Applications of Biotechnology in Horticulture

Sukhada Mohandas

Introduction

The requirement of fruits and vegetables is increasing proportionally with the

increasing population in the country. How do we keep horticultural production
on par with the burgeoning population? Although conventional plant breeding
techniques have made considerable progress in the development of improved
varieties, they have not been able to keep pace with the increasing demand for
vegetables and fruits in the developing countries. Therefore an immediate need
is felt to integrate biotechnology to speed up the crop improvement
programmes. Biotechnological tools have revolutionized the entire crop
improvement programmes by providing new strains of plants, supply of planting
material, more efficient and selective pesticides and improved fertilizers. Many
genetically modified fruits and vegetables are already in the market in developed
countries. Modern biotechnology encompasses broad areas of biology from
utilization of living organisms or substances from those organisms to make or to
modify a product, to improve plant or animal or to develop micro-organisms for
specific use. It is a new aspect of biological and agricultural science which
provides new tools and strategies in the struggle against worlds food production
problem. The major areas of biotechnology which can be adopted for
improvement of horticultural crops are

Tissue Culture
Genetic Engineering
Molecular diagnostics and
Molecular markers
Development of Beneficial microbes

I. Tissue Culture:

One of the widest applications of biotechnology has been in the area of tissue
culture and micro propagation in particular. It is one of the most widely used
techniques for rapid asexual in vitro propagation. This technique is economical in
time and space affords greater output and provides disease free and elite
propagules. It also facilitates safer and quarantined movements of germplasm

across nations. When the traditional methods are unable to meet the demand
for propagation material this technique can produce millions of uniformly
flowering and yielding plants. Micropropagation of almost all the fruit crops and
vegetables is possible now. Production of virus free planting material using
meristem culture has been made possible in many horticultural crops. Embryo
rescue is another area where plant breeders are able to rescue their crosses
which would otherwise abort. Culture of excised embryos of suitable stages of
development can circumvent problems encountered in post zygotic
incompatibility. This technique is highly significant in intractable and long
duration horticultural species. Many of the dry land legume species have been
successfully regenerated from cotyledons, hypocotyls, leaf, ovary, protoplast,
petiole root, anthers, etc., Haploid generation through anther/pollen culture is
recognized as another important area in crop improvement. It is useful in being
rapid and economically feasible. Complete homozygosity of the offspring helps
in phenotype selection for quantitative characters and particularly for
qualitatively inherited characters making breeding much easier successful
isolation, culture and fusion of plant protoplasts has been very useful in
transferring cytoplasmic male sterility for obtaining hybrid vigour through
mitochondrial recombination and for genetic transformation in plants.

In vitro germplasm conservation is of great significance in providing solutions

and alternative approaches to overcoming constrains in management of genetic
resources. In crops which are propagated vegetatively and which produce
recalcitrant seeds and perennial crops which are highly heterozygous seed
storage is not suitable. In such crops especially, in vitro storage is of great
practical importance. These techniques have successfully been demonstrated in
a number of horticultural crops and there are now various germplasm collection
centers. In vitro germplasm also assures the exchange of pest and disease free
material and helps in better quarantine.

Plant breeders are continually searching for new genetic variability that is
potentially useful in cultivar improvement. A portion of plants regenerated by
tissue culture often exhibits phenotypic variation atypical of the original
phenotype. Such variation, termed somaclonal variation may be heritable i.e.
genetically stable and passed on to the next generation. Alternatively, the
variation may be epigenetic and disappear following sexual reproduction. These
heritable variation are potentially useful to plant breeders.

II. Genetic Engineering of Plants

Genetic Engineering involves three major steps:

i)

Identification and isolation of suitable genes for transfer

ii) Delivery system to insert desired gene into recipient cells.

iii) Expression of new genetic information in recipient cells.

Using techniques of genetic engineering many useful genes have been

introduced into plants and many transgenic plants have been developed in which
the foreign DNA has been stably integrated and resulted in the synthesis of
appropriate gene product. Transgenic plants have covered about 52.6 m hectares
in the Industrial and developing countries upto 2001. Genes for the following
traits have been introduced to the crop plants.

Herbicide tolerance: Transgenic plants are developed that are resistant to

herbicides allowing farmers to spray crops so as to kill only weeds but not their
crops. Many herbicide tolerant plants have been developed in tomato, tobacco,
potato, soybean, cotton, corn oilseed rape, petunia, etc. Glyphosate is one of
the most potent broad spectrum environment friendly herbicide known, it is
marketed under the trade name Round up. Glyphosate kills plants by blocking
the action of an enzyme (5-enolpyruvyl shikimate-3-phosphate synthase)
(EPSPS) an essential enzyme in the biosynthesis of aromatic amino acids,
tyrosine, phenylalanine and tryptophan. Amino acids are building blocks of
protein. Transgenic plants resistant to Glyphosate have been developed by
transferring gene of EPSPS that over prodoce this enzyme thus inhibiting the
effect of Glyphosate. A number of detoxifying enzymes have been identified in
plants as well as in microbes. Some of these include glutahthione-s-transferase
or GST in maize and other plants which detoxifies the herbicide bromoxynil and
phosphinothricin acetyl transferase (PAT) which detoxifies the herbiside PPT (Lphosphinothricine). Transgenic plants using bxn gene from Klebsiella and bar
gene from Strepotomyces have been obtained in potato, oilseed, sugarbeet,
soybean, cotton and corn and are found to be herbicide resistance. These
transgenic plants reduce the use of weeding labour, farmers cost and increase
yield.

Engineering pathogen resistance: Viruses are the major pests of crop plants
which cause considerable yield losses. Many strategies have been applied to
control virus infection using coat protein and satellite RNA. Viruses are
submicroscopic pockets of nucleic acid (DNA or RNA) enclosed in a protein coat
and can multiply within a host cell. Use of viral coat protein as a transgene for
producing virus resistant plants is one of the most spectacular successes
achieved in plant biotechnology. Coat protein gene from tobacco mosaic virus
(TMV) classified as a positive strand RNA virus has been transferred to tobacco,
making it nearly resistant against TMV. Using gene for nucelocapsid protein
resistance has been introduced in crops like tomato, tobacco, lettuce, groundnut,

pepper and in ornaments like Impatiens, Ageratum and Crysnathemum against

tomato spotted wilt virus. Use of satellite RNA (SATRNA) makes many transgenic
plants resistant to Cucumber Mosaic Virus (CMV). Transgenic resistant plants
have also been developed against alfalfa mosaic virus, potato virus X, Rice
tungro virus, tobacco rattle virus and Papaya ring spot virus.

During the last decade many resistance genes whose products are involved in
recognizing the invading pathogens have been identified and cloned. A number
of signaling pathways which follow the pathogen infection have been dissected.
Many of the antifungal compounds synthesized by plants which combat fungal
infections have been identified. The major strategies for developing fungal
resistance have been production of transgenic plants with antifungal molecules
like proteins and toxins, and generation of hypersensitive response through R
genes or by manipulating genes of SAR pathway. A chitinase gene from bean
plants in tobacco and Brassica napus showed enhanced resistance to Rhizoctonia
solani. In another case chitinase gene obtained from Serratia marcescens (soil
bacterium) is introduced in tobacco making it resistant to Alternaria longipes
which causes brown spot diseases. Acetyl transferase gene is introduced in
tobacco making it resistant to Pseudomonas syringea, a causal agent of wild fire
disease.

Stress resistance : A number of genes responsible for providing resistance

against stresses such as to water stress heat, cold, salt, heavy metals and
phytohormones have been identified. Studies are also being conducted on
metabolites like proteins and betains that have been implicated in stress
tolerance. Resistance against chilling was introduced into tobacco plants by
introducing gene for glycerol-1-phosphate acyl-transferase enzyme from
Arabidopsis. Many plants respond to drought stress by synthesizing a group of
sugar derivatives called polyols (Mannitol, Sorbitol and Sion) . Plants that have
more polyols are more resistant to stress. Using a bacterial gene capable of
synthesizing mannitols it is possible to raise the level of mannitol very high
making plants resistant to drought.

Fruit Quality: Tomatoes which ripen slowly are helpful in transportation process.
Transgenic tomato with reduced pectin methyl esterase activity and increased
level of soluble solids and higher pH increases processing quality. Tomatoes
exhibiting delayed ripening have been produced either by using antisense RNA
against enzymes involved in ethylene production (Eg ACC synthase) or by using
gene for deaminase which degraded l-aminocyclopropane-l-carboxylic acid (ACC)
an immediate precursor of ethylene. This increases the shelf life of tomatoes.
These tomatoes can also stay on the plant long giving more time for
accumulation of sugars and acids for improving flavour. It is produced at
commercial level in European and American countries. Tomatoes with elevated

sucrose and reduced starch could also be produced using sucrose phosphate
synthase gene. Starch content in potatoes has been increased by 20-40% by
using a bacterial ADP glucose pyrophosphorylase gene.

Pest resistance : The insecticidal beta endotoxin gene (bt gene) has been
isolated from Bacillus thuringiensis the commonly occurring soil bacteria and
transferred to number of plants like cotton, tobacco, tomato, soybean, potato,
etc. to make them resistant to attack by insects. These genes produce
insecticidal crystal proteins which affect a range of lepidopteran, coleopteran ,
dipteran insects. These crystals upon ingestion by the insect larva are
solubilised in the highly alkaline midgut into individual protoxins which vary from
133 to 136 kDa in molecular weight. Insecticidal crystal protein produced during
vegetative growth of the cells (VIP)are also found to be highly effective against
insect control. Bt resistant plants are already in the market.

Male sterility and Fertility restoration: This is helpful in hybrid seed production.
Transgenic plants with male sterility and fertility restoration genes have become
available in Brassica napus. It facilitates production of hybrid seed without
manual emasculation and controlled pollination as often done in maize. In 1990,
Mariani and others from Belgium have successfully used a gene construct having
another specific promoter from TA29 gene of tobacco and bacterial coding
sequence for a ribonuclease gene from Bacillus Sp. (barnase gene) for production
of transgenic plants in Brassica napus. Here the translated gene prevented
normal pollen development leading to male sterilily.

III. Molecular Diagnostics

Nucleic acid probes:- It is now possible to detect the plant diseases even before
onset of symptoms by using cDNA probes. Probes are nucleic acid sequences of
pathogen causing organisms labeled with certain markers. cDNA probes
corresponding to specific regions of the pathogens can be generated using
standard recombinant DNA technique.

Monoclonal antibodies (McAb): Immunochemical techniques are extremely useful

for the rapid and accurate routine detection of plant pathogens and ultimately
the diagnosis of plant disease and their relatedness, The introduction of
hybridoma technology has provided methods for the production of homologous
and biochemically defined immunological reagents of identical specificity which
are produced by a single cell line and are directed against a unique epitope of
the immunizing antigen. The great potential of McAbs in phytopathological

diagnostics is essential because of homogeneous antibody preparations with

defined activity and specificity can be produced in large quantities over long
periods. Even though hybridoma technology is a laborious and expensive
enterprise compared to standard immunization procedures it is going to be
widely used for large scale diagnosis.

IV. Molecular Markers

The possibilities of using gene tags of molecular makers for selecting agronomic
traits has made the job of breeder easier. It has been possible to score the
plants for different traits or disease resistance at the seedling stage itself. The
use of RFLP (Restriction Fragment Length polymorphism), RAPD (Random
Amplified Polymorphic DNA) , AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism)
and isozyme markers in plant breeding are numerous. RFLPs are advantageous
over morphological and isozyme markers primarily because their number is
limited only by genome size and they are not environmentally or
developmentally influenced. Molecular maps now exist for a number of crop
plants including corn, tomato, potato, rice, lettuce, wheat, Brassica species and
barley. RFLPs have wide ranging applications including cultivar finger printing,
identification of quantitative trait loci, analysis of genome organization,
germplasm introgression and map-based cloning. AFLP is becoming the tool of
choice for fingerprinting because of its reproducibility compared to RAPD.
Microsatellile or simple sequence repeats (SSRS) markers have also become the
choice for a wide range of applications in genotyping, genome mapping and
genome analysis.
V. Development of Microbial Inoculan

Indiscriminate and injudicious use of chemical fertilizers and pesticides for the
crop production and control of insect-pests has resulted in pollution of the
environment deterioration of soil health and development of resistance by many
insects and residue problems. Hence there is a great concern world wide to use
safer biofertilisers and biopesticdies in the integrated nutrient management and
pest management systems.

Biofertilizers are micro-organisms which fix atmospheric nitrogen or solubilise

fixed phosphorus in the soil and make more nutrients available to the plant.
Some of the organisms providing major inputs are the biological nitrogen fixing
organisms like Rhizobium, Azotobacter, Azospirillum and phosphate solubilising

organisms like Bacillus polymyxa, B. magaterium, Pseudomonas striata and

certain fungal species of Aspergillus and Penicillium.
The benefits of using micro-organisms as fertilizers are many fold. They are less
expensive, nontoxic to plants, do not pollute the ground water nor render the soil
acidic and unfit for growth of plants. Rhizobium forms nodules on the roots of
leguminous plants and help in fixing nitrogen from the atmosphere to ammonium
irons which get converted to amino acids in the plant system. Inoculation with
this bacteria helps in reducing addition of nitrogenous fertilizers to the soil.
Azospirillum is also found colonizing inter cellular spaces inside the root system.
These bacteria also contribute substantially to the nitrogen requirement of the
plant.

Phosphate solubilising bacteria are another group of micro-organisms which

solubilise the insoluble phosphorus in the soil and make them readily available to
the crop.

Mycorrhiza is the symbiotic association of the roots of crop plants with nonpathogenic fungus. They provide nutrients absorbed from deeper layers of soil
to the plants. They help the plants in better plant establishment and growth
when inoculated. Many fruit crops like papaya, mango, banana, citrus,
pomegranate are found to be dependent on this association and are greatly
benefited by its inoculation in procuring higher phosphate and other nutrient
from the soil. These mycorrhizal associations help the plants in overcoming
pathogen attack also. They improve soil characters too.

Genetic modification of microbes: By using DNA recombination technique it has

been possible to genetically manipulate different strains of these bacteria
suitable to different environmental conditions and to develop strains with traits
with capacity for better competitiveness and nodulation.

Biopesticides are biological organisms which can be formulated as that of the

pesticides for the control of pests. Biopesticides are gaining importance in
agriculture, horticulture and in public heatlh programmes for the control of pests.
The advantages of using biopesticides are many. They are specific to target
pests and do not harm the non target organisms such as bees, butterflies and
are safe to humans and live stocks, they do not disturb the food-chain nor leave
behind toxic residues.

Some of the microbial pesticides used to control insect pests are Bacillus
thuringiensis species to control various insect pests. Insecticidal property of

these bacteria are due to crystals of insecticidal proteins produced during

sporulation. These proteins are stomach poisons and are highly insect specific.
Bt toxins could kill plant parasitic nematode too. Number of baculoviruses (BV)
nuclear polyhedrosis virus (NPV) is being developed as microbial pesticides both
nationally and internationally, A few examples of these are Heliothis, Spodoptera,
Plusia, Agrotis, Trichoplusia, etc.

Biocontrol agents : These are other microbes which are antagonistic to several
pathogenic fungus and are good substitutes to fungicides or insecticide. These
are Bacillus sps. Pseudomonas fluorescens, Trichoderma, Verticillium sp.,
Streptromyces sps. etc. These organisms are commercially available.

The extent of commercial application of plant biotechnology is the important

mark for measuring the vitality of this newly emerging technology. Small and
marginal farmers can adopt less expensive technologies like the use of
biofertilizers and biopesticides while capital intensive technologies can be
adopted by rich farmers
.................................................
Aplikasi Bioteknologi di Hortikultura
Sukhada Mohandas

Pengenalan

Kebutuhan buah dan sayur meningkat secara proporsional dengan meningkatnya

jumlah penduduk di negara ini. Bagaimana kita menjaga produksi hortikultura
setara dengan populasi yang berkembang? Meskipun teknik pemuliaan tanaman
konvensional telah membuat kemajuan besar dalam pengembangan varietas
unggul, mereka belum mampu mengimbangi peningkatan permintaan untuk
sayuran dan buah-buahan di negara-negara berkembang. Oleh karena itu
kebutuhan mendesak dirasakan untuk mengintegrasikan bioteknologi untuk
mempercepat program perbaikan tanaman. Alat bioteknologi telah merevolusi
seluruh program perbaikan tanaman dengan memberikan strain baru dari
tanaman, pasokan bahan tanam, efisien dan selektif pestisida dan pupuk
ditingkatkan lagi. Banyak buah-buahan dan sayuran yang dimodifikasi secara
genetik sudah di pasar di negara-negara maju. Bioteknologi modern meliputi
wilayah yang luas biologi dari pemanfaatan organisme atau zat hidup dari
organisme tersebut untuk membuat atau memodifikasi produk, untuk
meningkatkan tanaman atau hewan atau untuk mengembangkan mikroorganisme untuk penggunaan khusus. Ini adalah suatu hal yang baru dari ilmu
biologi dan pertanian yang menyediakan alat-alat dan strategi baru dalam

perjuangan melawan masalah produksi pangan dunia. Bidang utama

bioteknologi yang dapat diadopsi untuk perbaikan tanaman hortikultura yang -

Kultur Jaringan
Rekayasa Genetika
Diagnostik molekuler dan
Penanda molekuler
Pengembangan mikroba Menguntungkan

I. Kultur Jaringan:

Salah satu aplikasi terluas bioteknologi telah di bidang kultur jaringan dan
propagasi mikro pada khususnya. Ini adalah salah satu yang paling banyak
digunakan teknik untuk aseksual cepat dalam propagasi in vitro. Teknik ini
ekonomis dalam ruang dan waktu memberi output yang lebih besar dan
menyediakan bebas penyakit dan propagul elit. Hal ini juga memfasilitasi
pergerakan yang lebih aman dan dikarantina plasma nutfah di negara. Ketika
metode tradisional tidak dapat memenuhi permintaan untuk bahan perbanyakan
teknik ini dapat menghasilkan jutaan seragam berbunga dan menghasilkan
tanaman. Budidaya hampir semua tanaman buah dan sayuran mungkin
sekarang. Produksi virus bahan tanam bebas menggunakan kultur meristem
telah dimungkinkan dalam banyak tanaman hortikultura. Embrio penyelamatan
daerah lain di mana pemulia tanaman dapat menyelamatkan salib mereka yang
dinyatakan akan membatalkan. Kultur embrio dipotong dari tahap yang sesuai
dari pembangunan dapat menghindari masalah yang dihadapi dalam posting
ketidakcocokan zigotik. Teknik ini sangat signifikan dalam durasi spesies
hortikultura keras dan panjang. Banyak spesies leguminosa lahan kering telah
berhasil kembali dari kotiledon, hipokotil, daun, ovarium, protoplas, tangkai daun
akar, kepala sari, dll, generasi haploid melalui kultur antera / serbuk sari diakui
sebagai daerah penting dalam perbaikan tanaman. Hal ini berguna untuk
menjadi cepat dan ekonomis. Homozigositas lengkap keturunannya membantu
dalam seleksi fenotipe untuk karakter kuantitatif dan kualitatif terutama untuk
karakter mewarisi membuat peternakan lebih mudah sukses isolasi, kultur dan
fusi protoplas tanaman telah sangat berguna dalam mentransfer kemandulan
pria sitoplasma untuk memperoleh kekuatan hibrida melalui rekombinasi
mitokondria dan genetik transformasi pada tanaman.

Dalam konservasi plasma nutfah vitro adalah sangat penting dalam memberikan
solusi dan pendekatan alternatif untuk mengatasi kendala dalam pengelolaan

sumber daya genetik. Dalam tanaman yang diperbanyak secara vegetatif dan
yang menghasilkan biji bandel dan tanaman tahunan yang sangat penyimpanan
benih heterozigot tidak cocok. Dalam tanaman seperti khususnya, penyimpanan
in vitro sangat penting praktis yang besar. Teknik-teknik ini telah berhasil
dibuktikan dalam sejumlah tanaman hortikultura dan sekarang ada berbagai
pusat koleksi plasma nutfah. Dalam plasma nutfah vitro juga menjamin
pertukaran hama dan penyakit bahan gratis dan membantu dalam karantina
yang lebih baik.

Pemulia tanaman terus mencari variabilitas genetik baru yang berpotensi

berguna dalam perbaikan kultivar. Sebagian tanaman diregenerasi dengan kultur
jaringan sering menunjukkan fenotipik variasi atipikal fenotip asli. Variasi seperti,
disebut variasi somaklonal mungkin diwariskan yaitu genetik stabil dan
diteruskan ke generasi berikutnya. Atau, variasi mungkin epigenetik dan
menghilang berikut reproduksi seksual. Ini variasi diwariskan berpotensi berguna
untuk pemulia tanaman.

II. Rekayasa Genetika Tanaman

Rekayasa genetik melibatkan tiga langkah utama:

i) Identifikasi dan isolasi gen cocok untuk transfer
ii) sistem Pengiriman untuk memasukkan gen yang diinginkan ke dalam sel
penerima.
iii) Ekspresi informasi genetik baru dalam sel penerima.

Menggunakan teknik rekayasa genetika banyak gen yang berguna telah

diperkenalkan ke tanaman dan banyak tanaman transgenik telah dikembangkan
di mana DNA asing telah terintegrasi secara stabil dan mengakibatkan sintesis
produk gen yang sesuai. Tanaman transgenik telah membahas tentang 52,6 m
hektar di Industri dan negara-negara berkembang upto 2001. Gen untuk ciri-ciri
berikut ini telah diperkenalkan ke tanaman.

Herbisida toleransi: tanaman transgenik yang dikembangkan yang tahan

terhadap herbisida memungkinkan petani untuk menyemprot tanaman sehingga
membunuh hanya gulma tetapi tidak tanaman mereka. Banyak herbisida
tanaman toleran telah dikembangkan di tomat, tembakau, kentang, kedelai,
kapas, jagung lobak, petunia, dll glifosat adalah salah satu herbisida yang ramah
lingkungan spektrum yang luas yang dikenal paling kuat, dipasarkan dengan

nama dagang Putaran up. Glifosat membunuh tanaman dengan menghalangi

aksi enzim (5-enolpyruvyl synthase shikimate-3-fosfat) (EPSPs) enzim penting
dalam biosintesis aromatik asam amino, tirosin, fenilalanin dan triptofan. Asam
amino adalah blok bangunan protein. Tanaman transgenik tahan glifosat telah
dikembangkan dengan mentransfer gen dari EPSPs yang lebih prodoce enzim ini
sehingga menghambat efek glifosat. Sejumlah detoksifikasi enzim telah
diidentifikasi pada tanaman maupun mikroba. Beberapa di antaranya
glutahthione-s-transferase atau GST pada jagung dan tanaman lainnya yang
mendetoksifikasi bromoksinil herbisida dan fosfinotrisin asetil transferase (PAT)
yang mendetoksifikasi PPT herbiside (L-phosphinothricine). Tanaman transgenik
menggunakan gen BXN dari Klebsiella dan gen bar dari Strepotomyces telah
diperoleh pada kentang, biji minyak, sugarbeet, kedelai, kapas dan jagung dan
ditemukan untuk menjadi perlawanan herbisida. Tanaman transgenik
mengurangi penggunaan tenaga kerja penyiangan, petani biaya dan
peningkatan hasil.

Teknik resistensi patogen: Virus adalah hama utama tanaman tanaman yang
menyebabkan kehilangan hasil yang cukup. Banyak strategi telah diterapkan
untuk mengendalikan infeksi virus menggunakan protein mantel dan RNA satelit.
Virus adalah kantong submicroscopic asam nukleat (DNA atau RNA) tertutup
dalam mantel protein dan dapat berkembang biak dalam sel inang. Penggunaan
protein virus mantel sebagai transgen untuk memproduksi virus tanaman tahan
adalah salah satu keberhasilan paling spektakuler dicapai dalam bioteknologi
tanaman. Coat gen protein dari virus mosaik tembakau (TMV) diklasifikasikan
sebagai positif virus RNA untai telah dipindahkan ke tembakau, sehingga hampir
tahan terhadap TMV. Menggunakan gen ketahanan protein nucelocapsid telah
diperkenalkan pada tanaman seperti tomat, tembakau, selada, kacang tanah,
lada dan ornamen seperti Impatiens, Ageratum dan Crysnathemum terhadap
tomat melihat virus layu. Penggunaan RNA satelit (SATRNA) membuat banyak
tanaman transgenik tahan Cucumber Mosaic Virus (CMV). Tanaman transgenik
tahan juga telah dikembangkan terhadap alfalfa mosaic virus, kentang virus X,
Beras tungro virus, tembakau mainan virus dan Pepaya cincin tempat virus.

Selama dekade terakhir banyak gen ketahanan yang produknya terlibat dalam
mengenali patogen menyerang telah diidentifikasi dan kloning. Sejumlah sinyal
jalur yang mengikuti infeksi patogen telah dibedah. Banyak dari senyawa
antijamur disintesis oleh tanaman yang memerangi infeksi jamur telah
diidentifikasi. Strategi utama untuk mengembangkan resistensi jamur telah
produksi tanaman transgenik dengan molekul antijamur seperti protein dan
racun, dan generasi respon hipersensitif melalui gen R atau dengan
memanipulasi gen SAR jalur. Sebuah gen kitinase dari tanaman kacang
tembakau dan Brassica napus menunjukkan peningkatan ketahanan terhadap
Rhizoctonia solani. Di lain gen kitinase kasus yang diperoleh dari Serratia
marcescens (bakteri tanah) diperkenalkan dalam tembakau sehingga tahan

terhadap Alternaria longipes yang menyebabkan penyakit bercak coklat. Gen

transferase asetil diperkenalkan dalam tembakau sehingga tahan terhadap
Pseudomonas syringea, agen penyebab penyakit api liar.

Resistensi stres: Sejumlah gen yang bertanggung jawab untuk menyediakan

perlawanan terhadap tekanan seperti air stres panas, dingin, garam, logam berat
dan phytohormones telah diidentifikasi. Studi juga sedang dilakukan pada
metabolit seperti protein dan betains yang telah terlibat dalam toleransi stres.
Perlawanan terhadap dingin diperkenalkan ke tanaman tembakau dengan
memperkenalkan gen untuk enzim asil-transferase-gliserol 1-fosfat dari
Arabidopsis. Banyak tanaman menanggapi kekeringan oleh sintesis sekelompok
turunan gula yang disebut poliol (Mannitol, Sorbitol dan Sion). Tanaman yang
memiliki lebih poliol lebih tahan terhadap stres. Menggunakan gen bakteri yang
mampu mensintesis mannitols adalah mungkin untuk meningkatkan tingkat
manitol yang sangat tinggi membuat tanaman tahan terhadap kekeringan.

Kualitas buah: Tomat yang matang perlahan membantu dalam proses

transportasi. Tomat transgenik dengan mengurangi aktivitas esterase pektin
metil dan meningkatkan tingkat padatan terlarut dan pH yang lebih tinggi
meningkatkan kualitas pengolahan. Tomat menunjukkan tertunda pematangan
telah diproduksi baik dengan menggunakan antisense RNA terhadap enzim yang
terlibat dalam produksi etilen (Misalnya ACC sintase) atau dengan menggunakan
gen untuk deaminase yang terdegradasi l-aminocyclopropane-l asam karboksilat
(ACC) merupakan prekursor langsung etilena. Hal ini meningkatkan kehidupan
rak tomat. Tomat ini juga dapat tinggal di pabrik lama memberi lebih banyak
waktu untuk akumulasi gula dan asam untuk meningkatkan rasa. Hal ini
dihasilkan pada tingkat komersial di negara-negara Eropa dan Amerika. Tomat
dengan sukrosa tinggi dan mengurangi pati juga bisa diproduksi menggunakan
sukrosa gen synthase fosfat. Kadar pati dalam kentang telah meningkat sebesar
20-40% dengan menggunakan ADP gen pyrophosphorylase glukosa bakteri.

Resistensi hama: Gen endotoksin beta insektisida (bt gen) telah diisolasi dari
Bacillus thuringiensis bakteri tanah sering terjadi dan dipindahkan ke sejumlah
tanaman seperti kapas, tembakau, tomat, kedelai, kentang, dll untuk membuat
mereka tahan terhadap serangan serangga . Gen ini menghasilkan protein kristal
insektisida yang mempengaruhi berbagai lepidopteran, coleopteran, serangga
dipteran. Kristal ini pada konsumsi oleh larva serangga yang terlarut dalam
midgut sangat alkali ke protoxins individu yang bervariasi 133-136 kDa berat
molekul. Protein kristal insektisida yang dihasilkan selama pertumbuhan
vegetatif sel (VIP) juga ditemukan sangat efektif terhadap pengendalian
serangga. Tanaman tahan Bt sudah di pasar.

Kemandulan laki-laki dan pemulihan kesuburan: Ini membantu dalam produksi

benih hibrida. Tanaman transgenik dengan sterilitas dan pemulihan kesuburan
gen laki-laki telah tersedia di Brassica napus. Ini memfasilitasi produksi benih
hibrida tanpa pengebirian manual dan penyerbukan terkendali seperti yang
sering dilakukan pada jagung. Pada tahun 1990, Mariani dan lain-lain dari Belgia
telah berhasil menggunakan konstruk gen memiliki lain promoter dari gen TA29
tembakau dan bakteri coding urutan untuk gen ribonuklease dari Bacillus Sp.
(Gen barnase) untuk produksi tanaman transgenik di Brassica napus. Berikut gen
diterjemahkan dicegah pengembangan serbuk sari yang normal yang mengarah
ke sterilily laki-laki.

AKU AKU AKU. Diagnostik Molekuler

Probe asam nukleat: - Sekarang mungkin untuk mendeteksi penyakit tanaman

bahkan sebelum timbulnya gejala dengan menggunakan cDNA probe. Probe
sekuens asam nukleat dari patogen yang menyebabkan organisme diberi label
dengan spidol tertentu. probe cDNA yang sesuai dengan daerah tertentu dari
patogen dapat dihasilkan dengan menggunakan teknik DNA rekombinan standar.

Antibodi monoklonal (McAb): teknik immunochemical sangat berguna untuk

deteksi cepat dan akurat rutin patogen tanaman dan akhirnya diagnosis penyakit
tanaman dan keterkaitan mereka, Pengenalan teknologi hibridoma telah
memberikan metode untuk produksi reagen imunologi homolog dan didefinisikan
biokimia kekhususan identik yang diproduksi oleh garis sel tunggal dan
diarahkan terhadap epitop unik dari antigen imunisasi. Potensi besar McAbs di
diagnosa phytopathological sangat penting karena persiapan antibodi homogen
dengan aktivitas didefinisikan dan spesifisitas dapat diproduksi dalam jumlah
besar dalam waktu lama. Meskipun teknologi hibridoma adalah perusahaan
melelahkan dan mahal dibandingkan dengan prosedur imunisasi standar itu akan
digunakan secara luas untuk diagnosis skala besar.

IV. Molekuler Marker

Kemungkinan menggunakan tag gen pembuat molekuler untuk memilih sifat

agronomi telah membuat pekerjaan peternak lebih mudah. Telah memungkinkan
untuk mencetak tanaman untuk sifat yang berbeda atau ketahanan terhadap
penyakit pada tahap pembibitan sendiri. Penggunaan RFLP (Restriction Fragment
Length polymorphism), RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA), AFLP
(Amplified Fragment Length Polymorphism) dan penanda isozim dalam
pemuliaan tanaman banyak. RFLPs menguntungkan lebih morfologi dan isozim

penanda terutama karena jumlah mereka hanya dibatasi oleh ukuran genom dan
mereka tidak lingkungan atau perkembangan dipengaruhi. Peta molekul
sekarang ada untuk sejumlah tanaman tanaman termasuk jagung, tomat,
kentang, beras, selada, gandum, spesies Brassica dan barley. RFLPs telah luas
aplikasi termasuk pencetakan jari kultivar, identifikasi sifat lokus kuantitatif,
analisis organisasi genom, plasma nutfah introgresi dan berbasis peta kloning.
AFLP menjadi alat pilihan untuk sidik jari karena reproduksi dibandingkan dengan
RAPD. Microsatellile atau urutan sederhana mengulangi (SSR) penanda juga
menjadi pilihan untuk berbagai aplikasi dalam genotip, pemetaan genom dan
analisis genom.
V. Pengembangan Mikroba inokulasi

Penggunaan sembarangan dan gegabah pupuk kimia dan pestisida untuk

produksi tanaman dan pengendalian serangga hama-telah mengakibatkan
pencemaran kerusakan lingkungan kesehatan tanah dan pengembangan
resistensi oleh banyak serangga dan masalah residu. Oleh karena itu ada
kekhawatiran besar dunia luas untuk menggunakan biofertilisers aman dan
biopesticdies dalam pengelolaan hara dan pengelolaan hama terpadu sistem.

Pupuk hayati adalah mikro-organisme yang memperbaiki nitrogen atmosfer atau

melarutkan fosfor tetap di tanah dan membuat lebih banyak nutrisi yang
tersedia untuk tanaman. Beberapa organisme memberikan masukan utama
adalah nitrogen biologis memperbaiki organisme seperti Rhizobium, Azotobacter,
Azospirillum dan organisme solubilising fosfat seperti Bacillus polymyxa, B.
magaterium, Pseudomonas striata dan spesies jamur tertentu Aspergillus dan
Penicillium.
Manfaat menggunakan mikro-organisme sebagai pupuk banyak kali lipat. Mereka
lebih murah, tidak beracun untuk tanaman, tidak mencemari air tanah atau
membuat tanah asam dan tidak layak untuk pertumbuhan tanaman. Bentuk
Rhizobium nodul pada akar tanaman polongan dan bantuan dalam memperbaiki
nitrogen dari atmosfer ke besi ammonium yang bisa dikonversi menjadi asam
amino dalam sistem tanaman. Inokulasi dengan bakteri ini membantu dalam
mengurangi penambahan pupuk nitrogen ke dalam tanah. Azospirillum juga
ditemukan menjajah ruang antar sel dalam sistem akar. Bakteri ini juga
berkontribusi besar terhadap kebutuhan nitrogen tanaman.

Bakteri Fosfat solubilising adalah kelompok lain mikro-organisme yang

melarutkan fosfor larut dalam tanah dan membuat mereka tersedia untuk
tanaman.

Mikoriza adalah asosiasi simbiosis dari akar tanaman tanaman dengan jamur
non-patogen. Mereka menyediakan nutrisi diserap dari lapisan yang lebih dalam
dari tanah ke tanaman. Mereka membantu tanaman dalam pembentukan
tanaman yang lebih baik dan pertumbuhan ketika diinokulasi. Banyak tanaman
buah seperti pepaya, mangga, pisang, jeruk, delima yang ditemukan tergantung
pada hubungan ini dan sangat diuntungkan oleh inokulasi dalam pengadaan
fosfat tinggi dan nutrisi lainnya dari tanah. Asosiasi mikoriza ini membantu
tanaman dalam mengatasi serangan patogen juga. Mereka meningkatkan
karakter tanah juga.

Modifikasi genetik mikroba: Dengan menggunakan teknik rekombinasi DNA telah

memungkinkan untuk memanipulasi genetik strain yang berbeda dari bakteri ini
cocok untuk kondisi lingkungan yang berbeda dan untuk mengembangkan strain
dengan ciri-ciri dengan kapasitas daya saing yang lebih baik dan nodulasi.

Biopestisida adalah organisme biologis yang dapat dirumuskan seperti yang dari
pestisida untuk mengendalikan hama. Biopestisida yang semakin penting di
bidang pertanian, hortikultura dan program heatlh publik untuk pengendalian
hama. Keuntungan menggunakan biopestisida banyak. Mereka khusus untuk
menargetkan hama dan tidak membahayakan organisme non sasaran seperti
lebah, kupu-kupu dan aman bagi manusia dan saham hidup, mereka tidak
mengganggu rantai makanan atau meninggalkan residu beracun.

Beberapa pestisida mikroba yang digunakan untuk mengendalikan hama

serangga adalah spesies thuringiensis Bacillus untuk mengendalikan berbagai
hama serangga. Properti insektisida dari bakteri ini adalah karena kristal protein
insektisida dihasilkan selama sporulasi. Protein ini adalah racun perut dan sangat
serangga tertentu. Bt racun bisa membunuh tanaman nematoda parasit juga.
Jumlah baculoviruses (BV) virus polihedral nuklir (NPV) sedang dikembangkan
sebagai pestisida mikroba baik secara nasional dan internasional, Beberapa
contoh dari ini Heliothis, Spodoptera, Plusia, Agrotis, Trichoplusia, dll

Agen biokontrol: Ini adalah mikroba lain yang bertentangan dengan beberapa
jamur patogen dan pengganti yang baik untuk fungisida atau insektisida. Ini
adalah Bacillus sps. Pseudomonas fluorescens, Trichoderma, Verticillium sp.,
Streptromyces sps. dll Organisme ini tersedia secara komersial.

Luasnya aplikasi komersial bioteknologi tanaman adalah tanda penting untuk

mengukur vitalitas teknologi ini baru muncul. Petani kecil dan marginal dapat

mengadopsi teknologi yang lebih murah seperti penggunaan pupuk hayati dan
biopestisida sementara teknologi padat modal dapat diadopsi oleh petani kaya