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microorganismos
Historia
Composicin de los microorganismos y componentes
celulares
Composicin qumica de una clula procariota
Requerimientos nutricionales
Clasificacin de los microorganismos por sus
requerimientos nutricionales
Concepto y clasificacin de los medios de cultivo
HISTORIA
Brefeld (miclogo), aisl y cultiv esporas de hongos en medios
slidos realizados a base de gelatina.
El ao 1878, Lister populariz un mtodo enfocado al cultivo puro
basado en diluciones seriadas en un medio lquido.
Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento
rodajas de patata como soporte nutritivo slido, pero no tard en
recurrir al caldo de carne lquido, diseado por Loeffler, al que, en
1881, aadi gelatina, logrando un medio slido transparente ideal
para la observacin de la morfologa macroscpica de las colonias
microbianas.
Walter Hesse ( mdico alemn) introduce el agar-agar (polisacrido
extrado de algas rojas) como solidificante.
HISTORIA
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar
placas de cristal planas, que se llaman desde entonces placas de Petri.
Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus
investigaciones sobre las bacterias quimioauttrofas (utilizacin de
nitrgeno y azufre sobre todo) tuvieron gran importancia en el
desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento.
En 1892 Wrtz impuls el uso de los medios diferenciales,
incorporando indicadores de pH a la composicin de ciertos medios
con lo cual se poda observar la produccin de cidos en la
fermentacin en ciertos microorganismos.
protenas
cidos nucleicos (DNA y RNA)
lpidos
carbohidratos.
Requerimiento de factores
de crecimiento
Auxotrofa
Prototrofa
Peso seco
(%)b
Molculas
por clula
Clases
diferentes
96
55
5
9.1
3.1
20.5
3.5
0.5
2
0.5
1
24,610,000
2,350,000
4,300
22,000,000
2.1
255,500
~2,500
1,850
2c
4d
1
~650
~350
~100
~50
~200
18
100
Los datos son de Neidhardt, F.C. y col (eds).1996. Escherichia coli y Salmonella typhimurium-Cellular and
Molecular Biology, 2a, ed, ASM; b Peso seco de una clula de E. coli creciendo activamente (2.8 x 10-13 g); c
Asumiendo que la peptidoglicana y el glucgeno son los polisacridos mayoritarios presentes; d Existen diversas
clases de fosfolpidos; de cada uno de ellos se presentan muchas formas debido a la variabilidad de los cidos
grasos entre las especies y las condiciones de crecimiento.
Requerimientos nutricionales
Las sustancias en el ambiente utilizadas por los organismos
para el anabolismo y el catabolismo se denominan nutrientes.
Nutriente. Sustancia requerida por los organismos para la
sntesis de materiales celulares y para la generacin de energa
y que es obtenida del ambiente
Los nutrientes se pueden dividir en dos clases:
Macronutrientes, los que se requieren en grandes cantidades.
Micronutrientes, aquellos que se necesitan en pequeas cantidades.
Carbono
Oxgeno
Nitrgeno
Fsforo
Azufre
Potasio
Magnesio
Sodio
Calcio
Hierro
KCl, KH2PO4
MgCl2, MgSO4
NaCl
CaCl2
FeCl2, FeSO4, soluciones de Fe quelado con
EDTA o citrato
Funcin Celular
Requerimientos de los
microorganismos
De acuerdo con los requerimientos de energa y
carbono, los microorganismos se clasifican en:
Fotoauttrofos (luz + CO2)
Fotohetertrofos (luz + compuestos qumicos)
Quimioauttrofos (compuestos qumicos + CO2)
Quimiohetrertrofos (compuestos qumicos)
Requerimientos de un medio de
cultivo
Fuente de carbono
Fuente de nitrgeno
Fuente de energa
Agua
Sales minerales
Factores de crecimiento
Lquidos
Pesar
Pesar
Mezclar
Solubilizar
Envase
Esterilizacin
Prueba de esterilidad
Pruebas de funcionalidad
Adicin de
substancias
termolbiles
estriles
Envase
Esterilizacin
Solidificacin
Pruebas de esterilidad
Medios definidos
Medio E de Vogel y
Bonner.
Medio de Knop
Medio de Fowell para
ascosporas
BHI
Gelosa sangre
Caldo nutritivo
Medio PDA
Medio Luria Bertani
Medio Baird Parker
Medios Simples
Los medios simples son medios comunes, que slo
tienen un tipo de infusin o extracto adems de
otros componentes. Son medios para fines generales
porque mantienen el crecimiento de muchos
microorganismos que no son muy exigentes.
Ejemplos: la gelosa nutritiva, el PDA, el caldo simple
o caldo nutritivo.
Medios Enriquecidos
Constituidos por algunas sustancias que los hacen ms
nutritivos. En estos medios puede crecer una gran
variedad de microorganismos.
Sangre
Suero
plasma
extractos nutritivos (levadura, carne)
Gelosa sangre
Medios Selectivos
Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares debido a
que poseen un inhibidor o sustancia especfica, que nos permite
escogerlos o seleccionarlos.
Agentes Inhibidores: Las sales biliares o los colorantes como la
fucsina bsica, el cristal violeta, la eosina o el verde brillante
permiten el crecimiento de las bacterias Gram negativas, mientras
que inhiben el crecimiento de las Gram positivas.
Incubndolos con nutrientes que puedan utilizar de forma
especfica. Un medio que contenga celulosa ser efectivo para
aislar bacterias que digieran celulosa o bien la adicin de
sustancias tales como el NaCl o la sacarosa a concentraciones
relativamente altas lograr el propsito de aislar microorganismos
definidos.
Ejemplos de medios selectivos son el agar EMB (Eosina Azul de
Metileno), agar ENDO, agar MacConkey, S-110, SS, gelosa Rosa de
Bengala, agar Biggy, agar Verde Brillante, etc.
Medios diferenciales
Distinguen, separan, diferencian grupos distintos de
bacterias e incluso permiten una identificacin tentativa
de los microorganismos segn sus caractersticas
metablicas.
Ejemplos de medios diferenciales son el Gelosa sangre,
SS (Salmonella-Shigella), agar MacConkey, agar BairdParker, agar XLD, agar Vogel Johnson, Citrato de
Simmons, LIA, Kligler, Verde Brillante, etc. Ntese que
algunos de estos medios son adems selectivos.
Desarrollan
microorganismos
capaces
de
crecer
en
concentraciones de NaCl del
7.5%, adems diferencia a
aquellos que fermentan el
manitol provocando el vire del
indicador de pH (rojo de fenol) de
rojo a amarillo.
Medios de enriquecimiento
Enriquecer significa, en este caso, proporcionar al
microorganismo que se desea aislar todos los elementos
nutritivos necesarios para que alcance su ptimo crecimiento.
Se usan para aumentar el nmero relativo de organismos de un
tipo en relacin al total. Por ejemplo, enriquecer un patgeno
minoritario particular presente en una muestra altamente
contaminada con otros microorganismos irrelevantes desde el
punto de vista mdico.
Ejemplos de estos medios son: caldo tetrationato de Meller,
caldo selenito de sodio, caldo selenito, caldo urea, caldo
tioglicolato, agua peptonada, Monsur, etc.
Tcnicas de enriquecimiento
Consiste en ajustar las condiciones de cultivo para seleccionar
el microorganismo que nos interesa aislar.
Ejemplo 1: Nos interesa aislar bacterias fotoauttrofas.
Tomamos un matraz con agua y sales y lo incubamos a la luz,
de manera que crezcan las bacterias fotoauttrofas.
Ejemplo 2: Queremos aislar bacterias quimiolittrofas del
azufre; ponemos azufre, CO2 como fuente de carbono
(disuelto en agua) e incubamos en la oscuridad para eliminar
fotoauttrofos.
Para incubar enterobacterias como Enterobacter hay que
incubar a 37, mientras que para incubar otra enterobacteria,
E. coli, hay que incubar a 45
Medios de transporte
Se utilizan para el transporte de diversas muestras
biolgicas evitando la muerte de los
microorganismos de inters.
Su composicin permite la viabilidad de los
microorganismos
pero
no
permite
su
multiplicacin
Ejemplos de estos medios son los medios de
Stuart, de agua peptonada para Vibrio, Cary y
Blair, Glicerol-Solucin Salina, Amies y Douglas,
Hajna, Caldo de Fildes etc.
Aislamiento y Seleccin
Uso de procedimientos que permiten la seleccin
y aislamiento de solo aquellos microorganismos
de inters, entre una gran poblacin microbiana.
Seleccin Primaria (Primoaislamiento).
Seleccin Secundaria (Resiembra).
CULTIVO
SUELO
AGUA
AIRE
SUPERFICIES
ALIMENTOS
BIOTA NORMAL HUMANA
PRODUCTOS BIOLGICOS
TUBO
PLACA
MATRZ
GARRAFN
FERMENTADOR
CULTIVO CELULAR
PREPARACIN DE LA MUESTRA
DILUCIONES
CUALITATIVA Y
CUANTITATIVA
Presin de seleccin
Factores Nutricionales.
pH.
Atmsfera (Oxgeno).
Temperatura.
Osmolaridad y Aw.
Inhibidores.
Potencial Redox
Aislamiento
Mtodos Cualitativos
Estria Cruzada ECONMICO, RPIDO, POCO MATERIAL, FCIL.
Mtodos Cuantitativos
Dilucin y Dispersin con varilla acodada
COLONIA BACTERIANA
UFC/ml
10-6
10-7
10-9
10-8
10-10
Escherichia
CLCULOS
V (diluyente) + V (muestra) = V (total)
9mL
+
1mL
= 10mL
Se divide entre el volumen de la muestra
9mL
Dilucin
1mL
1mL
= 10mL
1mL
1:10
AISLADAS
DE 25-250
EJEMPLO:
DILUCIN: 10-8
250)
10-8
ALCUOTA: 0.1mL
Clasificacin de Bacterias
Bacterias Aerobias
Aquellas capaces de crecer con la
concentracin de oxgeno que existe en la
atmsfera (21%).
Sistema enzimtico de desintoxicacin de
radicales libres del metabolismo del oxgeno.
Radicales libres:
H O , O -, OH., O .
Enzimas contenidas en las bacterias
aerobias.
Catalasa, peroxidasa, Superxido dismutasa
2
O2
Metabolismo
Productos
Txicos
O2OH.
O2.
H2O2
Rutas
detoxificantes
1. Superxido
dismutasa
2. Catalasa
3. Peroxidasa
Productos
no txicos
H2 O
O2
Bacteria anaerobia
O2
Metabolismo
Productos
Txicos
O2OH.
O2.
H2O2
No hay rutas
detoxificantes
Muerte
bacteriana
Requerimiento
de O2
Metabolismo
Ejemplo
Hbitat
Obligados
Si
Respiracin
aerbica
Micrococcus luteus
Piel, polvo
Facultativos
No
Respiracin
aerbica y
anaerbica,
fermentacin
Escherichia coli
Intestino
Si, baja
tensin
Respiracin
aerbica
Spirillum volutans
Lagos
No
Fermentacin
Streptococcus
pyogenes
Tracto
respiratorio
Letal
Fermentacin,
repiracin
anaerbica
Methanobacterium
formicicum
Diverso
Aerobios:
Microaeroflicos
Anaerobios:
Aerotolerantes
Obligados