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tiempo real
Sistemas de deteccin de
PCR
Manual de instrucciones
Catlogo # 184-5384
# 185-5384
# 184-5096
# 185-5096
Bio-Rad Recursos
La Tabla 1 enumera otras Bio-Rad recursos y la forma de localizar lo que
necesita:
Notas tcnicas y la
literatura
Especialistas tcnicos
Significado
SUGERENCI
A:
NOTA:
ADVERTEN
CIA!
> Y
Significado
especificaciones
Temperatu
ra
altitud
Uso en
interior
es
CUMPLIMIENTO DE LA NORMATIVA
Este instrumento ha sido probado, y se encontr que de acuerdo con todos
Tabla de contenidos
Bio-Rad recursos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . ii
Escritura utilizados en este manual.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . ii
Seguridad y Cumplimiento Normativo.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . iii
Captulo 1.El sistema de instalacin. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . .. 1
Desembalaje del mdulo de reaccin ptica.
................................1
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . 31
Protocolo de Control Editor. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . 33
Modo de control de temperatura.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . 37
Protocolo AutoWriter. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . 37
Tabla de contenidos
VI
Captulo 5.Placas.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
Placa ventana del editor. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . 41
Seleccione Ventana fluorforos.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . 45
Configuracin del experimento de la ventana. . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .
. . . . . . . . . . 48
Bueno Grupos gestor de ventanas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . ... . . 50
Hoja de clculo Plate la ventana de visualizacin. . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . 51
Captulo 6.Funcionamiento autnomo.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..53
Panel de control.
.................................................... ..
53
Men Principal.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..
54
Montaje del ensayo.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 55
Exportacin de datos para el anlisis. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . .. . . . 61
Creacin de un archivo de datos.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 64
Configurar el correo electrnico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . .. . . . . 65
Captulo 7.Anlisis de Datos Descripcin. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . .. 69
Datos de la ventana de anlisis.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69
Anlisis de los datos de la barra de mens.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71
Cuantificacin Tab.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 72
Configuracin de anlisis de datos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . 73
Selectores de bien.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .75
Grficos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . 78
Hojas de clculo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . 79
Captulo 8.Anlisis de datos de Windows. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . .. . . 81
Cuantificacin Tab.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
Los datos de cuantificacin Tab.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85
Derretir Tab curva. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . 87
Derrita la curva de la ficha de datos.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . 89
Punto Final Tab. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . 91
Distincin del allica.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 93
QCTab. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . 95
Informes de los archivos de datos.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . 97
Captulo 9. Anlisis de expresin gnica.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 101
De la expresin gnica. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . .101
Placa de instalacin de anlisis de expresin gnica. . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . 102
Gene Expresin Tab.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102
Configuracin del experimento de la ventana.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . 107
Estudio de genes.
......................................................
109
Estudio de genes de datos de hoja de clculo. . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .
. . . . . . . . . . . 112
viii
El sistema de instalacin
2 Descripcin general del sistema
Indicador LED
Boton de apertura
Del panel frontal
Figura 1. Vista
frontal del sistema
CFX96.
Cuando est abierto, el sistema CFX96 o CFX384 incluye las caractersticas
que se muestran en la Figura 2.
Tapa interna con placa de calefaccin
Bloque
botn de cierre
asentado
comprobar
espacio
comprobar
espacio
comprobar
espacio
Instalacin
Administrador
del
software
de
de
CFX
Conducir
Disco Duro
Velocidad del
procesador
RAM
resolucin de la
pantalla
USB
navegador de
Internet
Software
Mnimo
Windows XP ProfessionalSP2y
Windows XP ProfessionalSP2y
Por encima oWindows Vista
Home
Premium ypor encima de
CD-ROM
10GB
2.0 GHz
Recomendado
por encima o Windows
Vista Home
Premium ypor encima de
2 GB RAM
CD-ROM
20GB
2.0 GHz
1280 x 1024concolor
verdaderomodo de
USB2.0 Hi-Speed
Internet Explorer
Microsoft Office Suite
encontrado que
pone en marcha despus de que el instrumento se detect por primera vez
por el ordenador.
El sistema de instalacin
3. En la primera pantalla, seleccione S, esta vez slo para indicar al sistema
operativo Windows para conectarse a Windows Update para buscar software
(Figura 9). Haga clic en
asA10
(180 de rotacin)
asH3
(correcta)
2 Introduccin al Administrador de
CFX Software
Lea este captulo para obtener informacin sobre cmo empezar con el
(pgina 16)
Barra de men
La barra de mens de la ventana principal del software proporciona los
elementos enumerados en la Figura 16:
comando
Funcion
Nuevo
Abierto
Archivos de
datosrecientes
Repetir un experimento
Ver
Salir
registro de aplicaciones
Los informes se
ejecutan
Asistentede inicio
Montaje del ensayo
Resumende
instrumentos
Los
instrumentosdetectaron
barra de herramientas
la barra de estado
Usuario
seleccione Usuario
Cambiar la
contrasea
Preferencias de
usuario
Administracion de
Instrumentos
usuarios
Tinte mago de
calibracion
ProtocoloAutoWriter
TaCalculadora
opciones
mendel
artculo
ventanas
comando
ayuda
Mosaico vertical
cascada
TileHorizontal
Cerrar todo
Contenido
Indice
Busqueda
Expresin Gnica
Puerta de entradadel
sitioWeb
PCR de plstico
deadministracin de usuarios
Abra la ventanade calibracinpara
calibrar untinteinstrumento paraun
fluorforonuevo
Abra la ventanaAutoWriterProtocolopara
crear unnuevo protocolo
bra la ventana dela calculadorapara
calcular elTa
temperatura deanillamiento de los
cebadores
Ver un registrodel bloquetermociclador
Abra la carpetaDatos de programapara
versoftware
archivos
abra la carpetade datos para verel
protocolo, la placa yarchivos de datos
Ver las propiedadesde todos
losinstrumentos detectaron,
incluyendo nmeros de serie
Elijay condensarlos archivos
seleccionadosen formato comprimido
para el almacenamientode archivoso
correo electrnico a
Configurar las opciones desoftware de
correo electrnico
Funcin
Organizar las ventanasde softwareen la
parte superiorde cada uno
Organizar las ventanasde softwarede
arriba a abajo
Organizar las ventanasde softwarede
derecha a izquierda
Cierre todas las ventanasde software
libre
Abrirla ayuda del softwarepara obtener
ms informacin sobre la ejecucin
dePCRyPCRen tiempo real
Verel ndice enla Ayuda del software
Buscarla ayuda del software
Abra un sitioweb para
encontrarinformacin sobre la ejecucin
PCRen tiempo reallos experimentos de
PCR
Ver un sitio webque las listas deBio-Rad
consumibles para
PCRen tiempo real yreactivosPCR
Ver un sitio webque las listas deBio-Rad
Actualizaciones de
software
sobre
consumibles para
PCRen tiempo reallos experimentos de
PCR
Buscar actualizaciones de softwarede
Bio-Rad
Abriruna ventana para verla versin de
software
16
Archivos de software
CFX Manager almacena la informacin sobre los experimentos en archivos
especficos (Tabla 9):
Consejos y trucos
Trucos y consejos para el uso de software de gestin CFX se enumeran a
continuacin.
Abra cualquier protocolo, la Plata, de datos o un archivo de Estudio Gene
arrastrndolo desde una carpeta a un
ventana del software libre
Imprimir o exportar la informacin mostrada en muchas ventanas
haciendo clic derecho en un grfico,
hoja de clculo, o bien selector
Cambiar el tamao de cualquier ventana haciendo clic y arrastrando los
bordes
Abra la ventana de preferencias del usuario de elegir la configuracin por
defecto que se activan todos los
vez que inicie sesin en el software
Agregar archivos de datos de un estudio de Gene arrastrando desde una
carpeta a un estudio de Gene abierto
ventana
Anlisis de datos Abrir varios archivos y Gene estudio, al mismo tiempo
Haga clic en Configuracin y Herramientas de mens para encontrar las
funciones avanzadas
Para aadir o eliminar archivos en el men de carga Express, agregar o
eliminar los archivos (. PRCL
extensiones and.pltd) en la carpeta ExpressLoad, seleccione Herramientas>
Carpeta de Usuario de datos en
la barra de men de la ventana principal del software
Para ver toda la informacin cargada en un pocillo de una placa, haga
doble clic en el pozo para
abrir la ventana de informacin bien
Haga clic en cualquier grfico o tabla para cambiar las opciones de
visualizacin y anlisis de datos
Modificar el contenido y, antes, durante o despus de la carrera
Seleccione un grupo y para ver y analizar un subconjunto de los pozos de
la placa. Seleccione cada
as el grupo por su nombre en el grupo bien el men desplegable en la barra
de herramientas
Tabla 9. Abrir este tipo de archivos con el software de Administrador de CFX
Extensin Tipo de archivo Cmo ver y editar archivos
Protocolo. PRCL Seleccione en Configuracin del experimento y editar en el
Protocolo Editor
Plato. PLTD Seleccione en Configuracin del experimento y editar en el
Editor de Plata
De datos. PCRD Ver y analizar en la ventana de Anlisis de Datos
Estudio de genes. Mgxd Ver y analizar en la ventana de Gene Estudio
Independiente antes de los datos
expediente
. Zpcr Contiene las lecturas de fluorescencia de stand-alone
operacin que se convierte en un archivo de datos
CFX96 y CFX384 Manual de Sistemas
21
3 Experimentos Running
Lea este captulo para obtener informacin sobre la ejecucin de
experimentos utilizando el software CFX Manager:
Experimentar la ventana de configuracin (continuacin)
Protocolo de la ficha (page22)
Punto final slo se ejecuta (pgina 22)
Placa de la ficha (pgina 23)
Inicio, Ejecutar pestaa (pgina 24)
Detalles de ejecucin de la ventana (pgina 26)
Instrumento ventana Resumen (pgina 28)
Ventana de Configuracin de experimento
La ventana Configuracin del experimento proporciona acceso rpido a los
archivos y configuraciones necesarias para crear
y realizar un experimento. Para abrir la ventana Configuracin del
experimento, siga una de estas opciones:
Haga clic en la opcin Crear un nuevo experimento en el Asistente de
inicio (pgina 16)
Haga clic en el botn Configuracin del experimento en la barra de
herramientas de software principal (pgina 14)
Seleccione Archivo> Nuevo> Experimento en la barra de men principal
de software (pgina 12)
La ventana Configuracin del experimento incluye tres pestaas:
Protocolo. Haga clic en la ficha Protocolo para seleccionar un protocolo
existente para ejecutar o modificar, o crear
un nuevo protocolo en la ventana del editor de Protocolo (pgina 31)
Placa. Haga clic en la lengeta de la placa para seleccionar una placa
existente para ejecutar o modificar, o crear una nueva
placa en la ventana Editor Plate (pgina 41)
Inicio Ejecutar. Haga clic en la pestaa Inicio Ejecutar (pgina 24) para
comprobar la configuracin de ejecucin, seleccione una o
ms bloques de instrumentos, y comienza la carrera
NOTA: Si el protocolo seleccionado en la ficha Protocolo no incluye un paso
con una placa de lectura para anlisis en tiempo real PCR, la lengeta de la
placa que est oculto. Para ver
la lengeta de la placa, aadir una "Placa de lectura" (pgina 34) en al
menos un paso en el protocolo.
experimento
pocillo en la placa.
Figura 29. La ficha Estado en tiempo real muestra los datos durante una
carrera.
Aadir ms repeticiones con el actual paso GOTO en el protocolo.
Este botn slo est disponible cuando un paso GOTO se est ejecutando.
Omitir el paso de corriente en el protocolo. Si usted se salta un paso GOTO,
el software verifica que desea omitir todo el GOTO
bucle y continuar con el siguiente paso en el protocolo.
Flash del LED en el instrumento elegido para identificar la
bloques seleccionados
Pausa el protocolo
NOTA: Esta accin se inscribe en el Registro de ejecucin.
Reanudar un protocolo que se ha detenido
Detener la ejecucin antes de que termine protocolos, que pueden alterar
sus datos
El cuadro 11. Ejecutar los botones de estado y sus funciones (continuacin)
Botn de funcin
Los experimentos en ejecucin
28
Sustitucin de un archivo de Plata
Durante la carrera, reemplazar el archivo placa haciendo clic en el botn
nueva
ubicacin
Cierre Cierre el Editor del Protocolo
Configuracin de ajustes de tapa abierta la ventana de Configuracin de la
tapa para cambiar o ajustar la tapa
Temperatura
Herramientas de degradado
Calculadora
Seleccione el tipo de bloque de un paso gradiente. Elija 96 Wells
o 384 Wells
En tiempo de ejecucin
Calculadora
Seleccionar el modo de instrumento y anlisis que se utilizarn para
calcular el tiempo de ejecucin estimado en la Configuracin del
experimento
ventana
CFX96 y CFX384 Manual de Sistemas
33
Tabla 14 enumera las funciones de los botones de la barra de herramientas
Protocolo Editor:
Protocolo de Control Editor
La ventana del editor Protocolo incluye botones para cambiar el protocolo.
En primer lugar, seleccionar y resaltar
un paso en el protocolo de la izquierda haciendo clic con el puntero del
ratn. A continuacin, haga clic en uno de los Protocolo
Editor de botones en la parte inferior del lado izquierdo de la ventana del
editor de Protocolo para cambiar el protocolo.
La ubicacin de la insercin de una nueva etapa, "Antes" o "despus" del
paso actualmente seleccionado se
determinado por el estado del cuadro de Paso Insertar situado en la barra de
herramientas.
Insertar botn Paso
Para insertar un paso de temperatura antes o despus del paso actualmente
seleccionado:
1. Haga clic en el botn Paso Insertar.
2. Edicin de la temperatura o tiempo de espera haciendo clic en el valor
por defecto en la vista grfica o de texto,
e introducir un nuevo valor.
Tabla 14. Protocolo de botones de la barra de herramientas del editor
Barra de herramientas de botones y mens de funcin Nombre
Guardar Guarde el archivo de protocolo actual
Imprimir la ventana seleccionada
Inserte el paso Seleccione antes o despus de insertar los pasos de un
posicin en relacin con el resaltado
paso
Volumen de la muestra Introduzca un volumen de muestra en l entre 0 y
50 (para el bloque de 96 pozos), o entre 0 y 30
Paso.
3. Agregar o quitar opciones de introducir un nmero, la edicin de un
nmero, o hacer clic en una casilla de verificacin.
CONSEJO: Para mantener un paso para siempre (una bodega infinita),
escriba cero (0.00) para la poca.
La figura 37 muestra el avance seleccionado, con un gradiente de 10 C.
Tenga en cuenta que algunas opciones no son
disponibles en un paso de gradiente. Un paso pendiente no puede incluir un
incremento o cambio de velocidad de la rampa.
anillamiento en la calculadora de Ta
ventana
Longitud de amplicn (pb). Introduzca la duracin prevista del producto de
PCR
enzima. Seleccione la enzima ADN polimerasa (ITAQ, iProof, u otro) (ADN
iTagTm
Polimerasa, ADN polimerasa iProofTm de alta fidelidad), introducir
informacin adicional
incluyendo el tiempo de activacin del inicio caliente, y el tiempo de
extensin final
Tiempo de funcionamiento y el tipo. Introducir una velocidad (estndar,
rpido y ultrarrpido) para ajustar el tiempo de ejecucin total,
y seleccionar el tipo de PCR (PCR en tiempo real o PCR)
El tiempo de ejecucin de cualquier protocolo se ve influenciada por el
nmero de pasos y de los ciclos, la incubacin
tiempo en cada paso, y el tiempo que tarda en llegar a la uniformidad, a la
temperatura deseada. Para reducir
el tiempo de ejecucin del conjunto de la AutoWriter Protocolo de hace uno
o ms de los siguientes cambios:
Reduce el nmero total de pasos del protocolo
Reduce el nmero de repeticiones GOTO
Minimiza el tiempo de espera en cada paso de temperatura
Minimiza el tiempo de rampa entre los pasos por la reduccin del cambio
de temperatura de
un paso a la siguiente
CFX96 y CFX384 Manual de Sistemas
39
Por ejemplo, un tpico protocolo de PCR incluye los siguientes tres conjuntos
de medidas con un recorrido total
tiempo de 1,5 a 2,0 horas:
1. Plantilla inicial de desnaturalizacin y la activacin de la enzima (95 C
durante 30-10 minutos).
2. Ciclos de tres pasos de temperatura (30 a 40 ciclos): La desnaturalizacin
de la plantilla (94-95 C
durante 15-30 segundos), hibridacin de los cebadores (recocido durante
15-30 segundos), y la extensin de
producto (72 C durante 15-60 segundos).
3. La extensin final (72 C durante 10 minutos).
El Protocolo de AutoWriter podra hacer estas modificaciones para acortar
un protocolo tpico:
Cambiar la plantilla de desnaturalizacin inicial y activacin de la enzima
paso de 95 C durante 3 minutos a 98 C durante 30 segundos
Cambie el primer paso de desnaturalizacin en cada ciclo de 95 C
durante 30 segundos a 92 C durante 1 segundo
Combinar los pasos de recocido y extensin en un solo paso a 70 C
durante 20 segundo
NOTA: La combinacin de los pasos de recocido y extensin impone lmites a
la fusin
la temperatura de los cebadores. Si las temperaturas de fusin de los
cebadores no estn
dentro del rango especificado, ajustar los cebadores. Por ejemplo, acortar
los cebadores por
2 a 3 pares de bases (pb), o redisearlos para ajustar la temperatura de
fusin.
Crear un protocolo con el Protocolo de AutoWriter
Siga estos pasos para utilizar el AutoWriter Protocolo para crear un nuevo
protocolo:
1. Haga clic en el botn AutoWriter Protocolo sobre la barra de herramientas
para abrir el Protocolo AutoWriter
ventana.
2. Introduzca la temperatura (Ta) y amplicn longitud en los cuadros dentro
de la
Introducir valores objetivo / panel de enzimas. Si usted no sabe la
temperatura de recocido para primers, haga clic en el botn de la
calculadora Ta para entrar en el primer secuencias y calcular el
la temperatura de recocido. Para obtener ms informacin acerca de los
clculos utilizados en la calculadora de Ta
ver Breslauer et al. 1986.
3. Seleccione un tipo de enzima de la lista de opciones (ITAQ, iProof, u otro).
4. Agregar parmetros en el panel de parmetros adicionales (opcional) si
desea agregar un
Rango de gradiente, la temperatura caliente de inicio de activacin, o el
tiempo de extensin final de la
protocolo.
5. Seleccione una velocidad de protocolo (estndar, rpido o ultrarrpido)
moviendo la barra deslizante en la
Tipo panel. Cuando se mueve la barra deslizante, el software ajusta el
tiempo de ejecucin total. Seleccionar
PCR en tiempo real para indicar al software para recopilar datos de
fluorescencia.
6. Revisar el protocolo en el panel de vista previa en tiempo de ejecucin
total. Hacer los cambios necesarios.
Consejo: Introduce la temperatura tapa y volumen de la muestra antes de
cada ejecucin mediante la edicin del
parmetros en la pestaa Inicio Ejecutar (vea "Iniciar ficha Ejecutar" en la
pgina 24).
7. Haga clic en Aceptar para guardar el nuevo protocolo, o en Cancelar para
cerrar la ventana sin guardar
el protocolo.
Sugerencia: Para editar un protocolo escrito con las AutoWriter Protocolo,
abra el archivo de protocolo
(. PRCL extensin) en la ventana del editor de Protocolo (pgina 31).
NOTA: Bio-Rad Laboratories no garantiza que la ejecucin de un protocolo
por escrito en
instrumento lo
canales para recoger los datos de fluorescencia de durante la carrera.
Seleccionar todos los canales (por defecto), SYBR / FAM solo, o FRET
Grupos bien Abra la ventana de grupos bien Manager y crear as
grupos de la corriente de placa
Ayuda Abrir la Ayuda del software para obtener informacin sobre las placas
Placa de carga
Gua
Mostrar una gua rpida sobre cmo configurar una placa y la carga
los pozos
CFX96 y CFX384 Manual de Sistemas
45
Modo de Escaneo
El sistema detecta CFX96 excita y fluorforos en seis canales. El sistema
CFX384
excita y detecta fluorforos en cinco canales. Ambos sistemas utilizan
adquisicin de datos mltiples
explorar los modos para recopilar datos de fluorescencia de durante la
carrera.
Seleccione uno de estos modos de escaneo int l Editor Plate barra de
herramientas de la ventana:
Todos los canales. Incluye los canales 1 al 5 en el sistema CFX96 o los
canales 1
a 4 en el sistema CFX384
SYBR / FAM solamente. Incluye slo el canal 1, y proporciona un anlisis
rpido
FRET. Incluye solamente el canal de FRET y proporciona un anlisis rpido
Fluorforos Seleccione Ventana
Seleccione las listas de los fluorforosfluorforos ventana que puede ser
seleccionado para la carga de la Plata
Editor y cargar los controles. Para abrir la ventana Seleccionar fluorforos,
haga clic en el botn Seleccionar
Fluorforos botn en el lado derecho del editor de la Plata.
NOTA: Los fluorforos mostradas dependen del modo de exploracin,
cuando SYBR / FAM slo es
elegido, slo el canal 1 fluorforos se muestran en la ventana Seleccione
fluorforos.
NOTA: No se puede agregar o quitar fluorforos de la lista, debe calibrar el
fluorforos nuevo en un instrumento en el mago de la calibracin (pgina
131). Despus de
calibracin, el fluorforo se aade a la ventana Seleccione fluorforo.
Haga clic en la casilla de verificacin junto al nombre del fluorforo para
aadir o eliminar los fluorforos
a la lista en la parte derecha de la ventana del editor de la Plata.
En este ejemplo, SYBR se selecciona de la lista de los fluorforos disponibles
(Figura 40).
47
Para el anlisis de expresin gnica o para distinguir entre
varias muestras, seleccione un nombre de ejemplo desde el men
desplegable
men a la carga que el nombre de la muestra en el seleccionado
pozos. Para borrar un nombre de la muestra, se selecciona en el men,
pulse la tecla Supr en el teclado, y luego pulse
Intro.
TIP: Para agregar un nombre a la nueva muestra del men desplegable de
la corriente de placa, escriba un nombre nuevo en el cuadro desplegable
y pulse la tecla Enter
Para cargar los nmeros se replican, pozos seleccionados deben contener
idntico contenido bien. Si no lo hacen, el software
desactiva este control de carga
Haga clic en la caja de carga para aadir una rplica a los seleccionados #
pozos. Haga clic en la Replicar # Borrar para borrar la
replicar el nmero de las celdas seleccionadas.
TIP: Para cargar varios nmeros de replicar a travs de una serie de
pozos, haga clic en el botn Reproducir de la serie.
En el panel de la serie Replicar puede aplicar una rplica
serie a un conjunto de pozos seleccionados. Introduzca el Replicar
Tamao del grupo mediante la seleccin de un nmero que representa el
nmero de muestras (pozos) en cada grupo de rplicas.
Seleccionar una rplica # de comenzar a aadir repeticiones.
NOTA: Puede cargar grupos de replicar con replicar
nmeros progresando de izquierda a derecha (horizontal), o
progresando de arriba a abajo (vertical).
Entrar en una concentracin de los pozos seleccionados con la norma
muestra el tipo de edicin o escribiendo un nmero en el
Concentracin de la caja. Para solicitar la concentracin de un
fluorforo en la fuente, seleccione un solo fluorforode
el men desplegable (<Todos>) en la concentracin
box.To eliminar una concentracin, seleccinela, pulse el botn Volver
Espacio en el teclado y luego presione Enter
Seleccione varios pozos con un tipo uniforme de muestra para
activar el botn de la serie de dilucin
Cuadro 17. Opciones para la carga de la placa y los pozos en el Editor de
Plata (continuacin)
Opcin Funcin
Placas
48
Configuracin del experimento ventana
Para abrir la ventana de Configuracin experimento, siga una de estas
opciones:
En el Editor de la Plata, haga clic en el botn Configuracin del
Experimento
Al analizar los datos en la ventana de anlisis de datos, haga clic en la
pozos seleccionados
NOTA: Al hacer clic en el botn Borrar de forma permanente Wells
elimina el contenido de los pozos.
Cuadro 17. Opciones para la carga de la placa y los pozos en el Editor de
Plata (continuacin)
Opcin Funcin
CFX96 y CFX384 Manual de Sistemas
49
Objetivos. Una lista de nombres de destino para cada reaccin de PCR,
tales como los genes o secuencias de
de inters. Haga clic en la columna de referencia para asignar genes de
referencia en un experimento
Muestras. Una lista de los nombres de las muestras que indican la fuente
de la meta, como una muestra
tomadas en una hora (1 hora), o tomado de un individuo en particular
("mouse1"). Haga clic en el control
columna para asignar la condicin de control para un experimento
La figura 41 muestra la ficha Destinos con la configuracin de anlisis de
muestra.
de muestra.
formato:
Haga clic en Importar plantilla para importar los contenidos y de un
archivo delimitado por comas
Haga clic en Exportar plantilla para exportar contenidos y en el archivo de
Excel (. Csv)
Ordenar o editar una columna, seleccinela y uso de estos mtodos:
Ordenar la hoja de clculo de acuerdo a los datos de una columna
haciendo clic en el diamante
al lado de un nombre de columna
Editar el contenido de una columna que tiene un asterisco (*) en la parte
superior, haga clic y escribiendo
cada pozo
NOTA: Seleccione las unidades de los datos de la curva estndar en la
columna de Cantidad por
abrir el Editor de Plata y seleccionando Configuracin> Unidades en la barra
de men. Despus de la
funciona la placa, los datos de estas normas aparecen en la tabla de la
curva estndar de la
Ficha de cuantificacin (ventana de Anlisis de Datos) con las unidades que
usted seleccione. Abrir
la hoja de clculo para importar o exportar el contenido de la placa de Excel
o de otra
TabDelimited formato.
Haga clic derecho en la hoja de clculo para seleccionar una de estas
opciones en el men del botn derecho:
Copia. Copia de la hoja de clculo completa
Copiar como imagen. Copia de la hoja de clculo como archivo de imagen
Impresin. Imprimir la hoja de clculo
Seleccin de impresin. Imprimir slo las celdas seleccionadas
Exportacin a Excel. Exportar el archivo como un archivo de Excel con
formato
Exportar a texto. Exportar el archivo como un archivo de texto
Buscar. Bsqueda de texto en la hoja de clculo
Ordenar. Ordenar la hoja de clculo mediante la seleccin de un mximo
de tres columnas de datos en la ventana para ordenar
CFX96 y CFX384 Manual de Sistemas
53
6 Funcionamiento autnomo
Lea este captulo para obtener informacin sobre la ejecucin del sistema de
CFX96 o CFX384 sistema
modo independiente:
Panel de control (continuacin)
Men principal (pgina 54)
Montaje del ensayo (pgina 55)
Exportacin de datos para el anlisis (pgina 61)
Creacin de un archivo de datos (pgina 64)
Configuracin del correo electrnico (pgina 65)
Panel de control
El panel de control en el termociclador C1000 proporciona acceso a todas
las funciones necesarias para
ejecutar el instrumento que utilizan los siguientes tres componentes:
Pantalla de cristal lquido (LCD): Muestra el men principal y otras
pantallas
Teclado: navegar por las pantallas e introducir comandos con las teclas
Puerto USB: Conecte un dispositivo USB, el ratn o el teclado.
La figura 45 muestra los componentes del panel de control:
Figura 69. Todas las fichas que se pueden mostrar en la ventana de Anlisis
de Datos.
El software slo se muestra una ficha en la ventana de anlisis de datos si
los datos se recogen en el
ejecutar y los datos estn disponibles para ese tipo de anlisis. Por ejemplo,
la curva de fusin y fusin
Datos de la curva las pestaas no aparecen si el experimento no incluye un
paso de curva de fusin.
Barra de herramientas de anlisis de datos
La barra de herramientas en la ventana de Anlisis de Datos (Figura 70)
proporciona acceso rpido a los datos importantes
funciones de anlisis.