TABLE OF CONTENTS

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ABSTRACT . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
TITLE PAGE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
APPROVAL SHEET . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
ACKNOWLEDGEMENT . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
TABLE OF CONTENTS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
LIST OF TABLES . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
LIST OF FIGURES . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

i
ii
iii
iv
viii
xii
xiii

CHAPTER
1
INTRODUCTION
1.1
Background of the Study . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.2
Objectives of the Study . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.3
Significance of the Study . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.4
Scope and Delimitation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

1
1
3
4
4

REVIEW OF RELATED LITERATURE

2.1
Phytochemical Analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.2
Alkaloids . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.3
Steroids . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.4
Terpenoids . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.5
Flavonoids . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.6
Saponins . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.7
Polyphenols and Tannins . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.8
Cyanogenic Glycosides . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.9
Statistical Analysis: Sign Test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.10 Toxicity: Brine Shrimp Assay Test . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.11 Median Lethal Concentration (LC50): Probit Test . . . . . .
2.12 Saccharum spontaneum (Talahib) . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.13 Manihot esculenta (Cassava) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.14 Ficus minahassae (Hagimit) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

6
6
7
9
10
11
13
14
16
18
19
21
23
24
25

METHODOLOGY
3.1
Sampling and Sample Preparation . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.2
Preparation of Stock Plant Extracts . . . . . . . . . . . . . . . .
3.3
Phytochemical Analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.3.1 Test for Alkaloids . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.3.2 Test for Steroids: Liebermann-Buchard Test . . . . . . . . .
3.3.3 Test for Terpenoids: Salkowski Test . . . . . . . . . . . . . . .
3.3.4 Test for Flavonoids . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.3.4.1 Test for Leucoanthocyanins: Bate-Smith and
Metcalf

27
27
28
29
29
30
30
31
31

Method . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.3.4.2 Test for -benzopyrone nucleus: Willstatter
cyanidin Test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.3.5
3.3.6
3.3.6.1
3.3.6.2
3.3.6.3
3.3.7
3.4
3.5
3.5.1
3.5.2
3.5.3
3.5.4

Test for Saponins: Froth Test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Test for Polyphenols and Tannins . . . . . . . . . . . . . . . . .
Gelatine Test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Lead Acetate Test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Ferric Chloride Test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Test for Cyanogenic Glycosides: Guignard Test . . . . . .
Statistical Analysis: Sign Test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Toxicity Test: The Brine Shrimp Assay . . . . . . . . . . . .
Plant Test Extract Preparation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Hatching the Shrimp . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Bioassay . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Determination of the Median Lethal
Concentration (LC50) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

31
32
32
32
33
33
33
34
35
35
35
36
37

RESULTS AND DISCUSSIONS

4.1
Phytochemical Analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.1.1 Test for Alkaloids . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.1.2 Test for Steroids . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.1.3 Test for Terpenoids . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.1.4 Test for Flavonoids . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.1.5 Test for Saponins . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.1.6 Test for Polyphenols and Tannins . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.1.7 Test for Cyanogenic Glycosides . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.2
Summary of Qualitative Analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.3
Statistical Analysis: Sign Test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.4
Toxicity: Brine Shrimp Assay Test . . . . . . . . . . . . . . . .

38
39
39
41
42
43
44
45
47
48
49
50

SUMMARY, CONCLUSION AND RECOMMENDATION

53

BIBLIOGRAPHY . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

56

APPENDICES
A
Preparation of Reagents for Phytochemical Analysis . . . . . . . . .
B
Photographs of Sampling and Extraction of Ficus
minahassae (Hagimit) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
C
Documentation for the Tests Performed . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
D
Toxicity Test: Brine Shrimp Assay Test Set-up . . . . . . . . . . . . . .
E
Results for Phytochemical Analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F
Table of Probit Values and Raw Data for Brine Shrimp
Assay Test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
G
Sample Calculations . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

60
62
64
71
72
73
75

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