CULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

El antibiograma es la prueba microbiolgica que se realiza para determinar la

susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un grupo de antibiticos.
Las tcnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiologa para
estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables
de las infecciones.

Se considera como antimicrobiano cualquier sustancia con capacidad de matar o al

menos de inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible de
utilizacin como tratamiento en los pacientes
El antibiograma tiene cuatro utilidades principales:

La utilidad bsica del antibiograma es la instauracin de un tratamiento

antibitico correcto al paciente.
Es til en el seguimiento e incluso en la confirmacin de tratamientos
empricos. El antibiograma tiene que confirmar, o en su caso corregir el
tratamiento.
Otra aplicacin de las tcnicas de estudio de resistencia es la epidemiologa.
Es necesario detectar el aumento de los niveles de resistencia en los
aislamientos clnicos para tomar medidas correctoras.
puede tener utilidad diagnstica porque el perfil de resistencia puede en algn
caso orientar en la identificacin bacteriana.

Objetivos:
El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa
bacteriana que se sospecha es la responsable de una infeccin a uno o varios
antibiticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la
eficacia in vivo de un tratamiento antibitico. El antibiograma sirve, en primer lugar,
para orientar las decisiones teraputicas individuales.
El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolucin de las resistencias
bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiolgico, a escala de un servicio, un
centro de atencin mdica, una regin o un pas, es como puede adaptarse la
antibioterapia emprica, revisarse regularmente los espectros clnicos de los
antibiticos y adoptarse ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de
programas de prevencin en los hospitales.

Mtodos
En un primer momento, el mtodo estndar utilizado para las pruebas in vitro fue el de
dilucin en caldo, que proporcionaba un resultado cuantitativo. Actualmente existen
varios mtodos que se utilizan para llevar a cabo los estudios de sensibilidad a los
antibiticos y todos ellos se realizan bajo condiciones entandarizadas por organismos
internacionales.

Dilucin en caldo
Se colocan concentraciones decrecientes del agente antimicrobiano, generalmente
diluciones 1:2, en tubos con un caldo de cultivo que mantiene el desarrollo del
microorganismo. Los antibiticos se preparan en "soluciones madre" concentradas y
luego se diluyen en caldo hasta obtener las concentraciones apropiadas.
Un tubo de caldo se mantiene sin inocular como control negativo de crecimiento.
Despus de un periodo de incubacin adecuada se observa la turbidez de los tubos
que indica el desarrollo bacteriano. El microorganismo crecer en el tubo control y en
todos los que no contengan suficiente antibitico que sea capaz de inhibir su
desarrollo. La concentracin de antibitico que presente ausencia de crecimiento es la
Concentracin Mnima Inhibitoria.
Para medir la CMB se debe realizar la prueba de actividad bactericida, que emplea el
mismo sistema de dilucin en caldo que para medir la sensibilidad.
A partir de la CMI, se siembra una cantidad conocida de inculo de cada uno de los
tubos de caldo que no tienen turbidez en placas de agar, y el nmero de colonias que
crece en estos subcultivos, despus de incubar durante la noche, se compara con el
nmero de UFC/ml del cultivo original. La mnima concentracin del agente
antibacteriano que permite sobrevivir a menos de 0,1 % del inculo original se
denomina concentracin bactericida mnima (CBM).
Difusin en agar
Este mtodo incorpora el antimicrobiano a discos de papel de filtro. Su introduccin
permiti agilizar la determinacin de la sensibilidad de las cepas bacterianas frente a
un nmero importante de antimicrobianos de forma simultanea. El empleo de los
discos de papel de filtro para las pruebas de sensibilidad est estandarizado y se
correlaciona con las CMIs. Durante muchos aos, y a pesar de ser una tcnica
puramente cualitativa, el mtodo de difusin por disco (o mtodo Kirby-Bauer), en
funcin sobre todo de su comodidad, economa y fiabilidad, ha sido uno de los ms
utilizados en los laboratorios.
El microorganismo a investigar se inocula en una o varias placas de agar y sobre su
superficie se disponen los discos correspondientes a varios antibiticos. Se incuban
las placas durante 16-24 horas y se estudia el crecimiento en ellas. Se valora el
dimetro de la zona de inhibicin que se forma alrededor de cada disco y se compara
con las referencias oportunas publicadas por la NCCLS. De esta manera se sabe si el
microorganismo es Sensible, Intermedio o Resistente a cada uno de los antibiticos.