A bioquimica, metabolismo e defeitos hereditarios da via pentose fosfato

introduo
A via da pentose fosfato (PPP) constitudo por duas partes distintas, as quais preenchem dois papis
especficos: um oxidante, filial no reversvel, que permite a reduo de NADP + a NADPH durante a
converso de glucose-6-fosfato a uma pentose fosfato e CO2, e um no -oxidativa, ramo reversvel que
liga fosfato de pentose com intermedirios glicolticas.
Nos ltimos anos, nosso grupo descobriu dois novos defeitos no PPP. O primeiro defeito, ribose-5-fosfato
isomerase deficincia (RPI), foi diagnosticada em um paciente, que se apresentou com uma progressiva
lentamente Leuko encefalopatia (Huck et al 2004; van der Knaap et al 1999). O segundo defeito
transaldolase deficincia (TALDO), e no incio do presente projecto de doutoramento apenas seis
pacientes de trs famlias tinham sido diagnosticados (Valayannopoulos et al 2006; Verhoeven et al 2001,
2005). TALDO deficincia est associada com sintomas de fgado, ao passo que outros rgos so
atingidos em graus variados. Estes dois defeitos so raros, e, embora o
Desfazer edies
enzimas responsveis esto presentes na mesma parte reversvel do PPP, o fentipo clnico de cada um
deles completamente diferente.
Durante este projecto de doutoramento os objetivos da pesquisa foram:
1 Para caracterizar o padro normal de metablitos envolvidos na PPP (poliis, acares e acar,
fosfatos) e para melhorar o diagnstico de pacientes com suspeita de defeitos no PPP.
2 Para explorar o fentipo clnico e pathophys iology de deficincia TALDO humano.
3 Para identificar novas reaes associadas com o PPP, e para investigar a sua inter-relao com outras
vias.
Via das pentoses fosfato
A via da pentose fosfato (PPP), tambm conhecido como o shunt hexose-monofosfato, fornece uma via
alternativa para a oxidao da glicose. Na maioria dos tecidos de 80-90% da oxidao da glicose atravs
da gliclise , 10-20% e o restante ocorre atravs do PPP. A via no necessita de oxignio, e no gera
ATP. Encontra-se presente no citosol de todas as clulas e tem duas funes principais: (1) produo de
NADPH, que usado como um agente redutor, em muitos biossintticas path-ways e tambm
importante para a proteco contra os danos oxidativos, e (2) sntese de ribose 5-fosfato, o qual
necessrio para a sntese de cidos nucleicos e de nucleotdeos. O percurso pode ser dividido em dois
ramos. O ramo oxidativo consiste em trs reaces irreversveis, que resultam em NADPH e produo de
fosfato de pentose. O ramo no oxidativa da via de pentose fosfato reconverte em glicose-6-fosfato
(glucose-6P), e dois dos compostos intermdios, a frutose-6P e gliceraldedo-3P (GA-3P), so tambm
intermedirios glicolticas. As reaes es-no ramo no-oxidativa so reversveis. O fluxo de glicose
atravs do 6P-PPP ou gliclise dependente do requisito de NADPH celular, ribose-5P e ATP.
PPP oxidativo
A ramificao oxidativa do PPP comea com a desi-drogenation de glucose-6P, uma reaco catalisada
pela glucose-6P-desidrogenase (G6PD) com concomitante produo de NADPH (Fig. 1, A). O produto,
6-phosphoglucono-d-lactona rpida e irreversvel hidrolisado por uma lactonase especfico para se obter
6-fosfo-gluconato. O ltimo oxidativamente descarboxilado por 6-fosfogluconato desidrogenase
(6PGD) para produzir ribulose-5P, CO2 e NADPH.
No-oxidativa PPP
Os intermedirios da gama ramo no oxidativa de trs a sete carbonos de carbono-espcies. O Ribu
perder-5P-produzido pela ramificao oxidativa pode ser isomerizado a ribose-5P por RPI, ou
epimerizado para 5P-xilulose por ribulose-5P epimerase (Fig. 1, B). Ribose-5P incorporado nucletidos
e cidos nucleicos. No entanto, a necessidade de NADPH em processos biossintticos muitas vezes
superior ao de ribose-5P para a sntese de nucletidos. Nestes casos, a ribose e 5P-5P-xilulose so
convertidos em GA-3P e sedoheptulose 7P-a-trans-ketolase e posteriormente metabolizado em eritrose-4P
e frutose-6P por TALDO. Finalmente, converte transcetolase eritrose-4P e 5P-xilulose em GA-3P e

frutose-6P. E transcetolase TALDO formar uma ligao reversvel entre o PPP e gliclise atravs da
produo de GA-3P e frutose-6P.
Funes do PPP
Ao produzir NADPH e ribose-5P, o PPP tem vrias funes na proteo contra o estresse oxidativo, em
hipxia e em clulas que se dividem rapidamente, incluindo clulas malignas.
Produo de NADPH
A principal funo da ramificao oxidativa do PPP a produo de NADPH, que serve como co-factor
para muitas reaces. O NADPH / NADP + relao geralmente> 1,0. G6PD e 6PGD so responsveis
pela maior parte da NADPH produzido no citosol. Outras enzimas, como a isoforma citoslica da enzima
mlico, a forma citoslica de NADP + isocitrato desidrogenase dependente de quinase e aldedo
desidrogenase NAD, responsvel pelo restante da NADPH produzido no citosol (Pollak et al 2007)
As piscinas NADPH citoslico e mitocondrial-tas a ser mantido de forma independente. NADPH usado
para a reduo da glutationa oxidada (GSSG) para glutationa reduzida (GSH). GSH importante para a
desintoxicao de espcies reactivas de oxignio (ROS) e converte o perxido de hidrognio reactivo em
H2O. NADPH usado tambm em muitas vias anablicas, tais como a sntese de lpidos, a sntese do
colesterol e de alongamento da cadeia de cido gordo. O NADPH / NADP + par essencial para manter a
GSH na sua forma reduzida, e para manter a produo de determinadas hormonas (por exemplo, estradiol,
testosterona). At agora, no se sabe como as piscinas de NADPH em diferentes organelas, clulas e
tecidos so gerados e regulados. provvel que as clulas no dependem de um nico sistema NADPH
gerao dada a ameaa permanente de dano oxidativo (Pollak et al 2007). Para eritrcitos apenas as
enzimas do PPP oxidativo esto presentes e deficincia de G6PD, a enzima limitante, pode resultar em
anemia hemoltica, devido a uma diminuio potencial redox.

Produo de ribose
D-Ribose sintetizado a partir da glucose-6P glicolticas ou intermedirios atravs de qualquer um dos
ramos do oxidativo (catalisado pela G6PD e 6PGD) ou o ramo de no-oxidativo do PPP (catalisado pela
transcetolase e TALDO) atravs de D-ribose-5P. Ribose e desoxirribose seu produto metablico
representam os componentes de acar do RNA e DNA, respectivamente, e, por conseguinte,
desempenham um papel chave na diviso de clulas. Ribose tambm um componente de numerosos
outros intermedirios celulares, incluindo o ATP, ADP, AMP, cAMP, coenzima A, FAD, NAD (P) + e
NAD (P) H. O fluxo de glucose-6P, quer atravs dos ramos oxidativas ou no-oxidativo do PPP, ou
atravs da gliclise, depende dos requisitos para a NADPH, ribose-5P ou ATP.
O estresse oxidativo
O PPP regulada por um certo nmero de processos celulares, incluindo o stress oxidativo. O estresse
oxidativo causado por um desequilbrio entre a produo de espcies reativas de oxignio e uma
capacidade system_s biolgico para desintoxicar os intermedirios reativos ou reparar o dano resultante.
Nos seres humanos, o stress oxidativo est envolvido em muitas doenas, tais como a aterosclerose, a
doena de Parkinson e doena de Alzheimer, mas pode tambm ser importante no envelhecimento. ROS
pode ser benfico, uma vez que so utilizados pelo sistema imunitrio como uma forma de atacar e matar
agentes patognicos. ROS so tambm utilizados em sinalizao celular. G6PD a enzima chave na
regulao da PPP e pode fornecer um marcador precoce de estresse oxidativo, uma vez que reage
rapidamente com o aumento da procura de NADPH necessrio para a manuteno do estado redox
celular. O estado redox essencial para manter a glutationa na sua forma (GSH) reduzida. Assim, o PPP
fornece a maioria dos equivalentes redutores na forma de NADPH, que so necessrios para a
regenerao de glutationa GSH dissulfureto (GSSG), um processo catalisado pela glutationa-redutase
(Kletzien et al 1994). A deficincia de G6PD em eritrcitos resulta em sensibilidade celular (hemlise) ao
stress oxidativo a partir de substncias alimentares (por exemplo, a partir de divicine favas) ou frmacos
tais como Primaquina (Luzzatto 1987). Os eritrcitos no pode responder adap-tivamente aos oxidantes
no nvel de expresso do gene, ou por meio de produo de NADPH, uma vez que os eritrcitos no
contm isocitrato desidrogenase.
Inactivao da desidrogenase GA-3P glicoltica (GAPDH) detectada na maioria dos tipos de clulas

submetidas a oxidantes, tais como os perxidos de hidrognio (Chuang et al 2005; dastoor e Dreyer et
2005; Du et al 2003; Janero al 1994; et al Shenton 2002; Newman et al 2007). Tem sido proposto que a
inactivao GAPDH pode resultar em um redirecionamento do fluxo de hidrato de carbono (Chuang et al
2005; Shenton e Grant 2003) a partir de gliclise para o PPP. Aumento da actividade do PPP tem sido
observada em cardiomicitos de ratos neonatais, bem como em clulas epiteliais humanas durante o stress
oxidativo (Janero et al 1994; Goffe Le et al, 2002). Em levedura, mostramos que a actividade reduzida de
GAPDH ou triose fosfato isomerase (TPI), a enzima directamente a montante do GAPDH, conduz ao
aumento dos nveis de metabolitos de PPP e NADPH (Ralser et al 2007). Por conseguinte, parece
plausvel que a inactivao da GAPDH e funes da TPI como um comutador celular para o
reencaminhamento do fluxo de hidratos de carbono, a fim de manter o celular NADPH / NADP + e
equilbrio pa-interajam estresse oxidativo.

Hipxia
PPP actividade durante hipoxia (isqumia) tem sido estudado principalmente no msculo cardaco e
vascular. Resultados de hipoxia em aumento ROS e perxido de hidrognio para a desintoxicao
exigindo GSH atravs da glutationa peroxidase e, portanto, NADPH. Em ratos, a atividade de G6PD ea
gerao de NADPH pela PPP aumenta rapidamente durante a isquemia-reperfuso em coraes isolados.
Ratinhos sem o enzima G6PD exibiram maior sensibilidade isqumia-reperfuso induzida por contrao
e disfuno diastlica, associada com a depleo de tiis intracelulares e perda de homeostase redox (Jain
et al 2004). Estes resultados indicam que a funo do PPP oxidativo tem um papel importante na defesa
contra a disfuno induzida por stress oxidativo cardaco durante a isquemia-reperfuso. Mecanismos
contrcteis controladas por nveis de NADPH / NADP + pode ser um factor contribuindo para a resposta
contrctil hipoxia (Wolin et al 2007), uma vez que a hipoxia foi tambm observada para aumentar os
nveis de glucose-6P e NADPH em artrias de ratos isolados pulmonares e pulmes (Gupte et al 2006).
Cncer
Em tecidos malignos, h um aumento do metabolismo da glicose, o principal substrato da PPP. A glicose
utilizada para a sntese aumentada de cidos nucleicos nas clulas malignas. Ribose, o componente de
acar de cidos nucleicos, sintetizado a partir da glicose ou glico-lticas intermedirios, quer atravs da
ramificao oxidativa do PPP (catalisado pela G6PD e 6PGD) ou o ramo de no-oxidativo (catalisado
pela transcetolase e TALDO). Transcetolase reaes so estritamente tia-mina-dependente, e 70% de
ribose isolada do tumor de clulas de RNA sintetizada atravs da reao transcetolase tia-minadependente. A tiamina oxythiamine anlogo , portanto, um inibidor eficaz da proliferao do tumor por
inibio da actividade de transcetolase. Trs genes foram relatados transcetolase at agora (TKT, TKTL1
e TKTL2) (Coy et al 2005), TKTL1 mRNA e pro-tena encontrado sobre-expresso em tumores
invasivos (Langbein et al 2006). Menos de 30% de ribose sintetizada pelos passos oxidativos de PPP.
Condies proliferativas em tecidos normais e de tumor so acompanhadas por um aumento da actividade
de G6PD (Ramos-Montoya et al 2006). Oxythiamine combinado e dehidroepiandrosterona (DHEA, um
inibidor no-competitivo de G6PD) interveno pode resultar em completa inibio da sntese de ribose, e
pode representar uma nova estratgia para novas terapias de cncer (Ramos-Montoya et al 2006).
Caminhos ligadas ao PPP
O PPP ligado a duas vias de metabolismo de hidratos de carbono, a gliclise e a via do cido
glucurnico.
Gliclise
Gliclise, intimamente interligado com o PPP, a via principal de metabolismo de hidratos de carbono,
que ocorre no citosol de todas as clulas. Gliclise converte a glicose em piruvato (Fig. 1, C). Em
organismos aerbicos, pyru-vado pode entrar na mitocndria gliclise, em ligao com o ciclo do cido
ctrico e da cadeia de transporte de electres, em que a maior parte da energia livre de glicose
produzida. A entrada de glicose para dentro da clula mediada por transportadores especficos de tecido
GLUT. Dentro da clula, a glicose fosforilada em glicose-6P por glucoquinase ou hexo-quinase. Todos
os intermedirios entre glicose e piruvato so fosforilados, garantindo assim que no deixe o celular. A
primeira fase de gliclise requer ATP. Glicose, um substrato de seis carbonos, convertida em duas, trs-

carbono intermedirios, dihidroxiacetona fosfato diclcico-(DHAP) e GA-3P. Esta sequncia de reaces

requer duas moles de ATP por mole de glucose. GA-3P e DHAP so interconversveis pela TPI. A
segunda etapa da gliclise resultados na produo de ATP. GA-3P metabolizado pela GAPDH e
posteriormente oxidada a piruvato, simultaneamente produzir 2 moles de ATP e 1 mol de NADH por cada
mole de GA-3P.
Via do cido glucurnico
Similar ao PPP, a via metablica do cido glucurnico (via do cido urnico) uma via alternativa para a
oxidao de glicose que no produz ATP, mas no produz activado UDP-glucuronato. A via do cido
glucurnico comea com a converso de glicose em glicose-6P-1P por fosfoglucomutase, o qual ento
activado para UDP-glucose por UDP-glucose pirofosforilase (Fig. 1, D). UDP-glicose oxidada para
UDP-glucuronato de NAD + que requer UDP-glucose desidrogenase. UDP-glucuronato serve ento como
um precursor para a sntese de cido idurnico e de UDP-xilose e incorporado proteogly-latas e
glicoprotenas ou conjugados com bilirrubina, esterides, xenobiticos, drogas e muitos outros compostos
contendo hidroxilo (JOH) grupos.
Glucuronato reduzido a L-gulonate, o precursor directo do ascorbato naqueles animais capazes de
sintetizar esta vitamina, numa reaco dependente de NADPH. Em seres humanos e outros primatas,
assim como cobaias, morcegos e alguns pssaros e peixes, o cido ascrbico no pode ser sintetizado por
causa da ausncia de L-gulonolactone oxidase. L-Gulonate ento oxidado a 3-ceto-L-gulonate, que
ento descarboxilado a L-xilulose. L-Xilulose convertido para o ismero D por uma reduo dependente
de NADPH em xilitol, seguido por oxidao, numa reaco dependente de NAD a D-xilulose. Aps a
converso de D-xilulose-5P, metabolizado atravs do PPP.
Doenas hereditrias do PPP
Ribose-5-fosfato-isomerase de deficincia (RPI)
Acumulao dos pentitols ribitol e arabitol no crebro e fluidos corporais foi descrita pela primeira vez
em um paciente com uma leucoencefalopatia lentamente progressiva de origem desconhecida (van der
Knaap et al 1999). RPI deficincia foi descrito por Huck e colaboradores (2004). Desde ento, nenhum
dos pacientes adicionais com deficincia RPI tm sido descritas.
A apresentao clnica
O paciente com RPI (CE 5.3.1.6) deficincia (OMIM 608611) apresentaram psicomotor lento o
desenvolvimento, desenvolvimento da fala, especialmente atrasado (Huck et al 2004; van der Knaap et al
1999). Com a idade de 4 anos ele desenvolveu epilepsia. A partir da idade de 7 anos, ele regrediu, com
deteriorao da viso, fala, coordenao motora, andar e controle das crises. Neurolog ical exame com a
idade de 14 anos, mostrou alguns espasticidade, atrofia ptica bilateral, e nistagmo em olhar lateral, um
aumento Masseter reflexo e disartria cerebelar / pseudobulbar mista. Ele tinha ataxia cerebelar
proeminente de seus braos e pernas e neuropatia perifrica leve. Ele tinha retardo mental grave-dao,
mas suas parmetros de crescimento foram normais. Ele no tinha nenhuma disfuno orgnica
organomegalia ou interno. Ele agora est em seus vinte anos.
A ressonncia magntica (RM), s 11 e 14 anos de idade apresentaram anormalidades extensas da
substncia branca cerebral com envolvimento proeminente do U-fibras. A substncia branca cerebral
anormal tinha uma aparncia anormalidade metablica
Na urina, plasma e CSF, concentraes elevadas do ribitol pentitols e arabitol foram detectadas (Tabela
1), e tambm D-xilulose foi elevada na urina. Estes metabolitos so postulados para derivar a partir de
intermedirios de PPP (Fig. 2). As concentraes de ribitol e arabitol exibido um gradiente crebro /
LCR / plasma de 70:40:1 para arabitol e 125:55:1 para ribitol. Mio-inositol concentraes no CSF foram
diminudos (2 - a 10 vezes, em comparao com os controlos) (van der Knaap et al 1999).
defeito enzimtico
Por incubao de fibroblastos ou linfoblastos com ou ribose-5P ou 6-fosfogluconato, a actividade do RPI
foi seguido medindo os acar-fosfato a partir de inter-medeia o PPP. Diminuio da atividade foi demtrada no paciente RPI-deficiente (Huck et al 2004).ligeiramente inchada com alguma ampliao da giros.
Espectroscopia de ressonncia magntica (MRS), realizado em 14 anos de idade, revelou ressonncias
anormais na regio 3,5-4,0 ppm, correspondente a arabitol e ribitol.

Gentica e estrutura
O gene RPIA humano (GenBank # NM_144563) est localizado no locus 2p11.2 e tem 9 exes. Humano
RPIA consiste de um monmero de 311 aminocidos. A sua estrutura esperado que seja semelhante ao
RPIA levedura, que tem sete hlices alfa-e beta-fios 14 e funciona como um homotetramer (GRAILLE et
al 2005).
Dois alelos mutantes foram demonstradas no paciente RPI-deficiente: a uma deleo (c.540delG),
resultando num desvio de enquadramento no codo 181 e uma protena truncada previsto de 196
aminocidos, e uma mutao missense c.182C> T, resultando em uma substituio de Ala-Val-(p.A61V).
A descoberta de dois alelos mutantes no paciente e os pais aparentemente saudveis sugere herana
autossmica recessiva.
Diagnstico
O diagnstico de deficincia RPI pode ser feita por meio da anlise de acares e poliis em urina,
plasma, ou CSF. Urinria ribitol e arabitol, bem como xilulose, so elevadas (mais de 10 vezes o limite
superior dos intervalos de referncia). Concentraes elevadas dos pentitols tambm so observadas em
CSF. As concentraes urinrias de os acares sete carbonos so normais (Tabela 1), o inverso da
deficincia TALDO. A confirmao pode ser obtida atravs da medio dos acar-fosfato intermediates em fibroblastos ou linfoblastos aps incubao com ou ribose-5P ou 6-fosfogluconato e por anlise
da sequncia do gene RPIA (Huck et al 2004). In vivo MRS crebro revela picos elevados na regio 3,54,0 ppm que correspondem a arabitol e ribitol.
Tratamento e prognstico
As opes teraputicas para a deficincia RPI ainda no foram identificados.
Fisiopatologia
Embora a contribuio quantitativa da PPP para o metabolismo da glucose no crebro de adulto mnima
(inferior a 5%), numerosas experincias usando inibidores especficos e os estudos confirmam a
importncia do desenvolvimento e do papel ^ Bfunctional desta via no crebro. O PPP pode ter um papel
essencial durante o desenvolvimento do crebro (Baquer et al, 1977), como se segue: (1) atravs do
fornecimento de ribose-5P no desenvolvimento precoce para a sntese de cidos nucleicos e depois para a
rotatividade de ARN, e (2) a via de NADPH fornece para lpidos e colesterol sntese (importante para a
mielina), a produo de neurotransmissores e a remoo de H2O2 (para proteger as membranas
celulares).
No nico paciente com deficincia RPI, especula-se que os resultados da produo diminuda de NADPH
em mielinizao incompleta, resultando em homeopatia-leukoencephal. A neuropatia pode representar
intoxicao com altas concentraes de poliis (ribitol e arabitol) no crebro (Huck et al 2004), como
observado em galactosemia mellitus ou diabetes quando galacticol ou sorbitol acumula nos nervos. A
ausncia de per-eral envolvimento de rgos nos rgos patient_s sugere um papel fundamental para o
RIP no crebro. Pois apenas um paciente foi diagnosticado com deficincia RPI uma associao sem
causalidade com o fentipo neurolgico possvel, e necessrio encontrar outros pacientes para
esclarecimento do fentipo.
Transaldolase deficincia (TALDO)
A deficincia de TALDO foi descrita pela primeira vez em 2001 (Verhoeven et al 2001), com sete
pacientes adicionais diagnosticados.
Variabilidade fenotpica
TALDO deficincia (CE 2.2.1.2) (OMIM 606003) foi diagnosticado em cinco famlias (8 pacientes; 3
meninas e 5 meninos) (Fung et al 2007; Valayannopoulos et al 2006; Verhoeven et al 2001, 2005;
Wamelink et al 2008a ) (Fig. 1, B). Doena heptica est presente em todos. Os pacientes nasceram
consangneos turco, rabe Emirados ou casais paquistaneses, sugerindo alelos raros na populao
humana. Em uma famlia de quatro pacientes foram afetados, incluindo um feto de 28 semanas
apresentando hidropsia primeiros pr-natal e uma sndrome polymalformative. Todos os pacientes
apresentaram no perodo neonatal ou pr-natal com hepatoesplenomegalia, testes de funo heptica
anormais, fibrose heptica e anemia hemoltica (Tabela 2). A maioria mostrou dismrficos (inclinao
anti-mongolide, por exemplo, baixa de orelhas e cutis laxa), edema neonatal, defeitos cardacos
congnitos, renal problemas (tubulopatia, insuficincia renal, nefrocalcinose) e / ou hipoglicemia

intermitente. Mental e desenvolvimento motor foi normal na maioria, em que a avaliao foi possvel
(trs pacientes morreram antes da idade de 6 meses). Em casos isolados clitris aumentado, microfalo
surdez sensrio-neural e condutor, e raquitismo foram anotados. MRI e MRS do crebro no revelou
anormalidades.
Patologia do fgado inclui dano hepatocelular e degenerao dos hepatcitos ou hepatcitos hiperplsicos
e ampliada com fibrose
anormalidade metablica
TALDO deficincia apresenta elevada urina eritritol, arabitol, ribitol, sedoheptitol, perseitol,
sedoheptulose, mannoheptulose e sedoheptulose 7P-(Verhoeven et al 2001, 2005; Wamelink et al 2005a,
b, 2007) (Tabela 3). Elevaes so marcantes no perodo neonatal, e mais sutil em pacientes mais velhos.
No plasma e LCR, talvez haja apenas pequenas elevaes poliol.
defeito enzimtico
Deficincia TALDO detectada atravs da medio da formao de acar-fosfato intermedirios aps a
adio de ribose-5P a homogeneizados de eritrcitos, fibroblastos, linfoblastos e / ou de tecido do fgado.
No houve actividade TALDO detectvel em todas as amostras dos pacientes.
Gentica e estrutura
O ser humano TALDO gene (TALDO1; GenBank # NM_006755; gi 5.803.186) est localizado no
cromossomo 11p15.5-p15.4 e um pseudogene est no cromossomo 1p34.1-p33. O gene consiste em cinco
exes (Banki et al 1994). Humano TALDO um monmero de 337 aminocidos. A estrutura do ncleo
um alfa oito cadeias / barril beta formada por oito fios paralelos beta-e 14 alfa-helicoidal regies (Thorell
et al 2000). Na estrutura de cristal, humano TALDO operativo como um dmero.
At agora, trs mutaes homozigticas foram detectados, incluindo uma deleo 3 (c.512-514delCCT)
resultando em p.Ser171del (cinco pacientes), uma mutao sem sentido c.574G> A (p.Arg192His) (dois
pacientes) ou c.575C> T (p.Arg192Cys) (um paciente), substituindo Argi-nine 192 ou com histidina ou a
cistena. Arginina 192 proposta para fazer parte do local de ligao do fosfato, envolvida na catlise
(Thorell et al 2000). Homozigose allica, padro de herana e localizao cromossmica confirmam
herana autossmica recessiva.
O gene TALDO1 portador da mutao p.Ser171del transcrita, mas no protenas ou a actividade
enzimtica detectada em fibroblastos ou linfoblastos a partir de um paciente com essa mutao
(Grossman et al 2004). O tratamento com inibidores de proteossomas sugere que a supresso da Ser171
leva inactivao e protea-alguma degradao mediada de TALDO.
diagnstico
TALDO recicla pentose-P em glicolticas intermedi-ates em conjunto com transcetolase, e deficincia
resulta TALDO na acumulao de poliis e sete carbonos acares provavelmente derivadas a partir de
intermedirios da via (Fig. 2). Diagnstico de deficincia de TALDO conseguida por concentraes de
urina elevadas destes intermedirios (Wamelink et al 2005a, b, 2007). Elevat-ed concentraes de
sedoheptulose-7P pode ser detectado em manchas de sangue, o que sugere que a triagem neonatal pode
ser vivel (Huck et al 2003). MRS no informativo, e o padro de ouro de diagnstico a medio da
actividade in vitro e TALDO anlise da sequncia TALDO gene.
Diagnstico pr-natal
O diagnstico pr-natal possvel atravs da anlise da sequncia do gene TALDO em vilosidades
corinicas e amnicitos. Aumento das concentraes de sedoheptulose e ribitol foram detectados no
lquido amnitico de um feto afetado (Wamelink et al 2008b). O diagnstico pr-natal pode tambm ser
possvel atravs da medio sedoheptulose e ribitol no sobrenadante lquido amnitico.
Tratamento e prognstico
As opes teraputicas para a deficincia TALDO permanecem indefinidos. O tratamento deve tentar
restaurar a fisiopatologia dis-turbed ou para substituir os rgos afetados (por exemplo, o transplante de
fgado ou hepatcitos).
Fisiopatologia
TALDO tem sido proposto como a enzima limitante da velocidade do ramo no-oxidativo do PPP
(Gumaa et al 1969; Vatanaviboon et al 2002), enquanto que o ramo de G6PD controla oxidativo. Os dois
ramos esto interligados. O ramo no oxidativa converte ribose-5P em glicose-6-P e indirectamente

contribui para a produo de NADPH. A actividade de TALDO parece estar ligada actividade de G6PD.
A sobre-expresso de TALDO em Jurkat e H9 humanas resultados linhas de clulas T de uma diminuio
da actividade de G6PD e 6PGD e NADPH e nveis de GSH, enquanto que a actividade reduzida TALDO
nestas clulas induz um aumento actividades G6PD e 6PGD e nveis de GSH (Banki et al 1996). Clulas
com superexpresso TALDO foram mais suscetveis apoptose induzida por vrios mecanis-mos,
enquanto as clulas com atividade reduzida TALDO mostrou inibido apoptose. O impacto da deficincia
TALDO aparece tipo de clula e da espcie, uma vez que os nveis de NADPH e GSH so reduzidos em
TALDO camundongos deficientes (Perl et al 2006), em oposio a ser aumentada em linhas de clulas
com actividade TALDO reduzida. Reduzidos de protena e actividades de G6PD enzima foram detectados
em clulas de um paciente com deficincia de TALDO (Qian et al 2008).
Em oito pacientes com diagnstico de deficincia TALDO h evidncia de diminuio da NADPH + /
NADP, conduzindo diminuio da actividade da NADPH-dependente reaces (ou seja, a biossntese do
colesterol, hormona me-tabolism) (Wamelink et al, 2008a). Colesterol baixo, estradiol, testosterona ou
nveis de vitamina D foram detectado em um ou mais pacientes. Anemia hemoltica foi observada na
maioria dos pacientes, talvez relacionados com a diminuio da produo de NADPH nos eritrcitos.
O quadro clnico da deficincia de TALDO dominados por fibrose heptica / cirrose, resultando em
perma-nente tecido cicatricial. Desde TALDO tem sido reconhecida como um regulador de
processamento de sinal de apoptose (Banki et al, 1996), esta pode ter relevncia para a patognese da
doena do fgado. Por fim, acumulao de sedohep-tulose-7P e sedoheptulose tem sido sugerido que tm
uma relao causal com alguns dos sintomas clnicos.
Distrbios do metabolismo dos carboidratos relacionados
Outras doenas hereditrias do metabolismo de carboidratos esto intimamente relacionados com RPI ou
deficincia TALDO quer atravs da associao com poliis acumulados ou ser-causar via de interrelaes com o PPP.
Pentosuria essencial
Pentosuria essencial foi reconhecida como um erro inato do metabolismo, em 1892 (Hiatt, 2001).
Indivduos excretam 1-4 g por dia de L-xilulose pentose na urina. Pentosuria essencial considerada uma
condio benigna, que resulta de um defeito na via glucurnico oxidao. Os resultados metablicos
bloco de actividade reduzida do xilitol NADP-linked desidro-oxigenase (EC 1.1.1.9), a enzima que
catalisa a converso da L-xilulose a xilitol (Fig. 1, D).
L-Arabinosuria
Em 2002, uma menina de 16 meses de idade, com atraso no desenvolvimento motor, dismorfismo facial,
palatoschizis e vrias anormalidades esquelticas incluindo hipo-plstico escpulas, OS hipoplsica ilea, e
uma cifose extrema cervical (Onkenhout et al 2002). Grandes quantidades de L-arabinose foram
detectadas na urina, togeth-er com um aumento de L-arabitol na urina, plasma e lquido cerebrospinal. A
deficincia de L-presume arabitol desidrogenase era suspeito. Retirada de fruta na dieta levou
normalizao dos nveis de poliol. Os autores sugerem que os sintomas clnicos pode ter sido um
epifenmeno sem relao com as anormalidades bio-qumicas neste paciente.
Glucose-6P desidrogenase
G6PD (EC 1.1.1.49) catalisa a reaco em primeiro lugar no PPP, proporcionando equivalentes redutores
(NADPH) para todas as clulas (Fig. 1A). G6PD deficincia (OMIM 305900) o mais comum defeito
hereditrio enzima humana, presente em mais de 400 milhes de pessoas (Cappellini e Fiorelli 2008). A
deficincia de G6PD uma doena ligada ao X do gene G6PD. As manifestaes clnicas mais freqentes
so ictercia neonatal e anemia hae-molytic aguda, muitas vezes desencadeada por um agente exgeno. O
principal papel metablico de G6PD nas clulas vermelhas a defesa contra agentes oxidantes atravs da
produo de NADPH necessrio para repor a glutationa reduzida (GSH). GSH essencial para a
desintoxicao de perxido de hidrognio, radicais de oxignio, bem como a manuteno da hemoglobina
e outras protenas do sangue no estado reduzido. Produo de NADPH diminuiu provavelmente associado
com o fentipo clnico.
Sedoheptulokinase deficincia
Em aproximadamente 50% de todos os doentes com cistinose de descendncia norte da Europa, uma
grande deleo 57 kb leva para paralelo de deleo do gene CTNS eo CARKL gene adjacente (Touchman

et al 2000). Ly recente, foram documentadas que o gene codifica uma CARKL sedoheptulokinase, que
responsvel pela phos-phorylation de sedoheptulose para sedoheptulose-7P; ainda sugerido que esta
quinase renomeando sedoheptulose gene (SHPK) (Wamelink et al 2008b). Sedoheptulose 7P-Acredita-se
que introduza o PPP e podem regular a produo de ribose e NADPH. Os pacientes com deficincia
sedoheptulokinase ligados ao 57 kb excretam DELE-o elevada sedoheptulose e eritritol na urina, e
diminuram sedoheptulose actividade phosphorylat-ing. Cistinose pacientes homozigticos para a deleo
sofrem da forma infantil grave nefroptica da doena. Anteriormente, no houve diferena no fentipo
clnico de pacientes com outras mutaes que causam o tipo infantil grave nefroptica ou pacientes
portadores a 57 kb deleo pode ser detectado. No entanto, existe uma grande heterogeneidade clnica em
cistinose e deficincia SHPK que pode modificar o fentipo clnico. Uma deficincia SHPK isolado no
foi descrita, e ainda no est claro se haveria um fentipo clnico.
Modelo do rato de TALDO deficincia
Os TALDO J / J ratos, desenvolvidos por recombinao homloga (Perl et al 2006), desenvolver-se
normalmente, no entanto, os machos so estreis por causa de defeitos estruturais e funcionais
mitocondriais. H infertilidade masculina completa em j / j, e infertilidade masculina parcial, em ratinhos
+ / j knockout. Camundongos fmeas com completa ou parcial de fertilidade manifesta deficincia
TALDO normal. Nos J / J TALDO ratos, sedoheptulose-7P acumulada na urina, testculos e fgado. A
diminuio do nvel de NADPH foi detectada em cauda de epididimrio TALDO j / j e + / j ratos,
indicando uma produo reduzida atravs G6PD e 6PGD, associada a uma incapacidade de reciclar
ribose-5P a glucose-6P atravs da fase no oxidativa de o PPP. Nucleotdeos de piridina outros (por
exemplo, ADP-ribose, AMP, cAMP, ADP e ATP) diminuram em cauda epididimrio de TALDO J / J
ratos. Na urina dos J / J TALDO ratos havia nveis elevados de D-arabitol, ribitol e 6-fosfo-gluconato
(EVA et al 2006). As actividades da G6PD e TK no foi alterada em j / j ou + / j ratinhos (Perl et al 2006).
Em clulas TALDO deficientes esperma, um potencial transmembrana mitocondrial diminuiu rendeu
dimin-tada produo de ROS, e reduziu citoplasmtica e mitocondrial de Ca2 + nveis. Alm disso, os
nveis de pH intracelulares foram reduzidas. Teor de tiol intracelular, composto em grande parte de GSH,
foi reduzida em TALDO j / j, mas no TALDO + / j espermatozides. Nos ratinhos heterozigticos, a
fertilidade foi restabelecida aps tratamento com N-acetilcistena, um composto capaz de estimular a
sntese e / ou poupar a utilizao da GSH. N-acetil-cistena no afectou a esterilidade do TALDO j / j
ratos.
Mtodos
A determinao quantitativa de acar-fosfato, acares e poliis em tecidos e fluidos corporais
essencial para o diagnstico de defeitos metablicos no PPP ou doenas relacionadas.
Mtodos para medio de acar-fosfatos
Vrios estudos abordaram a medio de acar-fosfato nos tecidos (Hofer 1974; Jensen et al 2001;
Kauffman et al 1969; Smits et al 1998; Swezey 1995). Medio da basais acar-fosfato concen-traes
em tecidos complicado devido sua fraca abundncia e a sua estrutura qumica. Alm disso, a
diferenciao de diferentes fosfatos de acar desafiadora devido s suas semelhanas na carga, peso e
estrutura.
Kauffman e colaboradores tm quantificado PPP metabolitos no crebro de rato e tecido heptico
indirectamente atravs de um ensaio espectrofotomtrico (Kauffman et al 1969) e verificou-se que os
fosfatos de acar esto presentes na gama de tecidos nmol / g de peso fresco. No entanto, o seu mtodo
falharam a diferenciao de acar-fosfatos. Por exemplo, a ribose-5P e sedoheptulose-7P foram
quantificados em soma. Mtodos de HPLC foram apresentados (Hofer 1974; Swezey 1995) que foram
morosos. Jensen e seus colegas desenvolveram um fluxo de massa em tandem injeo espectrometria
(MS / MS) mtodo para a triagem neonatal de galactosemia com base na presena de elevada intracelular
galactose-1P (Jensen et al, 2001). A cromatografia lquida de MS / MS do mtodo (LC-MS/MS) para a
anlise de diferentes fosfatos de acar, em manchas de sangue foi apresentada (Huck et al 2003). Este
ensaio foi aplicado ao tecido de fibroblastos, fgado linfoblasto, e amostras de urina (Valayannopoulos et
al 2006; Wamelink et al, 2005a, 2007). Isto facilita a aplicao distino de pentose-5P e pentulose-5P,
enquanto ribulose-5P-5P xilulose e no podia ser independentemente quanti-ficada, como foi o caso para
a glicose e a frutose-6P-6P.

Os mtodos para a medio de acares e poliis

As concentraes anormais de acares e poliis em fluidos corporais ocorrem num certo nmero de condies patolgicas, tais como diabetes mellitus, doena renal e heptico e vrios erros inatos do
metabolismo de carboidratos. Poliis, ou lcoois polifuncionais, podem ser formadas por meio de reduo
de acar. Eles so classificados de acordo com um dos nmeros de tomos de C: C4, Tetroses e tetritols;
C5, pentoses e pentitols; C6, hexoses e hexitols, e C7, heptuloses e heptitols. O profil-o de acares e
poliis em fluidos e tecidos corporais geralmente feito por HPLC (Agblevor et al 2004; Jandera e
Chura'cek 1974; Verhaar Kuster e 1981) ou GC (Haga e Nakajima 1989; Jansen et al, 1986; Laker 1980).
GC com deteco de ionizao de chama ou deteco por espectrometria de massa de alta resoluo
cromatogrfica oferece com boa sensibilidade e seletividade. No entanto, a preparao da amostra
trabalhoso (incluindo a purificao da amostra e derivatizao) uma limitao. Dois mtodos de LCMS/MS para a investigao de poliis na urina foram desenvolvidos recentemente (Wamelink et al
2005b). O tempo de preparao da amostra reduzida sem comprometer o desempenho analtico. Os
mtodos utilizam apenas 200 ml de urina.
Um mtodo especfico para a quantificao LC-MS/MS de sedoheptulose mannoheptulose e na urina foi
desenvolvido para a deteco de deficincia TALDO (Wamelink et al 2007).
Resumo perspectivas e futuro
Durante este projecto de doutoramento, desenvolvemos novos mtodos analticos para medir os fosfatos
de acar, poliis e sete carbonos acares para a deteco do (novo) defeitos no PPP e para caracterizar a
funo do PPP (Wamelink et al 2005a, b, 2007) .
Foram identificados novos marcadores metablicos urinrios de deficincia TALDO e marcadores
possveis amnitico fluido que pode facilitar o diagnstico pr-natal (Wamelink et al 2007, 2008b). A
apresentao de hidropisia fetal e um sndrome polymalformative num feto de 28 semanas de idade, com
deficincia TALDO, associado metablica anomalias no fluido amnitico que implica TALDO relevante
durante o desenvolvimento fetal. O PPP altamente activo em tecidos que proliferam rapidamente,
porque gera 5P-ribose necessria para a sntese de cidos nucleicos. Alm disso, gera NADPH como o
redutor primrio usado em vias anablicas e essencial para a manuteno de GSH (Jauniaux et ai,
2005).
Com o nmero crescente de pacientes recm-diagnosticados TALDO deficientes (Wamelink et al, 2008a)
e as investigaes desses defeitos metablicos herdados no PPP, o conhecimento de seus fentipos
bioqumicos e clnicos tm aumentado. No entanto, muitas questes sobre a fisiopatologia desses defeitos
permanecem. A descoberta, utilizando um modelo de levedura, que o estresse oxidativo induz uma ativa
reencaminhamento da gliclise ao PPP para manter o citoplasmtica NADPH / NADP relao + (Ralser et
al 2007) relevante para a fisiopatologia de defeitos no PPP ou gliclise e isso pode sugerir estresse
oxidativo que deve ser evitada em pacientes. RPI e TALDO so ambos enzimas na parte reversvel do
PPP. Embora estas funes enzimas na mesma parte da via, o seu resultado deficincias em duas
totalmente diferentes fentipos clnicos, ou seja, neurolgicos (RPI) versus heptica / sistmica
(TALDO). A funo do PPP e, especialmente, RPI no crebro no tem sido extensivamente estudada.
Animais knock-out modelos ser muito importante para estudar os papis da RPI e TALDO em diferentes
tecidos e vai permitir que as investigaes sobre a fisiopatologia exata desses transtornos. Inves-tigaes
da RPI e da TALDO atividades e expresso em diferentes tecidos pode revelar as relaes entre padres
de clulas especficas de expresso e os clnicos phe-notypes em caso de seus defeitos. A toxicidade de
acumulao de poliis e acar-P pode desempenhar um papel na patofisiologia e poderia ser estudada.
Alm disso, mais se desenrolando, os mecanismos fisiopatolgicos destas doenas essencial para o
tratamento de desenvolvimento. Abordagens hipotticas para estratgias de tratamento so os seguintes:
para induzir a produo de glutationa reduzida, com N-acetilcistena, para reduzir o stress oxidativo com
anti-oxidantes (por exemplo, a vitamina C ou E), e para reduzir a acumulao de poliol ou de acar-P,
utilizando inibidores especficos da PPP. Estas estratgias de tratamento pode ser melhor testado em
animais (por exemplo, levedura) modelos.
Os poliis acumulando, ribitol, arabitol e eryth-ritol, encontrados em pacientes com deficincia de RPI
TALDO e esto pensados para derivar atravs de P-acar a partir do PPP.

Contudo, o metabolismo destes poliis e as enzimas envolvidos no foram ainda completamente

determinada e mais pesquisa precisa de ser feito para confirmar estas vias suspeitas para a produo de
poliis.
Ns determinamos que a protena um CARKL sedo-heptulokinase, e rebatizou-SHPK (Wamelink et al
2008c). Doentes com cistinose com uma deleo de 57 kb comum, que altera os dois CTNS e genes
SHPK, display diminuio da atividade sedoheptulokinase em fibroblastos e acumular sedoheptulose na
urina. A consequncia de uma carncia bioqumica sedoheptuloki-nase isolado no foi ainda identificado.
Isto pode ser estudado atravs da transfeco de linhas celulares em cultura de pacientes com cistinose
transportando a supresso de 57 kb com o gene CTNS.
Ambas as deficincias e TALDO RPI so susceptveis de ser sub-diagnosticada uma vez que ambas as
doenas s recentemente foram descritos e so pouco conhecidas. Alm disso, a disponibilidade limitada
de determinadas tcnicas de anlise que so requeridos para as medies dos biomarcadores adequados
dificulta a utilizao em investigaes de rotina. Ns sentimos que legtimo para a tela todos os
pacientes com hepatoesplenomegalia inexplicvel, problemas de funo heptica, fibrose heptica e
hemoltica anae-mia apresentando no perodo neonatal ou pr-natal e pacientes com hemocromatose
neonatal para deficincia TALDO por poliis urinrio de medio e / ou sete carbono acares . Alm
disso, todos os pacientes com um pouco compreendidos curso clnico neurodegenerativa incluindo
leucoencefalopatia devem ser rastreados para a deficincia RPI medindo poliis urinrio. Nos casos em
que as concentraes anormais de acares e poliis so encontrados, ensaios enzimticos esto agora
disponveis para o investigao detalhada da causa subjacente (s) de anormalidades do metabolismo do
acar-mal / poliol.
Reconhecimento Temos uma grande dvida com o professor Michael Gibson por seus comentrios sobre e
correes deste manuscrito.