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LOJA
MANUAL DE PROCEDIMIENTO
LOJA- ECUADOR
2014
DEPARTAMENTO CIENCIAS DE
LA SALUD
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
CLNICA E INMUNOLOGA
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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NDICE
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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NDICE
1. INTRODUCCIN
2. OBJETIVOS
3. DISPOSICIONES GENERALES
5
6
EN FORMACIN
6. PROCEDIMIENTO DE PRACTICAS
8. DILUCIONES
9. ANTGENOS DE SUPERFICIE DE GRUPOS
11
17
SISTEMA ABO.
10.
PRUEBA
RPIDA
DE
AGLUTINACIN
22
PLACA. AGLUTINACIONES FEBRILES
11.
TCNICAS
DE
AGLUTINACIN
30
11.1 Determinacin de la Protena C-Reactiva Prueba
en porta. (PCR- Ltex)
11.2 Determinacin de Factores reumatoideos Prueba
en porta. (FR Ltex)
11.3 Determinacin de Anti- Estreptolisina O. Prueba
en porta. (ASLO-Ltex)
12.
DIAGNOSTICO SEROLGICO DEL ANTGENO
13.
VDRL DETERMINACIN DE REAGINAS
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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1. INTRODUCCIN
El correcto desarrollo de cualquier tipo de prcticas de laboratorio, implica la
necesidad de contar con elementos apropiados que permitan establecer los
fundamentos y metodologas sobre el trabajo a realizar. As mismo es
necesario marcar algunas consideraciones sobre las reglas de seguridad,
condiciones para trabajar dentro del laboratorio.
La prctica de laboratorio es el tipo de clase que tiene como objetivos
instructivos fundamentales que los estudiantes adquieran las habilidades
propias de los mtodos de la investigacin cientfica, amplen, profundicen,
consoliden, realicen, y comprueben los fundamentos tericos de la asignatura
mediante la experimentacin empleando los medios de enseanza necesarios,
garantizando el trabajo individual en la ejecucin de la prctica.
El laboratorio debe estar dotado de una serie de infraestructuras que ayuden al
desarrollo de las actividades, garanticen su adecuado funcionamiento, y la
minimizacin de riesgos.
OBJETIVO
Brindar a los alumnos a establecer la aplicacin de los fundamentos tericos de
los programas docentes, y a encontrar en este conjunto de conocimientos una
herramienta de apoyo.
1.
2.
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2. DISPOSICIONES GENERALES
Todos los docentes, se acogern a los horarios establecidos.
Todos los docentes, reportarn de manera obligatoria al responsable
del laboratorio,
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de manera
verbal o escrita.
Est prohibida la salida de accesorios y/o partes de los instrumentos
depositados en el Laboratorio, as como la apertura del mismo sin un
4.
5.
docente responsable.
Queda prohibido el consumo de bebidas y alimentos en el Laboratorio.
El material corto punzante debe ser depositado en el recipiente rojo
(guardianes), que se encuentra justo a lava manos; la basura generada
en cada clase, deber quedar lista para su eliminacin de acuerdo con
la normativa vigente y colocados en sus bolsas respectivas de acuerdo
6.
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CODIGO
PRCTICA
Revisin tcnica: Natalia
Bailon
Cargo: Responsable de
Seccin
Fecha: 27/07/2013
01
02
03
04
05
06
07
08
IMN001
IMN002
IMN003
IMN004
IMN005
IMN006
IMN007
IMN008
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Diluciones
Antgenos de superficie de grupos sanguneos. Sistema ABO
Prueba rpida de aglutinacin o placa. Aglutinaciones febriles
Tcnicas aglutinacin. Determinacin de FR, ASTO y PCR
Diagnstico serolgico. VDRL
Inmunocromatografia Antgenos de superficie de Hepatitis B
Determinacin de BHCG
ELISA. Helicobacter Pylori IgM, Helicobacter Pylori IgG
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OBJETIVOS
TIPO
Terica
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
La dilucin es la reduccin de la concentracin de una sustancia en una
disolucin. Consiste en rebajar la cantidad de soluto por unidad de volumen de
disolucin. Se logra adicionando ms diluyente a la misma cantidad de soluto:
se toma una poca porcin de una solucin alicuota y despus esta misma se
introduce en ms disolvente.
Adems consiste en aadir a un volumen de muestra biolgica tantos
volmenes de diluyente (agua destilada, solucin salina, buffer) como sean
necesarios para obtener la dilucin deseada, la misma tiene como
consecuencia inmediata la disminucin de la concentracin de los diferentes
componentes de la muestra.
Las diluciones son las soluciones con concentracin menor obtenidas al
agregar volmenes conocidos de diluyente a una solucin de concentracin
conocida. Las diluciones se expresan en forma de una proporcin, por ejemplo
1/10 (1:10) donde la primera cifra o numerador (1) corresponde al volumen de
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placa
EQUIPOS
Micropipetas
de
REACTIVOS
Diluyente (agua destilada,
volumen variable
translucida
MATERIAL BIOLGICO
Toma de muestras
Transporte
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
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METODOLOGA
DILUCIN SIMPLE
Para preparar una dilucin, mezcle un volumen especfico de la muestra o
espcimen (ej. Suero) con un cierto volumen de un diluyente. Recuerde que
para preparar la dilucin siempre agregue primero el diluyente y seguidamente
la muestra (ej. Suero), finalmente mezcle en forma adecuada.
En un caso simple, una parte de suero una parte igual de diluyente producirn
una dilucin de (o 1:2). La expresin 1:2 representa la relacin de la
cantidad de partes de suero con el nmero total de partes, en este caso
representa una parte de suero y una parte de diluyente para un total de dos (2)
partes. Una muestra pura de suero, es decir, que no contenga ninguna parte de
diluyente se representara por la relacin 1/1 (o1:1), es decir el total de partes
es una (1) y est representada nicamente por la muestra.
Dado que en una dilucin lo que se indica es la relacin entre el volumen de la
solucin original y el volumen total en que se encuentra, una dilucin 1/10
puede prepararse de diferentes maneras:
Por ejemplo:
1 ml de muestra en 9 ml de diluyente
0.1 ml de muestra en 0.9 ml de diluyente
0.5 ml de muestra en 4.5 ml de diluyente
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
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Ejemplo N2
Prepare exactamente 200 ml de una dilucin 1/50.
Sustituyendo los valores conocidos tenemos:
1/d=1/50
Vm=?
Vt= 200 ml
As:
1/50=Vm/200
despejando Vm tenemos que Vm=200 x 1/50=4 ml
volumen de diluyente = volumen total-volumen de muestra
volumen de diluyente = 200-4=196 ml
Sin embargo, las diluciones directas tienen el inconveniente de que cuando es
necesario hacer una dilucin alta por ejemplo 1/ 10 000, se desperdicia mucho
reactivo o se incurre en un error de medicin. As, una dilucin 1/ 10 000 se
preparara con 1 ml de muestra y 9 999 ml de diluyente o bien 9.999 ml de
diluyente y 0.001 ml de muestra.
DILUCIN SERIADA
Este tipo de dilucin soluciona los inconvenientes que presenta el clculo
directo de las diluciones altas. La diferencia entre la dilucin de dos tubos
consecutivo se conoce como factor de dilucin, siendo 2, 4 y 10 los ms
usados. En el ejemplo de la dilucin 1/ 10 000, la muestra se puede diluir 1/
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100 (Vm= 0.1 ml + Vt= 10 ml) en un primer tubo y colocar 0.1 ml de esta
dilucin en un segundo tubo con 9.9 de diluyente. El segundo tubo tendr una
dilucin 1/ 100, sin embargo como la muestra ya se encuentra diluda
previamente 1/ 100, multiplicando sus denominadores tenemos:
1/ 100 x 1/ 100= 1/ 10 000
En este caso el factor de dilucin es de 100. Debe insistirse en que solo el
primer tubo lleva la alcuota de la muestra sin diluir, los dems tubos toman la
alcuota ya diluida del tubo previo.
El nmero de tubos y las diluciones intermedias se plantean considerando el
volumen de los tubos as como el volumen mnimo que se puede medir fcil y
exactamente con las pipetas disponibles.
Cmo lograr exactamente 30 ml de una dilucin 1:2000?
REPORTE DE LA PRCTICA
UNIDADES DE MEDIDA (VOLUMEN)
En la mayora de los casos en las precipitaciones de las diluciones se utilizan
pequeos volmenes tanto del espcimen como del diluyente, estos volmenes
generalmente se encuentran en el orden de los microlitros (l). Recuerde que 1
ml es igual a 1000ul y que 1 l es igual a 0,001ml, trate de familiarizarse con
las conversiones de ml a l y viceversa.
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Clculo
Una dilucin de 1/100 puede prepararse mezclando 1 parte de suero con 99
partes de diluyente. Por ejemplo 1 ml + 99ml (total de partes: 100; volumen
final 100 ml). Ahora bien, si mantenemos la relacin de volumen de suero y la
del diluyente necesaria para preparar una determinada dilucin (como en este
ejemplo; dilucin 1/100:1+99). Podemos variar los volmenes de cada uno de
ellos y se obtendr la misma dilucin.
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Abbas, A., Lichtman, A. y Pober, J. (1999). INMUNOLOGA CELULAR Y
MOLECULAR. 3 Edicin. Interamericana- McGRAWHILL.
2. Roitt, I. (1998). IMUNOLOGIA FUNDAMENTOS. 9 Edicin. Editorial
Mdica Panamericana. Espaa.
3. Roitt, I., Brostoff, J. y Male, David. (2000). INMUNOLOGIA. 5 Edicin.
Ediciones Harcourt. Espaa.
4. http://es.scribd.com/doc/79773831/Practica-1-Guia-de-Diluciones-2
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anticuerpo.
Conocer los tipos sanguneos ms importantes y discutir la importancia
de la identificacin del grupo sanguneo en la prctica clnica.
TIPO
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
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Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
Los eritrocitos poseen en su membrana sustancias antignicas determinadas
genticamente,
las
cuales
pueden
identificarse
mediante
anticuerpos
grupo
sanguneo
es
una
forma
de
agrupar
ciertas
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MATERIALES Y METODOS
MATERIALES
EQUIPOS
Micropipetas de 50l
Microscopio
Palillos
Agitador
Portaobjetos o placa
mecnico
translucida
REACTIVOS
Suero anti-A (grupo B)
Suero anti-B (grupo A)
Suero anti-D (grupo O)
MATERIAL BIOLGICO
METODOLOGIA
1. Obtener aproximadamente 3mL de sangre venosa y colocarla en un tubo
sin anticoagulante EDTA.
2. Rotular un portaobjetos de la siguiente manera A, B y O. Sobre el
portaobjetos se depositaran 3 gotas de sangre (25ul o gotas de
aproximadamente 0,5 cm de dimetro) bien separadas.
3. Sobre cada gota se pipetean 25ul de antisuero. El orden recomendado
es A, B, D.
4. Homogenizar mezclando suavemente con los palillos y despus con
movimientos rotatorios en el agitador mecnico, durante 3 minutos.
5. Determinar la aglutinacin e interpretar el resultado. Puede utilizarse el
microscopio en caso de reaccin muy dbil.
REPORTE DE LA PRCTICA
Grupo A
Grupo B
suero anti-A.
Si aglutina a los 3 minutos con el Y no aglutina con el suero anti-A.
Grupo AB
suero anti-B.
Si aglutina con el suero anti-A.
Grupo 0
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CUESTIONARIO
1. Cul es antgeno y anticuerpo? Qu funcin cumple cada uno de
ellos?
2. Por qu el tipo de sangre O se le considera donador universal, y al
AB, receptor universal?
3. Cul es la importancia de la determinacin de los grupos sanguneos y
su factor Rh, en una transfusin?
4. Cul es su grupo de sangre y su factor Rh?
5. Cuntos grupos sanguneos existen y cules son los ms conocidos?
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Bird,
G.
W.G.
and
Cunningham,
J.
1977.
Agglutination
and
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ESQUEMA
METODOLOGA
1
Tubo tapa
lila con
EDTA
Rotular
Rotular
Depositar
Obtener
sangre
venosa
A, B, O
3 gotas
de sangre
Total:
Total: 3
3 ml
ml
4
Depositar
Depositar
3 gotas de
Antisuero A, B y
D
Homogeniz
ar
Con
palillos
Colocar
Determinar
Agitador
mecnic
o
Aglutinaci
n
REPORTAR
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TIPO
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
Son un conjunto de pruebas que sirven para diagnosticar enfermedades que
causan fiebre. Se basan en que el suero del paciente se pone en contacto con
antgenos especficos. En este caso se utilizan suspensiones de Salmonellas o
Brucellas muertos. Si la muestra contiene los anticuerpos correspondientes se
producir una aglutinacin visible macroscpicamente.
Antgenos Febriles es un trmino referido a un grupo de suspensiones
bacterianas, representativo de un nmero de bacterias patgenas para la
especie humana y responsables de la aparicin de infecciones (brucelosis,
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
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Toma de muestras
Transporte
METODOLOGA
PRUEBA CUALITATIVA
1. Obtenga sangre venosa y separe el suero evitando la hemlisis.
2. Atemperar los reactivos.
3. Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antgeno que
se est usando.
4. Colocar en una placa una gota (50 ul) de suero y agregar una gota (50
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80 l
40 l
PIPETEAR
20 l
10 l
5 l
1:40
Paratfico B
1:40
Tifico O
1:80
Tifico H
1:160
Brucella abortus
1:40
Proteus Ox-19
1:80
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VALORES DE REFERENCIA
de
enfermedad
cuando
estn
acompaados
de
la
sintomatologa clnica.
Ttulos mayores de 1:32, son concluyentes.
ALTERNATIVAS
Es importante considerar siempre algunos estudios de laboratorio adicionales
que aporten elementos de juicio con los cuales elaborar un diagnstico ms
slido.
CUESTIONARO
1. En qu se basa la prueba de reacciones febriles
2. Para qu nos sirve la prueba de reacciones febriles?
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
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Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
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Atempera
rr
Obtener
sangre
venosa
Centrifuga
rr
Separar el
suero
Tubo tapa
roja sin
anticoagulant
e
Reactivos
Total: 3 ml
Homogeniz
Homogeniz
ar
Colocar
Marcar el
antgeno que se
usa
50l de
suero
50l de
antgeno
Con
palillos
11
10
Colocar
Colocar
Observar
REPORTAR
Agitador mecnico
Aglutinaci
n
2 minutos
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ESQUEMA
PRUEBA CUANTITATIVA
Para
c/muestra:
pipetear
80, 40, 20 y 5
ul SUERO
Homogeniz
ar
1 gota de
ANTIGENO
en c/muestra
Palillos
Colocar
Agitador
mecnic
o
Observa
r
2
minutos
REPORTAR
Aglutinaci
n
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TIPO:
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION:
La prueba de PCR ltex se basa en una reaccin de aglutinacin de las
molculas biolgicamente inertes de poliestireno ltex
sensibilizadas con
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PCR Aumentada
Fiebre reumtica
Espondilitis anquilosante
Infarto de miocardio
Carcinomas
entre
Inflamaciones agudas
Artritis reumatoide
ellas,
mediante
complemento
la
la
activacin
aceleracin
de
del
la
fagocitosis.
En el diagnstico clnico, el resultado de la
Infecciones bacterianas
Tras cirugas
de
volumen variable
Palillos
Placa con fondo
oscuro
de
EQUIPOS
Agitador
REACTIVOS
mecnico Kit para PCR
Solucin salina (NaCl
rotatorio de velocidad
0,9%, para tcnica
variable
Cronmetro
semi-cuantitativa)
seis
divisiones
MATERIAL BIOLGICO
Toma de muestras
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Transporte
METODOLOGA
Preparacin de los reactivos
Mezclar con suave agitacin antes de usar. El ltex debe presentar aspecto
uniforme.
PRUEBA CUALITATIVA
1. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
2. Resuspender el vial de ltex con suavidad. Aspirar y vaciar varias veces
el cuentagotas para asegurar su homogeneidad antes del ensayo.
3. Depositar 1 gota (50 L) de suero problema en uno de los crculos de la
tarjeta visualizadora. En crculos adicionales, depositar 1 gota de control
positivo y 1 gota de control negativo.
4. Aadir a cada crculo 1 gota del Reactivo PCR-Ltex, prxima a la
muestra a analizar.
5. Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable, extendindola de
forma que cubra por completo la superficie interior de cada anillo.
Emplear palillos distintos para cada mezcla.
6. Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos.
7. Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la aparicin
de cualquier signo de aglutinacin.
REPORTE DE LA PRCTICA
Reaccin
Aglutinacin
dbil
intensa, Nivel
de
PCR
igual
positiva
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LA SALUD
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CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
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Vlido
01/06/201
desde: 3
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
fcilmente
32 de 88
macroscpicamente.
muestra.
Reaccin
negativa
Resultados
PRUEBA CUANTITATIVA
1. Para cada muestra a analizar se utilizan 6 crculos de una tarjeta
pipeteando 50 L de solucin salina (0,9%) en cada uno de ellos.
2. Pipetear sobre el diluyente del primer crculo 50 L de muestra, y
empleando
la
misma
punta,
mezclar
mediante
aspiraciones
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desde: 3
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
33 de 88
1:64
4. Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en los pasos 47 de la Prueba cualitativa.
REPORTE DE LA PRCTICA
En el mtodo semicuantitativo se define el ttulo como la dilucin mayor que da
resultado positivo.
La concentracin aproximada de PCR en la muestra del paciente se obtiene
aplicando la siguiente frmula:
6 mg/l x Ttulo de PCR = PCR mg/L
Ejemplo: la muestra presenta un ttulo de 1:2.
Su concentracin de PCR es de 2 x 6 = 12 mg/l.
VALORES DE REFERENCIA
Valores de Ttulos de PCR
Hasta 6 mg/L
CUESTIONARIO
1. Cul es la base del prueba de PCR ltex y para qu sirve?
2. Qu es la artritis reumatoide y que relacin guarda con la PCR?
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
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desde: 3
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
34 de 88
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Young,
D.S.
(1995).
EFFECTS
OF
DRUGS
ON
CLINICAL
roja sin
Espaa.
anticoagulant
4. http://www.cromatest.mx/Insertos/Serodiagnostico%20Reumatoide/PCR
e
%20LATEX.pdf
Obtener
5. sangre
http://www.linear.es/ficheros/archivos/2410025_cas_.pdf
sangre
venosa
Pipeta
Pasteur
Total: 3
ml
ml
Control positivo
Micropipe
ta
40l (1
gota)
Control
negativo
negativo
Homogeniz
ar
PCR
Ltex
40l
40l de
de
suero
Reactivo
PCR
PCR
Ltex
Centrifuga
rr
Atempera
r
Reactivos
Homogeniz
Homogeniz
ar
Colocar
En cada
una de las
muestras
Recoger
el suero
suero
el
Agitador mecnico
80-100rpm por 2
min
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
40l (1
gota)
35 de 88
Observar
REPORTAR
Aglutinaci
n
Microscopio en caso
de reaccin dbil
Para c/muestra: 6
crculos de
tarjeta
Pipetear 50 l
(sol. salina
0,9%)
Pipetear sobre el
diluyente del 1
crculo 50 L de
muestra
Transferir 50 L
de la mezcla
resultante sobre
el diluyente del
2 crculo
50 l
muestra
Elaborado: Andrea
Con la misma
Mediante
aspiraciones
Vintimilla Revisin
y
Bailon
expulsiones
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
50 l mezcla
resultante
tcnica: Natalia
Cargo: Responsable de
Seccin
Fecha: 27/07/2013
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desde: 3
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
36 de 88
Continuar dobles
diluciones hasta el
sexto crculo,
desechando los 50
L del mismo
Diluciones finales:
1:2, 1:4, 1:8, 1:16,
1:32, 1:64.
Reactivo
Reactivo
PCR
Ltex
Ltex
Aadir a c/
crculo 40l
(1 gota)
Coloca
2
minutos
Homogeniz
ar
Agitador
mecnic
o
Observa
r
REPORT
AR
Aglutinaci
n
Palillos
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
37 de 88
TIPO
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
El FR-Ltex Test es una prueba rpida de aglutinacin, que se basa en la
determinacin que se efecta ensayando una suspensin de partculas de ltex
recubiertos con gamma globulina humana frente a los sueros problema. La
presencia o ausencia de aglutinacin visible es indicativa de la presencia o
ausencia de FR en las muestras ensayadas.
Los factores reumatoideos son un grupo de anticuerpos, mayoritariamente de
la clase IgM, dirigidos contra determinantes de la porcin Fc de la
inmunoglobulina
IgG
del
paciente.
Aunque
presentes
en
diversas
MATERIALES
Palillos
Placa con
oscuro
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
mecnico
rotatorio
de
seis
divisiones
Micropipetas
CODIGO:
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desde: 3
EQUIPOS
Agitador
fondo
de
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38 de 88
REACTIVOS
Kit para FR
Solucin salina (NaCl
velocidad variable
Cronmetro
de
volumen variable
MATERIAL BIOLGICO
1. Muestra (suero claro, reciente)
Toma de muestras
Transporte
Se debe separar el suero, mantenerlo refrigerado (4 C), y congelar su
envo se demora.
METODOLOGA
Preparacin de los reactivos
Mezclar el reactivo con suave agitacin antes de usar. El ltex debe presentar
aspecto uniforme.
PRUEBA CUALITATIVA
1. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
2. Resuspender el antgeno con suavidad. Aspirar y vaciar varias veces el
cuentagotas para asegurar su homogeneidad antes del ensayo.
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
39 de 88
positiva:
Aglutinacin
dbil
intensa,
fcilmente
visible
macroscpicamente.
RESULTADOS
PRUEBA CUANTITATIVA
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
40 de 88
1:8 1:16
1:32 1:64
4. Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en los pasos 4-7
de la Prueba cualitativa.
REPORTE DE LA PRCTICA
El titulo se expresa como el reciproco de la dilucin ms alta que conduzca a
una aglutinacin macroscpica.
La tasa aproximada (UI/mL) de FR presentes en la muestra puede obtenerse
multiplicando la unidad mnima detectable (sensibilidad analtica) por el ttulo de
la ltima dilucin positiva.
La concentracin aproximada de FR en la muestra del paciente se obtiene
aplicando la siguiente frmula:
8 x Ttulo de FR =
UI/mL
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
41 de 88
Hasta 8 UI/mL
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
BIBLIOGRAFIA
1. Christian, C. RHEUMATOID FACTORS IN: LABORATORY DIAGNOSTIC
PROCEDURES IN THE RHEUMATIC DISEASES. 2nd ed. Cohen AS
(ed).
2. Evan, D. (1975). RHEUMATOID ARTHRITIS-A REVIEW. ASCP, Chicago.
p.21.
3. Waaler, M. y Toone, E. (1998). ARTHRITIS RHEUM. 4: 47.
4. Young, D. (1995). EFFECTS OF DRUGS ON CLINICAL LABORATORY
TESTS. 4th Edition. AACC Press.
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
42 de 88
Tubo tapa
roja sin
anticoagulant
e
Obtener
sangre
sangre
venosa
Total: 3 ml
Control
Control positivo
positivo
Micropipet
a
FR Ltex
40l (1
gota)
Control
Control negativo
negativo
Homogeniz
Homogeniz
ar
Atempera
Atempera
r
Recoger el
suero
Reactivos
40l
40l de
de
suero
Reactivo
FR Ltex
Ltex
FR
Homogeniz
Homogeniz
ar
Colocar
Director
delmecnico
Agitador
80-100rpm por 2
Departamento
min
Fecha: 01/08/2013
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
43 de 88
Observar
REPORTAR
Aglutinaci
n
En caso de
reaccin dbil
ESQUEMA
PRUEBA CUANTITATIVA
1
2
Pipetear 50 l
(sol. salina
0,9%)
Para
Para c/muestra:
c/muestra: 6
6
crculos de
tarjeta
tarjeta
3
Pipetear sobre el
diluyente del 1
crculo 50 L de
muestra
50 l
muestra
4
Con la misma
punta
Transferir 50 L
de la mezcla
resultante sobre
el diluyente del
segundo crculo
Mediante
aspiraciones y
expulsiones Aprob:
Natalia
repetidas
Revisin tcnica:
Bailon
Cargo: Responsable de
Seccin
Fecha: 27/07/2013
Jana Bobokova
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
Continuar dobles
diluciones hasta el
sexto crculo,
desechando los 50
L del mismo
Homogeniz
ar
Palillos
Diluciones finales:
1:2, 1:4, 1:8, 1:16,
1:32, 1:64.
8
Colocar
Agitador
mecnic
o
44 de 88
En cada
una de las
muestras
Reactivo
FR Ltex
40l (1
gota)
2
minutos
Observa
r
REPORT
AR
Aglutinaci
n
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
45 de 88
TIPO
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
El ASLO-Ltex Test es una prueba rpida de aglutinacin en porta para la
deteccin directa y la semi-cuantificacin de niveles clnicamente significativos
de anticuerpos anti-estreptolisina O (ASLO) en suero.
La determinacin se efecta ensayando una suspensin de partculas de ltex
recubiertos con estreptolisina frente a los sueros problema. La presencia o
ausencia de aglutinacin visible es indicativa de la presencia o ausencia de
ASLO en las muestras ensayadas a niveles significativos.
Las estreptolisinas son enzimas hemolticas producidas por la mayora de los
estreptococos del grupo A, destruyen la membrana de los eritrocitos
ocasionando la hemlisis.
Como respuesta a la infeccin por estreptococos hemolticos de los grupos A,
C y G, productores de estreptolisina O (SLO), una protena extracelular de
carcter enzimtico y con acusadas propiedades antignicas, se produce una
elevacin de la tasa de anticuerpos anti-estreptolisina O (ASLO) que pueden
ser determinados en el laboratorio. La investigacin inmunoqumica de estos
anticuerpos especficos contra los productos metablicos de los estreptococos
proporciona una informacin valiosa para el diagnstico de infecciones
provocadas por estreptococos (fiebre reumtica, glomrulonefritis).
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
46 de 88
EQUIPOS
REACTIVOS
Agitador mecnico Kit para ASLO
fondo
rotatorio
de Solucin salina (NaCl
de
seis
divisiones
Micropipetas
de
velocidad variable
Cronmetro
volumen variable
MATERIAL BIOLGICO
2. Muestra (suero claro, reciente)
Toma de muestras
Transporte
Se debe separar el suero, mantenerlo refrigerado (4 C), y congelar su
envo se demora.
METODOLOGA
Preparacin de los reactivos
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
47 de 88
Mezclar el reactivo con suave agitacin antes de usar. El ltex debe presentar
aspecto uniforme.
PRUEBA CUALITATIVA
1) Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
2) Resuspender el antgeno con suavidad. Aspirar y vaciar varias veces el
cuentagotas para asegurar su homogeneidad antes del ensayo.
3) Depositar 1 gota (50 L) de suero problema en uno de los crculos de la
tarjeta visualizadora. En crculos adicionales, depositar 1 gota de control
positivo y 1 gota de control negativo.
4) Aadir a cada crculo 1 gota de Antgeno ASLO-Ltex, prxima a la
muestra a analizar.
5) Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable, extendindola de
forma que cubra por completo la superficie interior de cada anillo.
Emplear palillos distintos para cada mezcla.
6) Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos.
7) Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la aparicin
de cualquier signo de aglutinacin.
REPORTE DE LA PRCTICA
Reaccin negativa: Suspensin uniforme sin cambio visible alguno, tal como se
presenta en el control negativo.
Reaccin
positiva:
Aglutinacin
dbil
intensa,
fcilmente
visible
macroscpicamente.
PRUEBA CUANTITATIVA
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
48 de 88
la
misma
punta,
mezclar
mediante
aspiraciones
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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s:
49 de 88
VALORES DE REFERENCIA
Valores de Ttulos de ASLO
Persona adulta sana
200 Ul/mL
CUESTIONARIO
1. En qu se basa la prueba de antiestreptolisina y para qu sirve sta?
2. Frente a qu infeccin se produce estrptolisina O?
3. Para el diagnostico de qu enfermedades se utiliza la prueba
Antiestreptolisina O?
4. Cul es el valor normal de antiestrptolisina O en personas sanas?
5. Qu tipo de muestra se debe utilizar para realizar la determinacin de
Antiestreptolisina O?
BIBLIOGRAFIA:
1. Bisno, A. (1990). PRINCIPLES AND PRACTICE OF INFECTIOUS
DISEASES. 3rd ed. (Mandell GL et al. eds.), Churchill Livingstone, NY,
176-177.
2. Klein, G. (1976). MANUAL OF CLINICAL IMMUNOLOGY. Chapter 33,
American Society for Microbiology, Washington D.C.
3. Young, D. (1995). Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th
Edition. AACC Press.
4. Schmidt, K., Mueller, C. y Beckmann, A. (1970). RHEUMATOL. 29.
5. http://www.cromatest.mx/Insertos/Serodiagnostico
%20Reumatoide/ASLO%20LATEX.pdf
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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s:
50 de 88
ESQUEMA
PRUEBA CUALITATIVA
1
Atempera
r
Reactivos
y
muestras
2
Resuspend
er
er
4
Control positivo
Micropipet
a
50l (1
gota)
ASLO
Ltex
50l
50l de
de
suero
7
Reactivo ASLO
Ltex
Ltex
Control
Control negativo
negativo
Homogeniz
Homogeniz
ar
50l (1
gota)
50l (1Aprob:
gota)
Jana Bobokova
Palillos
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
51 de 88
9
Colocar
Observar
Observar
10
REPORTAR
Agitador
mecnico
100rpm por 2
min
Aglutinaci
n
En caso de
reaccin
dbil
ESQUEMA
PRUEBA CUANTITATIVA
2
Pipetear 50 l
(sol. salina
0,9%) en los 3
primeros y 25
L en el cuarto
Para c/muestra: 4
crculos de
tarjeta
3
Transferir 50 L
de la mezcla
resultante sobre
el tercer crculo
50 l
muestra
Mezclar de
nuevo y
desechar 50
ul
Pipetear sobre el
2 25 ul de
muestra y
Mezclar
Pipetear 50
L de
muestra
Con la misma
punta
Mediante
aspiraciones y
expulsiones
repetidas
5
Transferir 25 L
de la mezcla
resultante sobre
el 4 crculo y
mezclar
Diluciones finales:
1:2, 1:3, 1:4, 1:6
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
Homogeniz
ar
Colocar
Reactivo
ASLO
Ltex
Palillos
40l (1
gota)
8
6
Colocar
Agitador
mecnic
o
52 de 88
9
Observa
r
10
REPORT
AR
Aglutinaci
n
2
minutos
Treponema pallidum.
Aplicar correctamente la tcnica y tener la capacidad de interpretar el resultado
obtenido.
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s:
53 de 88
TIPO
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
La prueba de VDR es una prueba de deteccin para sfilis. Se basa en que las
"reaginas", presentes en individuos infectados por T. pallidum se detectan en
suero por la reaccin con un antgeno cardiolipnico purificado y estabilizado. Si
la muestra contiene reagina, sta se unir al antgeno produciendo una
floculacin visible en el microscopio.
La sfilis es una enfermedad causada por la infeccin con la bacteria
Treponema pallidum y que puede ser transmitida congnitamente o por
contacto sexual. Ensayos no treponmicos, como la prueba del VDRL
(Venereal Disease Research Laboratory), permiten un rpido muestreo de
poblaciones y el inmediato tratamiento de pacientes con signos de positividad.
Las
pruebas
No
Treponemales
incluyen
precipitacin,
floculacin
EQUIPOS
REACTIVOS
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Pgina
s:
54 de 88
(NaCl
0,9%).
MATERIAL BIOLGICO
Toma de muestras
Transporte
PROCEDIMIENTO
PRUEBA CUALITATIVA
1.
2.
3.
4.
5.
anillo.
6. Aadir una gota del antgeno en suspensin estabilizado previamente
resuspendido,
(resuspender
con
suavidad
para
asegurar
su
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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s:
56 de 88
la
misma
punta,
mezclar
mediante
aspiraciones
1:2
1:32
Lectura
Resultado
Agregados grandes o
Reactivo
Agregados pequeos
Reactivo dbil
No reactivo
medianos
rugosidad
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s:
57 de 88
Durante la sfilis primaria y terciaria, el resultado del examen puede ser falso
negativo.
VALORES DE REFERENCIA
Un examen negativo es normal y significa que no se detectaron anticuerpos
contra la sfilis. La prueba de deteccin es ms probable que sea positiva en la
sfilis secundaria y latente.
Valores de VDRL
Resultado normal
Negativo
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
BIBLIOGRAFIA
1. Centers for Disease Control and Prevention, Workowski KA, Berman
SM. Diseases characterized by genital ulcers. Sexually transmitted
diseases treatment guidelines 2006. MMWR Morb Mortal Wkly Rep.
2006 Aug 4;55(RR-11):14-30.
2. Hook EW III. Syphilis. In: Goldman L, Ausiello D, eds. Cecil Medicine.
23rd ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2007:chap 340.
3. Tramont EC. Treponema pallidum (syphilis). In: Mandell GL, Bennett JE,
Dolin R, eds. Principles and Practice of Infectious Diseases. 7th ed.
Philadelphia, Pa: Elsevier Churchill Livingstone; 2009:chap 238.
Elaborado: Andrea Vintimilla
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Control negativo
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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s:
59 de 88
1
gota
Tubo tapa
roja sin
anticoagulant
e
Obtener
Obtener
sangre
venosa
venosa
Pipeta
Pasteur
Total: 3 ml
Centrifuga
r
Control positivo
Recoger el
suero
suero
Micropipet
a
Observar
Observar
0,05
0,05 ml
ml
Suero
1
gota
Previament
e
resuspendid
o
Colocar
Colocar
Agitador
mecnico 180
rpm
Homogeniz
ar
ar
4 minutos
Palillo
s
Antgeno
en
en
suspensin
En cada
una de
las
muestras
Floculaci
n
REPORTAR
1
gota
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Titulo.dilucin
mayor que da
resultado +
TITULADA
S
2
5
crculos de
5 crculos
de
placa
Recoger
Recoger el
el
suero
Pipetear
Pipetear sobre
sobre el
el
diluyente del 1
crculo
crculo
Usar la misma
punta
punta
50 l Sol. Salina en
c/u
c/u
Transferir 50 L
sobre
sobre el
el 2
2
diluyente
Continuar
dobles
diluciones
Dilucion
es
finales
Hasta el
5
5
crculo
1:2, 1:4,
1:8, 1:16,
1:32
Colocar
Mezclar
Mezclar por
por
aspiraciones y
expulsiones
expulsiones
50
50 l
l Muestra
Muestra
Homogeniz
Homogeniz
ar
Palillo
s
10
Observar
Agitador
mecnico 180
rpm
4 minutos
REPORTAR
Floculaci
n
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reaccionaron con anticuerpos anti ratn IgG (conejo), formando la lnea control.
2 lneas visibles aparecern con la presencia de HBsAg (HBsAg > 1 U/ml) en la
muestra. Si no hay HBsAg en la muestra, o si la concentracin de HBsAg est
debajo 1 U/ml, solo aparecer la lnea de control. La segunda lnea sirve como
control del adecuado manejo y condicin intacta de los reactivos. Si no hay
lneas visibles en la zona de reaccin indica una inadecuada ejecucin o
deterioro de los reactivos.
La hepatitis B es una infeccin heptica potencialmente mortal causada por el
virus de la hepatitis B (VHB). Constituye un importante problema de salud a
nivel mundial y es el tipo ms grave de hepatitis viral. Puede causar
hepatopata crnica y conlleva un alto riesgo de muerte por cirrosis y cncer
heptico.
MATERIALES Y METODOS
MATERIALES
EQUIPOS
REACTIVOS
Placa para reaccin
Agitador
mecnico
Tiras para prueba
Micropipetas
de
rotatorio de velocidad
de HBsAg.
volumen variable
variable
Palillos
Cronometro
Microscopio (100x)
MATERIAL BIOLOGICO
METODOLOGA
EL TEST y las muestras deben ser llevadas a temperatura ambiente antes de
usarse.
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
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ESQUEMA
METODOLOGA
1
TEST Y
MUESTRA
2
Tubo
3
1
Introducir
test en el
tubo
Leer
resultado
Luego de
20 -30 min
Temperatur
a ambiente
0,25 a
0,5 ml
muestra
(Suero)
La muestra
debe tocar la
parte azul del
test
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colocar
EQUIPOS
la Cronmetro
REACTIVOS
Tirilla para prueba
muestra
MATERIAL BIOLGICO
Muestra: suero claro, reciente.
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
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Toma de muestras
METODOLOGA
Atemperar, a temperatura ambiente (20-30C) el dispositivo, la muestra y/o
controles antes de su uso.
1. Sacar la tira de la bolsa sellada y usarla lo antes posible.
2. Con las flechas dirigidas hacia la muestra de suero, sumerja la tira
verticalmente en el suero por lo menos durante 5 segundos. No
sobrepase la lnea de nivel mximo (MAX) en la tira cuando la sumerja.
3. Coloque la tira en una superficie plana y limpia.
4. Espere a que la lnea(s) de color rojo aparezca. Lea los resultados a los
3-5 minutos de iniciar la prueba.
Nota: Despus de 15 minutos la sensibilidad de la prueba se incrementa a 10
mIU/mL. Este incremento tiene el riesgo de dar falsos resultados positivos
debido al riesgo de abortos naturales, niveles fisiolgicos elevados de hCG en
mujeres no embarazadas o toma de medicamentos que contienen hCG. Por lo
que se recomienda interpretar el resultado a los 5 minutos de la adicin de la
muestra para pruebas de rutina.
REPORTE DE LA PRCTICA
POSITIVO: Embarazo. Dos lneas rojas distintivas aparecen en la tira. Una
lnea en el rea de control (C) y la otra en el rea de prueba (T).
NOTA: La lnea de color rojo en la zona del ensayo (T) puede variar
dependiendo de la concentracin de hCG presente. Sin embargo, ni el valor
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Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Batzer FR. Fertility y Sterility 1980; 34:1.
2. Catt KJ, Dufan ML, Vaitukaitis JL. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1975;
40:537.
3. Baunstein GD, Rasor J, Adler D, Danzer H, Wade ME. Am. J. Obstet.
4.
5.
6.
7.
50:172.
8. http://www.linear.es/ficheros/archivos/361_4120050hCGstrip50t
%28orinayplasma%29cas.pdf
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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ESQUEMA METODOLOGA
1
Sacar el test
de la bolsa
DISPOSITIVO,
MUESTRA,
CONTROLES
Usar lo antes
posible
Temperatura
ambiente
No sobrepasar
la lnea Max
cuando se
sumerja
3
Las flechas
dirigidas
abajo
Sumerja la
tira en el
suero
5
Colocar
Esperar 5
min
La tirilla en una
superficie plana
y limpia
6
LEER
RESULTADOS
Esperar a
que la lnea
de color
rojo
aparezca
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MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
EQUIPOS
Revisin tcnica: Natalia
Bailon
Cargo: Responsable de
Seccin
Fecha: 27/07/2013
REACTIVOS
Aprob: Jana Bobokova
Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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Toalla de papel
Papel
Pipetas
cuadriculado
precisin
Cronometro
ELISA capaz
de Kit
para
73 de 88
ELISA
Agua
de
desionizada
leer la absorbancia
a 450 nm.
MATERIAL BIOLGICO
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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74 de 88
4. Retire el lquido de todos los pozos. Lavar los pocillos tres veces con
300 ll de tampn de lavado 1X. Seque con absorbancia de papel o una
toalla de papel.
Dispensar 100 l de conjugado de enzima a cada pocillo e incubar
durante 20 minutos a temperatura ambiente.
Retire la enzima conjugada de todos los pozos. Lavar los pocillos tres
veces con 300 l de tampn de lavado 1X. Secar en el papel de
absorbancia o toalla de papel.
Dispensar 100 l de sustrato TMB y se incuba durante 10 minutos a
temperatura ambiente.
5. Aadir 100 l de solucin de parada. Leer Densidad ptica a 450 nm
utilizando un lector de ELISA dentro de 15 min. Una longitud de onda
dual se recomienda con filtro de referencia de 600-650 nm.
REPORTE DE LA PRCTICA
Evaluacin Cualitativa
El Valor de Corte est dado por la densidad ptica (DO) del Estndar B (Nivel
de Corte). El ndice de Corte (COI) se calcula a partir de la media de densidad
ptica de la muestra y el Valor de Corte. Si la densidad ptica de la muestra
est dentro de un rango de 20 % de todo el Valor de Corte (Zona gris) la
muestra tiene que ser considerada como lmite. Las muestras con mayor DOs
son positivas, las muestras con menos Dos son negativas.
El ndice de Corte de las muestras puede ser calculado de la
siguiente
manera:
NEGATIVO
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< 8 U/ml
75 de 88
EQUIVOCO
POSITIVO
U/ml
>12 U/ml
Los resultados por si solos no deben ser la nica razn para un tratamiento
teraputico, sino que deben correlacionarse con observaciones clnicas y
ensayos de diagnstico.
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Ansari, M., Rasmi, Y., Manafi, M., Rahimipour, A. y Ghadermarzi, E.
(2010). THE EVALUATION OF HELICOBACTER PYLORI INFECTION
AND
CARDIOVASCULAR
DISEASE
RISK
FACTORS
WITH
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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s:
77 de 88
ESQUEMA METODOLOGA
Mezclar
suavemente
Temperatura
ambiente
MUESTRAS Y
REACTIVOS
2
Control +, y
calibrador
estn listos
para usar
COLOCAR
N de tiras
en el
soporte
Dilucin 1:21 de
prueba
muestras
Mediante
la
adicin de 10 l
de la muestra a
200
l
de
diluyente
de
muestra.
Agregue 100 l
de suero diluido,
calibrador,
y
controles en los
pozos
apropiados.
Mezclar bien
Para el reactivo
blanco,
dispensar 100l
de diluyente de
la muestra en la
posicin
del
pozo 1A
9
1
Toque el soporte
para
remover
las burbujas de
aire del lquido y
mezclar
Retire el lquido
de todos los
pozos
Incubar
Por 20 min
T`
Ambiente
10
Lavar
los
pocillos
tres
veces con 300
ll de tampn de
lavado 1X.
12
11
Secar con una
toalla de papel
Dispensar 100 l
de conjugado de
enzima a cada
pocillo
13
Incubar
Retire la enzima
conjugada
de
todos los pozos
Por 20 min
T`
Ambiente
14
Lavar los pocillos
tres veces con
300 l de tampn
de lavado 1X.
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s:
15
16
Dispensar 100
l de sustrato
TMB
78 de 88
17
Incubar
Por 10 min
T`
Ambiente
18
Aadir 100 l de
solucin
de
parada
19
9
Despus
de 15
min.
Leer
densidad
ptica a 450 nm
utilizando
un
lector de ELISA
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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s:
80 de 88
gastritis crnica (tipo B), pacientes con ulcera y pacientes con carcinoma
gstrico estn infectados con Helicobacter pylori. La temprana deteccin y
tratamiento pueden erradicar esta bacteria.
La prueba de Elisa IgG e IgM es de preferencia como una prueba inicial en el
caso de una infeccin crnica.
La prueba Helicobacter pylori IgG ELISA est basada en la tcnica ELISA
sndwich. Los micropocillos ELISA son recubiertos con antgenos de H. pylori
(H. pylori- Ag) derivados de cultivo celular. En la primera etapa de inoculacin,
los anticuerpos contra el H. pylori IgG (Ac anti- H. pylori-IgG) contenidos en la
prueba o el control se fijan especficamente a los antgenos inmovilizados.
Al final de la incubacin, los componentes excesivos son eliminados por
lavado. En la segunda etapa de incubacin, se aade un conjugado anti-IgG
(anticuerpos anti- IgG- humana, marcados con peroxidasa) que se fija
especficamente a los anticuerpos IgG. Se forman inmunocomplejos tpicos.
Despus de eliminar el conjugado excesivo por lavado (segunda etapa de
lavado) y aadir TMB/Substrato (etapa 3), se forma un color azul que se
transforma a amarillo despus de detener la reaccin. La intensidad de este
color es directamente proporcional a la cantidad de anticuerpos anti-H. pyloriIgG en la muestra.
MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES
Pipetas
EQUIPOS
REACTIVOS
de Cronmetro
Kit
para
ELISA
ELISA capaz de leer
precisin
Helicobacter pylori IgG
Toalla de papel
destilada
o
la absorbancia a 450 Agua
Papel
nm.
desionizada
cuadriculado
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85 de 88
Un punto con una intensidad mayor que o igual a la del Control Positivo
TM
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POSITIVO
< 8U/mL
8-12
U/mL
>12
prueba.
Indicativo de infeccin por H.
U/mL
pylori.
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Elaborado: Andrea Vintimilla
Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
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s:
87 de 88
http://www.bqkits.com/shopcart/images/product/BQ%20015M%20%20H.
%20Pylori%20IgM.pdf
http://biokit.com.ve/tecnicas/elisa/el-hpylg.pdf
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ESQUEMA
PRINCIPALES PROCEDIMIENTOS DE LA PRUEBA