
1
S
y = mx + b
32
33
= max
S1
S2
K S1 + S1 K S 2 + S2
34
Rendimento
O rendimento Yi/j definido como a relao entre a velocidade de consumo de substrato (-rj)
e a velocidade de produo (rj):
ri
Yi / j =
rj
Rendimento em Biomassa
O rendimento em biomassa (YX/S) representa o acrscimo de biomassa (dX) devido ao
consumo de uma determinada quantidade de substrato (dS) e dado pela expresso:
dX
YX / S =
dS
Se as condies da cultura forem constantes ao longo do perodo de operao:
X X 0 = YX / S.(S S 0)
O rendimento em produto ser:
rP
YP / S =
rS
35
CH2O +..
CH1.8O0.5N0.16S0.0045P0.0055
2C2H4 + O2
2C2H4O
36
37
(Bailey e Ollis, 1987)
Quocientes Metablicos
A velocidade de consumo de substrato numa cultura microbiana :
dS
= qS . X
dt
qS =
YX / S
qS quociente metablico.
qS max .S
qS =
KS + S
O quociente metablico de uma cultura vem sempre afectado por um ndice correspondente ao substrato
(qG quociente de consumo de glucose; qL quociente de consumo de lactose; qC quociente de
consumo de carbono).
rS =
rx
YX / S
rp
YP / S
+ mS.Mx
(mol subst./s)
Crescimento celular
Formao de produto
Biomassa (mol)
Coeficiente de manuteno 38
(mol subst./(mol biom.s))
rp
rp
Y P/S= =
rX
rp
rS
+
+ mS.MX
YX / S YP / S
G
Em que rX=.MX
rP=qP.MX
Reescreve-se:
G
P/S
Yp / S
1+
.YP / S
qP.YX / S
mS.YP / S
+
qP
39
rX
rS =
+ mS.MX
YX / S
O rendimento global dado por:
rX
YX / S
Y X /S = =
rS 1+ mS.YX / S
G
40
rP
Y P/S =
rS
rX
a
rS = a + m S .MX
Y X /S
rX
a
rp = a
+ m P .MX
Y X /P
rX = .MX
Ga
Y
Y P/S =
Ga
m P
Y P/S = a
m S
Ga
+m
+m
X /P
X /S
41
rS =
rX
a
Y X /S
rX = .MX
+ m S .MX
a
0.67C1H3O0.5+0.33C1O2
42
YP/S
(mol/mol)
Baixa manuteno
Alta manuteno
(h-1)
YX/S
(mol/mol)
Baixa manuteno
Alta manuteno
(h-1)
43
= max KX . X
( S , X ) = max
()
+S ( )
S0
Teisser (1973)
KS
X
Y
X
Y
N=
N 0.
max
max
.e
o max .t
+ mx.N 0.(e
o max .t
1)
44
Monod
Tessier
Verhulst-Pearl
X
Representao grfica da dependncia da taxa especfica de crescimento na concentrao de biomassa,
de acordo com as aproximaes referidas anteriormente.
45
2.3
X
log
tL = t
X0
max
De acordo com Pirt (1975), a representao de log X em funo do tempo dada por:
X = X0e
( t tL )
Uma extenso simples da funo de Monod, usando o tL como parmetro do modelo, foi
descrita por Bergter e Knorre (1972):
S
t / tL
( S , t ) = max
(1 e )
KS + S
46
lnX0
tL
lnX = . (t-tL)+lnX0
47
rX = . X
( )
1
1 dX
Kd = .
X dt
48
X:
rX = ( Kd ). X
rS =
1
YX / S
.rX
1
KS 1
1
=
. +
+ Kd max S max
49
Contudo, algumas consideraes a nvel fisiolgico levam a concluir que, dois factores
independentes so responsveis pelo decrscimo da concentrao de biomassa. As clulas
viveis perdem massa devido ao metabolismo endgeno e so tambm convertidas em
clulas mortas.
Sinclair e Topiwala (1970) desenvolveram um modelo que considera a taxa de morte de
clulas viveis (K0d) e o metabolismo endgeno (Ke):
Kd = K0d+Ke
X
Clulas totais
Clulas viveis
Clulas mortas
Representao grfica da cintica em estado estacionrio num reactor do tipo perfeitamente agitado,
assumindo taxas individuais de morte celular e metabolismo endgeno, demonstrando as diferenas
50 na
concentrao de biomassa em funo da taxa de diluio (D).
1/
Kd=0.05
Kd=0.02
Kd=0.01
Kd=0.005
Kd=0
1/max
1/S
-1/KS
rS =
YX / S
rX = . X
mS =
qS
. . X + mS. X
( )
qS =
YX / S
+ mS
1
No considerando a
formao de produto no
associado ao crescimento
YX
1 dX
.
X dt
/S
ms
Kd
1/Y
Kd
.mS
YX / S
1/YX/S
1/D
Mtodo alternativo ao anteriormente apresentado para a determinao do coeficiente de manuteno,
atravs da utilizao de reactores em contnuo a funcionar a diferentes taxas de diluio.
53
d =
S
d max 1
Kd . S
d
dmax
Kd
( )
( )
d =
S
d max 1+
Kd + S
mS = m
S
s max
Ke + S
54
S
1
= max .
.
KS + S 1 + S / KI , S
KI,S a constante de inibio pelo substrato.
S (1 + S / K `S )
= max .
2
S + KS + S / K S
Mltipla inactivao de complexos enzima-substrato (Aiba et al., 1968):
= max .
1
i
KS / S + ( S / Ki , S ) j
j
55
S
= max
.e S / KI , S
KS + S
A funo semi-emprica de Teissier:
S
S
max exp
exp
KI , S
KS
S
1.17
.e
= max
S + KS (1 + / KI , S )
Tseng e Waymann (1976) propuseram, para concentraes de substrato superiores a uma
limite de inibio (SC) a seguinte expresso:
S
= max
KI , S(S SC)
KS + S
56
1
=
+
.S
max max .KI , S
1/
Monod
1/2
1/max
1/KI
1/S
Cintica de inibio por substrato e mtodo para a determinao dos parmetros associados ao modelo
57
mtodo aproximado.
max
S
KS
1 +
1 +
S KI
KI constante de inibio.
= max
S1 K I
SK I + K S K I + S 2
58
max
1
2
3
max
1 + 2 KS / K I
1/2
max
KS
Monod
.S
2
K S . KI
KS
KI
Cintica de inibio por substrato e mtodo para a determinao precisa dos parmetros cinticos
mtodo preciso.
59
S
= max
(1 Kp )
KS + S
Este modelo foi melhor ajustada inibio pelo produto por Holzberg et al. (1967):
= max K 1( P K 2)
E por Ghose e Tyagi (1979):
S
KI , P
= max
.
KS + S KI , P + P
Em que KI,P a constante de inibio pelo produto. Este modelo um dos mais utilizados,
predominantemente para sistemas em descontnuo.
S
Kp
= max
.e
KS + S
60
= 0 K 1.Pm( K 2 P)
Em que Pm a concentrao mdia de produto na cultura e K1 e K2 so constante empricas.
pm
0 1+
p max
1/ 2
Kobs = K
( )
pm
1
pcrit
Em que K = max; Pcrit = concentrao crtica de produto para a qual a fermentao termina; n = factor de
toxicidade.
61
S
1
1
ri = ri , max
.
X
KS + S (1 + S / KR ) X
Esta equao uma forma anloga ao caso da inibio por substrato e tem sido utilizada
para a modelao do crescimento diauxico de leveduras e de produo de antibiticos.
Tipo I
[S]
Tipo III
Tipo II
[S]
[X]
[P]
[S]
[X]
[P]
[X]
[P]
Curvas de concentrao (substrato, biomassa e produto) em funo do tempo para os trs tipos usuais de
formao de produtos em processos fermentativos. I formao de produto associado ao crescimento; II
associado parcialmente ao crescimento; III no associado ao crescimento.
64
rP = YP / X .rX
ou
qP = YP / X .
e ainda:
S
rP = qP , max .
.X
KS + S
O caso da formao de produto no ligado ao crescimento mais difcil de quantificar.
Normalmente usa-se a relao:
rP = KP. X
A formao de produto, neste caso, tambm pode ser quantificada pela relao de
dependncia do substrato.
rP = YP / S.rS
65
qP = YP / X . + Kp
qP
II
I
III
IV
V
Relaes cinticas lineares entre as taxas especficas de produo e crescimento, exibindo formas
diferentes: I associadas ao crescimento; II associadas parcialmente ao crescimento; III no
associadas ao crescimento; IV com uma correlao negativa; V sem correlao.
66
Formao de produtos
rP = .rX + .X
De acordo com este modelo:
Produto primrio = 0
Produto secundrio = 0
Produto intermdio quando e so ambos positivos
67
A modelizao cintica pode ser efectuada atravs de uma funo de limitao dupla por
substrato:
S
O
.
( S , O ) = max .
K S + S KO + O
Esta equao pode ser incorporada no balano mssico ao oxignio, onde se considera
tambm a transferncia de massa:
rO = K L .a.(O L OL )
*
1
YX / O
. ( S , O ). X
68
As clulas passa por diversas transies. Daqui resulta uma srie de fases de crescimento,
cada uma com uma taxa de crescimento sucessivamente decrescente.
2
[S]
[S]
[S]
[S1+2]
[X]
1
[S1+2]
[S1+2]
[S1]
[S1]
[S1]
[S2]
[S2]
[S2]
Cintica multi-substrato para uma reaco com dois substratos (1 e 2): a diagrama concentrao em
funo do tempo para utilizao estritamente sequencial dos substratos (crescimento diauxico); b
utilizao de substrato parcialmente sequencial e parcialmente simultnea; c utilizao simultnea de
substrato.
70
Quantificao directa:
Contagem em placas;
Filtrao e plaqueamento;
Mtodo do nmero mais provvel;
Contagem directa ao microscpio.
Quantificao indirecta:
Turbidimetria;
Actividade metablica;
Peso seco.
71
Imobilizao Celular
A imobilizao um termo que descreve o fenmeno de encapsulamento e/ou
aprisionamento de clulas.
Existem quatro princpios bsicos para a imobilizao de clulas: ligao a superfcies,,
aprisionamento em matrizes porosas, conteno por membranas e autoagregao.
A imobilizao por meio de aprisionamento em matrizes porosas envolve, normalmente, a
sntese in situ da matriz porosa em torno das clulas a serem imobilizadas. Este mtodo tem
sido extensivamente estudado para a imobilizao de clulas viveis, devido possibilidade
de uso de polmeros hidroflicos biocompatveis como suportes de imobilizao. Alm disso,
as clulas imobilizadas em uma matriz hidroflica podem ser protegidas de condies no
adequadas de pH, temperatura, solventes orgnicos e/ou compostos inibidores presentes no
meio de fermentao.
Como a matriz de aprisionamento geralmente resulta em limitaes de transferncia de
massa, a imobilizao na forma de esferas geralmente preferida devido elevada rea
superficial.
Como principais desvantagens, temos o pequeno volume disponvel para a conteno das
clulas imobilizadas, a perda de clulas para o meio de fermentao, que limitam a
quantidade de clulas imobilizadas nas esferas, e a instabilidade dos suportes normalmente
utilizados, que limita a utilizao dos agregados por longos perodos.
As principais caractersticas de um suporte para a imobilizao de clulas vivas so as
seguintes: no txico para a clula; elevada capacidade de reteno; elevada
72
difusividade de substratos e produtos; biodegradabilidade.
Biofilmes
A definio mais usual de biofilme o de uma matriz polimrica de aspecto gelatinoso,
aderida a uma superfcie slida, quase sempre imersa em meio lquido, constituda
essencialmente por microrganismos, pelas substncias polimricas extracelulares que estes
excretam e por gua.
Os biofilmes so tipicamente constitudos por gua, microrganismos (essencialmente
bactrias, mas tambm fungos, leveduras, microalgas, vrus e protozorios), substncias
polimricas extracelulares (EPS), partculas retidas e substncias dissolvidas e adsorvidas. A
gua a fraco mais significativa da massa total do biofilme, podendo variar entre 70 a 99
% da massa total do biofilme.
Os microrganismos representam somente uma pequena parte da massa e do volume do
biofilme, geralmente menos de 10 %, embora estes excretem as substncias polimricas que
representam a fraco dominante da matria orgnica seca do biofilme. As substncias
polimricas representam cerca de 70 a 95% da matria orgnica da massa seca do biofilme.
74
Estruturas dinmicas.
75
77
78
pH
Temperatura
Fora Inica do Meio
Velocidade de Escoamento/Regime de Escoamento
Concentrao de Nutrientes
Tipo de Material da Superfcie e o Seu Estado de Conservao
Comunidade Microbiana
Concentrao de Agentes Antimicrobianos
80
82
83
Dentes
Intestino
Alvolos
pulmonares
Tracto urinrios
Lentes de contacto
84
Biofilmes na indstria
Indstria do papel
Indstria alimentar
Permutadores de calor
85
Biofilmes em casa
Superfcies sanitrias
Paredes e tectos
86
87
Escala piloto
Escala laboratorial
88
89
Bio-reactor rotativo
90
Reactor PropellaTM
91
Microtiter plates
24 poos
96 poos
92
Imagens, obtidas por microscopia de epifluorescncia com recurso ao corante alaranjado de acridina e por
microscopia electrnica de varrimento, de biofilmes formados por Bacillus cereus (esq.) e Pseudomonas
93
fluorescens (dir.).
94
rendimentos,
dimensionamento
de
instalaes
de
equipamentos, etc...
O balano de massas ou balano material baseia-se no princpio de
conservao de massa.
Processos
contnuos
alimentao
os
produtos
flem
98
F=P
F = F1 + F2 + F3
P = P1 + P2
F1 = 0.2F
F2 = 0.35F
F3 = 0.45F
P1 = 0.1F1 + 0.25F2 + 0.65F3
base de clculo F = 100 kg
99
Qs (Kg/h)
de
processo
100
101
102
Reactor
110 Kg A/h
Separador
200 Kg A/h
100 Kg A/h
10 Kg A/h
30 Kg R/h
130 Kg R/h
100 Kg R/h
90 Kg A/h
30 Kg R/h
Unidade de processo
Outro procedimento adoptado consiste na purga, em que parte de uma corrente, que
no interessa, separada da parte de corrente de interesse.
Alimentao
Produto
Processo
Alimentao
combinada
Reciclagem
Purga
105
Bio-reactores de clulas
microbianas
106
107
Matrias-primas
Meio de cultura
seleccionado
Esterilizao
Indstria
Clulas
Separao
das clulas
Indstria
Meio fermentado
Ar esterilizado
Produto
Efluentes
108
Classificao de Bio-reactores
Os bio-reactores podem classificar-se em:
110
Descontinuo
(Batch)
Continuo
Semi-continuo
(Fed-batch)
111
Concentrao de biomassa,
substrato e produto
Biomassa, X
Substrato, S
Produto, P
comum a
utlizao destes
reactores na
produo de
antibiticos e de
fermento de
padeiro (levedura)
113
Tempo
114
Balano material
d (V . )
= Qentrada.entrada Qsada.sada
dt
d (V .Csada )
= Qentrada.Centrada ri.V
dt
Para caudais muito baixos, o modo de operao em fed-batch assemelha-se a um
quimiostato, atingindo-se um estado estacionrio dinmico para caudais suficientemente
baixos:
Qentrada
=
V
Em estado quase-estacionrio:
dX
V.
= Q.YX / S.Sentrada V . X = Xentrada + Q.YX / S.Sentrada.t
dt
Massa de clulas recolhida
Q
D=
V 0 + Q.t
116
dX
Q
Q
Biomassa
= Kd X + X 0
dt
V
V
Substrato
Produto
Biomassa
removida
Biomassa
adicionada
dS Q
= (S0 S )
+ m X
dt V
YX / S
dP
Q
=
+ X + P 0
P
dt
dV
=Q
dt
YX / P
117
Crescimento dinmico;
Cintica de Monod.
118
120
Produo de vinagre
O etanol mais txico para as clulas do que o cido actico ou que o pH;
As aceto-bactrias so capazes de metabolizar o etanol a pH < 3;
As aceto-bactrias podem produzir at 180 g/L de cido actico.
122
Produo de antibiticos
125
Produo de penicilina
Inculo
microbiano
Esporos de Penicillium
chrysogenum
Fase de crescimento
40 horas; tduplicao = 6 h
Produo de
penicilina
126
Biomassa
Antibitico
Tempo
127
Num sistema aberto/contnuo, todos os materiais que compem o sistema podem entrar
ou sair dele;
Se uma parte componente do sistema no puder entrar nem sair, o sistema diz-se
fechado em relao a essa parte.
Num sistema fechado, a velocidade de crescimento deve tender para zero. Logo, neste
caso, haver uma sucesso de estados transientes.
130
S0
Xf
X0
Bio-reactor
Xf
X0
Sf
tf
131
Esta anlise corresponde a uma situao ideal. No entanto, existe sempre retrodisperso e
disperso transversal.
Podem considerar-se dois casos gerais:
S=Sa
S=SW
X=Xa
X=XW
dV
X = Xa.e ( max .t )
v
Q
v
t=
V .D
Como:
Vem:
t=
Portanto:
X = Xa.e
max
.
V
.
D
QdS = rS dV
132
S=SW
X=Xa
X=XW
S=SW
X=Xe
Q
QS
a.Qs
Separador
S=SW
X=g.XW
Factor de concentrao da biomassa
QS = Q + a.QS
Xa = a.g.XW
Um dado volume (v) sai do reactor ao fim do tempo:
1 a
t = v.
Q
A produo mxima de biomassa dada pela expresso: Xmax = YX/S.Sa+Xa
133
Ve.(1 a)
t=
Q
Xw = Xa.e
Ve (1 a )
max .
1
Q
Ve =
. ln
(1 a). max a.g
Quando Ve=V:
1 1
1
Ve
=
= tr =
. ln
Q
(1 a). max a.g Dc
Taxa de diluio crtica
Na prtica, impossvel realizar uma cultura pisto num s vaso, pois h sempre mistura,
incluindo entre diferentes fases (gs, lquido, slido). Uma boa aproximao atravs da
134
utilizao de uma srie de quimiostatos.
Cultura em Quimiostato
Numa situao ideal, podemos assemelhar um quimiostato a um reactor contnuo
perfeitamente agitado/com mistura perfeita ou CSTR (continuous stirred tank reactor) assume
uma densidade constante; condies isotrmicas; reaco irreversvel e de 1 ordem (tal
como assumido pelo modelo de Monod); estado estacionrio.
137
Formao de
biomassa
2
X0
1
t1
Consumo de
substrato
S0
t1
138
Balano biomassa:
dX
= ( Kd D ) X
dt
Considerando >>kd, e como em estado estacionrio dX/dt = 0:
=D
139
A taxa de diluio mxima a que se pode operar dever ser inferior ao max-kd. Caso seja
superior, o sistema perder toda a biomassa, situao que conhecida como wash-out. Isto
acontece porque max um parmetro biolgico intrnseco.
Aps inoculao de um bio-reactor, este dever operar durante algum tempo em descontnuo, antes de ser
iniciada a alimentao. A experincia indica que o tempo necessrio para atingir a situao de estado
estacionrio aps arranque do bio-reactor ou aps alterao da taxa de diluio corresponde a 3-5 tempos
de residncia da fase lquida.
140
= Dc =
max .Sr
Sr + Ks
Concentrao de
substrato no reactor
Assim, desprezando o valor de kd, pode-se substituir o valor de por max na equao:
dX
= ( D) . X
dt
Obtendo-se:
ln X = ln X 0 + ( max D ).t
141
Ks
Dm = max .1
Ks + Sr
Ks.D1
S1 =
max D1
Ks.D 2
S2 =
max D 2
Determinando-se os valores de Ks e max.
D1
D2
S1
S2
1 max
1
=
S Ks.D Ks
143
Balano ao substrato:
dS
V .dS = Q.So.dt Q.S .dt rS.V .dt
= D( S 0 S ) rS
dt
dS
= D(S0 S)
+ m X
dt
YX/S
Balano ao produto:
dP D
=
+ P X
dt YX / P
Concentrao celular, X
S0
Taxa de arrastamento (sada)
de clulas do reactor =
= Produtividade celular= D.X
Concentrao de substrato, S
A produtividade celular mxima obtm-se para taxas de diluio elevadas, mas isto corresponde a uma
zona de grande instabilidade, uma vez que aqui que a taxa de arrastamento de clulas para o exterior
(wash-out) maior. Logo, qualquer pequena variao no caudal, concentrao de substrato, etc. pode
causar o arrastamento total da biomassa para o exterior.
145
147
Qe
Xe
Se
Pe
Qo
Xo
So
Po
Qs
Xs
Ss
Ps
SEPARADOR
Purga de biomassa
QR
XR
SR
PR
Reciclagem
REACTOR
Qw
Xw
Sw
Pw
Balano biomassa
dX
= D. Xo + R.D. Xr D. X (1 + R ) + . X
dt
em que: R = QR/Qe (razo de recirculao) e D = Q/V
Supondo que Qe . Xe << QR. XR e como em estado estacionrio dX/dt = 0, vem que:
D=
1 R R 1
X
Balano ao substrato
dS
. X rP. X
= D.So + R.D.SR D.S .(1 + R )
dt
YX / S YP / S
149
Balano ao Produto
dP
= D.Pe DP + rP. X
dt
em estado estacionrio:
D.( Pe P) + rP . X = 0
Neste sistema possvel funcionar a concentraes celulares mais elevadas:
Xs = X .(1 + R R. )
em que =XR/X
X
X
D.X
XR
D
Representao grfica da evoluo da concentrao de biomassa no bio-reactor (X), na corrente de
recirculao/reciclagem (XR) e da produtividade em biomassa (D.X) para um sistema perfeitamente
150
agitado com um andar.
Classificao:
Mltiplos andares com uma s corrente;
Mltiplos andares com vrias correntes;
Mltiplos andares com recirculao.
Os sistemas com uma s corrente so uma cascata com uma nica entrada de meio que
constante em todos os outros andares. As suas caractersticas so:
Os ltimos andares no afectam os primeiros;
O primeiro andar comporta-se como um sistema perfeitamente agitado;
A taxa de diuio no pode ser modificada num andar sem mudar os outros;
A taxa nos vrios andares depende s do volume do bio-reactor:
Q=D1.V1=D2.V2=D3.V3
151
Biomassa
dXN
= D. XN 1 D. XN + N . XN
dt
Substrato
dSN
1
= D.SN 1 DSN
.N . XN
dt
YX / S
Produto
dPN
1
= D.PN 1 DPN +
.N
dt
YX / P
153
dXN Q
= .( XN XN 1)
dt V
Cintica do processo
descontnuo
Declive = D1
rX
Balano
mssico ao
reactor contnuo
Declive = D2
XN=1
X0
Contnuo
X0
descontnuo
XN=2
X
154
Quimiostato vs descontnuo
Considere-se que a taxa especfica de crescimento permanece no mximo. Ento, a durao
de uma cultura descontnua dada por:
Xm
+ t p
tc =
.ln
max X 0
1
O aumento da biomassa ser YX/S.Sr. Ento, a produtividade de uma cultura batch pode ser
calculada pela expresso:
Pbatch
Y.Sr
=
=
tc
max .Y.Sr
Xm
+ max .t p
ln
Xo
156
Quimiostato vs descontnuo
Em quimiostato, a produtividade dada pela expresso:
Pquimiostato
Pbatch
Xm
X m 0.693.t p
+ max .t p = ln
+
= ln
td
X0
X0
Em geral, Xm >> 10X0, pelo que ln (Xm/X0) 2.3. por outro lado, normalmente, tp > td.
Sistemas convencionais
Recuperao cara do produto;
Custo de capital elevado para aquisio do equipamento;
Bom para processos multi-enzimticos;
Menor concentrao de biomassa;
Elevados custos para controlo.
158
159
1.
2.
3.
4.
160
Tipo 1:
Polimerizao de uma soluo aquosa na qual as clulas so suspensas (ex.:
polimerizao da acrilamida originando cadeias de poliacrilamida reticuladas em N,N`metilenobio (acrilamida)). Esta tcnica tem o problema da toxicidade dos monmeros.
Tipo 2
Caracterizados pela existncia de uma membrana cuja porosidade no permite a
sada de clulas. Estas membranas devem ter elevadas resistncias mecnicas, trmicas e
qumicas. Como problemas associados a esta tcnica so: custo elevado, elevados gastos
energticos e possibilidade de aplicao de elevadas foras de corte nas clulas ( excepo
dos sistemas de fibras ocas hollow fibers).
162
Tipo 3
As clulas so agregadas em flocos ou pellets. A floculao pode ser natural ou
induzida por floculantes (polielectrlitos catinicos e/ou aninicos, hidrocolides minerais e
poliacrilato). Tambm pode ser utilizada a tcnica de reticulao entre clulas, recorrendo a
um agente reticulante (ex.: glutaraldedo), apesar deste mtodo reduzir a viabilidade celular.
Como desvantagens associadas a esta tcnica so: fracas propriedades mecnicas dos
agregados. As vantagens so: simplicidade e economia do processo.
Tipo 4
As clulas que saem do bio-reactor so centrifugadas e recicladas. Esta tcnica tem o
inconveniente dos elevados custos fixos de operao.
163
Corrente de sada
(1-c)Q, S, hX
V, X
X concentrao de biomassa
no sistema;
hX concentrao de
biomassa na corrente diluda;
cQ fraco de corrente de
sada com biomassa
concentrada.
Alimentao
Q, S0
Purga
Entrada de ar
cQ, X, S
164
dX
= . X c.D. X (1 c).D.h. X
dt
Em estado estacionrio:
= D.[c.(1 h) + h]
Exemplo: Considere um reactor com um volume til VR (m3), contendo clulas de levedura
imobilizadas em bolas de alginato de clcio com uma porosidade p e que, no reactor,
ocupam uma fraco de volume igual a S. As clulas contidas nas bolas de alginato tm
uma fraco de clulas viveis y e so responsveis pela produo em contnuo de etanol a
partir de glicose.
Vr = S VR p y
166
167
Aspecto de diversos bio-reactores utilizados para produo em larga escala.
Tanque agitado
,
essencialmente,
um
vaso
inferior,
colocado
uma
colocar
agitadores
Desvantagens:
Baixa eficincia na transferncia de oxignio;
Necessita de uma grande potncia de agitao;
Necessita de muita remoo de calor (devido grande potncia de agitao);
Com o aumento de escala a rea disponvel para transferncia de calor por unidade
de volume diminui muito;
A agitao pode provocar tenses de corte elevadas tornando-o pouco indicado em
algumas aplicaes (clulas ou agregados celulares sensveis);
Custos elevados de construo e operao devido grande potncia de agitao
necessria s selagens mecnicas que contm.
170
Coluna de bolhas
171
Vantagens
Reactor muito simples, com grande resistncia mecnica;
Construo muito barata com custos de manuteno baixos j que no possui
partes mveis;
Valores razoveis de transferncia de massa gs-lquido;
Possvel suspender partculas com clulas ou catalisadores imobilizados devido
pequena diferena de densidades entre a fase slida e a lquida;
O tipo de agitao (por circulao de ar) no induz tenses de corte que podem ser
prejudiciais no crescimento de clulas ou agregados celulares sensveis a este tipo de
foras.
Desvantagens
Deficiente grau de mistura o que implica baixa eficincia nas transferncias de
massa slido-lquido e lquido-lquido;
Devido a estas limitaes na transferncia de massa no pode ser usado em muito
grande escala pois os gradientes de concentrao na fase lquida seriam demasiado
172
significativos.
Airlift de circulao
interna e tubos
concntricos
Airlift de circulao
externa
173
P. Doran, Bioprocess Engineering Principles, Academic Press, 1995
No riser a densidade mais baixa porque o fludo uma mistura de gs e lquido o que faz
com que o fluido seja empurrado para cima;
No downcomer a densidade do fluido maior, aproximadamente igual densidade do
lquido. Isto faz com que o lquido seja empurrado para baixo;
Esta movimentao nos tubos ascendentes e descendentes responsvel pelo elevado
grau de mistura, que no topo do reactor (zona de desgaseificao) equivalente a de um
reactor perfeitamente agitado.
A transferncia de massa gs-lquido to eficiente como numa coluna de bolhas;
Devido ao tipo de agitao, as tenses de corte induzidas so tambm bastante
baixas adequados para bioprocessos envolvendo microrganismos imobilizados;
Devido s caractersticas do fluxo a capacidade para transferncia de massa e calor
muito aumentada ao mesmo tempo que se diminui a energia consumida para
agitao;
As tenses de corte no interior do bio-reactor so relativamente constantes quando
174
comparadas com um bio-reactor do tipo coluna de bolhas ou tanque agitado.
Leito fixo
Gas
175
Leito fluidizado
Boa mistura e baixa resistncia s transferncias de massa e
calor;
Gas
Variao de escala
179
Variao de Escala
Os estudos de variao de escala tm o objectivo de fornecer dados acerca do
comportamento de um bio-reactor de escala diferente mantendo rendimentos e
qualidade de produto quando se muda de escala (scale-up ou scale-down).
Problemas
heterogeneidade
(mistura,
transferncia
massa e calor)
180
de
de
Variao de Escala
181
Variao de Escala
Factores a considerar:
Transferncia de massa (oxignio);
Transferncia de calor;
Esterilizao;
Caractersticas fsicas do equipamento (impulsor; reactor);
Limpeza e desinfeco;
Formao de espuma.
182
183
184
Por exemplo:
HT/Dt = constante
ou
Dt/Di = constante
(para mltiplos
impulsores)
185
International Standards
eficincia e estruturais.
186
Razo
Valores tpicos
Ht/Hl
~ 0.70 0.80
Ht/Dt
~ 1.0 2.0
Da/Dt
1/3 1/2
Db/Dt
~ 0.08 0.10
W/Da
0.20
L/Da
0.25
E/W
1.0
Exemplo: Um bio-reactor tem volume total de 100.000 L. A sua geometria definida pelas seguintes
razes:
Dt:Ht = 0.50
Da:Dt = 0.33
Db:Dt = 0.10
Calcule as dimenses:
O volume de trabalho do reactor aproximadamente 0.7 0.8 do volume total.
187
188
V volume de trabalho/bio-reactor.
Qualquer um destes critrios pode conduzir alterao dos outros parmetros. Por exemplo,
o oxignio dissolvido pode tornar-se inferior ao seu valor crtico.
Esta abordagem no adequada por si s para se conseguir a transio de escala
189
aspectos importantes da maioria dos processos biolgicos so ignorados.
190
As respostas das suspenses celulares s tenses de corte pode variar com escala,
utilizando-se como critrio de scale-up a manuteno da velocidade da extremidade dos
agitadores entre as escalas laboratorial (Dlab) e industrial (Dind):
tm proporcional a 1/N.
Este critrio equivale a manter constante o nmero de rotaes do veio (N).
Por exemplo, para um sistema agitado por turbinas de Rushton com 6 lminas e em regime
turbulento, o n de rotaes do agitador por ciclo de homogeneizao dado por:
N.tc = V/(2.6Da3)
192
KLa = a.(PotG/V)b.uGc
Sendo PotG, a potncia dissipada com arejamento; V, o volume do bio-reactor; uG, a
velocidade linear do gs.
Num bio-reactor de grande capacidade, atravs de um ajuste frequente da velocidade
de agitao e do arejamento, conseguem obter-se taxas de consumo semelhantes s
do sistema em pequena escala.
Em bio-reaces onde a viscosidade do meio aumenta, possvel observar gradientes de
concentrao de oxignio dissolvido. Esses gradientes devem-se a tempos de mistura
relativamente elevados, quando comparados com os tempos caractersticos das taxas de
transferncia e consumo de oxignio.
Nesses casos, ser mais correcto usar a taxa de consumo de oxignio como
parmetro de aumento de escala.
193
uG = Qv.v.m. (HG/60)
Sendo HG a altura do lquido arejado no bio-reactor.
Vrios parmetros de scale-up (escala piloto bio-reactor de 10000 litros) utilizados em semelhanas
geomtricas (Lima e Mota, 2000)
Propriedade
Escala Piloto
(80 L)
P/V
constante
N
constante
N/D
constante
ND2/
constante
1.0
125
3125
25
0.2
Potncia fornecida/volume
do reactor (P/V)
1.0
1.0
25
0.2
0.016
Velocidade de rotao do
impulsor/agitador (N)
1.0
0.34
1.0
0.2
0.04
1.0
5.0
5.0
5.0
5.0
Capacidade de bombagem
do impulsor (F)
1.0
42.5
125
25
5.0
Capacidade de bombagem
do impulsor/volume do
reactor (F/V)
1.0
0.24
1.0
0.2
0.04
Velocidade mxima do
agitador (N/D)
1.0
1.7
5.0
1.0
0.2
N de Reynolds (ND2/)
1.0
8.5
25
5.0
1.0
195
196
Parmetro
Crescimento
1/
Consumo de substrato
1/qs
Consumo de oxignio
1/qO2
Mistura
tm
Transferncia de oxignio
1/KLa
Produo de calor:
Tempo caracterstico = T.Cp./HPR
Coeficiente
trmico do caldo
fermentativo
(J/Kg.K)
198
Tempos crticos dos mecanismos relevantes na produo de cido glucnico por Gluconobacter oxydans
(Fonseca e Teixeira, 2006)
Hidrodinmica/Fenmenos de transferncia
Transferncia de oxignio
8.4
12.3
20.6
442
Transferncia de calor
490
Converso
Consumo de oxignio
0.7 16
Consumo de substrato
5.5 104
Crescimento
1.2 104
Produo de calor
350
199
Interpretao:
O consumo de substrato um processo muito mais lento do que a circulao da
fase lquida o substrato ser disponibilizado de forma rpida e homognea por toda a
cultura;
Valores dos tempos crticos da transferncia de oxignio para a fase lquida e do seu
consumo semelhantes possibilidade de limitao de oxignio;
Tempo de circulao da fase lquida da ordem de grandeza do tempo crtico da
transferncia de oxignio para a fase lquida possibilidade de existncia de gradientes
de concentrao de oxignio;
Transferncia de oxignio da fase gasosa para a lquida mais lenta do que o tempo
de residncia da fase gasosa no se verificar esgotamento do oxignio na fase gasosa;
Tempo de circulao da fase lquida mais rpido que o calor gerado no existiro
gradientes de temperatura no interior do bio-reactor;
Esta anlise revelou que o mecanismo chave a ser estudado o fornecimento de
oxignio transposio de escala tomando como base a manuteno de tempos
crticos para a circulao do lquido e para o consumo de oxignio.
200
201
Modelao e simulao de
processos em bio-reactores
203
Armazenagem de matria-prima
Sub-produtos
Reciclagem de material
Resduos
Separao dos
produtos
Preparao da
alimentao
Reaco
Purificao dos
produtos
Armazenagem dos
produtos
Venda
Estrutura de um processo bioqumico.
204
SuperPro Designer
O SuperPro Designer (Batch-Pro, BioPro, EnviroPro, SuperPro) um software de projecto
em engenharia que efectua balanos mssicos, econmicos e atravs do qual
possvel avaliar com mais facilidade a viabilidade de um determinado processo
produtivo. Este programa uma valiosa ferramenta para engenheiros e cientistas em
desenvolvimento de processos em indstrias como farmacutica, qumica ou alimentar.
205
SuperPro Designer
Sumrio do procedimento utilizado no desenvolvimento de um projecto:
206
Produo de -galactosidase
207
Berkeley Madonna
Este software foi desenvolvido na Universidade de Berkeley, Califrnia, permitindo a
modelizao e anlise de sistemas dinmicos. Possui interfaces grficas para a anlise e
modificao de parmetros, e elaborao de diagramas de fluxo.
considerado o sistema mais rpido e flexvel para a resoluo de sistemas de equaes
diferenciais.
Uma verso de demonstrao pode ser obtida pelo endereo electrnico:
http://www.berkeleymadonna.com/
Ansys, Aspen Plus e Matlab so exemplos de outras ferramentas que podem ser utilizadas
na simulao computacional de processos e equipamentos.
208
Arejamento
210
Arejamento
Interface lquido-slido
Filme lquido
Local de reaco do
oxignio
Massa de
lquido
Clula individual
Bolha de
gs
Agregado celular
Local de reaco do
oxignio
Filme lquido
Clula individual
Interface gs-lquido
Filme lquido
QO2 =
Hold-up
O hold-up do gs em um dos parmetros mais importantes na definio das
caractersticas hidrodinmicas de um sistema.
A disperso de pequenas bolhas de gs resulta numa maior rea interfacial por unidade de
volume. Pequenas bolhas tm uma baixa velocidade de ascenso. Consequentemente, estas
esto mais tempo em contacto com o lquido, permitindo uma maior dissoluo do oxignio.
A fraco de fluido ocupado pelo gs designado por hold-up do gs volume de gs
no volume total gs-lquido. Bolhas de gs pequenas originam maiores valores de
hold-up.
VG
H=
VG + VL
H - hold-up; VG - volume de gs no bio-reactor; VL volume de lquido no bio-reactor.
213
A rea superficial de uma bolha (a) pode ser calculada atravs da expresso:
6H
a=
d
d ou d32 dimetro da bolha (dimetro mdio de Sauter) determinado pelo tamanho mdio
de gotas, directamente por fotografia de disperses.
VS
H=
VS + Vt
Foram desenvolvidas diversas expresses que permitem o clculo do hold-up para
214
diferentes modos de operao (com ou sem agitao, tipo de agitador utilizado, etc).
Arejamento
Em bio-reaces aerbias, a quantidade de oxignio a fornecer aos microrganismos
um factor extremamente importante na sua viabilidade e na produo de biomassa e
de produtos.
Os factores mais importantes na determinao da quantidade de oxignio necessria a
uma bio-reaco so:
Caractersticas
exigncias
dos
microrganismos/clulas
(espcie,
fase
de
215
dCL
= KL.a.(C * CL )
.X
dt
YO2
dCL/dt taxa global de transferncia de oxignio (mg/L.h)
KL coeficiente de transferncia de oxignio no meio lquido (m/h);
a rea interfacial efectiva das bolhas/volume das bolhas de gs no meio
(m2/m3);
C* - concentrao de saturao de gs no meio (mg/L);
CL concentrao de gs no meio (mg/L);
taxa especfica de crescimento dos microrganismos (h-1);
X quantidade de biomassa formada (g/L);
YO2 rendimento da cultura em biomassa, relativamente ao oxignio consumido
(gbiomassa/goxignio);
.X/YO2 taxa de consumo de oxignio pelos microrganismos;
KL.a.(C*-CL) taxa de transferncia de oxignio apenas no meio de cultura.
216
De facto, so vrios os factores que afectam o KL.a dos quais se destacam o grau de
agitao, a taxa de arejamento, as propriedades reolgicas do meio de fermentao e a
presena de antiespumantes. De facto, a transferncia de massa depende:
da solubilidade do gs no lquido;
mistura (uma maior mistura implica maior investimento e gastos energticos, provocando
tambm danos celulares);
rea interfacial entre as 2 fases (uma maior rea interfacial est relacionada com uma
maior transferncia de massa). Para aumentar a rea interfacial deve ser adicionado mais
material ao bio-reactor e/ou diminuir o tamanho da bolha;
viscosidade do lquido (quanto maior a viscosidade do lquido, menor ser a transferncia
de massa).
218
Cu2+/CO2+
Na2SO3 + O2
dCL
= K L a(C * CL )
dt
Na2SO4
No final da reaco CL
0, ento:
Limitaes do mtodo:
A reaco tem que ser rpida o suficiente para reduzir a concentrao no lquido at zero,
mas no to rpida que no seja possvel medi-la;
A reaco funo do pH, temperatura;
Influncia da qualidade da gua;
219
2 - Mtodo dinmico
C*
Declive =X./YO2
C*-CL
C*-C0
CL
C0
dCL
*
= k L .a. C CL
.X
dt
YO2
220
Representao grfica dos valores de CL = f(dCL/dt+.X/YO2) para duas condies distintas de arejamento.
C * C L
ln
C * C0
K L .a =
t t0
C*, CL e C0 so diferentes valores de concentrao de oxignio dissolvido mostrados na
Figura C = f(t).
Declive =X./YO2
Declive =X./YO2
222
Pg
K L .a = k u s
V
k L a = ku s
0, 4
Pg
0,6
0,7
Est
Pg = Np N d s
3
223
224
Agitao
A agitao uma operao fsica que uniformiza o fluido pela eliminao de gradientes
de concentrao, temperatura ou outras propriedades. Consiste num movimento tipocircular ou de vai-vem exercido sobre o material contido num recipiente.
no-mecnica
Agitao
mecnica
arejado
no-arejado
Baixa velocidade
de agitao
Elevada velocidade
de agitao
225
ncora
Hlice
Turbina
Ps
ncora
Parafuso
Tipos de impulsores.
226
P. Doran, Bioprocess Engineering Principles, Academic Press, 1995
Tipo de fluxo
Dimenso
Velocidade de
rotao
Hlice
Parafuso
Axial
Axial
Pequena
Da > 0.45 m
Alta
400-1800 rpm
Lminas fazem
Formato
ngulo diferente
de 90 com o
eixo
Grande
Baixa
Ps
Radial e
tangencial
Turbina
Radial
Grande
Pequena
Da 90 % Dt
Da = (30-50%) Dt
Baixa
20-150 rpm
Ps planas
Ps em ncora
Alta
Lminas planas ou
curvas; verticais ou
inclinadas
Evitar a
Lquidos poucos
Aplicaes
viscosos
Suspenses
diludas
Pastas (sabo,
alimentos, etc)
Polpa de papel
formao de
Lquidos de
depsitos nas
diversas
paredes
viscosidades
Lquidos
Turbulncia elevada
viscosos
228
Fluxo radial:
229
Anteparos
Os anteparos previnem a formao de vrtices e
a existncia de excesso de mistura axial mesmo
com impulsores de fluxo radial.
Zona de estagnao
Efeito da colocao dos anteparos junto da parede do reactor ou ligeiramente afastados, permitindo a
circulao volta do anteparo.
230
(PA)n = n.(PA)
231
Potncia na agitao
O consumo de potncia para agitao (PA) de fluidos no arejados uma funo das
propriedades fsicas do fluido (massa especfica e viscosidade), condies de
operao (velocidade de agitao N), e geometria do tanque e do impulsor
(dimetro DA).
PA n1.n2.DAn3.N.n4.gn5
Nmeros adimensionais na agitao
Nmero de potncia
PA
NP =
5
3
L .N .DA
Nmero de Reynolds
D A . N . L
2
Re A =
232
D A .N 2
FrA =
g
Este nmero representa a razo entre as foras desenvolvidas pelo agitador e a fora
de gravidade. A formao de vrtices est associada ao nmero de Froude.
WeA =
DA .N . L
Funo potncia
Nos casos em que o valor da tenso superficial no afecta a mistura:
N P = K (Re) a A .( Fr ) b A
Define-se funo de potncia () como a razo entre o nmero de potncia e o nmero
de Froude:
NP
a
=
=
K
(Re)
A
b
( Fr ) A
Nos tanques sem anteparos (onde pode ocorrer a formao de vrtices e o nmero de
Froude importante) o exponente b pode ser calculado atravs da expresso:
m log(Re) A
b=
p
O valor de m e de p encontra-se na tabela seguinte, de acordo com o tipo de impulsor:
234
Tipo de impulsor
1.0
40.0
18.0
2.3
18.0
1.7
18.0
Hlice com 3
lminas
O movimento de rotao d
ao fluido um movimento
helicoidal,
uma
rotao
completa move o fluido
longitudinalmente a uma
distncia fixa, dependendo
do ngulo das lminas do
impulsor. A razo entre esta
distncia e o dimetro do
impulsor chamada passo
do agitador.
235
236
Perry & Green (1999)
Nmero de potncia
237
- Regime de transio (hlices: 10 < ReA < 1000; turbinas: 10 < ReA < 10000); no h
relao constante entre NP e ReA.
238
KL
3
2
NP =
PA = K L N DA
Re A
Regime turbulento no h vrtices, no varia com ReA = constante (KT)
N P = K T PA = K T N DA
3
dv
mdio = C 0.N
dr
C0 constante de proporcionalidade
N velocidade de rotao
Exemplo:
Para agitao de fluidos pseudo-plsticos C0: Ps planas (11-12); Ps curvas (7); Turbina
de lminas planas (11); Hlice (10); ncora (20-25).
2n
dv
D
(
N
)
n 1
A
mdio = 11.N ap = K c (11N )
Re A =
dr
K C (11) n 1
2
N P = C1 (Re i )
Dt
ht
Dt
Larguras das
lminas
Dimetro do
tanque
Sendo:
DA N n
0.1K C 6n + 2
2
Re i =
2n
Rei > 50
C1
32
11
-0.9
-0.4
-0.05
-1.7
-1.7
-1.2
0.4
0.5
0.9
241
PAG
PA 2 NDA3
= 0.15
0 .56
Q
G
0 .45
D
PA = g . S .VS .ut .(1 ) 2 / 3 . t .e 4.35
DA
VS volume da suspenso
Dt dimetro do tanque
DA dimetro do impulsor
= (volume de lquido)/(volume total da
suspenso)
= (HL-HA/Dt)-0.1
g ( P ) DP
ut =
18
243
Correlao entre o n
de potncia e o n de
Reynolds
para
Rushton,
hlice.
Doran (1995).
244
( Dt / Di ) * ( H L / Di ) *
fc =
( Dt / Di )( H L / Di )
245
NQg =
Qg
ND 3
246
Formao de espuma
247
Antiespumante
248
249
Mistura
250
Mistura
Mistura um processo que aumenta a homogeneidade de um sistema.
251
Mecanismos de mistura
Corte a mistura ocorre por aco de camadas do fluido, deslocando-se ao longo umas
das outras (ocorre em fluxo laminar);
Troca partculas movem-se aleatoriamente (ocorre em fluxo turbulento);
Difuso difuso molecular.
Modelizao da mistura
Para a modelizao da mistura em bio-reactores necessrio conhecer diversas
caractersticas do sistema, destacando-se:
Tempo de residncia (tR) mdio dos elementos do lquido;
Concentrao do componente numa determinada posio num determinado
tempo;
Direco axial e velocidade mdia na direco axial;
Nmero de Bodenstein (razo entre o fluxo mssico por conveco e o fluxo
mssico por disperso).
252
253
Tempos de mistura em tanque agitado. Linhas a tracejado para tanques sem anteparos; linha slida para
tanque com anteparos (McCabe, 2001).
254
Correlao para tempos de mistura para lquidos miscveis em tanque agitado com turbina e com
anteparos (McCabe, 2001).
255
Mtodo da reaco qumica sem importncia para processos biotecnolgicos, uma vez
que a sua principal vantagem reside na possibilidade de efectuar medies escala
molecular (desnecessrias em bio-reaces).
257
258
Esterilizao
259
Esterilizao
Esterilizao pelo calor seco utilizado quando se trabalha com materiais resistentes a
altas temperaturas (por exemplo, vidro). Para este efeito recorre-se a estufas que atinjam
temperaturas da ordem dos 160-180 C. Estas temperaturas vo promover a oxidao e a
desnaturao das protenas eliminando os seres vivos contaminantes. Contudo, apesar de
clulas vegetativas serem destrudas a menos de 100 C, os esporos podem ser muito
resistentes aos tratamentos trmicos.
A incinerao, consiste na queima directa do material pelo fogo (por exemplo, esterilizao
de ansas no bico de Bunsen, eliminao de lixos slidos dos hospitais)
260
O comprimento de onda com maior poder bactericida o de 265 nm. Este tipo de
esterilizao limitada a superfcies, uma vez que se tratam de radiaes pouco
penetrantes.
A radiao acstica de alta frequncia (ultra-sons) tambm , por vezes, utilizada na
esterilizao de materiais.
Os raios catdicos so feixes de electres com intensidade e velocidades elevadas,
circulando num tubo com vcuo. Estes feixes so utilizados na esterilizao de equipamento
cirrgico previamente lavado.
265
266
Comprimento de onda
Intensidade
Distncia da fonte
Durao
267
268
269
Luz UV
270
0.2 m
Membrana de nitrocelulose
271
Suportes
272
Receptculo
com filtro estril
Colector
273
Agentes qumicos
No antibiticos
274
Parede celular
Membrana plasmtica
Ligao cruzada entre macromolculas
Intercalao de DNA
SH
Oxidao
275
Agentes qumicos
lcoois
Glutaraldedo
Clorhexidina
Halogneos
Metais pesados
Perxido de hidrognio
Fenis
Esterilizantes gasosos
276
Caractersticas de um desinfectante
Ser barato;
277
278
Em alguns casos
necessrio um
pr-tratamento qumico!
dN
= K d .N
dt
K d = K d 0 .e
E / RT
281
A taxa especfica uma constante para cada estirpe num determinado meio e
depende fortemente da temperatura
fungos
Vrus
1
3 106
2-10
1-5
Temperatura ( C)
Kd
100
0.02
110
0.21
120
2.1
130
17.5
282
N
1
K d DT
=
=e
N 0 10
Tempo de
reduo decimal
N0
1
t=
ln
Kd
N
Tempo necessrio:
Inversamente proporcional temperatura empregada
Directamente proporcional carga microbiana no material
Dependente do tipo de microrganismos presentes
284
100
50C
% de viveis
10
70C
60C
0.1
tempo
285
esporo
286
Esporulao
Germinao
287
% de viveis a 121C
100
Esporo
10
1
Cl. vegetativa
0.1
Tempo (min)
10
288
Intrnsecos
Baixo teor de gua
Pequenas protenas solveis em cido
cido dipicolnico
Ca2+
289
Extrnsecos
pH neutro
Altas concentraes de gorduras, protenas, acares
gua
290
2.303 E
log10 DT = log10
+
a
RT
Representando esta equao num grfico semi-logartmico:
log10 DT
1/T
291
Factor de Esterilizao Fo
Uma vez que a gama de temperaturas durante a esterilizao relativamente pequena,
pode-se, aproximadamente, simplificar o grfico anterior e representar log DT em
funo da temperatura T (C ou F) atravs de uma recta:
DT
10
Fo
1.0
z
0.1
T2
121.1 C
T1
T (C)
292
Da definio de Fo resulta:
No
Fo = D121.1C log10
N
1
log10 DTo log10 DT = (T To )
Z
121.1T
DT = D121.1.10
293
F = DT .10
T 121.1
No
. log10
N
F = t . 10
T 121 . 1
(Z em C)
294
Microrganismo
Fo (min) Z (C)
Produto alimentar
________________________________________________________________________
Clostridium botulinum
0.1-0.3
8-11
Clostridium sporogenes
0.8-1.5
9-11
Carnes
Bacillus stearothermophilis
4.0-5.0
9.5-11
Leite e hortalias
Clostidium thermosaccharolyticum
3.0-4.0
7-10.5
Hortalias
Bacillus subtilis
3.0-4.5
4.1-7.2
Produtos lcteos
_______________________________________________________________________
F =
10
0
T 121 , 1
dt
295
296
N0
= ln
N
Quando
O factor de projecto para reduzir o n de clulas a zero igual a infinito. Isto indica que
teoricamente impossvel garantir a eliminao de todas as clulas viveis.
297
N0
dN
=
= K d 0 dt ln
= K d .t
N 0 dt
N
0
N
N0
= ln
= K d 0 e E / RT dt
N
0
298
No entanto:
Os meios de cultura no possuem 1 nico tipo de microrganismo a ser destrudo;
299
2.303
t=
Kd
Clculo do tempo de destruio trmica baseado na probabilidade de falha
P = (n de microrganismos no destrudos/n total de microrganismos) x 100
N0
1
ln
t=
Kd
P
300
Esterilizao em descontnuo
A esterilizao de meio de cultura num bio-reactor pode ser efectuada em descontnuo.
A esterilizao de um produto conseguida atravs de um plano temperatura vs tempo
convenientemente escolhido. Normalmente o processo de esterilizao compreende as
seguintes fases:
Aquecimento do produto at temperatura de esterilizao permanente (injeco
directa de vapor perfil de temperatura hiperblico; aquecimento por resistncia elctrica
perfil de temperatura linear; aquecimento por vapor circulante perfil de temperatura
exponencial);
Operao/esterilizao a uma temperatura permanente (usualmente 121 C);
Arrefecimento (usualmente, atravs da circulao de gua numa camisa ou serpentina
perfil de temperatura exponencial).
301
Temperatura
Permanncia
Numa
Aquecimento
esterilizao
em
descontnuo, as 3 etapas
contribuem para a reduo
do n de microrganismos
contaminantes.
Arrefecimento
Tempo
302
testerilizao
Autoclave horizontal
Autoclave vertical
305
Manmetro
Sada de vapor
Vlvula para sada
de vapor
Porta
Cmara de
vapor
Termmetro
Vlvula de
segurana
Entrada de
vapor
306
A temperatura alta mantida durante algum tempo poder alterar a composio do meio de
cultura;
307
t Permanncia
Permanncia
=
Kd
Esterilizao em contnuo
O meio recentemente preparado actua, geralmente, como fluido de arrefecimento;
Posteriormente, aquecido (mistura com vapor ou atravs de um permutador de calor);
Percorre a clula holding;
Sofre um arrefecimento gradual at chegar ao bio-reactor;
O tempo de residncia , geralmente, igual ao tempo de esterilizao.
310
Esterilizao em contnuo
Este processo apresenta algumas vantagens comparativamente ao modo de esterilizao em
descontnuo, nomeadamente:
Minimizao do espao requerido;
Reprodutibilidade do sistema;
Possibilidade de operao a alta temperatura e baixo tempo (HTST e UHT);
Requer menos vapor de gua (consequentemente menos gua para aquecimento),
pois recupera vapor do meio a esterilizar;
Sistema mais fcil de automatizar, requerendo menor trabalho do operador.
311
312
t Rpermanncia
L
=
u
permanncia
N0
= ln
= K d .t R permanncia = K d 0 .e E / RT .t R permanncia
N
Numa pasteurizao, uma clula holding consiste num tubo em espiral ou zig-zag, coberto ou
no por uma cpsula metlica que previne acidentes por contacto com a superfcie quente e
diminui as perdas de calor para o exterior. O comprimento do tubo e o caudal a escoar so
calculados de modo a que o tempo de residncia no tubo, o holding time, seja igual ao tempo
de pasteurizao requerido. Uma combinao adequada de permutadores de calor e de
clulas holding permite obter processos eficientes e economicamente optimizados.
313
A pr-esterilizao envolve:
Tratamento com gua quente mesma temperatura a que se vai efectuar a
esterilizao do produto, com uma durao mnima de 30 minutos a partir do momento
em que atingida, em todas as partes da instalao, a temperatura pretendida.
314
total permanncia
Desvio ao fluxo pisto ideal na clula holding
Backmixing contacto de elementos de volume j esterilizados com outros que ainda
podero conter clulas viveis.
Estes desvios so traduzidos pela extenso da disperso axial. O nmero de Peclet (Pe) da
disperso axial uma medida da importncia relativa do transporte de massa por conveco
e por disperso:
u.L
Pe =
Dz
315
Mtodo de clculo:
1 Especificar o valor de P
desejado;
2 Determinar N0 no sistema:
3 Ler Kd.t a partir do grfico;
4 Sabendo o valor de Kd para o
microrganismo contaminante,
obtm-se o valor de t.
Mtodo de clculo:
1-P = 1-ln(N0/N)
Kt = Kd.t
316
Pasteurizao
Processo recomendado para eliminar microrganismos patognicos e/ou reduzir a
populao de microrganismos presentes em determinados alimentos (por exemplo,
leite).
Essencialmente,
empregado
para
produtos
que
possuem
caractersticas
Cerveja
pH > 4.5:
Leite
Destruir leveduras
indesejveis
Destruir patognicos
Destruir outros
microb. & enzim. 63 C (30 min); 71.5 C (15 s)
Ovo lquido
Destruir Salmonella spp.
Destruir outros
microb.
64.4 C (2.5 min); 60 C (3 min)
_________________________________________________________________________.
318
319
320
Permutador
de Placas
321
Permutador Tubular
322
Permutador de Carcaa-e-Tubos
Sada do
tubo interno
Entrada no
tubo interno
Sada da
seco anular
324
Permutador de Superfcie
Raspada
325
326
Esterilizao do ar
A esterilizao do ar de entrada e de sada de um bio-reactor tem a finalidade de prevenir a
sua contaminao.
Mtodos:
Em bio-reactores at aproximadamente 10 m3 utiliza-se filtrao.
Para bio-reactores maiores que 10 m3 a opo pela membrana torna-se muito cara.
Actualmente, utiliza-se vapor para a esterilizao.
327
Definio
dos
procedimentos
fortemente
caractersticas da unidade processual.
dependentes
das
328
329