FACULTAD DEL MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES

PROYECTO CURRICULAR DE INGENIERIA FORESTAL

ASIGNATURA FITOMEJORAMIENTO FORESTAL
GUIA PARA REALIZACIN DE ACETOLISIS
LABORATORIO DE SILVICULTURA Y FITOMEJORAMIENTO FORESTAL

Por : MOISS ROJAS SALAZAR

INTRODUCCIN

Parte importante del conocimiento previo a la formulacin, diseo y puesta en marcha de un plan de
mejoramiento gentico, no solo para especies forestales, sino para cualquier especie vegetal, tiene
que ver con la biologa reproductiva en general y en particular con el grado de conocimiento de las
estructuras unidades que contienen y transmiten la informacin gentica (vulos y polen ), mxime
cuando se trata de mejoramiento gentico no clsico, es decir a nivel molecular, asistido por
marcadores genticos, o en otras aplicaciones como el cultivo de protoplastos de anteras, tcnica
empleada recientemente, con xito en la propagacin asexual de especies agrcolas como el arroz.
Particularmente se busca introducir al estudiante en la terminologa y tcnicas para la preparacin y
descripcin de muestras de polen, complementando la informacin que se encuentra en la gua
sobre Ensayos de polinizacin controlada y caracterizacin preliminar de polen.
As, la presente gua contiene la informacin acerca de los pasos necesarios para la realizacin de
la tcnica de acetlisis, herramienta utilizada en el campo de la palinologa para el estudio y
caracterizacin tanto de polen fsil como del actual, de manera que el estudiante conozca adems
su importancia y aplicacin en el mbito del estudio e investigacin bsica de las especies

forestales.

Ingeniero forestal. Asistente laboratorio de Silvicultura y Fitomejoramiento .

MARCO TEORICO
DEFINICIN, ESTRUCTURA Y COMPOSICIN QUMICA DEL POLEN
En la totalidad de las plantas con flores (fanergamas), encontramos estructuras especializadas en
las que se producen y alojan los gametfitos masculinos (polen), corresponden stas a las anteras,
cuerpos rectangulares vistos en un corte transversal y de forma ms o menos prismtica al
considerarlas en tres dimensiones. Cada uno de los cuatro vrtices o cantos de la antera es el lugar
en donde se produce la gnesis tanto de las clulas madres de los gametfitos masculinos, como de
los sacos polnicos que los contienen.
Por medio de dos divisiones meiticas consecutivas, de las cuales en la segunda no ocurre la
sntesis de ADN, es decir que no se produce la replicacin de los cromosomas, las clulas madres
de los granos de polen (CMP) dan origen a stos. El gametfito masculino como tal es producto de
una divisin mittica posterior cuyo producto son dos clulas separadas entre si por una membrana
en forma de vidrio de reloj, ambas con ncleos haploides, una de ellas mas grande que la otra,
siendo esta la manera como madura y es dispersado el polen de aproximadamente dos terceras
partes de las angiospermas (principalmente Liliceas, rosaceas y solanaceas), mientras que en otras
antes de la fecundacin se produce una segunda mitosis que ocurre solo en el ncleo generativo, de
modo que el polen es dispersado en forma trinuclear (Rutishauser, 1982).
EL ESTUDIO DEL POLEN
El estudio palinolgico comprende por extensin adems del polen actual y el fsil, el estudio
general de las esporas y dems cuerpos cistiformes de las algas o de origen desconocido. El origen
de la palabra es la raz griega palynein, que significa dispersar. (Soejarto y Fonnegra, 1972)
El inicio de los estudios palinolgicos se registra a partir del siglo XVI es decir desde la aparicin del
microscpio (Brown, 1960, en Bogot, 2002), pero es solo hasta el siglo XVII que Malpighi y Grew
reportan los primeros trabajos de carcter netamente palinolgico que se fundamenta en la

descripcin de palimorfos. Bauer aporta a la nueva ciencia botnica en el mismo siglo los primeros
palinogramas de 181 plantas (Andres & Felix), (Ibid).
Los primeros estudios detallados sobre morfologa polnica se iniciaron con Erdtman hacia 1920,
quien fue el primero en proponer una metodologa de clasificacin de polen y esporas basado en la
posicin, nmero y forma de la aberturas germinales y en la caracterizacin estructural de la exina. A
nivel nacional los primeros estudios en esta rea se presentan a partir de 1952 con Van der Hammer.
Otros trabajos realizados sobre morfologa polnica son los de Soejarto & Fonnegra, 1972; Murillo &
Bless (1974,1978), Uribe & Fonnegra,1979 y mas recientemente los de Velsquez y Rangel (1995),
Jimnez et al(1999), Bogot y Snchez, 2001(Ibid).
ESTRUCTURA Y COMPOSICIN DEL POLEN
El grano de polen es considerado como una espora (microspora) ya que es una estructura celular
envuelta por una pared gruesa y resistente. En su condicin viva, como cualquier otra clula vegetal,
esta formado por dos componentes, la pared celular que es inerte y el protoplasma o la parte viva.
Sin embargo el esporodermo o pared celular del polen es diferente a la pared celular general, al ser
mas grueso y estar constituido por dos capas principales, la intina, que se encuentra en contacto
directo con la membrana celular, es delgada y constituida principalmente por celulosa y la exina que
es mas gruesa, constituida por esporopolenina, un polmero de cidos grasos mono o dicarboxilicos
con peso molecular alto y que es exterior a la primera. La exina es altamente resistente a las altas
temperaturas tanto como a la accin de cidos fuertes como el actico y el sulfrico, de modo que
perdura a la degradacin de la intina y el protoplasma, lo que constituye la base del anlisis
palinolgico. (Soejarto y Fonnegra, 1972).
La exina consta de dos capas, una interna o endexina y la ektexina o capa externa y se diferencian
por la reaccin que presentan al tratarse con fuchina B, en la que la endexina tie de rosado,
mientras que la ektexina de rojo oscuro, permitiendo as una diferenciacin morfolgica entre stas.
La endexina se caracteriza por ser lisa y homognea, mientras que la segunda se distingue por la
disposicin radial de sus elementos que se pueden diferenciar en tres subcapas de afuera hacia
adentro, tctum, infratctum y base. Faegri & Iversen, 1975 en Bogot, 2002.

Erdtman, 1986, citado por el mismo autor, distingue en cambio dentro de la exina dos capas: sexina
o externa y nexina o interna, las cuales son solo diferenciables morfolgicamente ya que la nexina la
constituye adems de la endexina, la base de la ektexina de la nomenclatura de Faegri & Iversen.
Senz de Rivas, 1978 en Bogot 2002 recomiendan usar la nomenclatura de Erdtaman cuando se
trabaja con polen sin tincin al microscopio ptico o al electrnico.
DESCRIPCIN MORFOLGICA
Los atributos que se consideran desde el punto de vista palinolgico para describir el grano de polen
son agrupables as:

Atributos que describen la estructura y escultura del esporodermo. La estructura hace referencia
a la estratificacin de la exina, mientras que la escultura describe los elementos supratectales
presentes en la misma. La exina descrita por Iversen & Faegri, 1975 consta de dos estratos:
endexina y ektexina; de esta ltima se pueden diferenciar a la vez tres estratos o capas : tctum,
infratctum(columnas o bculos) y base Hideux y Ferguson, 1975, en Bogot, 2002.
Protubrerancia supratectal
Tctum
Exina

Sexina
Nexina

Infratctum
Base

Figura 1. Esquema de la estructura y escultura de la exina, comparando la nomenclatura propuesta por Erdtman, 1986 (izquierda y
cursiva), con la propuesta por Iversen y faegri, 1975 (derecha). Tomado y modificado de Soejarto y Fonnegra, 1978

Mientras que la exina descrita por Erdtman 1986, consta de 2 estratos, la sexina y la
nexina, la primera estructurada y la segunda no.
Cae fuera del objetivo de la presente gua proponer y desarrollar una profundizacin extensa a
cerca de este punto, no solo por la diferencia nomenclatural expuesta antes, sino porque existen
limitaciones respecto a la resolucin alcanzada por el microscopio ptico especialmente cuando
se trata de polen muy pequeo.

Atributos referentes a las aberturas. Las aberturas son reas adelgazadas de la exina y
especialmente delimitadas que permiten la salida del tubo polnico y ante las variaciones de
humedad medioambientales posibilitan la expansin del citoplasma, las aberturas que cumplen
esta

funcin

se

denominan

harmomgatas,

mientras

que

las

primeras

son

germinativas(Wodehouse, 1935; Faegri & Iversen, 1975, en Bogot, 2002) Para la descripcin
del polen respecto a las aberturas se pueden analizar tres aspectos:
El nmero, la posicin y el carcter. Este sistema se conoce como la clasificacin NPC. De tal
suerte que respecto al nmero de aperturas, la terminologa empleada con base en la raz
treme(Gr. Abertura) es: monotreme, ditreme, tritreme, tetratreme, etc.( Respecto a la posicin de
las aperturas, estas pueden ser: Catatreme(proximal), anatreme(distal), zonotreme(alrededor del
plano ecuatorial) y pantotreme( sobre toda la superficie)
El carcter de la apertura se refiere a si esta es simple o compuesta y adems a su forma; para
las aperturas simples se clasifican en colpo (apertura alargada) y en poro(apertura en forma
circular). Una apertura compuesta es aquella formada por un poro rodeado por otra estructura
que puede ser circular o elevada, denominada ora (Lat. os que significa boca) o elptica (Soejarto
y Fonnegra, 1972).

Figura 2. Representacin esquemtica de los tipos de aperturas, de izquierda a derecha poro, colpo, poro en colpo y ora.
Tomado y modificado de (Soejarto y Fonnegra, 1972).

Agrupacin, polaridad y simetra. Los granos de polen al madurar pueden permanecer unidos
unos con otros o ser liberados individualmente de la antera al momento de la dehiscencia de
estas cuando se inicia el proceso de polinizacin. Los granos de polen maduros y liberados de
manera individual se denominan mnadas. La agrupacin de dos o ms granos se conoce como
polen compuesto, y se nombran diadas, ttradas, o poliadas, cuando estas agrupaciones
contienen dos, cuatro o mas de ocho granos, respectivamente, mientras que las msulas son
agrupaciones en la cuales es casi imposible determinar el nmero de granos. Walker & Doyle,
1975 en Bogot, 2002).

Con respecto a la polaridad se puede decir en trminos generales, que la gnesis de los granos
de polen a partir de la clula madre por medio de la meiosis culmina con una ttrada,
independientemente de que al producirse la antsis el polen maduro sea liberado en diadas o
de manera individual (como en la mayora de las plantas), lo que implica que el grano individual
siempre tendr dos lados o caras, uno llamado proximal que se encuentra hacia el centro de la
ttrada y el lado distal que se encuentra hacia fuera de sta.
Lado o cara proximal (Centro de ttrada)
Lado o cara distal (Exterior de la ttrada)

Figura 3. Esquema de ttrada indicando las caras distal y proximal del grano de polen.

De manera que el eje polar es una lnea imaginaria que une el centro del lado proximal (polo
proximal), con el centro del lado distal (polo distal). Un plano imaginario ortogonal al eje polar se
denomina plano ecuatorial. Un grano de polen es considerado isopolar cuando el plano
ecuatorial divide al mismo en dos mitades idnticas, la mitad proximal y la mitad distal y en polen
heteropolar el grano se divide en dos partes desiguales. Cuando es imposible determinar
polaridad o no es definida como en los granos de polen esfricos, se habla de polen apolar.
(Soejarto y Fonnegra, 1972).

Forma. Erdman, 1986 en Bogot, 2002 propone trminos para describir las formas generales del
polen isopolar, co simetra radial, basndose en la relacin del eje polar (P) y el eje ecuatorial
(E), P/ E, distinguiendose las siguientes formas: Perprolado >2, prolado 1.34 2, subprolado
1.15 1.33, prolado esferoidal 1.01- 1.14, esferoidal1, oblado esferoidal 0.88 0.99, suoblado
0.75 0.87, oblado 0.5 0.74 y peroblado menor a 0.5
Una clasificacin que no aborda la gran variedad de trminos empleados para definir con
exactitud la forma del polen basndose en el ndice P/E, es la presentada por (Soejarto y
Fonnegra, 1972). Quienes aplican trminos como esfrico, subesfrico, elipsoidal, triangular,
trilobado, reniforme, con alas, etc

PROCEDIMIENTO GENERAL DE LABORATORIO

Maceracin de
anteras en mortero
con KOH al 10%

Calentar a 30 40C

Filtrar y disponer en tubos

de centrifuga, lavando con
agua destilada

Centrifugado 4500rpmx 5min.

Descartar sobrenadante
Agregar 2cc. de
cido actico
glacial

Lavar dos veces con agua

destilada y agitar,
centrifugar despus de cada
lavado.

Centrifugado 4500rpmx 5min

Descartar sobrenadante
Adicionar 4ml de
mezcla acetoltica

Calentar a 80C x 5min.

Adicionar 2ml de alcohol
Enfriado, centrifugado 4500 rpmx 5min. etlico, agitar.

Centrifugado 4500rpmx 5min

Descartar sobrenadante
Repetir.

Montaje en placas
para observacin

Montaje al
microscopio ptico,
toma de fotografas.

Adaptado de Bogot, 2002

Calentar x 12 horas a 40C

Poner en viales y
agregar 2 gotas de
glicerina

BIBLIOGRAFIA

BOGOTA, R.G. 2002. El polen de la subclase Asteridae en el pramo de Monserrate. Centro de

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RUTISHAUSSER, A. 1982. Introduccin a la embriologa de la plantas superiores. Ed. trillas.
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