OBJETIVOS

Objetivos General
Objetivos Especficos

Comprobar la desnaturalizacin y coagulacin de las protenas.

Realizar ensayos de precipitacin de protenas al mezclarlas con sales de
metales pesados, o con reactivos cidos.
Verificar la importancia de la reaccin de Biuret para el reconocimiento de
las protenas.

TEORIA RELACIONADA
Las protenas son un grupo de biomolculas caracterizados por su gran variedad
estructural y enorme diversidad de funciones biolgicas. Las protenas de cada ser
vivo, animal o vegetal son especificas ya que estas codificadas por su genoma. A
pesar de que desempean la misma funcin, las protenas presentan diversas
variaciones estructurales en las diferencias especies. Qumicamente pueden
diferenciarse en protenas simples, constituidas nicamente por aminocidos y
protenas complejas que contienen material adicional como carbohidratos, lpidos
o cidos nucleicos.
Las protenas pueden variar sus caractersticas de solubilidad mediante
alteraciones en el medio acuoso en el que hallen disueltas. Cuando una protena
se disuelve en agua, las fuerzas hidrofilicas, electrostticas y los puentes de
hidrogeno, participan positivamente, aportando un mayor grado de solubilidad
entre ms efectivas sean estas interacciones. Sin embargo factores fsicos como
el calor, radiaciones, variaciones en los valores de pH y la presencia de solventes
que afectan estas interacciones, pueden producir serias alteraciones en la
solubilidad. Algunas veces pueden ocurrir cambios en la estructura nativa de la
protena y se considera que en estas condiciones la protena se ha
desnaturalizado. El fenmeno fsico observado en este caso, es la informacin de
un coagulo o proceso de coagulacin.

PROCEDIMIENTO
1. Determinacin del punto de coagulacin de una protena y
demostracin de la desnaturalizacin: se rotulo 2 ensayos con la letra A
y B, agregamos a cada uno 405 ml de solucin de albumina de huevo. Se
agreg 0.5 ml de buffer pH 407 al tubo A.
Colocamos los tubos en un bao de Mara y aumentamos la temperatura en
forma gradual anotando cualquier cambio en los tubos y la temperatura a la
que ocurre. Continuamos calentado hasta la ebullicin del gua y
prolongamos el calentamiento por 5 min ms, separamos el tubo A y lo
dejamos enfriar y agregamos 4 ml de Buffer pH 407, llevamos al balo de
agua caliente hasta ebullicin. Determinamos si el precipitado que se ha
formado, redisuelve despus de enfriar o diluir con agua.
2. Precipitacin de protenas
a) Precipitacin con sales metlicas: en una serie de tubos se
adiciono en cada uno 1 ml de solucin ALBUMINA de huevo, se
adiciono a uno 4 gotas de solucin de cloruro mercurio al 2%, al
segundo 4 gotas de la solucin de acetato de plomo al 2%, ms 3
gotas de cido actico y al tercero 4 gotas de sulfato cprico al 2%,
obsrvese cuidadosamente la formacin o no de precipitados.
Explique, repetir el procedimiento de casena y luego por solucin de
gelatina.
b) Precipitacin con reactivos acidicos: en tres tubos de ensayo
coloque en cada uno 1.5 ml de solucin de casena: adale al
primero 3 gotas de una solucin acuosa saturada de cido pcrico, al
segundo igual cantidad de una solucin de cido tnico al 10% y al
tercero 3 gotas de una solucin acuosa de ferrocianuro de potasio y
1 gota de cido actico al 10%. Observe lo que ocurre, repetir el
procedimiento remplazando la solucin de casena por albumina.

MATERIALES Y REACTIVOS

10 tubos de ensayo
1 pinza para tubo de ensayo
1 estufa o calentados
1 Beaker de 400 ml
1 gradilla
1 termmetro
Reactivo de Biuret
Acido pcrico saturado
cido actico 10%
Buffer pH 4.7
Soluciones: albumina, casena y gelatina
Acido tnico al 10%
Sulfato cprico al 2%
Ferrocianuro de potasio acuoso
Acetato de plomo al 2%
Cloruro de mercurio al 2%

ANALISIS DE RESULTADOS
A) SALES METALICAS
Para la precipitacin con sales metlicas se implementaron 3 tubos de ensayos en
los cuales se agregaron 1 ml de solucin de albumina en cada uno de los tubos,
identificndolos de la siguiente forma:
Tubo N 1= (AA); Tubo N2= (AB); Tubo N3= (AC).
TUBO N1 (AA): una vez agregado 1 ml de solucin de
Albumina se procedi a agregrsele 4 gotas de cloruro
de mercurio (HgCl2) al 2%; luego de realizada la
mezcla de estos compuestos se pudo observar una
pequea concentracin de precipitado en el fondo del
tubo. A la vez, se not un poco de precipitado disuelto
en la totalidad del lquido, de igual forma se observ un
cambio en la coloracin del lquido a un todo un poco
ms blanco.

TUBO N2 (AB): se realiz una mezcla en un tubo de

ensayo utilizando 1ml de solucin de albumina, 4 gotas
de acetato de plomo ((CH3COO)2Pb) y 3 gotas de cido
actico (CH3COOH). Una vez realizada dicha mezcla se
pudo observar un cambio de coloracin en el compuesto
formado y el tono se volvi un poco ms blanco, adems
de esto, la reaccin no arrojo ningn tipo de precipitado y
se mantuvo todo el tiempo en estado lquido.

TUBO N3 (AC): en el tubo de ensayo AC se adiciono 1 ml de solucin de

albumina mezclado con 4 gotas de sulfato de cobre (CuSO4), en este tubo
se pudo observar que la reaccin entre estos dos compuestos origino un
cambio en su coloracin y esta paso de un tono transparente a un tono un
poco ms azul, tambin se observ que la reaccin no arrojo ningn tipo de
precipitado y se mantuvo todo el tiempo en estado lquido.

continuacin se pueden observar en la imagen 4. El

resultado de estas reacciones con los cambios

presentados una vez finalizadas dichas mezclas.

B) PRECIPITACIN CON REACTIVOS ACIDICOS

En el punto B de las precipitaciones de protenas se realiz a base de una
solucin de casena a 1.5 ml, con el fin de identificar la precipitacin obtenida por
medio de reactivos acidicos, se utilizaron 3 tubos de ensayo con esta sustancia los
cuales identificamos de la siguiente forma:
TUBO N1= (BA); TUBO N2= (BB); TUBO N3 (BC).
TUBO N1= (BA): luego de haberse disuelto 1.5 ml de
solucin de casena, se procedi a agregrsele 3 gotas
de cido pcrico el cual reacciono de inmediato dndole
una coloracin diferente a dicha mezcla, esta paso a un
tono amarillo y adems de esto se observaron una gran
cantidad de precipitado el cual se mantuvo presente en
todo el medio, la solucin permaneci en menos cantidad
de forma lquida, mientras que el resto se not en forma
de precipitado.


TUBO N2= (BB): Para este punto una vez
realizada la mezcla de 1.5 ml de solucin de casena y 3
gotas de cido tnico al 10%, se pudo observar un
resultado en el cambio de la coloracin del medio, pasando
a un tono oscuro, mientras que no se present ningn tipo
de precipitado, el medio se mantuvo todo el tiempo en
forma lquida.
TUBO N3= (BC): en el tubo BC se disolvi 1.5 ml de solucin de
casena, a la cual se le adicionaron 3 gotas de ferrocianuro de potasio,
una vez realizada esta mezcla de sustancias se pudo observar un cambio
de coloracin en el medio, pasando a un tono un poco amarillo, casi
transparente, no se present ningn tipo de precipitado en el medio y la
solucin se mantuvo en su estado lquido.

A continuacin podemos observar los cambios presentados en cada uno de los

tubos de ensayo en los cuales se realizaron dichas mezclas.

C) PRECIPITACION CON SALES METALICAS UTILIZANDO CASEINA

Esta vez se realiz una mezcla de sustancias utilizando casena en una
concentracin de 1 ml en tres tubos de ensayos diferentes, los cuales
identificamos de la siguiente forma

TUBO N1= (CA); TUBO N2 (CB); TUBO N3 (CC)

TUBO N1= (CA): en el primer tubo de ensayo se le adiciono 1 ml de
casena, al cual le agregamos 4 gotas de cloruro de mercurio al 2%,
durante la reaccin se pudo observar un cambio en la coloracin del
compuesto pasando a un tono un poco ms blanco, al mismo tiempo se
pudo notar que arrojo un poco de precipitado en la totalidad del medio y
hubo una pequea concentracin de este en el fondo del tubo, se pudo
observar que la sustancia permaneci en estado lquido.
TUBO N2 (CB): una vez agregado 1 ml de solucin de casena y
mezclado con 4 gotas de acetato de plomo al 2%, ms 3 gotas de cido
actico, se pudo observar que no existi ningn tipo de reaccin y el medio
continuo en su estado natural, la coloracin de este permaneci en un tono
transparente, no se present ningn precipitado y el medio permaneci en
estado lquido.
TUBO N3 (CC): para el tubo CC despus de realizada la mezcla entre 1
ml de solucin de casina y 4 gotas de sulfato cprico, el compuesto general
de esta reaccin permaneci en estado lquido, su concentracin presento
una serie de burbujas en pequea cantidad y la coloracin del medio
permaneci en un tono transparente, esto significa que no existieron
grandes cambios en esta reaccin.

D) PRECIPITACION CON SALES METALICAS UTILIZANDO GELATINA

En el punto D, se adiciono 1 ml de solucin de gelatina en 3 tubos de ensayos
diferentes, los cuales se pusieron a reaccionar con diferentes compuestos y se
observaron y analizaron los cambios presentados en estos, hemos identificado los
tubos de la siguiente forma:
TUBO N1= (GA); TUBO N2 (GB); TUBO N3 (GC)
TUBO N1= (GA): para el tubo GA se adiciono 1 ml
de gelatina el cual se puso a reaccionar con 4 gotas
de cloruro de mercurio al 2%, en esta mezcla no se
presentaron grandes cambios, ya que el medio
permaneci en su estado natural, con tono de
coloracin transparente y no se present precipitado
en el medio.

TUBO N2 (GB)
TUBO N3 (GC)
E) PRECIPITACIN CON REACTIVOS ACIDICOS EN MEDIO DE CASEINA
Se implementaron 3 tubos de ensayos en los cuales se agregaron 1.5 ml de
solucin de casena y se identificaron de la siguiente forma:
TUBO N1= (C1A); TUBO N2 (C1B); TUBO N3 (C1C)
TUBO N1= (C1A): en el tubo de ensayo C1A se adiciono 1.5 ml de
solucin de gelatina, al cual se le agregaron 3 gotas de cido pcrico y se
pudo observar un cambio de coloracin en el medio presentndose un tono
amarillo, no arrojo ningn tipo de precipitado y la solucin del medio
permaneci en estado lquido.
TUBO N2 (C1B): para el C1A se mezcl 1.5 ml de solucin de gelatina con
3 gotas de cido tnico al 10%, el medio permaneci en su estado natural
(liquido), adems se observ que no hubo cambio de coloracin y

permaneci en un tono transparente, no se present ningn tipo de

precipitado.
TUBO N3 (C1C): luego de reaccionar 1.5 ml de solucin de gelatina con 3
gotas de ferrocianuro de potasio, se pudo observar un cambio de coloracin
en el medio, este se present en un tono un poco amarillo y no arrojo
ningn tipo de precipitado en la solucin final, adems de esto el medio
permaneci en estado lquido.

F) PRECIPITACIN CON REACTIVOS ACIDICOS EN MEDIO GELATINA

Se implementaron 3 tubos de ensayos en los cuales se agregaron 1.5 ml de
solucin de gelatina y se identificaron de la siguiente forma:
TUBO N1= (G1A); TUBO N2 (G1B); TUBO N3 (G1C)
TUBO N1= (G1A): Luego de agregada 1.5 ml de solucin de gelatina se le
adiciono 3 gotas de cido pcrico y se pudo observar un cambio de
coloracin en el medio, presentndose con un tono amarillo, no se
presentaron precipitados en esta solucin y el medio se conserv en un
estado un poco gelatinoso.
TUBO N2 (G1B): en el tubo G1B se mezcl 1.5 ml de solucin de gelatina
con 3 gotas de cido tnico y se pudo observar que el medio permaneci

en un tono transparente, su consistencia permaneci un poco gelatinosa y

no se present ningn tipo de precipitado.
TUBO N3 (G1C): para el tubo N 3 luego de realizada la mezcla entre 1.5
ml de solucin de gelatina y 3 gotas de ferrocianuro de potasio se observ
un cambio de coloracin en el medio, pasando a un tono un poco amarillo,
no en igual tonalidad que en el G1A pero si un poco ms fuerte que el G1B,
de igual forma que en los tubos anteriores el medio permaneci en un
estado gelatinoso y tampoco se presentaron ningn precipitado en l.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Consultar en forma clara y breve en que cosiste la desnaturalizacin
de las protenas.
Desnaturalizacin: Consiste en la prdida de la estructura terciaria, por
romperse los puentes que forman dicha estructura. Todas las protenas
desnaturalizadas tienen la misma conformacin, muy abierta y con una
interaccin mxima con el disolvente, por lo que una protena soluble en
agua cuando se desnaturaliza se hace insoluble en agua y precipita. La
desnaturalizacin se puede producir por cambios de presin y temperatura,
variaciones del pH, determinadas radiaciones electromagnticas (agentes
fsicos) as como los cambios en concentracin salina o determinadas
sustancias qumica como la urea (agentes qumicos). En algunos casos, si
las condiciones se restablecen, una protena desnaturalizada puede volver
a su anterior plegamiento o conformacin, proceso que se denomina
renaturalizacin.
La desnaturalizacin de las protenas tambin se da e por la exposicin de
estas a:
Calor
La luz ultravioleta.
cidos y bases.
Solventes orgnicos.
Sales de iones metlicos pesados.
2. Explique qu sucede cuando el cabello se somete a los tintes de iris y
alisado, este proceso es reversible o irreversible?
3. Explique porque las pezuas, los cuernos, las uas, el cabello y las
plumas no se disuelven con el agua.
4. Consultar de que depende la solubilidad de las protenas.
La solubilidad de una protena depende de los siguientes factores:
De su composicin en aminocidos: una protena rica en aminocidos
polares es, en general, ms hidrosoluble que una protena rica en
aminocidos hidrofbicos.
De su estructura tridimensional: las protenas fibrosas son, en general,
menos solubles que las globulares.
Del entorno de la propia protena: La temperatura, la constante dielctrica
del medio, el pH del mismo y la fuerza inica son los principales factores
ambientales que influyen en la solubilidad de una protena.

La solubilidad es debida a los radicales (-R) libres de los aminocidos que,

al ionizarse, establecen enlaces dbiles (puentes de hidrgeno) con las
molculas de agua. As, cuando una protena se solubiliza queda recubierta
de una capa de molculas de agua (capa de solvatacin) que impide que se
pueda unir a otras protenas lo cual provocara su precipitacin
(insolubilizacin). Esta propiedad es la que hace posible la hidratacin delos
tejidos de los seres vivos.
5. Explique cuando es positiva la reaccin de Biuret, escriba la reaccin.
La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que
se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -) que se destruye al
liberarse los aminocidos.
Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se
forma una sustancia compleja denominada Biuret.
Debido a dicha reaccin fue que observamos que al agregar el reactivo de
sulfato de cobre mas solucin de protena precipito una coloracin violeta.
Quedando en el fondo del tubo una tonalidad azul cielo reaccin positiva.
Precipitando a una coloracin amarilla la reaccin nos torna negativa al no
haber presencia de protenas.
La reaccin debe su nombre al Biuret, una molcula formada a partir de dos
de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta
reaccin.
La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la
reaccin del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin
acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de
un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de
coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos
del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos presentando un
mximo de absorcin a 540 nm.

Da positiva esta reaccin en

todos los compuestos que
tengan dos o ms enlaces
peptdicos consecutivos en
sus molculas.
6.

Consulte
otras
tcnicas
utilizadas para la cuantificacin

de protenas.
Mtodo de Biuret
Se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH
de los enlaces peptdicos en medio bsico. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH. La
intensidad de coloracin es directamente proporcional a la cantidad de protenas
(enlaces peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que pocas
sustancias interfieren. La sensibilidad del mtodo es muy baja y slo se
recomienda para la cuantificacin de protenas en preparados muy concentrados
(por ejemplo en suero).
Mtodo de Bradford

Se basa en la unin de un colorante, Comassie Blue G-250 (tambin Serva Blue)

a las protenas. El colorante, en solucin cida, existe en dos formas una azul y
otra naranja. Las protenas se unen a la forma azul para formar un complejo
protena-colorante con un coeficiente de extincin mayor que el colorante libre.
Este mtodo es sensible (1-15 g), simple, rpido, barato y pocas sustancias
interfieren en su determinacin. Entre las sustancias que interfieren estn los
detergentes y las soluciones bsicas.
Mtodo de BCA
El cido bicinconnico, sal sdica, es un compuesto capaz de formar un complejo
prpura intenso con iones Cu1+ en medio alcalino. Este reactivo forma la base de
un mtodo analtico capaz de monitorizar el ion cuproso producido en una
reaccin entre las protenas con Cu2+ en medio alcalino (reaccin de Biuret). La
estabilidad del reactivo y el cromforo proporciona un mtodo para la
cuantificacin de protenas que es sencillo, rpido, muy sensible, y que muestra
una gran tolerancia a compuestos que afectan a otros mtodos.
OHProtena + Cu2+ Cu1+
Cu1+ + BCA complejo prpura BCA- Cu1+

BIBLIOGRAFIA

http://tux.uis.edu.co/quimica/sites/default/files/paginas/archivos/V00Man10B
ioqca_MFOQ-BQ.01_08072013.pdf
https://es.scribd.com/doc/16795723/Informe-N%C2%BA5-laboratorio-debioquimicaI
http://es.slideshare.net/profesorjano/propiedades-proteinas
https://es.scribd.com/doc/22934028/proteinas-info03
http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.pdf