REBIOL. Vol.

28, N 2: julio-diciembre, 2008

Organo oficial de la Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo-Per

ARTCULO/ARTICLE

Concentracin mnima bactericida in vitro del

extracto etanlico de propleos de Chepn
(Per) sobre Listeria monocytogenes
In Vitro minimal bactericidal concentration of the propolis
ethanolic extract from Chepen (Peru) on Listeria monocytogenes
Eder A. Diestra Guevara1, Elvia F. Del Castillo-Algarate1, Maritza
Gernimo-Gonzales1, Pedro E. Mercado-Martnez2*
1

Escuela Acadmico Profesional de Microbiologa y Parasitologa. 2Departamento de Microbiologa y

Parasitologa. Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo. Per.
*Autor a quien dirigir correspondencia peemercado_1@hotmail.com

RESUMEN
Se determin la concentracin mnima bactericida in vitro de un extracto de propleos sobre Listeria
monocytogenes. Se utiliz un cultivo bacteriano en fase exponencial media y propleos procedente de
Chepn, La Libertad-Per. El mtodo utilizado fue el de inhibicin mnima microbicida, usando un grupo
control y otro experimental. Para este ltimo se hicieron diluciones al medio, concentraciones desde
15mg/mL hasta 0,01mg/mL, se inocul la suspensin bacteriana y se incub. Posteriormente se sembr
por estra en agar BHI.
Despus de la incubacin se determin la concentracin mnima bactericida del extracto etanlico de
propleos frente a Listeria monocitogenes, cuyo valor fue de 1,23mg/mL.
Palabras clave: concentracin mnima inhibitoria, Listeria monocytogenes, propleos.

ABSTRACT
In vitro minimun inhibitory concentration of the ethanol extract of propolis on Listeria monocytogenes
was determined. For this, a bacterial culture in half exponential phase and propolis from Chepen, La
Libertad-Peru were used. Minimun inhibition microbicide method ws used, as well as, a control and
experimental groups. For the last group dilutions were done in the middle, to concentrations since
15mg/mL until 0.01mg/mL, the bacterial suspensin was inoculated and incubated. Then was sow by
stretch in BHI agar, the minimun inhibitory concentration of the ethanol extract of propolis about
Listeria monocytogenes was determined after incubation, and it was 1.23mg/mL.
Key words: minimun inhibitory concentration, Listeria monocytogenes, propolis.

INTRODUCCIN
L. monocytogenes, bacilo Gram-positivo, mvil, no esporulado, anaerobio facultativo y catalasapositivo, es el agente causal de un sndrome generalizado llamado listeriosis, enfermedad
mundial que est reemergiendo debido a que se trasmite fcilmente a travs de la ingesta de
hortalizas y otros alimentos crudos, para los cuales no hay un proceso de desinfeccin
conveniente para eliminarlo1,2,3,4. La patogenicidad de L. monocytogenes se debe a su capacidad
para adherirse, invadir y multiplicarse dentro de una gran variedad de clulas no fagocticas

(enterocitos, hepatocitos, fibroblastos, clulas endoteliales y clulas dendrticas), lo que lo

convierte en un patgeno multisistmico que puede infectar un amplio rango de tejidos
hospederos, con un claro tropismo por el tero grvido y el sistema nervioso central 5.
La manifestacin primaria de la listeriosis en el hombre puede incluir la presencia de
septicemia, meningitis (o meningoencefalitis) y encefalitis, habitualmente precedida de
sntomas parecidos a los de la gripe, incluida la fiebre. Tambin se presentan manifestaciones
gastrointestinales acompaadas de fiebre. A pesar de que la morbilidad de la listeriosis es
relativamente baja, la mortalidad puede alcanzar valores de alrededor del 30%. En embarazadas,
la infeccin puede dar lugar a abortos, nacidos muertos o nacimientos prematuros6, 7.
El tratamiento oportuno de la listeriosis depende del diagnstico rpido y preciso. Una
condicin para el uso adecuado de los antibiticos es el estudio previo de la sensibilidad de L.
monocytogenes a los antibacterianos, lo que se puede realizar a travs de la determinacin de la
Concentracin Mnimo Bactericida mediante tcnicas establecidas 8,9.
En los ltimos aos se vienen desarrollando investigaciones relacionadas con los beneficios
para la salud humana de productos producidos por las abejas, siendo el propleo uno de ellos10.
ste es un producto resinoso y complejo, con variabilidad en el color (ocre, rojo, pardo, marrn
claro o verde) y el aspecto (friables y firmes o gomosos y elsticos) 11, 12.
Los principales componentes del propleos son resinas y blsamos que contienen flavonoides
y cidos fenlicos o sus steres (50%), ceras (7.5-35%), aceites voltiles (10%), polen (5%) e
impurezas (4.4-19.5%). Adems, contienen pequeas cantidades de terpenos, taninos, restos de
la secrecin de las glndulas salivares de las abejas y posibles contaminantes. Los compuestos
activos de inters mdico son los flavonoides que incluyen flaconas, flavonoles, flavononas y
flavononoles 13. El propleos puede variar de una regin a otra, ya que su presencia se asocia en
parte a las resinas que las abejas recogen de las plantas presentes en el entorno 10.
Al propleos se le atribuyen efectos antiinflamatorios, inmunoestimulantes,
hepatoprotectores,
carcinoestticos,
antimicrobianos,
antivirales,
antifngicos
antiprotozoarios, anestsicos y de regeneracin tisular14, 15. Los disolventes y el mtodo de
extraccin utilizado pueden modificar la actividad antimicrobiana del propleos, habindose
verificado que los extractos etanlicos al 60-80% inhiben el crecimiento microbiano, al 70-80%
tienen una mayor actividad antioxidante y al 80% inactivan a la hialuronidasa 13. As, por
ejemplo, se investig la efectividad antimicrobiana de propleos provenientes de Campeche,
Mxico, sobre Staphylococcus aureus, Salmonella typhi, Pseudomonas aeruginosa y Streptococcus pyogenes,
encontrando que la efectividad depende del solvente empleado, la procedencia del propleos y
la especie bacteriana evaluada12.
Al mismo tiempo, se evalu las propiedades antimicrobianas del propoleos procedentes de:
Serbia, que tienen actividad antimicrobiana contra bacterias gram- positivas y levaduras16;
Turquia, que son efectivos contra 20 especies de bacterias, de las cuales L. monocytogenes mostr
ser una de las ms sensibles17; Argentina, Colombia y Cuba, que poseen cualidades de inhibir el
crecimiento de Streptococcus mutans ATCC25175, a concentraciones de 15 a 3.75 mg/mL 18; y de
Bulgaria, que son activos contra Helicobacter pylori 19.
Se investig, asimismo, la influencia estacional y la actividad antimicrobiana de propleos
provenientes de dos zonas climticas de Venezuela sobre Staphylococcus aureus y Micrococcus
luteus., cuyos resultados muestran que el efecto de los propleos vara de acuerdo a la influencia
estacional y que los extractos etanlicos de propleos pueden ser usados como agentes
antimicrobianos frente a las bacterias estudiadas10, al mismo tiempo que se pudo determinar
que la actividad microbiana de propleos provenientes de dos regiones diferentes de Anatolia,
se debe principalmente al cido cafeico y sus steres presentes en los propleos20.
Tambin se ha determinado la accin antibacteriana del extracto etanlico de propleo
peruano (EEPP) proveniente del valle de Oxapampa- Pasco, sobre Streptococcus mutans y
Lactobacillus casei, verificandose que el EEPP, en solucin al 0.8%, tiene una mejor accin
antibacteriana contra estas bacterias respecto de la Clorhexidina al 0.12% 21.
Considerando que L. monocytogenes es una bacteria patgena para el hombre y que en el Per no
se ha investigado sobre la sensibilidad de esta bacteria a los componentes antibacterianos
presentes en el propleos, esta investigacin est orientada a determinar la concentracin

mnima bactericida in vitro del extracto etanlico de propleos, proveniente de Chepn,

sobre la supervivencia L. monocytogenes.
MATERIAL Y MTODOS
Material
Se trabaj con cultivos puros de Listeria monocytogenes proporcionados por el Laboratorio de
Fisiologa y Gentica Bacteriana de la Universidad Nacional de Trujillo y con propleos
procedente de Chepn, La Libertad (Per) cuyo extracto etanlico se obtuvo en la Facultad de
Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo.
Resiembra de Listeria monocytogenes
Se tom una asada de cultivo de Listeria monocytogenes y se sembr por estra en agar BHI
(infusin cerebro corazn), luego se incub a 37 C por 16 horas, tiempo en que la bacteria se
encuentra en fase exponencial media22.
Obtencin del inculo
Se prepar una suspensin de Listeria monocytogenes, cuya concentracin corresponda al tubo
N 3 de la escala de Mc Farland equivalente a 9 x 108 clulas/mL) 12.
Determinacin de la Concentracin Mnima Bactericida
Se emple el mtodo de Inhibicin Mnima Microbicida12, que consisti en lo siguiente:
Se emplearon dos tubos controles: un control positivo conteniendo 2 mL de caldo BHI y 0,1
mL de la suspensin bacteriana; y un control negativo conteniendo solo 2 mL de caldo BHI.
Se prepar una serie de 11 tubos, al primero se le agreg 2 mL de caldo BHI a doble
concentracin y a los restantes la misma cantidad de caldo BHI a simple concentracin.
Al primer tubo se le adicion 2 mL de extracto etanlico de propleo al 3% (30mg/mL), de
este se tom una alcuota de 2mL que se aadi al siguiente tubo y as se procedi con los
tubos restantes hasta desechar los ltimos 2 mL, de esta forma se obtuvieron las siguientes
diluciones del extracto etanlico de propleo: 15; 7,5; 3,75; 1,87; 0,93; 0,46; 0,23; 0,11; 0,05;
0,02; 0,01 mg/mL.
A cada tubo se agreg 0,1 mL del inculo bacteriano. Los tubos del grupo control y
experimental se incubaron a 37C por 24 horas. Posteriormente se tom una asada de cada
tubo y se sembr por estra en agar BHI, luego se incub nuevamente a 37C por 24 horas.
De las placas donde no se observ crecimiento de Listeria monocytogenes se escogi la de
menor concentracin, est correspondi a la concentracin mnima bactericida del extracto
etanlico de propleo sobre la bacteria evaluada.
RESULTADOS
Se encontr que el extracto etanlico de propleo de Chepn tiene un efecto bactericida
sobre Listeria monocytogenes, lo cual se evidencia por la ausencia de crecimiento de esta bacteria;
se determin que a partir de la concentracin de 1.87mg/mL la falta de crecimiento es total y que
a las concentraciones de 0.93mg/mL se aprecia crecimieto en algunos de los ensayos (Tabla 1).
Se encontr, tambin, que la concentracin inhibitoria mnima en el ensayo 1 fue de
0.23mg/mL y en los ensayos 4, 5, 6 y 7 de 1.87mg/mL (Tabla 2)
Tabla 1. Concentracin Mnima inhibitoria del extracto etanlico de propleos de Chepn (Per) sobre
Listeria monocytogenes

Tabla 2. Valores de las concentracin mnima bactericida obtenidos al evaluar, en siete ensayos, el efecto
del extracto etanlico de propleo sobre Listeria monocytogenes.

Ensayo

Concentracin
mnima
bactericida(mg/mL)

0,23

0,46

0,46

1,87

1,87

6
7

1,87
1,87

Concentracin mnima bactericida promedio (X)= 1,23 mg/m L

DISCUSIN
La concentracin mnima bactericida obtenida en esta investigacin es de 1,23 mg/mL, sin
embargo Yang et al22 revelaron que el extracto etanlico de propleo en una dosis de 0,0075
mg/mL o superior a esta, ejercen un efecto bactericida sobre L. monocytogenes. Por lo antes dicho,
el extracto etanlico proveniente de la provincia de Chepn es menos efectivo que el propleo
empleado por Yang; pues es necesario una concentracin mayor de este propleo para inhibir a
Listeria monocytogenes. Incluso el propleo puede tener un menor efecto inhibitorio sobre la
bacteria o sta mostrar resistencia ante esta sustancia15.
En un estudio del efecto antimicrobial del extracto de propleo turco sobre distintas especies
microbianas, se determin el efecto bactericida de esta sustancia sobre Listeria monocytogenes, a la
concentracin de 0.02% (vol/vol) 23. En general, la actividad antimicrobiana de los propleos es
atribuida al contenido de flavonoides. Estas sustancias actan sobre las bacterias generando
complejos con protenas extracelulares y protenas solubles15, inhibiendo la girasa del DNA,
inhibiendo la funcin de la membrana citoplasmtica e inhibiendo el metabolismo energtico de
las clulas16.
La actividad del propleo frente a Listeria monocytogenes puede variar segn la procedencia de
esta resina, ya que de esto depende su composicin qumica.
CONCLUSIN
La concentracin mnima bactericida in vitro del extracto etanlico de propleo
proveniente de Chepn sobre Listeria monocytogenes es de 1,23 mg/mL.
AGRADECIMIENTO
A la Ph. D. Nydia Cataeda, por sus consejos y apoyo incondicional para llevar a cabo la
investigacin.
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