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MATERIALES Y METODOS
El organismo y su cultivo.
B. stearothermophilus se aisl a partir del suelo (15). A menos que se indique
lo contrario, la bacteria se cultiv en matraces estacionarios a 50 0,5 C en
un medio basal de la siguiente composicin: peptona, 0,4%; (NH4) 2HPO4,
0,4%; licor de maz, 0,4%; KCI, 0,1%; MgSO4 7H2O, 0,05; y almidn (Difco
Laboratories), 0,3%.
El pH del medio se ajust a 7,0. Las porciones (50 ml) del medio basal se
esterilizaron en autoclave en matraces Erlenmeyer de 250 ml y se utilizan para
el cultivo bacteriano. El rendimiento de la amilasa se estim en el fluido
extracelular despus de la eliminacin de las clulas bacterianas del caldo de
cultivo por centrifugacin a 10.000 xg (0 a 4 C) durante 10 min. Las clulas
se lavaron y se suspendieron en agua destilada para la medicin del
crecimiento en cubetas (trayectoria de la luz, 1 cm) a 610 nm en un
espectrofotmetro Beckman DU-2 espectrofotmetro a fondo.
Ensayo de amilasa.
La amilasa en el filtrado del cultivo se ensay mediante los mtodos de
Bernfeld (3). La enzima se precipit a partir del filtrado de cultivo con acetona
previamente enfriado para estudiar la estabilidad del pH, estabilidad trmica, y
el pH y la temperatura ptimos de la enzima. El ensayo de amilasa en cada
caso se realiz por triplicado. Una unidad de actividad de dextrinizacin se
expres como la cantidad de enzima requerida para disminuir el color de
almidn-yodo por unidad de 0,05 densidad ptica a 610 nm por minuto, y 1
unidad de actividad de sacarificacin se expres como la cantidad de enzima
requerida para liberar 1 mg de maltosa por minuto.