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ndice
Prlogo
Material de Laboratorio
Preparacin de soluciones
smosis
11
14
18
Emulsificacin de aceite
24
Amilasa srica
27
31
Glucosa plasmtica
36
Lactato plasmtico
40
Triacilgliceroles sricos
44
Colesterol srico
48
53
Transaminasas sricas
60
Urea srica
67
72
78
83
93
99
104
Recuento plaquetario
109
Bilirrubinas sricas
115
120
125
PRLOGO
La Bioqumica es una ciencia que explica la naturaleza qumica de muchos y muy diversos procesos que
forman parte esencial de lo que determina la vida de una clula y del organismo en su conjunto.
Para el estudiante de Medicina, la Bioqumica es una disciplina fundamental de apoyo para la comprensin
de los fenmenos fisiolgicos cuyas alteraciones presentan relacin directa con las manifestaciones clnicas
de las patologas.
El conocimiento bioqumico, igual que ocurre con otras disciplinas, avanza gradualmente conforme se
desarrolla la investigacin. Esto ha permitido entender los fundamentos bioqumicos relacionados con las
manifestaciones clnicas de mltiples patologas, pudiendo interpretar la presentacin de signos y sntomas
desde la perspectiva bioqumica. Sin embargo, existen todava casos en los cules la
informacin es
insuficiente para establecer dichas relaciones y en ellos las asociaciones de las patologas con sus
expresiones clnicas se catalogan como empricas.
Los programas de Bioqumica de las escuelas y facultades de Medicina de las universidades mexicanas
deberan estar orientados fundamentalmente a que los conocimientos que construyan los alumnos vinculen
cada vez ms los contextos bsico y clnico. Este es el camino que hemos seguido en nuestro programa
durante muchos aos.
En este contexto se enmarca el presente Manual de Prcticas de Bioqumica, cuyos propsitos
fundamentales son que el alumno reafirme los conocimientos adquiridos con el programa terico 1
relacionndolos con aspectos fisiolgicos y patolgicos relevantes, que aprenda el manejo bsico del
laboratorio de Bioqumica Clnica, y de manera muy especial, que aprenda la pertinencia de las pruebas de
laboratorio para la obtencin de datos que le permitan fundamentar diagnsticos con un criterio cientfico.
Aunque se ha realizado un esfuerzo serio para que tanto los contenidos como la presentacin de este
trabajo sean congruentes con las necesidades acadmicas de gran competitividad que prevalecen en la
actualidad en el mundo de la Medicina, sin duda es una obra perfectible y ser bienvenida toda sugerencia
que permita mejorarlo.
Los autores
MATERIAL DE LABORATORIO
OBJETIVO
El alumno identificar y explicar la utilidad del equipo y de los distintos materiales comnmente
utilizados en el laboratorio de Bioqumica.
GENERALIDADES
La tecnologa del laboratorio de anlisis clnicos se emplea para realizar con la mayor exactitud las
diversas pruebas qumicas a fin de que los resultados generados sean correctos, dada la
importancia que esto tiene para que la interpretacin que haga el mdico permita un diagnstico
confiable. Para lograr este propsito, el alumno debe seguir cuidadosamente el mtodo de cada
prctica, utilizando los materiales y equipo apropiados.
Por otra parte, es muy importante que el alumno preste mucha atencin en lo que est realizando
a fin de evitar accidentes que podran ser graves. Debe tener presente en todo momento las
posibles causas de accidentes para poder evitarlos oportunamente y disminuir as la probabilidad
de sufrir daos en su integridad fsica.
Peligros a los que se encuentra expuesto el alumno al trabajar en el laboratorio:
l.
2.
3.
Infecciones diversas
4.
Balanza granataria. Se utiliza para medir cantidades de masa relativamente grandes (> 0.5 g) de sustancias
generalmente slidas
Balanza analtica. Se utiliza para medir con exactitud cantidades de masa relativamente pequeas
(aproximadamente 5 a 500 mg), aunque tambin pueden medirse masas mayores.
Medicin de volumen
Pipetas graduadas. Son tubos con dimetro interno uniforme, de diferentes capacidades y
calibradas. Son muy utilizadas debido a que con una misma pipeta se pueden medir diferentes
volmenes. Debe utilizarse la pipeta que sea ms adecuada al volumen por medir. Per ejemplo,
para medir 2.5 ml se utiliza una pipeta de 5 ml, para medir 0.5 ml, una de 1 ml, etc. Deben
cargarse mediante dispositivos especiales que eviten pipetear con la boca (propipetas), evitando
as el riesgo de contacto de la solucin con la boca.
Pipetas Pasteur. Son tubos de vidrio con una punta delgada y larga. No tienen graduacin y se
utilizan fundamentalmente para transferir a un tubo limpio el suero o el plasma de una muestra
de sangre despus de centrifugada, y para llenar con sangre completa los tubos de Wintrobe para
la determinacin del hematocrito.
Micropipetas. Son instrumentos muy tiles para la medicin de volmenes pequeos con un alto
grado de exactitud. Existen micropipetas con diferentes capacidades, siendo las ms comunes las
que miden 1-10 .tl, 10-250 .tl y 100-1000 .tl.
Matraces aforados o volumtricas. Son contenedores de vidrio que tienen un tallo relativamente
delgado que presenta una marca denominada afore, la cual indica el nivel al que debe llevarse el
lquido para que el volumen medido corresponda al indicado en el matraz. Se utiliza para la
preparacin de soluciones con concentracin porcentual(% p/v), molar, osmolar o normal.
Matraces Erlenmeyer. Son contenedores de vidrio de forma cnica y fondo plano que se utilizan
para medir volmenes aproximados de lquidos y si es necesario, para calentarlos con bajo grado
de evaporacin.
Vasos de precipitados. Son recipientes de vidrio utilizados para medir volmenes de lquidos, con
muy baja exactitud. Tambin se utilizan para calentar o hervir lquidos cuando no importa que se
evaporen en grado importante, o simplemente como contenedores de sustancias lquidas.
Tubos de ensayo. Son tubos de vidrio con diferentes dimensiones que se utilizan para llevar a cabo
las reacciones qumicas.
Materiales varios
Mechero de Bunsen. Es un dispositivo que se utiliza para calentar lquidos, mediante la combustin
de gas.
Gradillas. Dispositivos generalmente metlicos utilizados para mantener los tubos de ensayo en
posicin vertical
Esptulas. Dispositivos generalmente metlicos, planos, sin filo y con el extremo romo, utilizados
para transferir sustancias slidas, tpicamente al medir determinadas masas de ellas.
Equipo
Centrfuga. Es un instrumento que contiene un rotor capaz de girar varios miles de revoluciones
por minuto. Presenta espacios en los que se colocan los tubos que contienen el material que se
desea centrifugar para lograr la separacin de sus componentes. Tpicamente se utiliza para
separar el suero del cogulo o el plasma del paquete globular, en muestras de sangre.
Espectrafotmetra. Es un aparato electrnico capaz de medir la cantidad de luz que pasa a travs
de una solucin (transmitancia) o la que absorbe dicha solucin (absorbancia, extincin o densidad
ptica). La luz que incide en la solucin tiene una longitud de onda especfica que se selecciona
con una perilla u otro dispositivo del aparato. Se utiliza para la determinacin de la concentracin
de solutos generalmente coloridos, bajo el principio de que mientras ms concentrado se
encuentra el so luto, menor es la transmitancia de la solucin y mayor su absorbancia si se utiliza
luz con la longitud de onda adecuada.
EJERCICIOS
Mida los siguientes volmenes de agua: 25 .L, 40 .L, 0.2 ml, 0.7 ml, 1.5 ml, 2.8 mL, 4.5
ml, 7.5 ml y 9.5 ml, indicando qu pipeta utiliz en cada caso.
3. Transforme los volmenes que se mencionan en el punto 2, de manera que cada uno
quede expresado en micro litros, mililitros y litros.
PREPARACIN DE SOLUCIONES
OBJETIVO
l.
El alumno preparar varias soluciones, para lo cual calcular previamente las cantidades
de so luto y/o solvente necesarias.
2.
GENERALIDADES
Las soluciones son mezclas homogneas de dos o ms sustancias. En una solucin, el so luto es la
sustancia disuelta y el solvente es la sustancia que disuelve. En el campo de la Biologa, el solvente
ms comn es el agua, la cual disuelve sustancias polares, es decir sustancias cuya estructura
molecular presenta cargas formales (positivas, negativas o ambas), y/o dipolos. Por ejemplo, el
cloruro de sodio (NaCI), consta de iones Na y
cr;
cantidad de grupos oxhidrilo (-OH), los cuales son estructuras dipolares (presentan y -. En
cualquier caso, el principio de disolucin est dado por la capacidad de interaccin elctrica entre
las molculas de agua y las molculas de soluto. Las sustancias hidrofbicas, que carecen de
grupos polares, no son solubles en agua. Entre ellas se encuentran el aceite, la gasolina, el ter,
etc.
volumen (% p/v), que es el nmero de gramos de soluto disueltos en cada 100 mL de solucin (100
mL = 1 dL); molaridad (M), que es el nmero de moles de soluto disueltos en cada litro de
solucin; osmolaridad (OsM), que es el nmero de osmoles de soluto disueltos en cada litro de
solucin; normalidad (N), que es el nmero de equivalentes qumicos de soluto disueltos en cada
litro de solucin; molalidad (m), que es el nmero de moles de soluto disueltos en cada kilogramo
de solvente; y osmolalidad (Osm), que es la cantidad de osmoles de soluto disueltos en cada
kilogramo de solvente.
IMPORTANCIA CLNICA
En su mayora, los nutrientes se hacen llegar a los distintos tejidos disueltos en el plasma
sanguneo y por el mismo medio se canalizan los productos de desecho hacia las vas de excrecin.
Desde este punto de vista, el plasma sanguneo es una solucin que contiene muy diversos so lutos
7
glucosa y de la urea. Los lmites normales de dicha concentracin son de 280 a 300 mOsm
aproximadamente.
MATERIAL
1. Balanza granataria
2. Esptulas
3. 1 matraz volumtrico de 50 mL
4. 3 matraces volumtricos de 100 mL
5. 1 matraz volumtrico de 250 mL
6. 1 vaso de precipitados de 100 mL
7. 1 vaso de precipitados de 250 mL
8. Glucosa, cloruro de sodio y sulfato de sodio
PROCEDIMIENTO
l. Calcular la cantidad de soluto (en gramos) y/o solvente (en mililitros) necesaria para
Pesar el so luto con la mayor exactitud posible, utilizando una balanza granataria.
l.
2.
3.
6.
7.
EJERCICIOS
a)
b)
e)
d)
e)
f)
g)
BIBLIOGRAFA
Mendoza-Medelln, A. Nociones de Qumica para las reas mdica y biolgica, UAEM 2007
RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES
10
SMOSIS
OBJETIVOS
1.
2.
GENERALIDADES
IMPORTANCIA CLNICA
La distribucin de los lquidos en los diversos compartimentos del organismo humano se regula
por eventos de smosis que dependen de la concentracin de los solutos no difusibles.
En el espacio intravascular los principales solutos no difusibles son las protenas, siendo por tanto
responsables de la presin osmtica intravascular que acta como contraparte de la presin
hidrosttica debida al impulso cardiaco, permitiendo el retorno del lquido al lecho vascular.
La protena plasmtica que ejerce el principal efecto onctico es la albmina, la cual es sintetizada
en el hgado a una tasa de aproximadamente 12 g diarios.
De esta manera, dicha protena se encuentra sujeta a un recambio elevado, presentando una vida
promedio normal de 17 a 20 das en el plasma. Al parecer, el sitio donde se cataboliza la albmina
es el mismo hgado, tanto en los hepatocitos como en las clulas de Kpffer.
11
1.
Un huevo de gallina
2.
Un popote
3.
Un vaso de precipitados de SO mL
4.
S.
PROCEDIMIENTO
3.
4.
nivel del agua sobrepase apenas el nivel del vaso de precipitados, asegurando as que la
membrana expuesta quede en contacto con el agua.
S.
NOTA: El proceso osmtico puede llevarse a cabo usando agua a temperatura ambiente, pero
12
BIBLIOGRAFA
Mendoza-Medelln, A. Nociones de Qumica para las reas mdica y biolgica, UAEM 2007
13
MATERIAL
1.
4.
Ligadura
PROCEDIMIENTO
1.
El paciente debe estar sentado en una posicin cmoda que le permita colocar el brazo
sobre una superficie plana adecuada para mantenerlo extendido e inmvil sin mayor
esfuerzo.
2.
Se prepara el brazo frotando la regin anterior del antebrazo con una torunda de algodn
humedecida con alcohol etlico (96).
3.
Se aplica un torniquete con la ligadura aproximadamente 7 cm por arriba del pliegue del
codo. La puncin suele hacerse en la vena mediana ceflica, la cual es fcilmente
localizable en casi todas las personas. Si por alguna razn no se observa dicha vena, debe
indicarse al paciente que abra y cierre su puo al tiempo que se aplica masaje en la cara
14
anterior del antebrazo, con lo cual frecuentemente se logra que resalte la vena. En
ocasiones ser necesario utilizar las venas del dorso de la mano, lo cual deber hacerse
con cuidados especiales ya que dichas venas son mviles por carecer de fijacin.
4.
S.
6.
Una vez que se concluy la sangra se coloca la torunda sobre el sitio de la puncin y se
retira la aguja. Se mantiene la torunda presionando el sitio de la puncin unos segundos
ms y se coloca sobre dicho sitio un parche redondo tipo curita.
7.
8.
ANTICOAGULANTES
Existe cierto nmero de anticoagulantes, Los cuales en general actan impidiendo que el calcio
desempee su funcin en el proceso de la coagulacin. Por ejemplo, el oxalato de amonio o de
potasio se combina qumicamente con el calcio disuelto,
15
La heparina es un polisacrido natural que se une a la antitrombina 111, lo cual potencia el efecto
anticoagulante de esta ltima sustancia.
SISTEMAS VACUTAINER
El sistema vacutainer es un dispositivo alternativo para la toma de muestras de sangre,
consistente en una pieza de plstico (adaptador) con forma de jeringa a la que se enrosca una
aguja con doble punta. La parte larga de esta aguja queda por afuera del adaptador y es la que se
utiliza para llevar a cabo la puncin del vaso. El otro extremo de la aguja queda por adentro del
adaptador. Una vez que se ha practicado la puncin de la vena, se introduce en el adaptador un
tubo vacutainer, que tiene un tapn de hule blando, fcilmente perforable por la aguja dentro del
adaptador. Debido a que el tubo vacutainer se halla sellado con cierto grado de vaco, en cuanto la
aguja perfora el tapn de hule empieza a fluir la sangre hacia el tubo. Al momento de perforar el
tapn de hule debe mantenerse al adaptador tan inmvil como sea posible para evitar que la
aguja se salga de la vena o se introduzca ms en ella. Despus de tomada la muestra, se remueve
el tubo del adaptador antes de sacar la aguja de la vena.
Los tubos vacutainer pueden tener ciertos aditivos, como anticoagulantes (EDTA, heparina, citrato,
oxalato, etc.), inhibidores enzimticos (fluoruro) para evitar que disminuya la concentracin de
glucosa, etc. El color del tapn corresponde al aditivo que contiene. Por ejemplo, los tubos con
tapn violeta contienen EDTA, los de tapn azul claro contienen citrato, etc. Los tubos con tapn
color rojo no contienen ningn aditivo.
NOTA.- Se recomienda a los alumnos que se habiten a extremar las precauciones en el manejo de
la sangre, con el fin de evitar cualquier contacto con la misma. Deben utilizarse guantes
quirrgicos para hacer la toma de muestras y tener todos los cuidados para minimizar el riesgo de
picaduras con agujas que han sido utilizadas y que por lo tanto pudieran estar contaminadas con
agentes biolgicos, como son los virus productores de hepatitis, el VIH, etc.
16
17
l.
2.
GENERALIDADES
18
!3
partir de las lipoprotenas de densidad intermedia (LDI) y llevan colesterol del hgado a otros
tejidos; la transferrina (transporte plasmtico de hierro), la hemopexina (transporte del hemo
liberado en el lecho vascular al sistema reticuloendotelial); el fibringeno (precursor de la fibrina
en el proceso de la coagulacin sangunea) y los factores del complemento.
Las globulinas y corresponden a los anticuerpos, siendo su funcin unirse a antgenos en
reacciones especficas como parte de la respuesta inmune.
La gran mayora de las protenas plasmticas que no son globulinas y se sintetizan en el hgado. Las
globulinas y se forman en clulas especializadas del aparato inmunocompetente.
IMPORTANCIA CLNICA
l.
Transferrina.
19
durante
el
embarazo
y disminuye
en
mujeres
que
toman
pldoras
6.
autoinmunes
como
el
lupus
eritematoso
(trastorno
autoinmune
inflamatorio y crnico que puede afectar la piel, las articulaciones, los riones y otros
rganos. Afecta ms a las mujeres que a los hombres, en proporcin de 9 a 1, y puede
presentarse a cualquier edad) y la tiroiditis crnica. Tambin ocurre incremento de la
concentracin de globulinas y en algunos procesos malignos como el mieloma mltiple
20
PROCEDIMIENTO (Randox)
Fundamento: las protenas en solucin bsica de sulfato cprico y tartrato forman un complejo
azul violeta cuya intensidad es proporcional a la concentracin de protenas.
La albmina se une cuantitativamente con el indicador 3, 3', 5, 5' tetrabromo-m-cresol
sulfoneftalena (verde de bromocresol, VBC). La intensidad del color del complejo albmina-VBC es
proporcional a la concentracin de albmina.
Protenas totales
Pipetear en tubos de ensayo:
Agua destilada
20 .rL
Suero (o plasma)
Patrn
Reactivo de trabajo
1.0 mL
1.0 mL
1.0 mL
CLCULO
VALORES DE REFERENCIA
Neonatos:
5.3-8.9 g/dL
Nios (hasta 6 aos): 5.6-8.5 g/dL
Adultos:
6.6-8.7 g/dL
21
Albmina
Pipetear en tubos de ensayo:
Agua destilada
10 .L
Suero (o plasma)
10 .L
Patrn
10 .L
Reactivo de trabajo
Mezclar e incubar entre 20 y 25
3.0ml
2(
3.0 ml
3.0 ml
CLCULO
(A m"'""/A ''"0,)
VALORES DE REFERENCIA
Adultos: 3.4-4.8 g/dl
BIBLIOGRAFA
Balcells, A. La Clnica y el Laboratorio. Ed. Marn, 1989
Gornall, A. G. Applied Biochemistry of Clinical Disorders. Harper & Row, 1980
Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with c/inical correlations,
s'h
edition. Wiley-Liss,
2002
H. Lehr, M. Pauschinger, E. Pittke, E. Kurrle and H. Heimpel (1988). Haemolytic anaemia as initial
manifestation of Wilson's disease. Annals of Hematology: 56 (1)
http://digestive.niddk.nih.gov/ddiseases/pubs/wilson/ (enfermedad de Wilson)
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000435.htm
22
23
EMULSIFICACIN DE ACEITE
OBJETIVOS
1.
2.
GENERALIDADES
24
IMPORTANCIA CLNICA
MATERIAL
2 mL
2. Aceite vegetal
Sml
3. Detergente extrn
2 mL
S. Pipeta graduada de 10 ml
6. Pipeta graduada de S ml
8. Agua destilada
10ml
9. Agitador "vortex"
PROCEDIMIENTO
Control
3 ml
1 ml
Bilis
3 ml
1 mL
Extrn
3 mL
1 ml
1 mL
1 ml
2S
BIBLIOGRAFA
Mathews, C. K. & K. E. Van Holde. Bioqumica, 2a. ed. McGraw-Hili, 1998
Devlin, T. M. (Editor) Textbaok of Biochemistry with clinical correlations,
26
s'h edition.
La amilasa es una enzima que participa en la digestin del almidn y del glucgeno dietarios.
Cata liza la hidrlisis de los enlaces glucosdicos al-4 que unen a las molculas de glucosa entre s
en dichos polisacridos.
La amilasa se produce en las glndulas salivales, principalmente en las partidas, y en el pncreas,
nombrndose amilasa salival (ptialina) y amilasa pancretica, respectivamente. La actividad de la
amilasa salival es limitada debido al corto periodo de tiempo que permanece el bolo alimenticio
en la boca, ya que poco despus de que este pasa al estmago se pierde la actividad amilsica
debido al pH cido del jugo gstrico.
La funcin de la ami lasa salival es iniciar la hidrlisis del almidn y del glucgeno presentes en los
alimentos, generando como productos fundamentalmente dextrinas y en menor proporcin
maltosa. Las dextrinas son oligosacridos o polisacridos de peso molecular variable que resultan
de la hidrlisis al azar de los enlaces al-4 del almidn o del glucgeno.
La amilasa pancretica se vierte a travs del jugo pancretico al intestino, donde transforma los
productos generados por la amilasa salival, en maltosa y dextrinas lmite. Las dextrinas lmite son
oligosacridos ramificados que contienen un enlace
27
IMPORTANCIA CLNICA
Pancreatitis aguda. Se registran elevaciones de hasta 5 veces los niveles normales. En caso
de que se mantengan los valores elevados por ms de 5 das, puede pensarse en una
necrosis continuada del pncreas o en la formacin de un pseudoquiste (acumulacin de
tejido, lquido, residuos, enzimas pancreticas y sangre, que se puede desarrollar despus
de una pancreatitis aguda. Con frecuencia ocurre cuando se rompen los conductos
pancreticos por efecto de la inflamacin propia de la pancreatitis). En muchos casos la
pancreatitis aguda se encuentra asociada con ingesta aguda de etanol.
2.
3.
lcera gstrica penetrante de pncreas, en cuyo caso los aumentos son menores a los
6.
Fundamento: Se mide la hidrlisis del almidn por la amilasa srica mediante la formacin de
un complejo colorido (azul-verde) entre el almidn y el yodo, cuya intensidad es directamente
proporcional a la cantidad de almidn. Mientras ms se hidroliza el almidn (por mayor
actividad amilsica), menos complejo colorido se forma con el yodo, por lo tanto la intensidad
del color vara en proporcin inversa con la concentracin de ami lasa en la muestra.
28
2.
3.
4. Aadir 5.0 ml de solucin de yodo N/100 a cada uno de los matraces e inmediatamente
despus atorarlo con agua destilada. Mezclar bien por inversin y agitar.
S.
Leer de inmediato la absorbancia a 660 nm del problema y del blanco contra agua
destilada.
CLCULO
X 800
=---unidades de amilasa/dL
NOTA: Una unidad de amilasa se define como la cantidad de enzima que hidroliza 10 mg de
almidn en 30 minutos a un grado tal que el yodo no produzca ningn color.
VALORES DE REFERENCIA
BIBLIOGRAFA
29
30
l.
2.
GENERALIDADES
Fosfatasa alcalina (FAL) es el nombre con que se conoce un grupo de enzimas que presentan
actividad ptima para hidrolizar fosfosteres en un intervalo de pH de 9.0 a 10.5. Como productos
de las reacciones que catalizan se obtienen los alcoholes correspondientes y fosfato inorgnico,
segn indica la siguiente reaccin general:
R-0-PO,W + H20
R-OH
H2Po.-
La FAL se encuentra distribuida ampliamente en los tejidos del organismo. Durante el crecimiento
se encuentra en mayor cantidad en los osteoblastos (clulas productoras de tejido seo) y
condroblastos (clulas embrionarias que dan origen al cartlago) del tejido seo. En el adulto, la
mayor proporcin se encuentra en la mucosa intestinal, el hgado, los pulmones y el bazo, aunque
tambin se produce en el endotelio vascular, los t bulos renales, el epitelio tiroideo, el epitelio del
conducto biliar, placenta y clulas de la serie mieloide. Se localiza en el citosol, microsomas y
lisosomas. Su funcin bioqumica precisa no se conoce aunque al parecer en el hgado y el hueso
participa en el transporte de membrana pues en dichos tejidos la actividad de fosfatasa alcalina se
halla asociada a la membrana celular.
La FAL srica es principalmente de origen heptico y seo, y los incrementos se deben ms al
aumento de su sntesis que a incremento de su liberacin por los tejidos lesionados o necrticos
Las isoenzimas de la FAL son distinguibles por sus propiedades fisicoqumicas, segn indica el
siguiente cuadro:
Propiedades de las isoenzimas de la fosfatasa alcalina
PROPIEDAD
HIGADO
1
HUESO
INTESTINO
RAPIDEZ ELECTROFORTICA*
PLACENTA
2
DESACTIVACIN A 56 C
S0-70
90-100
S0-60
0-10
0-10
7S
75
31
IMPORTANCIA CLNICA
LA FAL AUMENTA EN LOS SIGUIENTES CASOS:
l.
2.
3.
4.
S.
6.
32
8.
9.
33
l.
2.
3.
4.
2 (A2 ) Y 3 (A3 )
minutos
CLCULO
pmmod;o
VALORES DE REFERENCIA
34
35
GLUCOSA PLASMTICA
OBJETIVOS
1.
2.
GENERALIDADES
La glucosa es el monosacrido de mayor importancia que utilizan las clulas para la obtencin de
energa. El origen de la glucosa puede ser exgeno, cuando se obtiene a partir de los carbohidratos
dietarios (almidn, glucgeno, sacarosa y lactosa), y endgeno, cuando se sintetiza en el
organismo a travs de la va gluconeognica.
La glucemia (glucosa en sangre) se halla regulada fundamentalmente por dos hormonas, el
glucagon y la insulina. La hipoglucemia es el efector para la secrecin de glucagon, el cual
estimula la glucogenlisis en el hgado. La glucosa liberada a partir del glucgeno pasa entonces a
la sangre, restableciendo la normoglucemia. En la hiperglucemia en cambio, la insulina activa el
mecanismo que permite la incorporacin de la glucosa a los tejidos adiposo y muscular,
reduciendo as la concentracin de glucosa sangunea hasta lograr la normoglucemia. Aunque la
insulina se requiere para la incorporacin de glucosa por los hepatocitos, s interviene en forma
importante estimulando la glucognesis.
La concentracin normal de glucosa en la sangre o normoglucemia despus de un ayuno de al
menos 8 horas vara dentro de un intervalo de aproximadamente 75 a 115 mg/dL o 4.16 a 6.39
mmoi/L, pudiendo variar segn el mtodo utilizado.
En condiciones normales la glucemia posprandial raramente supera los 140 mg/dL, recuperndose
la normoglucemia antes de 2.5 horas. Si el grado de glucemia en ayuno supera el lmite superior
del intervalo normal o bien si la hiperglucemia posprandial se mantiene durante ms tiempo del
indicado, muy probablemente se trata de alguna patologa que cursa con hiperglucemia.
Se considera que en el ayuno los mnimos valores de glucemia tolerables por el organismo sin que
se presente dao cerebral son de 40 a 50 mg/dL, sin embargo esto no es aplicable a todas las
personas debido a que la sensibilidad es muy variable entre los distintos individuos, de tal manera
que debe procurarse en todos los casos mantener normoglucmico al paciente para prevenir
cualquier efecto de la hipoglucemia.
36
IMPORTANCIA CLNICA
SE PRESENTA AUMENTO DE LA GLUCEMIA EN LOS SIGUIENTES CASOS:
l.
2.
3.
4.
S.
Traumatismo cerebral.
6.
7.
l.
2.
3.
4.
5.
Trastornos digestivos que cursan con malabsorcin intestinal, como vmitos y diarrea
6.
7.
PROCEDIMIENTO (Randox)
Fundamento: la glucosa reacciona con oxgeno y agua, transformndose en gluconato y perxido
de hidrgeno mediante la glucosa oxidasa. El perxido de hidrgeno producido reacciona con
fenal y 4-aminofenazona, formando quinoneimina y agua, por catlisis de la peroxidasa. La
37
Plasma o suero
20 j.!L
Patrn
Reactivo de trabajo
2.0 mL
2.0mL
2.0 mL
CLCULO
(A m"""'/ A pwn)
El mtodo es lineal hasta valores de 500 mg/dl. Si la concentracin de glucosa es superior a este
valor, debe diluirse la muestra 1:2 con solucin salina, multiplicando al final la concentracin
obtenida por el factor 2
VALORES DE REFERENCIA
75 a 115 mg/dL
BIBLIOGRAFA
Balcells,A. La clnica y el Laboratorio. Ed. Marn
Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodrguez-Segade & A. Snchez Pozo. Bioqumico
7'h
38
39
LACTATO PLASMTICO
OBJETIVOS
1.
2.
GENERALIDADES
La glucosa se cataboliza en todos los tejidos a travs de la gluclisis, va que transforma la glucosa
en piruvato (glucosa ---+ 2 piruvato). Si ocurre en condiciones aerbicas, el piruvato ingresa a las
mitocondrias y ah es catabolizado hasta C0 2 y H20, lo cual permite la liberacin de cantidades
importantes de energa til para la formacin de ATP y otras sustancias a travs de las cuales se
aporta energa a los procesos celulares que la requieren.
En tipos celulares en los que la glucosa no se cataboliza aerbica sino anaerbicamente
(eritrocitos, clulas de gla, clulas de la mdula renal, etc.), o bien en aquellos otros que, teniendo
normalmente un metabolismo aerbico entran a una fase de limitacin o ausencia de oxgeno (el
comn de los tipos celulares, de manera importante las clulas del msculo esqueltico y los
cardiomiocitos), el piruvato producido a partir de la glucosa se reduce a lactato de acuerdo con la
siguiente reaccin:
Piruvato + NADH + H' ---+ Lactato+ NAD'
Esta reaccin es catalizada por la enzima denominada lactato deshidrogenasa, de amplsima
distribucin en el organismo humano.
El lactato que se forma en las clulas pasa a la circulacin por un transportador de la membrana
celular que en realidad es un simportador de lactato e hidrogeniones, con lo cual se preserva la
electroneutralidad. De esta manera, conforme se produce puede ir pasando a la circulacin.
Bajo las condiciones apropiadas, el hgado y en menor proporcin el rin, captan y metabolizan el
lactato de la sangre, transformndolo en glucosa a travs de una va conocida como
gluconeognesis. En condiciones normales, la concentracin de lactato se mantiene baja (menos
de 20 mg/dL de plasma) gracias a este proceso metablico.
40
IMPORTANCIA CLNICA
3.
4.
6. Algunos
tipos
de
tumores,
como
linfomas
(cncer
del
sistema
linftico)
PROCEDIMIENTO (Randox)
Plasma
10 .tL
Patrn
Reactivo de trabajo
10 .tL
1.0 mL
1.0 mL
1.0 mL
41
CLCULO
(Amuestr,/Apotco)
40 = _ _ mg/dL Lactato
VALORES DE REFERENCIA
4.5-20 mg/dL
BIBLIOGRAFA
42
43
TRIACILGLICEROLES S RICOS
OBJETIVOS
l.
2.
GENERALIDADES
Los triacilgliceroles (triglicridos) son lpidos formados por la esterificacin de tres molculas de
cidos grasos con una de glicerol. Se encuentran presentes en los aceites y las grasas que forman
parte de las dietas comunes y en el tejido adiposo, donde constituyen la principal forma de
almacenamiento energtico. Los triacilgliceroles dietarios se digieren por accin de la lipasa
pancretica, generando principalmente monoacilgliceroles y cidos grasos, productos capaces de
ser absorbidos por el intestino.
En los enterocitos los monoacilgliceroles se reesterifican con los cidos grasos, y los
triacilgliceroles resultantes se asocian con otros componentes para estructurar las lipoprotenas
conocidas como quilomicrones, los cuales son secretados hacia la linfa, a travs de la cual son
llevados a la circulacin general. En los capilares sanguneos de diversos tejidos, principalmente
del adiposo y del muscular, la lipoprotena lipasa (LPL) hidro liza ms del 80% de los triacilgliceroles
de los quilomicrones, y la mayor parte de los cidos grasos liberados penetran a las clulas del
tejido correspondiente, mientras que el glicerol es captado y meta bol izado por el hgado.
Despus de que acta la LPL sobre los quilomicrones, stos quedan convertidos en lipoprotenas
pequeas de relativo alto contenido de colesterol, llamadas remanentes de quilomicrones, cuyo
destino es ser endocitadas por los hepatocitos.
El hgado forma triacilgliceroles a partir de los carbohidratos dietarios cuando stos se hallan en
exceso. Debido a que el hgado normalmente no almacena grasa, sus triacilgliceroles se asocian
con otros componentes lipdicos y protenicos para estructurar las lipoprotenas de muy baja
densidad (LMBD), las cuales secreta a la sangre. De manera similar a lo que ocurre con los
quilomicrones, la LPL hidroliza la mayor parte de los triacilgliceroles presentes en las LMBD,
penetrando los cidos grasos liberados, a las clulas del tejido correspondiente.
44
IMPORTANCIA CLNICA
La elevacin de la concentracin plasmtica de triacilgliceroles constituye un factor de riesgo
aterognico. La concentracin normal es menor a 200 mg/dL, aunque se considera sospecha de
hipertriacilglicerolemia entre 150 y 200 mg/dL. Aquellos pases con dietas altas en grasas animales
tienen elevada prevalencia de aterosclerosis y sus complicaciones. Por el contrario, en pases con
ingesta baja de grasa saturada, como es el caso de Japn y de algunos pases mediterrneos, la
prevalencia de aterosclerosis es baja.
Se ha documentado que las campaas exitosas para disminuir la ingesta de grasa animal en pases
con alta prevalencia de aterosclerosis y cardiopata isqumica, logran reducir la mortalidad por
esta causa.
El hombre primitivo requera el almacenamiento de grasa en su cuerpo debido a lo incierto de
cundo podra tomar su prximo alimento, sin embargo, en la mayora de las sociedades actuales
es innecesario el almacenamiento de grasa, dada la disponibilidad de alimentos a cualquier hora
del da y a que el esfuerzo fsico cada vez es menor.
Las grasas insaturadas son de origen vegetal, aunque tambin existen en proporciones
importantes en los alimentos de origen animal. La ingestin de grasas de origen vegetal no se halla
asociada por s misma a la ingesta de colesterol. Adems, dicha fuente proporciona los cidos
grasos esenciales, que no pueden sintetizarse en el organismo humano.
La hipertriacilglicerolemia endgena primaria es una patologa genticamente determinada que
se presenta aproximadamente en 1 de cada 100 individuos en la poblacin adulta y se hereda
como rasgo autosmico dominante. El defecto molecular es desconocido aunque al parecer
determina una sobreproduccin heptica de triacilgliceroles.
PROCEDIMIENTO (Randox)
Fundamento: la hidrlisis de los triacilgliceroles produce cidos grasos y glicerol por accin de la
lipasa. El glicerol formado reacciona con ATP, produciendo glicerol-fosfato y ADP por catlisis de la
glicerolcinasa. El glicerol-fosfato a su vez reacciona con oxgeno y produce dihidroxiacetonafosfato y perxido de hidrgeno, en una reaccin catalizada por la glicerol-fosfato oxidasa. El
perxido de hidrgeno reacciona con 4-aminofenazona y 4-clorofenol, generando quinoneimina
(compuesto colorido), cido clorhdrico y agua. La concentracin del compuesto colorido es
proporcional a la concentracin de triacilgliceroles.
45
Patrn
Reactivo de trabajo
1.0mL
1.0 mL
1.0 mL
Mezclar e incubar a 37" C durante S min. y medir la absorbancia (A) de la muestra y del
patrn frente al blanco a 500 nm. El color es estable durante 60 min.
CLCULO
(A muestcafA '"'")
X 200 = _ _
mg/dL Triacilgliceroles
VALORES DE REFERENCIA
Sospecha de hipertriacilglicerolemia:
Hipertriacilglicerolemia:
BIBLIOGRAFA
2002
46
47
COLESTEROL SRICO
OBJETIVOS
GENERALIDADES
ALIMENTO (100 g)
COLESTEROL (mg)
RIN DE RES
700
HGADO DE RES
440
8S
CARNE DE BORREGO
9S
POLLO O PAVO
80
CAMARONES
1SO
ALMEJAS
6S
PESCADO MAGRO*
43
OSTIONES*
40
QUESO O CREMA
111
19
REQUESN
S40
ClARA DE HUEVO
33
VEGETALES
* alimentos cocidos
En el hgado se produce la mayor parte del colesterol endgeno. Este rgano tambin participa en
la excrecin de colesterol transformndolo en sales biliares, las cuales son llevadas por la bilis
hacia el intestino, donde funcionan como agentes emulsionantes de la grasa dietara, en
conjuncin con el movimiento peristltico. En el leon una gran parte de las sales biliares se
reabsorbe, participando en la circulacin enteroheptica. La pequea fraccin que no se
reabsorbe sufre la accin de la flora bacteriana, dando como resultado coprostanol y colestanol,
48
que son eliminados en las heces fecales. La dieta promedio suministra alrededor de 0.3 g de
colesterol diariamente.
El colesterol se encuentra en todas las clulas animales formando parte de las membranas.
Tambin se encuentra formando parte de los distintos tipos de lipoprotenas, siendo precursor de
las sales biliares, de la vitamina O y de toda la familia de hormonas esteroides.
IMPORTANCIA CLNICA
SE PUEDE ENCONTRAR HIPERCOLESTEROLEMIA EN LOS SIGUIENTES CASOS Y SITUACIONES:
l.
2.
3.
Cirrosis biliar. Este padecimiento cursa con deterioro crnico de la excrecin de bilis. Se
observan datos morfolgicos de destruccin progresiva de Jos conductos biliares
intrahepticos. La enfermedad puede deberse a colestasis crnica intraheptica o a la
obstruccin del coldoco.
4.
Sndrome
nefrtico.
Padecimiento
renal
que
se
caracteriza
por
proteinuria,
6.
esta
enfermedad.
Al
disminuir
hipercolesterolemia.
49
la
hiperglucemia
tambin
disminuye
la
7.
falta de receptores hepticos para LBD, lo que ocasiona que los niveles de colesterol
circulante se incrementen.
PROCEDIMIENTO (Randox)
Agua destilada
10 Jll
Patrn
Suero o plasma
Reactivo de trabajo
1.0 ml
1.0 ml
1.0 ml
50
CLCULO
(A m""'"/A potc,)
VALORES DE REFERENCIA
Deseable:
Lmite alto:
BIBLIOGRAFA
Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodrguez-Segade & A. Snchez Pozo. Bioqumica
Clnica. McGraw-Hill, 1998
Guadalajara, J. F. Cardiologa. 5'. Ed., Mndez Editores, 1990
Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlations,
2002
51
s'"
edition. Wiley-Liss,
52
1.
2.
GENERALIDADES
LBD. Las lipoprotenas de baja densidad transportan en la sangre la mayor cantidad del
colesterol liberado por el hgado y lo llevan hacia los tejidos perifricos, aunque despus su mayor
parte regresa al tejido heptico. Las clulas que captan LBD poseen receptores membranales
capaces de reconocer a dichas lipoprotenas siempre y cuando stas contengan apoprotena B-
100. Una vez incorporadas las LBD por endocitosis, el colesterol queda libre y se integra al
metabolismo celular, pudiendo almacenarse previa esterificacin catalizada por la enzima acil CoA
colesterol aciltransferasa {ACAT).
El hgado segrega normalmente lipoprotenas de muy baja densidad (LMBD), las cuales se
convierten en lipoprotenas de densidad intermedia (LDI) al perder una buena parte de sus
triacilgliceroles por efecto de la enzima lipoprotena lipasa {LPL) en los capilares de los tejidos
perifricos. Aproximadamente la mitad de las LDI del plasma son captadas por el hgado, y las que
no, se convierten en LBD por accin de la lipasa heptica. Los individuos que padecen
hipercolesterolemia familiar tienen receptores para LBD con alteraciones estructurales y
funcionales genticamente determinadas. Los individuos normales que ingieren dietas con alto
contenido de colesterol tienen en su hgado un exceso de colesterol, lo cual hace que disminuya el
nmero de receptores para LBD en la superficie celular, con el consecuente aumento de la
concentracin plasmtica del colesterol LBD.
La regulacin del metabolismo de las LBD y por tanto del colesterol, depende de su concentracin
plasmtica, ya que si se presenta una reduccin de las LBD del plasma y por tanto del colesterol
heptico, se activa la HMGCoA reductasa, enzima reguladora de la sntesis heptica de colesterol.
Con la mayor produccin de colesterol se restituye la concentracin plasmtica de LBD y
colesterol. Por el contrario, si aumenta la concentracin plasmtica de las LBD se incrementa la
captacin heptica del colesterol y este inhibe a la HMGCoA reductasa con la consiguiente
disminucin de la sntesis de colesterol heptico. Adicionalmente, disminuye la sntesis de
receptores para LBD, lo cual se traduce en menor nmero de receptores en la superficie celular, lo
53
que a su vez reduce la captacin heptica de las LBD plasmticas. En las personas sanas este
mecanismo mantiene dentro de los intervalos normales la concentracin de LBD circulantes y su
colesterol.
El aumento de la concentracin plasmtica de colesteroi-LBD es uno de los factores de riesgo ms
importantes para generar aterosclerosis.
Por el
contrario,
la terapia
LAD. Las lipoprotenas de alta densidad se forman en el hgado y en el intestino. Recin secretadas
se les denomina LAD nacientes y son una especie de vesculas planas. En la circulacin adquieren
apoprotena A y apoprotena C provenientes de las LMBD y de los quilomicrones. Las LAD reciben
fosfolpidos y colesterol no esterificado a partir de la superficie celular en los tejidos perifricos y a
partir de otras lipoprotenas. En dichas lipoprotenas ocurre la esterificacin del colesterol ya que
contienen la enzima lecitina colesterol acil transferasa (LCAT). A esto se debe que normalmente
2/3 del colesterol sanguneo se encuentre esterificado.
Las LAD llevan al hgado el colesterol esterificado, lo cual constituye en su conjunto un proceso
que se conoce como transporte inverso de colesterol, el cual es un mecanismo importante para
evitar la hipercolesterolemia y la aterosclerosis. Todos aquellos factores que disminuyen las LAD
(tabaquismo, obesidad, vida sedentaria, andrgenos, beta-bloqueadores, hipertriacilglicerolemia,
anablicos esteroides, diabetes mellitus, etc.) son promotores de la aterosclerosis. Se considera
conveniente una concentracin de colesteroi-LAD mayor a 55 y 65 mg/dL para hombres y mujeres,
respectivamente y como factor de riesgo aterognico elevado, una concentracin menor a 35 y a
45 mg/dL en hombres y mujeres, respectivamente.
El colesterol, las LBD Y LAD deben cuantificarse en sujetos sanos despus de los 20 aos de edad,
por lo menos cada 5 aos y con mucha mayor razn si presentan uno o ms factores de riesgo
aterognico.
54
IMPORTANCIA CLNICA
55
lO y 20%.
Ejercicio. El ejercicio fsico rutinario produce su aumento
COLESTEROL ESTERASA
2 H20 + 0 2
H20 2
FASE DE REACCIN
56
Patrn
10 11L
Suero
Reactivo 1
750 11L
750 11L
Reactivo R2
0.25 mL
0.25 mL
CLCULO
[(Az- Adm"'""/(A,- A,)pwol x concentracin del patrn = ___ mg/dL colesteroi-LBD
VALORES DE REFERENCIA
ADULTOS
SIN RIESGO
RIESGO MODERADO
RIESGO AlTO
130-1S9 mg/dl
2160 mg/dl
CLCULO
57
VALORES DE REFERENCIA
SIN RIESGO
RIESGO MODERADO
RIESGO ALTO
HOMBRES
>55 mg/dl
35-55 mg/dl
<35 mg/dl
MUJERES
>65 mg/dl
35-55 mg/dl
<45 mg/dl
BIBLIOGRAFA
Balcells, A.
Bioqumica
2002
Scriver, C. R., A. L. Beaudet, W. S. Sly & D. Valle (Ed.)
ed. McGraw-Hill, 1995
58
59
TRANSAMINASAS SRICAS
OBJETIVOS
1.
El alumno determinar la actividad de las enzimas TGO y TGP en una muestra de suero
sanguneo
2.
GENERALIDADES
Una vez que los aminocidos pierden su grupo amino, se integran a las vas que los catabolizan o
que los transforman en glucosa y/o cuerpos cetnicos.
El cetocido que participa de manera preponderante para que los aminocidos pierdan su grupo
amino es el a-cetoglutarato, el cual se transforma en glutamato en la reaccin transaminante al
perder su grupo ceto y adquirir el amino, de tal manera que este aminocido porta el grupo amino
que perteneci a otros aminocidos.
A fin de que este proceso pueda seguir ocurriendo se hace necesario que el glutamato se
reconvierta en su cetocido por una reaccin no transaminante. La regeneracin de acetoglutarato a partir de glutamato es catalizada por la glutamato deshidrogenasa y se trata de un
proceso de desaminacin oxidativa que libera el grupo amino del glutamato como amonio, al
tiempo que reduce NAO+ como lo indica la siguiente reaccin:
Glutamato + NAO+ + H2 0
Debido a que las tranasaminasas catalizan reacciones reversibles, pueden sintetizar los distintos
aminocidos no esenciales a partir de sus respectivos cetocidos y glutamato.
60
IMPORTANCIA CLNICA
En el plasma sanguneo se encuentran dos transaminasas de relevancia diagnstica, la
transaminasa glutmico-oxalactica (TGO), tambin conocida como aspartato aminotransferasa
(AST), y la transaminasa glutmico-piruvica (TGP) o alanina aminotransferasa (ALT).
La TGO abunda en hgado, corazn y msculo esqueltico, encontrndose tanto en el citosol como
en las mitocondrias de las clulas en dichos tejidos. La TGP presenta una distribucin ms
restringida, encontrndose casi exclusivamente en el citosol de los hepatocitos. Las reacciones que
catalizan estas enzimas son las siguientes:
AST(TGO)
Aspartato + a.-cetoglutarato ,: Oxalacetato + Glutamato
ALT (TGP)
Alanina + a.-cetoglutarato ,: Piruvato + Glutamato
SE PRESENTA INCREMENTO OE LAS TRANSAMINASAS EN LOS SIGUIENTES CASOS:
1.
suero de pacientes con hepatitis viral, registrndose mximos de 10 a 30 veces los valores
normales cuando aparece la ictericia. Sin embargo, la elevacin se registra desde la fase
prodrmica, incluso 10 das antes de que se evidencie la ictericia. La elevacin de las
61
La
obstruccin hepatobiliar cursa en casi todos los pacientes con elevacin de ambas
transaminasas, con un intervalo de 2 a 8 veces la actividad superior normal.
3.
62
Suero
0.1 ml
Tampn (R1-AST)
0.5 ml
Mezclar e incubar a 3r
Despus agregar:
0.5 ml
2, 4-DNP (R2)
0.5 ml
Suero
0.1 ml
0.5 ml
5.0ml
y 25
5.0ml
CLCULO
AST{U/L)
ABSORBANC!A
AST(U/L)
0.020
O.D30
7
10
13
16
19
23
27
31
0.100
0.110
0.120
0.130
0.140
0.150
0.160
36
41
47
52
59
67
76
89
0.040
0.050
0.060
0.070
0.080
0.090
0.170
63
VALORES DE REFERENCIA
Fundamento: se pone la muestra en contacto con alanina y a-cetoglutarato para que reaccionen
transaminando y produzcan glutamato y piruvato. El piruvato producido reacciona con 2, 4dinitro-fenihidracina y produce piruvato hidrazona, que es un compuesto que tiene color. La
intensidad del color es proporcional a la actividad de la ALT.
Suero
Tampn (R1-ALT)
0.1 mL
0.5 mL
0.5 mL
2, 4-DNP (R2)
0.5 mL
Suero
0.1 mL
0.5 mL
5.0 mL
5.0mL
64
CLCULO
Obtener la actividad de la ALTa partir de la siguiente tabla:
ABSORBANCIA
ALT (U/L)
ABSORBANCIA
ALT (U/l)
0.025
0.050
4
8
12
17
21
25
29
34
39
43
0.275
0.300
0.325
0.350
0.375
0.400
0.425
0.450
0.475
48
52
57
62
67
72
0.075
0.100
0.125
0.150
0.175
0.200
0.225
0.250
o.soo
77
83
88
94
VALORES DE REFERENCIA
Hasta 12 U/L ALT
BIBLIOGRAFA
Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodrguez-Segad e & A. Snchez Pozo. Bioqumica
Clnica. McG raw-Hill, 1998
Devlin, T. M. (Editor) Textbaok of Biochemistry with clinical correlations, 5th edition. Wiley-Liss,
2002
http ://www .m o nografias.com/tra bajos 15/desn utricion-c1ases/ desnutricionclases.shtm 1
(kwashiorkor)
65
66
UREA S RICA
OBJETIVOS
1.
2.
GENERALIDADES
El catabolismo de las protenas es un proceso que ocurre de continuo por el recambio normal a
que se encuentran sometidas la protenas y por el recambio celular en los tejidos con capacidad de
divisin celular. Tambin ocurre en forma importante durante el ayuno, para activar la sntesis de
glucosa, sustancia fundamental para el cerebro y otros tejidos o tipos celulares. Los productos del
catabolismo de las protenas son los aminocidos libres, los cuales mediante el proceso conocido
como transdesaminacin se transforman en los cetocidos correspondientes, con la liberacin
concomitante del nitrgeno aminoacdico en forma de ion amonio.
El amonio es una sustancia txica para el organismo, especialmente para el sistema nervioso
central, por lo que, luego de liberarse en los diversos tejidos, llega al hgado formando parte de
diversas molculas, fundamentalmente alanina y glutamina, las cuales se descomponen para
liberar un nitrgeno como amonio.
En el hgado el amonio se transforma en urea a travs del ciclo de la urea o ciclo de KrebsHenseleit. La urea es una sustancia de muy bajo peso molecular, sin carga elctrica formal y capaz
67
IMPORTANCIA CLNICA
EL AUMENTO DE LA CONCENTRACIN DE UREA EN LA SANGRE PUEDE OCURRIR DEBIDO A CAUSAS
COMO LAS SIGUIENTES:
PRERRENALES, las cuales se deben a un descenso en la perfusin renal por diferentes factores,
entre los cuales se encuentran:
1.
2.
3.
4.
RENALES O NEFROPTICAS, las cuales incluyen patologas y condiciones que cursan con
insuficiencia renal aguda o crnica. Entre ellas se encuentran las siguientes:
1.
edema
hipervolmico.
Un
buen
ejemplo
es
la
glomerulonefritis
68
3.
Administracin
de
frmacos
nefrotxicos,
tales
como
furosemida,
rifampicina,
1. Cncer de prstata
2.
PROCEDIMIENTO (Randox)
10 .tl
Patrn
10 .tl
Suero o plasma
Reactivo de trabajo
1.0ml
1.0 ml
1.0 ml
Hipoclorito sdico
200 .tl
200 .tl
200 .tl
69
CLCULO
15-45 mg/dl
BIBLIOGRAFA
70
71
1.
El alumno comparar una muestra de plasma sanguneo con una muestra de solucin
salina fisiolgica en cuanto a su capacidad de amortiguamiento
2.
GENERALIDADES
produccin incrementada de cuerpos cetnicos, de los cuales los principales son el cido
acetoactico y el cido ~ -hidroxibutrico. En pacientes con hipoxemia intensa se producen
cantidades excesivas de cido lctico, lo cual tambin puede producir acidosis metablica
72
La acidosis metablica puede resultar de las diarreas graves debido a que el lquido de los
intestinos delgado y grueso posee cantidades importantes de bicarbonato.
En la uremia debida a casi todas las formas de enfermedad renal crnica se produce acidosis
metablica debido a que la secrecin renal de hidrogeniones y de amoniaco es deficiente. El
amonaco (NH 3 ) que se produce en los riones se combina con hidrogeniones del medio y se
convierte en amonio (NH;), de manera tal que cada ion amonio que se excreta por la orina
equivale a la eliminacin de un hidrogenin.
Alcalosis metablica. Consiste en el incremento de pH debido generalmente a la prdida de cido
no carbnico, como ocurre en los casos de vmito prolongado o intenso, y en casos en los que se
practica aspiracin gstrica. En ambas condiciones se pierde el cido clorhdrico presente en el
jugo gstrico y se pierde el equilibrio cido-bsico a favor de la alcalosis.
En los casos en los que el rin retiene Na y HC0 3, como ocurre con el uso teraputico excesivo
de hormonas esteroides suprarrenales o en enfermedades que cursan con hiperproduccin de
dichas hormonas, puede presentarse alcalosis metablica debido al exceso de concentracin de
bicarbonato.
El rin deja pasar con cierta facilidad al potasio (K), y aunque con dietas normales es improbable
una deficiencia de este elemento, en pacientes alimentados con sonda nasogstrica o por va
intravenosa durante tiempos prolongados, puede presentarse dficit si no se incorpora en esas
formas de alimentacin.
Debido a que el potasio se encuentra fundamentalmente en el medio intracelular, su prdida por
el intestino y/o por el rin, produce su deplecin intracelular. La respuesta a esto es el ingreso de
hidrogeniones y sodio a las clulas. Si a la deplecin de potasio acompaa una disminucin del
volumen extra celular, el rin retiene sodio y empieza a excretar abundante e inadecuadamente
iones hidrgeno para neutralizar las cargas negativas de iones poco reabsorbibles, como son
fosfato, sulfato y aniones de cidos orgnicos. Dicha excrecin de hidrogeniones explica la
alcalosis metablica que puede asociarse con la deplecin de potasio.
Acidosis respiratoria. Consiste en la disminucin del pH debida a la incapacidad de la ventilacin
alveolar para excretar C0 2 a una velocidad apropiada, producindose en consecuencia un exceso
de cido carbnico. La hipoventilacin se puede producir si el centro respiratorio se halla
deprimido por agentes anestsicos, sedantes o hipoxia y en alteraciones del sistema nervioso
central de diversos tipos, como traumatismo, isquemia o presin elevada del lquido
cefalorraqudeo.
73
MATERIAL
1.
2.
3.
4.
5.
Solucin de Na OH 0.1 N
6.
7.
Pipetas de 1 mL (2)
8.
Potencimetro
9.
Agitador magntico
74
PROCEDIMIENTO
3.
4.
Aada a cada muestra 1.0 mL de solucin 0.1 N de HCI en fracciones de 0.2 mL, mezclando
bien despus de cada adicin mediante el agitador magntico. Registre cada vez el pH.
5.
6.
Repita el experimento con otra muestra de plasma aadiendo 1.0 mL de solucin 0,1 N de
Na OH en fracciones de 0.2 mL, como en el primer experimento, y grafique los resultados
BIBLIOGRAFA
Krupp, M. A, L. M. Tierney, E. Jawetz, R. L. Roe & C. A Ca margo. Manual de Diagnstica Clnica y de
75
12
11
10
pH
0.2
0.4
0.6
0.8
l. O
77
GENERALIDADES
La glucosa es una sustancia fundamental para el metabolismo del organismo humano. Los
distintos tipos celulares se hallan dotados de transportadores para este importante combustible
biolgico, teniendo acceso por lo tanto al ambiente intracelular en todos los tejidos. En el caso
particular de los eritrocitos el transportador de la glucosa es el GluTl, que, como todos estos
transportadores para glucosa, acta con un mecanismo de difusin facilitada.
La glucosa es una sustancia reactiva, capaz de combinarse qumicamente con grupos amino. En el
caso particular de la hemoglobina A1 1a glucosa se combina con el grupo amino libre de las cadenas
~ de la protena, formando la
78
establecido, siendo mayor la prevalencia al aumentar la edad, de manera que en el grupo de edad
de 50 a 59 aos era de 13.5% y en el de 60 a 69 aos era de 19.2%, observndose en general una
tendencia mayor en el sexo femenino.
La diabetes mellitus es una patologa que en funcin de tiempo impacta en la funcionalidad de la
micro y vasculatura, lo cual produce patologas derivadas de gran relevancia como son la
insuficiencia renal, las retinopatas y las neuropatas, as como la insuficiencia cardiaca y el infarto
al miocardio.
La presencia de 9-9.5% o ms de hemoglobina glicada se asocia con una progresin muy rpida de
las complicaciones microvasculares que produce la hiperglucemia, habindose encontrado en
estudios de alto nivel que disminuyendo la proporcin de hemoglobina glicada, disminuye el
desarrollo y progreso de alteraciones en ojos, riones y nervios, tanto en la diabetes tipo 1 como
en la tipo 2. Se ha establecido que en los pacientes diabticos el riesgo de sufrir las complicaciones
microvasculares se reduce en 10% por cada punto porcentual que disminuya la concentracin de
hemoglobina glicada, de manera que si un paciente con un valor de 10% lo reduce a 8, tendr un
20% menos riesgo de sufrir las complicaciones, debiendo disminuir la hemoglobina glicada por
debajo de 7% para prevenir la patologa microvascular.
Recientemente la hemoglobina glicada ha sido integrada como criterio diagnstico de la diabetes
mellitus por la Asociacin Americana para la Diabetes (AAD). Una concentracin de 6.5 %o ms de
hemoglobina glicada es diagnstica de dicha patologa, como lo son otros criterios de la AAD entre
los cuales se encuentran la concentracin de glucosa de 126 mg/dL o ms en plasma despus de
ayuno de al menos 8 horas o el registro de 200 mg/dL o ms a las 2 horas en prueba de tolerancia
a la glucosa.
La cuantificacin peridica de hemoglobina glicada permite saber el grado de control de la
glucemia en los ltimas semanas antes de realizarse la prueba, permitiendo al profesional de la
salud darse cuenta con un criterio fidedigno del apego que ha tenido el paciente a las
prescripciones dietticas y medicamentosas que recibi. La AAD recomienda la cuantificacin de
HBA1c al menos 2 veces al ao.
79
PROCEDIMIENTO (NycoCard)
Fundamento: los eritrocitos se lisan al ponerse en contacto con una solucin amortiguada de
glicinamida que contiene tambin un detergente y cido brico conjugado con un colorante. La
solucin produce que la hemoglobina liberada se precipite y en esas condiciones la hemoglobina
glicada HbA1c une al conjugado de cido brico en forma especfica. Posteriormente se transfiere
una alcuota de la solucin a una membrana porosa que retiene la hemoglobina libre o conjugada
y filtra el conjugado de cido brico, se lava el precipitado pare eliminar el conjugado de cido
brico residual que no se uni y se cuantifica con un lector especial la hemoglobina glicada.
VALORES DE REFERENCIA
4.5-6.3%
80
BIBLIOGRAFA
Bunn, HF, Haney, DN, Gabbay, KH and Gallop, PM. (1975). Further identification of the nature and
linkage ofthe carbohydrate in Hemoglobin A1c Biochem Biophys Res Commun 67: 103-109
Encuesta Nacional de Salud y Nutricin 2006, Instituto Nacional de Salud Pblica y Secretara de
Salud
Executive summary: standards of medical ca re in diabetes-2010. Diabetes Ca re 2010; 33: 54-60
Hermoglobin A1 Fact Sheet, Michigan Diabetes Research and Training Center. University of
Michigan Health System 2011:
http:flwww.med.umich.edu/mdrtc/cores/ChemCore/hemoalc.htm
Mathur, R. (2009) Hemoglobin A1 test.
http:flwww.medicinenet.com/hemoglobin ale test/index.htm
81
82
OBJETIVOS
1.
2.
GENERALIDADES
El examen general de orina (EGO) se ha practicado con fines diagnsticos durante siglos y
probablemente es el ms antiguo de los procedimientos de laboratorio utilizados en Medicina.
El estado nutricional del paciente, el estado de sus procesos metablicos y la capacidad renal para
manejar selectivamente las sustancias que recibe, constituyen los tres factores principales que
determinan la composicin de la orina
Con la introduccin de tcnicas sencillas en las que se utilizan tiras impregnadas con ciertos
reactivos, se ha facilitado la realizacin del EGO.
MATERIAL
1. Tubos de 13 X 100 mm
2. Probeta
3. Porta y cubreobjetos
4. Densmetro
S. Microscopio
6. Pipeta graduada de 10 mL
7. Tiras reactivas
8. Muestra reciente de orina
9. centrfuga clnica
83
Una vez realizada la limpieza, se colecta la primera orina de la maana en un recipiente limpio,
seco y de ser posible estril. Por el grado de concentracin de esa orina es ms probable detectar
alguna anormalidad en su composicin. En caso de que no se tenga disponible la primera orina de
la maana, conviene concentrar el sedimento por centrifugacin secuencial de unas 3 alcuotas de
5 ml en el mismo tubo. De esta manera se aumenta la probabilidad de detectar alguna anomalfa
que presente la muestra.
Es necesario revisar la historia clnica del paciente a fin de constatar si recientemente ha ingerido
medicamentos que pudieran afectar los resultados del anlisis.
Caractersticas macroscpicas normales de la orina y determinacin de la densidad. las
caractersticas macroscpicas normales de la orina son las siguientes:
Color
pajizo
Olor
sui generis
Aspecto
cristalino
Para determinar su densidad se transfieren 20 ml de orina a la probeta especial para medir dicho
parmetro. Posteriormente se introduce cuidadosamente el densmetro y al tiempo que se suelta
se hace girar con un movimiento rpido, con lo que se logra que flote libremente sin adherirse a
las paredes de la probeta. Una vez que se estabiliza el densmetro, se toma la lectura registrando
directamente el valor marcado por el nivel de la superficie de la orina en la escala localizada en el
tallo del densmetro.
Tiras reactivas. Diversos parmetros de importancia pueden analizarse a travs de las tiras
reactivas {Combur 10 test), para lo cual solo se introduce la tira reactiva en una muestra de orina
fresca del paciente. la tira reactiva presenta varias zonas impregnadas con reactivos especficos
para la deteccin de dichos parmetros. la lectura se hace por comparacin de la tira humedecida
con la orina, con un patrn de colores que aparece en el envase de las tiras.
84
Densidad
1.003 -1.030
pH
4.5-8.0
Leucocitos
O- 4 por campo
Nitritos
negativo
Protenas
negativo
Glucosa
negativo
Cuerpos cetnicos
negativo
Urbilingeno
negativo
Bilirrubina
negativo
Sangre oculta
negativo
1.
Eritrocitos.
2.
Neutrfilos.
3.
4.
Epitelio vesical.
5.
Clulas escamosas.
6.
Cilindros hialinos.
85
7.
Cilindros granulados.
8.
Cilindros leucocitarios.
9.
86
Cilindro leucocitario
Clulas escamosas
87
Cilindro granuloso
Color. Los cambios de color pueden ser consecuencia de la dieta, de frmacos o de diversos
signo que puede estar asociado con diabetes inspida central o nefrognica, glomerulonefritis,
88
89
Nitritos. La mayora de los grmenes patgenos que pueden encontrarse en la orina reducen el
nitrato a nitrito, pudiendo determinarse de esta manera indirecta la presencia de grmenes como
rin puesto que no se encuentra libre sino asociada con albmina. Cuando la bilirrubina libre se
conjuga en el hgado con glucuronato, se hace soluble en agua y entonces s es capaz de atravesar
el glomrulo puesto que se desplaza por s misma en la sangre. La bilirrubina conjugada
normalmente se excreta por la bilis, de manera que la orina normal no contiene bilirrubina. La
bilirrubina conjugada se elimina por la orina en cuadros de ictericia obstructiva o hepatocelular,
produciendo el signo de coluria (orina oscura).
Por efecto de toxinas y ciertos frmacos tambin se encuentra bilirrubina en la orina debido al
aumento de la presin intracanalicular por inflamacin periportal o fibrosis y a causa de la
inflamacin de los hepatocitos. La bilirrubina puede aparecer en la orina en la hepatitis antes de
que se manifieste ictericia. La positividad de bilirrubina en orina puede ser un indicio precoz de
afeccin heptica.
Urobilingeno. La bilirrubina se reduce a mesobilirrubina, estercobilingeno y urobilingeno por
cantidades pequeas de sangre en la orina, que pueden estar asociadas con afecciones renales o
de vas urinarias. Por ejemplo puede tratarse de tuberculosis renal, glomerulonefritis o procesos
inflamatorios de vas urinarias como la cistitis. La sangre oculta tambin puede ser expresin de
procesos sistmicos como el dengue hemorrgico o la prpura trombocitopnica, ya que en
ambas condiciones se reduce el nmero de plaquetas y se facilita la hemorragia. Existen
condiciones no patolgicas en que se presenta sangre oculta en la orina, como puede ser el caso
de las mujeres menstruantes, o despus de realizar ejercicio fsico intenso o incluso el baile
intenso y prolongado.
90
aumentados de volumen y adheridos unos con otros. Los leucocitos se cuentan por campo de gran
aumento o colocando una pequea gota de orina directamente en el hemocitmetro; se observan
en grandes cantidades en presencia de cualquier infeccin urogenital. Es normal encontrar 0-4
leucocitos por campo
Cilindros. Se originan por la precipitacin de !as mucoprotenas en las paredes de los tbulos y
91
92
l.
2.
GENERALIDADES
la creatinina es una sustancia de bajo peso molecular que filtra libremente por el glomrulo. Se
forma en el msculo a partir de la fosfocreatina, la cual reacciona con ADP para formar ATP en el
microambiente de las sarcmeras. Entre 1 y 2% de la fosfocreatina se transforma cada da en
creatinina +fosfato sin que en ello participe ninguna enzima. la creatinina, que es un producto de
desecho, pasa a la sangre y se excreta por la va renal. la cantidad de creatinina que se produce
cada da, y por lo tanto su concentracin sangunea, es muy constante y depende de la masa
muscular de cada persona.
En la prctica, la determinacin de la concentracin plasmtica de creatinina es la prueba simple
ms utilizada para valorar la funcin glomerular. Como se mencion antes, la concentracin de
creatinina en el plasma se encuentra relacionada con la masa muscular, por Jo cual, un mismo
valor puede tener significados diferentes en cuanto a la funcin glomerular en personas con
diferente masa muscular. Debe tenerse cuidado al interpretar los valores encontrados de
creatinina plasmtica pues la velocidad de filtracin glomerular puede estar muy disminuida sin
que la creatinina plasmtica salga del intervalo normal.
De esta manera, una concentracin de creatinina plasmtica dentro del intervalo normal no
significa necesariamente una funcin glomerular normal. Sin embargo, un valor por arriba del
intervalo normal generalmente indica alteracin de la funcin renal. Si un paciente registra un
incremento de la concentracin srica de creatinina respecto a determinaciones previas de l
mismo, puede significar alteracin de la VFG, aunque ninguno de los valores se halle fuera del
intervalo normal. En general, en los pacientes en los que se ha documentado la enfermedad renal,
es suficiente la determinacin de la creatinina srica para su seguimiento, sin necesidad de
cuantificar su depuracin.
la velocidad de filtracin glomerular (VFG) es un importante parmetro de la funcin renal y
consiste en el volumen de plasma que pasa en determinado tiempo a travs de los glomrulos
renales. la VFG depende de tres factores: l. la presin neta que se ejerce sobre la membrana
93
e,
Donde
e, es
= U,V/P,
debido a que el
94
en pacientes bajo condiciones ideales puede ser de hasta el 10%, considerndose que en
condiciones ordinarias puede ser de hasta 30%.
Por lo anterior, la depuracin solo se practica en casos en que se encuentre claramente indicada,
incluyendo la valoracin de donadores potenciales de rin, el estudio de pacientes con
alteraciones menores de la funcin renal, y para el clculo de las dosis de medicamentos
potencialmente txicos que se eliminan por va renal, como ocurre con los aminoglucsidos
(antibiticos) y la digoxina (glucsido cardiotnico).
IMPORTANCIA CLNICA
95
Pipetear en cubetas:
Patrn
100 llL
Suero
100 llL
Reactivo de trabajo
1.0 mL
1.0 mL
CLCULO
Suero
/lA
m""'"
''""
(/lA
Orina
=A,- A1 de la muestra
= A2 - A1 del patrn
m,.,,,/!lA '"'o) x 2 = _
mg/dL Creatinina
/lA
m""'"
/lA
'"'"
=A,- A, de la muestra
= A2 - A, del patrn
(/lA m,.,,,/!lA
pwo) x 100 = _
VALORES DE REFERENCIA
SUERO
ORINA
HOMBRES
0.6-1.1 mg/dl
MUJERES
O. S -0.9 mg/dl
96
mg/dL creatinina
Depuracin de creatinina
1.
Recolectar orina de 24 horas de acuerdo con lo siguiente: vaciar la vejiga al levantarse por
la maana (p. ej. 8:00AM) y desechar la orina. Recolectar en un recipiente apropiado toda
la orina que se produzca durante el da y la noche. A la misma hora del siguiente da,
volver a vaciar la vejiga pero esta vez aadindola al recipiente. Llevar la orina al
laboratorio lo ms pronto posible.
2.
Tomar una muestra de sangre del paciente al entregar la orina. Dejar coagular y separar el
suero
3.
4.
S.
VALORES DE REFERENCIA
80-130 ml/minuto
BIBLIOGRAFA
Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlations, 5th edition. Wiley-Liss,
2002
Guyton, A. C. and J. E. Hall. Textbook of Medica/ Physio/ogy, 10th edition, W. B. Saunders Company,
2000
Marshall, W. C. and S. K. Bangert. Clinical Chemistry. 5th edition, Mosby, 2004
Gaw, A., R. A. Cowan, D.St..J. O'Reilly, M. J. Stewart and J. Shepherd. C/inical Biochemistry, an
illustrated colar text, 2"' edition, Churchill Livingston, 1999.
97
98
OBJETIVOS
1.
2.
GENERALIDADES
dichas clulas a partir de succiniiCoA (intermediario del ciclo de Krebs) y de glicina, generndose
sucesivamente 6-aminolevulinato, porfobilingeno, uroporfirinogno 111, coproporfiringono 111,
protoporfiringeno IX, protoporfirina IX y hemo. Este ltimo es un tetrapirrol asociado con un
2
p formndose
asociacin de 4 cadenas, 2 de cada tipo, de tal manera que la molcula de hemoglobina contiene 4
grupos hemo y es capaz de portar 4 molculas de oxgeno simultneamente.
99
La oxihemoglobina aporta oxgeno suficiente a los tejidos para que se lleve a cabo la oxidacin de
los combustibles biolgicos, proceso normalmente acoplado a la produccin de molculas de alta
energa, fundamentalmente el ATP.
La concentracin celular media de hemoglobina (CCMH) se calcula dividiendo la concentracin de
hemoglobina (en g/dL) entre el hematocrito y multiplicando el resultado por 100. Como puede
apreciarse, este clculo corresponde al % de hemoglobina en el paquete celular rojo, es decir el
nmero de gramos de hemoglobina que estaran presentes en 100 mL de paquete eritrocitario y
equivale al% de hemoglobina dentro de cada eritrocito. La CCMH normal es de aproximadamente
35%. Se consideran hipocromas las anemias cuya CCMH es inferior a 30%.
IMPORTANCIA CLNICA
Las anemias constituyen la manifestacin clnica de diversas alteraciones, las cuales pueden
agruparse como sigue:
Insuficiencia de la mdula sea. Se producen cantidades bajas de eritrocitos debido a deficiencias
de la eritropoyesis, alteraciones endocrinas, factores nutricio na les, etc. Por ejemplo, la deficiencia
de hierro produce anemia hipocrmica (CCMH disminuida) y microctica (tamao eritroctico
menor al normal); la deficiencia de vitamina B12 y/o de folato, produce anemia megaloblstica
(abundancia de clulas grandes precursoras de los eritrocitos).
Insuficiencia renal crnica. En la fase terminal de esta patologa el rin deja de producir
eritropoyetina y en consecuencia se presenta anemia normoctica y normocrmica.
Hemlisis aumentada.
La anemia
p,
cuando la presin parcial de oxgeno es baja, lo cual provoca que los eritrocitos adquieran una
rigidez tal que se rompen con facilidad al transitar por capilares muy estrechos.
La hemlisis aumentada puede deberse tambin a la presencia de anticuerpos contra los
eritrocitos, como ocurre en la eritroblastosis fetal, enfermedad en la cual la madre Rh- produce
anticuerpos contra los eritrocitos del feto Rh +.
La anemia hemoltica puede deberse tambin a infecciones como el paludismo, proceso en el que
el agente infeccioso, Plasmodium, lleva a cabo su ciclo vital en el interior de los eritrocitos,
lisndolos al cabo del mismo.
100
Para determinar el hematocrito se requiere un tubo graduado especial conocido como tubo de
Wintrobe, el cual est hecho de vidrio grueso que soporta bien la centrifugacin. El tubo se carga
hasta la graduacin superior (10) con sangre tratada con anticoagulante, utilizando una pipeta
Pasteur de punta larga, la cual, una vez cargada con sangre se introduce hasta el fonda del tubo de
Wintrobe y entonces se descarga gradualmente conforme se va sacando del tubo, minimizando el
riesgo de formar burbujas. En caso de que se haya formado una burbuja, debe sacarse con golpes
suaves dados al tubo con un dedo. Una vez cargado debidamente el tubo de Wintrobe, se
centrifuga durante 30 minutos a 3000 r. p. m. y se toma la lectura directamente de la graduacin
del tubo. a nivel de la lnea que separa el paquete rojo del blanco .
PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR LA CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA (Randox).
2.
3.
4.
S.
101
VALORES DE REFERENCIA
Hombres Adultos:
13 -18 g/dl
Mujeres adultas:
11-16 g/dl
Recin nacidos:
14 -23 g/dl
NOTA: Puede haber variaciones fuera de los intervalos indicados por efecto de la edad, la raza, el
ejercicio, la altitud y la estacin del ao.
BIBLIOGRAFA
Bennington, Fouty & Hougie. El Laboratorio en el Diagnstico Clnico. La Prensa Medica Mexicana,
1977, 2'. Ed.
Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodrguez-Segade & A. Snchez Pozo. Bioqumica
Clnica. McGraw-Hill, 1998
102
103
OBJETIVOS
l.
2.
El alumno explicar la relevancia clnica de los grupos sanguneos ABO y del carcter Rh
GENERALIDADES
Las sustancias que determinan los grupos sanguneos son componentes de la membrana de los
eritrocitos (y en muchos casos de otros tipos celulares) cuya variedad se debe a polimorfismos
genticos.
En el hombre se han reconocido ms de 200 variantes genticas de antgenos de los eritrocitos,
producidas por al menos 20 sistemas de grupos sanguneos, pudiendo haber en cada sistema dos o
ms fenotipos distintos. En el sistema ABO, por ejemplo, existen cuatro fenotipos (A, B, AB Y 0),
que corresponden a cuatro grupos sanguneos en dicho sistema.
El sistema ABO es de gran importancia por su alto poder de inmunogenicidad. Los individuos
pertenecientes al grupo A poseen el antgeno A en sus clulas rojas, los del grupo B poseen el
antgeno B, los del grupo AB poseen ambos antgenos y los del grupo O no poseen ninguno de los
dos. Una caracterstica notable de los grupos ABO es la relacin recproca entre los antgenos
presentes en los eritrocitos y los anticuerpos que se encuentran en el plasma de los mismos
individuos, de acuerdo con la siguiente tabla:
GRUPO SANGUNEO
(FENOTIPO)
GENOTIPO
0/0
ANTfGENOS EN
ERITROCITOS
NINGUNO
ANTICUERPOS EN EL
PLASMA
ANTI-A, ANTI-8
A/ A
ANTI-B
A/0
ANTI-B
B/B
ANTI-A
B/0
ANTI-A
A/B
A, B
NINGUNO
B
AB
La razn de esta relacin reciproca no se conoce pero se cree que la formacin de anticuerpos
anti-A y anti-B puede ser la respuesta al contacto con las sustancias A y B que se encuentran de
manera natural en el ambiente.
Las especificidades antignicas de estos grupos sanguneos se deben a variaciones en el azcar
terminal del oligosacrido de cierto glicolpido membrana!. En el caso del grupo A, el azcar
104
La importancia de los grupos sanguneos en general tiene relacin con el proceso de transfusin
pues considerando la posible presencia de anticuerpos en la sangre del receptor puede propiciarse
la generacin de una reaccin inmunolgica si no se tiene el cuidado de ensayar previamente la
compatibilidad de la sangre del donante con la del receptor. El individuo con sangre tipo A puede
recibir eritrocitos de tipo A u O, mientras que el individuo con sangre tipo B puede recibir
eritrocitos de tipo Bu O. En cambio, quien tiene tipo AB puede recibir eritrocitos de cualquier tipo
y quien es tipo O puede recibir solo eritrocitos de tipo O. La compatibilidad o incompatibilidad de
una combinacin determinada se halla en funcin de la presencia o ausencia de anticuerpos en la
sangre del receptor, segn indica la tabla anteriormente presentada.
105
106
PROCEDIMIENTO
l.
Se obtiene una muestra de sangre mediante una puncin con lanceta del dedo pulgar
2.
3.
A cada gota de sangre se agrega una gota de uno de los sueros anti-A, anti-B o anti-D
4.
En cada caso se mezclan las muestras con un palillo durante aproximadamente un minuto
5.
6.
En lo concerniente al sistema Rh, la reaccin positiva con anti-D indica que la sangre es Rh
positiva y la no aglutinacin de los eritrocitos implica que el tipo de sangre es Rh negativo.
BLIBLIOGRAFA
Meissenberg, G. and W. H. Simmons. Principies of Medica/ Biochemistry. Mosby, 1998
Roith, 1, Brostoff, J. And Male, D. lmmuno/ogy, 3'' edition. Mosby, 1993
Thompson, J. S. and Thompson, M. W., Genetics in Medicine, 2"' edition, W. B. Saunders Co., 1973
Bonilla-Zavala, R. (2005) Pruebas pretransfusionales. Rev Med lnst Mex Seguro Soc 43: 13-15
Incompatibilidad feto-materna por el grupo sanguneo ABO:
http://www.pruebadepaternidad.info/?p=197
107
108
RENCUENTO PLAQUETARIO
OBJETIVOS
El alumno determinar la concentracin de plaquetas en una muestra de sangre
El alumno explicar el contexto clnico relevante del recuento plaquetario
GENERALIDADES
El sistema hemosttico del organismo humano tiene como funcin evitar la prdida de sangre
mediante la formacin de un cogulo que ocluye la solucin de continuidad, preservando el
estado lquido dentro de los vasos sanguneos. Los principales componentes del sistema
hemosttico son:
1.
Plaquetas
2.
3.
Protenas plasmticas, tanto las que participan en la coagulacin como las que actan en
la fibrinlisis.
Estos tres componentes interrelacionan entre s para generar el efecto hemosttico. La pared
interna de los vasos sanguneos se encuentra recubierta por clulas endoteliales y cuando stas se
lesionan, dejan expuestas fibras de colgena y otras sustancias del medio subyacente, a las cuales
se adhieren algunas plaquetas que entonces se activan e inducen la agregacin plaquetaria, que
termina formando un tapn primario; por otra parte, la solucin de continuidad permite la
activacin de las vas de la coagulacin (extrnseca, por exposicin al factor tisular, e intrnseca,
por la exposicin de una superficie extraa, de manera relevante la colgena), a lo que sigue la
cascada de reacciones que conduce a la formacin del cogulo.
Plaquetas. Tambin llamadas trombocitos, son clulas enucleadas en forma discoidal de 2 a 4 .m
de dimetro, derivadas de los megacariocitos. Su vida promedio es de aproximadamente 7 .S das y
su concentracin normal en la sangre oscila entre 150,000 y 400,000/mm 3 Normalmente, del total
de plaquetas presentes en el organismo, 2/3 se encuentran circulando y 1/3 se encuentra en el
bazo. La participacin de las plaquetas consta de cuatro fases:
1.
Adhesin de las plaquetas a superficies extraas que quedan expuestas por efecto de la
lesin endotelial. Este proceso depende de la presencia de glucoprotenas membranales a
las que se enlazan los trombocitos y es fundamental para contener la hemorragia.
109
2.
3.
4.
(antiagregante plaquetario), que hacen que el flujo sanguneo se mantenga normal. Las protenas
adhesivas fibronectina, vitronectina, tromboespondina y el factor Von Willebrand, tambin se
elaboran en este sitio y participan en el proceso de agregacin plaquetaria. Al continuar el proceso
de la coagulacin, las clulas endoteliales intactas que se encuentran en las proximidades del sitio
lesionado limitan la formacin de fibrina a partir de fibringeno, activando a los inhibidores de la
trombina.
Protenas plasmticas. Entre ellas se encuentran las protenas necesarias para los procesos de
coagulacin y fibrinlisis. La mayor parte de las que participan en la hemostasia, son
IMPORTANCIA CLNICA
EL AUMENTO DEL NMERO DE PLAQUETAS PUEDE SER DE DOS TIPOS:
110
l.
2.
Anemia post-hemorrgica
3.
4.
5.
plaquetas.
6.
7.
l.
2.
mdula sea)
3.
Neumonas
4.
Alergias
5.
6.
111
7.
prolongados:
quinidina
(antiarrtmico),
sulfas
(antibacteriano),
clorpropamida
MATERIAL
2.
3.
Anticoagulante EDTA
4.
5.
Caja de Petri
6.
Microscopio
7.
8.
Papel filtro
PROCEDIMIENTO
l.
Verter la sangre extrada en un tubo de ensayo que contenga una gota de anticoagulante y
mezclar suavemente por inversin.
2.
3.
4.
5.
6.
Cargar una micropipeta con la preparacin y depositar una gota en la orilla del
cubreobjetos, a nivel de una de las hendiduras del hemocitmetro.
7.
8.
Enfocar la cuadrcula con el seco dbil, luego con el seco fuerte e identificar las plaquetas.
Una vez identificadas, hacer el recuento de las plaquetas utilizando la cuadrcula central
112
El conteo debe hacerse con todo cuidado, detectando las plaquetas en cada uno de los 16
subcuadros de cada uno de los 25 cuadros.
Cargando el hemocitmetro
113
VALORES DE REFERENCIA
150,000- 400,000/mm 3
BIBLIOGRAFA
Balcells, A, La Clnica y el Laboratorio. Ed. Marn, 1989
Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodguez-Segade & A. Snchez Pozo. Bioqumica
2002
RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES
114
s'h
edition. Wiley-Liss,
BILIRRUBINAS S RICAS
OBJETIVOS
1.
2.
GENERALIDADES
eritrocitos
senescentes
son
captados
por
el
sistema
reticuloendotelial,
presente
mediante un mecanismo de transporte activo para pasar luego al intestino formando parte de la
bilis. En ltima instancia la bilirrubina se excreta en su mayor parte despus de haber sufrido
algunas modificaciones qumicas, en forma de urobilina por la orina y como estercobilina por las
heces fecales.
IMPORTANCIA CLNICA
l.
heptica como son los casos de tumores hepticos, hepatitis viral, cirrosis, congestin
heptica por insuficiencia cardiaca, hepatitis medicamentosa, hepatitis alcohlica, etc.
116
Pipetear en cubetas:
Reactivo Rl
200 11L
Reactivo R2
200 !lL
1 gota (50 !lL)
Reactivo R3
1.0 mL
1.0 mL
Muestra
200 11L
200 !lL
Reactivo 4
1.0 mL
1.0 mL
117
Bilirrubina directa
Pipetear en cubetas:
Reactivo R1
200 llL
Reactivo R2
200 llL
1 gota {50 11L)
NaCI 0.9%
2.0 mL
2.0 mL
Suero
200 llL
200 llL
CLCULOS
Bilirrubina total (BT)
Asr X 10.8 = _ _ _ mg/dL
Bilirrubina directa
BIBLIOGRAFA
Berk, P. D., and A. W. Wolkoff {2001). Bilirubin metabolism and hyperbilirubinemias. En:
Braunwald, E, A. S. Fauci, D. L. Kasper, S. L. Hauser, D. L. Longo and J. Larry Jameson (Eds).
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2000
Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlations, 5th edition. Wiley-Liss,
2002
118
119
OBJETIVOS
l.
2.
GENERALIDADES
El cido rico es el producto final del metabolismo de las bases nitrogenadas purnicas, proceso
que se lleva a cabo principalmente en el hgado y en la mucosa intestinal. En estos tejidos se
registra gran actividad de la xantina oxidasa, enzima que produce directamente el cido rico. En
otros tejidos solo se encuentran indicios de dicha enzima.
El contenido total de cido rico en el adulto es de aproximadamente 1.2 g y se origina tanto de
los nucletidos de purinas ingeridos en los alimentos como de los endgenos. Las concentraciones
de cido rico y de su base conjugada, el urato, dependen del pH. La primera disociacin del cido
rico tiene un pK de aproximadamente 5.8, por lo que en el plasma (pH 7.4) y en el lquido sinovial
el urato representa el 98% y el cido rico solo el 2%.
La cantidad de urato en el organismo es el resultado de la cantidad que se produce y de la que se
excreta. Normalmente entre 2/3 y 3/4 del urato se excreta por la va renal y el resto por la
intestinal.
El urato filtra libremente a travs del glomrulo, enseguida es reabsorbido casi ntegramente,
luego los t bulos proximales secretan aproximadamente el 50% del absorbido y de esa cantidad se
vuelve a reabsorber un 80%. La excrecin neta es de 8 a 12% del total filtrado por los glomrulos.
Mientras ms cida es la orina mayor ser la proporcin cido rico/urato.
La concentracin srica de cido rico se halla influenciada por el sexo y la edad. En los nios
oscila normalmente entre 3 y 4 mg/dl. A partir de la pubertad aumenta en los hombres pero no
en las mujeres debido en parte a que las mujeres excretan una mayor cantidad de urato, por lo
cual los valores normales de los hombres adultos son mayores a los de las mujeres. En los
hombres los valores oscilan entre 3.4 y 7.0 mg/dL y en las mujeres entre 2.4 y 5.7 mg/dl.
120
IMPORTANCIA CLNICA
La hiperuricemia puede definirse como una concentracin de urato superior a 7 mg/dl. A partir de
este valor aumenta el riesgo de sufrir artritis gotosa o uro litiasis. Entre el 2 y el13 %de los adultos
ambulatorios presenta hiperuricemia. En la hiperuricemia se tiene la condicin propicia para que
se precipite el urato, aunque intervienen factores adicionales que hacen que no ocurra en
personas con elevadas concentraciones de urato. Se considera que esto se debe a la presencia de
algunas sustancias presentes en el plasma normal. Cuando llega a ocurrir, se forman cristales que
tienden a acumularse en las articulaciones formando los llamados tofos, que constituyen la causa
de la artritis gotosa aguda, la cual puede progresar a artritis gotosa crnica. El 90% de las personas
hiperuricmicas deben tal condicin a deficiencia en el manejo renal del cido rico. El exceso de
cido rico favorece la precipitacin de cristales, que pueden observarse en la orina. Alrededor del
13% de los clculos renales son de cido rico.
Numerosas enfermedades y factores sociales y de comportamiento se asocian a modificaciones de
la concentracin de cido rico en el plasma. El aumento de la concentracin srica de urato es
ms frecuente y clnicamente ms significativo que su disminucin.
SE PRESENTA AUMENTO DE CIDO RICO EN:
1.
Nefropata crnica por plomo, patologa que se asocia con gota (gota saturnina).
3.
ejemplo: furosemida (diurtico de asa), tiazidas (diurticos que actan en el t bulo distal),
salicilato (aspirina) y fenilbutazona (antiinflamatorio no estero id e de accin muy potente
pero con efectos colaterales muy importantes, ya que puede suprimir la produccin de
leucocitos y puede producir anemia aplstica).
4.
121
7.
8.
9.
Radiacin ionizante, que produce alteraciones en la estructura del DNA, lo cual aumenta
su tasa de degradacin a cido rico.
122
PROCEDIMIENTO (Randox)
Fundamento: el cido rico se transforma en alantona y perxido de hidrgeno en presencia de
uricasa. El perxido de hidrgeno reacciona con cido 3, 5-dicloro-2 hidroxibencensulfnico y 4aminofenazona, por catlisis de la peroxidasa, produciendo quinoneimina, que es un compuesto
colorido. La intensidad del color es directamente proporcional a la concentracin de cido rico.
Patrn
20 .L
Suero o plasma
Reactivo de trabajo
20 .L
1.0 mL
1.0 mL
1.0 mL
CLCULO
(A m,.,,,./ A blooco) X 10 = _ _ mg/dL cido rico
VALORES DE REFERENCIA
Hombres: 3.4-7 .O mg/dL
Mujeres: 2.4-5.7 mg/dL
BIBLIOGRAFA
Balcells, A. La Clnica y el Laboratorio. Ed Marn, 1989
Grases, F., A. l. Villacampa, A. Costa-Bauza and O. Sohnel (1999). Uric acid calculi. Scanning
Microscopy 13: 223-234
Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical carrelations, 5th edition. VViley-Liss,
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Wortmann, R. L (2001). Disorders of purine and pyrimidine metabolism. En:
Braunwald, E, A. S. Fauci, D. L Kasper, S. L. Hauser, D. L Longo and J. Larry Jameson (Eds). Harrison's
Interna! Medicine, 15th ed., McGraw-Hill, New York, N. Y., USA. P. 2268-2273
123
124
OBJETIVOS
l.
2.
GENERALIDADES
La fosfatasa cida (FAC) es el nombre que recibe un grupo de enzimas cuya funcin es hidrolizar a
pH cido una serie amplia de esteres de fosfatos (combinaciones de alcoholes con cido fosfrico),
tales como las hexosas fosfato, el glicerol-fosfato y los nucletidos. Su mxima actividad se
despliega a un pH de 4.9. Los productos de la reaccin catalizada por esta enzima son fosfato
inorgnico y el alcohol correspondiente, como se muestra en la siguiente reaccin general:
R-O- P0 3 H- + H20 -
R- OH + H2 P04
Existe una serie de isoenzimas de la FAC en el organismo, de tal manera que virtualmente todas
las clulas la contienen, y aunque se detecta esta actividad en el citosol, la localizacin intracelular
predominante es la lisosomal. Desde el punto de vista clnico son importantes las fosfatasas cidas
de la prstata, de los eritrocitos y de las plaquetas.
La FAC de origen prosttico se inhibe en presencia de l-tartrato, aunque algunas de otros tejidos
tambin son sensibles a dicho reactivo, como lo demuestra el hecho de que tanto en hombres
prostatectomizados como en mujeres, se detecta actividad de FAC sensible al tartrato. La FAC de
los eritrocitos se inhibe en presencia de formaldehido, por lo cual, si una muestra de sangre se
hemoliza, puede aadrsele dicha sustancia para evitar alteraciones de la actividad real de FAC en
el suero. Esto resulta particularmente til cuando se dificulta o no existe forma de obtener otra
muestra de sangre del paciente.
IMPORTANCIA CLNICA
l.
125
incluyen
hiperparatiroidismo
primario
metstasis
carcinomatosas
de
diversas
procedencias.
3.
Lquido vaginal. Debido a que el semen contiene FAC prosttica, en caso de sospecha de
Fundamento: la hidro lisis del1-naftil-fosfato, catalizada par la FAC, da como productos fosfato y 1naftol. El1-naftol reacciona a su vez con 4-cloro-2-metilfenildiazonio, y forma colorante azo, cuya
concentracin es directamente proporcional a la actividad de la FAC.
Para determinar la fosfatasa cida prosttica (FAP) se realiza un ensayo igual al que se sigue para
la fosfatasa cida total, pero se aade tartrato a la mezcla de reaccin. Dicha sustancia inactiva a la
FAP, de manera que la actividad obtenida en el ensayo corresponde a la fosfatasa cida total
126
menos la FAP, es decir la fosfatasa cida no prosttica (FANP). Para obtener la actividad de la FAP,
se resta la FANP de la total.
Pipetear en cubetas:
Suero
100 !!L
Reactivo FAT
1.0 mL
Reactivo FANP
100 !lL
1.0 mL
CLCULO
Obtener los 3 valores de M en cada muestra (FAT y FANP) como sigue: A 1 - A0, A2
A 1 y A3
promediarlos.
pmmedio de FAT X
~A
pcomediode FANP
VALORES DE REFERENCIA
Fosfatasa cida total:
hasta 1. 6 U/L
127
A2 y
BILBLIOGRAFA
Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. RodrguezSegade & A. Snchez Pozo. Bioqumica
128