Introduo Espectroscopia Absoro

Molecular no UV/visvel Captulo 13

Medio da Transmitncia e da Absorbncia
Definies e equaes
A Lei de Beer
Derivao, aplicaes e limitaes
Efeito do rudo instrumental nas medies
espectrofotomtricas
Fontes de rudo e erros
Instrumentao
Desenho e configuraes

Medio da Transmitncia e da Absorbncia

Espectroscopia de absoro molecular baseia-se na
medida da transmitncia, T ou da absorbncia, A de
uma soluo contida em um recipiente transparente
O valor de T ou A correlacionado com a concentrao
c do analito responsvel pela absoro e com o
caminho tico b do recipiente pela expresso:

P0
A = log T = log = bc
P
Medio deve ser feita comparativamente

T=

Psoluo
Psolvente

Psolvente
P0
P
=
ou A = log
log
P0
Psoluo
P

Termos e Smbolos em Absoro Molecular

Termos e Smbolos

Definio

Nome Alternativo

Potncia Radiante P, P0

Energia da radiao
incidindo em uma rea de
1 cm2 de um detector por
segundo

Intensidade da Radiao
I, I0

Absorbncia A

log P0/P

Densidade tica D,
Extino E

Transmitncia T

P/P0

Transmisso T

Caminho tico da
radiao b

l, d

Absortividade a

A/bc

Coeficiente de extino k

Absortividade molar

A/bc

Coeficiente de extino
molar

Perdas por Reflexo e Espalhamento

A lei de Beer
Um feixe de radiao monocromtica com potncia P0 atinge
perpendicularmente a superfcie
A potncia diminui para P aps
percorrer toda a extenso b do
material contendo n partculas*
absorventes de radiao
Uma seo transversal do bloco
com rea S e espessura dx conter
dn molculas que absorvero
radiao
Cada molcula preencher uma
frao dS da rea indicando a
probabilidade de absoro de um
fton por dS/S
A potncia do feixe entrando esta
seo, Px proporcional ao no. de
ftons por cm2 e dPx a quantidade
absorvida dentro da seo

A frao absorvida na seo

transversal ser dPx/Px que
tambm representa a probabilidade
mdia de absoro

dPx dS

=
Px
S

A lei de Beer
Sendo dS a soma das reas de
todas partculas absorvendo
dentro da seo proporcional
ao no. de partculas

dS = adn
e dn o no. de partculas e a
uma constante de
proporcionalidade
seo
transversal de captura

dPx

=
P0 P
x
P

adn
S

Transformando em log10

P0
an
log =
P 2,303S
sendo n o nmero total de
partculas no bloco de volume V
em cm3
Relacionando a rea em termos
de volume

V cm3
S=
= cm 2
b cm

e resolvendo a equao temos

temos a expresso logartmica

P0 an
ln =
P
S

P0
anb
log =
P 2,303V

A lei de Beer
Note que:
n/V tem unidades de concentrao, ou seja o nmero de
partculas por cm3
Convertendo em mol por litro

n partculas
no. mol =
6,02 10 23 partculas/mol
e a concentrao em mol/L

n
1000 cm 3 /L
1000n
c=
mol
=
mol/L
23
3
23
6 ,02 10
V
cm
6,02 10 V

A lei de Beer
Finalmente, combinando

P0
anb
log =
P 2,303V

com

1000n
c=
mol/L
23
6,02 10 V

temos:

P0 6,02 10 23 abc
log =
P
2,303 1000
Finalmente, agrupando todas as constantes temos a
Lei de Beer

P0
log = bc = A
P

Aplicao da Lei de Beer para Misturas

O valor da absorbncia em um dado comprimento de
onda ser a somatria das absorbncias de cada
espcie absorvendo em soluo
importante que no ocorra interao entre as espcies
Todas as espcies absorventes em soluo obedecem a
lei de Beer
Para um sistema com n espcies necessrio obter n
determinaes em comprimentos de ondas diferentes
1
Atotal
2
Atotal
n
total

= A + A + ... + A
= A + A + ... + A
= A + A + ... + A
1
1

1
2

1
n

2
1

2
2

2
n

n
1

n
2

n
n

Limitaes Da Lei De Beer

Quando a correlao linear entre absorbncia e
concentrao no obedecida?
absorbncia

1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
Lei de Beer
Desvio

0,2
0
0

0,05
0,1
concentrao (M)

Desvios/limitaes instrumentais
So dependentes da forma como a medio feita

Desvios qumicos
Resultado de alteraes qumicas associadas com a mudana de
concentrao

Desvios Qumicos Observados

A lei de Beer idealizada para solues diludas
Em solues relativamente concentradas (>0,01 mol L-1 )
a distncia mdia entre molculas absorventes diminui e
interaes entre as mesmas comeam a afetar a
distribuio de cargas
Este tipo de interao pode alterar a habilidade das espcies absorverem
um dado comprimento de onda

Em solues diludas de analitos porm com grande

concentrao de outras espcies, p.ex., eletrlitos
Interaes eletrostticas podem alterar a absortividade molar das
espcies
Em casos extremos, solues to diludas quanto 10-6 mol L-1 so
necessrias para observao da lei de Beer
Em teoria, dependente do ndice de refrao n. Se a concentrao
alterar significativamente n desvio da lei de Beer

Desvios Qumicos Aparentes

Principal causa de desvios qumicos ocorre quando o
analito se dissocia, associa ou reage com as molculas
do solvente gerando uma espcie qumica com espectro
de absoro diferente
Por ex., indicadores cido-base (Ka = 1,42 x 10-5)
HIn H+ + In570 nm

430 nm

1,2E-04
1,0E-04
8,0E-05

[Hin]
[In]

6,0E-05
4,0E-05
2,0E-05
0,0E+00
0,0 3, 0 6,0 9,0 1,2 1,5
E+ E-0 E-0 E-0 E-0 E-0
00
5
5
5
4
4

Desvios Instrumentais Aparentes com Radiao

Policromtica
Outra limitao importante da lei de Beer
obteno de
radiao verdadeiramente monocromtica

Como Escolher o Melhor

Efeito desprezvel se a largura da banda efetiva do monocromador (ou

filtro) < 1/10 da metade da largura do pico a meia altura

Desvios Instrumentais Devido ao Espalhamento

Se Ps for a radiao
espalhada no absorvida
pela amostra

P0 + Ps
A' = log
P + PS

Obs: note que desvios instrumentais

so sempre negativos

Efeitos do Rudo Instrumental em Anlises

Espectrofotomtricas
Preciso e exatido so normalmente afetadas pela
incerteza associada com o rudo de um instrumento
Uma medio instrumental normalmente melhor
representada pela relao sinal/rudo

S
mdia
x
1
=
= =
R desvio padro dpr
Fontes de rudo instrumentais Eletrnica
rudo trmico (Johnson)
rudo eventual (shot)
rudo trmulo (flicker)
rudo ambiental

Erros Intrnsecos com a Medio da

Transmitncia

Ajuste de 0% T
Ajuste de 100% T
Medio de % T
A incerteza na determinao da concentrao c pode
ser relacionado como:

A = log T = bc

log T
0,434
c=
=
ln T
b
b
Aps algumas transformaes:

S c 0,434 ST
=
c
T log T

Fontes de Erros Instrumentais

Categoria

Relao

Fontes Tpicas

Relevncia

Caso I

ST = k1

Resoluo da leitura
limitada

Fotmetros simples e com

escalas pequenas

Rudo Johnson em
detectores de calor

Espectrofotmetros de IV

Corrente de fundo e
rudo do
amplificador

Quando a intensidade da
fonte e a sensibilidade do
detector so baixas

ST = k2(T2 + T)1/2

Rudo eventual de
detector de ftons

Detectores UV-vis de boa

qualidade

ST = k3T

Incertezas no
posicionamento da
cela

Detectores UV-vis de boa

qualidade

Tremulao da fonte

Fotmetros baratos

Caso II

Caso III

Quanto Cada Erro Vale!

Efeito da Fenda na Medio de Absorbncia

Controla a quantidade de luz atingindo a amostra e
conseqentemente tambm o detector
Limitante da resoluo
Importncia qualitativa menor que quantitativa

Efeito do Espalhamento de Radiao

A quantidade de radiao
espalhada depende:
Qualidade do material tico
Geometria do equipamento
Baixos comprimentos de
onda
Importncia tanto qualitativa
(falsos mximos de absoro)
quanto quantitativa (uma das
causas dos desvios da lei de
Beer)

Instrumentao Espectrofotometria UV-visvel

Fontes de Radiao
Lmpadas de deutrio ou hidrognio
D2 + Ee D2* D + D + h
Emisso contnua de 160 a 375 nm
Lmpada deve ser feita de quartzo

Lmpada de filamento de tungstnio

Utilizada para regio do visvel e IV
Emisso contnua de 350 a 2500 nm

Compartimento da Amostra
Cubetas de quartzo ( < 350 nm)
Vidros borossilicatos
Plsticos
b = 1 cm padro

Tipos de Instrumentos
Feixe simples

Os componentes podem ser simples ou sofisticados

Geralmente de custo mais reduzido
Cubetas idnticas so fundamentais

Tipos de Instrumentos
Feixe duplo no espao

Usa um divisor de feixe e dois transdutores

Ajuste de 0% T e mede-se %T
Compensam flutuaes na fonte de radiao

Tipos de Instrumentos
Feixe duplo no tempo

Compensao por variao de potncia em funo do

A maioria dos espectrofotmetros modernos tem essa
configurao

Tipos de Instrumentos
Canais mltiplos DAD

Vantagens
Determinao simultnea de todos os rapidez
Melhoria da relao sinal/rudo sensibilidade
Anlises rpidas minimizam foto-decomposio

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