Catarina Isabel Fernandes Loureno

Licenciada

Diagnstico laboratorial em microbiologia clnica:

Um estudo no centro hospitalar

Dissertao para obteno do Grau de Mestre

em Gentica Molecular e Biomedicina

Orientadora: Ilda Maria Barros dos Santos Gomes Sanches, Professora Doutora,
UNL/ FCT

Jri:
Presidente: Professor Doutor Jos Paulo Nunes de Sousa Sampaio
Arguente: Professora Doutora Rita Maria Rodrigues Teixeira de Castro
Vogais: Professora Doutora Ilda Maria Barros dos Santos Gomes Sanches

Dezembro 2012

Diagnstico laboratorial em microbiologia clnica:

Um estudo no centro hospitalar

Copyright Catarina Loureno, FCT/UNL, UNL

A Faculdade de Cincias e Tecnologia e a Universidade Nova de Lisboa tm o direito, perptuo e sem limites
geogrficos, de arquivar e publicar esta dissertao atravs de exemplares impressos reproduzidos em papel ou
de forma digital, ou por qualquer outro meio conhecido ou que venha a ser inventado, e de a divulgar atravs de
repositrios cientficos e de admitir a sua cpia e distribuio com objectivos educacionais ou de investigao,
no comerciais, desde que seja dado crdito ao autor e editor.

ii

Agradecimentos

Concludo este longo percurso existem agradecimentos que no posso deixar de fazer.

Quero agradecer ao Centro Hospitalar que me disponibilizou este estgio e a toda a equipa do
laboratrio de anlises clnicas, em especial seco de microbiologia.
Aos meus pais e ao meu mano, que sempre me apoiaram em tudo e que possibilitaram a minha
evoluo a nvel acadmico.

Ao meu namorado, no s pela maneira como sempre me tratou, mas tambm por todo o apoio que
me deu nos momentos em que me apeteceu desistir de tudo. Por me devolver sempre a vontade de
fazer mais e melhor.
Aos amigos que sempre estiveram do meu lado e que me proporcionaram momentos nicos,
especiais e inequecveis, nomeadamente: Cludia Pinheiro, Tatiana Fera, Dbora Fera, Andreia
Forte, Marta Monteiro, Rui Semio, Carina Silva, Andr Monteiro, Ndia Silvestre, Paulo Palminha,
Carla Correia, Patricia Barreiros, Cecilia Bento, Sandra Piarra, Maria Moniz, Armnio Silva, Edgar
Gramacho e Bruno Gonalves.

A todos os colegas de curso, especialmente Ana Cludia, Ctia e Ndia, pelas horas de estudo que
passamos juntas, e pelos sorrisos que partilhamos tantas vezes.
Aos meus padrinhos, afilhada e respectivas familias, e a todos os familiares que sempre quiseram o
melhor para mim: prima Xana, prima Maria Antnia, primo Manel, Av Adlia, tia Hortence, tio
Ramos, tia Maria, tio Renato, prima Ana, primo Paulo, primo Nuno, primo Guilherme, primo Valter,
primo Mauro, tio Antnio, tia Quina, prima Isabel, primo Antnio, primo Valter, prima Ins, prima
Mavilde, primo Olmpio, primo Tiago, prima Gina, primo Z, primo Nuno, prima Silvia, primo Pedro,
prima Patrcia, primo Diogo, prima Soraia, primo Vitor, prima Anabela, primo Rodrigo, prima Catarina,
primo Manel e prima Maria.
minha cadela Kira, pela companheira que .

E por ltimo, mas no em ltimo, ao meu grande AV, que mesmo ausente, estar sempre presente
no meu corao.

A todos voces o meu muito obrigado por tudo. Estamos juntos!

Catarina Loureno

iii

iv

Resumo:

A realizao do estgio na seco de microbiologia do Servio de Patologia Clnica de um Centro

Hospitalar, durante um perodo de seis meses (Outubro de 2011-Maro de 2012) consistiu em duas
fases.
Numa primeira fase (Trabalho 1), realizada durante os seis meses de estgio (de 1 de outubro a 31
de maro), foi possvel adquirir conhecimentos gerais de bacteriologia, dando ateno metodologia
utilizada no processamento de diferentes amostras biolgicas provenientes dos diferentes servios.
A urina foi o produto mais analisado com 36% (n=3294) das amostras totais.
A segunda fase (Trabalho 2), realizada durante um perodo de trs meses (de 1 de janeiro a 31 de
maro), incidiu no estudo microbiolgico de urinas.
Foram analisadas 1408 amostras de urina provenientes dos vrios servios, com o objectivo de isolar
e identificar possveis agentes infecciosos. Deste estudo resultaram 500 uroculturas positivas (36%),
e um total de 604 microrganismos isolados. Com a avaliao por sexo, das uroculturas positivas, foi
possvel verificar que a prevalncia foi maior no sexo feminino (68%) e em idades superiores a 60
anos (63,2%).
Dos 22 tipos de microrganismos isolados o mais frequente foi E.coli (46,5%), seguido de outras
Enterobactereaceas spp. e cocos Gram positivo, podendo esta ordem alterar significativamente com
a situao clnica em estudo (doentes internado/externos e doentes algaliados/no algaliados).
Foi ainda possvel detectar que o nmero de amostras polimicrobianas foi mais incidente em
indivduos algaliados (41%) do que em no algaliados (7%), e que a prevalncia de uroculturas
positivas em algaliados voltou a ser maior para o sexo feminino (58,6%) e para idades superiores a
60 anos (86,9%)

vi

Abstrat
The realization of the internship in microbiology section of the Department of Clinical Pathology of a
hospital center, during a period of six months (from October 2011 to March 2012) was built in two
parts.
One of these parts (part number one) was made during six months of internship (from October 1 to
March 31) it was possible to obtain general knowledge of bacteriology, paying attention to the
methodology used in the processing of different biological samples who came from several services.
The urine was the most analyzed product at 36% (n = 3294) of the total samples..
The second part (part number two) completed during a period of three months (from January 1 to
March 31) focused on the study microbiological of urine. 1408 urine samples from different services
were analyzed with the goal of isolate and correctly identify possible infectious agents. From this study
resulted 500 urocultures (36%) and a total of 604 isolated microorganisms. With the gender evaluation
of the positive urocultures was possible to verify that the prevalence was bigger to the feminine gender
(68%) and to people over than 60 years old (63.2%).
From the 22 types of isolated microorganisms the most frequent was E.coli (46,5%) followed by others
Enterobactereaceas spp. And Gram positive cocci, this order may change significantly with the clinical
condition under study (intern/extern patients and patients with/without catheter).
It was possible to find out that the number of polymicrobial samples was most incident in the
individuals with catheter (41%) than in the individuals without catheter (7%). It was still possible to
observe that the predominance of positives urocultures was in female individuals with catheter
(58,6%) as it was in individuals with ages over 61 years old (86,9%).

vii

viii

ndice Geral

Introduo ...................................................................................................................................1
1.1

Objectivo do Estgio ............................................................................................................1

1.2

Flora comensal ....................................................................................................................1

1.3

Tipos de amostras ...............................................................................................................2

1.3.1

Urina ............................................................................................................................2

1.3.2

Sangue ........................................................................................................................3

1.3.3

Amostras provenientes do aparelho reprodutor ............................................................4

1.3.4

Fezes...........................................................................................................................4

1.3.5

Amostras provenientes das Vias Respiratrias .............................................................5

1.3.6

Exsudado Cutneo, de ferida, escara ou auricular externo ...........................................5

1.3.7

Exsudado Ocular .........................................................................................................5

1.3.8

Lquidos Corporais........................................................................................................... 6

1.4

Meios de cultura ..................................................................................................................6

1.5

Crescimento bacteriano .......................................................................................................7

1.6

Preparaes a fresco e coloraes ......................................................................................8

1.6.1 Colorao de Gram ...........................................................................................................9

1.6.2
1.7

Colorao lcool-cido resistente (Ziehl-Neelsen) ...................................................... 10

Testes de Identificao ...................................................................................................... 10

1.7.1

Oxidase ..................................................................................................................... 10

1.7.2

Catalase .................................................................................................................... 11

1.7.3

Coagulase ................................................................................................................. 11

1.7.4

Urease ....................................................................................................................... 11

1.7.5

Indol........................................................................................................................... 12

1.7.6

Teste de CAMP.......................................................................................................... 12

1.7.7

Hidrlise de esculina .................................................................................................. 12

1.7.8

Sistemas automatizados .......................................................................................... 133

1.8

Antibiograma - Teste de Susceptibilidade aos Antimicrobianos (TSA) .............................. 133

1.9

Microrganismos ................................................................................................................. 16

1.9.1

Microrganismos Gram negativo: ............................................................................... 177

1.9.1.1

Famlia de Enterobactereaceas: .......................................................................... 17

1.9.1.2

Bacilos Gram negativo no fermentadores .......................................................... 17

1.9.2

Microrganismos Gram positivo: .................................................................................. 18

1.9.2.1

Famlia de Staphylococcaceae ........................................................................... 18

1.9.2.2

Famlia de Enterococcaceae .............................................................................. 19

1.9.2.3

Famlia de Streptococcacea ................................................................................ 19

1.9.2.4

Bacilos Gram positivo.......................................................................................... 19

ix

1.9.3
2.

Parte Experimental: ................................................................................................................... 21

2.1

Materiais, Equipamentos e Reagentes: .............................................................................. 21

2.2

Procedimento Experimental ............................................................................................... 22

2.2.1

Trabalho 1: Estudo estatstico das vrias amostras biolgicas.................................... 22

2.2.1.1

Processamento de vrias amostras biolgicas .................................................... 22

2.2.1.2

Procedimento efectuado para coloraes ............................................................ 26

2.2.2
3.

Outros microrganismos .............................................................................................. 20

Trabalho 2: Uroculturas .............................................................................................. 26

Resultados e Discusso ............................................................................................................ 33

3.1

Trabalho 1: Estudo estatstico das vrias amostras biolgicas ........................................... 33

3.2

Trabalho 2: Uroculturas ..................................................................................................... 35

4.

Concluses: .............................................................................................................................. 45

5.

Bibliografia ................................................................................................................................ 47

6.

Apndices: ................................................................................................................................ 51

ndice de Figuras
Figura 1. 1 Observao microscpica de bacilos Gram negativo ........................................................9
Figura 1. 2 Observao microscpica de cocos Gram positivo ...........................................................9
Figura 1. 3 Morfologia das bactrias ................................................................................................ 10
Figura 2. 1 Fluxograma com procedimento efectuado em urinas ....................................................... 26
Figura 2. 2 Fluxograma de Bacilos Gram negativo ........................................................................... 30
Figura 2. 3 Fluxograma de Cocos Gram positivo .............................................................................. 31
Figura 2. 4 Fluxograma de Bacilos Gram positivo............................................................................. 31
Figura 6. 1 E.coli em MacConkey .................................................................................................... 52
Figura 6. 2 E.coli em gelose Sangue ............................................................................................... 52
Figura 6. 3 Klebsiella pneumoniae em MacConkey ......................................................................... 53
Figura 6. 4 Proteus mirabilis em gelose Sangue .............................................................................. 53
Figura 6. 5 Proteus mirabilis em MacConkey................................................................................... 53
Figura 6. 6 P.aeruginosa em gelose Sangue ................................................................................... 54
Figura 6. 7 P.aeruginosa em MacConkey ........................................................................................ 54
Figura 6. 8 S.aureus em gelose Sangue........................................................................................... 54
Figura 6. 9 Estafilococos coagulase negativa em gelose Sangue .................................................... 54
Figura 6. 10 Enterococcus spp. em gelose Sangue .......................................................................... 55
Figura 6. 11 S.agalactiae em gelose Sangue ................................................................................... 55
Figura 6. 12 S.pneumoniae em gelose Sangue ............................................................................... 55
Figura 6. 13 Corynebacterium spp. em gelose Sangue .................................................................. 556
Figura 6. 14 Leveduras ao microscpico ....................................................................................... 556
Figura 6. 15 Demonstrao da exigncia dos factores de crescimento para H.influenzae ................ 57
Figura 6. 16 H.influenzae em gelose Chocolate............................................................................... 57
Figura 6. 17 Ovo de Ascaris lumbricoides......................................................................................... 57
Figura 6. 18 Ovo de Trichuris trichiura .............................................................................................. 57
Figura 6. 19 Quisto de Entamoeba spp. .......................................................................................... 58
Figura 6. 20 Larva de Strongyloides spp.......................................................................................... 58
Figura 6. 21 Ovo de Ancylostoma spp. ............................................................................................. 58

xi

xii

ncide de Tabelas
Tabela 1. 1 Distribuio dos principais microrganismos da flora comensal........................................2
Tabela 1. 2 Meios de cultura ............................................................................................................6
Tabela 1. 3

Locais de aco dos antimicrobianos nas bactrias ..................................................... 13

Tabela 1. 4 Enterobactereaceas spp. associadas a infeces no homem. ..................................... 17

Tabela 3. 1 Produtos biolgicos analisados durante o perodo de estgio ....................................... 33

Tabela 3. 2 Produtos biolgicos analisados nos primeiros seis meses do ano de 2011..................... 33
Tabela 3. 3 Resultados positivos e negativos ................................................................................... 35
Tabela 3. 4 Resultados positivos consoante o sexo. ......................................................................... 35
Tabela 3. 5 Percentagens de uroculturas positivas no sexo masculino, por grupo etrio................... 36
Tabela 3. 6 Percentagens de uroculturas positivas no sexo feminino, por grupo etrio ..................... 36
Tabela 3. 7 Isolamentos de S.agalactiae por sexo e grupo etrio ..................................................... 40
Tabela 3. 8 Amostras polimicrobianas em algaliados e no algaliados. ............................................ 41
Tabela 3. 9 Percentagens de microrganismos em indivduos algaliados, por sexo feminino e grupo
etrio ................................................................................................................................................ 43
Tabela 3. 10 Percentagens de microrganismos em indivduos algaliados, por sexo masculino e
grupo etrio ...................................................................................................................................... 43
Tabela 6. 1 Resistncias intrnsecas de Microrganismos Gram negativo ......................................... 51
Tabela 6. 2 Resistncias intrnsecas de Microrganismos Gram positivo............................................ 51
Tabela 6. 3 Antibiticos utilizados no mtodo de Kirby-Bauer ........................................................... 52
Tabela 6. 4 Resultados de testes de identificao para bacilos Gram negativo ................................ 58
Tabela 6. 5 Resultados de testes de identificao para Estafilococos .............................................. 59
Tabela 6. 6 Resultados de testes de identificao para Estreptococos ............................................ 59
Tabela 6. 7

Resultados de testes de identificao para Enterococos .............................................. 59

Tabela 6. 8

Resultados para os microrganismos isolados nas uroculturas positivas ...................... 60

Tabela 6. 9

Uroculturas positivas para doentes internos e doentes externos .................................. 61

Tabela 6. 10 Uroculturas positivas para doentes algaliados e no algaliados ................................... 62

xiii

xiv

ndice de Grficos
Grfico 3. 1 Percentagens de produtos biolgicos analisados durante o perodo de estgio ............. 33
Grfico 3. 2 Percentagens de produtos biolgicos analisados nos primeiros seis meses de 2011 ..... 33
Grfico 3. 3 Percentagens de resultados positivos e negativos ......................................................... 35
Grfico 3. 4 Percentagens de resultados positivos consoante o sexo ............................................... 35
Grfico 3. 5 Uroculturas positivas no sexo masculino, por grupo etrio............................................. 36
Grfico 3. 6 Uroculturas positivas no sexo feminino, por grupo etrio .............................................. 36
Grfico 3. 7 Distribuio dos microrganismos isolados nas amostras de urina ................................. 37
Grfico 3. 8 Distribuio dos microrganismos isolados por doentes internados e externos............... 39
Grfico 3. 9 Distribuio dos microrganismos por indivduos algaliados e no algaliados ................. 41
Grfico 3. 10 Microrganismos em indivduos algaliados, por sexo feminino e grupo etrio ............... 43
Grfico 3. 11 Microrganismos em indivduos algaliados, por sexo masculino e grupo etrio ............ 43

xv

xvi

Lista de abreviaturas
ITU

Infeces do trato urinrio

LCR

Lquido Cefalorraquidiano

CNA

Columbia, colistina e cido nalidxico

VCAT

Vancomicina, Colistina, Anfotericina e Trimetoprim

MRSA

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Ufc

Unidades formadoras de colnias

Ufc/ml

Unidades formadoras de colnias por mililitro

spp.

Espcies

NAD

Nicotinamida adenina dinucleotdeo

Mcf

Mcfarland

TSA

Teste de Susceptibilidade aos antimicrobianos

Lac+

Fermentador de Lactose

Lac-

No fermentador de Lactose

P.mirabilis

Proteus mirabilis

K.pneumoniae

Klebsiella pneumoniae

K.oxytoca

Klebsiella oxytoca

A.baumanii

Acinetobacter baumanii

E.faecalis

Enterococcus faecalis

E.faecium

Enterococcus faecium

S.epidermidis

Staphylococcus epidermidis

S.saprophyticus

Staphylococcus saprophyticus

S.aureus

Staphylococcus aureus

S.agalactiae

Streptococcus agalactiae

P.aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa

P.stuartii

Providencia stuartii

M.morganii

Morganella morganii

E.coli

Escherichia coli

P.vulgaris

Proteus vulgaris

E.aerogenes

Enterobacter aerogenes

C.koseri

Citrobacter koseri

S.marcescens

Serratia marcescens

E.cloacae

Enterobacter cloacae

S.liquefaciens

Serratia liquefaciens

Caldo GN

Caldo para Gram negativos

AM

Antimicrobianos

CMI

Concentrao mnima inibitria

CLSI

Clinical and Laboratory Standards Institute

xvii

xviii

1 Introduo
1.1 Objectivo do Estgio
O objectivo do Estgio no laboratrio de microbiologia foi o de adquirir conhecimentos gerais sobre
microbiologia clinica e tomar contacto com metodologia e tcnicas utilizadas no processamento de
amostras biolgicas provenientes de doentes dos vrios servios hospitalares, como fezes,
expectorao e exsudado vaginal, dando especial ateno s amostras de urina
As amostras so inicialmente semeadas em diferentes meios de cultura, e posteriormente incubadas
em atmosfera adequada ao crescimento e isolamento de microrganismos. Em algumas amostras so
efectuados exames a fresco (ex. urina), e na maioria realizam-se exames ps-colorao.
Depois do crescimento bacteriano procede-se identificao do agente isolado e determinao do
perfil de susceptibilidade a diversos antimicrobianos (antibiograma). Concludo todo o processo e
aps validao introduzido o resultado no sistema informtico, para que possa facilmente ser
consultado pelo clnico.

1.2 Flora comensal

O nosso organismo colonizado por milhares de microrganismos. Esta populao de microrganismos
numerosa e diversificada e coloniza a pele, mucosas, aparelho respiratrio, intestinal, reprodutor e
urinrio (ver tabela 1.1). A constituio desta flora ocorre no momento do nascimento atravs da
passagem pelo canal do parto e continua posteriormente, at que se estabelea uma microflora. A
microflora do organismo humano, embora de base estvel, mantm ao longo da vida de um indivduo
um contnuo fluxo determinado por uma variedade de factores (idade, dieta, alteraes hormonais,
sade e higiene pessoal), que contribuem para alterar quantitativa e qualitativamente a microflora.
Nas regies do corpo que so estreis qualquer isolamento de microrganismo de extrema
importncia, e deve ser alvo de estudo (Pinto A.M., 2004).
Vrias so as funes desta flora microbiana, podendo destacar-se a sua interferncia no
metabolismo do hospedeiro, e ainda a defesa contra potenciais microrganismos patognicos (Pinto
A.M., 2004).
Quando os membros da flora comensal so encontrados regularmente numa determinada rea
corporal so designados como flora residente. Quando os microrganismos apenas sobrevivem e no
se multiplicam, permanecendo num local por um curto perodo de tempo, recebem o nome de flora
transitria (Forbes & Sahm, 2004).
A maioria dos microrganismos encontrados na flora comensal so bactrias. A relao que estes
microrganismos estabelecem com o hospedeiro chamada de comensalismo, se for mutuamente
benfica, ou se benificiarem da relao sem causar danos. Existem tambm os patognicos

oportunistas, que causam infeces caso haja alteraes da flora residente, e os patognicos
obrigatrios, cuja presena origina sempre danos no hospedeiro (Forbes & Sahm, 2004).
Tabela 1. 1 Distribuio dos principais microrganismos da flora comensal (Forbes & Sahm, 2004)
(Murray, 2007) (Versalovic, 2011).

Regio

Pele

Olhos (conjuntiva)

Vias areas superiores

(Fossas nasais e
nasofaringe)
Aparelho intestinal
(intestino grosso e
delgado)

Aparelho urinrio
(Uretra)
Aparelho reprodutor
(Vagina)

Flora comensal
- Staphylococcus coagulase negativa
- Propionibacterium spp.
- Corynebacterium spp.
- Streptococcus viridans
- Staphylococcus coagulase negativa
- Difterides spp.
- Streptococcus viridans
- Staphylococcus coagulase negativo
- Corynebacterium spp.
- Lactobacillus spp.
- Enterococcus spp.
- Anaerbios
- Enterobactereaceas spp.
- Staphylococcus epidermidis
- Difterides spp.
- Lactobacillus spp.
- Lactobacillus spp.
- Streptococcus spp.
- Bacterides spp.
- Difteroides spp.

Agentes potencialmente
patognicos
- S.epidermidis
- S.aureus
- S.pneumoniae
- S.aureus
- H.influenzae
- N.meningitidis
- S.pneumoniae
- S.aureus
- H.influenzae
- Salmonella spp.
- Campylobacter spp.
- E.coli
- Shigella spp.
- Yersinia spp.
- Entecococcus spp.
- Enterobactereaceas spp.
- Trichomonas vaginallis
- C.albicans
- C.glabrata
- N. gonorrhoeae

O conhecimento da flora comensal muito importante na anlise dos produtos biolgicos que
chegam ao laboratrio, para que no sejam obtidos falsos resultados positivos.

1.3 Tipos de amostras

1.3.1

Urina (Urocultura)

O aparelho urinrio formado pelos rins, ureteres, bexiga e uretra, sendo que esta ltima estrutura
possui uma microflora residente. Acima da uretra, todas as reas do aparelho urinrio so estreis
num ser humano saudvel, o que faz com que a urina seja habitualmente estril (Forbes & Sahm,
2004) (Washington Jr. et al, 2006).
Contudo, as bactrias podem invadir a bexiga e causar infeco por duas vias principais: ascendente
e descendente. Embora a via ascendente seja mais frequente, ela favorecida por introduo de
corpos estranhos ao organismo (ex: cateter urinrio). Ao introduzir um cateter urinrio, as bactrias
podem ser introduzidas directamente na bexiga ou, mover-se atravs deste instrumento da uretra at
bexiga, aumentando desta forma o risco de infeco (Forbes & Sahm, 2004).

A disseminao por via descendente pode ser resultado de uma bacterimia. Qualquer infeco
sistmica pode provocar infeco urinria mas certos microrganismos, como S. aureus ou espcies
de Salmonella, so particularmente invasivos. A via descendente causadora de menos de 5% das
ITU (infeces do trato urinrio) (Forbes & Sahm, 2004).
As infeces urinrias so uma das infeces mais frequentemente encontradas (Forbes & Sahm,
2004).
Para o estudo das amostras de urina deve ser efectuada uma colheita adequada, tendo em conta a
idade e a situao clnica, de forma a minimizar os agentes contaminantes:

Jacto mdio: colheita para doentes com controlo de esfncter.

Cateter urinrio: recolha atravs de puno do cateter (doentes algaliados).

Puno supra-pbica: aspirao de urina directamente da bexiga. Este mtodo assegura uma
amostra livre de contaminao (com excepo de microrganismos presentes na pele).

Saco colector: recm-nascidos e crianas sem controlo de esfncter.

Para a validao da amostra necessrio ter em conta alguns critrios, entre eles encontra-se a
contagem directa de unidades formadoras de colnias por mililitro (ufc/ml).
Para obteno do nmero de ufc/ml deve-se fazer contagem das colnias aps incubao da amostra
de urina semeada com ansa calibrada e correlacionar com os seguintes dados:

Nmero de ufc/ml > 105 Infeco urinria;

Nmero de ufc/ml < 104 Contaminao uretral ou vaginal;

Nmero de ufc/ml 104-105 Avaliao deve ser feita segundo critrios clnicos.

Para as amostras de urina recolhidas pelo mtodo de puno supra-pbica, o mtodo de

quantificao anteriormente discrito deve ser ignorado, e devem ser valorizados todos os
microrganismos isolados, com excepo de microrganismos comensais da pele (Faria, 2010).

1.3.2

Sangue (Hemocultura)

A invaso microbiana da corrente sangunea pode ter consequncias graves, como choque,
insuficincia de mltiplos orgos, coagulao intravascular disseminada e morte (Forbes & Sahm,
2004).
A presena de um cateter venoso central (CVC) aumenta o risco de colonizao por microrganismos
podendo levar a disseminao microbiana (Melo et al, 2007).
Perante a suspeita de infeco da corrente sangunea associada a ponta de cateter deve ser
realizado o seu exame microbiolgico, bem como de hemocultura com sangue colhido de veia
perifrica de outro acesso venoso. A amostra de sangue venoso colhida e inoculada directamente
no meio lquido para hemocultura em aerobiose.
As hemoculturas so analisadas num sistema automatizado, como o Bact/Alert, que faz a deteco
do crescimento de microrganismos (bactrias e fungos) em amostras de sangue (BioMrieux,
Bact/Alert MB, 2004).

Os frascos de hemocultura fornecem um meio de cultura com os nutrientes e condies ambientais

recomendadas para os microrganismos normalmente encontrados nas infeces sanguneas.
Aps semeados com sangue, os frascos so colocados no equipamento Bact/Alert onde feita
incubao (35-37C) e agitao contnua. Bact/Alert utiliza um sensor colorimtrico e luz reflectida
para detectar a presena de CO2. Se existir produo de CO2, confirma-se a presena de
microrganismos que durante a metabolizao dos substratos do meio de cultura produzem este gs.
Com a produo deste gs d-se uma alterao da cor do meio existente no frasco de hemocultura e
a amostra lida pelo aparelho como positiva (BioMrieux, Bact/Alert MB, 2004).
O cumprimento rigoroso de medidas de asspsia extremamente importante na reduo da
incidncia de contaminao (BioMrieux, Bact/Alert MB, 2004).
1.3.3

Amostras provenientes do aparelho reprodutor

Anatomicamente, o aparelho genital feminino constituido por uma sucesso de cavidades (trompas,
tero, endocolo, exocolo e vagina) que se comunicam com o exterior atravs de uma fenda vulvar
(vulva). Esta estrutura permite a entrada de microrganismos patognicos que podem prejudicar o
processo de reproduo (Linhares et al, 2010).
A microflora vaginal constitui um dos mais importantes mecanismos de defesa da funo reprodutora,
impedindo a proliferao de microrganismos potencialmente patognicos, nomeadamente devido ao
seu ambiente cido. Este ambiente mantido por alguns microrganismos presentes, com destaque
para Lactobacillus acidophilus (bacilo Gram positivo), que o principal constituinte desta flora
(Linhares et al, 2010).
A composio da flora vaginal no constante, sofrendo variaes consoante a idade e estado
fisiolgico. Na infncia e aps a menopausa, o pH vaginal neutro e a flora vaginal substituda por
outras espcies microbianas (Linhares et al, 2010) (Faria, 2010).
No caso de grvidas necessrio fazer a pesquisa de Streptococcus agalactiae para prevenir
contaminao materno-fetal (Faria, 2010) (Melo et al, 2007).
Para a deteco de infeces, so efectuadas colheitas de exsudados (ex: exsudado vaginal e do
endocolo). As colheitas so efectuadas com zaragatoa e enviadas para o laboratrio em meio de
transporte adequado.
1.3.4

Fezes (Coproculturas)

O intestino delgado (pH=4.5), encontra-se influenciado pela acidez do estmado (pH=2),

apresentando por isso uma flora escassa (Baron, 1996).
J o intestino grosso (pH=7), contem o um vasto nmero de microrganismos, sendo que, na grande
maioria so bactrias anaerbias (Vandenplas, 2009).
As infeces do aparelho gastrointestinal tm uma alta incidncia sobretudo em determinados grupos
etrios (crianas e idosos).

Para uma avaliao do possvel agente infeccioso, deve ser colhida uma amostra de fezes em
recipiente adequado.

1.3.5

Amostras provenientes das Vias Respiratrias

O Sistema respiratrio pode dividir-se em superior e inferior. A parte superior envolve a epiglote e
tecidos circundantes, laringe, cavidade nasal e faringe (Forbes & Sahm, 2004). A parte inferior
compreende a traqueia, brnquios, bronquolos e pulmes.
O diagnstico de infeces frequentemente dificultado pela contaminao das amostras pela flora
comensal das vias respiratrias superiores durante a sua colheita (Fonseca et al., 2004). Deve-se ter
em conta, os microrganismos presentes nesta flora e observ-los como contaminantes das amostras,
e no como causadores de infeco.
Podem ser efectuadas colheitas das seguintes amostras:

Expectorao

Secreces brnquicas

Lavado brnquico ou Lavado bronco-alveolar

Bipsia brnquica ou Bipsia pulmonar

Aspirado transtraqueal ou Aspirado pulmonar

O exame microbiolgico do exsudado nasal efectuado para despiste de MRSA (S.aureus resistente
meticilina). Cerca de 20 a 30% dos indivduos saudveis so portadores de S.aureus, podendo
existir MRSA. Neste sentido, importante fazer despiste de MRSA nos doentes hospitalizados, para
que seja possvel tomar medidas de preveno e controlo de infeco hospitalar (Versalovic, 2011).
1.3.6

Exsudado Cutneo, de ferida, escara ou auricular externo:

A pele representa uma barreira consideravelmente eficaz contra as infeces bacterianas. Apesar de
viverem sobre a pele muitas bactrias, normalmente so incapazes de provocar uma infeco.
Existem mais microrganismos nas zonas mais hmidas da pele (ex: axilas e virilhas).
Quando existe a suspeita de uma infeco, devem ser colhidos exsudados para anlise
microbiolgica, sendo tambm efectuados exsudados cutneos para controlo de infeco Hospitalar
(Forbes & Sahm, 2004).
1.3.7

Exsudado Ocular:

Devido sua exposio constante para o meio externo, a conjuntiva est sujeita a contaminao
microbiana intensa. A maioria dos microrganismos so removidos por lacrimao (que contm
lisozima), ficando apenas uma microbiota relativamente escassa. Quando ocorre uma interrupo do
equilbrio entre a flora residente e transitria, podem surgir doenas (Trindade, 1999) (Baron, 1996).
Perante a suspeita de infeco procede-se recolha de exsudado ocular.

1.3.8

Lquidos Corporais

Qualquer tecido do organismo ou lquido corporal estril pode ser invadido e infectado por agentes
potencialmente patognicos (Forbes & Sahm, 2004).
Os lquidos devem ser colhidos seguindo as normas de colheita e devem ser enviados de imediato
para o laboratrio. Alm do j referido sangue, existem outros lquidos estreis como: lquido
peritoneal (cavidade abdominal), lquido pleural (trax), lquido articular (articulaes), LCR (lquido
cerebrospinal) e blis (lquido biliar).

Informao clnica adicional um dado importante, na pesquisa do agente etiolgico e deve ser
fornecida ao laboratrio, juntamente com a amostra a analisar (Fonseca et al., 2004).

1.4 Meios de cultura:

Os meios de cultura fornecem s bactrias os nutrientes necessrios para o seu crescimento
(vitaminas, elementos minerais e fontes de energia,essencialmente de carbono e azoto), tornando
assim possvel a multiplicao de microrganismos em laboratrio, sob condies controladas. As
exigncias metablicas de bactrias e outros microrganismos so muito diversificadas e alguns
microrganismos ainda no so cultivveis (Forbes & Sahm, 2004) (Nelson & Cox, 2002).
Os meios de cultura podem dividir-se essencialmente em trs categorias gerais:

No selectivos: contm nutrientes que favorecem o crescimento da maioria dos

microrganismos (Forbes & Sahm, 2004).

Selectivos: contm um ou mais agentes que inibem todos os microrganismos excepto os que
se pretendem obter (Forbes & Sahm, 2004).

Diferenciais: contm factores que permitem s colnias bacterianas exibir certas

caractersticas que podem ser utilizadas para diferenciao de outras bactrias que crescem
no mesmo meio (Forbes & Sahm, 2004).

Apenas alguns meios de cultura so requeridos para uso dirio no diagnstico microbiolgico e cabe
aos responsveis do laboratrio a escolha dos meios a utilizar.
Tabela 1. 2 Meios de cultura utilizados neste estudo
Meio
MacConkey
Gelose Sangue
Chocolate

Objectivo principal
Meio de seleco e diferenciao para bacilos entricos Gram negativo
fermentadores e no fermentadores de lactose (nomeadamente
Enterobactereaceas spp. e Pseudomonas spp.) (Forbes & Sahm, 2004).
Meio no selectivo que permite o crescimento da maioria dos
microrganismos (Faria, 2010).
Meio no selectivo particularmente recomendado para o crescimento de
estirpes exigentes pertencentes ao gnero Neisseria e Haemophilus
(BioMriuex, 2009).

Columbiacolistina-cido
nalidxico
(CNA)
Yersinia CIN
Campylosel
Legionella
GVPC
Sabouraud
D-coccosel
(bile-esculina)
Hektoen
Chocolate com
Vancomicina,
colistina,
anfotericina e
trimetoprim
(V.C.A.T)
MRSA
Mueller-Hinton
MacConkey com
Sorbitol
Granada

Meio de seleco para microrganismos Gram positivo (BioMriuex, 2009).

Meio de seleco para espcies Yersinia (BioMriuex, 2009).

Meio de seleco para isolamento de Campylobacter spp. (C.jejuni e C.coli
principalmente) (BioMriuex, 2009).
Meio de seleco para maioria das espcies de Legionella (BioMriuex,
2009) (BioMrieux, Gelose Legionella GVPC: Isolamento selectivo das
legionellas, 2004).
Meio de seleco para fungos (BioMriuex, 2009).
Meio de seleco e diferenciao, para diferenciar enterococos de
estreptococos (BioMrieux, Produtos conventional culture media, 2012).
Meio de seleco e diferenciao para espcies de Shigella e Salmonella
(Becton, Hektoen Enteric Agar, 2011).

Meio de seleco para Neisseria spp. (Forbes & Sahm, 2004).

Meio de seleco e diferenciao para S.aureus resistentes a meticilina

(MRSA) (BioMrieux, Gelose MRSA, 2006).
Meio no selectivo usado para o estudo da susceptibilidade aos
antimicrobianos (BioMrieux, Gelose Mueller Hinton 2, 2002).
Meio de seleco e diferenciao para
MacConkey Agar with Sorbitol, 2003).

E.coli O157:H7 (Becton,

Meio de seleco e diferenciao para a deteco de Streptococcus

agalactiae (Becton, Granada Medium, 2011).

Alm dos meios mencionados anteriormente, existem outros tipos, tais como meios de
enriquecimento. So exemplos disso o Caldo para microrganismos Gram negativo (GN), meio
selectivo para patognicos entricos, o Caldo Todd Hewitt, meio selectivo para Streptococos
(ex.:S.agalactiae), e a Hemoline que se destina pesquisa de microrganismos aerbios (BioMrieux,
Caldo Todd Hewitt + Antibiticos, 2003).

1.5 Crescimento bacteriano:

Alm dos nutrientes fornecidos pelos meios de cultura, os microrganismos apresentam ainda outras
exigncias para que o seu crescimento seja obtido com sucesso: temperatura, atmosfera e pH (pH
tambm fornecido pelo meio de cultura).

A temperatura de incubao que possibilita o crescimento mais rpido num curto perodo de tempo
(geralmente 18-24 horas) chamada de temperatura ptima. Relativamente s temperaturas podemse distiguir os seguintes grupos de microrganismos:

Bactrias psicrotrfilas: capazes de crescer a temperaturas baixas (entre 0 e 15C).

Bactrias mesfilas: capazes de crescer entre 20 e 40C.

Bactrias termfilas: capazes de crescer a temperaturas altas (entre 40 e 60C);

Bactrias hipertermfilas: capazes de crescer a temperaturas muito altas (acima de 60C)

(Arcuri & et al, 2008) (Madigan & et al., Biology of Microorganisms, 2012).

A maioria dos microrganismos isolados neste estudo crescem a 36C 1, sendo por isso classificados
como mesfilos.
A exigncia ou no de determinados gases, nomeadamente o Oxignio e o Dixido de Carbono,
permite classificar as bactrias em:

Aerbios obrigatrios: proliferam no ar ambiente que contem 21% de Oxignio (O2) e uma
pequena quantidade (0,03%) de Dixido de Carbono (CO2);

Anaerbios obrigatrios: no crescem na presena de oxignio livre, podendo esta atmosfera

ser obtida atravs de geradores, bolsas ou cmaras de anaerobiose, compostas por 5 a 10%
de Hidrognio (H2) e CO2, 80 a 90% de Azoto (N2) e 0% de O2;

Anaerbios facultativos: crescem na presena ou ausncia de oxignio livre;

Captanfilos: requerem maior concentrao de CO2 (5-10%) e aproximadamente 15% de O2;

Microaerfilas: requerem concentraes menores de oxignio livre (5 a 10%) e maiores de

CO2 (8 a 10%). Este ambiente tambm pode ser obtido atravs de geradores ou de bolsas
(Forbes & Sahm, 2004).

A maioria dos microrganismos analisados neste estudo so aerbios e anaerbios facultativos.

Tambm o pH interfere no crescimento bacteriano. Este deve ser ajustado, consoante as

necessidades da bactria em estudo. Microrganismos que crescem optimamente a valores de pH
aproximadamente neutros, so chamados neutrfilos (a maioria dos analisados neste estudo). Por
contraste, os microrganismos que crescem melhor a valores de pH inferiores a 5,5 so chamados
acidfilos. Microrganismos que demonstrem um crescimento ptimo a valores de pH superiores a 8,
designam-se de alcaliflicos.
A populao atinge condies ptimas de crescimento quando se encontram reunidas as condies
nutricionais fornecidas pelo meio de cultura, e as condies fsicas a que so expostos (temperatura,
atmosfera e pH).

1.6 Preparaes a fresco e coloraes

A observao microscpica tambm um procedimento muito importante num laboratrio clnico,
pois ajuda na validao da amostra.
Existem dois mtodos gerais (mtodos directos) utilizados na preparao de amostras
microbiolgicas:
o

Exame a Fresco: baseia-se na observao directa da amostra ao microscpio, preservando a

forma natural dos microrganismos (Pereira & Petrechen, 2011) (Fonseca et al., 2004).

Exame ps-colorao: possibilita a colorao e fixao de microrganismos, para posterior

observao microscpica (Pereira & Petrechen, 2011).

A maioria das observaes microscpicas feita com colorao. O material celular e os

microrganismos so frequentemente transparentes e podem ser mais facilmente distinguidos pelo uso
de corantes (Pereira & Petrechen, 2011).
Neste Laboratrio so utilizadas dois tipos de coloraes: colorao de Gram e colorao de ZiehlNeelsen.
1.6.1 Colorao de Gram

A colorao de Gram um dos mtodos de colorao mais importantes utilizados em laboratrios de

microbiologia, indispensvel para o diagnstico e identificao de diversos microrganismos. Esta
colorao classifica os microrganismos com base nas suas caractersticas morfolgicas e tinturiais
(tamanho, forma e colorao)

(Pereira & Palomo, 2010) (Madigan & et al., Biology of

Microorganisms, 2012) (Murray, 2007) (Freitas & Picoli, 2007).

Certas bactrias quando tratadas por um corante bsico de pararosanilina (ex.: violeta de cristal), e
seguidamente pelo iodo, fixam o corante de tal modo que este no removido pelos diferenciadores
como lcool-acetona. A estas bactrias d-se o nome de bactrias Gram positivo, e coram de azul
escuro (Pereira & Palomo, 2010).
A parede das bactrias Gram positivo basicamente constituda por uma camada espessa de
peptidoglicano suficientemente porosa para permitir a passagem de metabolitos para a membrana
plasmtica (Forbes & Sahm, 2004) (Murray, 2007).
Outras bactrias so descoradas quando aplicado o diferenciador lcool-acetona, e chamadas de
Gram negativo. Estas bactrias apresentam uma fina camada de peptidoglicano na constituio da
parede. Para que se possam ver mais facilmente quando observadas ao microscpio, aplica-se um
corante de contraste, geralmente vermelho (fucsina ou safranina) (Forbes & Sahm, 2004) (Pereira &
Palomo, 2010) (Madigan & et al., Biology of Microorganisms, 2012).

Figura 1. 2 Observao microscpica

Figura 1. 1 Observao microscpica de bacilos

de cocos Gram positivo em cacho

Gram negativo (1000x), onde tambm visvel uma

(1000x) (foto deste trabalho).

clula epitelial (foto deste trabalho).

ainda possvel observar, atravs da colorao de Gram, as diferentes morfologias que as bactrias
podem apresentar. Deste modo, as bactrias podem apresentar forma esfrica (coco), forma de
bastonete (bacilo), forma oval (cocobacilo), forma de vrgula (vibrio), forma ondulada (espirlo), ou

em forma de espiral (espiroqueta) (ver Figura 1) (Madigan

& et al., Biology of Microorganisms, 2012) (Murray, 2007).

Algumas bactrias formam ainda agregados podendo

dispor-se em: pares, cachos e cadeias.
Figura 1. 3 Morfologia das bactrias
(Murray, 2007).

1.6.2

Colorao lcool-cido resistente (Ziehl-Neelsen)

Certos microrganismos possuem na sua parede cidos gordos de cadeia longa (cido miclico), que
conferem impermeabilidade ao violeta de cristal e a outros corantes bsicos. Calor ou detergentes
devem ser usados para permitir a entrada de corantes primrios nestas bactrias. Uma vez dentro
das clulas bacterianas, o corante no eliminado mesmo com solvente lcool-cido.
A colorao Ziehl Neelsen tem como princpio fundamental a colorao lcool-cido-resistente de
microrganismos e diferencia grupos especficos de bactrias como Mycobacterium spp. (Pereira &
Petrechen, 2011).

1.7 Testes de Identificao

Para a identificao do agente isolado alm de se ter em conta as observaes macroscpicas (ex:
caractersticas de colnias nos meios) e microscpicas (ex: caractersticas tinturiais e morfolgicas),
tambm temos que ter em considerao alguns testes de identificao (Pereira & Petrechen, 2011).
Para identificao do agente etiolgico foram realizados os seguintes testes:
1.7.1

Oxidase

Determina a presena da enzima intracelular Citocromo C Oxidase em bactrias. Esta enzima

participa no transporte de electres das vias metablicas da maioria das Pseudomonas spp.,
permitindo a diferenciao dos bacilos Gram negativo (Forbes & Sahm, 2004) (Macfaddin, 2000)
(BioMriux, 2005) (Versalovic, 2011).
Contudo, deve-se ter em conta algumas limitaes deste teste, para que no sejam obtidos
resultados falsos:
o

No utilizar ansas de ferro,

No utilizar uma cultura mista.

10

1.7.2

Catalase

Detecta a presena de catalase em bactrias, servindo essencialmente para a distino de cocos

Gram positivo. A catalase uma enzima intracelular que decompe o perxido de hidrognio (H2O2)
segundo a reaco qumica:
2H2O2 2 H2O + O2
Quando a catalase est presente verifica-se efervescncia na realizao da experincia, devido
libertao de oxignio resultante da hidrlise de H2O2 (Forbes & Sahm, 2004) (Macfaddin, 2000)
(Versalovic, 2011).
Para evitar resultados falsos, deve-se:
o

Evitar a utilizao de meios que contm sangue, pois os eritrcitos podem produzir uma fraca
reaco de catalase.

1.7.3

Coagulase

Verifica a capacidade de um microrganismo reagir com o plasma e formar um cogulo, por aco da
enzima coagulase. Um teste de coagulase positivo um critrio de diagnstico presuntivo para
identificar S.aureus. Desta forma possvel distinguir Staphylococcus coagulase positiva de
Staphylococcus coagulase negativa. As clulas de uma colnia recente so adicionadas a plasma de
coelho. Se o organismo possuir coagulase, a enzima age sobre o fibrognio no plasma e causa
agregao da bactria (de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999) (Macfaddin, 2000) (Versalovic, 2011).
Para que no sejam obtidos resultados de falsos positivos ou falsos negativos deve-se utilizar um
nmero suficiente de colnias na realizao do teste (uma a duas colnias).

1.7.4

Urease

Detecta a presena da enzima urease. Esta enzima catalisa a hidrlise de ureia em dixido de
carbono e amnia:
(NH2)2CO + H2O CO2 + 2 NH3

Se a urease estiver presente, hidrolisa a ureia e a amnia resultante aumenta o pH do meio

alcalinizando-o, pelo que a sua presena se detecta facilmente por meio de um indicador. A prova
considerada positiva aquando da alterao da cor do meio, e negativa na ausncia dessa alterao.
Deste modo, este teste ajuda na identificao de certas espcies de Enterobactereaceas (ex: Proteus
spp.) (Forbes & Sahm, 2004) (Versalovic, 2011).
Resultados de falsos positivos so considerados raros, mas podem ocorrer se o teste for lido aps 24
horas.

11

1.7.5

Indol

Determina a capacidade do microrganismo degradar o triptofano at produo de Indol. O

Triptofano um aminocido que pode sofrer oxidao pelas actividades enzimticas de algumas
1

bactrias, devido presena de triptofanase (Forbes & Sahm, 2004) (Macfaddin, 2000) (Versalovic,
2011).
Para que se obtenha um resultado vlido, deve-se considerar como positivo alteraes de cor
imediatas.

1.7.6

Teste de CAMP

A identificao presuntiva de estreptococos -hemolticos do grupo B de Lancefield (S.agalactiae)

pode ser feita atravs deste teste. A actividade hemoltica da -hemolisina produzida pela maioria das
estirpes de S.aureus acentuada por uma protena extracelular produzida por estreptococos do
grupo B.

Interaes da -hemolisina com esta protena causam sinergismo hemoltico, que

facilmente observado em placa de gar de sangue, pois a -hemlise apresenta-se sob a forma de
flecha. Este fenmeno observado quer em isolados hemolticos, quer no hemolticos de
estreptococos do grupo B (Washington Jr. et al, 2006) (de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999).
Para que se obtenham resultados vlidos, no devem ser utilizadas colnias velhas de S.aureus (pois
podem no produzir -hemolisina), nem se deve tocar as estrias da sementeira (para que no haja
resultado de falso positivo).

1.7.7

Hidrlise de esculina

Esta prova utiliza-se para determinar a capacidade de um microrganismo hidrolisar a esculina,

presente no meio D-coccosel. A esculina um composto fluorescente, contudo, aquando da sua
hidrlise a fluorescncia perdida e o meio torna-se preto. Deste modo em provas consideradas
positivas, o meio sofre alterao de cor para preto, sendo assim possvel distinguir os enterococos
(positivos para este teste) dos estreptococos.
A incubao do meio deve ser feita em aerobiose, pois existem estreptococos do grupo viridans que
conseguem hidrolisar a esculina quando incubados em atmosfera de CO2 (Forbes & Sahm, 2004)
(Washington Jr. et al, 2006).

Termo geral usado para denominar o sistema completo de enzimas que medeiam a produo de Indol

12

1.7.8

Sistemas automatizados

Pode ainda ser utilizado um sistema automatizado2: Vitek 2 Compact, para a identificao do
microrganismo isolado.
Este sistema realiza em simultneo a identificao de bactrias e os resultados do respectivo teste de
susceptibilidade a antimicrobianos (TSA) num nico relatrio e encontra-se associado a um programa
de computador que auxlia na interpretao dos resultados dos testes de sensibilidade (Fonseca et
al., 2004) (BioMrieux, VITEK 2 Compact , 2005).

1.8 Antibiograma - Teste de Susceptibilidade aos Antimicrobianos (TSA)

O antibiograma uma tarefa executada pelo sector de microbiologia clnica, que possibilita avaliar o
padro de resposta de bactrias (padro de sensibilidade) perante concentraes pr-estabelecidas
de antimicrobianos3.

Deste modo, as bactrias podem ser consideradas em trs categorias:

Resistente (R), Intermdio (I), ou Sensvel (S) ao agente antimicrobiano.

Mecanismos de aco dos antimicrobianos:

O modo como actuam os antimicrobianos baseia-se na inibio de processos essenciais
multiplicao da clula e, em ltima instncia, sua sobrevivncia. So divididos de acordo com a
estrutura alvo na clula bacteriana, como evidenciado na tabela 1.3 (Murray, 2007) (Washington Jr. et
al, 2006).

tabela 1. 3

Locais de aco dos antimicrobianos nas bactrias (Sousa, 2006).

Local de aco
Sntese da parede
celular
Membrana plasmtica
Sntese de cidos
nucleicos
Sntese proteica

Anti-metabolitos

Exemplos
Penicilina, Aztreonamo, Imepenemo, Ampicilina, Amoxacilina,
Piperacilina, Ticarcilina, Oxacilina, Meticilina, Cefpime, Cefuroxima,
Cefotaxima, Ceftazidima, Cefalotina, Cefoxitina, Meropenemo,
Vancomicina e Teicoplanina
Polimixina B e E (Colistina)
cido nalidixco
Ciprofloxacina e Ofloxacina
Linezolida, Amicacina, Tobramicina, Gentamicina, Cloranfenicol,
Tetraciclina, Eritromicina, Telitromicina, Lincosamina, Clindamicina,
Novobiocina, Estreptomicina, Estreptogramina A (quinupristina),
Estreptogramina B (dalfopristina) e Nitrofurantona.
Trimetoprim, Sulfonamidas e Cotrimoxazole (TrimetropimSulfametoxazol)

Neste laboratrio, normalmente, procede-se a identificao atravs de sistemas automatizados, quando se

tratam de microrganismos menos frequentes em patologias clnicas, ou quando no possvel a sua
identificao atravs dos testes de identificao mencionados.
3
qualquer tipo de droga, incluindo antibiticos, que tem a capacidade de inibir o crescimento de bactrias ou de
as matar, bacteriosttica ou bacteriocida, respectivamente.

13

Mecanismos de Resistncia aos antimicrobianos:

Os principais mecanismos de resistncia que uma bactria pode apresentar aco dos
antimicrobianos baseiam-se em:
a)

Inativao Enzimtica: Inactivao do antibitico atravs da produo de enzimas que

neutralizam os antibiticos. Estas enzimas podem ser: constitutivas, se forem produzidas
independentemente da presena do antimicrobiano; ou induzidas, se o antimicrobiano,
quando em contacto com a bactria, desencadeia ou estmula a produo enzimtica que
proteger a bactria dos efeitos dos antibiticos.

b)

Alterao da permeabilidade da membrana: A alterao nos canais de porina impedem a

passagem e consequentemente, a aco dos antimicrobianos.

c)

Efluxo activo de antibiticos: Capacidade de expulsar activamente os antibiticos para fora da

clula atravs de bombas de efluxo, contribuindo para uma concentrao insuficiente
realizao do seu efeito.

d)

Alterao do alvo do antimicrobiano: Os antimicrobianos ligam-se a alvos especficos na

parede celular da bactria. Se este for alterado o antimicrobiano no se consegue ligar e
torna-se ineficaz contra a bactria.

No contexto da resistncia aos antimicrobianos, os organismos procariticos podem apresentar

fundamentalmente os seguintes fentipos: resistncia intrnseca e resistncia adquirida.
A resistncia intrnseca uma caracterstica natural apresentada por todos os exemplares de uma
determinada bactria, podendo ser til na identificao. Exemplo: a resistncia de S.aureus
polimixina B (ver resistncias intrnsecas em apndice 1).
A resistncia adquirida resulta de mutaes cromossmicas e/ou transferncias de genes de
resistncia por elementos genticos mveis atravs de :
a)

Conjugao, onde o contacto com outras bactrias possibilita a transferncia de genes de

resistncia a antibiticos.

b)

Transformao, onde ocorre a captao de DNA livre no meio ambiente;

c)

Transduo, onde vrus que infectam bactrias (bacterifagos) transferem genes de virulncia
para as mesmas (Vieira, 2009) (Stansfield, 2005).

Um outro fentipo que as bactrias podem apresentar aco dos antimicrobianos a

susceptibilidade. Esta resulta da ausncia total de mecanismos de resistncia.

Todas as etapas envolvidas no procedimento do TSA e no resultado do mesmo, so padronizadas

por organizaes especializadas como:

Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, EUA) utilizada neste laboratrio

British Society for Antimicrobial Chemotherapy (BSAC, Reino Unido);

Comit de LAntibiogramme de la Socit Franaise de Microbiologie (CA-SFM, Frana);

European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST, Europa).

14

O TSA deve ser realizado para qualquer microrganismo que seja responsvel por um processo
infeccioso e que necessite de teraputica antimicrobiana, sempre que a susceptibilidade no puder
ser previsvel pelo conhecimento da identidade do microrganismo, ou esse microrganismo seja capaz
de exibir resistncia aos antimicrobianos mais frequentemente utilizados. Os antimicrobianos a utilizar
diferem consoante o tipo de microrganismo em estudo (ver listas em apndice 2) (CLSI, 2011)
(Fonseca et al., 2004).
Os mtodos correntes de testes de susceptibilidade a antimicrobianos (TSA), podem ser
classificados em trs grandes grupos:

Testes de diluio (pontos I e II)

Testes de difuso (ponto III)

Testes de gradiente de difuso ( ponto IV)

I.

Macrodiluo em meio lquido

Foi o primeiro mtodo a ser desenvolvido, sendo considerado o de referncia. Este mtodo consiste
na realizao de diluies sucessivas de agente antimicrobiano em caldo, existindo ainda um tubo
livre de agente antimicrobiano, para controlo de crescimento. Cada tubo inoculado com uma
suspenso do microrganismo a ser testado e incubado a 36C 1, durante 18-24 horas. Aps a
incubao, os tubos so examinados visualmente pela turvao. A existncia desta turvao indica
que o crescimento bacteriano no foi inibido pela concentrao de agente antimicrobiano presente.
A mais baixa concentrao de antimicrobiano em g/ml que impede o crescimento bacteriano (tubo
onde ja no visivel turvao) representa a concentrao minima inibitria, CMI.
Contudo, este mtodo no utilizado devido ao facto de ser muito trabalhoso e dispendioso
(Fonseca et al., 2004).
II.

Microdiluo em meio lquido (sistemas automatizados)

Na maioria dos laboratrios utilizado um sistema automatizado que se baseia na adaptao do

teste anterior a volumes menores. Este mtodo permite avaliar a susceptibilidade das bactrias
contra um vasto painel de AM (antimicrobianos) e a baixo custo. O uso dos sistemas automatizados
(ex: Vitek e Walk away) permite a execuo dos testes de sensibilidade com maior rapidez, pois estes
aparelhos possuem sistemas de deteco ptica capazes de medir alteraes discretas do
crescimento bacteriano.

Neste laboratrio utilizado o sistema automatizado Vitek 2 compact

(Fonseca et al., 2004) (BioMrieux, VITEK 2 Compact , 2005).

III.

Difuso

Os testes de difuso utilizam uma suspenso bacteriana padronizada que semeada em meio slido
apropriado ao mtodo utilizado (ex.: gelose Meller-Hinton para o mtodo de Kirby-Baer). Os discos
impregnados em antimicrobianos so colocados na sementeira e aps incubao so medidos os
tamanhos dos halos de inibio de crescimento, obtendo-se um resultado qualitativo que pode ser
lido em Sensvel / Intermdio /Resistente (Fonseca et al., 2004).

15

Mtodo de KIRBY-BAER

O mtodo de difuso em disco utilizado na rotina dos laboratrios clnicos, descrito por Kirby e Baer
em 1966, um dos mtodos de sensibilidade mais simples e confiveis.
O gar de Meller-Hinton considerado o meio mais adequado para testes de rotina de sensibilidade
contra bactrias no fastidiosas pelas seguintes razes:

Permite crescimento satisfatrio de microrganismos patognicos no fastidiosos: A

composio

deste

meio

permite

crescimento

de

bactrias

no

exigentes

(Enterobactereaceas spp., bacilos Gram negativo no fermentadores, estafilococos e

enterococos) detectados em patologia, garantindo um mnimo de interferncia dos
componentes da frmula no resultado do antibiograma (BioMriuex, 2009) (BioMrieux,
Gelose Mueller Hinton 2, 2002).

Contem baixos teores de inibidores de sulfonamida, trimetoprim e tetraciclina: Os meios que

contm teores excessivos de timidina ou timina podem reverter o efeito inibitrio destes trs
antibiticos, produzindo halos de inibio menores e menos ntidos, ou at mesmo nenhum
halo de inibio, o que pode resultar em falsa resistncia (BioMriuex, 2009) (BioMrieux,
Gelose Mueller Hinton 2, 2002) (CLSI, 2011).

Concentrao ajustada de ies bivalentes: As variaes

nos caties divalentes,

principalmente magnsio e clcio, afectam os resultados dos testes de aminoglicosdeos e

tetraciclinas contra estirpes de Pseudomonas aeruginosa. Um teor excessivo de caties
reduz o tamanho dos halos de inibio, enquanto que um baixo teor de caties poder
resultar em halos de inibio exageradamente grandes. Por este motivo, a concentrao
deste meio ajustada para assegurar uma preciso mais correcta na determinao da
sensibilidade das Pseudomonas spp. aos aminoglicosdeos e s tetraciclinas (BioMriuex,
2009) (CLSI, 2011) (BioMrieux, Gelose Mueller Hinton 2, 2002).

IV.

Gradiente de difuso (Etest)

Um dos mtodos quantitativos mais utilizados, o Etest, baseia-se em tcnicas de diluo e difuso. O
sistema compreende um gradiente antimicrobiano pr-definido que usado para quantificar a CMI em
g/ml (BioMrieux, Products: Etest, 2012).
Quando uma tira de Etest inoculada numa placa de gar, h uma imediata difuso do antibitico
pelo meio. Aps incubao, alm de ser visvel um crescimento bacteriano, tambm visvel uma
inibio elptica volta da tira (BioMrieux, Products: Etest, 2012).

1.9 Microrganismos
O mundo dos microrganismos muito vasto, contudo, sero apenas focados aqueles que foram
isolados com mais frequncia nas amostras clnicas estudadas.

16

1.9.1

Microrganismos Gram negativo:

Dentro destas caractersticas podemos destacar a famlia das Enterobactereaceas e os bacilos Gram
negativo no fermentadores.
1.9.1.1 Famlia de Enterobactereaceas:

Esta famlia engloba microrganismos obquos e constituintes da microbiota intestinal comensal da

maioria dos animais, inclundo seres humanos. Estes microrganismos so comuns em infeces
humanas, sendo os mais frequentemente isolados num laboratrio de microbiologia. Todos os
membros desta famlia so bacilos Gram negativo, aerbios e anaerbios facultativos, oxidase
negativo e fermentadores de glicose que crescem em MacConkey (Fonseca et al., 2004) (Poeta
& Rodrigues, 2008-2009) (de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999).
Tabela 1. 4 Lista de espcies Enterobactereaceas que podem ser associadas a infeces no
homem (Fonseca et al., 2004).
Citrobacter koseri
Enterobacter aerogenes

Shigella dysenteriae (grupo A)

Shigella flexeneri (grupo B)

Enterobacter cloacae
Serratia marcescens

Shigella boydii (grupo C)

Shigella sonnei (grupo D)

Serratia liquefaciens
Proteus mirabilis

Salmonella (todos os serotipos)

Yersinia pestis

Proteus vulgaris
Proteus penneri
Providencia retgeri
Providencia stuarti
Morganella morganni

Yersinia enterocolitica
Yersinia pseudotuberculosis
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella oxytoca

Estes microrganismos so associados a infeces gastrointestinas, urinrias e respiratrias, actuando

normalmente como patognicos oportunistas (Fonseca et al., 2004).
(ver morfologia tpica de algumas Enterobactereaceas em apndice 3)
1.9.1.2 Bacilo Gram negativo no fermentadores

Existem bactrias que, embora se apresentem como bacilos Gram negativo, tal como a famlia das
Enterobactereaceas, diferem desta por no utilizarem ou oxidarem a glucose (ao contrrio da
familia das Enterobactereaceas que a fermentam). So exemplos disso os gneros Acinetobacter
spp. e Stenotrophomonas spp.. Estes microrganismos no fazem parte da flora normal humana, mas
devido alta prevalncia de alguns deles em meio hospitalar, essencialmente Acinetobacter spp.,
podem colonizar a pele e o aparelho respiratrio de doentes hospitalizados (Fonseca et al., 2004).

17

Outros microrganismos que se diferenciam da famlia das Enterobactereaceas por serem Oxidase
positiva, como o caso de Pseudomonas spp., Burvodimonas spp., Rhizobium spp. e Ochrobactrum
spp..
Pseudomonas aeroginosa a espcie no pertencente famlia das Enterobactereaceas encontrada
com mais frequncia em amostras clnicas. Tambm a espcie Acinetobacter baumanii encontrada
algumas vezes, enquanto que as restantes raramente se encontram associadas a infeces no ser
humano (ver morfologia tpica de P.aeruginosa em apndice 4).

1.9.2

Microrganismos Gram positivo:

Destacam-se as famlias: Micrococcacea, Staphylococcacea, Streptococcacea e Enterococcacea,

como sendo as de maior interesse a nvel clnico.
1.9.2.1 Familia de Staphylococcaceae

Os gneros pertencentes a esta famlia so: Staphylococcus spp., Gemella spp., Jeotgalicoccus spp.,
Macrococcus spp. e Salinicoccus spp.. Contudo, os agentes etiolgicos mais comuns de doenas
humanas so os pertencentes ao gnero Staphylococcus (Forbes & Sahm, 2004) (de la Maza,
Pezzlo, & Baron, 1999) (Washington Jr. et al, 2006).
Os estafilococos so, geralmente, comensais ou patognicos oportunistas. A maioria das espcies
aerbia ou anaerbia facultativa, catalase positiva e apresenta-se frequentemente como cocos
em forma de cacho, quando observados ao microscpio aps colorao de Gram. Contudo, tambm
podem ser observados isoladamente, aos pares, ou em pequenas cadeias (Forbes & Sahm, 2004)
(Washington Jr. et al, 2006) (Poeta & Rodrigues, 2008-2009) (de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999).
A espcie patognica mais encontrada em infeces humanas o S.aureus. A distribuio deste
microrganismo muito ampla podendo ser encontrado em diversos locais, como em alimentos,
superfcies secas e em vrias regies do corpo humano (intestino, pele, mucosas, nasofaringe e
fossas nasais). S.aureus produz uma coagulase, enzima cuja deteco permite distinguir em dois
grupos, estafilococos coagulase positiva (s.aureus) e estafilococos coagulase negativo. O
estafilococo coagulase negativo, mais frequentemente encontrado em amostras clnicas o
S.epidermidis, que na maior parte das vezes corresponde a um agente contaminante (Forbes &
Sahm, 2004) (Washington Jr. et al, 2006) (Poeta & Rodrigues, 2008-2009) (de la Maza, Pezzlo, &
Baron, 1999).
Devido sua virulncia, o Staphylococcus aureus pode comprometer o organismo humano em
infeces sistmicas, ocasionando septicmia, endocardite, choque txico e outras complicaes,
independente da faixa etria e do ambiente em que foi adquirida a infeco (Souza, 2011).
(ver morfologia tpica de Estafilococos em apndice 5)

18

1.9.2.2 Famlia de Enterococcaceae

Os

gneros

pertencentes

esta

famlia

so:

Enterococcus

spp.,

Melissococcus

spp.,

Tetragenococcus spp. e Vagococcus spp. Destes microrganismos, os mais encontrados em infeces

humanas so os Enterococcus spp., nomeadamente: E.faecalis e E.faecium, que so aerbios ou
anaerbios facultativos e catalase negativa (Forbes & Sahm, 2004) (Washington Jr. et al, 2006)
(de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999).
Enterococcus spp. muito associado infeco hospitalar e a ITU (Fonseca et al., 2004).
(ver morfologia tpica de Enterococos em apndice 6)
1.9.2.3 Famlia de Streptococcacea

Os microrganismos desta famlia dispem-se normalmente aos pares (diplococos) ou em cadeias

lineares, quando vistos ao microscpio, aps colorao de Gram. So aerbios ou anaerbios
facultativos e catalase negativa (Forbes & Sahm, 2004) (Washington Jr. et al, 2006) (Poeta &
Rodrigues, 2008-2009) (de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999).
Os gneros que fazem parte desta famlia so Streptococcus spp. e Lactococcus spp.. Destes
microrganismos, os mais encontrados em infeces humanas so os Streptococcus spp.,
nomeadamente: S.pyogenes (ou estreptococos do grupo A de Lancefield), S.agalactiae (ou
estreptococos do grupo B de Lancefield), S.pneumoniae e S.viridans (Forbes & Sahm, 2004).
S.pyogenes (-hemoltico) um patognico que causa amigdalite bacteriana nas crianas dos 5 aos
10 anos de idade (Fonseca et al., 2004).
S.agalactiae (gama ou -hemoltico) cujo despiste importante no 3 trimestre de gravidez, para
previnir a infeco neonatal que pode ocasionar quadros graves de septicmia e meningite (Forbes &
Sahm, 2004) (Poeta & Rodrigues, 2008-2009).
S.pneumoniae (-hemoltico), a principal causa de pneumonia da comunidade e frequente causa de
pneumonia, meningite, otite e sinusite, contudo o microrganismo pode residir sem provocar danos nas
vias respiratrias superiores (Forbes & Sahm, 2004) (Fonseca et al., 2004).
S.viridans, (gama ou -hemoltico), consideram-se em geral patognicos oportunistas de baixa
virulncia. So microrganismos frequentemente envolvidos em endocardite bacteriana (Forbes &
Sahm, 2004).
(ver morfologia tpica de Estreptococos em apndice 7)
1.9.2.4 Bacilos Gram positivo

Dos microrganismos que se apresentam sob a forma de bacilos Gram positivo, aqueles que mais
frequentemente so isolados em amostras clnicas so os pertencentes aos gneros: Listeria e
Corynebacterium ( Mena & et al, 2004).
Contudo, durante este estgio apenas foi detectada a presena de Corynebacterium spp.

19

Corynebacterium spp. pode ser aerbio ou anaerbio facultativo, fermentadoras de glicose e

outros carbohidratos e , na sua maioria so catalase positiva (Oliveira & et al, 2005).
Estas bactrias encontram-se amplamente distribudas na natureza (solo e gua) e fazem parte da
flora da pele e mucosas do homem. Os isolamentos em produtos biolgicos de bactrias deste
gnero, so geralmente considerados contaminantes. No entanto, o seu repetido isolamento sugere a
sua implicao na etiologia do processo infeccioso (Washington Jr. et al, 2006) (Oliveira & et al,
2005).
(ver morfologia tpica de Corynebacterium spp. em apndice 8)

1.9.3

Outros microrganismos

Alm dos microrganismos anteriormente mencionados detectou-se tambm a presena de leveduras.

(ver apndice 9)
Para as leveduras realizado, neste laboratrio, um teste de germinao, que permite concluir se
estamos perante C.albicans (germinao positiva). ainda utilizado o sistema automtico de
identificao, quando se justifica (ex:hemoculturas).

Tambm foi possvel a observao de outros microrganismos presentes em amostras clnicas, que
no as urinas, como o caso de Haemophilus influenzae (coco-bacilo Gram negativo), muito
frequente em exsudados oculares.
Para deteco deste microrganismo alm do exame directo (colorao de Gram) e exame cultural
(gelose Sangue e Chocolate) utilizam-se testes de identificao:
o

teste de demonstrao da exigncia dos factores de crescimento hemina (X) e/ou

Nicotinamida adenina dinucleotdeo-NAD (V). Haemophilus influenzae exige a presena de
ambos para o seu desenvolvimento, no crescendo quando apenas se encontra presente um
dos factores (Forbes & Sahm, 2004) (Fonseca et al., 2004).
(ver apndice 10)

sistemas automatizados

20

2. Parte Experimental:
2.1 Materiais, Equipamentos e Reagentes:
Equipamentos:
Previ-Color Gram: colorao automtica de Gram, da Biomrieux
Microscpio ptico Olympus BX41: Microscpio com ocular de 10x e quatro objectivas diferentes,
10x, 20x, 40x e 100x.
Bact/Alert 3D 120: sistema automatizado para Hemoculturas e Micobactrias (Biomriuex).
Vitek2 compact (BioMrieux): sistema automatizado para identificao de bactrias e
antibiograma
Camara de segurana biolgica (classe II): para proteco do operador e segurana no
processamento de amostras.
Estufa (ar ambiente ) e estufa de CO2
Materiais:
Meios de cultura da BioMrieux.
Ansas calibradas de 1l e 10l, de Sarstedt
Zaragatoas, de APTACA.
Lminas Normax: Lminas com bordos esmerilados com dimenses 76x26 mm e espessura
0,95x1,05 mm.
Lamelas Normax: dimenses 22x22 mm e espessura 0,13x0,17 mm.
BD BBL DRYSlide: Discos impregnados com reagente oxidase de dimetro 6mm, para a prova da
oxidase.
Kit slidex staph plus: teste de identificao presuntiva de S.aureus, para prova da coagulase, da
Bio-Rad.
Aplicador automtico de discos de antibiticos em placas de agar (90 e 150mm), para realizao
de antibiogramas pelo mtodo de Kirby-Bauer
Densimat: Medidor de densidade para antibiogramas realizados pelo mtodo de Kirby-Bauer:
(BioMrieux)
Materiais para Vitek2-Compact:
o

Cartas de identificao

Cartas para antibiogramas

Tubos polisterino

Dispensador de soluo salina

Aparelho de densidades DensiCHEK

Nos procedimentos experimentais foi ainda utilizado material corrente de laboratrio, Micropipetas
e geradores de microaerofilia e anaerobiose da BioMrieux

21

Reagentes:
Reagente Kovacs, para o teste da Ureia/Indol (BioMrieux)
Perxido de Hidrognio (H2O2) para catalase
Soluo salina da BioMrieux, para Vitek2-Compact
Reagentes para colorao de Ziehl-Neelsen:
o

Fucsina: Reagente de Kinyoun (BioMrieux)

lcool-cido (970ml lcool etlico 96% ; 30 ml de HCl)

Azul de Metileno: Soluo de Gabett (BioMrieux)

Reagentes para Previ-color Gram:

o

Previ-Color Gram Soluo de Violeta de Cristal, da bioMrieux

Previ-Color Gram Soluo de Iodo, da bioMrieux

Previ-Color Gram Soluo de Acetona-Fucsina, da bioMrieux

2.2 Procedimento Experimental

2.2.1

Trabalho 1: Estudo estatstico das vrias amostras biolgicas

2.2.1.1 Processamento das vrias amostras

Urina
Exame cultural

Aps homogeneizao, a amostra semeada com ansa calibrada de 1l, utilizando a tcnica
de sementeira em estrias4.

Meios de cultura: gelose Sangue e MacConkey (a gelose Sangue substituda por gelose
CNA nos algaliados)

As placas so incubadas durante um perodo de 18-24 horas a 36C1 em aerobiose;

Exame directo
o

Exame de esfregao da urina pela colorao de Gram

Com a ajuda de uma pipeta de pasteur, colocar uma gota de urina previamente
homogeneizada e no centrifugada na lmina, sem a espalhar (tcnica de esfregao de
lquidos).

Esperar que a gota seque e fixar chama (bico de bnsen)

Proceder colorao
o

Exame directo a fresco do sedimento urinrio

Centrifugao a 1800 rpm durante 5 minutos. Decantar e utilizar o sedimento para fazer
exame citolgico.

Avaliao semi-quantitativa da presena de elementos celulares tais como clulas epiteliais,

eritrcitos, leuccitos, e microrganismos (bactrias, fungos e parasitas).

Depositar a amostra no meio de cultura atravs de uma estria ao meio da placa. Realizar estrias
perpendiculares primeira estria, rodar a placa 90 e fazer novamente estrias.

22

Sangue
Exame cultural
A amostra de sangue venoso colhida e inoculada directamente no meio lquido para hemocultura em
aerobiose introduzida no equipamento automtico (Bact/ALERT 3D), por leitura de cdigo de
barras. Se o aparelho detectar alguma positividade emitido um sinal e o frasco retirado. As
negativas mantm-se em incubao at ao 5 dia, findo os quais so assinaladas como negativo e
retiradas.
Exame cultural (Hemocultura positiva):

So efectuadas passagens para meios de cultura:

Agitar suavemente o frasco.

Inserir uma agulha para ventilar o frasco e colocar posteriormente uma seringa na agulha
para retirar aproximadamente 1ml.

Colocar uma gota em cada um dos seguintes meios: gelose CNA, gelose Chocolate e
MacConkey.

Efectuar a sementeira em quadrantes5 com a ajuda de uma ansa descartvel.

Incubar a gelose de Chocolate e CNA em atmosfera de aerobiose rica em CO2 e MacConkey

em aerobiose durante 18-24 horas a 36C 1. Voltar a incubar a gelose CNA e a gelose
Chocolate at 48 horas, se no houver crescimento s 24 horas.

Exame directo:

efectuado esfregao6 para colorao pelo mtodo de Gram, cuja

observao pode

constituir informao importante como resultado preliminar.

Ponta de cateter vascular
Deve ser enviada hemocultura acompanhante colhida de veia perifrica 30 minutos antes da retirada
do cateter. critrio de rejeio o no cumprimento desta norma.
Exame cultural:

Colocar o cateter em gelose Chocolate asspticamente com o auxlio de uma ansa.

Fazer o cateter rodar sobre a superfcie do meio

Incubar a 36C1 em atmosfera de aerobiose rica em CO2, at 48 horas.

Amostras provenientes do aparelho reprodutor:

Exame cultural

Utiliza-se a tcnica de sementeira em quadrantes, em gelose Chocolate e Sabouraud.

Podem ainda ser utilizados outros meios, alm destes, em casos especficos:
o

Granada: despiste de S.agalactiae, solicitado no 3 trimestre de gravidez.

VCAT: perante suspeita clnica de N.gonorrhoeae

Depositar a amostra no meio de cultura atravs da realizao de vrias estrias num primeiro quadrante (sem
levantar a ansa do meio). Realizar estrias nos quadrantes seguintes, tocando sempre com a ansa nas estrias do
quadrante anterior.
6
Colocar uma gota de sangue na extremidade da lmina, em seguida posicionar uma segunda lmina junto
dessa gota com uma inclinao de sensvelmente 45, e fazer correr esta segunda lmina sobre a primeira.

23

Incubar durante, 18-24 horas a 36C1, a gelose Chocolate, VCAT e Granada em atmosfera
de aerobiose rica em CO2 ,e a gelose sabouraud em atmosfera de aerobiose.

Exame directo

Efectuar um esfregao de zaragatoa7 e corar pela tcnica de Gram.

Fezes
Por rotina, so efectuadas pesquisas de Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia enterocolitica e
Campylobacter spp.
Exame macroscpico

Devem ser registados todos os aspectos macroscpicos importantes, tais como: fezes
moldadas ou diarreicas, mucosas, sanguinolentas.

Exame cultural

Deve-se selecionar uma poro com muco e/ou sangue.

Semear em quadrantes, usando uma ansa descartvel, nos seguintes meios: Hektoen,
MacConkey com sorbitol, Yersinia e Campylosel.

Incubar galose Campylosel a 42C em microaerfilia durante 48 horas, e os restantes em

aerobiose, durante 18-24 horas a 36C 1

Colocar o resto da amostra em caldo GN.

Incubar a 36C 1 em aerobiose, durante 6 horas e fazer a subcultura para gelose Hektoen.

Amostras provenientes das vias respiratrias

Exame cultural
o

Expectorao, secreces brnquicas e lavado bronco-alveolar

Fazer sementeira utilizando a tcnica em quadrantes, nos seguintes meios: gelose Chocolate,
CNA, e MacConkey.

Incubar os meios gelose Chocolate e CNA em atmosfera de aerobiose rica em CO2 e o meio
de MacConkey em aerobiose, durante 18-24 horas a uma temperatura de 36C 1.
o

Exsudado Nasal pesquisa de Staphylococcus aureus (portador)

Vigilancia epidemiolgica pesquisa de Staphylococcus aureus meticilino resistente ( MRSA)

Fazer sementeiras, utilizando a tcnica em quadrantes nos meios: MRSA e CNA

Incubar os meios em atmosfera de aerobiose rica em CO2 durante 18-24 horas, a 36C 1.
o

Exsudado farngeo

Utilizar tambm a tcnica de sementeira em quadrantes, para fazer o cultivo deste produto
em CNA .

Semear em meio liquido (caldo de Todd Hewitt), subcultura aps incubao de 24 horas para
gelose CNA

Incubar em atmosfera de aerobiose rica em CO2 durante um periodo de 18-24h, a 36C1.

Rodar a zaragatoa para a frente e para trs em reas contguas da lmina.

24

Exame directo
o

Expectorao, secreces brnquicas e lavado bronco-alveolar

Exame macroscpico da amostra e escolha da poro purulenta para execuo de esfregao

Fazer duas lminas por tcnica de esmagamento8

Corar pela tcnica de Gram e Ziehl-Neelsen (quando solicitado pesquisa de bacilos lcoolcido resistente, por suspeita de Tuberculose.)

Exsudado cutneo, ferida, escara e auricular externo

Exame cultural

Semear em quadrantes, utilizando a zaragatoa com a amostra para realizar o primeiro

depsito nos seguintes meios: MRSA (apenas para exsudado cutneo), MacConkey, CNA e
Chocolate.

Em seguida utilizam-se ansas descartveis para realizao dos quadrantes seguintes.

Incubar os meios de Chocolate, MRSA e CNA em atmosfera de aerobiose rica em CO2 , e

MacConkey em aerobiose, durante 18-24 horas a 36C 1

Exame directo

Fazer lmina por rolamento de zaragatoa

Corar por Gram

Exsudado Ocular
Exame cultural:

Semear em quadrantes nos seguintes meios: gelose de Sangue e gelose Chocolate.

Em seguida utilizar ansas descartveis para realizar os quadrantes seguintes.

Incubar o meio gelose Chocolate em atmosfera de aerobiose rica em CO2 e gelose Sangue
em aerobiose, durante 24-48 horas a 36C 1.

Exame directo:

Fazer lmina por rolamento de zaragatoa

Corar por Gram.

Lquidos corporais
Exame cultural:

Retirar 2 a 3ml de lquido, com a ajuda de uma seringa.

Colocar uma gota em gelose Chocolate e semear em quadrantes.

Incubar o meio em atmosfera de aerobiose rica em CO2 durante 24-72horas a 36C 1.

Inocular em meio lquido de enriquecimento (Hemoline), incubar a 36C 1, em aerobiose

Exame directo:

Esfregao corado pelo mtodo de Gram (tcnica de esfregao de lquidos)

Depositar amostra sobre a lmina e pressionar com uma segunda lmina. Deslizar suavemente as lminas em
direces opostas.

25

Esfregao corado pelo mtodo de Ziehl-Neelsen: no caso de pesquisa de Bacilos lcoolcido resistentes. (tnica de esfregao de lquidos)

2.2.1.2 Procedimento efectuado para coloraes

Para qualquer colorao necessrio iniciar com os seguintes procedimentos:

Depositar a amostra na lmina

Esperar que seque e fixar chama (bico de bnsen)

Colorao de Gram utilizando o aparelho Previ-color Gram

Colocar os esfregaos previamente fixados no aparelho e esperar que este complete o ciclo
de colorao.

Colorao de Ziehl-Neelsen

Cobrir a lmina com soluo de Fucsina e aquecer, passando uma chama no lado oposto da
lmina, at emisso de vapores;

Deixar actuar o corante durante 15minutos;

Lavar a lmina com gua corrente;

Cobrir novamente a lmina, mas agora com lcool-cido

Lavar a lmina com gua corrente;

Corar com azul de metileno durante 20 segundos;

Lavar com gua corrente e esperar que seque.

Observar ao microscpio ptico.

2.2.2

Trabalho 2: Uroculturas

Aps a recepo das amostras de urina so efectuados os seguintes procedimentos:

Exame a
fresco e
pscolorao
Sementeira
e incubao

Validao
e emisso
do
resultado

Execuo
do
Antibiograma

Validao
da amostra

Identificao
do agente
isolado

Leitura e
interpretao
do
Antibiograma

Figura 2. 1 Fluxograma com procedimento efectuado em urinas

26

O exame a fresco, a colorao de Gram, a sementeira e incubao so realizados tal como descrito
na primeira parte do estudo.

Para validao da amostra temos em conta a avaliao a fresco, a colorao de Gram, a presena de
culturas puras e o nmero de ufc/ml.

Para identificao do microrganismo isolado, so realizados vrios testes/provas, que juntamente

com outros dados (ex:crescimento em determinado meio de cultura), vo permitir a identificao do
microrganismo.
Prova da Urease

Transferir uma poro do crescimento bacteriano, para um meio

contendo ureia e um indicador de pH (vermelho de fenol);

Incubao a 36C 1 por 18 a 24 horas.

Resultado positivo: alterao da cor do meio (amarelo) para rosa;

Resultado negativo: ausncia de alterao de cor.

Prova do Indol

Utilizar o tubo que contem o resultado da prova da urease;

Colocar uma gota de reagente kovacs;

Resultado positivo: Quando se forma anel rosa superfcie do meio

Resultado negativo: Quando se forma anel de qualquer outra

tonalidade.

Prova da Oxidase

Retirar do meio, uma colnia com a ajuda de uma ansa descartvel;

Espalhar a colnia sobre o disco impregnado que j contm o

reagente de oxidao (BD Dryslide Oxidase- slidex)

Resultado positivo: aparecimento em 20 segundos de uma colorao

que vai de violeta a prpura;

Resultado negativo: reaces tardias, ou a ausncia de cor, indicam um teste negativo.

Prova da Catalase

Depositar uma gota de perxido de hidrognio (H2O2) numa lmina de vidro;

Colocar uma colnia sobre esta gota;

Resultado positivo: quando h efervescncia devido libertao de oxignio;

Resultado negativo: no h efervescncia.

27

Prova da Coagulase

Dispensar uma gota de reagente patorex: staph-plus (vermelho), num dos

crculos da placa de reaco (disponvel com o kit);

Colocar uma gota de reagente de controlo positivo (S. Aureus: ATCC

29213) noutro crculo;

Adicionar 1-3 colnias em cada uma das gotas;

Resultado positivo: formam-se partculas vermelhas isoladas (agregao)

Resultado negativo: no se formam as partculas.

Hidrlise de Esculina

Utilizar uma ansa de plstico para colocar uma poro de colnias no meio;

semear em quadrantes

Resultado positivo: o meio apresenta uma tonalidade escura;

Resultado negativo: o meio no altera a sua cor.

Teste de CAMP

Colocar no centro da placa de gar de sangue (horizontalmente) uma estria de -hemolisina

produzida por S.aureus comercial (Controlo positivo : S. aureus
ATCC 29213)

Inocular perpendicularmente ao S.aureus o estreptococo a testar,

tendo o cuidado para no intersetar com o S.aureus

Incubar em aerobiose 36C 1, durante 18-24 horas

Resultado positivo: quando a -hemlise se apresenta sob a forma

de flecha;

Resultado negativo: a -hemolise no apresenta esta forma.

(Ver possveis resultados dos testes de identificao em apndice 12)

Sistema automatizado
o

Procedimento utilizado em Cartas de identificao para Vitek2

Encher tubos de vidro com 3ml de soluo tampo;

Colocar uma colnia nesta soluo, com a ajuda de uma zaragatoa;

Agitar no vortex;

Observar a densidade da soluo que deve estar entre :

0,50 e 0,63 Mcf (Mcfarland) para Gram negativo e Gram positivo;

1,8 e 2,2 Mcf para leveduras;

2,7 e 3,3 Mcf para Corynebacterium sp.

Colocar no aparelho para que seja identificado o microrganismo.

28

Depois de identificado o microrganismo, pode ento proceder-se realizao do antibiograma. Este

pode ser feito por dois metodos: atravs de sistema automatizado Vitek 2 compact, ou atravs do
mtodo manual de Kirby-Baer.
Sistema automatizado

Pipetar 145l da soluo preparada para carta de identificao;

Colocar a soluo pipetada em outro tubo que j continha 3ml de soluo tampo;

Colocar carta de idenfificao em contacto com esta soluo, atravs de um tubo de

aspirao ligado carta;

Colocar todo este conjunto no aparelho.

Mtodo de Kirby-Baer:

O meio de cultura e os discos de antimicrobianos devem ser armazenados no frio (2 a 8C) e

retirados deste para arrefecer temperatura ambiente antes de serem usados;

Se o meio apresentar excesso de humidade na superfcie, as placas devem ser colocadas

numa estufa (36C 1), at que o excesso de humidade evapore (normalmente entre 10 a 30
minutos);

Colher colnias puras e isoladas, com o auxilio de uma ansa, e suspender em soluo
fisiolgica estril;

Comparar a suspenso com a escala 0,5 de McFarland de turvao;

Realizar inoculao no meio de cultura ( Meller-Hinton)

Colocar os discos de antibitico com a ajuda de um dispensador, pressionando suavemente

contra o meio, de modo a garantir que permaneam fixos no local de aplicao. Depois de
colocados, os discos no devem ser removidos.

As placas so incubadas por 16- 24 horas, em aerobiose, a 36C 1.

Para o TSA de Staphylococcus spp., o disco da oxacilina e cefoxitina, devem ser incubados a
temperaturas mais baixas, aproximadamente 30C.

Aps o crescimento procede-se realizao da leitura e interpretao de antibiograma:

Medio dos halos: efectuar a leitura por observao directa do halo de inibio (rea sem
crescimento) e, com o auxlio de uma rgua, fazer a medio do dimetro. Comparar com o
valores consenso de CLSI, para dar o resultado de Resistente/Intermdio ou Sensvel.

Leitura e interpretao do antibiograma: ter em conta os diferentes fentipos das

bactrias. Durante este procedimento verificar se a tcnica foi bem executada: Num inculo
bem executado, os halos de inibio resultantes sero uniformemente circulares e haver um
tapete confluente de crescimento. Se se observarem colnias individuais, o inculo foi
demasiado leve e o teste dever ser repetido. No caso de crescimento evidente de colnias
dentro de um halo de inibio, dever ser feita a repetio do teste. Se o crescimento das
colnias persistir, deve ser medido o halo de inibio livre de colnias. Em alguns Proteus

29

spp. pode-se orbservar um vu de crescimento dentro do halo de alguns antibiticos que

deve ser ignorado. importante o conhecimento dos mecanismos de resistncia, e ateno
aos diferentes fentipos de resistncia bacteriana (natural e adquirida) de forma a permitir
uma validao correcta dos resultados do antibiograma.

Concludos estes processos, analisam-se todos os seus resultados em simultneo, e se no

levantarem qualquer suspeita de erro, a amostra validada e enviada para o clnico atravs de um
sistema computadorizado.

Resumindo os passos anteriormente descritos, os microrganismos isolados so identificados segundo

os fluxogramas que se seguem:

Bacilos Gram negativo

Crescimento em gelose de Sangue e

MacConkey
Teste de Oxidase

Negativo (sugere famlia de

Enterobactereacea)

Positivo (sugere bacilo Gram negativo no

fermentador ex:Pseudomonas spp.)

Testes de identificao manuais (ex: Urease e

Indol) e sistema automatizado

Antibiograma

Validao e emisso do resultado

Figura 2. 2 Fluxograma de Bacilos Gram negativo

30

Cocos Gram positivo

Crescimento em gelose sangue (e gelose
de CNA)
Teste da Catalase

Negativo (sugere Streptococcus spp. e

Enterococcus spp.)

Positivo (sugere Staphylococcus spp.)

Testes de identificao manuais (ex:Teste de Camp,

coagulase e Hidrlise de esculina) e sistema
automatizado

Antibiograma

Validao e emisso do
resultado
Figura 2. 3 Fluxograma de cocos Gram positivo

Bacilos Gram positivo

Crescimento em gelose sangue (e gelose

de CNA)

Teste da Catalase

Positivo (sugere Corynebacterium spp.)

Negativo

Testes de identificao manuais (ex: Gram da

cultura) e sistema automatizado

Antibiograma

Validao e emisso do resultado

Figura 2. 4 Fluxograma de bacilos Gram positivo

31

Esta pgina foi propositadamente deixada em branco

32

3. Resultados e Discusso
3.1 Trabalho 1: Estudo estatstico das vrias amostras biolgicas
Durante o estgio de seis meses realizado no laboratrio de microbiologia (outubro 2011- maro
2012), foram analisados 9092 produtos biolgicos. Um avaliao estatstica de todos os produtos,
permitiu conclur acerca do produto mais frequentemente analisado neste laboratrio.

Tabela 3. 1 Produtos biolgicos

analisados durante o perodo de
estgio (outubro 2011- maro 2012)
Produto
Urina
Sangue
Amostras das Vias
respiratrias
Amostras do Aparelho
reprodutor
Fezes
Exsudado cutneo
Lquidos corporais
Exsudado ocular

total
3294
2288

TOTAL

9092

Exsudado
cutneo
5%

Lquidos Ex.ocular
1%
4%
Fezes
7%

Aparelho
reprodutor
7%

Urina
36%

1405
668
614
425
345
53

Vias
respiratrias
15%

Sangue
25%
Grfico 3. 1 Percentagens de produtos biolgicos

analisados durante o perodo de estgio

Tabela 3. 2 Produtos biolgicos analisados

de janeiro a junho de 2011

Produto
Urina
Sangue
Amostras das Vias
respiratrias
Amostras do
Aparelho reprodutor
Fezes
Exsudado cutneo
Lquidos corporais
Exsudado ocular

TOTAL

total
3409
2478

Ex.cutneo Lquidos
3%
3%
Fezes
7%
Aparelho
reprodutor
8%

Exsudado
ocular
1%

Urina
34%

1883
756
656
340
270
60
9852

Vias
Respiratrias
19%

Sangue
25%

Grfico 3. 2 Percentagens de produtos biolgicos

analisados de janeiro a junho de 2011

33

Observando os dados anteriores (grfico 3.1 e tabela 3.1), verifica-se que o produto biolgico mais
analisado durante o perodo de estgio foi a urina com 36% (n=3294). Este resultado est de acordo
com a literatura, pois as infeces urinrias encontram-se entre as que mais levam os pacientes a
consultas mdicas. Estima-se que cerca de 10% dos seres humanos sofrem uma infeco urinria
em alguma altura da sua vida (Forbes & Sahm, 2004) (Camargo & et al, 2001) (Sahm, Forbes, &
Weissfeld, 2007).
De janeiro a junho de 2011 foram analisados 9852 produtos biolgicos, e foi verificado mais um dado
a favor de que as urinas so realmente o produto mais analisado.

Tambm o sangue foi uma amostra analisada com alguma frequncia (25%), sendo o segundo
exame mais frequente neste estudo. A invaso microbiana da corrente sangunea pode ter graves
consequncias, como choque, insuficincia de mltiplos orgos, coagulao intravascular e morte.
Isto d-nos a indicao de que a invaso da corrente sangunea uma das infeces mais graves, e
por conseguinte, a rpida deteco e identificao dos patognios transportados pelo sangue uma
das funes do laboratrio de microbiologia (Forbes & Sahm, 2004).
As amostras provenientes das vias respiratrias tambm foram analisadas com alguma regularidade
(15%), o que corrobora outros trabalhos descritos. Segundo os mesmos, estes produtos so
analisados com bastante frequncia, mas ainda assim, menos que as urinas e o sangue (Jorgetto &
et al, 2005).

Os produtos provenientes do aparelho reprodutor foram unicamente do sexo feminino e

corresponderam a 7% dos analisados. O exsudado vaginal foi o mais requisitado, pois trata-se de um
exame importante no diagnstico pr-natal para despiste de mulheres portadoras de S.agalactiae
(estreptococos do grupo B de Lancefield), no 3 trimestre da gravidez, como preveno da infeco
neonatal.

As doenas diarreicas so, por todo o mundo, uma importante causa de morte, especialmente em
crianas com idade inferior a 5 anos (Forbes & Sahm, 2004).
As fezes constituem 7% das amostras analisadas, semelhana do que se verificou para as
amostras provenientes do aparelho reprodutor. Desta forma, este tipo de amostra surge como o
quinto produto mais analisado.

Outros Produtos biolgicos relacionados como exsudado cutneo, exsudado ocular e lquidos
corporais, so menos frequentes, apresentando por isso uma menor afluncia de anlise neste
laboratrio.
Finalmente, analisando o tabela 3.1 em simultneo com o tabela 3.2, observa-se que a ordem dos
produtos analisados se mantem inaltervel, independentemente da altura do ano em estudo.

34

3.2 Trabalho 2: Uroculturas

Durante um perodo de trs meses (de 1 janeiro de 2012 a 31 maro de 2012), foram analisadas
1408 amostras de urina provinientes de pacientes do sexo feminino e masculino, que se
apresentaram nos diferentes servios hospitalares. Desta anlise, 36 % (n=500) apresentaram
resultado positivo (uroculturas positivas).

Tabela 3. 3 Resultados positivos

e negativos
Urinas

Resultados

Negativos

908

Positivos

500

total

1408

Positivos
36%
Negativos
64%

Grfico 3. 3 Percentagens de resultados positivos e

negativos
O predomnio das uroculturas positivas ocorreu no sexo feminino com 68% dos casos (grfico 3.4),
assemelhando-se assim a vrios trabalhos j descritos (Muller & et al, 2008) (Kazmirczak & et al.,
2005) (Menin & et al., 2010).

Tabela 3. 4 Resultados positivos

consoante o sexo.
Sexo

Resultados

Feminino
Masculino

341
159

total

500

Masculino
32%
Feminino
68%

Grfico 3. 4 Percentagens de resultados positivos

consoante o sexo
Este predomnio pode ser explicado pelo facto das mulheres serem mais susceptveis a este tipo de
infeco, devido estrutura anatmica do aparelho urinrio (uretra curta e proximidade com o nus).
O facto de nos homens a incidncia ser menor (32%), pode ser explicado pelo maior comprimento
uretral, maior fluxo urinrio e pela presena de antibacteriano prosttico (Muller & et al, 2008).
Alm desta diferena entre sexos, foi tambm verificada uma diferente distribuio por grupo etrio.

35

uroculturas positivas no sexo masculino

por grupo etrio.
Grupo etrio
1
2-10
11-20
21-30
31-40
41-60
61-80
81
Total

Percentagens
2,4
1,2
0,0
0,0
0,4
2,2
14,2
11,4
32

Quantidade de Uroculturas
positivas

Tabela 3. 5 Percentagens de
Masculino
71
57

12
1

11

2-10 11-20 21-30 31-40 41-60 61-80 81

Grupo etrio (anos)

Grfico 3. 5 Uroculturas positivas no sexo masculino

por grupo etrio

Atravs da observao dos valores anteriores (Grfico 3.5 e Tabela 3.5), verifica-se que para
crianas com idade inferior a 1 ano, o resultado de uroculturas positivas no sexo masculino foi 2,4%
(n=12), e que h medida que a idade da criana aumentou (2-10anos), ocorreu uma diminuio para
1,2% (n=6). Entre os 11 e os 30 anos no se obtiveram uroculturas positivas, voltando estas a surgir
a partir dos 31 anos.
Tabela 3. 6 Percentagens de uroculturas
Feminino

etrio
Grupo etrio
1
2-10
11-20
21-30
31-40
41-60
61-80
81
Total

Percentagens
2,0
6,4
3,8
4,0
5,6
8,8
21,0
16,6
68

Quantidade de uroculturas
positivas

positivas no sexo feminino por grupo

105
83
44

32

10
1

19

20

28

2-10 11-20 21-30 31-40 41-60 61-80 81

Grupo etrio (anos)

Grfico 3. 6 Uroculturas positivas do sexo feminino por

grupo etrio

Nos valores apresentados no grfico 3.6 e tabela 3.6, observa-se que, para o sexo feminino, o
nmero de uroculturas positivas em idades inferiores a 1 ano , foi de 2,0% (n=10), menos 0,4% do
que o verificado para o sexo masculino. Este resultado pode estar relacionado com a presena de
mal formaes congnitas no sexo masculino, que so mais frequentes neste sexo (Kazmirczak & et
al., 2005).
Verificou-se tambm que foram encontrados resultados positivos em todas as faixas etrias, ao
contrrio do que aconteceu no sexo masculino, e que a incidncia tem tendncia a aumentar
significativamente com a idade. Todos os grupos etrios, com excepo do j referido grupo de

36

idades inferiores a 1 ano, apresentaram percentagens superiores s obtidas para o sexo masculino,
isto , as uroculturas positivas foram predominantes no sexo feminino.
Estudos prvios mostraram que a incidncia de bacteriria (presena de bactrias na urina) no sexo
feminino aumenta gradualmente com a idade (Sahm, Forbes, & Weissfeld, 2007). O que est de
acordo com os resultados obtidos neste estudo.
A predominncia de uroculturas positivas no sexo feminino est relacionada, tal como j referido, com
a estrutura anatmica do aparelho urinrio da mulher, agravando-se ainda com a juno de outros
factores, tais como:
o

Em idades entre os 20 e os 40 anos, a probabilidade de uma infeco reincidir em 1ano de

50%;

A associao das ITU com relaes sexuais tambm est relacionada com o aumento da
incidncia, devido possvel introduo de bactrias na uretra feminina;

Tambm a gravidez aumenta a incidncia de bacteriria, devido a alteraes anatmicas e

hormonais. Estas alteraes podem levar a infeces graves em ambos, me e feto (Sahm,
Forbes, & Weissfeld, 2007).

Observa-se ainda que em ambos os sexos, as uroculturas positivas foram mais frequentes para
indivduos com idade acima dos 60 anos (63,2% : ver clculo em apndice 13), tal como se verificou
em outros estudos (Muller & et al, 2008) (Kazmirczak & et al., 2005) (Menin & et al., 2010) (Sahm,
Forbes, & Weissfeld, 2007).
Estes resultados podem estar relacionados com a presena de clculos urinrios e doena prosttica,
que obstruem o fluxo urinrio causando esvaziamento vesical incompleto e consequentemente a
infeco urinria (Kazmirczak & et al., 2005) (Muller & et al, 2008).
Das 500 amostras de urina com resultado positivo, foi possvel isolar 22 tipos diferentes de
microrganismos, incluindo leveduras. Estes microrganismos, bem como o respectivo nmero de
isolamentos, so evidenciados no grfico 3.7.

Quantidades isoladas

281

64 55

39 39 37
25 18

Microrganismos isolados

Grfico 3. 7 Distribuio dos microrganismos isolados nas amostras de urina

37

Os microrganismos isolados com maior frequencia, foram :

o

Escherichia coli com 46,5% (n=281);

Proteus mirabilis com 10,6% (n=64);

Enterococcus faecalis com 9,1% (n= 55);

Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa com 6,5% (n=39);

Staphylococcus aureus com 4,1% (n=25);

Streptococcus agalactiae com 3,9% (n=18). (ver tabela de percentagens em apndice 14)

Deste modo, possvel constatar que os microrganismos maioritariamente isolados das amostras de
urina foram bacilos Gram negativo pertencentes famlia das Enterobactereaceas, com evidncia a
E.coli, semelhana do que est descrito por outros autores (Muller & et al, 2008) (Kazmirczak & et
al., 2005) (Jorgetto & et al, 2005) (Camargo & et al, 2001) (Orestein & et al., 1999) (Guidoni &
Toporovski, 2001) (Grossman & Caroni, 2009) (Sahm, Forbes, & Weissfeld, 2007).
A Escherichia coli um microrganismo pertencente flora normal do intestino humano que pode
contaminar e consequentemente causar infeces extra-intestinais.
Na literatura consta que o segundo microrganismo mais isolado em urinas Klebsiella spp., contudo,
neste estudo P.mirabilis foi mais frequente (Kazmirczak & et al., 2005) (Grossman & Caroni, 2009)
(Duarte & et al., 2008). A capacidade de P.mirabilis provocar infeces do trato urinrio facilitada
pela sua capacidade em degradar a ureia.
Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis, S.aureus e S.agalactiae
tambm surgiram com alguma frequncia, semelhana do que est descrito na literatura, onde
estes microrganismos so identificados como sendo dos mais comumente isolados de amostras de
urina (Kazmirczak & et al., 2005) (Jorgetto & et al, 2005) (Camargo & et al, 2001) (Sahm, Forbes, &
Weissfeld, 2007) (Caldern & et al., 2009).
Para alm destas espcies foram tambm isolados, embora em pequenas quantidades (inferior a 15
isolamentos), os seguintes microrganismos: Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecium,
Staphylococcus epidermidis, Klebsiella oxytoca, Acinetobacter baumanii, Morganella morganii,
Citrobacter koseri, Corynebacterium sp, Providencia stuartii, Proteus vulgaris, Enterobacter
aerogenes, Serratia marcencens, Serratia liquefaciens e Enterobacter cloacae.
Foi tambm possvel a deteco de 37 leveduras, sendo na sua maioria C.albicans. Se compararmos
o total de bactrias obtido (n=567 : ver clculo deste valor em apndice 15), com o total obtido para
as leveduras (n=37), constatamos que o valor para estes segundos microrganismos muito inferior.
Assim sendo, conclu-se que leveduras surgem com menor frequencia em amostras de urina,
relativamente a bactrias (Grossman & Caroni, 2009).

O ambiente hospitalar desempenha um papel importante na seleco dos microrganismos isolados

de amostras de urina, pois existem microrganismos que se desenvolvem mais facilmente em doentes
hospitalizados (doentes internados) (Sahm, Forbes, & Weissfeld, 2007).

38

Por este motivo, foi feita a distino entre doentes internados e doentes externos, para todos os
microrganismos acima mencionados. A distino deste tipo de doentes permitiu obter os resultados
representados no grfico 3.8.

externos

Microrganismos isolados

Quantidades isoladas por

doentes externos VS
internos

internos

163

43 25
15 18 35 12
13
118 21 30 24 21

13

7
0

0
6

3
3

1
3

2
1

2
1

1
2

2
1

0
2

0
2

2
0

0
2

0
2

0
1

Grfico 3. 8 Distribuio dos microrganismos isolados por doentes internados e doentes externos.
(legenda: valores acima do eixo horizontal correspondem a doentes externos (rosa claro); valores
abaixo do eixo horizontal correspondem a doentes internos/internados (rosa escuro)).

Observando este ltimo grfico, possvel verificar que os microrganismos isolados com maior
regularidade neste laboratrio, diferiram de doentes externos para doentes internos (internados).
As espcies bacterianas com maior frequncia de isolamento em doentes externos tiveram a seguinte
ordem:
o

E.coli com 47,4% (n=163)

P.mirabilis com 12,5% (n=43)

E.faecalis com 7,3% (n=25)

K.pneumoniae com 5,2% (n=18)

P.aeruginosa com 4,4% (n=15)

S.agalactiae com 3,8% (n=13)

S.aureus com 3,5% (n=12).

Para os doentes internos, embora se mantenha constante o tipo de microrganismos isolados mais
frequentemente, a ordem foi ligeiramente diferente:
o

E.coli com 45,4% (n=118)

E.faecalis com 11,5% (n=30)

P.aeruginosa com 9,2% (n=24)

P.mirabilis e K.pneumoniae com 8,1% (n=21)

S.aureus com 5,0% (n=13)

39

S.agalactiae com 1,9% (n=5). (ver tabela com percentagens em apndice 16)

E.coli foi a espcie mais isolada em ambos os tipos de doentes (internados e externos), sendo a
maioria dos casos adquiridos em doentes externos (na comunidade). Estes resultados encontram-se
de acordo a literatura (Maldaner & et al., 2011) (Sahm, Forbes, & Weissfeld, 2007).
Tambm P.mirabilis foi encontrado com maior regularidade em doentes externos, relativamente a
doentes internados. Este resultado pode estar relacionado com a constante associao desta espcie
a clculos urinrios e doena prosttica (Faria, 2010).
Quanto espcie E.faecalis, foi isolada um maior nmero de vezes a partir de amostras provenientes
de doentes internados. A sobrevivncia dos microrganismos pertencentes ao gnero Enterococcus
em ambiente hospitalar deve-se sua resistncia intrnseca a vrios antibiticos utilizados
comumente, e, talvez mais importante ainda, a sua capacidade de adquirir resistncia aos
antibiticos, seja por mutao ou recepo de material gentico atravs de plasmdeos (Horner & et
al, 2005).
Os resultados positivos para P.aeruginosa foram maioritariamente de doentes internados. A ampla
resistncia deste microrganismo aos antibiticos favorece a sua seleco em doentes internados
(Faria, 2010).
ainda de salientar que ao contrrio do que aconteceu com S.aureus e K.pneumoniae, S.agalactiae
foi isolado maioritariamente de doentes externos. Esta predominncia em doentes externos, pode
estar ligada com a sua pesquisa especfica em gestantes no terceiro trimestre de gravidez, no
havendo para tal a necessidade de internamento da utente. Este microrganismo tem grande
relevncia mdica deste na contaminao de neonatos, sendo importante o despiste da portadora,
para eventual profilaxia (Borger & et al., 2005).
Se observarmos a tabela que se segue, verificamos que o isolamento deste microrganismo ocorre
quase exclusivamente no sexo feminino, e que grande parte da sua incidncia ocorre na mulher em
idade frtil (n=9).
Tabela 3. 7 Isolamentos de S.agalactiae por sexo e grupo etrio
Grupo etrio
(anos)
1
2-10
11-20
21-30
31-40
41-60
61-80
81
Total

Masculino

Feminino

0
0
0
0
0
0
1
1
2

0
1
3
3
3
2
3
1
16

Total em
idade
frtil =9

Tambm as leveduras foram isoladas com alguma frequncia, o que corrobora a literatura (Sahm,
Forbes, & Weissfeld, 2007).
Para os restantes microrganismos, no foi retirada qualquer concluso, quer em doentes externos e
internos, devido sua baixa incidncia (n15).

40

Tambm a distino entre doentes algaliados e no algaliados importante para a avaliao dos
microrganismos isolados na urina, pois a presena de cateter temporrio ou permanente pode
influenciar na seleco dos microrganismos.

Dos 500 produtos com resultado positivo, foi possvel o isolamento de um total de 604
microrganismos. Esta diferena de valores entre produtos e microrganismos, est relacionada com a
deteco de 71 amostras polimicrobianas (14,2%), nomeadamente em indivduos algaliados.
Tabela 3. 8 Amostras polimicrobianas (2 e 3 tipos diferentes de microrganismos na mesma amostra)
em doentes algaliados e no algaliados.

Doentes no
algaliados
n
%
319
93
24
7
0
0
343
367

Doentes algaliados
tipos microrganismos
1
2
3
total amostras
total microrganismos

n
93
48
16
157
237

%
59
31
10

total amostras
412
72
16
500
604

A introduo de cateter no aparelho urinrio, especialmente os que permanecem durante algum

tempo, acarreta um risco de infeco urinria. A cateterizao e a sua longa permanncia so
factores que favorecem a colonizao e facilitam o aparecimento de infeces urinrias, que em
alguns casos pode ser assintomtica (Sahm, Forbes, & Weissfeld, 2007).
Por este motivo, a deteco de floras polimicrobianas mais frequente em doentes algaliados (41%:
ver clculo deste valor em apndice 17), do que em indivduos no algaliados (7%).
Microrganismos isolados

no algaliados
algaliados

Quantidades isoladas por

doentes algaliados VS no
algaliados

213

38 20

21 12
0

68 26 35 18 27 0

10 12

15

Grfico 3. 9 Distribuio dos microrganismos por doentes algaliados e no algaliados

41

Lengenda do Grfico: valores acima do eixo horizontal correspondem a doentes no algaliados (rosa
claro); e valores abaixo do eixo horizontal correspondem a doentes algaliados (rosa escuro).

Pode-se constatar, atravs do grfico 3.9, que para os indivduos no algaliados houve um maior
isolamento com a seguinte ordem:
o

E.coli com 60,7% (n=213)

P.mirabilis com 10,8% (n=38)

Klebsiella pneumoniae 6,0% (n=21)

E.faecalis com 5,7% (n=20)

P.aeruginosa e S.agalactiae com 3,4% (n=12)

S.aureus com 2,8%(n=10).

Para os indivduos algaliados, a ordem alterou-se ligeiramente para:

o

E.coli com 31,9% (n=68)

E.faecalis com 16,4% (n=35)

P.aeruginosa com 12,7% (n=27)

P.mirabilis com 12,2% (n=26)

K.pneumoniae com 8,5% (n=18)

S.aureus com 7,0% (n=15)

S.agalactiae com 2,8% (n=6). (ver tabela com percentagens em apndice 18)

Mais uma vez, semelhana do que aconteceu quando foi feita a distino entre doentes internos e
externos, a espcie E.coli foi o microrganismo isolado com maior afluncia quer em doentes
algaliados, quer no algaliados. No entanto, pde constatar-se que esta espcie foi mais frequente
em individuos no algaliados. Os microrganismos encontrados apresentaram percentagens de
isolamento que diferem significativamente das obtidas para doentes internados/externos. O que
corrobora a teoria de que estes dois determinantes esto relacionados com a seleco dos
microrganismos.
Tambm foi possvel verificar que houve maior nmero de isolamentos em indivduos algaliados,
relativamente a indivduos no algaliados, para os seguintes microrganismos: E.faecalis, S.aureus, e
P.aeruginosa.
Alguns destes resultados podem estar relacionados com a capacidade dos microrganismos em aderir
a superfcies plsticas de corpos estranhos, como cateteres (Forbes & Sahm, 2004)

(Washington

Jr. et al, 2006) (Muller & et al, 2008) .

S.agalactiae foi, tal como esperado, mais isolado em doentes no algaliados, pois como j foi referido
anteriormente, esta espcie pesquisada especificamente em gestantes.
Mais uma vez, no foi feita qualquer observao para os restantes microrganismos, devido aos
baixos valores que apresentaram.
Nos grficos e tabelas que se seguem avaliou-se a incidncia dos microrganismos em indivduos
algaliados, por sexo e grupo etrio.

42

Tabela 3. 9 Percentagens de microrganismos em indivduos algaliados, por sexo feminino e grupo

Grupo etrio
1
2-10
11-20
21-30
31-40
41-60
61-80
81
Total

Quantidade de
microrganismos isoslados

etrio
Percentagens
0
0
0
0
3,0
5,1
23,2
27,4
58,6

Feminino
55

65

12

1 2-10 11-2021-3031-4041-6061-80 81
Grupo etrio (anos)

Grfico 3. 10 Microrganismos em indivduos

algaliados, por sexo feminino e grupo etrio

Os valores apresentados anteriormente (grfico 3.10 e tabela 3.9), para o sexo feminino, demonstram
que a incidncia de uroculturas positivas em indivduos algaliados foi de 58,6% (n = 139 : ver clculo
deste valor em apndice 19).
S se obtiveram isolamentos acima dos 31 anos, e foi notvel um aumento da sua incidncia com a
idade.
Idades superiores a 60 anos foram as que apresentaram uma percentagem de uroculturas positivas
mais significativa, com 50,6% (n=120 : ver clculo destes valores em apndice 19), do total de
microrganismos isolados em ambos os sexos. Isto , mais de metade dos microrganismos isolados
resultaram de indivduos do sexo feminino, nomeadamente em idades superiores a 60 anos.

3.

10

Percentagens

microrganismos em indivduos algaliados,

por sexo masculino e grupo etrio

Masculino
Quantidade de microrganismos
isolados

Tabela

51
35

Grupo etrio
1
2-10
11-20
21-30
31-40
41-60
61-80

Percentagens
0,4
0,0
0,0
0,0
0,0
4,6
21,5

81

14,8

Grfico 3. 11 Microrganismos em indivduos algaliados,

Total

41,4

por sexo masculino e grupo etrio

11
1
1

2-10 11-20 21-30 31-40 41-60 61-80 81

Grupo etrio (anos)

Para o sexo masculino (grfico 3.11 e tabela 3.10), observou-se que a incidncia de uroculturas
positivas foi de 41,4% (n=98 : ver clculo deste valor em apndice 20).

43

S foram isolados microrganismos em indivduos com idade superior a 40 anos, com excepo de um
nico isolamento numa criana com menos de 1 ano.
Tambm para este sexo se registou uma percentagem de uroculturas positivas mais significativa
acima dos 60 anos, com 36,3% (n=86 : ver clculo destes valores em apndice 20), do total de
microrganismos isolados em ambos os sexos.
Ao contrrio do que aconteceu para o sexo feminino, nota-se que para idades acima de 81 anos,
existiu um ligeiro decrscimo da incidncida de uroculturas positivas, isto , no ocorreu um aumento
sucessivo.

Este resultado pode estar relacionado com a esperana mdia de vida associada a

ambos os sexos:
o

76,14 anos para os homens;

82,05 anos para as mulheres (INE, 2010).

Como a esperana mdia de vida para os homens se situa abaixo dos 80 anos, normal que a
percentagem de isolamentos de microrganismos em uroculturas diminua do grupo etrio dos 61-80
anos para o grupo etrio acima 81 anos .
Posto isto, podemos constatar que a frequncia de uroculturas positivas em indivduos algaliados foi
maior em :
o

indivduos do sexo feminino (58,6%);

em idades superiores a 61 anos, com 86,9% (n=206 :ver clculo destes valores em apndice
20).

A incidncia de uroculturas positivas em idades mais avanadas pode estar relacionada com o facto
destes indivduos estarem mais susceptveis a adquirir infeco hospitalar devido diminuio da
resposta imunolgica, o que causa vulnerabilidade a condies adversas, tal como estes
procedimentos invasivos.
Estes resultados corroboram os obtidos para o estudo feito inicialmente para o total de
microrganismos isolados, onde as uroculturas positivas tambm foram mais frequentes em indivduos
do sexo feminino, e em idades superiores a 60 anos.

44

4. Concluses:
Com o primeiro estudo (trabalho1) foi possvel conclur que a urina o produto biolgico mais
analisado neste laboratrio, independentemente do semestre. Sendo a infeco urinria uma das
mais frequentes.

Com o segundo estudo (trabalho 2), analisaram-se 1408 amostras de urina, tendo-se verificado que a
grande maioria eram negativas (64%). Notou-se um predomnio de uroculturas positivas no sexo
feminino (68%), verificando-se isolamentos de microrganismos em todos os grupos etrios,
contrariamente ao que se verificou para o sexo masculino, onde entre os 11 e os 30 anos no se
obtiveram uroculturas positivas.
Verificou-se tambm um predomnio destas uroculturas positivas em idades superiores a 60 anos
(63,2%) para ambos os sexos.

Destas uroculturas positivas foi possvel isolar 22 tipos de microrganismos. Os microrganismos com
percentagens de isolamento baixas (n<15), no foram includos no estudo.
E.coli foi o microrganismos mais isolado neste estudo, com 46,5%, seguido de outros bacilos Gram
negativo, nomeadamente Enterobactereaceas spp., e alguns cocos Gram positivo.
Os microrganismos mais frequentemente isolados variaram a sua ordem de acordo com a situao
clnica em estudo (doentes internados/externos e doentes algaliados/no algaliados).
Para os indivduos algaliados, foi ainda possvel constatar que apresentaram com maior frequncia
amostras polimicrobianas.

Com este estudo foi possvel tomar conhecimento da prevalncia dos patognicos locais, mediante
diversos determinantes. Este conhecimento de extrema importncia a nvel clnico, pois juntamente
com o conhecimento do perfil de susceptibilidade, vai permitir a elaborao de protocolos de
actuao teraputica importantes para um tratamento mais rpido e adequado.

45

Esta pgina foi propositadamente deixada em branco

46

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50

6. Apndices:
Apndice 1

Microrganismo

Ampicilina

Amoxacilina + c.
Clavulnico

Ticarcilina

Piperacilina

Cefoxitina

Cefuraxima

Trimetoprim
+
sulfametoxazol

Nitrofurantona

Tabela 6. 1 Resistncias intrnsecas de Microrganismos Gram negativo (R=Resistente)

Klebsiella spp.

--

--

--

--

--

--

E.coli

--

--

--

--

--

--

--

--

P.mirabilis

--

--

--

--

--

--

P.vulgaris

--

--

--

--

--

Pseudomonas spp.

--

--

--

--

--

--

--

Microrganismo

Polimixina B

Eritromicina

Clindamicina

Novobiocina

Ampicilina

Tabela 6. 2 Resistncias intrnsecas de Microrganismos Gram positivo (R=Resistente)

S.saprophyticus

--

--

--

--

S.aureus

--

--

--

--

S.coagulase negativo

--

--

--

--

--

Streptococcus sp.

--

--

--

--

--

E.faecalis

--

--

--

E.faecium

--

--

--

51

 Apndice 2
Tabela 6. 3 Antibiticos utilizados no mtodo de Kirby-Bauer
Gram negativos

Enterococcus sp.

Staphylococcus sp.

Outros Gram negativo

Estreptomicina altamente
concentrada
Ampicilina
Linezolide
Ciprofloxacina
Gentamicina altamente
concentrada

Cefoxitina

Colistina

Ciprofloxacina
Cloranfenicol
Penicilina

Amicacina
Tobramicina
Gentamicina

Oxacilina

Ceftazidima

Tobramicina

Vancomicina

Teicoplanina

Gentamicina

Nitrofurantona

Eritromicina

Amicacina
Meropenem
Cefotaxima
Amoxacilina+
c.clavulnico
Nitrofurantona
Piperacilina +
Tazobactam
Trimetoprim +
Sulfametoxazol :
Cotrimoxazole
Ceftazidima
Ciprofloxacina

Teicoplanina
Novobiocina

Tetraciclina
Vancomicina
Gentamicina

Trimetoprim +
Sulfametoxazol
Piperacilina +
Tazobactam
Aztreonamo
Ticarcilina
Piperacilina

Clindamicina

Cefpime

Nitrofurantona
Trimetoprim+
Sulfametoxazol

Meropenemo

Polimixina B

Ciprofloxacina

Cefuraxima
Cefoxitina
Cefalotina
Ampicilina
Ticarcilina

Imipenemo

Linezolida
Novobiocina

Apndice 3

Morfologia tpica de algumas Enterobactereaceas

Colnias de E.coli em gelose de sangue apresentam tipicamente uma colorao creme, podendo
algumas estirpes apresentar hemlise . Em MacConkey normalmente so fermentadoras de lactose
(Lac+), de cor rosa, brilhantes e com depresso central.

Figura 6. 1 Colnias de E.coli em

MacConkey (foto deste trabalho).

Figura 6. 2 Colnias de E.coli em

gelose sangue (foto deste trabalho).

52

Klebsiella sp. em MacConkey apresenta regularmente colnias grandes, fermentadoras de lactose

(Lac+), de cor de rosa, brilhantes e mucides.

Figura 6. 3 Colnias de Klebsiella pneumoniae em MacConkey (foto deste trabalho).

Proteus spp. em gelose Sangue apresenta na grande maioria das vezes um vu resultante da sua
mobilidade. Em MacConkey estas colnias so tipicamente transparentes, isto , no fermentadoras
de lactose (Lac-)

Figura 6. 4 Colnias de Proteus

Figura 6. 5 Colnias de Proteus

mirabilis em gelose Sangue (foto

mirabilis em MacConkey (foto deste

deste trabalho).

trabalho).

Apndice 4
Morfologia tpica de P.aeruginosa

Em gelose Sangue as colnias normalmente apresentam um bordo irregular e uma pigmentao que
as distingue das outras Pseudomonas spp.: azul-esverdeado (pigmento piocianina) ou vermelho
acastanhado (pigmento piorubina). Frequentemente apresentam um brilho metlico e -hemoltica.
(de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999)
Em agar de MacConkey as colnias so tpicamente no fermentadoras de lactose (Lac-), podendo
apresentar pigmentao esverdeada, ou acastanhada. (de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999)

53

Figura 6. 6 Colnias de P.aeruginosa

Figura 6. 7 Colnias de P.aeruginosa

em gelose sangue (foto deste trabalho).

em MacConkey (foto deste trabalho).

Apndice 5
Morfologia tpica de estafilococos.

As colnias de Staphylococcus coagulase negativa, em gelose sangue, so normalmente de cor

branca e sem hemlise, j as colnias de S.aureus apresentam normalmente uma colorao
creme/camura, circundadas por uma zona de -hemlise. (de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999)

Figura 6. 8 Colnias de S.aureus em

Figura 6. 9 Colnias de Estafilococos

gelose sangue (foto deste trabalho).

coagulase negativa em gelose sangue

(foto deste trabalho).

Apndice 6

Morfologia tpica em Enterococcus spp.

As colnias, em gelose sangue, apresentam tpicamente cor branca ou acizentada, geralmente sem
hemlise. (de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999)

54

Figura 6. 10 Colnias de Enterococcus spp. em gelose

sangue (foto deste trabalho).

Apndice 7
Morfologia tpica de Estreptococcus spp.
S.agalactiae em gelose Sangue apresenta normalmente colnias grandes, mas com uma -hemlise
pequena. (de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999)
S.pneumoniae em gelose Sangue apresenta regularmente colnias translcidas, mucides ou no, e
circundadas por -hemlise. (de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999)
.

Figura 6. 11 Colnias de S.agalactiae em

Figura 6. 12 Colnias de S.pneumoniae em

gelose sangue (foto deste trabalho).

gelose sangue (foto deste trabalho).

Apndice 8
Observao microscpica de Corynebacterium spp.

Alguns Corynebacterium spp. (frequentemente chamados de difterides) apresentam-se como

colnias pequenas, branco-acizentadas e no hemolticas, em gelose sangue. Podem facilmente ser
confundidas com colnias de estreptococos, especialmente quando isoladas do aparelho respiratrio.

55

Algumas espcies aparecem brancas e opacas, semelhantes a estafilococos coagulase-negativos.

(de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999)

Figura 6. 13 Colnias de Corynebacterium spp. em gelose sangue (foto deste trabalho).

Apndice 9
Leveduras
Ao microscpio apresentam colorao azul (Gram positivo) e so fceis de identificar devido s suas
dimenses celulares.

Figura 6. 14 Leveduras ao microscpico (1000X) (foto deste trabalho).

Apndice 10
Morfologia tpica de Haemophilus influenzae

As colnias de H.influenzae so lisas, redondas, planas, algumas vezes opacas e acizentadas.

H.influenzae requer ambos os factores X e V para o seu crescimento (ambos esto presentes em
gelose chocolate). (de la Maza, Pezzlo, & Baron, 1999)

56

Figura 6. 16 H.influenzae em gelose chocolate

(foto deste trabalho).

Figura 6. 15 Demonstrao da exigncia

dos factores de crescimento para

Apndice 11

H.influenzae (foto deste trabalho).

Parasitologia

Figura 6. 17 Ovo de Ascaris lumbricoides

(400x) (foto deste trabalho).

Figura 6. 18 Ovo de Trichuris trichiura

(400x) (foto deste trabalho).

57

Figura 6. 19 quisto de Entamoeba spp.

(400x) (foto deste trabalho).

Figura 6. 20 Larva de Strongyloides spp.

(400x) (foto deste trabalho).

Figura 6. 21 Ovo de Ancylostoma spp. (400x)

(foto deste trabalho).

Apndice 12
Resultados normalmente obtidos com testes de identificao presuntiva

Tabela 6. 4 Resultados de testes de identificao que normalmente se verificam em bacilos Gram

negativo (resultado para 90% das estirpes, ou mais)
Microrganismo
E.coli
Klebsiella sp.
Proteus sp.
P.aeruginosa

Oxidase

Urease

Negativo Negativa
Negativo Positiva
Negativo Positiva
Positivo

Indol
Positivo
negativo: K.pneumoniae
Negativo: P.mirabilis

Indol
Positivo: K.oxytoca
Positivo: P.vulgaris

58

Tabela 6. 5 Resultados de testes de identificao que normalmente se verificam em Estafilococos

(Cocos Gram positivo)
Microrganismo

catalase

Coagulase

S.aureus

Positiva
Positiva

Positiva
Negativa

Estafilococos coagulase negativo

Tabela 6. 6 Resultados de testes de identificao que normalmente se verificam em Estreptococos

(Cocos Gram positivo)
Microrganismo
S.pneumoniae
S.agalactiae

Tabela 6. 7

catalase

Hidrlise de esculina

CAMP Test

Negativa

Negativa

Negativa

Negativa

Negativa

Positivo

Resultados de testes de identificao que normalmente se verificam em Enterococos

(Cocos Gram positivo)
Microrganismo

catalase

Enterococcus spp. Negativa

Hidrlise de esculina
Positiva

Apndice 13
Clculo da percentagem de uroculturas acima dos 60 anos

Resultado: 14,2+11,4+21,0+16,6=63,2 %

59

 Apndice 14
Tabela 6. 8 Resultados para os microrganismos obtidos nas uroculturas positivas
microrganismos
P.mirabilis
K.pneumoniae
K.oxytoca
A.baumanii
E.faecalis
E.faecium
S.epidermidis
S.saprophyticus
S.aureus
S.agalactiae
P.aeruginosa
P.stuartii
M.morganii
E.coli
P.vulgaris
E.aerogenes
Leveduras
C.koseri
S.marcescens
E.cloacae
S.liquefaciens
Corynebacterum sp.
total

Total Percentagens
64
10,6
39
6,5
4
0,7
3
0,5
55
9,1
6
1,0
6
1,0
7
1,2
25
4,1
18
3,0
39
6,5
2
0,3
3
0,5
281
46,5
2
0,3
2
0,3
37
6,1
3
0,5
2
0,3
1
0,2
2
0,3
3
0,5
604
100

Apndice 15
Clculo do total de bactrias:

Total de microrganismos= 604

Total de leveduras =37
Total de bactrias=604-37= 567 bactrias

60

 Apndice 16
Tabela 6. 9 Uroculturas positivas para doentes internos e doentes externos
Microrganismos
P.mirabilis
K.pneumoniae
K.oxytoca
A.baumanii
E.faecalis
E.faecium
S.epidermidis
S.saprophyticus
S.aureus
S.agalactiae
P.aeruginosa
P.stuartii
M.morganii
E.coli
P.vulgaris
E.aerogenes
Leveduras
C.koseri
S.marcescens
E.cloacae
S.liquefaciens
Corynebacterium spp.
total

n (internos)
21
21
3
1
30
6
3
0
13
5
24
2
1
118
2
0
2
2
2
1
2
1
260

% (internos)
8,1
8,1
1,2
0,4
11,5
2,3
1,2
0,0
5,0
1,9
9,2
0,8
0,4
45,4
0,8
0,0
0,8
0,8
0,8
0,4
0,8
0,4
100

n (externos)
43
18
1
2
25
0
3
7
12
13
15
0
2
163
0
2
35
1
0
0
0
2
344

% (externos)
12,5
5,2
0,3
0,6
7,3
0,0
0,9
2,0
3,5
3,8
4,4
0,0
0,6
47,4
0,0
0,6
10,2
0,3
0,0
0,0
0,0
0,6
100

Apndice 17
Clculo de amostras polimicrobianas em doentes algaliados

Resultado= 31+10= 41%

61

 Apndice 18
Tabela 6. 10 Uroculturas positivas para doentes algaliados e no algaliados
Microrganismos

(n)Algaliados (%)Algaliados

P.mirabilis
K.pneumoniae
K.oxytoca
A.baumanii
E.faecalis
E.faecium
S.epidermidis
S.saprophyticus
S.aureus
S.agalactiae
P.aeruginosa
P.stuartii
M.morganii
E.coli
P.vulgaris
E.aerogenes
Leveduras
C.koseri
S.marcescens
E.cloacae
S. liquefaciens
Corynebacterium sp.
total

26
18
2
1
35
4
4
0
15
6
27
2
1
68
0
0
0
1
1
0
2
0
213

12,2
8,5
0,9
0,5
16,4
1,9
1,9
0,0
7,0
2,8
12,7
0,9
0,5
31,9
0,0
0,0
0,0
0,5
0,5
0,0
0,9
0,0
100

(n) no
Algaliados
38
21
2
2
20
2
2
7
10
12
12
0
2
213
2
2
0
2
1
1
0
0
351

(%) no
algaliados
10,8
6,0
0,6
0,6
5,7
0,6
0,6
2,0
2,8
3,4
3,4
0,0
0,6
60,7
0,6
0,6
0,0
0,6
0,3
0,3
0,0
0,0
100

(n) Total
64
39
4
3
55
6
6
7
25
18
39
2
3
281
2
2
0
3
2
1
2
0
564

(%)
total
11,3
6,9
0,7
0,5
9,8
1,1
1,1
1,2
4,4
3,2
6,9
0,4
0,5
49,8
0,4
0,4
0,0
0,5
0,4
0,2
0,4
0,0
100

Apndice 19
Clculos para doentes algaliados do sexo feminino:

Nmero total de uroculturas positivas de indivduos algaliados, no sexo feminino:

Resultado=7+12+55+65= 139

Nmero total para indivduos com idade superior a 60 anos:

Resultado= 65+55= 120

Percentagem de indviduos com idades superiores a 60 anos:

Resultado= 23,2+27,4= 50,6%

62

 Apndice 20
Clculos para doentes algaliados do sexo feminino:

Nmero total de utoculturas positivas de indivduos algaliados, no sexo masculino:

Resultado= 11+51+35+1=98
Nmero total para indivduos com idade superior a 60 anos:

Resultado= 51+35=86
Percentagem de indviduos com idades superiores a 60 anos:

Resultado= 21,5+14,8= 36,3%

Total de isolamentos acima dos 61 anos, para ambos os sexo:

Resultados= 120+86= 206

Resultado em percentagem= 50,6+36,3= 86,9%

63