Manual de Bioquímica AÑO 2011

UNIVERSIDAD DE SAN
GUATEMALA
FACULTAD DE AGRONOMA
CARLOS
MANUAL DE
PRACTICA PARA
BIOQUMICA.
REA DE CIENCIAS
SUB REA DE CIENCIAS QUMICAS
DE
GUATEMALA ENERO 2011
[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

BIOQUMICA
LABORATORIO DE
NDICE
CONTENIDO
PAGINAS
NDICE................................................................................................. 2
REUNIN DE INFORMACIN GENERAL DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA 5
1. INTRODUCCIN................................................................................................5
2. OBJETIVOS........................................................................................................5
3. MATERIALES......................................................................................................6
4. METODOLOGA..................................................................................................6
PRACTICA No. 1 SELECCIN DE LA MUESTRA VEGETAL A TRABAJAR EN EL
LABORATORIO...................................................................................... 7
1. INTRODUCCIN................................................................................................7
2. OBJETIVOS........................................................................................................7
3. MATERIAL DE APOYO LAS BIOMOLCULA..........................................................8
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO.................................................................14
5. MATERIALES....................................................................................................16
6. METODOLOGA................................................................................................16
7. EVALUACIN DE LA PRCTICA........................................................................18
PRCTICA 2. PREPARACIN DE MUESTRAS VEGETALES PARA ANLISIS
QUMICO SECADO, MOLIDO Y TAMIZADO DE MUESTRAS VEGETALES.......18
1. INTRODUCCIN..............................................................................................18
2. OBJETIVOS......................................................................................................18
3. MARCO TERICO............................................................................................20
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRCTICA 2..............................................23
5. MATERIALES....................................................................................................24
6. METODOLOGA................................................................................................25
8. PARA INCLUIR EN EL REPORTE DE PRCTICA:.................................................27
9. INVESTIGAR....................................................................................................27
PRCTICA No. 3 EXTRACCIN Y ESTUDIO CUALITATIVO DE PROTENAS EN
MUESTRAS VEGETALES........................................................................ 28

BIOQUMICA
LABORATORIO DE
1. INTRODUCCIN..............................................................................................28
2. OBJETIVOS......................................................................................................28
3. MARCO TERICO.............................................................................................29
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRCTICA 3.............................................34
5. MATERIALES....................................................................................................35
6. METODOLOGA...............................................................................................36
8. PARA INCLUIR EN EL INFORME EN LA DISCUSIN...........................................41
PRCTICA 4 ESTUDIO DE AMINOCIDOS DE MUESTRA VEGETALES..........43
1. INTRODUCCIN..............................................................................................43
2. OBJETIVOS:.....................................................................................................43
3. MARCO TERICO.............................................................................................44
5. MATERIALES....................................................................................................52
6. METODOLOGA................................................................................................53
7. PARA INCLUIR EN EL INFORME DE PRCTICA:.................................................59
9. RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS PARA EL REPORTE........................60
PRCTICA No. 5 ESTUDIO DE AMINOCIDOS, CROMATOGRAFA DE
AMINOCIDOS Y ESPECTROFOTOMETRA..............................................63
1. INTRODUCCIN..............................................................................................63
2. OBJETIVOS......................................................................................................63
3. MATERIAL DE APOYO CROMATOGRAFA (11)...................................................64
5. MATERIALES DE LA PRCTICA V......................................................................72
6. METODOLOGA................................................................................................74
7. PARA INCLUIR EN EL INFORME DE PRCTICA:.................................................80
Prctica No. 6 EXTRACCIN DE GLCIDOS DE MUESTRAS VEGETALES.....83
1. INTRODUCCIN..............................................................................................83
2. OBJETIVOS......................................................................................................83
3. MATERIALES....................................................................................................84
4

BIOQUMICA
LABORATORIO DE
4. METODOLOGA................................................................................................85
PRCTICA 7 ESTUDIO DE GLCIDOS DE MUESTRAS VEGETALES..............88
1. INTRODUCCIN..............................................................................................88
2. OBJETIVOS......................................................................................................88
3. MATERIAL DE APOYO GLCIDOS (CARBOHIDRATOS) (3,7,15,20)....................89
5. MATERIALES....................................................................................................98
6. METODOLOGA..............................................................................................100
7. PREPARACIN DE REACTIVOS.......................................................................102
8. PARA INCLUIR EN EL INFORME DE PRCTICA:...............................................103
9. EVALUACIN DE LA PRCTICA......................................................................103
Prctica No. 8 EXTRACCIN DE LPIDOS DE MUESTRAS VEGETALES...Error!
Marcador no definido.
1. INTRODUCCIN..............................................Error! Marcador no definido.
2. OBJETIVOS......................................................Error! Marcador no definido.
3. MATERIALES....................................................Error! Marcador no definido.
4. METODOLOGA...............................................Error! Marcador no definido.
5. EVALUACIN DE LA PRCTICA:.......................Error! Marcador no definido.
Prctica No. 9 ESTUDIO DE LPIDOS DE MUESTRAS VEGETALES........Error!
1. INTRODUCCIN..............................................Error! Marcador no definido.
2. OBJETIVOS......................................................Error! Marcador no definido.
3. MATERIAL DE APOYO ESTUDIO DE LPIDOS DE MUESTRAS VEGETALES. Error!
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRCTICA 9.............Error! Marcador no
definido.
5. MATERIALES....................................................Error! Marcador no definido.
6. METODOLOGA...............................................Error! Marcador no definido.
7. EVALUACIN DE LA PRCTICA........................Error! Marcador no definido.
8. PARA EL REPORTE DE PRCTICA.....................Error! Marcador no definido.

BIOQUMICA
LABORATORIO DE
BIBLIOGRAFA..................................................Error! Marcador no definido.
REUNIN DE INFORMACIN GENERAL DEL LABORATORIO DE

BIOQUMICA
1. INTRODUCCIN
Para iniciar el Laboratorio de Bioqumica, se plantea esta primera reunin, de
carcter obligatorio, para enterar a los estudiantes de las disposiciones generales
que aqu debern cumplirse. Esta es una parte del laboratorio que el estudiante
suele obviar, pero que, por la trascendencia de la misma, se plantea como parle de
la asistencia.
Adems de lo antes dicho, puede aprovecharse la reunin para que el estudiante
conozca a su instructor d laboratorio y viceversa, con la finalidad de que se
cimienten las bases de una buena comunicacin sobre la cual pueda edificarse el
conocimiento.
A su vez, el instructor de laboratorio formar grupos de trabajo a quienes har
responsables de un locker, con la finalidad de qu las actividades prcticas s
realicen con el mayor orden posible.
2. OBJETIVOS
b.1.
b.2.
GENERAL
Informar a los estudiantes de las disposiciones generales del laboratorio de

Bioqumica.
ESPECFICOS:
Revisar el contenido del programa de Laboratorio de Bioqumica.

Revisar el reglamento de Laboratorio de Bioqumica.
6

BIOQUMICA
LABORATORIO DE
Revisar las normas de cuidado de materiales dentro del laboratorio.
Dar lectura a los "aspectos a considerar para el buen uso del Manual de
prcticas de bioqumica.
Ampliar la informacin antes revisada, o bien aclarar aquellas dudas que el

estudiante pudiese tener sobre algn tpico de la informacin general del
Laboratorio.
Formar los grupos de trabajo para el desarrollo ordenado del Laboratorio de

Bioqumica.
3. MATERIALES
Programa de Laboratorio de Bioqumica.
Reglamento de Laboratorio de Bioqumica.
Reglamento para Uso de Materiales de Laboratorio.
4. METODOLOGA
El instructor de laboratorio habr d presentarse a los estudiantes y

tomar asistencia a esta reunin.
El instructor de laboratorio repartir los tres reglamentos mencionados en

los listados de materiales" de esta sesin de laboratorio.

BIOQUMICA
LABORATORIO DE
Se proceder a dar lectura al Programa de laboratorio de Bioqumica.
Se proceder a dar lectura al Reglamento d laboratorio de Bioqumica.
Se proceder, a dar lectura al Reglament para uso de materiales de

laboratorio.
El instructor de laboratorio ampliar aquella informacin que fuese

requerida por los estudiantes.
Se formarn grupos de trabajo con un mximo de 4 integrantes, para

favorecer la realizacin de las prcticas y el aprendizaje de los
estudiantes.
PRACTICA No. 1 SELECCIN DE LA MUESTRA VEGETAL A

TRABAJAR EN EL LABORATORIO
1 INTRODUCCIN
Algunas veces se ha escuchado en la Subrea de Ciencias Qumicas, la inquietud
de los estudiantes por encontrar, desde el inicio, un "sentido" a los laboratorios de
la Subrea. No han quedado de lado aquellos estudiantes que ven al laboratorio
simplemente como un requisito para la aprobacin del curso, y es qu mucho de lo

BIOQUMICA
LABORATORIO DE
que un estudiante puede aprovechar de un laboratorio, est ligado con la manera

en cmo se lo presenten.
Es por ello que ahora se inicia el Laboratorio de Bioqumica con los fundamentos
que puedan crear un espritu de inters en el estudiante, esto es, algunas bases
sobre las que pueda descansar el proceso de aprendizaje en el laboratorio, con la
pretensin de que el estudiante se site en el contenido del Laboratorio de
Bioqumica y logre contextualizar l mismo en el campo de la Agronoma.
Procurando no caer en la profundizacin terica -lo cual corresponde a la teora de
curso- se har una breve descripcin de lo que es una "Biomolcula", y junto a ello
la identificacin de las molculas que se estudiarn posteriormente en el
Laboratorio.
As mismo, se aprovechar la reunin de esta semana para adelantar un poco de la
Prctica 2 a fin de que no se sobrecargue de trabajo la semana asignada a dicha
prctica.
5. OBJETIVOS
Explicar la importancia del laboratorio de Bioqumica dentro de la Carrera de

Ingeniero Agrnomo.
Ubicar el trmino "Biomolcula" en la Jerarqua Organizativa de la Vida.
Identificar las Biomolculas y Macromolculas que se van a trabajar en el

laboratorio.
Seleccionar el material vegetal que se trabajar en el laboratorio.
Iniciar el proceso de preparacin del material vegetal seleccionado.

BIOQUMICA
LABORATORIO DE
6. MATERIAL DE APOYO LAS BIOMOLCULA

c)
c.1.
La materia viva posee diversas caractersticas (15)
Alguna vez estudiaste en Biologa General lo que distingue a los organismos vivos
de los objetos inanimados; ahora mencionaremos uno de" estos atributos: "Un
organismo vivo es estructuralmente complicado y altamente organizado. Poseen
intrincadas estructuras internas (Fig. 1) y contienen muchos tipos de molculas.
Ello contrasta con la materia inanimada del entorno -arcilla, arena, rocas, agua del
mar que suele consistir en mezclas de compuestos qumicos relativamente
simples.
C4
C3
Fig. 1 corte transe versal de hoja. Observe como se aprecia la organizacin y complejidad
microscpica
"Cada uno de los componentes de un organismo vivo tiene una funcin especfica.
Esta afirmacin no es solamente cierta para estructuras macroscpicas como las
hojas y los tallos, el corazn y los pulmones, sino tambin para estructuras
intracelulares microscpicas como el ncleo y los cloroplastos".
La bioqumica trata de explicar la vida en trminos qumicos (5)
"Las molculas que componen los organismos vivos cumplen todas las leyes
familiares
de
la qumica, pero tambin la interaccin entre ellas, de acuerdo con otra serie de
principios
a los que nos referiremos colectivamente como la lgica molecular de la vida.
Estos
principios son un conjunto de relaciones que caracterizan la naturaleza, la funcin,
10

BIOQUMICA
LABORATORIO DE
as
como las interacciones de las Biomolcula.
"Si los organismos vivos se componen de molculas intrnsecamente inanimadas,
cmo pueden estas molculas dar lugar a la remarcable combinacin de
caractersticas que llamamos vida? Cuales la razn de que un organismo vivo
parece ser ms que la suma de sus partes inanimadas?
El objetivo fundamental de la ciencia 'bioqumica es el de determinar de qu modo
interactan los organismos vivos con otros los conjuntos de molculas inanimadas
que constituyen los organismos vivos para mantener y perpetuar la vida. En otras
palabras, la bioqumica tiene como objetivo explicar las estructuras y funciones
biolgicas en trminos qumicos. Aunque la bioqumica proporciona conocimientos
y aplicaciones prcticas que son importantes en medicina, agricultura, nutricin e
industria, su preocupacin ltima es el prodigio de la vida misma.
c.2.
Debajo de la diversidad biolgica subyace una informacin qumica (15)
Por favor piense un poco en la diversidad de seres vivos que conoce. Piense en un
conejo, en un caballo, en un insecto -de los que se miran en Entomologa General-,
en un roble (Quercus sp), en el frijol (Phaseolus vulgaris), piense en una bacteria o
un hongo (de los que se pueden apreciar al cursar Microbiologa General). Si
compara cada una de las cosas en las que pens, en un principio, parece haber
muy pocas cosas en comn.
Sin embarg, despus de cien aos de investigacin bioqumica, resulta evidente
que los organismos vivos son notablemente similares en los niveles qumico y
microscpico.
c.3.
Biomolculas
Lehninger, Nelson y Cox (15) dicen que al comenzar el estudio de las

biomolculas
y
sus
interacciones, algunas cuestiones bsicas requieren atencin. Qu elementos,
qumicos
pueden encontrarse en las clulas? Qu tipos de molculas conforman la materia
viva?
En qu proporciones se hallan? Cmo llegaron a formar parteado ella? De qu
manera
las molculas presentes en las clulas vivas son especialmente adecuadas para
cumplir
su
cometido?
11

BIOQUMICA
LABORATORIO DE
"Prcticamente todos los compuestos orgnicos a partir de los que se construyen

los organismos vivos son productos de la actividad biolgica. Estas biomolculas
fueron seleccionadas a lo largo del proceso de evolucin biolgica en razn de su
idoneidad para llevar a cabo funciones bioqumicas y celulares especficas".
c.4.
Composicin qumica (15)
"A principios del siglo diecinueve resultaba claro para los qumicos que la
composicin de la materia viva era sorprendentemente diferente de la del mundo
inanimado.
c.5.
La materia viva se compone principalmente en los elementos ms ligeros
"Los cuatro elementos ms abundantes en loa organismos vivos, en trminos de

porcentaje sobre el nmero total de tomos, son el hidrgeno, el oxgeno, el
nitrgeno y el carbono, que en conjunto representan ms del 99% de la masa de la
mayor parte de los clulas.
c.6.
Las biomolculas son compuestos de Carbono
"La qumica de los organismos vivos se organiza alrededor del elemento carbono,
que representa ms de la mitad del peso seco de las clulas.
Recuerde un poco el contenido de curso de "Qumica Orgnica": "los tomos de
carbono unidos covalentemente pueden formar cadenas lineales, cadenas ramificadas
y estructuras cclicas y en forma de celda. A estos esqueletos carbonados se les unen
otros grupos de tomos, denominados grupos funcionales, que confieren
propiedades qumicas especficas a la molcula.
Las molculas que contienen esqueletos carbonados unidos covalentemente se
denominan compuestos orgnicos; el nmero de ellos y su variedad son casi
ilimitados.
La mayor parte de biomolculas son compuestos orgnicos; podemos por tanto
deducir
que
la versatilidad de enlace del carbono constituy un factor decisivo en la seleccin
de
los
compuestos de carbono para la maquinaria molecular de las clulas durante el
origen
y
la
evolucin de los organismos vivos"(15)
c.7.
Los grupos funcionales determinan las propiedades qumicas:
12

BIOQUMICA
LABORATORIO DE
"Puede considerarse que la mayor parte de biomolculas son derivados

de
los
hidrocarburos, compuestos que tienen un esqueleto de tomos de carbono
unidos
covalentemente a los que slo se unen tomos de hidrgeno.
Los esqueletos de hidrocarburo son muy estables.
Los tomos de hidrgeno
pueden
ser
reemplazados por una amplia gama de grupos funcionales para dar lugar a las
diferentes
familias de compuestos orgnicos.
"Muchas biomolculas son poli funcionales y contienen dos o ms tipos diferentes
de grupos funcionales, cada uno de ellos con sus propias caractersticas qumicas y
su reactividad propia: Los aminocidos, una importante familia de biomolculas
que actan principalmente como subunidades monomricas de las protenas,
contienen como mnimo dos tipos diferentes de grupos funcionales: un grupo
amino y un grupo carboxlico. La capacidad de un aminocido para condensarse
con otros aminocidos para formar las protenas depende de los propiedades
qumicas de estos dos grupos funcionales''.
c.8.
Reactividad qumica (15)
"Los hidrocarburos saturados -molculas con enlaces simples carbono-carbono y

sin enlaces dobles o grupos sustituyentes- no son fcilmente atacados por la
mayora de los reactivos qumicos; las biomolculas, quo pueden, poseer diversos
tipos de grupos funcionales, son mucho ms reactivas qumicamente. Es posible
analizar y predecir el comportamiento qumico y las reacciones de las biomolculas
a partir de los grupos funcionales que contienen".
c.9.
Las macromolculas y sus subunidades monomricas (15)
"Muchas de las molculas que se encuentran dentro de las clulas son

macromolculas,
polmeros de alta masa molecular construidos a partir de precursores
relativamente simples.
Las macromolculas pueden formar posteriormente
estructuras
supra macromoleculares, dando lugar a las unidades funcionales del tipo de los
ribosomas,
las membranas y los orgnulos (Ver Fig. 2)
:
13

BIOQUMICA
LABORATORIO DE
"Las
macromolculas
son
los
constituyentes
principales
de
los
organismos. Prcticamente toda la materia slida de cualquier tipo de clulas es
orgnica y se halla presente en cuatro formas: protenas, cidos nucleicos,
polisacridos y lpidos.
"Las protenas, largos polmeros de aminocidos, constituyen, el agua aparte, la
fraccin celular mes importante; las protenas son quizs las ms verstiles de los
biomolculas, en cuanto a sus mltiples funciones y propiedades. Los cidos
nucleicos,
DNA y RNA, son polmeros de nucletidos. Participan en el almacenaje, transmisin
y
traduccin de la informacin gentica. Los polisacridos, polmeros de azcares
simples
como la glucosa, tienen dos funciones principales: como almacn de combustibles
energticos y cmo elementos estructurales extracelulares.
Los lpidos, derivados hidrocarbonados grasos o aceitosos, sirven de componentes
estructurales do las membranas y de reserva de combustible rico en energa,
adems de cumplir otras funciones.
"Las macromolculas se construyen a partir de subunidades monomricas. En las
macromolculas protenas, cidos nucleicos y polisacridos el nmero de
subunidades monomricas es muy grande.
NOTA: Si esto ltimo le confunde un poco, no se preocupe, pues esto es lo que se
ir estudiando en el laboratorio de Bioqumica.
Antes de continuar, se recordar un poco de lo visto en el Curso de

Biologa General, respecta a la jerarqua de organizacin de un organismo
vivo.
Esto servir para poder ubicar el contenido del laboratorio de Bioqumica

en un contexto
Agronmico, pues con esta Figura 2, es posible
concatenar ideas, para ubicar el sitio de las "Biomolculas" en una planta
(pilar fundamental de la Agronoma).
c.10. Existe una jerarqua en la estructura celular
"Las subunidades monomricas (aminocidos, azcares simples como la glucosa,

etc.), que se unen para formar las macromolculas, Son muy pequeas
comparadas con las macromolculas biolgicas. Una molcula d un aminocido
como la alanina tiene una longitud menor de 0.5 nm. Lo hemoglobina, la protena
transportadora de oxgeno de los eritrocitos, est formada por aproximadamente
14

BIOQUMICA
LABORATORIO DE
600 aminocidos unidos covalentemente en cuatro largas cadenas, que se pegan

en forma globular y se asocian en una estructura tetramrica con un dimetro de
5,5 nm. Por su parte, las molculas de protena son pequeas en comparacin con
los ribosomas (de aproximadamente 20 nm de dimetro), que contienen
aproximadamente 70 protenas diferentes y diversas molculas de DNA. Los
ribosomas, son a su vez, mucho ms pequeos que orgnulos cmo las
mitocondrias, de dimetro aproximadamente igual a 1000 nm. Existe pues, un
gran salto desde las biomolculas sencillas hasta las estructuras celulares que
pueden observarse con el microscopio ptico. (Ver Fig. 2)
Fig. 2 Organizacin jerrquica en la estructura celular
15
7. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO

1. A qu se le llama la Lgica Molecular de la Vida?
2. Cul es el objetivo fundamental de la Ciencia Bioqumica?
3. Cules son los dos niveles en los cuales los organismos vivos (por ejemplo, un
roble, un insecto o un hongo) son notablemente similares?
4. En razn de qu surgieron las biomolculas a lo largo del proceso de evolucin

biolgica?
5. Cules son los 4 elementos ms abundantes en los seres vivos?
6. A su juicio personal y fundamentado en lo que ha ledo, qu es lo que

determina las propiedades qumicas y el comportamiento de las biomolculas?
7. Elabore una definicin propia de Biomolcula, indique qu es una

macromolcula. Adems explique si a su juicio hay alguna diferencia entre
ambos trminos.
8. Enumere las 4 macromolculas que se presentan en el material de apoyo a esta

prctica. Adems indique cul de esas 4 es la que tiene mayor versatilidad de
funciones y propiedades.
9. Seales las funciones generales de los cidos nucleicos, los polisacridos y los
lpidos.
10. Esquematice lo que para usted significa la frase siguiente:

macromolculas se construyen a partir de subunidades monomricas.
las
11. Para resolver este tpico piense, por ejemplo, en un conjunto formado por
varios subconjuntos. Luego piense cmo la unin de estos lo hace a aqul.
12. Esquematice grficamente, de manera clara y sencilla, cada uno de los

trminos sealados en la Fig. 2 del Material de apoyo de esta prctica,
procurando que su esquema guarde una secuencia lgica. Por ejemplo: se le
pudiera ocurrir esquematizar una hoja de Frijol como ejemplo de rgano.
13. Ordene ascendentemente (en funcin de su tamao), los trminos

siguientes: rgano, subunidad monomrica, organismo vivo, complejos supra
moleculares, orgnulos, tejido, macromolcula, sistema, clula.
14. Conteste con sinceridad si usted cree que ha podido ubicar el tema central
de estudio de este laboratorio (biomolcula) como parte integradora de una
Planta. Cree usted que al lograr esta ubicacin es posible enmarcar el
Laboratorio de Bioqumica en un Contexto Agronmico? Explique. Recuerde que
su Instructor de Laboratorio est para asesorarle y ayudarle a resolver sus
dudas.
8. MATERIALES
A cargo de cada estudiante
Manual de prcticas de Laboratorio de Bioqumica
Cuaderno de prcticas de laboratorio.
9. METODOLOGA
Revisin del fundamento terico y explicacin del instructor de laboratorio:
Resolver un examen corto del fundamento terico contenido en el "Material de

Apoyo".
Revisin del cuestionario pre-laboratorio y solucin a interrogantes de los

estudiantes.
Entrega del cuestionario pre-laboratorio.
Identificacin de las biomolculas y macromolculas que se estudiarn en el

Laboratorio de Bioqumica
Revisar de forma general el documento de laboratorio de Bioqumica,

procurando identificar las biomolculas y macromolculas que se tratarn en
las prcticas respectivas.
Realizar un listado de las biomolculas y macromolculas que se van a trabajar

en las prcticas de laboratorio.
En el listado anterior, procure colocar al menos, dos ejemplos de cada

biomolcula macromolcula.
Seleccin del material vegetal a trabajar en el laboratorio:

Al observar los objetivos de su instructivo, se ve que durante el laboratorio de
Bioqumica, se va a estudiar las macromolculas. En funcin de ello, la seleccin
del material vegetal estar muy ligada al contenido (en porcentaje peso/peso) de
dichas molculas.
El material a trabajar debe, cumplir con las caractersticas siguientes:
Que lo seleccionado sea un rgano vegetal (semilla, tallo, hoja, fruto, etc.)
que no posea demasiados pigmentos (como podra ser el caso del caf o el
laurel).
Que sea factible preparar harina de ese rgano vegetal
Para la seleccin de un
recomendaciones siguientes:
Que se tenga un porcentaje no menor que 10%, de al menos dos

biomolculas y/o macromolculas (protenas, carbohidratos, lpidos).
Conocer la planta seleccionada.
Tener la facilidad de conseguir la planta.
material
vegetal
especfico
seguir
las
Toda vez seleccionada la planta que se va a trabajar, cada sub-grupo de

laboratorio, se dirigir o. su instructor para pedir por la aprobacin de la planta a
trabajar.
Para ello debe tener al menos dos opciones de plantas (que cumplan con lo
sealado anteriormente) y presentar al instructor una pequea tabla con los datos
siguientes:
Nombre comn y nombre cientfico de la planta.

Lugar (es) donde se le puede conseguir (nombre del almacn u otro lugar
de suministro del material vegetal)
Contenido, en porcentaje, de biomolculas y/o macromolculas
Contenido de humedad
Porcin no comestible de la planta.
Inicio del proceso de preparacin de la muestra vegetal aprobada;
Cuando el instructor apruebe la planta a trabajar, los estudiantes

procedern a comprar el material suficiente para poder preparar una
buena cantidad de harina de la muestra vegetal. De 700 gramos en
adelante, de material vegetal.
Cuando tengan la muestra vegetal, refirase al numeral 6.1 de la prctica

2 (en caso de semillas) y/o al numeral 6.4 de la prctica 2 (para el secado
de la muestra vegetal).
Luego los alumnos averiguarn el porcentaje de humedad de la muestra

vegetal, utilizando el horno de conveccin (a una temperatura no mayor a
60oC).
Refirase a la metodologa que se emplea en el laboratorio de la Subrea

de Ciencias Biolgicas de la FAUSAC, para averiguar el contenido de
humedad de la muestra vegetal.
Para hacer esto puede serle de utilidad los numerales 6.1 y 6.2 del
Instructivo de la Prctica 2 de este laboratorio.
Anote los resultados de sus clculos en su cuaderno de laboratorio y

entrguelos como parte de la Tarea No. 1.
Recuerde que el material vegetal que se va a utilizar en la siguiente

prctica debe llevarlo seco, para que su instructor autorice la realizacin
de dicha prctica.
10.
EVALUACIN DE LA PRCTICA
Examen Corto con un nivel de dificultad similar al del CUESTIONARIO PRE
LABORATORIO.
Tarea No. 1:
Usted deber entregar individualmente un trabajo corto, escrito. Para ello debe
resolver y realizar aquello que est planteado, que aparecen en el Instructivo de
Prctica 1. La parte prctica indicada en esos mismos ser evaluada al momento
de que los estudiantes lleven su material debidamente seco, para la preparacin
de la harina, en la Prctica 2.
PRCTICA 2. PREPARACIN DE MUESTRAS VEGETALES PARA

ANLISIS QUMICO SECADO, MOLIDO Y TAMIZADO DE
MUESTRAS VEGETALES
1 INTRODUCCIN
o
o
o En el laboratorio de Bioqumica, se plantea un estudio de protenas,

carbohidratos y lpidos dentro de un contexto agronmico, y es por ello
que el anlisis de estas biomolculas se har en muestras de

vegetales.
o No obstante el aplicar pruebas analticas a muestras de vegetales a
alguien le pudiese parecer insuficiente para crear un contexto
agronmico en cada prctica. En funcin de esto, se realiz una
planificacin de actividades, la semana anterior (Prctica 1), y en esa
oportunidad se pudo seleccionar aquel vegetal, que por su contenido,
de al menos dos de las tres molculas biolgicas en cuestin, es
adecuada para el trabajo a lo largo de todo el laboratorio.
o Luego cada grupo de trabajo ha conseguido una muestra suficiente de
la planta escogida. As se llega a la presente reunin de laboratorio, en
donde la atencin se centrar en preparar dicho material vegetal, con
lo, cual se pretende proveer al estudiante de herramientas de trabajo
del campo agronmico.
o
11.
OBJETIVOS
o
Al finalizar la prctica, el alumno deber estar en capacidad de:
Preparar muestras vegetales para el anlisis a realizar en el laboratorio de

Bioqumica de la FAUSAC.
Utilizar de manera correcta, el equipo de laboratorio utilizado en la presente

prctica.
o
12.
MARCO TERICO
o
Cuando se hace referencia a "preparar" muestras vegetales para anlisis
qumico, en el contexto del laboratorio de Bioqumica de la FAUSAC, se est
hablando del proceso de colecta, secado, molido y tamizado de dichas muestras.
Este proceso incluye la "extraccin" de los compuestos a analizar, sin embargo,
esto se deja como un apartado puesto que se estar trabajando ms adelante (16)
1
Recopilacin botnica
o
Es el estudio botnico de la familia o gnero de plantas a investigar con el
objeto de no cometer errores en el momento de la recoleccin, pues en ocasiones
hay varias plantas, miembros de familias o gneros, que por lo comn contienen
las mismas sustancias de inters y debe decidirse cul planta escoger en el
momento. (6)
c.11. Investigacin bibliogrfica de la planta de inters (6)
o Consiste en hacer un estudio exhaustivo sobre todo lo que se

encuentra escrito sobre determinado gnero o familia del vegetal a
investigar con el objeto de tener la mayor cantidad posible de
informacin y conocer, por ejemplo, que parte de la planta es rica en
ciertos constituyentes, qu tipo de constituyentes se conoce que
contiene, qu parte de la planta recolectar, qu mtodo de extraccin
utilizar, etc.
o La mayor cantidad de informacin sobre estudios qumicos en plantas
y sustancias aisladas de ellas, son publicadas en revistas cientficas de
muy diversa ndole, pertenecientes a las reas de Farmacia, Medicina,
Agronoma, Botnica, Qumica, Zootecnia, etc.. Por lo tanto la
localizacin de datos sobre un vegetal puede ser muy dificultosa. Sin
embargo utilizando publicaciones de Chemical Abstrais u otros
abstractos de la rama de vegetales, puede facilitarse esta bsqueda
bibliogrfica. Adems, actualmente, el recurso Internet es de mucha
ayuda.
c.12. Recoleccin de las muestras vegetales
o Segn Medinilla (lT), idealmente el anlisis qumico de muestras

vegetales debera realizarse sobre tejidos vegetales frescos. Sin
embargo, muchas veces la planta a estudiar proviene de lugares
distantes, o quizs fue colectada en otro continente. En tales casos la
planta debe ser secada antes de la extraccin de compuestos.
o Debe cuidarse que el material vegetal bajo estudio se encuentre libre

de contaminacin con otra planta. Asimismo, es esencial emplear
plantas sanas, que no estn infectadas por virus, bacterias u hongos.
La razn de esto es que no solo podran detectarse productos de
sntesis microbiana, sino que adems estas infecciones podran alterar
seriamente el metabolismo de la planta y formarse productos
inesperados, quizs en grandes cantidades (lT).
o Es necesario reconocer de antemano al vegetal a recolectar entre
grupos similares de plantas, as como saber que parte o partes se van
a colectar de acuerdo al inters del investigador. Es imperativo llevar a
cabo una recoleccin de acuerdo a las normas establecidas para ello.
(6)
o De la tcnica do colecta de plantas en el campo, puede obtenerse una
buena referencia consultando el documento "Algunas indicaciones para
la preservacin de plantas", del Herbario de la FAUSAC (13), razn por
la cual no se detalla aqu.
c.13. Secado de las muestras vegetales
o Medinilla (17), dice: "es esencial que la operacin de secado se efecte

bajo condiciones controladas para evitar que ocurran cambios
qumicos en los constituyentes. Toda muestra vegetal debe secarse lo
ms pronto posible, evitando usar altas temperaturas, y preferiblemente
con una adecuada circulacin de aire".
o
Segn el documento "Mtodos de Investigacin Fitoqumica" (6), el secado de
muestras vegetales puede realizarse de 2 maneras:
c.13.1.
Tcnica de secado al sol:

o Esta tcnica es la ms utilizada, debido a que no hay descomposicin
de constituyentes, por lo cual es la tcnica ms recomendable.
Secando sobre papel peridico cambiable cada 24 horas hasta unas 4 a 5
veces hasta la eliminacin total del agua
c.13.2.
Tcnica de secado artificial:
o
Utilizando mtodos elctricos o de cualquier otro tipo. Es necesario no calentar
a temperaturas mayores de 60C que podran descomponer ciertos compuestos.
o En el documento del Herbario de la FAUSAC (13), dice que en el
proceso de colecta de muestras vegetales, muchos buenos
especmenes se pierden por pudricin. Por ello el secado de esas

muestras es imperativo. En ese documento se citan tcnicas de
colocacin de muestras vegetales en una "prensa", con el objeto de
preservar de mejor forma la morfologa de la planta, y proveer una
tcnica fcil de secado -que es lo particularmente nos interesa -. Una
vez hecho el paquete en la "prensa", puede dejarse secando lejos de la
intemperie y haciendo cambios constantes de papel peridico, o bien
utilizando una cmara desecadora, comnmente utilizada en el herbario.
c.14. Molienda y tamizado del material vegetal
o
Moler es reducir un cuerpo a partes menudas, o aplastarlo mucho (de aqu en
adelante procuraremos no confundir este trmino con "macerar", por las razones
que habrn de explicarse posteriormente). Para el caso del anlisis de las plantas
en el laboratorio de Bioqumica, se realiza la molienda con el fin de homogeneizar el
material a analizar, pues muchas veces, los compuestos qumicos de inters se
encuentran distribuidos heterogneamente en un rgano vegetal
o "La molienda debe efectuarse con el material ya seco; con el objeto de
reducir a lo mnimo posible el tamao de la partcula del material a
utilizar. Con races o material leoso debe usarse un molino, teniendo
cuidado de que la friccin producida no eleve la temperatura del
sistema para evitar descomposiciones de principios activos o compuestos
qumicos de inters. Cuando el material es ligero (hojas, tallos, flores,
etc.) puede utilizarse un mortero manual" (1).
o Para el tamizado se utiliza un tamiz de 20 mallas, con el objeto de
dejar pasar nicamente aquellas partculas ms pequeas y separarla
de grumos que no suelen ser de inters.
c.15. Procesamiento de las semillas
o En el laboratorio de Bioqumica de la FAUSAC suelen utilizarse semillas

para el anlisis de las biomolculas de inters. Por ello debe hacerse
una breve referencia de aquellas razones en las que se fundamentan
algunos hechos de la metodologa del instructivo de prctica.
o Para principiar, se recomienda eliminar la testa de las semillas a usar,
para evitar que exista una interferencia de pigmentos (13). Sin
embargo, esto se hace en funcin de que con el anlisis a realizar en
este laboratorio, se pretende acercar al estudiante al estudio cualicuantitativo de biomolculas, y no se pretende hacer un anlisis
detallado de todas las molculas para cada parte de la planta a utilizar.
o Es bueno hacer referencia a la definicin de testa. Testa es la capa

exterior de la semilla, y suele conocerse vulgarmente como la "cascara"
de la semilla. Algunas veces es difcil de eliminar (por ejemplo en el frijol
negro, Phaseolus vulgaris) y por ello se recomienda hacer un remojo de
no ms de 25 minutos para esa eliminacin. Lo que sucede es que la
testa no es impermeable y permite el paso de agua hacia su interior,
provocando que los tejidos internos de la semilla (endospermo y
embrin) absorban agua y se hinchen, facilitando de tal manera la
eliminacin de la testa.
o
13.
CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRCTICA 2

o
1. A qu se refiere la "preparacin de muestras vegetales" para anlisis

qumico, dentro del contexto de laboratorio de Bioqumica de la FAUSAC?
o
2. Cul es la importancia de hacer un recopilado botnico y una investigacin
bibliogrfica de
la planta de inters?
o
3. Por qu debe cuidarse que el material vegetal bajo estudio debe estar
sano?
o
4. Qu documento se le recomienda aqu para la colecta y secado de material
vegetal?
o
5. Por qu razn la operacin de secado debe hacerse bajo condiciones
controladas?
o
6. En qu consiste la tcnica de secado artificial de muestras vegetales
o
7. Explique por qu cree que se hace la molienda del material vegetal.
o
8. Qu es la testa de una semilla?
o
o
NOTA Cada grupo de trabajo debe traer, para la realizacin de esta prctica, lo
siguiente: La muestra vegetal que se puso a secar das antes de la presente
prctica, segn lo estipulado por el Instructivo de\ Prctica I. Esta muestra debe
estar debidamente seca para no: daar el equipo de laboratorio, por ello su
instructor revisar esto al inicio de la prctica.
14.
MATERIALES
o
o Preparar el rea de trabajo del rea de trabajo:
01 Mortero y 01 pistilo (1 marceador)
02 esptulas
01 Becker de 600 ml
01 balanza mono plato
Papel peridico
01 tamiz de 20 mallas
A cargo del da de laboratorio:
01 horno de conveccin
Papel encerado
Etiquetas auto adhesivo
Tijeras
Masking tape
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
15.
METODOLOGA
o
o
o Nota: Debido a que la mayora de grupos de trabajo utilizarn

"semillas" de la planta de inters, la metodologa que se describirn
ser para ese rgano vegetal. En caso de utilizar otra parte de la
planta, consultar con su instructor de laboratorio.
16.
LABORATORIO.
Tarea No. 2: Usted deber entregar individualmente un trabajo corto,

escrito. Para ello debe resolver y realizar aquello que est planteado para
el reporte.
17.
PARA INCLUIR EN EL REPORTE DE PRCTICA:

o
Reporte la cantidad de semilla utilizada para preparar harina.
Reporte la cantidad de harina obtenida
Reporte el porcentaje de prdida en el proceso de preparacin de harina.

Trate de indicar las razones de prdida de harina.
Indique qu cuidados especiales debern aplicarse a la harina en su

almacenamiento.
18.
INVESTIGAR
Por qu debe eliminarse la testa de las semillas que se utilizaren como
muestras vegetales para el anlisis en este laboratorio?
Refirase a documentos de Tecnologa de Semillas" o dirjase al rea

Tecnolgica (Subrea de Manejo y Mejoramiento de Plantas) y pregunto
sobre quien puede asesorarle en este tpico.
Por qu se utiliza ms la "tcnica de secado al sol" que la de "secado

artificial", en la preparacin de muestras vegetales para anlisis qumico?
Por qu es necesario calentar las muestras vegetales a temperaturas

menores de 60 0C en la tcnica de secado artificial?
Cul es la razn de efectuar la "molienda" con material vegetal seco?

o
o PRCTICA No. 3 EXTRACCIN Y ESTUDIO CUALITATIVO

DE PROTENAS EN MUESTRAS VEGETALES
o
1
INTRODUCCIN
o
o El contenido proteico es un componente de los anlisis bromatolgicos
que se realizan en cultivos para evaluar su calidad nutricional o para
evaluar el efecto, en este aspecto, de algn tratamiento practicado
(16).
o Para el estudio de las macromolculas, en este laboratorio, han de
realizarse pruebas analticas (cuantitativas y cualitativas). Dichas
pruebas estn diseadas para llevarse a cabo en medio acuoso. Es por
ello que en esta prctica de laboratorio se prepararn soluciones
salinas y acuosas de protenas a travs del proceso de "Extraccin de
Protenas" indicado ms adelante.
o Con la finalidad de no confundir al estudiante en su proceso de
aprendizaje, en esta prctica se pretende dar a conocer cmo
caracterizar a la macromolcula "Protena", sin profundizar, todava, en
las subunidades monomricas que le componen. As que se detendr,
por el momento, en el estudio a travs de dos pruebas de
caracterizacin de protenas, que son: La Prueba de Biuret y la Prueba
de Metales Pesados.
o Es necesario mencionar, que el estudio cuantitativo de protenas se

realizar en una prctica posterior, a fin de evitar que se sobresature
el contenido de prcticas de laboratorio siguientes.
o
19.
OBJETIVOS
o
o Al finalizar la prctica el estudiante deber estar en capacidad de:

o
Efectuar extraccin salina y extraccin acuosa de las protenas de una
muestra Vegetal.
Efectuar la prueba de Biuret para la deteccin de protenas y/o pptidos (de

al menos dos enlaces peptdicos), en los extractos.
Efectuar la prueba de "Precipitacin Proteica por Metales Pesados" para la

deteccin de protenas en los extractos.
Utilizar adecuadamente el equipo y cristalera de laboratorio empleado en la

presente prctica.
o
o
20.
MARCO TERICO.
o
Protenas
o La importancia de las protenas fue reconocida a comienzos del S. XIX

por Mulder (1838): En las plantas y animales hay presente una
sustancia que, sin duda es la ms importante entre las sustancias
conocidas de los seres vivos, y sin ella, la vida sera imposible en el
planeta.
o Esta sustancia se llama protena. El nombre protena atestigua la
importancia que sematribuye a esta clase de biomolculas". (19)
o Bohinski (2) dice lo siguiente: "Cada protena es nica en trminos
de estructura y funcin. No obstante, tambin existen numerosas
semejanzas entre las protenas. Su caracterstica ms comn es que
todas son polmeros formados por aminocidos, los cuales son sus
monmeros, stos se unen en forma covalente unos a otros en

secuencia mediante lo que se llama un enlace peptdico. La
estructura resultante, que tiene forma de cadena, recibe el nombre
de polipptido, o simplemente pptido. Cuando un polipptido
consta de 50 o ms residuos (unidades) de aminocidos (un mnimo
arbitrario) ya se considera una protena".
o
Como dicen Lehninger, Nelson y Cox (15), casi todo lo que sucede en la
clula requiere la intervencin de una o ms protenas. Las protenas
proporcionan estructura, catalizan reacciones celulares y llevan a cabo una
multitud de tareas. Su papel central en la clula queda reflejado en el hecho
que la informacin gentica se expresa en ltimo trmino en forma de
protenas. En una clula tpica existen miles de protenas diferentes, cada una
codificada por un gen y encargada de realizar una tarea especfica. Las
protenas se encuentran entre las macromolculas biolgicas ms abundantes y
son tambin extremadamente verstiles en sus funciones. Las protenas son las
molculas orgnicas ms abundantes en el interior de las clulas, pues
constituyen el 50% o ms de su peso seco.
o
Las protenas ocupan una posicin central en la composicin y en
funcionalismo de la materia viva. Las actividades fsicas y qumicas que
constituyen la vida de la clula estn catalizadas por enzimas, las cuales son
todas de naturaleza proteica (19).
c.16. Extraccin proteica
o
La visin bioqumica general sobre la estructura y funcin de las
protenas proviene del estudio de muchas protenas individuales. Los mtodos
de separacin de protenas aprovechan las propiedades tales como la carga,
tamao y solubilidad, que varan en una y otra protena (15).
o
La Extraccin de Protenas tiene que ver mucho con su solubilidad en
diversos compuestos. Dado que muchas protenas se unen a otras
biomolculas, las protenas tambin se pueden separar en base a sus
propiedades ligantes. La fuente de una protena es generalmente un tejido o
clulas microbianas. Las clulas deben romperse liberando la protena en una
solucin denominada extracto crudo.
o Protena: del griego protos, primero. Mulder en 1838 introdujo esta
palabra con el sentido de "de primer orden, o sea, la sustancia ms
importante de la materia viva,
Para el caso particular de los laboratorios de Bioqumica de la

FAUSAC, interesa la extraccin acuosa y la extraccin salina. Se
suelen preparar soluciones de protena a razn de 5 g. de protena
por litro de solvente. La casena se disuelve en un poco de NaOH
(6N), la albmina, gelatina y peptona se disuelven en solucin salina
(NaCl 0.2N) (19)
c.17. Composicin de las protenas
o En la prctica siguiente, se ver cmo las protenas se conforman

a partir de aminocidos. El objeto de colocar aqu, un poco sobre
"composicin de Protenas", es para tocar un poco lo de la solubilidad
de las protenas y con ello comprender un poco mejor el tema de la
"Extraccin de Protenas".
o
Segn Lelninger (15), del aislamiento de muchas protenas en forma pura
y cristalina, se ha aprendido que todas contienen carbono, hidrgeno,
nitrgeno y oxgeno, y casi todas tambin azufre. Asimismo, hay protenas
que contiene elementos adicionales, como fsforo, hierro, zinc y cobre.
Lehninger(15) y Bohin.ski(2) coinciden en que las protenas se dividen en dos
clases principales basndose en su composicin: Protenas simples y
Protenas conjugadas.
1. LAS PROTENAS SIMPLES: son aquellas que por hidrlisis producen
solamente aminocidos, sin ningn otro producto principal, orgnico o
inorgnico. Comprenden los siguientes grupos:
Albminas: Solubles en agua, coagulan por el calor y precipitan con las

soluciones salinas saturadas.
Globulinas: Solubles en soluciones diluidas de sales de cidos y bases

fuertes (NaCl por ejemplo); insolubles en agua pura o en soluciones
salinas de mediana concentracin; coagulan por el calor.
Glutelinas: Solubles en cidos y lcalis diluidos; insolubles en los

solventes neutros; coagulan por el calor. Ejemplo: glutelina del trigo.
Prolaminas: Solubles en alcohol de 70 a 80%; insoluble en alcohol

absoluto, en agua y en otros solventes neutros. Ejemplos: la zena del
maz y la gliadina del trigo.
Albuminoides: Solubles en todo solvente neutro y en cidos y lcalis

diluidos. En este grupo entran las protenas de sostn. Ejemplo:
queratina, colgeno.
Histidias: Solubles en agua y en cidos muy diluidos; coagulables por

el calor. Predominan los aminocidos bsicos.
Protaminas: Poli pptidos bsicos, solubles en agua predominan

aminocidos bsicos en su estructura; precipitan a otras protenas. Se
encuentran principalmente en las clulas huevo.
o
2. Las PROTENAS CONJUGADAS son aquellas que por hidrlisis producen no

solamente aminocidos, sino tambin otros componentes orgnicos o
inorgnicos (esta porcin no aminocido, de una protena conjugada se
denomina grupo prosttico). Las protenas conjugadas pueden subdividirse
de acuerdo con la naturaleza qumica de sus grupos prostticos, y pueden
identificarse as:
Nucleoprotenas: Compuestos formados por una o varias molculas de

protena unidas al cido nucleico.
Glucoproteas: Compuestos que

prostticos. Ejemplo: la mucina.
Fofoprotenas: Compuestos con un radical que contiene fsforo que no sea

ni un fosfolpidos ni cido nucleicos. Ejemplo: la casena.
Cromoprotenas: Compuestos conjugados con

Ejemplos: hemoglobina, citocroruo y flavoproienas.
Lipoprotenas: Poseen grasas neutras (triglicridos) u otros lpidos tales

como fosfolpidos y colesterol.
Metaloprotenas: Resultan de la unin con un metal.
Flavoprotenas: Tienen una flavina como grupo prosttico. De vez en

cuando pueden estar presentes dos o ms grupos prostticos idnticos o
diferentes.
tienen
c.18. Configuracin (forma) de las protenas
carbohidratos
un
como
grupo
grupos
cromforo.
o Segn la forma o estructura tridimensional de las protenas, estas

pueden ser: fibrosas y globulares.
o Las protenas fibrosas tienen formas moleculares muy alargadas.

Como dicen Sniith y Woocl(19), son insolubles en medio acuoso.
Dentro de ellas encontramos: Cartlagos, tendones, cabello, seda,
exoesqueleto de los insectos, etc...
o Las protenas globulares son ms compactas que las fibrosas; en
general son ms solubles que las protenas fibrosas. Incluyen la
mayora de enzimas, muchas hormonas y otros como los anticuerpos
(2,19).
c.19. Extraccin salina de las protenas
o
Segn White, et.aL (20), las sales pueden disminuir o aumentar la
solubilidad de una protena. El efecto salino haciendo mayor la cantidad de
protena disuelta se conoce como salling-in, o solubilidad por salado.
o Como usted recordar, del contenido terico de la Qumica General II,
la solubilidad de cualquier sustancia depende de la afinidad relativa
entre la correspondiente a las molculas del soluto entre s y la
existente con las molculas del solvente. Como dicen White et.al. (20):
"Cualquier factor que disminuya las interacciones entre las molculas
del soluto tender a aumentar la solubilidad. En el efecto salling-in, los
pequeos iones de las sales neutras interaccionarn con los grupos
inicos de las molculas proteicas, disminuyendo la interaccin
proteica y, por tanto, favoreciendo la solubilidad".
c.20. Reacciones de color de protenas (20)
o An cuando todas las protenas son: Compuestos formados por

aminocidos unidos por enlaces peptdicos, estas sustancias presentan
variaciones considerables en sus propiedades qumicas y biolgicas.
o Las protenas reflejan las propiedades qumicas de los aminocidos que
estas contienen en su estructura. Muchas de las reacciones de color de
las protenas dependen de la presencia de un aminocido en su
molcula.
c.21. Prueba de precipitacin proteica con metales pesados
o Esta prueba permite detectar la presencia de protenas. La

precipitacin de las protenas se llama "desnaturalizacin". En ella hay
prdida de la actividad biolgica de la molcula. La desnaturalizacin
puede ser causada por: a) agentes fsicos o b) por agentes qumicos.
o La prueba se basa en que no todas las protenas son igualmente

sensibles a los agentes desnaturalizantes y esta propiedad puede
usarse para remover ciertas protenas de una mezcla.
o A pH 7 o por encima de l, las protenas estn usualmente cargadas
negativamente, as que la adicin de metales cargados positivamente
neutraliza la carga y la protena precipita. La precipitacin por metales
pesados es, por lo tanto, ms efectiva a valores de pH neutros o
ligeramente alcalinos, pero la solucin no puede ser muy alcalina
porque se corre el riesgo de que se precipiten hidrxidos de los
metales. El precipitado es frecuentemente soluble en exceso de iones
de metal pesado, ya que tal exceso confiere a las partculas, cargas
positivas estables.
o
o
o
o
o
Figura 3: Resultados de prueba de nitrato de plata, as como la reaccin.
o
o
o
o
o
o
o
o
o
Figura 4: Resultados de la prueba de (CH3COO)2Pb

Fuente: Marvin Pec.
o
c.22. Biuret
o El ion cobre formar un complejo con las protenas de una manera

similar al que forma con el amonio. El complejo en el caso de las
protenas es rojo o violeta, y azul en el caso del amonio. La prueba es
positiva cuando la muestra analizada posee, al menos, dos enlaces

peptdicos (tripptidos, polipptidos y protenas); esto quiere decir que
los aminocidos y los dipptidos dan una prueba negativa de Biuret.
o La sustancia ms simple que tiene dos uniones peptdicos es el Biuret
(NH2CONHCONH2) y esta es la razn por la cual esta reaccin lleve el
nombre de Biuret.
o
O
o
R
H N
N H
C H
O
C u2+
H C
C
H N
R
R
O
N H
C H
H C
o
Figura 5: Resultados de prueba de Biuret y figura que muestra la interaccin entre cobre y
aminocidos
o
o
o
o
o
o
o
21.

o
o 1.
Elabore una definicin propia de: protena.
2.
Cules son los cinco elementos que se encuentran ms comnmente
en
las
protenas?
3.
Cmo pueden clasificarse las protenas segn su "composicin"?
o
4.
Cul es la diferencia entre una protena simple y una protena
conjugada?
5.
Mencione tres protenas simples que sean solubles en agua.
6.
De una definicin de grupo prosttico. Mencione al menos tres
compuestos que pueden, existir corno grupos prostticos, en las protenas.
7. Qu tipo de protena -segn su configuracin- es ms "soluble"? Las

fibrosas o las globulares?
8.
A qu se refiere la "solubilidad por salado" o salting-in?
9.
A qu se le llama "desnaturalizacin" de protenas?
10.
A pH 7 o por encima de l, las protenas precipitan cuando se les
adicionan metales pesados. Por qu? Adems, por qu en esta reaccin la
solucin no debe estar demasiado alcalina?
11.
Qu caracterstica debe tener un compuesto para dar positiva la
prueba de Biuret?
12.
Indique el cambio que evidencia un resultado positivo para la prueba
de "Metales Pesados" y para la prueba de "Biuret".
o
o
o
o
o
o
o
o
22.
MATERIALES
A cada del grupo de trabajo:
Balanza mono plat
2 Becker de 150 ml.
2 erlenmeyer de 50 ml.
1 anillo de hierro
1 esptula
12 tubos de ensayo
o
o
Centrfuga manual
2 varillas de agitacin
Probeta de 25 ml
1 plancha agitadora
1 embudo plstico
1 soporte universal
Agua destilada
Solucin de Biuret [0.2M
1 estufa elctrica
Papel parafilm No. 42
Papel encerado
2 probetas de 10 ml.
1 piceta
4 tubos de ensayo c/tapn de

rosca-1 pinza p/tubo de
Solucin NaCl 10.2N]
Solucin Acetato de Pb
Refrigeradora
Papel filtro Whatman
Centrifugadora
Solucin de HCl (6N)
1 beacker de 500 mL
Solucin de Sulfato Cu [0.2M]
1 gradilla de metal
2 tubos p/centrfuga
Etiquetas autoadhesivas
Solucin Nitrato de Hg 10.2M
Centrifugadora
23.
METODOLOGA
PRUEBAS DE CARACTERIZACIN DE PROTENAS
El siguiente cuadro, es una gua para el estudiante para que sepa qu muestras se
van a analizar con cada prueba, en esta prctica.
CUADRO 1. Resumen de pruebas cualitativas,
extractos de protenas.
a realizar a soluciones patrones y
PRUEBA
METALES
PESADOS
MUESTRA
ANALIZAR
BIURET
Extracto Acuoso
Extracto Salino
Peptona
Albumina
Casena
Gelatina
NOTA: Las soluciones patrn (peptona, albmina, casena y gelatina) son protenas.
Estas soluciones se utilizan para que el estudiante tenga cuatro "testigos" de
resultados positivos en cada prueba. En otras palabras, estas soluciones sirven
para poder observar como es el resultado positivo para cada una de estas pruebas.
24.

LABORATORIO.
La metodologa de evaluacin tambin incluye un Informe de prctica. Este
informe puede hacerse en parejos o individualmente, y debe incluir:
Cartula
RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS
Resultados de prctica.
Estos se presentan segn las siguientes indicaciones:
Para los resultados de los numerales 6.1 y 6.2 de la metodologa, solamente

resuelva lo que se le indica en los "cuadritos negros" que all aparecen.
Para los numerales 6.3 y 6.4, primeramente debe presentar un cuadro de
resultados pura cada prueba: Siga el modelo indicado en el Cuadro 2.
CUADRO 2. Resultados de la prueba de BIURET con las cuatro soluciones
patrn y los dos extractos de protenas.
MUESTRA ANALIZADA
COLORACIN OBTENIDA
DICTAMEN
Extracto Acuoso
Extracto Salino
Peptona
Albmina
Casena
Gelatina
REFERENCIA: Coloracin = color observado como resultado de la
prueba Dictamen = prueba positiva (+) o negativa (-).
Adems del cuadro anterior, para los numerales 6.3 y 6.4, debe incluir el anlisis
y explicacin de los dos cuadros de resultados, a fin de establecer la presencia o
ausencia de protenas en cada muestra problema. (Para el caso de la explicacin
que se le pide, haga nfasis sobre si hay concordancia de los resultados
prcticos con el fundamento terico. Si no hubiese tal concordancia, plantee una
justificacin valida).
Resuelva los "cuadros" que aparezcan en su metodologa (6.3 y 6.4); debe

presentarlos tambin, intercalados con los resultados, y anlisis de resultados.
Esto puede servirle tambin como una gua para ou anlisis de resultados.
25.
PARA INCLUIR EN EL INFORME EN LA DISCUSIN
Qu es una solucin patrn? Qu utilidad encontrada con el uso de este tipo de

soluciones en la presente prctica?
De la extraccin de protenas:
Cul cree que es (son) la(s) razn(es) para realizar dos tipos de extraccin de
protenas?
Cuntos tipos de "extraccin de protenas" existen y cules son? En qu se
diferencian estos tipos de extraccin?
Qu tipo de protena -segn su configuracin- es ms "soluble"? Las fibrosas o
los globulares? En funcin de ello qu tipo de protena -segn su configuracinhabr en mayor cantidad en sus "Extractos de protenas"?
Esquematice (utilice dibujos sencillos: No se complique) el procedimiento general
para extraer protenas de una muestra vegetal. Sugiera usted el solvente para
extraccin (agua o solucin salina)
En qu se basa la prueba de Precipitacin proteica por metales pesados?
Qu resultado indica una prueba positiva en esta prueba?
Qu se logra identificar con esta prueba?
En qu se basa la prueba de Biuret?
Qu resultado indica una prueba positiva en esta prueba?
Qu se logra identificar con esta prueba?
Haga un listado de los tipos de protenas que se pueden extraer con Agua. (Vea la
parte Composicin de las Protenas" de su material de Apoyo a la prctica)
Haga un listado de los tipos de protenas que se pueden extraer con Solucin
salina. (Vea la parte "Composicin de las Protenas" de su material de Apoyo a la
prctica)
A qu se refiere la solubilidad por salado o "salting in"? Qu tiene que ver con
esta prueba de la prctica?
PRCTICA 4 ESTUDIO DE AMINOCIDOS DE MUESTRA

VEGETALES
1 INTRODUCCIN
En la prctica anterior se ha efectuado el estudio cualitativo de protenas de una
muestra vegetal. Esta vez el estudio recae en las unidades que componen a las
protenas; usted recordar que en la prctica 1 se mencion que las protenas se
construyen a partir de aminocidos, los cuales son las subunidades monomricas
que se unen para formar esas macromolculas.
Tal como se ver ms adelante, pueden obtenerse aminocidos libres a partir de la
hidrlisis de protenas. Esto es, entonces, la primera parte de esta prctica, la
hidrlisis de protenas; luego, mediante el anlisis de los hidrolizados, se habr
de comprobar si la hidrlisis de las protenas fue o no fue completa.
El desarrollo de esta prctica contina con un estudio cualitativo de los
hidrolizados obtenidos; es este el momento en que el estudiante de laboratorio
centrar su atencin en los aminocidos y podr detectar su presencia/ausencia.
Esta prctica es una de las ms que necesita ms tiempo para su realizacin. A s
que deben emplearse al mximo las dos horas de laboratorio y en caso de no
poder terminar con la metodologa de prctica, se tendr que trabajar en otro
momento, acordado por el instructor y los estudiantes, dentro de la semana
asignada para esta prctica.
26.
OBJETIVOS:
Al finalizar la prctica, el estudiante deber estar en la capacidad de:
Efectuar la hidrlisis cida e hidrlisis alcalina de protenas extradas de la

muestra vegetal.
Determinar la presencia o ausencia de aminocidos en hidrolizados de

protenas.
Determinar la presencia o ausencia de aminocidos con ncleo aromtico, en

hidrolizados de protenas.
Determinar la presencio o ausencia de aminocidos fenlicos, en hidrolizados

de protena.
Determinar la presencia o ausencia de thioaminocidos, en hidrolizados de

protena.
Determinar la presencia o ausencia de aminocidos con grupo imidazol, en

hidrolizados de protenas.
Utilizar soluciones patrn, para obtener resultados positivos que acten

como testigos en cada prueba de esta prctica.
Utilizar adecuadamente el equipo y cristalera de laboratorio empleado en la

presente prctica.
27.
MARCO TERICO.
La hidrlisis proteica es el proceso de rompimiento del enlace peptdico con lo que

se producen ppticos y/o aminocidos libres. La hidrlisis proteica puede ser de
tres tipos: cida, alcalina o por enzimas (10,15)
La hidrlisis con cido o base no es especfica y existen algunos aminocidos que
sufren modificaciones o pueden ser destruidos. Mediante la hidrlisis enzimtica es
posible romper los enlaces peptdico entre residuos de aminocidos especficos. La
hidrlisis es un proceso fundamental para llegar a determinar la secuencia de
aminocidos que conforman la estructura primaria de la protena. (15).
Hidrlisis de las protenas mediante cido: (De Harper (10) y Lehninger (15)): la
mayora de las protenas son completamente hidrolizadas hasta sus aminocidos
constituyentes calentando a 110oC durante 20 a 70 horas en HCL 6N. La hidrlisis
se realiza en un tubo cerrado. El hidrolizado resultante contiene los aminocidos en
forma de clorhidratos.
Sin embargo, no todos los aminocidos de un pptido o de una protena
determinada se recuperarn cuantitativamente. Esto quiere decir lo
siguiente:
Todo el triptfano y cantidades variables se serina y treonina son destruidos.
Los grupos amida de la glutamina y la asparagina resultan hidrolizados, con
produccin de los cidos glutmico y asprtico y de iones amonio.
Hidrlisis de las protenas por lcali: esta se usa para recuperar el triptfano y la
tirosina, los cuales no se destruyen por hidrlisis alcalina. Sin embargo, la hidrlisis
alcalina provoca la destruccin de la arginina, la cistina, la serina y la treonina;
todos los aminocidos son racemizados. Por ello el mtodo se emplea para la
determinacin por separado del triptfano, que es estable a la calefaccin con

bases. (10,15)
1
Aminocidos
Anteriormente se cit a Bohinski (2) para conocer que la caracterstica ms comn

de las protenas es que todas son polmeros formados por aminocidos. Este autor
dice que los aminocidos son monmeros que se unen en forma covalente unos a
otros en secuencia mediante lo que se llama un enlace peptdico, y dan por
resultado una estructura que tiene forma de cadena; esa estructura recibe el
nombre de polipptido, o simplemente pptido.
Cuando un polipptido consta de 50 o ms residuos (unidades) de aminocidos (un
mnimo arbitrario) ya se consideran una protena.
El primer aminocidos que se aisl de una protena fue la glicina (del griego
glykis, dulce, pues la sustancia tiene cierto sabor dulce); la obtuvo Braconnot, en
1820, al hidrolizar la gelatina con cido sulfrico diluido, en un intento de
averiguar si la gelatina, como la celulosa, producira un azcar por hidrlisis.
Durante un perodo de 50 aos, el aislamiento de aminocidos a partir de
hidrolizados de protena era una cuestin de azar, ms que un problema de
investigacin sistemtica (10).
A partir de estos bloques unitarios, los aminocidos, los diferentes organismos
pueden fabricar productos tan diversos como enzimas, hormonas, anticuerpos, la
protena
del cristalino del ojo, antibiticos, venenos de hongos y muchas
sustancias con actividades biolgicas distintas (15)
c.23. Estructura de los aminocidos caractersticas generales
Se sabe que existe alrededor de 300 aminocidos diferentes de origen natural.

Muchos de ellos solo se observan en determinadas formas de vida, y algunos solo
aparecen en una especie. Sin embargo, todos los organismos usan solo 20 de ellos
para la biosntesis de protenas, lo que constituye un notable ejemplo de la unidad
bioqumica en la biosfera (2).
Como seala Lehinger, Nelson y Cox (15), debido a que cada uno de esos
aminocidos tiene una cadena lateral propia que determina sus propiedades
qumicas, se puede considerar a este grupo de 20 molculas precursoras como el
alfabeto en el que est escrito el lenguaje de la estructura proteica . Las clulas
pueden producir protenas con propiedades y actividades claramente diferentes
uniendo los mismos 20 aminocidos en multitud de combinaciones y secuencias
distintas.
Como dice Bohinski (2) y White & Handler (18), casi todos los aminocidos (salvo
la Prolina y la hidroxiprolina) son alfa-aminocidos pues tienen un grupo amino (NH2) y Un grupo carboxilo (-COOH) unidos al mismo tomo de carbono, llamado
alfa.
Cada aminocido posee propiedades nicas debido a la variacin en la estructura

de los Grupos R (el grupo R se refiere a la cadena lateral del aminocido).
Lehninger, Nelson y Cox (15) dicen que algunos aminocidos son mucho menos
frecuentes q otros. Por ejemplo, muchas protenas poseen relativamente pocos
restos de Histidina y de triptfano.
c.24. Reacciones qumicas de los aminocidos
Alfa-amino ms caracterstica y ms ampliamente utilizada es la reaccin de la Las

reacciones qumicas de los aminocidos son las de sus grupos funcionales, es
decir, las de los grupos alfa-carboxilo y alfa-amino, as como las de los grupos
funcionales presentes de las cadenas laterales. Una de las reacciones del grupo
ninhidrina, que puede utilizarse para valorar los aminocidos cuantitativamente en
cantidades muy pequeas (15)
c.25. Solubilidad de los aminocidos
La naturaleza del radical R de los aminocidos, puede ser, por un lado, hidroflico o
Hidrofbico y, por otro, acida, bsica o neutra. Fieser y Fieser (10) sealan que
como los aminocidos contienen simultneamente grupos carboxilo y amino, se
comportan como sustancias anfteras que se ionizan como cidos y como bases.
En el laboratorio de Bioqumica de la FAUSAC, se acostumbra preparar soluciones
patrn de aminocidos a razn de 1g de aminocidos por litro de agua destilada.
Para disolver los aminocidos hay que considerar si estos son cidos, bsicos o
neutros. As: los aminocidos se disuelven en agua y agregando unas gotas de
HCl 1N;
por otro lado los aminocidos bsicos se disuelven agregando, al agua,
unas gotas de NaOH6N. Los aminocidos neutros se disuelven simplemente en
agua (5, 16).
Esto de aminocidos cidos, neutros o bsicos depende del grupo R de los

aminocidos. Para profundizar en ello se recomienda referirse al captulo 5 de
Lehninger, Nelson y Cox (15)
c.26. Protenas vegetales y nutricin humana (18)
Salisbury y Ross (18) sealan lo siguiente: seres humanos y otros animales

dependen de los vegetales para obtener muchos de sus aminocidos, por lo
que la composicin protenica de semilla, hoja y tallo es importante para la dieta.
Nosotros y otros animales, utilizamos estos aminocidos para formar nuestras
propias protenas
y
como
fuente alimenticia ( de energa ). Aunque los
humanos adultos podemos sintetizar la mayor parte de los aminocidos que
necesitamos, a partir de carbohidratos y diversos
compuestos orgnicos
nitrogenados, hay ocho aminocidos que debemos obtener del alimento.
Estos
son: leucina, isoleucina, valina, lisina, metionina, triptfano, fenilalanina y
treonina. Adems parece que slo se pueden formar cantidades adecuadas del
aminocido azufrado Cistenas cuando se dispone de suficiente metionina
(otro aminocido azufrado ), y Utilizamos la fenilalanina para sintetizar tirosina,
que de lo contrario tambin seria Esencial en la dieta.
La mayor parte de las protenas en la dieta humana provienen de semillas, en
especial granos de cereales como maz, trigo y arroz.
Una contribucin
menor, pero an importante, la hacen semillas de leguminosas como frjol, chcharo
y soya.
Comparados con casi cualquier protena animal, las protenas de los granos de
cereal tienen bajo contenido de
lisina, mientras que
las semillas de las
leguminosas tienen bajo contenido de metionina.
Los
agricultores estn
logrando algunos avances con la introduccin de especies nuevas o hibridas
con mayor contenido protenico y mayores porcentajes de aminocidos esenciales.
Cuadro 3. Contenido proteico y composicin de aminocidos de algunos cereales y
Leguminosas.
c.27. PRUEBAS DE CARACTERIZACIN CUALITATIVA DE AMINOCIDOS: (5,16)
a) Prueba de la ninhidrina:
Esta prueba se utilizar en este laboratorio para la deteccin de aminocidos. Al
reaccionar la Ninhidrina, un agente oxidante poderoso, con cualquier alfa
aminocido a un pH entre 4 y 8 se forma un compuesto azulado o violeta.
Con la prolina o Hidroxiprolina, que poseen un grupo amino libre, el color producido
es amarillo.
Fig. 6. Reaccin de Ninhidrina
b) Prueba de sanger:
En solucin dbilmente alcalina, el 1-fluor-2,4-dinitrobenceno (FDNB) convierte
cualquier aminocido en su derivado 2,4 dinitrofenicado, por sustitucin de un
hidrogeno del grupo-amino en un grupo 2,3-dinitrofenilo.
En esta prueba, el
desarrollo de un precipitado amarillo denota la presencia de aminocidos.
Fig. 7. Reaccin de Sanger
c) Prueba xantoproteica:
Los aminocidos que poseen un ncleo aromtico forman nitro derivados de color
amarillo cuando se calientan con acido ntrico concentrado. Las sales de estos
derivados son de color naranja. Por lo tanto, el aparecimiento de color naranja,
en esta prueba, denota la presencia de aminocidos aromticos.
Las protenas que contienen triptfano, tirosina, y fenilalanina, dan prueba positiva.
Esta prueba la realizan inadvertidamente los estudiantes cuando derraman cido
ntrico sobre su piel.
Figura No. 8 coloracion de los extractos tanto acido como basico despues de la aplicacin de acido
nitrico. Ademas de la coloracion de los patrones
d) Prueba de millon:
Los compuestos que contienen el radical hidroxibenceno reaccionan con el reactivo
de Millon formando compuestos rojos. Los nicos aminocidos fenlicos son la
tirosina y sus derivados y solamente ellos dan una reaccin positiva.
Fig. 9 Reaccin positiva de millon
e) Prueba del sulfuro:

Los thioaminocidos reaccionan en medio alcalino con el acetato de plomo,
precipitando sulfuro de plomo (de color negro) como uno de los productos.
Fig. 10 Reaccin de Sulfuro
f) Prueba del bromo:

El bromo acta en medio alcalino con aminocidos que poseen el grupo imidazol
(como la Histidina), provocando una reaccin de adicin al eliminar un doble enlace.
El compuesto as formado posee una cloracin azul- violeta.
Esto quiere decir,
que cuando en esta prueba se produce un color azul-violeta, se denota la
presencia de Histidina.
Figura No. 11 Reaccin del bromo.
28.
1.
Qu Es la hidrlisis proteica?
2.
Qu tipo de hidrlisis se utiliza para la determinacin por separado del

triptfano? Explique.
3.
Elabore una definicin propia de: Aminocido.
4.
A qu se refiere el trmino alfa-aminocido?
5.
A qu se refiere el grupo R que poseen los aminocidos?
6.
Mencione al menos 5 productos que se pueden formar a partir de las distintas

combinaciones de aminocidos:
7.
Qu grupos funcionales son los que propician las reacciones qumicas de los
aminocidos?
8.
Cmo disolvera usted 3 gramos de un aminocido cuyo grupo R es de

naturaleza alcalina?
9.
En la reaccin de Nihidrina Qu reaccin provoca una coloracin azulada o

violeta? Cul reaccin provoca un color amarillo?
10.
Explique en qu consiste la prueba de Sanger, la prueba Xantoprotica, la

prueba de Millon, la prueba de Sulfuro y la prueba del Bromo.
11.
Investigue a que se refieren los trminos: aminocido fenolico, thioaminoacido,

y aminocido con grupo imidazol. Consulte a su instructor de laboratorio, a su
catedrtico de curso o en alguno de los libros que se le sugieren como
bibliografa del curso.
12.
Cules son los 8 aminocidos que los adultos debemos obtener del alimento?
13.
Refirase al cuadro 1 del material de apoyo de esta prctica. Observe los

aminocidos que all se le presentan. Diga cules de ellos se trabajarn en esta
prctica (vea cuadro 2 que est en el instructivo de practica).
29.
MATERIALES
A cargo del grupo de laboratorio:
Extracto acuoso
Extracto salino
Muestra desconocida
4 beackers de 50 Ml
2 varillas de agitacin
1 pizeta
4 tubos grandes con tapn de

rosca
Frasco gotero identificado para

cada una de las siguientes
soluciones:
Nihidrina, FDNB, Millon, NaNO2 1

% y acetato de plomo 2%
A cargo del auxiliar de laboratorio
1 estufa elctrica colocada en una

campana de gases
1 beacker de 500 mL
NaOH (1N), NaOH(GN), HCl(6N), Y

HCl(1N).
Recipiente de polietileno
solucin NaOH (6N)
Agua destilada
30 tubos de ensayo
Etiquetas autoadhesivas
2 gradillas de metal
2 pinzas p/tubo de ensayo
Gotero de pico de gallo con acido

ntrico (ubicado en campana de
gases)
1 estufa elctrica
2 probetas de 10 mL
Gotero pico de gallo con acido

sulfrico (ubicado en lavadero de
laboratorio)
1 beacker de 500 mL
1 beacker de 100 ml
Gotero pico de gallo con solucin

de bromo (ubicado en campana de
gases)
1 gradilla de metal grande
4 frascos con gotero para cada una

de las siguientes soluciones:
con
Gotero pico de gallo con carbonato

de Amonio (ubicado en campana
de gases)
Mechero de Meckler
Manguera de hule
Solucin de HCl (6N)
Trpode para autoclave
Solucin HCl
Rollos de papel pH
Autoclave
Potencimetros (medir pH).
30.
METODOLOGA.

NOTA IMPORTANTE TODO LO QUE SOBRE DE EXTRACTO
PROTENAS
DEBE
SER
ALMACENADO
NUEVAMENTE
REFRIGERACIN, PARA SER UTILIZADO EN LA PRCTICA 5
DE
EN
PRUEBA DE CARACTERIZACIN CUALITATIVA DE AMINOCIDOS
El cuadro siguiente es una gua para el estudiante para que sepa que muestras
se van a analizar en las pruebas de esta prctica.
Cuadro 4. Resumen de pruebas cualitativas, a realiza a soluciones patrones e

hidrolizados de protenas y muestra desconocida.
PRUEBAS
MUESTRAS
A
ANALIZAR
Hidrolizad
o acuoso
bsico
Hidrolizad
o acuoso
acido
Hidrolizad
o salino
bsico
Hidrolizad
o salino
bsico
Muestra
desconoci
da
SOLUCIN
PATRN
Lisina
Triptfano
Tirosina
Leucina
Histidina
Cistena
Ninhidri
na
San
ger
Xantoprot
eica
Mil
ln
Sulf
uro
Bro
mo
Fenilalami
na
TOME EN CUENTA LA LIMPIEZA DE LA CRISTALERA PARA LA REALIZACIN DE

ESTAS PRUEBAS EN LA PRESENTE PRCTICA

31.
PARA INCLUIR EN EL INFORME DE PRCTICA:
Responda, como trabajo post laboratorio, las cuestiones siguientes:
Usted observa en el cuadro 4 una serie de cheques ( ) que le indican que

prueba realizarle a cada muestra o solucin patrn. Para cada una de las
muestras o soluciones patrn, justifique por que se le deben realizar las
pruebas sealadas por los cheques. Ejemplo: Porque en la lisina se van
efectuar solamente las pruebas de la Ninhidrina y la Sanger.
Qu es una solucin patrn? Por qu se utiliza?
Haga un listado de las soluciones patrones que se usaran en cada prueba.

Qu utilidades(es) ha encontrado en el uso de soluciones patrn?
Qu es la hidrlisis proteica?
Esquematice de forma sencilla el procedimiento general para realizar

hidrlisis a una solucin extracto de protenas.
En qu consiste la hidrlisis proteica mediante acido?
En qu consiste la hidrlisis proteica de lcali? Para que se utiliza ese tipo

de hidrlisis?
A su criterio Cul es la razn de mantener la temperatura de la autoclave

en un rango que no sobrepase los 228 F?
Investigue en que otros lugares de la Facultad de Agronoma existen

autoclaves. Adems indique si hay diferencias entre los autoclaves que
encontr.
Indique el procedimiento general para detectar, visualmente, la presencia

del triptfano en una muestra recin colectada de granos de cebada. (si
usted plantea que se debe efectuar hidrlisis, indique y justifique cual
utilizara, la acida o la alcalina).
Cul es la utilidad de la prueba Biuret? Qu se logra identificar con esta

prueba?
Qu le indicara un resultado negativo de esta prueba? y un resultado

positivo?
Para la comprobacin de una hidrlisis completa debe hacer una

comparacin entre el resultado obtenido para cada hidrolizado en dos
pruebas que son la de Biuret y la de la Ninhidrina.
Diga si la siguiente explicacin es falsa o verdadera, justifique su respuesta:

Se tiene una solucin X a la cual se le han aplicado las metodologas de
hidrlisis. Esta solucin ha dado positivo la prueba de Biuret, y un resultado
negativo en la prueba de la Ninhidrina. Por eso podemos decir que en la
solucin X hemos identificado solamente aminocidos y por lo tanto
estaremos hablando de una hidrolisis completa de protenas.
Utilizando los resultados de la Ninhidrina y de Biuret de cada uno de los

hidrolizados y justificando su respuesta indique si cada una de las hidrlisis
fue o no fue completa.
De una razn vlida para la aplicacin de la prueba de Biuret y de la

Ninhidrina como comprobante de hidrlisis proteica completa. (En otras
palabras, Por qu se usa Biuret para ver si hubo o no una hidrlisis
completa de protenas?)
Para Ninihidrina, Sanger, Xantoproteica, Millon, Sulfuro, bromo

colocar lo siguiente.
En que se basa esta prueba?
Qu expresa para usted un resultado positivo da la prueba? Que se

logra identificar con esta prueba.
32.
Examen Corto con un nivel de dificultad similar al del CUESTIONARIO

PRELABORATORIO.
La metodologa de evaluacin tambin incluye un informe de prctica.

Este informe puede hacerse en parejas o individualmente, y debe incluir:
Cartula
33.
RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS PARA EL REPORTE
Resultados de prctica. Estos se presentan segn las siguientes indicaciones:
Para los resultados de los numerales 6.1, 6.2, 6.3 y 6.4 solamente debe
resolverse los cuadritos negros que aparezcan all.
Posteriormente presente resueltos los cuadros negros que aparezcan en la

metodologa (numerales 6.5 al 6.10). Procure colocar el titulo de cada
pareja de respuestas (es decir el titulo del numeral).
Para los resultados de los numerales 6.5, 6.6, 6.8, 6.9 y 6.10, tambin
debe presentarse un cuadro de resultados para cada Muestra Problema,
(hidrolizado acuoso acido, hidrolizado salino acido, hidrolizado acuoso
bsico, hidrolizado salino bsico y Muestra desconocida). Loa cuadros
deben seguir el siguiente modelo
CUADRO 5. Cuadro de resultados de las pruebas realizadas a la muestra de
HIDROLIZADO ACUOSO ACIDO:
NOMBRE
DE
PRUEBA
Biuret
Ninhidrina
Sanger
Xantoproteica
Millon
Sulfuro
LA
pH
COLORACIN
DICTAMEN
Bromo
REFERENCIA:
pH = VALOR EN NUMERO
Coloracin = color observado como resultado de la prueba
Dictamen = prueba positiva (+) o negativa (-).
OJO: Utilice como criterio de dictamen, los resultados

obtenidos con las soluciones patrn.
Procure Intercalar Los Resultados De Cada Muestra Con Su Anlisis respectivo.
Toda vez presentados estos resultados, se realizara un anlisis y explicacin

de cada cuadro, a fin de establecerla presencia o ausencia de aminocidos
en cada muestra problema. Si sus resultados se lo permiten, tambin debe
indicar el nombre o nombres posibles de aminocidos identificados.
Para el caso de la explicacin que se le pide, haga nfasis si hay

concordancia, plantee una justificacin valida.
Compare los resultados de sus muestras problemas con los resultados con
las soluciones patrn y tener otro criterio de anlisis.
Como una gua de anlisis le recomienda utilizar la solucin a los cuadritos

negros que aparecen para cada parte de la metodologa.
PRCTICA No. 5 ESTUDIO DE AMINOCIDOS,

CROMATOGRAFA DE AMINOCIDOS Y
ESPECTROFOTOMETRA.
1 INTRODUCCIN
Esta semana, continua es estudio de aminocidos y protenas. Son prcticas

de aplicacin frecuente en los laboratorios de anlisis de bioqumica y hoy se
pretende que el estudiante tenga un contacto con estas prcticas. Debido a
lo extenso de la metodologa de las prcticas pasadas, estas molculas
biolgicas no se han podido estudiar de una sola vez y por ello se emplea
una semana ms.
La cromatografa es una tcnica que sirve para separa, identificar y a veces
purificar una mezcla compleja de solutos solubles en un solvente comn.
Esta semana se utilizara esta tcnica para que el estudiante tenga un
contacto con esta alternativa de anlisis cualitativo de sustancias en este
caso con aminocidos. Por ende tratara de enlazarse lo obtenido con la
cromatografa.
La continuacin al estudio de protenas se hace desde un punto de vista
cuantitativo y para ello se utiliza una tcnica denominada
Espectrofotometra.
34.
Al finalizar la prctica, es estudiante deber estar en capacidad de:
OBJETIVOS
Utilizar la tcnica Cromatografa en Capa Fina como parte del

anlisis cualitativo de aminocidos de la muestra vegetal.
Utilizar Espectrofotometra en la cuantificacin de protenas

extradas de la muestra vegetal.
35.
MATERIAL DE APOYO CROMATOGRAFA (11)
La cromatografa es una tcnica que sirve para separar identificar y a veces

purificar una mezcla compleja de solutos solubles en un solvente comn.
Como dice Gaxiola (11), una mezcla de sustancias que van a ser separadas
se aplica en solucin a un medio de sostn. Este puede ser papal, una capa
de slice, o una columna rellena de resina absorbente o de intercambio
inico. La prueba consiste en que se deja correr por el medio de sostn un
solvente revelador y dicho solvente lava junto con el la mezcla de las
sustancias aplicadas previamente. En el proceso, las diferentes molculas de
la mezcla son arrastradas por el lavado a distintas velocidades, resultando en
su separacin.
En la mayora de los mtodos cromatogrficos la separacin est basada en
un proceso de reparto mltiple o uno continuo de absorcin desorcion,
aunque en la prctica existe una combinacin de ambos, dominando ms o
menos uno y otro tipo.
El grado de la separacin depende de cuatro fuerzas que operan
independientemente una de la otra. Estas son: (1) la velocidad de flujo del
solvente, (2) la solubilidad de las sustancias en el solvente, (3) los efectos de
fraccionamiento, y (4) los efectos de absorcin. Los dos primeros factores son
responsables de la movilizacin de la mezcla de sustancias a travs del
medio de sostn y los dos ltimos factores con responsables del retardo del
movimiento de la mezcla a travs del medio de sostn.
El flujo del solvente es el mismo para todas las sustancias presentes en la
mezcla. Si todas las sustancias fueran completamente solubles, no habra
separacin. No obstante, por fortuna es muy raro que las sustancias tengan
la misma solubilidad en cualquier solvente. Consecuentemente, si la
sustancia es muy soluble, tendera a movilizarse a travs del medio de sostn
y aparecer en el frente del solvente en movimiento. Por otra parte, si es
relativamente insoluble, tendera a permanecer en su punto de origen. Por lo
tanto, uno de los factores primordiales que determinan la separacin
cromatogrfica es la combinacin de la solubilidad y del flujo del solvente.
Los otros factores, los factores retardants, son igualmente importantes y
merecen alguna discusin.
Hay cuatro tipos principales de procedimientos cromatogrficos, cada uno de
los cuales est basado en ciertos principios fsicos. Ellos son: (1)
cromatografa por fragmentacin; (2) cromatografa por absorcin; (3)
cromatografa por intercambio inico, y (4) cromatografa con filtracin en
gel.
En la cromatografa de absorcin existe, como mnimo, un sistema de tres
componentes-absorbente, medio de elusin (disolvente) y compuesto
cromatografado. El comportamiento cromatogrficos depende tanto del

absorbente como del medio de elusin. Entre los absorbentes ms utilizados
en la cromatografa en la capa fina, se encuentran los xidos, xidos
hidratados y sales. Los ms comunes son la gel de slice (silicagel) y el oxido
de aluminio (almina).
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA (11)
La cromatografa en capa fina es una tcnica muy utilizada en la actualidad,

por su gran rapidez y versatilidad. Tambin se conoce como cromatografa en
columna abierta o cromatografa en pelcula delgada. Es una tcnica donde
la separacin ocurre sobre una capa delgada de adsorbente que est
adherida a un soporte inerte, generalmente vidrio. Se pueden usar variedad
de adsorbentes, desde la gel de slice o la almina hasta la celulosa la cual la
separacin es similar a la cromatografa de papel. Se diferencia de la hecha
en papel porque la separacin ocurre ms rpido, las manchas son ms
discretas y compactas, y se pueden usar reactivos detectores corrosivos sin
daar el substrato o el adsorbente.
El disolvente utilizado para la separacin se mueve sobre esta capa fina, ya
sea hacia arriba, por capilaridad (cromatografa ascendente) o hacia abajo,
por gravedad (cromatografa descendente). La separacin de sustancias se
basa en sus caractersticas de polaridad. Por consiguiente, una sustancia
polar se mover muy lentamente con relacin al frente del disolvente,
mientras que una sustancia no polar se mover ms rpido.
Bajo ciertas condiciones experimentales, el movimiento de una sustancia en
particular es constante, con respecto al movimiento del frente de un
disolvente determinado. Esta constante se llama valor Rf y se define como:
c.27.1.
CTIVACIN DE LAS PLACAS:
Antes de que se puedan usar las placas, generalmente deben ser calentadas
para retirar el agua que acta como una impureza y evita una buena
separacin. Con frecuencia el agua est firmemente ligada al adsorbente,
por lo cual se debe calentar la placa fuertemente. La magnitud del calor
depende del tipo de separacin que se requiere.
Para compuestos hidroflicos o polares, el secado al aire o con un secador de

pelo son generalmente adecuados; pero para los compuestos hidrofbicos o
no polares es necesario un calentamiento ms intenso. Las placas de
almina o silicagel con adhesivo requieren ser secadas al aire durante
aproximadamente 30 minutos y despus ser activadas en un horno a 10C
(nunca arriba de 105C) alrededor de 30 minutos.
Las placas de xido de aluminio y de silicagel sin adhesivo requieren secado
al aire durante 1.5 a 2 horas y ser activadas en el horno a 120C durante
aproximadamente 60 minutos.
c.27.2.
La muestra se aplica en solucin con una micro pipeta o con tubo capilar en
cantidades de aproximadamente 5 micro litros. Esto asegura que la mancha
no se extienda. Una mancha ideal tendr ms o menos 5 mm de dimetro.
La mancha debe ser secada tan pronto como sea posible, usando un secador
de pelo (esto adems evita que la mancha se extienda). Si la solucin est
diluida, se pueden repetir muchas aplicaciones en el mismo sitio una vez que
la anterior se ha secado. Debe tenerse cuidado de no sobre cargar la
mancha, de lo contrario se presentar el rayado (escurrimiento). Otro factor
importante es que debe tenerse cuidado de no maltratar la capa delgada del
adsorbente durante el manchado.
Con paciencia y con prctica resulta posible no tocar la capa con el extremo
de la micro pipeta (o tubo capilar) durante el manchado o el trazado de una
placa para CCD. An ms, dado que la capa est adherida a su soporte inerte
de vidrio o de aluminio, no es necesario usar placas de vidrio para sostener
el cromatograma durante el manchado.
c.27.3.
APLICACIN DE LA MUESTRA:
REVELADO DEL CROMATOGRAMA:
Existen numerosos mtodos para detectar sustancias en los cromatogramas.

Algunos de ellos usan sistemas fsicos, pero la mayora utiliza mtodos
qumicos.
Las tcnicas para localizar en el cromatograma sustancias, que no son
visibles, se clasifican en tres categoras:
a. Nebulizacin: En esta tcnica el reactivo se disemina en forma de fino

aerosol sobre la cromatoplaca mediante un atomizador. Debe aplicarse en
un gabinete cerrado (campana de extraccin de gases) para gases y para
vapores a fin de evitar que el reactivo penetre en el laboratorio. Si sta se
hace muy cerca del papel o la cromatoplaca, se aplicar demasiado
reactivo y har que se corra el cromatograma. Es preferible colocar el

atomizador a 30-38 cms del cromatograma.
b. Inmersin: Esta es mejor que la nebulizacin por numerosas razones, ya

que no se requiere de gabinete contra emanaciones en muchos casos; es
mucho ms fcil obtener una aplicacin uniforme del reactivo detector. Se
necesita un recipiente (preferentemente plstico) que contenga el
solvente. La cromatoplaca se pasa uniformemente dentro del solvente de
inmersin y se cuelga para que se seque.
c. Exposicin a gas o vapor: Est requiere equipo especial y por ello no se

trata aqu.
c.27.4.
PRESERVACIN
DELGADA:
DE
LOS
CROMATOGRAMAS
DE
CAPA
Con la mayora de las placas rociadas con cido, o con reactivos que
producen colores que se desvanecen con rapidez (como la ninhidrina), no
slo es difcil almacenarlos como referencia, sino que tambin resulta caro,
ya que las placas de vidrio se pueden volver a usar. Tan pronto como se
seque un cromatograma rociado, las manchas debern ser delineadas con un
lpiz afilado o con un alfiler y se deben rastrear. Debido a que los colores
tienden a desteirse despus de algn tiempo, es recomendable hacer una
copia del original tan pronto como sea posible.
c.28. ESPECTROFOTOMETRA (9)
Uno de los mtodos fisicoqumicos ms empleados en anlisis bioqumico es

el de la medida de la absorcin o emisin de energa radiante. La gran
difusin de esta tcnica es consecuencia de:
1. El amplio intervalo de longitudes de onda o de frecuencias de energa
radiante y sus diferentes modos de interaccin con la materia.
2. La existencia en el mercado de instrumentos de medida cada vez ms

precisos.
3. Las ventajas inherentes al mtodo.
La energa radiante se define como la energa transmitida en forma de
radiacin electromagntica. Esta energa puede ser absorbida, transmitida,
reflejada y refractada por muchas sustancias en diferentes estados de
agregacin (slido, lquido, disolucin, gas), si la radiacin incidente tiene
una longitud de onda apropiada.
En espectrofotometra, la energa que incide sobre una muestra, es una

radiacin monocromtica (energa radiante de una sola longitud de onda, o
por razones prcticas, una banda muy estrecha de longitudes de onda). Las
medidas de la radiacin transmitida se realizan mediante aparatos muy
sensibles como el espectrofotmetro.
Un espectrofotmetro consta de una Fuente de radiacin; Dispersor de
longitud de onda (prisma de cuarzo o de vidrio o de NaCl); Lentes; Clulas
espejos; y un Detector (Fotomultiplicador). (Vea figura 1)
Cuando se encuentra un sistema coloreado o un color producido en una
reaccin, es preciso una investigacin para desarrollar una determinacin
espectrofotomtrica adecuada del constituyente, para lo cual es necesario
hacer una seleccin de la longitud de onda analtica.
c.28.1.
El espectro de la energa radiante, contado a partir de la de menor longitud

de onda (o, lo que es lo mismo, e la de ms alta frecuencia), incluye los rayos
csmicos, las radiaciones gamma, los rayos X, la regin del ultravioleta, la
regin de la luz visible, la zona del infrarrojo y l regin de las ondas de radio.
Tanto los tomos como las molculas pueden adoptar varios estados
electrnicos o diversos niveles de energa. La absorcin de energa involucra
la transicin de los electrones a niveles energticos ms elevados; cuanto
ms larga es la longitud de onda de la radiacin absorbida, menor es la
transformacin energtica por esa absorcin. Ahora bien, estas son normas
generales, vlidas para todos los casos, pero cuando se pretende interpretar
con ms detalle los fenmenos de absorcin, las cosas se hacen bastante
ms complicadas, especialmente en el caso de las molculas orgnicas.
c.28.2.
NATURALEZA DE LA ABSORCIN DE ENERGA RADIANTE
LEYES DE LA ABSORCIN DE LA ENERGA RADIANTE
Estas Leyes hacen referencia a las relaciones existentes entre la magnitud de

la absorcin de energa radiante y la cantidad de la sustancia absorbente.
Para un sistema absorbente (solucin) dado, a una longitud de onda concreta
y con una determinada intensidad de la energa incidente, hay dos variables
que influencian la intensidad de la absorcin: la concentracin del
absorbente y el espacio recorrido por la radiacin energtica a travs de la
solucin.
La ley de Beer, expresa la absorcin de un rayo de energa radiante,

efectuada por un absorbente determinado, en las siguientes condiciones:
a) Se supone que la energa radiante es monocromica (es decir, con una

longitud de onda nica).
b) El medio es homogneo o istropo (es decir, su ndice de refraccin es

idntico en todas direcciones).
c) La absorcin del solvente es despreciable.
d) No hay asociacin ni disociacin de las molculas absorbentes.
e) No existe reaccin entre el absorbente y las molculas del solvente.
La ley de Beer afirma que, si se cumplen esos requisitos, la absorcin, A, es

directamente proporcional a la concentracin del absorbente y a la longitud
del trayecto recorrido por la energa radiante a travs de la solucin.
De aqu se puede escribir:
Donde:
A1: Absorcin de una solucin problema (de la que se quiere averiguar la
concentracin)
A2: Absorcin de una solucin patrn de concentracin conocida.
C1: Concentracin de la solucin problema
C2: Concentracin de la solucin patrn (estndar)
Esta es una frmula que se aplicara en esta prctica de laboratorio, a pesar
de que las lecturas de un instrumento determinado espectrofotmetropueden variar significativamente en el curso de unas pocas semanas a
consecuencia del desgaste de sus componentes, puesto que todo esto no
representan un problema cuando se calculan los resultados deducindolos de
la comparacin de la absorcin del problema con la de un patrn (9).
La dificultad es grave, en cambio, cuando hay que deducir los resultados a
partir de valores establecidos de absorcin, sea por no disponer de patrones,
sea por no resultar practico analizar un patrn simultneamente con cada
problema o grupo de problemas (9).
c.29. PROCEDIMIENTO A REALIZAR EN ESPECTROFOTOMETRA (9)

c.29.1.
Este se estudia en el espectrofotmetro la disolucin del constituyente que

se analiza, despus de desarrollado el color, determinndose su espectro de
absorcin. La longitud de onda seleccionada es normalmente una, a la que la
diferencia entre la absorbencia del compuesto coloreado y el reactivo sea
mxima. Aunque la longitud de onda conseguida no sea muy sensible, debe
ser segura.1
c.29.2.
BLANCO DE REACTIVOS
Generalmente cuando se hace una determinacin con un problema, se hace

una lectura similar sustituyendo la solucin problema por agua o por el o los
reactivos que sirvan para detectar la sustancia problema. Esta ltima lectura
es la del blanco de reactivos y sirve para determinar la absorcin de la
solucin problema no derivada de la sustancia cuya concentracin se trata
de medir si no de los reactivos en s. En esta prctica la absorcin en blanco
se debe a la razn que se explica seguidamente:
En esta prctica se utilizara la prueba de Biuret para detectar la sustancia
problema de nuestro inters: Protenas. Piense en el reactivo de Biuret. Es de
color azul recuerda? Cuando se utiliza este reactivo para detectar protenas,
y medir su concentracin, sucede que la lectura en espectrofotmetro es la
suma del color del reactivo de Biuret mas el color de la sustancia problema.
Por ello se hace necesario hacer una correccin.
Al colocar el espectrofotmetro en absorcin 0 (100% transmitancia) con
agua u otro solvente, entonces la lectura del problema corresponde a la
absorcin del problema en si mas la del blanco de reactivos. Se lee luego el
blanco de reactivos, frente al mismo solvente empleado antes y el valor de
esta ltima se resta a la absorcin de la solucin problema (extracto de
protenas). El valor de absorcin que ahora se tiene, representa
presumiblemente, la absorcin debida a la sustancia que se trata de
determinar, siempre, que no existan sustancias que interfieran en la
calibracin.
c.29.3.
DETERMINACIN DEL ESPECTRO DE ABSORCIN
USO ADECUADO DE LAS CUBETAS
La conservacin de las cubetas exige que se les trate correctamente. Hay

que evitar hacerles ralladuras o ponerlas en contacto con sustancias
qumicas capaces de alterar sus caractersticas pticas. Por lo tanto no se

deben usar, para limpiarlas, ni acido sulfrico concentrado, ni tampoco
soluciones fuertemente alcalinas. Lo ms conveniente es un detergente de
actividad moderada (no excesivamente alcalino) o, tambin, algn solvente
orgnico.
Las superficies pticas deben limpiarse con un trozo de tejido blando con
papel para limpiar los cristales de la guas, y no deben tocarse con los dedos
mientras se hacen las lecturas.
Figura No. 12 Espectrofotmetro utilizado en el laboratorio de bioqumica.

Fuente: MPH
Referencia:
Bausch & Lomb, Modelo
Spectronic 20
1. Escala de lectura
2. Luz piloto
3. Escala de longitud de onda
4. Control para seleccionar la longitud de
onda
5. Control de intensidad de luz

6. Interruptor de corriente y
control de cero
7. Compartimiento de la muestra
36.
1. Qu es la cromatografa? En qu consiste esta prueba?
2. Cules son las 4 fuerzas que determinan el grado de separacin de

sustancias en la cromatografa?
3. A qu tipo de procedimiento cromatogrfico pertenece la cromatografa

fina (esta se usara en la prctica)?
4. Cul sera el comportamiento de una sustancia relativamente insoluble,

en un proceso de separacin cromatografa? Qu sucedera si la
sustancia fuese muy soluble?
5. Explique en qu consiste la cromatografa de absorcin?
6. Qu tipos de adsorbentes se pueden utilizar en la cromatografa de

capa fina?
7. Qu es la activacin de de placas en la cromatografa en capa fina?
8. Enumere tres cuidados que se debe tener presentes en la aplicacin de la

muestra en la cromatoplaca:
9. En qu consiste la tcnica de nebulizacin para el revelado de

cromatograma?
10.
Cmo se preservan los cromatogramas de capa delgada?
11.
Elabore una definicin propia de espectrofotometra.
12.
Para qu se utiliza espectrofotmetro?
13.
Qu condiciones debe cumplir la absorcin de un rayo de energa
radiante segn la Ley de Beer?
14.
Qu dice la Ley de Beer? Para responder a esta pregunta puede
tambin referirse a Lehninger, Nelson y Cox.
15.
Trate de explicar con sus palabras lo que es un blanco de reactivos.
Si se le dificulta mucho, por favor preguntarle a su instructor de
Laboratorio o Catedrtico de curso.
37.
MATERIALES DE LA PRCTICA V
A cargo de cada grupo de trabajo:
Cromatoplaca de aluminio con slica gel
Extraccin acuosa
Extraccin salina
Un lpiz o un portaminas de grafico
1 regla graduada
1 gradilla de metal
1 beacker de 50 ml
3 tubos capilares
1 pinza /tubo de ensayo
2 probetas de10 ml
Muestra problema
1 cromatografa
9 tubos de ensayo
2 pipetas Mohr (1ml y 5 ml)
1 Kleenex
1 caja de placas
Gel como medio de sostn.
Tubos capilares
Cono(s) de hilo
1 Objeto puntiagudo (navaja, clavo, etc) y/o ganchos plsticos de ropa
Papel filtro
Espectrofotmetro de Bausch y Lomb Modelo Epectronic 20
2 Cubetas (recipientes para lectura en espectrofotmetro)
1 mechero bunsen
Solucin n-butanol, acido actico, agua
1 nebulizador de vidrio
1 manguera de hule
1 caja de Kleenex
cromatografas de aluminio con: Slica
Adems las soluciones siguientes:
Sulfato de sodio al 26.6 % Estndar de albumina de concentracin conocida

(preparado a base de reactivo o de clara de huevo), Reactivo de Biuret,
Agua destilada, Alcohol etlico, Acetona.
38.
METODOLOGA
39.
Resuelva lo siguiente:
Definir Cromatografa. En qu consiste esta prueba?
Enumere las cuatro fuerzas, de accin independiente, que definen el grado
de separacin de sustancias en la cromatografa. Cules de esos factores
son responsables de la movilizacin de la mezcla de sustancias a travs del
medio de sostn?
Cul es la diferencia entre la cromatografa en papel y la cromatografa en
capa fina?
Seale al menos 3 recomendaciones para la aplicacin de muestras en las
cromatoplacas.
Elabore un flujo grama de la metodologa para realizar cromatografa en
capa fina. (No es necesario que sea muy especfico, puede hacer
simplemente un bosquejo de dicha metodologa).
Indique que soluciones utilizo en la cromatografa (muestra problema y
soluciones patrn) y explique el fundamento que le ayudo a decir que
soluciones utilizar.
Calcule el valor de Rf para todas las manchas.
Vea la formula que aparece en su material de apoyo a la prctica.
Con base a los valores Rf obtenidos, identifique de ser posible, la muestra
desconocida.
Compare los Rfs de cada una de las manchas obtenidas de sus muestras de
hidrolizado, con los obtenidos para los aminocidos patrn.
Analice la correspondencia existente entre estos resultados y los de las
pruebas de color, desarrolladas en la prctica 2 parte II.
Resuelva lo siguiente:
Indique como se activa una cromatoplaca.
Cul es la razn de utilizar tubos microcapilares?

Cul es la razn de esperar a que se seque cada aplicacin?
Por qu se coloca papel filtro mojado con eluente?
Por qu se marca con lpiz la posicin del frente del disolvente?
Qu indicara para usted el aparecimiento de una mancha de un color muy
diferente al azul o violeta que denota aminocidos segn la prueba de la
Ninhidrina?.
Indique las dimensiones de una cromatoplaca completa (de donde su

instructor de laboratorio recorto varias porciones). Cules son las
dimensiones de la seccin de cromatoplaca que usted utilizo en esta
prctica?
Investigue si una cromatoplaca se recorta o si se utiliza completa. Por qu

se uso una cromatoplaca recortada?
Todas las cromatocamaras son iguales a las que se utilizaron aqu?

Justifique su respuesta; si hubiese cromatocmaras de fabrica Cul es su
tamao? Adems trate de justificar por qu aqu se usaron cromatocamaras
pequeas.
Responda las siguientes preguntas:
Qu es espectrofotometra? Qu es un espectrofotmetro?
Por qu hay que limpiar tan minuciosamente la cubeta antes de agregar

la solucin que se medir en el espectrofotmetro?
Por qu se utiliz una longitud de onda de 540 nm, en el espectrofotmetro,

para realizar esta prctica de laboratorio?
Qu es un blanco de reactivo?
Elabore una tabla para indicar el contenido de los 9 tubos de ensayo

identificados con letras maysculas.
Justifique los pasos 6. 2 g y 6.2 h de la metodologa de esta prctica.
Se le sugiere leer el tema blanco de reactivos de el material de apoyo a

esta prctica o consultar a su instructor de Laboratorio o Catedrtico de
Curso.
Reporte los datos siguientes:
Lectura (absorbancia y transmitancia) para las soluciones siguientes: blanco

de reactivo (Na2SO4 + Biuret); Estndar (albmina); Solucin problema
(extracto).
Concentracin [% peso/volumen] de protenas en el extracto acuoso de

protenas. (utilice la frmula incluida en el Material de apoyo a esta prctica).
Concentracin [% peso/volumen] de protenas en el extracto salino de

protenas. (utilice la frmula incluida en el Material de apoyo a esta prctica.
Investigue lo siguiente:
Cantidad (en gramos) de Protenas (solubles en agua) en 100 gramos de

harina vegetal seca.
Cantidad (en gramos) de Protenas (solubles en agua) en 100 gramos de

muestra vegetal hmeda.
Cantidad (en gramos de Protenas (solubles en agua) en 100 gramos de

muestra vegetal seca.
Para resolver esto tome en consideracin los siguientes datos:
Concentracin [1% peso/volumen] de protenas en el extracto acuoso de

protenas.
La cantidad obtenida de Extracto Acuoso en la prctica 3 de este Manual de

Prcticas.
La Cantidad de Harina Vegetal utilizada para preparar el Extracto Acuoso.
La cantidad de Muestra Vegetal (semilla, hoja, etc.) utilizada para preparar la

harina vegetal y la Cantidad de Harina Vegetal preparada.
El % de humedad de su Muestra Vegetal.
Prctica No. 6 EXTRACCIN DE GLCIDOS DE

MUESTRAS VEGETALES
1 INTRODUCCIN
Los glcidos han sido conocidos durante mucho tiempo como
carbohidratos, pero en la actualidad suele usarse ms el nombre
glcido.
Segn Lehniger, Nelson y Cox (15), los glcidos son las biomolculas
ms abundantes en la naturaleza. Cada ao, el proceso de la
fotosntesis llevado a cabo por plantas y algas convierte ms de
1000.000 millones de toneladas mtricas de CO2 y H2O en celulosa y
otros productos vegetales.
Ciertos glcidos (como el azcar y el almidn) son fundamentales en

la dieta humana de la mayor parte de pases, y la oxidacin de
glcidos es la principal ruta de obtencin de energa en la mayora de
clulas no fotosintticas. Los polmeros insolubles de glcidos actan
como elementos estructurales y de proteccin en las paredes
celulares de bacterias y plantas y en los tejidos conjuntivos y
envolturas celulares anmales. Otros polmeros de glcidos funcionan
como lubricantes de articulaciones seas o como adhesivos celulares.
En esta prctica de laboratorio se trabajar una metodologa sencilla

para la extraccin de glcidos (carbohidratos). Aquel fundamento
terico que se ha seleccionado para el trabajo con esta biomolcula,
se presenta en la Prctica 7 de este Manual. Por ello no encontrar
usted aqu cuestionario pre laboratorio.
40.
OBJETIVOS
Al finalizar la prctica el estudiante deber estar en capacidad de:
Utilizar el Sistema Soxhlet para la extraccin de glcidos de

una muestra vegetal pulverizada.
Utilizar adecuadamente la cristalera y equipo a emplear un

esta prctica de laboratorio.
41.
MATERIALES
A carga de cada grupo de trabajo:
Harina de muestra vegetal (preparada y almacenada desde la

Prctica 2 de este laboratorio).
Un destilador Soxhlet contenido en una caja de cartn: esto

incluye: un refrigerante o condensador, una cmara de extraccin,
un baln de fondo plano de 250 ml y dos mangueras de hule
largas.
1 mechero
1 manguera de hule
1 soporte universal
1 anillo de hierro
1 rejilla de asbesto
2 pinzas fisher
1 erlenmeyer de 250 ml
A cargo del da de laboratorio
1 caja con perlas de ebullicin
- papel parafilm
- fsforos
NOTA: Del destilador Soxhlet cabe sealar que es un sistema de cristal que
requiere de mucho cuidado en su manejo, pues es muy frgil. En funcin de
esto es posible que alguno(s) o todos los grupos utilicen un sistema aleatorio
que venga a sustituir a este destilador, pero esto ser decisin de la Subrea
de Ciencias qumicas y la explicacin pertinente de su uso estar a cargo del
42.
METODOLOGA
43.
Esta prctica ser evaluada junto con la practica 7. as que esta vez no
habr entrega de cuestionario pre laboratorio, ni examen cort ni
entrega de informe.
PRCTICA 7 ESTUDIO DE GLCIDOS DE MUESTRAS

VEGETALES
1 INTRODUCCIN
Los carbohidratos tambin llamados hidratos de carbono o glcidos,

son compuestos de amplia distribucin en la naturaleza, la mayora
son de origen vegetal formados durante el proceso de la fotosntesis.
Los carbohidratos son los principales componentes de casi todas las
plantas y comprenden del 60 al 90 % de su masa seca. Los hidratos
de carbono son sustancias orgnicas que contienen grupos aldehdos
o cetnicos potenciales (que en su estado libre poseen un intenso
poder reductor) y numerosos grupos alcohlicos secundarios y
primarios. A causa de la similitud de sus estructuras y reacciones,
resulta difcil identificarlos y determinarlos.
Se crea un contexto agronmico en las prcticas de laboratorio de

Bioqumica, de la FAUSAC, al estudiar los carbohidratos extrados de
una muestra vegetal. Para el mencionado estudio, se ha de trabajar
con reacciones caractersticas de las biomolculas (aplicacin de
pruebas para su caracterizacin cualitativa) en el extracto de la
muestra vegetal), en el extracto hidrolizado de la muestra vegetal,
a la par de soluciones patrones de carbohidratos.
44.
OBJETIVOS
Al finalizar la prctica, el estudiante deber estar en la capacidad

de:
Aplicar tcnicas qumicas en la caracterizacin de carbohidratos en

una muestra vegetal.
Sealar los criterios de clasificacin y caracterizacin de los

carbohidratos.
Manipular adecuadamente, la cristalera, reactivos y equipo a

utilizar en la presente prctica.
45.
MATERIAL DE APOYO GLCIDOS (CARBOHIDRATOS)
(3,7,15,20)
Segn Lehninger, Nelson y Cox (15), loe glcidos son las biomolculas
ms abundantes en la naturaleza. Cada ao, el proceso de la
fotosntesis llevado a cabo por plantas y algas convierte ms de
100.000 millones de toneladas mtricas de CO2 y H2O en celulosa y
otros productos vegetales.
Ciertos glcidos (como el azcar y el almidn) son fundamentales en

la dieta humana de la mayor parte de pases, y la oxidacin de
glcidos es la principal ruta de obtencin de energa en la mayora de
clulas no fotosintticas. Los polmeros insolubles de glcidos actan
como elementos estructurales y de proteccin en las paredes
celulares de bacterias y plantas y en los tejidos conjuntivos y
envolturas celulares animales. Otros polmeros de glcidos funcionan
como lubricantes de articulaciones seas o como adhesivos celulares.
Los glcidos han sido conocidos durante mucho tiempo como

carbohidratos, pero en la actualidad suele usarse ms el nombre
"glcido". Literalmente, carbohidrato significa hidrato de carbono.
Este nombre deriv de investigaciones de los primeros qumicos,
cuyos anlisis demostraron que contenan nicamente carbono,
hidrgeno y oxgeno. Ahora se sabe que algunos carbohidratos
contienen nitrgeno y azufre, adems de los 3 elementos ya
mencionados. Muchos glcidos comunes cumplen la frmula emprica
(CH2O)n, mientras que otros no. En definitiva no son compuestos
hidratados, como lo son muchas sales inorgnicas (CuSO 4.5H20). La
mayor parte de sustancias de este tipo tienen frmulas empricas que
sugieren que son `hidratos' de carbono, en los que la relacin C:I3:0
es de 1:2:1. (3, 20)
Como sealan I-P-hninger, Nelson y Cox (15), los glcidos o

carbohidratos son polihidroxialdehdos o polihidroxicetonas, o bien,
sustancias que dan lugar a estos compuestos despus de su
hidrlisis. En otras palabras los, carbohidratos son aldehdos o
cetonas polihidroxiladas o productos derivados de ellos por oxidacin,
reduccin, sustitucin o polimerizacin. (20)
Los carbohidratos son los principales componentes de casi todas las

plantas, comprenden del 60 al 90% de su masa seca. Los vegetales
usan los carbohidratos tanto como fuente de energa as como tejido

de sostn, de la misma manera que los animales emplean las
protenas. Los vegetales sintetizan sus propios carbohidratos a partir
del dixido de carbono del aire y del agua del suelo (3, 7)
El hombre no slo utiliza carbohidratos en su alimentacin

(aproximadamente del 60 al 65% en masa de su dieta media), sino
tambin para su vestimenta (algodn, lino, rayn), habitacin
(madera), combustible (madera) y productos de papel (madera). (3,
7)
CLASIFICACIN DE LOS CARBOHIDRATOS (3,7,15,20)
Los carbohidratos se pueden clasificar segn sus productos de hidrlisis

cida. Se aceptan tres categoras: Monosacridos, Oligosacridos y
Polisacridos (la palabra "sacrido" viene del griego sakkharon, que
significa azcar).
c.29.4.
Son azcares simples y no pueden fragmentarse en molculas ms

pequeas por hidrlisis. Consisten de una sola unidad de un
polihidroxialdehdo o cetona. Los monosacridos son slidos incoloros
y cristalinos solubles en agua e insolubles en disolventes no polares.
La mayora tienen sabor dulce. Los monosacridos, por el grupo
carbonlico, pueden ser aldosas (contienen un grupo aldehdo;
ejemplo glucosa) o cetosos (contienen un grupo cetnico; ejemplo
fructosa). A su vez, los monosacridos, pueden clasificarse por el
nmero de tomos de oxgeno: hexosas (glucosa, galactosa, manosa,
fructosa), pentosas (arabinosa, xilosa, ribosa), tetrosas, treosas
(treosa, eritrosa).
c.29.5.
Monosacridos:
Oligosacridos:
Consisten en cadenas cortas de unidades de monosacridos unidas

por los caractersticos enlaces glucosdicos. Los ms abundantes
son los disacridos, que producen dos molculas de monosacridos
por hidrlisis. Aqu los monosacridos estn unidos mediante "enlaces
glucosdicos". Incluyen: sacarosa, lactosa y maltosa. Todos los
monosacridos y disacridos comunes tienen nombres que

terminan con el sufijo "-osa". La mayor parte de oligosacridos
que tienen tres o ms unidades de monosacridos, no se encuentran
libres sino que se unen a otro tipo de molculas (lpidos o protenas)
formando estructuras hbridas (glucoconjugados).
c.29.6.
Polisacridos:
Consisten en cadenas largas de centenares o miles de unidades de

monosacridos; es decir, los polisacridos forman muchas molculas
de monosacridos por hidrlisis. Son los carbohidratos ms
abundantes en la naturaleza; sirven como componentes estructurales
de las clulas y como sustancias alimenticias de reserva. Aqu
encontramos: almidn, glicgeno y celulosa.
Aqu puede hacerse una subdivisin ms: se tienen por un lado los
homoopolisacridos (molculas muy grandes compuestas nicamente
por un tipo de monosacrido) y por otro lado los heteropolisacaridos
(se forman a partir de dos o ms unidades bsicas y estn
frecuentemente asociadas con protenas; cuando predomina el
carbohidrato el compuesto se conoce como proteoglicano o
mucoprotena, pero sin el carbohidrato es el componente menor, se le
conoce como glicoprotena).
Casi todos los monos y disacridos son slidos cristalinos, de sabor

dulce y fcilmente solubles en agua. Los polisacridos
frecuentemente son compuestos amorfos, insolubles e inspidos, con
masas molares sumamente grandes.
Los carbohidratos tambin pueden clasificarse en funcin de sus

propiedades "reductoras", de acuerdo a su capacidad para reducir
soluciones con iones metlicos como Cu+2 y Ag+1.
Un carbohidrato reductor es todo carbohidrato que se reduce sin

necesidad de hidrlisis previa. Se caracterizan por poseer sus grupos
aldehdicos o cetnicos libres, es decir, que no forman parte de
uniones glucosdicas. En los carbohidratos, los grupos aldehdicos y
cetnicos se encuentran en forma de hemiacetales, por lo que su
poder reductor es menor que el de un aldehdo o cetona libres.
El poder reductor tambin vara entre loa diferentes tipos de

carbohidratos (aldosas y cetosas, monosacridos y disacridos), por
lo que el tiempo en que se realiza la reduccin del cobre, a una

temperatura controlada, permite identificar en una muestra el tipo de
carbohidrato reductor que se encuentra presente.
Todos los monosacridos y algunos disacridos son reductores; los

polisacridos contienen slo un grupo reductor por varios cientos o
ms de residuos, as que, en la prctica no son reductores.
c.30. HIDRLISIS DE CARBOHIDRATOS (3)
La hidrlisis de los carbohidratos es la liberacin de las unidades

monmeras, los monosacridos, a partir de carbohidratos que se
componen de por lo menos dos de stas unidades. Esto quiere decir
que la hidrlisis sucede desde los disacridos hasta los polisacridos.
Por ejemplo, la escama es un disacrido de molcula demasiado

grande por lo que no puede pasar a travs de las membranas
celulares por lo que el cuerpo humano es incapaz de utilizarla como
tal, por lo que debe fragmentarse en sus componentes (glucosa y
fructosa) por hidrlisis. Esta reaccin es catalizada por enzimas en el
cuerpo humano, y en el laboratorio puede llevarse a cabo utilizando
cido clorhdrico. El almidn, un polmero de glucosa, se hidroliza
tambin por enzimas y cidos obtenindose glucosa al final.
c.31. PRUEBAS PARA CARBOHIDRATOS (3, 7, 8, 20)
c.31.1.
Prueba de molish
Esta prueba es utilizada para identificar la presencia de

carbohidratos, incluso glucoprotenas. El resultado positivo (indicado
por la aparicin de un anillo prpura) se da con todos los carbohidratos
ms superiores que las tetrosas.
El cido sulfrico concentrado hidroliza enlaces glicosdicos para

dar monosacridos que pueden ser luego deshidratados dando
furfural y sus derivados. Estos productos pueden condensarse con
compuestos fenlicos como el -naftol para dar sustancias coloreadas
(mayormente prpuras).
Figura No. 13 Resultado de la prueba de molish.

Fuente: MPH.
c.31.2.
Prueba de benedict:
Esta prueba se realiza en condiciones moderadamente alcalinas.

Es una prueba sumamente sensible para detectar la presencia de
carbohidratos, pero no especfica para los azcares en particular (el
reactivo de Benedict demuestra la presencia hasta de 0.01% de
glucosa en agua). Esta reaccin suele usarse para demostrar la
presencia de carbohidratos reductores, y se basa en la reduccin del
ion cprico, en medio alcalino, para formar xido cuproso [Cu 2O].
Los aldehdos, al igual que muchos otros compuestos, dan prueba
positiva con el reactivo de Benedict. La formacin de un precipitado
de xido cuproso es el criterio para una prueba positiva. El color del
precipitado puede ser rojo, pardo naranja, amarillo o amarillo verdoso,
dependiendo de la naturaleza y cantidad del agente reductor presente.
El reactivo de Benedict es reducido por O-hidroxialdehidos, por Ohidroxicetonas y por O-cetoaldehdos. Las molculas que slo
contienen el grupo funcionar alcohol, se oxidan con la solucin de
Benedict.
Figura No. 14 Prueba de benedict dando una coloracin anaranjada.
c.31.3.
PRUEBA DEL, YODO:
Se utiliza para la deteccin de polisacridos y para seguir el curso de

la hidrlisis, a travs del cambio gradual de color que se produce
entre el "hidrolizado" y el yodo. Esto se debe a que el yodo forma
complejos coloreados de adsorcin con los polisacridos. El almidn
da un color azul o negro azulado con el yodo, mientras que el glicgeno
y el almidn parcialmente hidrolizado dan una coloracin pardo rojiza o
violeta rojizo.
Figura No. 15 Coloracin de los extractos con la prueba de yodo dando una
coloracin azul.

c.31.4.
PRUEBA DE BARFOED:
La prueba o reaccin de Barfoed se emplea para diferenciar entre

mono y disacridos. La base de esta prueba la constituye la diferente
velocidad de la reaccin con el acetato cprico. La velocidad de la
reaccin se determina por la velocidad de formacin de Cu2O.
Concentraciones equimolares de monosacridos y disacridos
poseyendo un grupo reductor por molcula reaccionan con el reactivo
de Barfoed a velocidades distintas. Una clara diferencia entre mono y
disacrido, es su tamao molecular, lo que parece constituir un factor
limitante en la velocidad de la reaccin. Tambin pueden estar
implicados otros factores, tales como una interaccin ms compleja
con los dos anillos monosacridos. Ello parece suficiente para
suponer que las molculas ms pequeas tienen una mayor
reactividad.
La prueba es positiva por el aparecimiento de un color rojo ladrillo,

que se debe al aparecimiento de precipitado 0120 (a pesar de ser el
mismo precipitado formado con Benedict, el color obtenido en estas
pruebas es diferente).
Figura No. 16 coloracin que se obtiene con la prueba de barfoed en glucosa y

fructuosa.
c.31.5.
PRUEBA DE SELIWANOFF
Esta prueba permite diferenciar las aldohexosas de las cetohexosas

en base a sus velocidades de reaccin. El HCl caliente deshidrata a
las cetohexosas para formar hidroximetilfurfural mucho ms rpido
que a las aldohexosas correspondientes.
Las cetosas se deshidratan ms rpido que las aldosas, dando

derivados de furfural, que, condensados con resorcinol, dan un
complejo rojo.
Esta reaccin est basada en la transformacin de la fructosa en un

derivado del furfural por la accin del calor y el cido clorhdrico.
Como ya se mencion, este derivado se condensa con el resorcinol
para formar un compuesto rojo. La reaccin la dan todas las cotosas.
La concentracin del azcar y el tiempo de calentamiento deben ser

controlados cuidadosamente. Un calentamiento prolongado hace que
la glucosa y otras aldosas den positiva la reaccin. Las pentosas
reaccionan con esta prueba dando un producto de color verde a azul.
Figura No. 17 Coloracin de los extractos y patrones con la prueba de seliwanof.
46.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Elabore una definicin propia de: carbohidrato

(glcido)
Mencione al menos 5 funciones de los glcidos.

Cmo se pueden clasificar a los carbohidratos segn sus productos
de hidrlisis cida?
Elabore una definicin para "monosacridos". Seale las
caractersticas generales de este grupo y adems indique
cul(es) monosacridos se usar(n) en esta prctica.
Cules la diferencia entre aldosa y cetosa?
Qu es un oligosacrido?
Elabore una definicin para "disacrido. Seale las
caractersticas generales de este grupo y adems indique cul(es)
disacrido(s) se usarn en esta prctica.
Elabore una definicin para "polisacrido". Adems
cul(es) polisacrido(s) se usar(n) en esta prctica.
Qu es un carbohidrato
carbohidratos reductores?
reductor?
Qu
caracteriza
indique
a
los
Diferencie a los monosacridos y disacridos; de los polisacridos, en

funcin de su solubilidad y de su propiedad "reductora'.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
Qu es hidrlisis de carbohidratos?
Para qu se utiliza la prueba de Molisch? Qu cambio indica una
prueba de Molisch positiva?
En qu consiste la prueba de Benedict? Cul es su utilidad?
Qu se puede detectar con la prueba del yodo? Qu cambio indica
que la prueba es positiva?
Cul es la utilidad de la prueba de Barfoed? en qu se
fundamenta esta prueba?
Qu compuesto es identificado en la prueba de Seliwanoff,
cuando el resultado es un complejo color rojo?
47.
MATERIALES
Preparar el rea de trabajo del rea de trabajo:
30 tubos de ensayo
2 gradillas de metal
1 pinza p/tubo de ensayo
1 estufa elctrica
2 probetas de 10 ml
1 beacker de 600 ml
1 pizeta
1 beacker de 100 ml
tubos de ensayo grandes
frascos con gotero identificados en funcin de su contenido, as:
-naftol; Benedict; Solucin de Yodo; Barfoed; Seliwanoff.
Muestras de extracto, de extracto hidroliza.do, de almidn

hidrolizado y de sac-fruosa hidrolizada.
Agua destilada
2 goteros pico de gallo con cido sulfrico (en lavaderos)
1 gotero pico de gallo con cido clorhdrico (en la campana de

gases). - Frascos con gotero con las soluciones siguientes:
Celulosa, AL-pidn, Sacarosa, Lactosa, Maltosa, Glucosa,

Fructosa.
48.
METODOLOGA
V E R P R E PA R A C I N D E LO S R E A C T I V O S .
N o t a : L a L I M P I E Z A de la cristalera es fundamental para las

pruebas a realizar en esta prctica de laboratorio
El cuadro siguiente es una gua para el estudiante para que sepa que
muestras se van a analizar en las pruebas de esta prctica.
Cuadro 6. Resumen de pruebas cualitativas, a realiza a soluciones

patrones e hidrolizados de carbohidratos y muestra desconocida.
PRUEBAS
MUESTR
AS A
ANALIZA
R
1.
Extracto
2.
Extracto
Hidroliza
do
3.
Celulosa
(Papel
Bond)
4.
Almidn
5.
Almidn
Hidroliza
do
6.
Sacarosa
7.
Sacarosa
Hidroliza
da
Molisc
h
Ben
edic
t
Yod
o
Barf
oed
Seliwanof
8.
Lactosa
9.
Maltosa
10.
Glucosa
11.
Fructosa
12.
Muestra
desconoc
ida
49.
PREPARACIN DE REACTIVOS
a) Prueba de Benedict:
El reactivo de Benedict se p re p a ra disolviendo 1..3 g de curato de

sodio y 10 gramos de carbonato de sodio en aproximadamente 80 ml
de agua tibia. Si la solucin est turbia, filtrar. Colocar en una
probeta de 100 ml y se completa con agua hasta la marca de 85 ml.
Enseguida, se disuelven 1.73g de sulfato de cobre en
aproximadamente 10 ml de agua destilada. Se mezclan las dos
soluciones y se agitan. Se diluye la solucin a 100 ml con agua
destilada (en un baln volumtrico de 1OOmL).
b) Prueba del Yodo:
Esta solucin de yodo es al 5mmol I2 por litro de solucin de KI al 3%

p/v,
c) Prueba de Barfoed:
El reactivo de Barfoed se prepara utilizando 13.3 g de acetato de cobre
en 200 mL de agita destilada, ms 1.8 mL de cido actico glacial.
d) Prueba Seliwanof.
El reactivo de Seliwanoff se prepara utilizando 0.5g de resorcinol

por cada litro de HCl 3M.
50.
Explique el por qu de la distribucin de las muestras, del cuadro

anterior, para cada prueba de caracterizacin. En otras palabras,
justifique el uso de cada muestra en cada prueba que se le indica en
el cuadro 6.
51.
Examen Corto con un nivel de dificultad similar al del CUESTIONARIO
PRE LABORATORIO
La metodologa de evaluacin incluye tambin un Informe de
prctica. El informe puede hacerse en parejas o individualmente, y
debe incluir:
Cartula
RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS
Resultados de prctica. Estos se presentan segn las siguientes
indicaciones:
Es un cuadro de resultados para CADA UNA DE LAS 12 MUESTRAS
(Vea el cuadro 6). Los cuadros deben seguir el modelo del Cuadro 7,
presentado a continuacin:
CUADRO 7. Cuadro de resultados de las pruebas realizadas a la

muestra de EXTRACTO DE CARBOHIDRATOS
NOMBRE
PRUEBA
DE
LA
COLORACI
N
DICTAMEN
Molisch
Benedict
Yodo
Barfoed
Seliwanoff
REFERENCIA:
Coloracin
=
color
observado como resultado de la prueba
Dictamen = prueba positiva (+) o
negativa (-).
NOTA: Procure intercalar los resultados con su respectivo anlisis

explicacin.
Anlisis y explicacin de cada cuadro de resultados, a fin de

establecer la presencia o ausencia de glcidos en cada muestra
problema. (Para el caso de la explicacin que se le pide, haga
nfasis sobre si hay concordancia de los resultados prcticos con
el fundamento terico. Si no hubiese tal concordancia, plantee una
justificacin vlida).
Dar solucin a los "cuadros" que aparezcan en su metodologa y

presentarlos tambin, intercalados con los resultados y anlisis de
resultados.
Como una gua de su anlisis se le recomienda utilizar la

solucin a los cuadritos que aparecen para cada parte de la
metodologa.

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Informar a los estudiantes de las disposiciones generales del laboratorio de

Revisar el contenido del programa de Laboratorio de Bioqumica.

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Revisar las normas de cuidado de materiales dentro del laboratorio.

Ampliar la informacin antes revisada, o bien aclarar aquellas dudas que el

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Reglamento de Laboratorio de Bioqumica.

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Seleccionar el material vegetal que se trabajar en el laboratorio.

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c.10. Existe una jerarqua en la estructura celular

"Las subunidades monomricas (aminocidos, azcares simples como la glucosa,

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600 aminocidos unidos covalentemente en cuatro largas cadenas, que se pegan

Fig. 2 Organizacin jerrquica en la estructura celular

7. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO

2. Cul es el objetivo fundamental de la Ciencia Bioqumica?

4. En razn de qu surgieron las biomolculas a lo largo del proceso de evolucin