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083559926
1990-B
UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA
l
(L E S)
TESIS
QUE
PARA
PROFESIONAL
OBTENER
LICENCIADO
EN
EL
TITULO
DE
BIOLOGIA
PRESENTA
1992
AGRAOE C I MI E NT OS
QFB
M EN C ERENDIRA
POR SU_AMISTAD Y SUS
ACERTADOS CONSEJOS.
OFB
RODOLFO
OE O1 C A T OR I A
( L E S ), QUE COOPERARON
"LA VIDA".
REPORTE DE ANOMALIAS
CUCBA
A LA TESIS:
LCUCBA00322
Autor:
Tipo de Anomala:
C AP I T U L O
INTRODUCCION
~r6nica.
El origen del lupus eritematoso sistmico (LES), no est definido; pero se sabe que estn involucrados factores g~
nticos. inmunolgicos, virales y ambientales (9).
Entre los trastornos inmunolgicos que presenta el pa-ciente, adems de la formacin de autoantjcuerpos, est la disminucin de.los linfocitos T y aumento de los B; que son
las celulas productoras de anticuerpos.
Aunque cuantitativ~
mente no se ha informado de la e1evacin de los cniveles de inmunoglobulinas en forma especfica de acuerdo al tipo de anticuerpos que presentan estos pacientes (2).
Durante el desarrollo de la enfermedad destaca la pre-sencia de una gran variedad de anticuerpos en el suero; que
precipitan en fro (crioglobulinas) y que son agregados de IgG, IgM
de
co~plemento
(factores de activacin)
(26).
su~
Adems de la determi-
Kunkel, uno de los pioneros en el estudio de las alteraciones inmunolgicas en el LES, describe a los autoanticuer-pos que se encuentran en la enfermedad y los divide de manera
general en dos grupos:
A.
B.
ant
supr~
rrenales (18).
AN ), espe--
utiliz~ndo
--
como substrato antignico hgado de rata ) ; esto provoca desconcierto. en el diagnstico Y pronstico del padecimiento.
(21).
El por qui de los resultados falsos negativos no estaclarado, aunque algunos Investigadores citan que estas rea~
ciones podran haberse producido por la ausencia de algn
factor srico o deberse al exceso de alguno de ellos (14).
isoti~
C A P I T U L. O
I I
ANTECEDENTES
respe~
Desde 1954, se localizaron en el suero de estos pacientes con LES, varios anticuerpos poco frecuentes.
q~e
actaan
Mtodo
sos~echa
Desde hace 20 aos, el uso de inmunofluorescencia indirecta para la deteccin de los anticuerpos antinucleares - ( AAN ), en el suero de los pacientes con enfermedades
reum~
Inicialmente se utilizaron --
cortes de tejidos de mamferos como substrato antignico y esto se sigue haciendo en la mayora de los lugares. utili-zando fundamentalmente cortes de hgado y riHn de rata. PO!
ter.iornente se ha introducido el uso de diversas 1 ineas ce l.!!_
lares como substrato antignico, entre los cuales. las ms usadas son los fibroblastos de ratn y las clulas HEp-2.
Con el uso de estos ltimos substratos existe la ventaja de que se suprime la fluorescencia inespecifica, que con
frecuencia se observa al utilizar tejidos de mamferos, ya que con las lneas celulares se tienen clulas individuales
desprovistas de tejido conjuntivo intracelular (28).
El lupus eritematoso sistmico es una enfermedad reumtica autoinmune en la cual se ha encontrado anti:cuerpos diri
gidos contra diversos componentes del ncleo, nucleolo y citoplasma celular.
co~
anti-Sm { anticuerpo
di~igido
a riboprote--
Los ttulos de anticuerpos anti-ADN se han correlacionado estrechamente con la actividad de la enfermedad; anticuerpos que disminuyen al iniciar el tratamiento con inmunQ
supresores y que hay una elevacin de los mismos al exacerbarse los sntomas (3).
pr~
~etarda
los anticuerpos antinucleares suelen ser negativos; por esta razn no puede predecirse cules pacientes con TP desa-rrcillar<in LES, posteriormente (27).
CAP 1 T UL O
1 I I
HIPOTESIS
CAP I T UL O
I V
11
OBJETIVO
utiliza~
ya
CAP I TUL O
13
En algunos pacientes con lupus eritematoso sistmico, no se detectan anticuerpos antinucleares, por lo que se les
denomina "seronegativos".
pa~
--------------------------~------~-~-
CAPITULO
VI
15
MATERIAL Y METODOS
Ce~
clnicamente sanos.
Obtencin de muestras
~eterminar
De inmediato se
hasta el momento de
As mismo se
Tissu-
16
Inmunodifusin radial
microlitros en cada pocillo de las cajas de inmunodifusin ( Norpartigen J. se dejaron reposar a temperatura ambientepor 24- 48 horas.
~e
la casa fabricante.
gr~
Inmunofluorescencia indirecta
~cetona
por lO minutos,
se incubaron -
30 minutos a temperatura ambiente en cmara hmeda, se lavaron dos veces con PBS por 5 minutos en los recipientes de
Koplin con agitacin suave, se elimin el PBS y los cortes
de higado de rata y clulas HEo-2 se cubrieron con 10 microlitros de anti-C3 y de anti-lgG humana en cabra conjugada
con FITC ( isotiocianato de fluorescena ), se incubaron __
17
cort~s
se cubrieron con
un~
18
FLUJOGRAMA
SANGRE VENOSA
PERIFERICA ( 5 m1.)
SUERO
1 :5 )
CELULAS HEp-2
CARCINOMA LARINGEO )
CORTES DE HIGADO DE
RATA Balb/C
INCUBACION EN CAMARA
HUMEDA 30 MIN. TEMP. AMBIENTE l TA )
l
DOS LAVADOS CON PBS
OBSERVACION AL MICROSCOPIO DE
FLUORESCENCIA
CA~ I T ULO
V1 I
----------------------------------
---
20
RESUL TAO OS
,..
'
con
~ES
Los result-.
dos con higado de rata muestran una similitud en su comporta-miento con antt-IgG y C3.
dad fueron ms bajos 30% y 46.7% respectivamente. los cuales no son significativos.
21
di~tribuida
fino ( el ncleo de las clulas muestran una apariencia finamente granular ) segn se muestran en las fotografas No. 1 y
2.
= 1.35
y -
CAPITULO
V I I l
22
TABLA No.
Porcentajes obtenidos de casos positivos y negativos, utilizando los dos substratos; clulas HEp-2 y cortes de hg9.,
do. de rata y los dos
~ntisueros
anti-lgG y anti-C3.
Clulas HEp-2
Hgado de rata
C3
C3
IgG
14/46.7%
9/30%
16/53.5%
21/70%
l gG
+ 31/77.5%
19/47.5%
9/22.5%
21/52.5%
Total
40
Nota
40
30
30
-------------------------------------------------------------------------------
23
TABLA No. 2
Significancia y diferencias de positividad.
En este cuadro observamos que con el substrato de clulas
HEp-2 y con los dos antisueros anti-IgG y anti-C3 obtuvimos 50
pruebas positivas con una significancia de P 0.01.
Total
HEp -2
HEp-2
C3
IgG
31
19
50 Pruebas positivas
21
30 Pruebas negativas
40
80 Pruebas totales
40
x2 ( 1 J = 7.68
o .o 1
Total
Hig. Rata
C3
lgG
14
23 Pruebas positivas
16
21
37 Pruebas negativas
30
2
30
60 Pruebas totales
x l11'= 1. 76
NS.
,-----------------------------------------------------------------------
----
24
TABLA No. 3
Hg. Rata
C3
C3
31
14
45 Pruebas positivas
16
25 Pruebas negativas
30
70 Pruebas totales
Total
40
x2 (1)- 7.10
o.01'
En este cuadro se observa el anti-Ig& en los dos substratos ( clulas HEp-2 y cortes de hgado de rata ), obteniendo 28 pruebas positivas. No siendo significativo .
HEp -2
. Hig. Rata
IgG
lgG
19
28 Pruebas positivas
21
21
42 Pruebas negativas
40
x2 ( 1)
30
70 Pruebas totales
Total
2.19
NS
25
TABLA No. 4
Comp~raciones entre los dos substratos y los dos antisueros para observar la sensibilidad del mtodo.
HEp -2
IgG
+
HEp -2
C3
h~~.,-_;;:,....,_-~
Simbolo.gia
37.5%,sensibilidad para
anti-C3, P:? 0.01
c===J
26
TABLA No. 5
(2)
Hig. Rata
C3
+
HEp-2
40%~
sensibilidad HEP-2
p;- 0.01
C3
Hg. Rata
(3)
IgG
+
HEp~2
NS
IgG
(4}
Hg. Rata
IgG
+
Hg.
rata
C3
__
30~6
NS
para
27
No. 1
Patrn Homogneo
28
TABLA No. 6
C3 g/L
3.0
2.0
1.0
Pacientes
~ =
40
Controles
N = 10
x = 1. 35
x = 1.5 7
S = 0.47
= O. 49
C A P I T UL O I X
30
DISCUSION
seronegativ~.
en ese estudio se agregaba C3 fresco para amplificar y elevar la positividad de las reacciones. (13).
La causa por la cual estos anticuerpos antinucleares ocultos no son detectables por los mtodos convencionales,
se est analizando.
31
CAP I T UL O
33
CONCLUSIONES
l.
2.
3.
Los AAN revelados con anti-C3 pueden ser una ayuda para
el mdico en la orientacin del diagnstico y tratamien.
to del paciente.
4.
'
C AP I T UL O
XI
35
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Anticuerpos
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E. ,
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Ector
trombocit~
Seccin .................. .
UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA
Expediente
................. .
sido aprobado
OCULTOS EN
(LES) "
el
tema de
Tesis
Al
mismo
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que
con esta
fecha ha
"ANTICUERPOS ANTINUCLEARES
LUPUS ERYTEMATOSOS SISTEMICO
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Boulevard General :uar.,.,lino Garcia Barraglin y Corregidora, SR., Tels. 19-8054 Y 19-a2-92, Fax (361 50-3~. Guadalajara. Jal.
Biol6~icas
Universidad de
de la
Guadalajar~a
P R E S E N T E
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~laestra
Beas por
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titulado:
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Pet'ntito
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