POLIEMBRIONIA EM

CITRUS
Slvio Moreira
J. T. A. Gurgel (*) e
Lineu F. de Arruda (**)

de

(*) Livre-Docente e assistente da Cadeira de Citologia e Gentica da E . S. A . " L u i z

Queiroz" e m Piracicaba.
(**) A g r n o m o Regional d e Limeira.
(***)
Seguimos a classificao adotada p o r Swingle ( 2 0 ) .

70

BRAGANTIA

VOL. V I I

Parece-nos comprovado que a poliembrionia nos Citrus , de um modo

geral, devida ao crescimento de clulas nucelares, situadas superfcie do
saco embrionrio. Iniciando-se por crescimentos irregulares, elas penetram
no interior do saco embrionrio, adquirindo, finalmente, a forma esfrica,
com um pequeno pednculo, tpico para a formao de embries normais.
Este processo j foi descrito por Strasburger (18), e verificado por observaes de muitos autores.
As observaes microscpicas feitas desde o incio da formao dos
embries nucelares, deixam claramente ver que so grupos irregulares de
clulas que iniciam o seu crescimento na direo centrpeta, superfcie
do saco embrionrio ; assim, no se pode dizer se cada grupo de clulas
iniciais j corresponde a um s embrio nucelar ou se h ainda divises
secundrias. Tambm parece que no h uma absoluta limitao a uma
ou outra regio pr-determinada do saco embrionrio, apesar de que sc
nos afigure que existe intensidade mais acentuada nas regies do nucelo
adjacente parte micropilar, onde est localizada a oosfera.
O desenvolvimento dos embries nucelares tambm no parece sincronizado e o fato de aparecerem, em sementes maduras, embries grandes e
pequenos, pode em parte ser explicado pela maior ou menor precocidade
do seu desenvolvimento. Assim, no h, evidentemente, qualquer limitao rgida de ordem histolgica com referncia ao nmero de embries
nucelares. De outro lado, devendo conter cada saco embrionrio uma s
oosfera, era de se esperar, no mximo, um embrio sexual por semente (15,
fig. 15 e 16), porm foram observados vrios casos com mais de um embrio
sexual por semente (6, 7, 24). Registamos tal caso num cruzamento de
Calamondin x Trifoliata, no qual, num total de 3 seedlings , um era Calamondin puro, indicando origem apogmica, e os dois outros, providos de
folhas tripartidas, de natureza sexual. interessante observar que estes
hbridos, quando novos, pela conformao das folhas, no eram idnticos,
e no podemos afirmar se se trata de aes fenotpicas, genticas, ou, ainda,
consequncia de uma aberrao citolgica, porquanto posteriormente os
caracteres foliares destes hbridos tornaram-se idnticos.
H duas explicaes para o aparecimento de dois embries sexuais :
Frost (6, 7) opinou tratar-se de uma clivagem do embrio, de modo que
os dois descendentes representam gmeos uni-ovais ; Bacchi (1), de outro
lado, observou, em cortes, a ocurrncia rara de dois sacos embrionrios
no mesmo vulo, o que daria origem a dois embries bi-ovais.
A variabilidade do nmero de embries foi j observada por muitos
autores e parece que os fatores responsveis por essa variao so muito
diversos, alm da constituio gentica das variedades ou espcies. Traub
(24), por exemplo, registou correlao entre poliembrionia e alimentao,
devendo-se admitir a influncia do meio sobre a manifestao desse fenmeno. Discutindo as relaes entre polinizao e poliembrionia, Frost (8)
manifesta dvidas de que a fecundao seja um pr-requisito para a embrionia
nucelar. De outro lado, no pode haver dvida, de acordo com as investigaes de vrios autores citados por Frost (8), de que o nmero de sementes
formadas est em relao com a polinizao efetuada. Moreira e Gurgel (15)

1947

BRAGANTIA

71

observaram que h diferena significante no nmero de sementes em laranja

Baianinha, quando fecundada com pleri das variedades Baro ou Hamlin.
Na anlise experimental da poliembrionia encontramos indicaes de
uma competio entre o nico embrio sexual e os numerosos embries
nucelares. Isto j foi constatado pelo mtodo direto de observao microscpica (histolgica) por Strasburger (18). Segundo Frost (8) e Toxopeus
(23), os embries sexuais, so menos vigorosos do que os embries apogmicos. Assim, no de se admirar que a natureza do pai, em cruzamento,
tenha uma influncia diferente nesta competio, pois de se esperar que
algum hbrido seja mais, ou menos, vigoroso (Toxopeus (23), Torres (21),
Frost (6).
O fim principal do presente trabalho a determinao da distribuio
e frequncia da poliembrionia nas diferentes espcies e variedades da nossa
coleo, para depois escolher o material mais favorvel aos estudos detalhados sobre alguns dos problemas acima mencionados. Parece-nos, ainda,
que estudos mais minuciosos sobre poliembrionia poderiam ter uma aplicao prtica, tanto na obteno de novas variedades por cruzamento,
como no problema do estabelecimento de clones para cavalo, opinio, alis,
j manifestada por Toxopeus (23).
MTODOS APLICADOS
As observaes por meio de dois diferentes processos de contagem
de poliembrionia, so justificadas pela finalidade que tnhamos em vista.
Pareceu-nos interessante, do ponto de vista geral, saber exatamente o nmero
de embries perfeitos ou imperfeitos, que podiam se formar. Para qualquer
fim prtico, era apenas de interesse saber o nmero de embries suficientemente desenvolvidos, que podem passar da fase embrional para a vida
independente, isto , formar "seedlings".
Dois mtodos foram por ns usados para proceder s determinaes
do nmero de embries encontrados nas sementes das plantas ctricas :
1) contagem de embries germinados ; 2) contagem de embries nas sementes
antes de iniciado o processo de germinao ou, como chamamos, processo
direto.
1.

Contagem de embries germinados

Os quadros 1 e 2 mostram, em resumo, os dados obtidos por este mtodo,

os quais, do ponto de vista prtico, so bastante interessantes, porque
indicam frequncias "realmente" obtidas na germinao das sementes.
Vejamos como foram feitas essas determinaes.
a) Dados do quadro 1. Colhemos, separadamente, frutos normais
em 15 rvores de laranja azeda {Citrus aurantium L.). Extramos as sementes,
que foram lavadas e imediatamente semeadas em canteiros de terra. Fizemos
a semeao em sulcos rasos (2 cm) cobrindo as sementes com leve camada
de terrio.

VOL. V T I

BRAGANTIA

72

QUADRO 1
POLIEMBRIONIA
Contagem em

EM

CITRUS

sementeira de l a r a n j a azeda 1936

(Fecundao livre)

E M 15.000 S E M E N T E S G E R M I N A D A S
N. de
rvores

15

Mdia

Embries

Frequncia de embries
1

14.020

935

934,6

62,3

Poliembrionia

Total

42

16.028

1.069

1,1

6,5

2,8

0,2

Quando a germinao j estava bem adiantada, arrancamos cuidadosamente as sementes com embries germinados, mas ainda reunidos sob a
resistente pelcula externa (texta), de maneira a no haver dvida quanto
origem dos embries encontrados. A maior parte das sementes assim
arrancadas j possuia pelo menos um embrio com as duas pequenas folhas
completamente formadas. Rasgando a pelcula j em incio de desagregao,
contamos todos os embries encontrados no seu interior e que demonstravam
comeo de germinao (formao de radcula e caulculo). A esta contagem
escapavam naturalmente aqueles embries minsculos, que normalmente
nunca germinam em sementeira comum.
De cada planta semeamos cerca de 5.000 sementes, de modo que tivemos
material abundante para escolher mil sementes nas condies acima referidas, desprezando as mal germinadas e aquelas cuja pelcula exterior j
se havia decomposto. Foram assim contados os embries, cuja frequncia
variou de 1 a 4, em 15.000 sementes. No fizemos determinao da proporo de germinao nesta sementeira.
b) Dados do quadro 2. Fizemos a sementeira em caixas com terra,
distribuindo as sementes em linhas e conservando uma distncia de 2 cm
de uma a outra. Anotamos o nmero de sementes plantadas, o qual regulou
ser 500 de cada planta. Pudemos determinar a percentagem de germinao por ocasio de proceder contagem dos embries.
Foram plantadas, individualmente separadas, sementes de 110 plantas
pertencentes a 62 variedades e 9 diferentes espcies ctricas, assim como
de 10 plantas representando 4 tipos de hbridos.
O arrancamento e a contagem dos embries foram procedidos do mesmo
modo descrito em a, depois de terminada a germinao, isto , 80 dias aps
a semeao (1.6).

1947

BRAGANTIA

73

QUADRO 2
POLIEMBRIONIA EM

mtagem

em

CITRUS

sementeira

1938

(Fecundao livre)

N.o

ESPCIE
OU
HBRIDO

Sem ntes

Embries
por
sementes

Poliembrionia

1,0

0,0

1,0

0,06

1,0

2,6

1,1

9,0

1,2

17,0

1,1

7,9

1,1

13,1

1,3

26,4

1,4

34,4

1,0

0,6

1,6

53,1

Frequncia mdia de embries

(por planta e por classe)

de
rvores

Plantadas

Germinadas
%

500

26,8

134

2200

71,1

30,5

0,2

30

14750

41,2

196,6

5,0

0,1

11

5410

24,4

110,2

10,9

0,1

500

37,6

156

30

1500

68,4

315

27

14

6860

41,3

170,7

30,4

3,2

0,4

0,07

40

16690

45,6

149,5

48,7

6,2

0,9

0,1

2000

71,7

234,2

115,5

8,2

0,5

500

30,0

149

1500

72,1

168,3

139,3

42,6

500

34,6

104

53

12

1000

57,5

214,5

62,5

8,5

1550

21,2

66,5

14,5

1,0

(papeda)
(toranjas)

(laranja azeda)

(limas)

(tangerinas)

(limo cravo)
(limes)
(laranja doce)
(pomelos)
1

(cidras)
C. reticulata x Fortu8,3

0,6

0,3

1,5

39,9

1,2

23,2

1,2

17,2

0,3

(calamondin)
Poncirus trifoliata x
(cLtrange Rusk)
C. reticulata x

2,0

(tau gelos)
C. sinensis x
C. reticulata
(tanjrors)

2.

Contagem

direta na

semente

Na literatura sobre poliembrionia encontramos referncias sobre contagem direta do nmero de embries nas sementes dos Citrus. Em vista
disso, tentamos fazer essa determinao tambm no material da nossa
coleo.

1947

BRAGANTIA

75

H vrias vantagens na determinao da poliembrionia diretamente

na semente, bastando lembrar que podemos contar um nmero bem maior
de embries, do que na sementeira, obtendo-se assim um resultado mais
exato, com grande economia de tempo e, principalmente, de espao.
A tcnica usada muito simples : com uma agulha histolgica abrese o integumento na ponta da semente. Com uma pina de pontas finas,
vai-se retirando o integumento bem como a pelcula que recobre os embries.
A disseo dos embries feita com duas agulhas histolgicas ; a princpio,
enquanto no se tem ainda prtica, deve ser feita sob a lupa binocular;
aps bastante tirocnio, pode-se fazer vista desarmada, com exceo apenas
das sementes altamente poliembrinicas, como a do Calamondin, laranja
lima, etc., em que se encontram embries pequenos, medindo, s vezes,
menos de milmetro. Na disseo dos embries das sementes deve-se tomar
muito cuidado para no quebrar os cotildones, retirando sempre que possvel
os embries completos. Nas espcies com alta frequncia de poliembrionia
deve-se abrir os cotildones dos embries maiores, pois comum encontrar-se
embries pequenos crescendo por dentro dos grandes ; alm disso, deve-se
ainda observar muito bem os embries do lado que foi o micrpilo, pois
tambm comum encontrar-se embries diminutos at menores de 0,5 mm,
por cima e entre os embries maiores.
Outra dificuldade que ainda se pode encontrar na identificao dos
embries a variao do nmero de cotildones, pois aparecem embries
com 1, 3 e 4 cotildones, alm dos normais, com 2.
No quadro 3 damos o resumo, por espcie ctrica, dos dados obtidos
na contagem direta dos embries nas sementes.
RESULTADO

DAS CONTAGENS DA POLIEMBRIONIA

Em todas as formas de Citrus estudadas, a poliembrionia foi demonstrada de dois modos : nmero mdio ou mdia dos embries, que se
obtm dividindo-se o nmero total de embries contados pelo nmero de
sementes consideradas ; e a percentagem de poliembrionia, que se obtm
calculando-se em porcento a frequncia das sementes com dois ou mais
embries, no total das sementes contadas. Por exemplo, se tivermos s
sementes monoembrinicas, a mdia dos embries ser l e a percentagem
ser zero ; se tivermos apenas sementes de 2 ou mais embries, a mdia
dos embries ser, no mnimo, 2, e a percentagem ser 100. Os casos mais
comuns so os compreendidos entre esses limites, sendo bom frizar que
encontramos mais frequentemente sementes monoembrinicas, ao passo
que sementes com 100% de poliembrionia fato raramente verificado.
Para facilitar a discusso sobre os resultados obtidos nas contagens
da poliembrionia, quer utilizando-se a contagem dos embries no processo
da germinao, quer no processo direto, achamos conveniente recorrer ao
agrupamento das percentagens de poliembrionia em trs classes, estabelecendo-se o critrio seguinte :

BRAGANTIA

76

VOL. V I T

Processo de c o n t a g e m
POLIEMBRIONIA
X-i, sementeira
baixa
mdia
alta

"

/0

/0

15%30%
+30%

Direto
0%30%
30%-60%
+00%

1. Contagem de embries germinados

a)

Dados d o quadro 1 L a r a n j a azeda (Citrus auranlium L.).

A contagem da poliembrionia da laranja azeda foi feita em mais de

15.000 sementes, pelo interesse que esta variedade j teve e pode ainda
voltar a ter como porta-enxrto. Do nosso plano de trabalhos em colaborao constava a obteno de clones desta variedade, utilizando-se do fenmeno da poliembrionia ; para isso projetamos polinizar as melhores matrizes
de laranja azeda com Poncirus trijoliata (L.) Raf., cujo carter "triflio"
dominante sobre o tipo de folha comum, o que permitiria distinguir na
sementeira os embries sexuais dos apogmicos. Depois do aparecimento
da "tristeza" dos Citrus, estes estudos foram interrompidos, por estar essa
variedade, pelo menos temporariamente, condenada como cavalo para
vrias espcies ctricas (14).
A percentagem da poliembrionia variou de 4,3 at 8,6 ; as diferenas
dos extremos para a mdia das 15 rvores estudadas so estatisticamente
significantes, o que prova ser possvel separar plantas com diferentes graus
de poliembrionia. Contudo, essas diferenas, apesar de significantes, no
apresentam interesse prtico, por serem de ordem muito baixa e sofrerem
variaes de um ano para outro, como veremos mais adiante.
A poliembrionia na laranja azeda, verificada pelo processo da germinao da semente, baixa. Obtivcrani-se em 15.000 sementes contadas,
93,5% ou 14.020 sementes com um s embrio germinado. A percentagem
de poliembrionia foi de 6,5. Entre as poliembrinicas esto includas 935
sementes com dois; 42 de trs, e 3 com quatro embries cada uma.
b)

Dados d o quadro 2 Citrus diversos e hbridos.

Incluimos na determinao da poliembrionia, os resultados expressos

pelo nmero mdio de embries e pela percentagem ; foram contadas
sementes de 9 diferentes espcies de Citrus, num total de 110 plantas, e
4 diferentes hbridos, no s de espcies do gnero Citrus, como tambm
deste gnero com Fortunlla e Poncirus, num total de 10 plantas
Papeda (Citrus hystrix D C ) . Esta foi a nica espcie cujas sementes
mostraram ser sempre monoembrinicas na contagem em sementeira. Nas
135 sementes germinadas, provenientes de uma nica planta, encontramos
sempre um s embrio.

1947

BRAGANTIA

77

Toranjas (Citrus grand is (L.) Osbeck). As variedades pertencentes

a esta espcie tm sido consideradas, por muitos autores, como monoembrinicas, mas, nas nossas determinaes, encontramos uma planta de
toranja doce que, dentre 338 sementes germinadas, apresentou uma com
2 embries. Como veremos posteriormente, fazendo a contagem dos embries
diretamente na semente, encontramos em sementes de algumas plantas
embries adicionais, os quais, sendo muito pequenos, raramente conseguem
germinar. Para fins prticos, podemos considerar as toranjas como sendo
monoembrinicas.

Laranja azeda (Citrus aurantium L.). Alm dos dados constantes

do quadro 1, na nova determinao da poliembrionia empreendida em
1938 inclumos tambm esta espcie, sendo anotada a poliembrionia em
sementes de 30 plantas, localizadas em 3 diferentes pomares. Encontramos
desde plantas monoembrinicas, at plantas com mais de 15% de poliembrionia (agro-doce), sendo a percentagem mdia da poliembrionia de 2,6%.
Devido poliembrionia ser muito baixa na grande maioria das plantas,
a mdia do nmero de embries por semente ficou muito prxima de 1.
Comparando estes resultados com os do quadro 1, notamos que lcs
so muito baixos, podendo-se atribuir este fato ao nmero menor de sementes
contadas, geralmente menos de 250 por planta ; a nica exceo verificada
a de duas plantas que, na verdade, no devem ser comparadas, pois so
representantes de outra variedade, a agro-doce, provavelmente um hbrido
(Citrus aurantium x Citrus sinensis). (24).

Limas doces e cidas (Citrus aurantijolia Christm. Swing). Foram

analisadas 11 plantas de 4 diferentes origens, variando a poliembrionia
de 2,9%, na lima selvagem, at 13,8%, na lima da Prsia. Neste grupo,
a poliembrionia foi baixa, sendo a percentagem mdia de 9,0%. O nmero
mdio de embries est prximo de 1 ; somente duas plantas (lima da Prsia
e limo Cristal) apresentavam sementes de trs embries.

Limo cravo (Citrus reticulata ?). Sementes de 3 plantas apenas foram

examinadas, encontrando-se baixa e constante percentagem de poliembrionia,
ao redor de 8,0%. O nmero mdio de embries por semente (1,1) tambm
foi constante. Por haver uma certa dvida quanto posio botnica desta
forma de Citrus, pensando-se, s vezes, tratar-se de uma tangerina cida
(20, p. 415) ou de um hbrido (lima x tangerina) preferiu Webber (28, p.
480, 548, 619, 626) manter o limo cravo no grupo das limas. De acordo
com os dados do quadro 2, sob o ponto de vista da poliembrionia, esta
forma ctrica aproxima-se muito mais da espcie Citrus aurantijolia do
que da Citrus reticulata Blanco.
Mexiriqueira do Rio (Citrus reticulata Blanco). Contamos os embries
de sementes de uma nica planta desta espcie, encontrando-se 17,0%
de poliembrionia. A mdia foi de 1,2 embries por semente ; o mximo
observado foi de 3 embries em 2 sementes.
Limes em geral (Citrus limon L. Burm.). Foram analisadas 14
plantas correspondentes a 10 variedades de duas diferentes localidades,

78

BRAGANTIA

VOL. V I I

encontrando-se desde limes monoembrinicos, como o Ponderosa e Sweet

Lemon, at limes com 32,0 a 53,2% de poliembrionia, respectivamente,
Rugoso e Rio Claro ; a poliembrionia para esta espcie foi em mdia de
13,1%, o nmero mdio de embries variou de 1 a 1,7 com um valor mdio
de 1,1.

Laranja (ou tangor), tangerina, maracuj, sabar e reticulata

(Citrus reticulata x Citrus sinensis). Foram analisadas 4 diferentes plantas
e variedades, todas da Estao Experimental de Limeira. A poliembrionia
foi baixa, variando de 7,7% para laranja tangerina at 25,8% para a laranja
reticulata, sendo a mdia de 17,2%. Apenas em dois casos obtivemos
sementes com mais de 3 embries (sabar e reticulata) ; o nmero mdio
de embries variou de 1,1 at 1,3 com um valor mdio de 1,2.

Laranjas doces (Citrus sinensis L. Osbeck). Foram analisadas 40

plantas, de 4 diferentes pomares, indo a poliembrionia desde 7,2% at 52,3%,
sendo a mdia de 26,4% ; as mdias de embries variaram de 1,1 at 1,7
com um valor mdio de 1,3.
Como vemos, nas laranjas doces encontramos representantes desde
poliembrionia alta, como as laranjas maca, mangaratiba, seleta amarela
e S. Sebastio, com mais de 40% e sementes at com 5 embries ; poliembrionia mdia, como nas laranjas caipira B, abacaxi, coronel, sangunea,
etc., entre 15 e 30% e sementes at com 4 embries ; finalmente, poliembrionia baixa, com menos de 15%, nas laranjas Setbal, aoriana, etc.

Pomelos (Citrus parodist Macf).

Neste grupo foram analisadas 4

plantas, cada uma de diferente variedade, todas de um s pomar. A poliembrionia oscilou entre mdia a alta, com valores de 26% para os pomelos
triunfo e marsh-seedless, at cerca de 42% para os pomelos Foster e McCarty ; os dois tipos com poliembrionia alta chegaram a ter sementes at
com 4 embries, e os 2 restantes at 3 embries por semente. A mdia de
poliembrionia para este grupo foi de 34,4% e o nmero mdio de embries
por semente de 1,4.

Calamondin (Citrus reticulata var. austera? x Fortunela sp?). Este

hbrido apresenta o mais alto grau de poliembrionia, variando as plantas
de 47,4% at 56,0%, com uma mdia de 53,1% ; portanto, o nmero de
sementes poliembrinicas maior do que as monoembrinicas. Encontramos
em uma planta sementes at com 7 embries, o que, de fato, um nmero
bastante alto ; nas outras 2 plantas, obtivemos sementes at com 5 embries.
Portanto, dentre todas as formas de Citrus, nas quais foi determinada a
poliembrionia na germinao da semente, o Calamondin ocupa a mais alta
posio, com um recorde de 7 embries, numa nica semente.
Cidra (C. medica L.). A nica planta analisada deu, em 150 sementes
germinadas, apenas 1 com 2 embries, o que d 0,6% de poliembrionia ;
aqui tambm, praticamente, podemos considerar a poliembrionia como nula.

Citrange Rusk (C. sinensis x P. trijoliata). Na nica planta analisada

deste hbrido, constatamos um grau poliembrinico alto, cerca de 40%,
encontrando-se sementes at com 4 embries.

1947

BRAGANTIA

79

Tangelos ((7. reticulata x C. paradisi). Nos dois tangelos analisados,

a poliembrionia foi de grau mdio, com valores de 15% e 31%, sendo a
mdia de 23,2% ; o tangelo Thornton teve sementes at com 4 embries,
ao passo que o Sampson ? teve sementes at com 3 embries. Os nmeros
mdios de embries, por semente, foram 1,1 e 1,4, com valor mdio de 1,2.

2.

Contagem direta na semente

Dados do quadro 3 Citrus diversos, hbridos e

Poncirus.

Papeda (C. hystrix). semelhana do que aconteceu na determinao

da poliembrionia pelo processo da germinao, tambm na contagem direta
no encontramos qualquer semente poliembrinica, mesmo examinando-se
plantas de duas origens diferentes, devendo-se considerar bastante provvel que esta espcie seja de fato monoembrinica.
Toranjas (C. granais). Como j vimos, esta espcie tem sido tomada
como monoembrinica. Nas nossas contagens baseadas no processo direto
e de germinao, observamos plantas com sementes apresentando embries
adicionais. Assim, para as toranjas vermelhas, encontramos, no ano de
1943, duas sementes com 3 embries e, em 1944, uma semente com 2 embries.
As demais eram plantas monoembrinicas.
Fica comprovado que, embora na maioria dos casos as sementes das
toranjas sejam monoembrinicas, pode aparecer algumas sementes com
um ou dois embries adicionais. Nada podemos afirmar quanto origem
destes. Parece-nos provvel tratar-se de embries sexuais.

Laranja azeda (C. aurantium). Foram analisadas 3 plantas : uma

de laranja azeda e duas de agro-doce, todas da coleo da Estao Experimental de Limeira. Na primeira, a poliembrionia foi de 54,0% e nas outras
duas de 36,0% e 64,7%, o que d uma mdia de 51,5%. Para as mesmas
plantas, o nmero mdio de embries variou de 1,3 a 2,1, com um valor
mdio de 1,6.
Na determinao direta, o grupo da laranja azeda apresentou alta
percentagem de poliembrionia, e uma planta de agro-doce chegou mesmo
a ter at 65,0% e sementes at com 7 embries. No processo da contagem
em sementeira, poucos embries conseguem germinar. Do percentagem
muito baixa, como vimos no quadro 2.

Lima da Prsia (C. aurantijolia). Foram analisadas sementes de 4

plantas, todas da Estao Experimental de Limeira. Esta espcie se mostrou
mais homognea que as demais, com valores de poliembrionia desde 32,1%
at 63,8% e mdia de 46,1%. O nmero mdio de embries variou de 1,4
at 2,0, com um valor mdio de 1,6.
De acordo com estes resultados, a lima da Prsia exibe grau mdio
de poliembrionia, podendo-se dizer que metade das suas sementes monoembrinica e outra metade tem uma variao de 2 a 5 embries por semente.

80

B R A G A N T I A

VOL. V I I

Limo cravo (C. reticulata?). Foram analisadas plantas de duas

origens diferentes, da Estao Experimental de Limeira e Escola Superior
de Agricultura "Luiz de Queiroz". As percentagens de poliembrionia so
muito variveis, obtendo-se desde 10,3% at 88,9%, sendo a mdia de 49,6%.
O nmero mdio de embries variou de 1,2 at 2,4 com um valor mdio de 1,7.
Pelos dados acima, podemos dizer que no limo cravo a poliembrionia
varia de baixa at alta, sendo que metade das sementes monoembrinica
e metade com 2 at 5 embries por semente. Novamente, esta variedade
apresenta as percentagens e frequncias mdias semelhantes s da espcie
C. aurantijolia.
Limes em geral (C. limon). Dentro desta espcie encontramos,
no mnimo, 2 grupos diferentes : um com grau baixo de poliembrionia,
como nos limes doce, ponderosa e sweet lemon ; outro com grau alto de
poliembrionia, constitudo pelo limo rugoso. Nas formas de baixa poliembrionia encontramos valores desde 3,0% para o limo ponderosa at 21,0%
para o limo doce ; na forma de alta poliembrionia, desde 80,5% at 90,0%,
sempre em limo rugoso, provavelmente um hbrido (C. limon x C. medica),
segundo Webber (28, p. 607). A mdia dos dois grupos no tem valor muito
representativo, aproximando-se de 40% de poliembrionia.
Nestes grupos, o nmero de embries, por semente, foi tambm muito
varivel, de 2 at 7 ; a mdia variou de 1,0 a 1,3 nas formas de baixa poliembrionia e de 2,4 a 2,8 no limo rugoso.

Laranja (tangor), maracuj (C. reticulata x C. sinensis).

Foram
analisadas duas plantas da Estao Experimental de Limeira. Os valores
de poliembrionia, bastante prximos um do outro, foram de 82,0% e 91,6% ;
o nmero mdio de embries foi de 3,2 e 3,3, respectivamente. A mdia
de poliembrionia deste hbrido foi de 86,8%. As sementes apresentavam
at 9 embries e podemos dizer que elas tm um alto grau de poliembrionia.

Laranjas doces (C. sinensis). Foram analisadas mais de 15 plantas

pertencentes a 7 variedades, todas da coleo da Estao Experimental
de Limeira. A poliembrionia variou de 30,8% para laranja aoriana at
95,0% para a laranja lima, sendo a mdia de 69,5% ; o nmero mdio de
embries, por semente, para as mesmas plantas, variou de 1,4 at 4,0 com
um valor mdio de 2,5.
Deste modo, nas laranjas doces, encontramos plantas com poliembrionia de grau mdio at alto ; nas primeiras, os valores de poliembrionia
vo at 60,0%, tendo sementes, no mximo, com 6 embries ; e nas segundas,
at 95%, com um recorde de 15 embries numa nica semente.

Pomelos (C. paradisi).

Nas vrias plantas examinadas, da Escola

Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz", obtivemos alta poliembrionia,
com valor de 73,2%, sendo o nmero mdio de embries de 2,3. As plantas
examinadas mostraram poliembrionia bastante uniforme.

Calamondin (C. reticulata var. austera? x Fortunela sp?). Este foi

o hbrido que deu maior percentagem de poliembrionia no processo de
contagem dos embries germinados. Confirmamos este fato, no processo

1947

BRAGANTIA

81

de contagem direta, pois constatamos sementes at com 20 embries.

notvel que encontramos vrias sementes com 10 at 14* embries e tambm
que o nmero de sementes com 3 embries foi muito maior do que com
2 embries. A percentagem de poliembrionia foi de 83,6% e o nmero
mdio de embries 3,6.
Trifoliata (Poncirus trijoliat). Esta espcie apresentou alto grau
de poliembrionia, chegando a 87,6%, e sementes encerrando at 10 embries;
o nmero mdio de embries foi de 2,6. Sendo a variao da poliembrionia.
entre as plantas muito pequena, reunimos todas as determinaes em um
nico valor.
Pomelo?. Como teremos ocasio de discutir mais adiante, as plantas
deste grupo, na Estao Experimental de Limeira, devem ter tido origem
bem diferente, pois, para duas plantas, encontramos poliembrionia muito
baixa, de 0,6% e 1,6%, respectivamente ; de outro lado, para uma planta,
encontramos a mais alta poliembrionia at hoje registada, de 99,4%. Uma
de suas sementes encerrava o notvel nmero de 20 embries ; o nmero
mdio de embries, por semente, desta planta, foi de 5, havendo apenas
2 sementes com 1 s embrio.
DISCUSSO DOS RESULTADOS
Como se v pelos quadros 2 e 3, a avaliao da poliembrionia em Citrus,
pela germinao da semente ou pela contagem direta, revelou grande diferena. Por este ltimo processo, a frequncia foi bem maior que no primeiro. A razo dessa diferena que, no processo direto, se contam todos
os embries existentes na semente, e, como j frizamos anteriormente,
muitos deles so bem pequenos, medindo at menos de um milmetro. Por
ocasio da germinao, eles ou no esto ainda completamente formados
e no conseguem vencer a concorrncia dos demais, ou esto mal localizados, s vezes dentro dos cotildones dos embries maiores, e dessa forma
no conseguem tambm germinar.
interessante notar que nas diversas formas de Citrus, utilizando-se
os dois processos de contagem, encontram-se diferenas muito acentuadas
na poliembrionia. Para os limes, esta diferena foi de 30%, para a laranja
azeda de 50% e para o tangor maracuj de 70%.
Para facilitar as comparaes dos resultados obtidos nos dois processos
citados, organizamos o quadro 4, no qual damos os valores mdios para
as diferentes espcies de Citrus, hbridos e gneros correlatos. Como podemos
notar ali, a nica espcie totalmente monoembrinica foi a papeda (C.
hystrix) ; nas toranjas, consideradas monoembrinicas, encontramos, em
alguns indivduos, fraca poliembrionia. A laranja azeda deu, na germinao, poliembrionia muito baixa, cerca de 2,6% e na contagem direta,
poliembrionia mdia 51,5%, sendo a diferena de 48,9% ; a variao de
poliembrionia, tanto em um como no outro processo de contagem, foi da
mesma ordem. A lima da Prsia, o limo cravo e os limes (C. limon) que
apresentaram no processo da germinao 9,0, 10,3 e 13,1%, deram, respectiva-

1947

BRAGANTIA

83

mente, na contagem direta, 46,1, 49,6 e 39,9%, sendo a diferena entre os

dois processos de 40%, aproximadamente ; estas 3 espcies de Citrus apresentaram grande variao de poliembrionia, como podemos notar nas ltimas
colunas do quadro 4. Muito contribuiu para isso, a incluso, neste grupo,
do limo rugoso, que deve ser considerado como hbrido e tem alta poliembrionia.
O tangor maracuj, deu, na sementeira, um valor muito baixo de poliembrionia, 17,2%, ao passo que na contagem direta foi bem alto, chegando
a 86,8% com uma diferena de 70% ; a variao da poliembrionia dentro
de cada processo foi pequena.
Nas laranjas doces e pomelos, as diferenas da poliembrionia avaliadas
pelos dois processos foram quase iguais, cerca de 40% ; as mdias das
contagens na sementeira foram, respectivamente, de 26,4% e 34,4% e na
contagem direta dos embries de 69,5% e 73,2%. Considerando-se a variao
da poliembrionia dentro de cada processo, podemos notar que na laranja
doce a variao foi bem grande e nos pomelos foi bem menor.
No calamondin, a diferena entre os dois processos de contagem foi
de 30% ; a variao da contagem em sementeira foi bem pequena.
Em sementes de trifoliata e de pomelo (?) fez-se somente a contagem
pelo processo direto, o que impossibilitou uma comparao.
Uma vez que se tem contagens de poliembrionia em algumas plantas
individualmente pelos dois processos, isto , da sementeira e direta, pode-se
fazer mais algumas comparaes (quadro 5), pois, naturalmente, aqui os
resultados so mais exatos do que quando se usam as mdias das espcies.
Para resumir estas comparaes, vamos discutir os casos mais interessantes,
podendo-se, nos demais, consultar o quadro 5.
Podemos notar que o sweet lemon (E. E. 4), considerado monoembrinico, segundo a contagem em sementeira germinada, revelou poliembrionia de 6-7% em contagem direta. Embora baixa, no permite classific-lo como variedade monoembrinica. Depois do sweet lemon, encontramos as menores diferenas da poliembrionia, entre os dois processos,
nas laranjas caipiras (E. E. 4 e E. E. 3), da ordem de 25% ; as maiores
diferenas apareceram na laranja azeda (E. E. 3), (53, 3%) e no limo cravo
(E. E. 3 e E. E. 4), 55 e 74%.
J podamos, at certo ponto, prever estes resultados, porque sweet
lemon, laranja azeda e limo cravo tm geralmente, um embrio muito
forte e os demais bem pequenos. Estes ltimos quase nunca conseguem
germinar. Na estampa 3, fig. a podemos facilmente observar esse fato
em sementes de laranja azeda.
De outro lado, nas plantas em que a diferena entre os dois processos
de contar a poliembrionia no grande, como nas laranjas caipira, aoriana
e seleta amarela, verifica-se que os embries no so muito diferentes entre
si. Mostram-se todos igualmente bem desenvolvidos, e, portanto, com
melhores possibilidades de germinar.

B R A G A N T I A

84

VOL. V I I

QUADRO 5
P O L I E M B R I O N I A E M CITRUS
C o m p a r a o entre contagens n a sementeira
(Fecundao livre)

e direta

CONTAGEM D E EMBRIES
CITRUS

N. da
rvore

DIVERSOS

Xa sementeira
Embries
V

Diferena
da
Poliembrionia

Direta

Poliembrionia

Embries
V

Poliembrionia

Of

/0

Sweet Lemon

(E.E. 4)

1,0

0,0

1,1

6,7

5,6

Laranja azeda
Laranja agro-doce . . . .

(E.E. 3)
(E.E. 4)

1,0
1,2

0,7
18,9

1,3
2,1

54,0
64,7

53,3
45,6

(E.E. 3)
(E.E. 4)

1,1
1,1

7,3
13,8

1,7
1,6

57,1
44,9

49,8
31,1

(E.E. 3)
(E.E. 4)

1,1
1,1

7,4
8,0

1,8
2,1

62,4
82,0

55,0
74,0

(E.E.
(E.E.
(E.E.
(E.E.
(E.E.

1,1
1,3
1,3
1,3
1,5

10,0
20,9
25,0
27,3
43,6

1,6
2,2
1,8
1,7
2,8

46,2
67,6
47,1
54,0
79,4

36,2
46,7
22,1
26.7
35,8

Lima da Prsia

....

Laranja aoriana
Laranja lisa paulista . .
Laranja caipira B
Laranja seleta amarela

5)
4)
4)
3)
3)

QUADRO 6
POLIEMBRIONIA E M

CITRUS

Distribuio das frequncias e m contagens n a sementeira e direta

FREQUNCIA
POLIEMBRIONIA
Sementeira

Direta

Classes em %
10090
90 80
80 70
70 60
60 50
5040
40 30
3020
20 10
10 0
0
Total

0
0
0
0
4
9
6
23
25
38
15

7
S
6
5
4
4
6
2
2
9
7

120

60

1047

BRAGANTIA

85

Para mostrar como se deu a distribuio da frequncia dos valores

de poliembrionia nos dois processos, organizamos o quadro 6, no qual podemos
notar o seguinte : na contagem, em sementes germinadas, encontramos
15 plantas na classe 0% de poliembrionia ; na classe de 0 a 10% encontramos a frequncia mxima de 38 plantas ; logo a seguir, notamos que
a frequncia vai diminuindo, terminando na classe de 50 a 60%. De outro
lado, da coluna do processo direto de contagem dos embries, notamos
distribuio mais ou menos uniforme de frequncia nas 11 classes de 0 a
100%, havendo um ligeiro acmulo nas classes de 0%, de 0% 10%,
de 30-40%, de 80-90% e 90-100%. Por este processo, conseguimos contar
nmero bem maior de embries do que pelo processo da germinao. A
contagem direta fornece informao precisa sobre o grau de poliembrionia.
Pelo processo de germinao encontramos, no mximo, 66%, quando pela
contagem direta chegamos at quase 100% de poliembrionia.
COMPARAO DOS RESULTADOS OBTIDOS COM OS D E OUTROS
AUTORES
1. Contagem e m sementeira.
Comparando os resultados discutidos no captulo precedente com os
obtidos por outros investigadores verifica-se que o nmero mdio de embries
germinados, por semente, em diversas espcies ctricas no excessivamente
varivel. No quadro 7 resumimos os dados publicados por Navarro de
Andrade (16), Torres (22), Frost (8), Toxopeus (23) e os constantes dos
quadros 1 e 2, todos referentes a contagens em sementeira.
QUADRO 7
POLIEMBRIONIA E M
CITRUS
N m e r o m d i o de embries germinados por s e m e n t e , segundo vrios autores,
c o m p a r a d o c o m os dados dos quadros 1 e 2 .

ESPCIES

Toranjas

Laranja azeda

Limo cravo . . . .
Mandarinas

Navarro
(16)

....

Limes

1 ones
(22)

1,0

Frost
(8)

1,1

Toxopeus
(23)

Quadros
1 e 2

1,0

1,3

1,2

1,1

1,1

1,0

1,1

1,1

1,1

1,3

1,2

1,5

1,2

1,0

1,0

1,1

1,1

1,7

1,2

Limo rugoso . . .

1,2

1,9

Laranjas doces . .

1,4

2,0

1.3

1,3

Pomelos

1.3

1,1

1.2

1,4

VOL. V I I

B R A G A N T I A

86

Os dados de Navarro e de Frost aproximam-se bastante dos nossos ;

Torres encontrou frequncia de embries bem mais elevada no limo rugoso
e nas laranjas doces ; o mesmo acontece com os dados de Toxopeus em
relao s mandarinas e ao limo rugoso.
Como veremos no captulo seguinte, a viabilidade dos embries est
condicionada s condies de meio que lhes sejam proporcionadas, especialmente nas formas de alta poliembrionia. As diferenas mencionadas podem
ser explicadas como resultantes de melhores ou piores condies para germinao a que foram submetidas as sementes.
2. C o n t a g e m direta.
Dados referentes contagem direta so mais raros. S foi possvel
comparar os nossos com os mencionados por Torres (22) e Toxopeus (23).
Os dados deste ltimo so de 4 formas ctricas apenas, como se v
pelo quadro 8 :
QUADRO 8
POLIEMBRIONIA E M

CITRUS

N m e r o m d i o de embries por s e m e n t e (contagem direta) segundo vrios autores

Torres
(22)

E S P C I E S

Toxopeus
(23)

Quadro 3

1,0

1,0

C. granais

1,0

1,0

C. aurantium

1,0

1,6

1,0

2,0

1,6

1,8

6,1

1,7(*)

1,3

1,1

2,0

4,5

2,6

C. sinensis

2,6

2,5

C. paradisi

1,6

C. reticulata x Fortunella

5,3

8,9

3,6

C. hybrida (?) (limo rugoso)

....

2,3

(*) Limo cravo ou "rangpur lime".

Verifica-se pelos dados das colunas 2 e 4, relativa concordncia de

nossos dados com os obtidos por Torres. Frequncias bem maiores foram

1947

BRAGANTIA

87

encontradas por Toxopeus, mostrando a existncia de acentuada variao

da poliembrionia dentro de uma mesma espcie, quando se consideram
todos os embries formados nas sementes, isto , em contagem direta.
ASPECTOS QUALITATIVOS DA POLIEMBRIONIA
1. Distribuio e caratersticas dos embries.
De acordo com o que vimos na introduo deste trabalho, os embries
adventcios se formam de clulas do nucelo, situadas nas circunvizinhanas
do saco embrionrio, as quais crescem para dentro deste ; h, ainda, uma
certa tendncia das clulas prximas ao micrpilo, de formar mais embries.
Devido a isto encontramos na regio que corresponde ao micrpilo, isto ,
pice da semente, um nmero maior de embries, como bem mostram as
figs, a e b da estampa 3 e estampa 5.
Os embries se distribuem na semente com o caulculo e a radcula
voltados para o micrpilo. Embries com os cotildones voltados para
o micrpilo, ou, ainda, situados no meio da semente, so raros. Pudemos
notar que nas sementes altamente poliembrinicas que se encontram mais
frequentemente as excees regra acima mencionada. Para melhor ilustrao disto, damos desenhos de embries de laranja azeda e calamondin
(estampa 3, figs, a e b ) , nas quais bem se pode notar a posio, tamanho
e distribuio dos embries e, tambm, o tamanho dos cotildones. Esses
desenhos representam 3 etapas : a) ao serem retirados o tegumento e a
pelcula da semente, mostrando como os embries se justapem ; b) os
embries afastados, mas mantendo a sua posio relativa na semente ; c)
embries abertos, mostrando a posio e tamanho dos cotildones.
Outro fato interessante que constatamos ao analisarmos a distribuio
da frequncia da poliembrionia (captulo seguinte) foi a deficincia de sementes
na classe de 4 embries, comprovada pela anlise estatstica. Observamos
que quando h 4 embries, eles tendem a se justapor em forma de cruz,
dentro da semente. Talvez isto cause alguma dificuldade de ordem mecnica que determine a no formao do 4. embrio.
Quanto cr, verificamos que na maior parte dos embries de Citrus,
predomina a cr branca. H casos, como no limo cravo, sweet lemon,
laranja maracuj e calamondin em que quase todos os embries so verdes ;
encontramos ainda casos em que apenas os embries pequenos so verdes,
como em laranja azeda, limo ponderosa e pomelo Mac Carty.
2. Tamanho dos embries e dos cotildones.
Como j acentuamos, por vrias vezes, os embries so muito variveis
em tamanho. Seus cotildones podem ser iguais ou diferentes.
Uma vez que os embries das diversas formas de Citrus tm tamanhos
diferentes, resolvemos, para estudar este carter, separ-los em trs
tamanhos : grandes, mdios e pequenos ; na classe dos pequenos, que
para todas as formas menor de 5 mm, podemos distinguir ainda embries
diminutos, menores de 2 mm.

B R A G A N T I A

88

VOL. V I I

As sementes monoembrinicas ou de poliembrionia muito baixa tm

um embrio muito desenvolvido e de cotildones iguais como na papeda,
toranjas e laranjas azeda e agro-doce. medida que a poliembrionia aumenta,
como na lima da Prsia, limes cravo, doce, ponderosa e sweet lemon, a
percentagem dos embries grandes decresce, passando de 100% a 60%.
Por outro lado, aumenta a dos embries mdios, enquanto a percentagem
dos embries pequenos mostra-se baixa, menos de 10%. Nas formas de
alta poliembrionia, como na laranja maracuj at o trifoliata, a percentagem
de embries grandes idntica ou menor que a dos embries mdios, geralmente de 20 a 40%, havendo um acrscimo notvel na classe dos embries
pequenos, que passam a cerca de 40%. medida que a poliembrionia cresce,
aumenta a variabilidade dos cotildones.
Uma boa ilustrao do que acabamos de expor, isto , da variabilidade
do tamanho dos embries e dos cotildones encontra-se nas estampas 3,
(figs, a e b), 4 e 5. Na figura a, estampa 3, damos o desenho de 3 sementes
de laranja azeda, das quais foram retirados o tegumento e a pelcula, expondo
os embries. Na primeira semente temos 2 embries grandes, um deles
com os 2 cotildones iguais e o outro com um cotildone grande e um pequeno.
Na 2 . semente, um dos embries mede a metade do outro, tendo os cotildones mais ou menos iguais. Na 3. semente, um dos embries bem pequeno,
com ambos os cotildones tambm mais ou menos iguais. A laranja azeda
tinha 82% de embries grandes, 10% de embries mdios e 8% de embries
pequenos.
Na figura b, estampa 3 (desenho de sementes altamente poliembrinicas de calamondin), podemos notar que na primeira semente h um grande
nmero de embries mdios, com cotildones no muito diferentes. Na
segunda e terceira sementes da mesma figura podemos ver alguns embries
com cotildones bem diferentes. O calamondin tinha 18% de embries
grandes, 43% de embries mdios e 39% de embries pequenos ; nos tipos
de embries grandes e mdios h ainda que notar a variao do tamanho
dos cotildones.
Outras particularidades se encontram ainda nos embries dos Citrus,
como sejam : cotildones colados, nmero diferente de cotildones, etc.
a

3. Germinao dos embries dissecados.

Por vrias vezes fizemos a semeadura de embries dissecados, em
caixas com terra bem preparada, e em todos os casos em que os embries
eram grandes e mdios (acima de 5 mm) obtivemos boa germinao. Cumpre
notar que h formas de Citrus que tm os embries adicionais ainda meio
gelatinosos, como na laranja lima, pomelo Mac Carty e lima da Prsia.
Neste caso, eles no germinam.
Como tnhamos interesse em que se desenvolvesse o maior nmero
possvel de embries, tentamos o cultivo em tubos de ensaio em meio asspticocom soluo nutritiva (soluo de Sachs) e pH corrigido para 5. Conseguiu,
se obter germinao de embries at de 2 mm (os embries foram previamente desinfestados em soluo de Uspulum a 1,25 %o, durante 5 minutos).

1947

BRAGANTIA

89

Os tubos de ensaio foram mantidos em plena luz e ao fim de 5 dias j se

notava que os embries grandes e mdios (de 13 a 15 mm) estavam emitindo
razes ; os embries pequenos de 5 a 2 mm demoraram mais ou menos 20
dias para emitir a radcula. Para se formar o primeiro par de folhas, foram
necessrios de 20 a 25 dias para os embries grandes e mdios, e 1 ms para
os embries pequenos. Estes experimentos foram realizados nos meses
de maro e abril de 1943, com temperaturas variando de 20 a 30C.
No conseguimos obter germinao dos embries muito pequenos,
menores de 2 mm. Talvez, usando outros meios de cultura com sacarose,
hormnios ou vitaminas, se consiga que eles tambm germinem, semelhana do que acontece com outras plantas.
4. Julgamento do grau de poliembrionia pelo aspecto da semente
Desde que inicimos a determinao da poliembrionia na semente,
chamou-nos a ateno, nas formas altamente poliembrinicas, a grande
variao de conformao que as sementes apresentavam, dentro de uma
mesma amostra. Assim, encontramos sementes com muitas anfratuosiclades, sementes lisas ou quase lisas, passando ainda por tipos intermedirios. Pareceu-nos que essas variaes estavam relacionadas com o nmero
de embries encerrados nas sementes.
Afim de verificar se uma separao (pelo aspecto das sementes) em
classes correspondia a diferenas no grau de poliembrionia, escolhemos
duas formas altamente poliembrinicas, calamondin e o trifoliata. Num
lote de sementes, fizemos a separao em 3 tipos : corrugado, meio liso
e liso, aos quais atribumos, respectivamente, o carter de alta, mdia e
baixa poliembrionia. Os resultados dessa contagem, bem como a determinao direta da poliembrionia, constam do quadro 9.
QUADRO 9
POLIEMBRIONIA E M

CITRUS

C o m p a r a o entre aspecto externo das s e m e n t e s e n m e r o d e embries

C A L
Tipo
de
poliembrionia

T R I F O L I A T A

A M O N D I N

Sementes
separadas

Poliembrionia

Sementes n. de
contadas embries

Sementes
separadas

Poliembrionia

n.

n. de
Sementes
contadas embries

..

118

32%

100

512

5,12

72

12%

43

148

3,47

Mdia .

243

46%

100

361

3,61

429

71%

50

124

2,28

Baixa

168

22%

100

189

1,89

102

17%

63

103

1,63

Total

529

100%

300

1.062

3,54

603

100%

156

662

2.41

Alta

n.

VOL. V I I

B R A G A N T I A

90

A seguir, fizemos um teste estatstico para ver se as mdias de cada

classe eram ou no significantemente diferentes entre si : aplicamos o
8 - teste para diferenas de mdias, porque temos uma distribuio
binomial e descontnua, definida pela frmula :

dif.

,
'

III

:,

nfi

nf

oo

li2

Os resultados dessa comparao seguem :

Calamondin

Trifoliate

CLASSES COMPARADAS

Alta com mdia

4,45

4,30

Baixa com mdia

8,56

5,07

Como vemos, os S so todos muito significantes, bem fora do limite

de 1% de probabilidade. Em virtude disso, conclumos que as classes separadas pelo aspecto exterior da semente so de fato diferentes. Por outras
palavras, que h correlao entre aspecto da semente e grau de poliembrionia. Pode-se muito bem notar isso nas estampas 4 e 5.
Poderamos estender essa anlise para outras formas de Citrus. Mas
os exemplos dados so patentes. Lembremo-nos de que essas concluses
se aplicam s formas com alta ou mdia poliembrionia, pois, naquelas com
baixa poliembrionia, essa distino no se torna mais possvel.
ANLISE D A VARIABILIDADE DA POLIEMBRIONIA
Os estudos sobre a variao do nmero de embries por semente
mostraram desde logo que todas as comparaes teriam que ser feitas,
tomando-se como base a variao ideal de acaso da "distribuio de Poisson".
Esta distribuio, j conhecida desde h muito, tem sido utilizada na estatstica. Um resumo dos seus principais testes e o modo de os aplicar foi publicado por Gurgel (9).
Por definio, devemos esperar uma variao segundo a distribuio
de Poisson, quando temos : a) uma srie descontnua, na qual os valores
das classes s podem ser nmeros inteiros e positivos ; b) a primeira classe

1947

BRAGANTIA

91

terica com o valor zero e em consequncia disto, a presso do limite zero

se manifesta, tornando-se a distribuio assimtrica ; c) a frequncia dos
acontecimentos esperados to pequena em relao ao nmero total de acontecimentos possveis, que a frequncia observada praticamente independente
do nmero total de observaes.
Evidentemente, esses requisitos so satisfeitos para a variao do
nmero de embries em Citrus. A variao sempre de embries inteiros,
dentro de um nmero teoricamente ilimitado de embries. O fato de no
existir semente sem embrio parece oferecer uma objeo, mas esta falta
aparente da classe zero se explica se considerarmos o seguinte : na poliembrionia, como alis o nome est dizendo, estamos interessados no nmero
de embries adicionais que a semente contm alm do normal e no no
nmero total de embries. Assim, nas nossas tabelas, entram as duas
seguintes indicaes : sementes com um embrio, isto , sem embrio
adicional (classe zero) ; sementes com dois embries, isto , com um embrio
adicional (classe um), etc. Igualmente podemos exprimir a mdia por
dois modos : mdia de nmero de embries por semente ou mdia de embries
adicionais, que igual mdia anterior menos um. A distino entre embrio
bsico, indispensvel, e embries adicionais, tem que ser feita, para satisfazer s exigncias da anlise estatstica, porm esta distino no deve
ser interpretada em termos biolgicos. Pode acontecer que todos os embries
sejam assexuais e, portanto, biologicamente iguais ; ou que um embrio
pelo menos, seja sexual e todos os restantes, apogmicos ; ou, ainda, que
todos os embries sejam sexuais (estampas : 3, figs, a e b ; 4 e 5).
So conhecidas observaes que servem para comprovar a assero
acima : em 6 cruzamentos feitos com tangerina Dancy, Frost (8) obteve
100% de embries apogmicos ; em cruzamentos efetuados, entre calamondin
x trifoliata, observamos (5), que apenas 2,47% das plantas provenientes
de 90 sementes, provinham de embrio sexual, caraterizado pela dominncia da folha tripartida do segundo ; em cruzamento de toranja x trifoliata, obtivemos (5) 100% de plantas com embrio sexual.
Na anlise estatstica aplicamos dois processos : a) a comparao da
distribuio inteira, fazendo um x teste das frequncias observadas por
classe, com as frequncias tericas da srie de Poisson, tendo ambas a mesma,
mdia e idntica soma de frequncias ; b) comparao pelo teste, do erro
"standard" da distribuio observada com o erro "standard" de uma srie
ideal correspondente, sendo este ltimo igual raiz quadrada da mdia.
Este segundo processo se baseia no princpio de Lexis e foi introduzido
na anlise estatstica por Brieger (4).
2

Neste ltimo teste, espervamos, de incio, que os erros "standard"

observados fossem sempre maiores do que os erros ideais correspondentes,
indicando assim uma variao excessiva ; verificando, porm, como mais
adiante explicaremos, que os erros observados eram menores do que os
erros ideais, resolvemos aplicar para o 0 teste os limites bilaterais de probabilidade, recentemente desenvolvidos por Brieger (2).

BRAGANTIA

92

VOL. VII

1. Variao entre frutos de uma mesma planta e na mesma colheita

Para verificarmos a variao fenotpica da poliembrionia nas sementes
de diferentes frutos colhidos simultaneamente e de uma mesma planta,
foram contados separadamente os embries de 10 frutos de pomelo Mac
Carty e do trifoliata, constando os resultados dos quadros .10 e 11.
Discutiremos em primeiro lugar os valores referentes ao pomelo Mac
Carty (quadro 10). O teste "entre-dentro" para a mdia dos 10 frutos
altamente significativo, com 6 igual a 3,43, o qual est fora do limite de
1 % o de probabilidade. Os desvios relativos dos frutos em relao mdia
geral do 4 valores fora do limite de 1 % o de probabilidade, sendo 3 valores
negativos e 1 positivo (14. coluna do quadro 10). As mdias dos embries
adicionais por fruto (12. coluna) formam uma srie contnua, indo desde
0,52 at 2,22 embries por semente. A variao por fruto homognea,
como mostra o 6 teste da ltima coluna do quadro ; comparando os erros
"standard", observados e ideais, e aplicando os limites bilaterais de probabilidade de 0, achamos dentro desses valores apenas um valor um pouco
fora do limite de 5% de probabilidade (valor achado de 0 igual a 0,78 e
valor calculado por interpolao da tbua de Brieger (2) de 0,77 com nfl
igual a 37 e nf2 igual ao infinito). Ainda mais, o 0 entre o "erro dentro"
(1,12) e o erro ideal (1,16), d tambm um valor no significativo, comprovando desta forma que toda a variao do acaso.
a

A anlise para o trifoliata (quadro 11) d o mesmo resultado que pomelo

Mac Carty, com referncia comparao das mdias ; a variao entre
as mdias, dada pelo 0 entre os erros "entre" e "dentro", 2,33 maior do
que o erro residual. Os valores das mdias formam tambm uma srie contnua, indo de 1,17 at 2,49 embries adicionais por fruto. Os erros individuais por fruto, porm, so com uma exceo nica, menores do que o erro
ideal, aparecendo 3 valores menores do que o limite de 1 % o de probabilidade, 2 valores menores do que o limite de 1% e 2 valores entre os limites
de 1% e 5% de probabilidade. O erro dentro (1,07) tambm estatisticamente menor do que o erro ideal correspondente, dando um valor de 0
igual a 0,84 que est fora do limite de 1 % o de probabilidade. Assim, fica
claro que no trifoliata h uma variao sistematicamente diminuda.
2. Variao entre sementes de uma mesma planta e na
colheita

mesma

Para este estudo foi determinada a poliembrionia em um nmero bastante grande de sementes obtidas de frutos misturados, colhidos na mesma
poca, de uma nica planta (pomelo Mac Carty, laranja lisa paulista e
limo francs) ou de diversas plantas (calamondin, trifoliata e laranja lima).
Pelo exposto nos captulos anteriores, vemos que para as trs primeiras
formas de Citrus foi eliminada a variao que podia ser causada pela diferena da poca de colheita e aquela entre diferentes rvores. A variao
realmente observada pode ser atribuda : a) variao entre diferentes frutos ;

BRAGANTIA

1947

95

b) variao inevitvel ou residual da poliembrionia. Separando estas duas

ltimas fontes de variao verificamos, no caso do pomelo Mac Carty e
do trifoliata (quadros 10 e 11), uma diferena de variao muito grande :
no pomelo Mac Carty as variaes "entre" e "dentro" frutos so do acaso ;
no trifoliata somente a variao "entre" frutos do acaso, havendo uma
significante e sistematicamente diminuda variao "dentro" frutos. "Confundindo" estas duas fontes de variao obtivemos resultados bem diferentes. O erro total para o pomelo Mac Carty um pouco maior do que
o erro ideal da srie de Poisson, sendo o 8 justamente fora do limite de 5%
de probabilidade ; em trifoliata, ao contrrio, prevalece a reduo da variabilidade, sendo o erro total significantemente menor do que o erro ideal.
Para estudarmos a variao da poliembrionia entre as sementes de
pomelo Mac Carty, laranja lisa paulista e limo cravo ou francs, fizemos
um x teste entre as frequncias observadas do nmero de embries em
cada classe, isto , zero, um, dois, e t c , embries adicionais, e as frequncias
esperadas pela distribuio de Poisson (9). Sabemos que para o x teste
ser eficiente, a frequncia esperada para as classes extremas tem que ser
igual ou maior do que cinco ; como em geral o nmero de sementes por
fruto no grande, temos que juntar as sementes de diversos frutos, mesmo
sabendo que com isso introduzimos mais uma fonte de variao, isto , a
variao entre diferentes frutos.
2

Verificamos que para o pomelo Mac Carty, laranja lisa paulista e

limo cravo, cujos frutos so de uma s planta, os x totais entre as frequncias observadas e esperadas das classes com diferentes graus de poliembrionia so todos no significativos, isto , abaixo do limite de 5% de probabilidade. Portanto, nestes trs Citrus, a variao da poliembrionia segue
a distribuio de Poisson.
2

Examinando com mais detalhe os x individuais de cada distribuio,

notamos que apenas para o pomelo Mac Carty o x da ltima classe significativo (7,09), aparecendo um nmero mais elevado de sementes com alta
poliembrionia (classes com 5 ou mais embries adicionais), do que o esperado pela srie de Poisson. Esta anormalidade devida principalmente
s sementes de um nico fruto (nmero 10), como se pode notar nos dados
do quadro 10.
Passando ao estudo da poliembrionia em calamondin, trifoliata e laranja
lima, devemos lembrar que temos aqui "confundidas" trs fontes de variao : a) entre plantas diferentes, b) entre frutos, c) residual. Assim, de
se esperar uma variao excessiva.
Como j nos referimos anteriormente, em calamondin e trifoliata foi
possvel distinguir, pelo aspecto externo da semente, trs tipos de poliembrionia, isto , alta, mdia e baixa. De acordo com essa separao, fizemos
para cada tipo e tambm para o conjunto (alta + mdia -f- baixa) um x
teste entre as frequncias observadas e aquelas esperadas, segundo a distribuio de Poisson.
2

Calamondin. O x teste total para o tipo de semente com alta poliembrionia no foi significativo. Esteve abaixo do limite de 5% de probabilidade.

B R A G A N T I A

96

VOL. V I I

Para os tipos de semente com mdia e baixa poliembrionia, bem como para
o conjunto dos trs tipos, o x teste foi altamente significativo, fora do
limite de 1% de probabilidade. Em outras palavras : no calamondin, excetuando o tipo de sementes com alta poliembrionia, nos demais (mdia e
baixa) ou em conjunto, a frequncia observada nas classse de 0, 1, 2, etc,
embries adicionais no segue a distribuio de Poisson.
Analisando os x individuais para cada tipo de poliembrionia e tambm
para a classe de zero embries adicionais por semente, houve, para o conjunto, um grande excesso de embries sobre o nmero esperado, excesso
esse bem fora do limite de 1 % o de probabilidade ; na classe de 3 embries
adicionais por semente houve nos tipos de mdia poliembrionia e no conjunto, forte deficincia de embries, fora do limite de 1 % o de probabilidade. No tipo de semente com baixa poliembrionia, houve, para a classe
de 3 ou mais embries adicionais, um excesso de frequncia, o mesmo acontecendo no conjunto na classe com 7 ou mais embries adicionais. interessante notar que no somente no calamondin, como tambm na laranja
lima e outros Citrus estudados, verificamos notvel deficincia na classe
de sementes com 3 embries adicionais (ou 4 embries ao todo), para a
qual, at o momento, no encontramos uma explicao satisfatria.
2

Trifoliata. O x total no foi significativo, ficando abaixo do limite

do 5% de probabilidade, para os tipos de sementes com alta e baixa
poliembrionia e tambm para o conjunto de poliembrionia das sementes ;
para o tipo de sementes com poliembrionia mdia, o x fi altamente
significativo, fora do limite de 1 % o de probabilidade.
Analisando os x individuais para as sementes com tipo de poliembrionia mdia, notamos que houve uma deficincia de embries na classe
de zero embries adicionais e um excesso de embries na classe de 2 embries
adicionais, fatos demonstrados pelos valores fora do limite de 1% no primeiro caso, e bem prximo a este limite, no segundo caso.
2

Disto conclumos : excetuando as sementes com poliembrionia do

tipo mdio, as demais, cem alta e baixa poliembrionia, e tambm no conjunto dos trs tipos a distribuio das frequncias nas classes 0, 1, 2, etc.
embries adicionais, seguem a distribuio de Poisson.
2

Laranja lima. Aqui tambm o x total foi significativo, fora do limite

de 1% de probabilidade. Conclui-se : na laranja lima a poliembrionia
no segue a distribuio de Poisson. Os x individuais mostram um excesso
de frequncia na classe com 2 embries adicionais e uma falta de frequncia
na classe com 3 embries adicionais, o que mostrado pelo x quase significativo no primeiro caso e significativo no segundo, fora do limite de 1%
de probabilidade.
2

3. Variao entre plantas da mesma variedade

No quadro 3 registamos os dados referentes ao pomelo Mac Carty,
separadamente dos de trs outras plantas desta mesma espcie. H razo
especial para justificar este fato. Como j foi mencionado em outro trabalho

97

BRAGANTIA

1947

(5), as plantas 3 e 8 do pomelo ? revelaram-se decididamente quase monoembrinicas, ao passo que a de nmero 7 produziu sementes com elevadssima
percentagem de poliembrionia. Tal anormalidade pode ser explicada
luz dos seguintes esclarecimentos : as 3 plantas registadas no quadro 3
como "pomelo ? " so "ps francos" provenientes, por sua vez, de um pomeleiro de "p franco" (13, pg. 529). Por outro lado, no houve qualquer
controle de polinizao para obteno das sementes que deram origem
s referidas 3 plantas. Assim sendo, possvel, e at provvel, tratar-se
de plantas hbridas que apresentam caracteres bastante diversos.
Estudando as variaes entre plantas nos experimentos de cavalos
instalados na Estao Experimental de Limeira, Brieger e Moreira (5)
constataram a "extrema heterogeneidade do P o m e l o e l i m o Ponderosa,
nos quais encontramos, desde copas cilndricas com altura duas vezes maior
que o dimetro, at copas redondas, nas quais a altura aproximadamente
igual ao dimetro da copa". Ora, as plantas 3, 7 e 8 de "pomelo ?" (estampa
6) esto entre as 8 plantas estudadas por esses autores.
Q U A D R O 12
POLIEMBRIONIA E M
Variao da poliembrionia

CITRUS

entre anos n a m e s m a

rvore

(Fecundao livre)

Embries

N . da
CITRUS

Ano

DIVERSOS
rvore

Poliembrionia
Cr?
/0

1943

2,2

66,1

1944

2,2

67,6

1943

1,0

1,1

1944

1,0

0,0

Limo cravo

2
2
3
3
4
4

1944
1945
1944
1945
1944
1945

1,2
2,1
1,2
1,8
1,5
2,1

10,3
75,8
17,5
62,4
38,2
82,0

Lima da Prsia

2
2
3
3
4
4

1944
1945
1944
1945
1944
1945

2.0
1,6
1.7
1,5
1.6
1,6

63,8
48,7
57,1
39.1
44,9
37,0

Laranja lisa paulista

Toranja vermelha

RESUMO E CONCLUSES
3. O presente trabalho faz parte do plano de colaborao de estudo
dos Citrus entre as seces de Citricultura, Gentica, Citologia e Estao
Experimental de Limeira do Instituto Agronmico, e a seco de Citologia
e Gentica da Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz". Trata
de estudo detalhado da poliembrionia.
2. Em Citrus h trs tipos poliembrionares : a) aqule proveniente
do crescimento das clulas do nucelo, originando embries apogmicos (15,
figs. 15 a 18) ; b) aqule que deriva de mais de um saco embrionrio (1),
obtendo-se assim 2 embries hbridos, que podem ser ou no diferentes ;
c) o que vem da diviso, por clivagem, do embrio sexual (6), produzindo
indivduos iguais.

3. A poliembrionia foi determinada por dois processos : a) contagem

de embries germinados e b) contagem direta de embries na semente.
Os resultados, em ambos os processos, foram expressos de dois modos diferentes : mdia do nmero total de embries por semente e percentagem
dos embries excedentes, ou, como chamamos, percentagem de poliembrionia. Nos dois processos de contagem dos embries, foram feitas determinaes em sementes de 9 espcies de Citrus, Poncirus trifoliata e 4 hbridos,
num total de 110 plantas (quadros 1 a 3).
Comparaes entre os resultados obtidos nos dois processos constam
do quadro 4, pelas quais se verifica que a nica espcie monoembrinica
foi a papeda (C. hystrix). Na contagem de embries germinados, encontramos com baixa poliembrionia (0 a 15%) as toranjas (C. grandis), as
laranjas azda (C. aurantium), a lima da Prsia (C. aurantifolia), o limo
cravo ou Rangpur (C. reticulata?) e os limes (C. limon) doce, ponderosa,
rugoso e sweet lemon ; de mdia poliembrionia (15 a 30%), o tangor maracuj (C. sinensis x C. reticulata) e laranjas doces (C. sinensis) ; de alta
poliembrionia ( + 3 0 % ) , pomelos (C. paradisi) e Calamondin (C. reticulata
x Fortunella). No processo direto de contagem encontramos baixa poliembrionia (0 a 30%), nas toranjas (C. grandis) ; mdia poliembrionia (30
a 60%), nas laranjas azda (C. aurantium), lima da Prsia (C. aurantifolia),
limo cravo (C. reticulata?), limes (C. limon) doce, ponderosa, rugoso e
sweet lemon ; alta poliembrionia ( + 60%), no tangor maracuj (C. sinensis
x C. reticulata), laranjas doces (C. sinensis), pomelos (C. paradisi), Calamondin (C. reticulata x Fortunella), Trifoliata (Poncirus trijoliata), e em
uma forma de pomelo ( C paradisi?). Nas laranjas doces e no trifoliata
encontramos sementes com 10 at 15 embries e no calamondin e pomelo (?)
at com 20 embries (estampa 3, figs, a e b). Tendo-se tambm determinado a poliembrionia de algumas plantas pelos dois processos, pde-se fazer
uma comparao individual (quadro 5).
4. Os embries podem ter nas sementes posies vrias alm da normal ;
podem les estar localizados no meio da semente e at em situao oposta
ao micrpilo ; os embries grandes e mdios (de 14 a 5 mm), germinam
fcilmente em terra preparada, e os pequenos (de 5 a 2 mm), s germinam
em agar com soluo nutritiva ; embries muito pequenos, menores de
2 mm, no germinam, nem nesse meio de cultura. Nas formas altamente
poliembrinicas, as sementes podem ser separadas pelas suas anfratuosi
dades, em 3 graus de poliembrionia: alta, mdia e baixa (estampas 4 e 5).
5. A anlise da variabilidade de poliembrionia, revelou : a) Entre
frutos de uma mesma planta e da mesma colheita (quadros 10 e 11) ; foram
usados o pomelo Mac Carty e o Trifoliata ; a anlise estatstica revelou
que no pomelo Mac Carty a variao da poliembrionia em diferentes frutos
foi de acaso, segundo a distribuio de Poisson ; no trifoliata, a variao
observada foi sistematicamente menor que a esperada segundo a distribuio de Poisson, o que alis, biologicamente, difcil de se explicar,
b) Entre sementes de uma mesma planta ; foi observado que em
algumas formas de Citrus, a frequncia observada de sementes com 1, 2, 3,
etc. embries, seguiu a distribuio de Poisson (pomelo Mac Carty, laranja

lisa paulista e limo cravo) e em outras formas no (laranja lima) ; nas

demais formas analisadas (Calamondin e Trifoliata) foram separados 3 graus
de poliembrionia : baixa, mdia e alta, havendo resultados diferentes para
cada grau. c) Entre plantas da mesma variedade; conforme mostra o quadro
3, no pomelo ( ?) houve uma planta (nmero 7) que se distinguiu, por ter
uma elevadssima percentagem de poliembrionia, das suas irms que eram
quase monoembrinicas ; sendo essas plantas oriundas de sementes de
polinizao livre, bem possvel que se trate de um hbrido (C. grandis x
C. sinensis), d) Entre colheitas de uma mesma planta em diferentes anos
(quadro 12) constatou-se que a poliembrionia variou bastante de um
ano para outro na mesma planta. Em algumas plantas ela aumentou e
em outras diminuiu, nos mesmos anos.
6. O grau de poliembrionia em uma variedade ou forma de Citrus
pode variar de semente para semente, de fruto para fruto, de rvore para
rvore e at de ano para ano, na mesma planta. A determinao do nmero
de embries adicionais em sementes de um ou alguns frutos de uma variedade ctrica no oferece base segura para se avaliar o grau de poliembrionia
dessa variedade.
Para se ter uma idia exata sbre o grau de poliembrionia de uma
variedade ou forma ctrica necessrio que sejam examinadas muitas
sementes, provenientes de vrios frutos produzidos em diversas plantas
e de mais de uma colheita. A determinao deve ser feita pela contagem
direta dos embries nas sementes, porquanto na contagem em sementeira,
aps a germinao, sempre se obtm um grau de poliembrionia inferior
ao real.
AGRADECIM ENTOS
Deixamos aqui consignados os nossos agradecimentos aos Srs. : Eng.
Agr. A. J. Rodrigues Filho e Prof. Felipe W. Cabral de Vasconcelos, pelo
fornecimento de material dos pomares da Estao Experimental de Limeira
e da Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz", em Piracicaba ;
Eng. Agr. C. A. Krug e Prof. F. G. Brieger, pelas sugestes e ajuda dispensadas no decorrer do trabalho.
S U M M A R Y
T h e studies on p o l y e m b r y o n y in Citrus reported in this paper s h o w that there is
a great variability in the degree of p o l y e m b r y o n y a m o n g the seeds, fruits and trees of
a same form or variety o f Citrus. Seeds from different crops o f the same plant also s h o w
considerable variation in the degree of p o l y e m b r y o n y .
In order t o obtain reliable data on the degree of p o l y e m b r y o n y in Citrus the samples
for study should include a great n u m b e r of seeds taken from several fruits of different
trees. Since there is a yearly variation on the degree of p o l y e m b r y o n y it w a s found
necessary t o study samples from several crops.
T h e average number of e m b r y o s w a s determined b y direct examination of individual seeds. Determinations based o n the number of plants developed from e v e r y seed
a l w a y s give l o w e r results as m a n y e m b r y o s d o n o t g r o w into seedlings.

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1947

a) Trs sementes de baixa poliembrionia, em laranja azeda, representadas em

trs etapas : ao serem retirados o integumento e a pelcula; posio relativa dos embries
e embries abertos, mostrando os cotildones. Pode-se notar a posio e o tamanho
dos embries, e tambm dos seus cotildones.

b) Trs sementes de alta poliembrionia, em

mesmas etapas como indicado em a.

Calamondin, representadas nas

Sementes poliembrinicas de Calamondin, onde foi possvel, pelo aspecto externo

da semente, separar trs classes de poliemhriona : baixa, mdia e alta.

1947

BRAGANTIA

As mesmas sementes da Est. 4, das quais foram retirados o integumento

deixando ver os embries.

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B R A G A N T I A

VOL. V I I

Est. 6

Mostrando as diferenas das folhas em ramos das trs plantas de Pomelo (?).
A rvore 7 altamente poliembriniea (99,4%) ; as rvores 3 e 8 so quase monoembrinicas (0,6% e 1,5%).