PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DE CHILE

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

FISIOLOGA VEGETAL
BIO 211G

GUA DE LABORATORIO

Profesor Encargado de Ctedra:

Profesores Encargados de Laboratorio:

1er Semestre Acadmico

2015

Dr. Mara Fernanda Prez Trautmann

Martin Carmona Ortiz.
Patricia Crdova Alfaro.
Juan Velozo Soto.

Reglas generales del trabajo de Laboratorio

El trabajo de laboratorio ser grupal, debiendo los alumnos organizarse en grupos de cinco
personas, o como se determine por los profesores encargados.

Cada grupo ser asistido por un ayudante, ste supervisar el trabajo de laboratorio del
grupo, durante el semestre.

En cada paso prctico se realizar un informe grupal al final de la sesin, el que deber ser
entregado el mismo da. Adems, se darn tareas las que sern entregadas en la fecha que
se indique.

Al comienzo de cada paso prctico se realizar un control de entrada, el que evaluar

conocimientos terico-prcticos, referido a las actividades de la sesin correspondiente.

El siguiente material se considera obligatorio para el trabajo de los alumnos en el

laboratorio: DELANTAL blanco, lpiz pasta azul o negro, lpiz grafito, goma de
borrar, regla milimetrada y su gua de laboratorio.

El requisito de asistencia a esta actividad es un 100%, debiendo justificarse cada ausencia

en su Secretara de Escuela, quien emitir informe al profesor encargado.

La entrada al laboratorio es a las 14:30 horas (salvo que se indique otra cosa). Los
alumnos que lleguen atrasados sern calificados con nota 1.0 en el control
correspondiente.

Los bolsos y mochilas deben quedar guardados en casilleros fuera del laboratorio.

I FLUJO DE AGUA EN LA CELULA VEGETAL

El agua es un fluido formado por una molcula polar. Esta molcula forma puentes de hidrogeno
entre si y con otras substancias orgnicas, esta caracterstica permite que se encuentre en estado
lquido a temperatura ambiente a pesar de su bajo peso molecular. Adems, los puentes de
hidrogeno le confieren un alto calor especfico, un alto valor de calor latente de vaporizacin,
debido a ello, tanto organismos vegetales como animales pueden ajustar su temperatura corporal
cuando pierden agua por transpiracin. Sumado a lo anterior, el agua tiene una constante
dielctrica alta, siendo un solvente fuerte para substancias como sales, azcares y protenas entre
otros. El conjunto de estas propiedades, permiten que el agua sea el solvente y medio de
transporte ms adecuado para la ocurrencia de las actividades metablicas en los organismos
vivos.
Ya que las molculas en un fluido estn en constante movimiento, el estado termodinmico del
agua en un sistema dar cuenta de su movilidad. Si el sistema no est en equilibrio, se producir
un movimiento aleatorio neto de sustancias llamado difusin. Es decir, ocurrir flujo de
molculas desde un lugar de mayor Potencial qumico (energa libre, J mol-1) a uno de menor
potencial. Cuando la difusin del agua ocurre a travs de una membrana, este fenmeno se
denomina osmosis, y es el fenmeno que explica el movimiento del agua a nivel celular.
Para referirse al estado termodinmico del agua los fisilogos vegetales han desarrollado el
concepto de potencial hdrico (). Este concepto es una expresin del potencial qumico del
agua, entendido como la diferencia de potencial qumico del agua en un sistema, respecto al
potencial qumico del agua pura. Sin embargo, esta diferencia es referido al volumen molal
parcial del agua, bajo condiciones estndares de temperatura, presin y altura (J/m3 =Pa). Como
consecuencia de esta forma de expresin de la energa libre del agua, el resultado se expresa en
unidades de presin (Pa). As por definicin, el potencial hdrico del agua pura es cero. Como la
energa libre del agua es afectado por la presin, la matriz que la contiene, la aceleracin de
gravedad y por la concentracin de los solutos en solucin, cada uno de estos factores se
convierte en una variable del potencial, siendo entonces, el potencial hdrico total del agua, igual
a la suma de los factores. La unin del agua a los solutos disminuye la energa libre del agua para
realizar trabajo, este efecto es denominado potencial de solutos (s, ecuacin 2). Por otro lado,
el agua en la clula vegetal est expuesta a la resistencia de la pared celular al incremento de
volumen, esta fuerza es conocida como potencial de presin (p). En las clulas vegetales, el
potencial hdrico ser entonces igual a la suma algebraica del potencial osmtico y el potencial de
presin (ecuacin 1), considerndose los efecto matriciales y gravitacionales constantes a nivel
celular.
1.- h = p + s
2.- s = -iCRT
donde

i
C
R
T

= constante de ionizacin (nmero de especies en solucin)

= concentracin en moles/l
= constante de los gases (0.0083 L MPa. mol-1 K-1)
= temperatura en grados Kelvin (273K+C)

Experimento 1.- Determinacin del potencial de solutos en tejido epidrmico.

El objetivo de esta experiencia es determinar el potencial de solutos del tejido epidrmico foliar.
Primero es necesario considerar que cuando se produce el fenmeno de plasmlisis incipiente en
una clula (prdida de agua con un cambio mnimo del volumen), el valor del potencial de
presin tendr valor cero, y entonces, el valor del potencial hdrico ser igual al valor del
potencial de solutos. En un tejido se considera que esta condicin se cumple cuando el 50% de
las clulas se encuentran en plasmlisis, es decir, las clulas muestran una reduccin significativa
del volumen que ocupa la vacuola, mientras en el resto de clulas, el estado de plasmolisis es
indetectable. Como es muy difcil evidenciar la plasmolisis celular, usted usar tejidos
epidrmicos que acumulan antocianinas en sus vacuolas, de esta manera, al mirar el tejido al
microscopio podr evidenciar el fenmeno de plasmolisis. La metodologa que usaremos para
determinar el potencial de solutos, se basa en encontrar el estado de plasmlisis incipiente de un
tejido en una batera de soluciones conocidas. En la situacin anterior se cumple h = s; y
como conocemos la solucin donde ocurre esto podremos determinar el valor de s.

Procedimiento:
A partir de una solucin madre de sacarosa 0.8 m, prepare siete tubos de ensayo, conteniendo 10
ml de solucin con las siguientes molaridades: 0.0; 0.35; 0.45; 0.50; 0.55, 0.60 y 0.70 m. Cada
tubo deber ser rotulado con la concentracin correspondiente.
Obtenga muestras de epidermis de catfilo de Cebolla morada (Allium cepa): ubique una zona de
epidermis interna del catfilo que presente color y obtenga trozos de epidermis con un bistur y un
par de pinzas, las muestras de epidermis deben ser ubicadas inmediatamente en la solucin
respectiva. Si es posible, coloque varios cortes en cada tubo de ensayo (los mejor coloreados).
Espere 30min y luego retire los trozos de epidermis. Coloque cada corte en un porta objeto y
aplique una gota de solucin de la cual proviene la muestra. Estire el tejido con agujas de
diseccin y cubra la muestra con un cubre objeto.
Observe las muestras en un microscopio con el objetivo 40X. En el campo visual, cuente las
clulas plasmolizadas y no plasmolizadas, no considere las clulas no pigmentadas. Los datos de
cada observacin deber registrarlos en la tabla 1.
Para obtener resultados confiables deber repetir la actividad anterior, a lo menos tres veces por
cada muestra, de esta manera reducir los posibles errores de muestreo.
Transforme los resultados en porcentaje y utilice estos datos para realizar un grfico (Fig. 1).
Para ser ms exacto en la determinacin de la solucin en que ocurre la plasmolisis incipiente,
obtenga la ecuacin de la recta que representa la dispersin de los datos y determine el valor
exacto de concentracin de sacarosa donde ocurre la plasmlisis incipiente. Use el valor de
concentracin determinado en el punto anterior para calcular el s, considere la temperatura
ambiente a 20C, y el valor de i igual a 1 (uno punto cero), ya que este soluto no se disocia.

Tabla 1. Grado de plasmlisis en funcin de la concentracin de sacarosa.

Concentracin de sacarosa (m)
0.00 0.35 0.45 0.50 0.55 0.60

Clulas
Plasmolizadas
No plasmolizadas

0.70

N de clulas
% de clulas
N de clulas
% de clulas

Figura 1. Grado de plasmlisis de un tejido vegetal en relacin a la concentracin de sacarosa.

%
p
l
a
s
m
o
l
i
s
i
s

100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
sacarosa (m)

Valor del potencial de solutos = ___________ MPa

Experimento 2.-Determinacin del potencial hdrico mediante el mtodo gravimtrico.

Cuando un tejido se encuentra en una solucin con el mismo valor de potencial hdrico, este
tejido no pierde ni gana biomasa, ello debido a que el desplazamiento de agua es nulo. En el caso
del mtodo gravimtrico, el potencial hdrico se determina por variaciones de la biomasa de un
tejido cuando ste es expuesto a diferentes soluciones de un soluto conocido. La solucin en la
que el tejido no experimente variacin de biomasa, tendr el mismo valor de potencial hdrico
que la muestra.
Procedimiento:
A partir de una solucin madre 0.4m de sacarosa, prepare siete tubos de ensayo conteniendo 10
ml de cada una de las siguientes soluciones: 0.0; 0.24; 0.28; 0.30; 0.32, 0.34 y 0.38 m. Estas
soluciones deber prepararlas por duplicado.
Los siguientes pasos deben ser realizados lo ms rpido posible. Usando un sacabocados, obtenga
cilindros de tubrculos de papa (Solanum tuberosum), de 3cm de longitud (elimine el sber). Los
cilindros deben ser lavados con agua potable para retirar restos celulares, y luego secados
suavemente con toalla de papel. Proceda a masar los cilindros en una balanza analtica, y coloque
cada uno en las soluciones preparadas previamente. Cada tubo de ensayo deber ser rotulado con
el nmero de la muestra y la concentracin de la solucin. Despus de 90min, debe retirar las
muestras de tubrculo, secarlas suavemente con toalla de papel y nuevamente pesarlas. Estos
resultados deben ser registrados en la tabla 2. Para los valores obtenidos calcule la diferencia de
peso de cada muestra (Pf-Pi)), finalmente estandarice este valor dividindolo por el peso original
((Pf-Pi)/Pi). Construya un grafico que relacione los valores promedio de la variacin de biomasa
respecto a la concentracin de sacarosa (Fig. 2).
Con la serie de datos obtenidos, usted deber determinar el potencial hdrico inicial del tejido; sin
embargo, como es muy posible que no encuentre una solucin en que el delta biomasa sea cero,
deber entonces realizar una regresin lineal de los datos y determinar el valor de concentracin
cuando la variacin de biomasa es cero, slo entonces podr conocer el potencial hdrico del
tejido.

Tabla 2. Determinacin del potencial hdrico

Sacarosa [molal]

0.0

0.24

0.28

0.30

0.32

0.34

0.38

Peso inicial (mg)

Peso final (mg)
Ganancia o prdida de
agua (mg)
Ganancia o prdida por g
de peso original

Figura 2.
Sacarosa

Variacin del contenido de agua de trozos de papa en diferentes soluciones de

ganancia o
prdida/gramo de
peso original

-1
sacarosa (m)

Experimento 3.- La "clula artificial" de Traube.

El fenmeno de osmosis y la direccin del flujo de agua, puede ser demostrada mediante una
membrana artificial. En este experimento, se formar una membrana por reaccin qumica de dos
sales. Coloque algunos cristales de ferrocianuro de potasio (K4[Fe (CN) 6]) en un vaso de
precipitado (100ml) que contenga 30 ml sulfato de cobre CuSO4 (5% p/v). Observe los cristales
durante 10 minutos, y registre los cambios que ocurren. Realice un esquema de sus
observaciones.

La reaccin que se produce es la siguiente:

2CuSO4 + K4 [Fe(CN)6] = 2K2SO4 + Cu2 [Fe(CN) 6]

a) Cul es la causa ltima que genera la diferencia de potencial hdrico entre la solucin de
CuSO4 y el cristal de ferrocianuro de cobre?, explique.
b) Por qu colapsa el cristal de ferrocianuro de cobre despus de un tiempo?