Professional Documents
Culture Documents
- Meio Semi-slido: possui na sua composio, alm dos nutrientes, gar (polissacardeo
proveniente de algas marinhas), em pequena porcentagem, possibilitando a mobilidade
bacteriana.
Quanto funo, so classificados (RIBEIRO & SOARES, 2000; JUNIOR, 2007):
- Meio de Enriquecimento: quando proporcionam nutrientes adequados que estimulam o
crescimento de microrganismos exigentes, presentes usualmente em baixos nmeros ou
de crescimento lento. Alm das fontes nutritivas usuais, podem possuir sangue, soro ou
extratos teciduais.
- Meio Diferencial: quando contm substncias que permitem estabelecer diferenas
entre microrganismos muito parecidos, tais como meio de Teague ou Eosina Azul de
Metileno (diferencial para coliformes), e gar Baird-Parker para isolamento e
diferenciao de cocos Gram-positivos (slidos).
- Meio Seletivo: os que contm substncias que inibem o desenvolvimento de
determinados grupos de microrganismos, mas permitem o crescimento de outros. A
maioria deles tambm diferencial, permitindo diferenciar as colnias (slidos) dos
microrganismos.
- Meio de manuteno: utilizados para conservao de microrganismos no laboratrio.
A manuteno adequada para a viabilidade de uma cultura pode exigir um meio
diferente daquele recomendado para o seu crescimento timo, pois esse rpido
crescimento pode estar associado com uma rpida porte celular.
Alm dos componentes presentes no meio, outros fatores, como a temperatura e tenso de
oxignio, interferem no seu desenvolvimento. Aps a inoculao, as bactrias devero ser
incubadas em ambiente com tenso de oxignio e temperatura ideal para o seu desenvolvimento
(RIBEIRO & SOARES, 2000), que so exigidos de forma diferentes em cada espcie de
bactria. As bactrias podem ser, quanto a temperatura: Psicrfilas (temperaturas relativamente
baixas para o desenvolvimento, entre 0 e 30C, e temperatura tima de 15 a 20C. Elas geram
pouca energia trmica ao trabalhar), Mesfilas (faixa de temperatura de desenvolvimento de
15 a 45 C. A temperatura tima entre 25 e 35 C) ou Termfilas (condies de calor para o
desenvolvimento entre 30 e 80C. A faixa de temperatura ideal para seu de 50 a 60C). Quanto
a exigncia de oxignio, podem ser (FOX, 2010):
- Bactrias aerbicas obrigatrias requerem a presena de oxignio para poderem
crescer; estas no realizam fermentao.
- Bactrias anaerbicas obrigatrias no efetuam a fosforilao oxidativa. Alm disso,
elas so mortas pelo oxignio.
Figura 1 - No tubo esquerda, observamos o momento da picada que realizada com o auxlio de uma
agulha de semeadura e direita observamos a picada propriamente dita.
Uma vez que as bactrias tenham sido isoladas em culturas puras, necessrio manter as
culturas vivas por um perodo de tempo com o objetivo de estud-las. Se a cultura mantida por
somente um curto perodo (dias a meses), ela pode ser armazenada temperatura de
2 METODOLOGIA
2.1 Coleta Ambiental
Os tubos e placas que seriam utilizados para inoculao foram identificados com um cdigo
exclusivo do grupo, para que ficassem caracterizados. Foram escolhidos os locais para coletar
amostras de bactrias, tendo cuidado para retirar o swab apenas no momento da coleta. O
material, primeiramente, foi inoculado em tubo de ensaio com o meio lquido, e depois em
placas com meio slido de Agar BHI, e ento ficaram 24h em estufa 35C (Quadro 1).
CD. DO
GRUPO/COLETA
LOCAL DE
COLETA
DATA DE
COLETA
#A
#B
#C
#D
Bolsa
Mq. de caf
Balco Sto. Gro
Unhas
24/09
24/09
24/09
24/09
MEIO DE
CULTUR
A
BHI
BHI
BHI
BHI
FORMA DE
INCUBAO
Estufa, 35C
Estufa, 35C
Estufa, 35C
Estufa, 35C
Na aula seguinte, as placas com cultivo mistos foram utilizadas para transferir uma alquota
de cada colnia selecionada (Figura 3) para placas de Agar BHI, atravs do mtodo de
esgotamento por estrias e incubar em estufa por 24hs/ 35 oC.
#C1 = colnia alaranjada
#C2 = colnia alaranjada
#C3 = colnia branca, mucide
#D1 = colnia branca, mucide
Figura 3 colnias da placa #C (balco da lancheria Santo Gro do Unilasalle) selecionadas para
isolamento.
Solues em ordem de
aplicao
Cristal violeta
Coradas em violeta
Coradas em violeta
Soluo de Iugol
lcool-acetona
Desidratao da parede
celular, diminuio da
porosidade e da
permeabilidade; o
complexo CV-I no pode sair
da clula, que permanece
violeta
Fucsina ou safranina
A clula no afetada,
permanece violeta
As amostras de cada isolado foram inoculadas por estrias em placas de Agar EMB, e
deixados em estufa a 35C por 24hs.
O gar Eosina Azul de Metileno (EMB) uma modificao da frmula de Holt-Harris e
Teague usada para o isolamento e diferenciao de enterobactrias ( bacilos Gram-
negativos). O meio formulado com gar bacteriolgico, azul de metileno, eosina Y, fosfato
bibsico de potssio, lactose, peptona de gelatina e sacarose. O aspecto do meio preparado
vinho e seu pH final de 7,2 +/- 0,2 a 25 C. Neste meio, a combinao de eosina e azul de
metileno como um indicador promove uma diferenciao distinta entre as colnias de
organismos fermentadores da lactose e os que no fermentam a lactose. A sacarose foi includa
10
no meio para detectar os membros do grupo coliforme que fermentam este carboidrato mais
rpido do que a lactose. As colnias lactose-positivas ou so negras ou possuem centros negros
com periferia transparente, ao passo que as lactose ou sacarose negativas so incolores. O meio
ligeiramente inibidor para organismos Gram-positivos.
11
cida (amarela) no fundo do tubo aps a incubao, indica que o microrganismo fermentador
de glicose, mas no capaz de fermentar lactose e/ou sacarose. Bactrias que fermentam lactose
e/ou sacarose, na adio de glicose, produzem grandes quantidades de cido, causando a no
reverso do pH naquela regio e portanto os tubos exibem a colorao amarela tanto na
inclinao (rampa) quanto no fundo devido ao pH cido. A produo de gs (CO2) detectada
pela presena de bolhas, quando o gs acumulado escapa. O pH final do meio de 7,3 +/- 0,2 a
25 C. Por conter trs acares, o meio permite o reconhecimento e identificao de Proteus,
Hafnia e Providencia, que no fermentam a lactose ou o fazem muito lentamente, porm
fermentam a sacarose rapidamente, o que permite diferenciar esse grupo de Salmonella e
Shigella.
12
13
14
ao longo da linha de inoculao. A deteco da motilidade possvel devido natureza semislida do meio. O crescimento radiando-se fora da linha central de inoculao indica que o
organismo analisado mvel.
15
16
3 RESULTADOS
Microorganismo
Staphylococcus sp. ou
Enterococcus faecalis
Serratia sp.
Staphylococcus sp. ou
Enterococcus faecalis
Microorganismo
Enterobacter aerogenes ou
Klebsiella sp.
Staphylococcus Coagulasepositivo
Enterobacter aerogenes ou
Klebsiella sp.
Enterobacter aerogenes ou
Klebsiella sp.
17
Microorganismo
Pseudomonas aeruginosa
Serratia sp.
Serratia sp.
Colorao Gram
Positivo
Negativo
Positivo
#C1
Microorganismo
Escherichia coli ou
Salmonella typhi ou
Salmonella paratyphi A ou
Colorao Gram
Positivo
Shigella sp.
Enterobacter sp. ou
Klebsiella pneumoniae ou
#C4
Salmonella enteritidis ou
Salmonella paratyphi B ou
Negativo
Salmionella typhimurium ou
Serratia sp.
Escherichia coli ou
#D1
Salmonella typhi ou
Salmonella paratyphi A ou
Positivo
Shigella sp.
18
19
4 CONCLUSO
O grupo deve descrever de que maneira a interpretao dos resultados direcionou a determinao
(mesmo que aproximada) dos gneros sugeridos para cada isolado.
- Devem ser colocados como itens separados os resultados das coletas ambientais e do
alimento/gua (quando for efetuado). No caso de alimento/gua, comentar sobre o nmero de UFCs
e se h ou no evidncia da presena de bactrias do grupo coliforme (tecendo um comentrio
fundamentado, sobre se o grupo considera o alimento/gua saudvel ou no ).
OBS: os resultados e a concluso devem conferidos com pesquisa bibliogrfica, para que no sejam
cometidos erros primrios (como indicar que um isolado pertena a um gnero com forma, arranjo
ou classificao de Gram diferente do que realmente o grupo apresente).
20
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
FOX, Alvin. Traduo: Dr. Paulo E. Moretti. Bacteriologia - Nutrio, Crescimento e
Metabolismo energtico. Disponvel em:
<http://www.microbiologybook.org/Portuguese/chapter_3_bp.htm> Acesso em 26 out
2014.
JUNIOR, Lauri Raitz. Pesquisa de microrganismos presentes em estetoscpios como
fator determinante para infeco hospitalar em um Hospital de Brusque-SC.
Universidade Regional de Blumenau, Centro de Cincias da Sade. Blumenau, 2007.
RIBEIRO, Mariangela Cagnoni; SOARES, Maria Magali S. R.. Microbiologia prtica:
roteiro e manual: bactrias e fungos. So Paulo: Atheneu, 2000. 112 p. (Biblioteca
biomdica) ISBN 8573792442
PELCZAR JUNIOR, Joseph Michael et al. Microbiologia: conceitos e aplicaes. 2.
ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 2 v. ISBN 8534601968 (v. 1).
PONTIFCIA UNIVERSIDADE CATLICA DE GOIS. Departamento de Biologia,
Microbiologia
aplicada.
Meios
de
Cultura.
Disponvel
em:
<http://professor.ucg.br/SiteDocente/admin/arquivosUpload/5583/material/Meios%20de
%20Cultura%20aula%20pr%C3%A1tica.pdf> Acesso em 26 out 2014.
SALVATORI, Rosngela Uhrig; WOLF, Greice Aline Kaisecamp; DRESCH, Fabola;
STROHSCHOEN, Andreia Aparecida Guimares. Laboratrio de Microbiologia:
normas gerais, instrues de trabalho e Procedimentos Operacionais Padres.
Editora UNIVATES, 1 edio. Lajeado, 2013.
http://www.icb.ufmg.br/mic/index.php?secao=material&material=42
http://www.uff.br/bacteriologia/aulaspraticas/tecnicasdesemeadura.htm
21
SUMRIO
1 INTRODUO..............................................................................................................1
2 METODOLOGIA...........................................................................................................7
2.1 Coleta Ambiental.....................................................................................................7
2.1.1 Colorao de GRAM........................................................................................8
2.1.2 Formao de estoque com Agar Inclinado.......................................................9
2.1.3 Semeadura por estrias em Agar MacConkey..................................................10
2.1.4 Semeadura por estrias em Agar EMB............................................................10
2.1.5 Inoculao em placas de Agar DNAse...........................................................11
2.1.6 Inoculao em tubos inclinados de Agar TSI.................................................11
2.1.7 Inoculao em tubos inclinados de Agar Citrato............................................12
2.1.8 Inoculao em placa de Agar Verde Brilhante................................................12
2.1.9 Inoculao em placa de Vermelho Violeta.....................................................13
2.1.10 Inoculao em tubos de Agar SIM...............................................................13
2.2 Coleta de Alimento................................................................................................15
2.2.1 Diluio Seriada da amostra em lquido.........................................................15
2.2.2 Semeadura em Drop Plate..............................................................................16
2.2.3 Cultivo em substrato enzimtico - ColilertR...................................................16
3 RESULTADOS.............................................................................................................17
3.1 Coleta Ambiental...................................................................................................17
3.1.1 Semeadura por estrias em Agar MacConkey..................................................17
3.1.2 Semeadura por estrias em Agar EMB............................................................17
3.1.3 Inoculao em placas de Agar DNAse...........................................................18
3.1.4 Inoculao em tubos inclinados de Agar TSI.................................................18
3.1.5 Inoculao em tubos inclinados de Agar Citrato............................................18
3.1.6 Inoculao em placa de Agar Verde Brilhante................................................19
3.1.7 Inoculao em placa de Vermelho Violeta.....................................................19
3.1.8 Inoculao em tubos de Agar SIM.................................................................19
3.2 Coleta de Alimento................................................................................................19
3.2.1 Semeadura em Drop Plate..............................................................................19
3.2.2 Cultivo em substrato enzimtico - ColilertR...................................................19
4 CONCLUSO..............................................................................................................20
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS............................................................................21
22
GABY
MAYARA
MICHELE EIDT
MICHELLE VISCARDI
SABRINA
CANOAS, 2014.
23
24