CAROLINE SANTOS CAPITELLI

EFEITO DA MELATONINA EM MODELO ANIMAL DE

PARKINSONISMO INDUZIDO PELO MPTP

Dissertao apresentada como requisito

parcial para a obteno do ttulo de Mestre
em Farmacologia, Curso de Ps-Graduao
em Farmacologia, Setor de Cincias
Biolgicas, Universidade Federal do Paran.
Orientadora: Prof. Dr. Maria Aparecida B. F.
Vital

CURITIBA
2007

 Ainda que eu tenha o dom de profetizar e conhea

todos os mistrios e toda a cincia; ainda que eu
tenha tamanha f, ao ponto de transportar montes,
se no tiver amor, nada serei.
(Efsios 13:2)

iii

AGRADECIMENTOS

Primeiramente, ao Senhor, Autor da Vida, por Sua presena,

amor e fora, que me concedeu mais esta experincia e conquista.
A meus queridos pais, zio e Luiza Odete, e irmos, Jaqueline e
Ricardo, pelo amor incondicional que me ajudaram a perseverar e vencer as
dificuldades.
Ao meu amado esposo, pelo amor, pacincia e encorajamento em
todos os momentos.
A minha orientadora e amiga, Prof.dr. Maria Aparecida Barbato
Frazo Vital, pelos ensinos, conhecimentos e amor pela pesquisa.
Aos meus companheiros de experimentos Adriana, Marcelo e
ngela pela amizade e colaborao na execuo dos experimentos
desenvolvidos.
As minhas amigas Mariza, Scheila, Aedra e Juliana, pelos timos
momentos de risos e companheirismo.
A minha amiga e farmacutica, Silvia Gennari, pela amizade,
auxlio e pacincia durante esses anos.
As colegas de departamento, Cristina, Alessandra, Nair e Linda,
por toda ajuda e carinho.
Aos colegas de biotrios, por toda colaborao.

iv

SUMRIO

LISTA DE ABREVIATURAS....................................................................

vii

RESUMO..................................................................................................

ix

ABSTRACT..............................................................................................

1. INTRODUO....................................................................................

1.1.
1.2.
1.3.
1.4.
1.4.1.
1.4.2.
1.4.3.
1.4.4.
1.4.5.
1.5.
1.5.1.
1.6.
1.6.1.
1.6.2.
1.6.3.
1.6.4.
1.6.5.

HISTRICO DA DOENA DE PARKINSON...........................

SINAIS E SINTOMAS DA DOENA DE PARKINSON............
FISIOPATOLOGIA DA DOENA DE PARKINSON.................
ETIOLOGIA DA DOENA DE PARKINSON............................
Componente gentico...............................................................
Fatores ambientais...................................................................
Excitotoxicidade........................................................................
Neuroinflamao......................................................................
Estresse oxidativo....................................................................
MODELOS ANIMAIS DA DOENA DE PARKINSON.............
Modelo do MPTP.....................................................................
MELATONINA (N-acetil-5-metoxitriptamina)...........................
Caractersticas gerais..............................................................
Sntese e degradao..............................................................
Mecanismo de ao.................................................................
Melatonina na doena de Parkinson........................................
Efeitos da melatonina em outros sistemas biolgicos............

1
2
5
6
6
7
9
11
12
14
15
18
18
19
22
25
27

2. OBJETIVOS..................................................................................

30

2.1.
2.2.

OBJETIVO GERAL.................................................................
OBJETIVOS ESPECFICOS...................................................

30
30

3. MATERIAIS E MTODOS...........................................................

31

3.1.
3.2.
3.3.
3.4.
3.5.
3.5.1.
3.5.2.
3.5.3.
3.6.
3.6.1.
3.7.

31
31
32
32
33
33
34
35
36
36
37

ANIMAIS.................................................................................
DROGAS................................................................................
TRATAMENTO.......................................................................
CIRURGIA ESTEREOTXICA...............................................
AVALIAO MOTORA E COMPORTAMENTAL...................
Teste Campo Aberto...............................................................
Teste Labirinto em Cruz Elevado...........................................
Teste Esquiva Ativa de Duas Vias..........................................
AVALIAO HISTOLGICA..................................................
Imunohistoqumica para tirosina hidroxilase...........................
ANLISE ESTATSTICA.........................................................
v

4. RESULTADOS..............................................................................
4.1.
4.1.1.
4.1.2.
4.2.
4.2.1.
4.3.
4.3.1.
4.4.
4.4.1.
4.4.2.

38

EFEITO DA MELATONINA (50 mg/kg) NA ATIVIDADE GERAL DE

RATOS NO TESTE DO CAMPO ABERTO APS INFUSO
BILATERAL DE MPTP...........................................................
38
Resultados 24 horas............................................................
39
Resultados 7 dias................................................................
39
4.2. EFEITO DA MELATONINA (50 mg/kg) NA ATIVIDADE GERAL
DE RATOS NO TESTE DO LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO APS
INFUSO BILATERAL DE MPTP...........................................
42
Resultados 24 horas e 7 dias..............................................
43
4.3. EFEITO DA MELATONINA (50 mg/kg) NA ATIVIDADE GERAL
DE RATOS NO TESTE DA ESQUIVA ATIVA DE DUAS VIAS APS
INFUSO BILATERAL DE MPTP...........................................
46
Resultados..............................................................................
47
4.4. EFEITO DA MELATONINA (50 mg/kg) NA EXPRESSO DA
ENZIMA TIROSINA HIDROXILASE.......................................
48
Resultados 24 horas............................................................
49
Resultados 7 dias................................................................
49

5. DISCUSSO................................................................................

54

6. CONCLUSO..............................................................................

65

7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS............................................

67

vi

LISTA DE ABREVIATURAS

AMK N-acetil-5-metoxiquinuramina
AANAT serotonina-N-acetiltransferase
COMT - catecol-O-metiltransferase
COX-2 enzima cicloxigenase tipo 2
DAT transportador de dopamina
DP- Doena de Parkinson
GFAP protena glial fibrilar cida
GPx glutationa peroxidase
GSH- glutationa
HNE 4-hidroxi-2,3-nonenal
HIOMT hidroxindol-O-metiltransferase
H2O2 perxido de hidrognio
IDO indolamina-2,3-dioxigenase
IL interleucina
iNOS- enzima xido ntrico sintase induzida
IP - fosfoinositdeos
LPS - lipopolissacardeo
L-dopa L-3,4-diidroxifenilalanina
MAO- B - enzima monoamino oxidase-B
MPP+ - on 1-metil-4-fenilpiridnio
MPTP 1-metil-4-fenil-,1,2,3,6-tetrahidropiridina
MPO enzima mieloperoxidase
NAS N-acetil-serotonina
vii

NMDA N-metil-D-aspartato
NO xido ntrico
NOS- enzima xido ntrico sintase
NOSn- enzima xido ntrico sintase neuronal
OH radical hidroxila
ONOO- - on peroxinitrito
PKA protena quinase A
ROS espcies reativas de oxignio
RNS espcies reativas de nitrognio
SNC - sistema nervoso central
SOD superxido dismutase
SCN ncleo supraquiasmtico
TH enzima tirosina hidroxilase
T5M triptofano-5-monooxigenase
TNF- fator de necrose tumoral-
UCHL-1- ubiquitina hidrolase carboxi terminal L1
UPS - sistema ubiquitina proteossoma
VMAT2 transportador vesicular de monoaminas -2
5-HT - 5-hidroxitriptamina
6-OHDA 6-hidroxidopamina

viii

RESUMO

A doena de Parkinson (DP) consiste em uma sndrome

progressiva caracterizada pela degenerao de neurnios dopaminrgicos da
substncia negra parte compacta. A causa da DP idioptica ainda
desconhecida,

mas

acredita-se

envelhecimento,

fatores

ambientais,

inflamao, excitotoxicidade, fatores genticos e estresse oxidativo possam

estar envolvidos na patognese da doena. A melatonina um poderoso
agente antioxidante secretado pela glndula pineal, com variadas funes
fisiolgicas. Alm de atuar regulando o ritmo circadiano, a melatonina parece
desempenhar efeito neuroprotetor importante. Dentre vrios modelos animais
para estudo da DP, o modelo do 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina
(MPTP) comumente utilizado na compreenso da patofisiologia da doena
devido sua capacidade de produzir caractersticas bioqumicas e histolgicas
semelhantes DP. Neste trabalho, investigou-se o efeito da administrao de
melatonina (50 mg/kg) em animais lesados com MPTP 24 horas e 7 dias aps
a infuso da neurotoxina nos teste do campo aberto, labirinto em cruz elevado
e esquiva ativa de duas vias. Vinte e quatro horas aps a leso, os animais
tratados com MPTP exibiam reduo na atividade motora geral e perda
significativa de clulas imunorreativas tirosina hidroxilase (TH), sendo que os
animais lesados tratados com melatonina no diferiam dos grupos controles em
ambos os parmetros citados. Sete dias aps a cirurgia estereotxica, o grupo
lesado e o tratado com melatonina no demonstraram alteraes motoras em
relao aos controles, porm ainda exibiam significante perda de neurnios
dopaminrgicos. No teste da esquiva ativa, os animais tratados com MPTP
exibiram dficit cognitivo em relao aos controles, sendo que a administrao
de melatonina no produziu alterao neste perfil. Em ambos os tempos, 24
horas e 7 dias aps a leso, os grupos de animais investigados no diferiam
entre si nos parmetros avaliados no modelo de ansiedade utilizando o labirinto
em cruz elevado. Assim, estes resultados provem evidncias do efeito
neuroprotetor da melatonina em modelo animal de parkinsonismo induzido por
MPTP.
ix

1
1. INTRODUO

1.1. Histrico da Doena de Parkinson

A doena de Parkinson (DP) consiste na segunda desordem
neurodegenerativa mais comum depois da doena de Alzheimer (DAUER e
PRZEDBORSKI, 2003) com elevada prevalncia nas ltimas dcadas
(YANAGISAWA, 2006). Conforme LANDRIGAN e colaboradores (2005) ela
afeta mais de 500.000 americanos e 50.000 novos casos aparecem a cada
ano.
Em 1817, o mdico ingls James Parkinson descreveu a DP em
um ensaio que ele denominou de Ensaio da paralisia agitante que mais tarde
recebeu seu nome (MENESES e TEIVE, 2003; LIM, 2005). Lewy, em 1912,
observou incluses citoplasmticas hialinas em neurnios dopaminrgicos de
pacientes com DP, que at os dias de hoje tm seu nome (TAKAHASHI e
WAKABAYASHI, 2005). Em 1930, Hassler descreveu a perda de neurnios nos
ncleos basais de Meynert (MORI, 2005) e ainda em 1938, observou que a
substncia negra e locus coeruleus encontravam-se lesados nesses pacientes
(TAKAHASHI e WAKABAYASHI, 2005).
Conforme LEE MOSLEY e colaboradores (2006) o incio da
doena manifesta-se em mdia aos 55 anos de idade e a sua incidncia
aumenta marcadamente com o envelhecimento (DAUER e PRZEDBORSKI,
2003) e ainda, aproximadamente 1.5 vezes maior no homem que nas
mulheres em todas as idades (ELBAZ et al., 2007).
Existem quatro formas de designao de parkinsonismo: 1)
parkinsonismo primrio (DP idioptica), que a forma mais comum de
parkinsonismo; 2) parkinsonismo secundrio causado por drogas indutoras de

2
parkinsonismo, como por exemplo, antagonistas dopaminrgicos, e psencefalite; 3) parkinsonismo associado a outras desordens neurolgicas como,
por exemplo, paralisia supraventricular progressiva e atrofia de mltiplos
sistemas; 4) desordens neurodegenerativas que apresentam o parkinsonismo
como uma de suas caractersticas, por exemplo, doena de Huntington e
doena de Wilson (FAHN e SULZER, 2004).
A causa da DP idioptica ainda desconhecida, mas acredita-se
que diversos fatores estejam envolvidos, tais como o estresse oxidativo, fatores
genticos, envelhecimento dentre outros (TAKAHASHI e WAKABAYASHI,
2005)..

1.2. Sinais e sintomas da Doena de Parkinson

So observados na DP sintomas conhecidos como sinais
cardinais da doena. Estes sinais resumem-se principalmente em tremores em
repouso, instabilidade postural, bradicinesia e rigidez (PRZEDBORSKI, 2005).
O tremor parkinsoniano o sintoma inicial em cerca de 60-70%
dos pacientes, sendo a caracterstica mais evidente da DP, embora no seja
necessariamente incapacitante, uma vez que pode ser suprimido pela
execuo de movimentos voluntrios (YANAGISAWA, 2006) e reduzido com o
uso de anticolinrgicos.
Pacientes

com

DP

tambm

apresentam

dificuldades

na

programao e execuo de movimentos, e em estgio mais avanado exibem

dificuldade em iniciar movimentos. Da mesma forma, o desempenho desses
pacientes em tarefas que requerem a realizao de movimentos seqenciais e
simultneos prejudicado (KLOCKGETHER, 2004).

3
A rigidez muscular pode ser definida como um aumento da
resistncia da articulao durante um movimento passivo (DAUER e
PRZEDBORSKI, 2003) e frequentemente relatada pelos pacientes como
sensao de dureza e capacidade reduzida de relaxar os msculos dos
membros (KLOCKGETHER, 2004).
A instabilidade postural um sintoma comum da DP e
compromete a capacidade do paciente de manter o equilbrio durante as
tarefas dirias, tais como levantar, andar e curvar-se, aumentando o risco de
quedas do paciente (MORRIS, 2000).
Alm destes sintomas, pacientes com DP apresentam outros
sintomas como ansiedade, depresso, distrbios do sono, fadiga, constipao,
distrbio olfatrio e declnio cognitivo (FAHN e SULZER, 2004; YANAGISAWA,
2006; ZIEMSSEN e REICHMANN, 2007). Segundo alguns autores, estes
sintomas precedem os sintomas motores em muitos pacientes com DP
(SCHRAG, 2006). A hiptese de sintomas, incluindo distrbio olfatrio e
constipao, serem sinais precoces da DP baseia-se primeiramente no achado
de que a funo olfatria encontra-se relacionada funo dopaminrgica
estriatal e que alguns pacientes previamente saudveis que apresentaram
problemas olfatrios desenvolveram a doena, e ainda, segundo estudo
epidemiolgico, a diminuio dos movimentos intestinais aumenta o risco de
desenvolvimento de DP (BRAAK et al., 2003; KLOCKGETHER, 2004).
Desordem de ansiedade consiste em uma alterao do humor de
elevada prevalncia na DP entre 20 - 52% (MERCURY, 2007), e inclui
ansiedade generalizada, pnico e fobia social. Acredita-se que danos no lcus
coeruleus possam contribuir para a prevalncia da ansiedade na DP
(RABINSTEIN e SHULMAN ; 2001).

4
A depresso um dos maiores problemas na DP, visto ser
causado por diferentes fatores biolgicos e exgenos (KLOCKGETHER, 2004).
A depresso na DP inclui anormalidades nas funes serotoninrgicas,
dopaminrgicas e noradrenrgicas, e est associada piora da qualidade de
vida do paciente, alm de constituir-se num fator de risco para prejuzo
cognitivo e demncia (SCHRAG, 2006).
Outro sintoma no motor da DP a demncia e segundo
ZIEMSSEN e REICHMANN (2007) pacientes com DP apresentam de 2-6 vezes
mais probabilidade de desenvolverem este sintoma do que indivduos de
mesma idade. Segundo estes mesmos autores, na DP com demncia comum
a ocorrncia de corpos de Lewy no crtex e reduo de 60-80% no nmero de
neurnios colinrgicos no ncleo basal de Meynert.
A prevalncia de distrbios do sono nos pacientes com DP
elevada e geralmente consiste em insnia noturna, fragmentao do sono e
hipersonolncia durante o dia, e frequentemente ocorrem no mesmo paciente,
piorando a qualidade de vida do paciente (KORCZYN, 2006).
A psicose tambm consiste em uma freqente complicao da
DP, afetando 15-40% dos pacientes (MARSH et al., 2004). Conforme MARSH
e colaboradores (2004) este sintoma dificulta ainda mais o tratamento da DP,
uma vez que a utilizao de frmacos antiparkinsonianos contribui para as
alucinaes, ao passo que frmacos antipsicticos podem agravar o prejuzo
motor e cognitivo destes pacientes.

1.3.

Fisiopatologia da Doena de Parkinson

A DP consiste em uma sndrome progressiva caracterizada pela

degenerao de neurnios dopaminrgicos que apresentam seus corpos

5
celulares na substncia negra parte compacta (SNpc) e projetam seus axnios
em direo ao estriado (LANG e LOZANO, 1998; DUNNET & BJORKLUND,
1999; PRZEDBORSKI, 2005; LANDRIGAN et al., 2005). Acredita-se que a
reduo nos nveis de dopamina estriatais seja a principal responsvel pelos
sintomas da DP (VALKO et al., 2007). A perda destes neurnios que
normalmente so ricos em neuromelanina, resulta em despigmentao da SN
(DAUER e PRZEDBORSKI, 2003).
Microscopicamente, alm da degenerao dopaminrgica e
conseqente reduo nos nveis de dopamina, paciente com DP apresentam
incluses eosinoflicas no citoplasma dos neurnios da SN (substncia negra)
denominadas de corpos de Lewy, em homenagem ao seu descobridor Fredrich
Lewy (CALNE, 2005).
Os corpos de Lewy so estruturas esfricas organizadas em um
ncleo denso de hialina e circundadas por um halo claro, medindo
aproximadamente 15 m de dimetro, compostas de numerosas protenas,
incluindo -sinuclena, parkina, ubiquitina e neurofilamentos (SCHULZ e
FALKENBURGER, 2004).
Estas estruturas no so exclusivas da DP, pelo contrrio,
tambm so encontradas na doena de Alzheimer, na demncia com corpos
de Lewy e como um achado acidental patolgico em pessoas saudveis de
idade

avanada

(DAUER

PRZEDBORSKI,

2003;

SCHULZ

FALKENBURGER, 2004)
O papel dos copos de Lewy na morte neuronal ainda
controverso, mas sabe-se que sua presena no crebro perturba o
funcionamento normal do crebro, interrompendo a ao de importantes

6
mensageiros qumicos como, por exemplo, acetilcolina e dopamina (VALKO et
al., 2007).

1.4. Etiologia da doena de Parkinson

A causa da DP ainda desconhecida, mas postula-se que
diversos fatores estejam relacionados gnese da doena, incluindo
alteraes genticas, fatores ambientais, excitotoxicidade, neuroinflamao e
estresse oxidativo (PRZEDBORSKI, 2005).

1.4.1.Componente gentico
Alguns estudos tm mostrado que algumas famlias as desordens
neurodegenerativas so devidas s mutaes em genes que resultam ento,
numa agregao protica anormal (ELBAZ et al., 2007).
Embora a maioria dos casos de DP seja espordica, a
identificao de algumas formas de DP familiar, tanto autossmica dominante
como recessiva (SUTHERLAND et al., 2007) despertou o interesse para o
envolvimento gentico na patognese da DP (THOMAS et al., 2007). Cerca de
aproximadamente 10-15% dos casos de DP apresentam histria familiar
positiva para a doena (TANNER et al., 1999; ELBAZ et al., 2007).
At o presente tempo, j foram identificados 13 lcus e mutaes
em 7 genes, dentre eles, -sinuclena, parkina, ubiquitina hidrolase carboxi
terminal L1 (UCH-L1), PINK1, DJ1, LRRK2 e Omi (ELBAZ et al., 2007).
A partir da descoberta que alguns casos de DP familiar
encontram-se relacionados mutao no gene codificador da -sinuclena,
uma protena pr-sinptica formada de 140 aminocidos, numerosos estudos
demonstram que esta protena pode desempenhar papel importante na

7
patognese da DP, j que esta o principal constituinte dos corpos de Lewy
(MOORE et al., 2005; NAKAI et al., 2007).
De acordo com SCHULZ e FALKENBURGER (2004) mutaes
no gene da -sinuclena favorecem a agregao de -sinuclena e podem
promover a formao de corpos de Lewy.

Conforme citado por VALKO e

colaboradores (2007), recentemente foram identificados mutaes no gene sinuclena que podem levar DP gentica.
Mutaes no lcus PARK1 levam identificao de agregaes
de -sinuclena na DP, enquanto mutaes no lcus PARK2 causam
deficincia na protena parkina e degenerao nigroestriatal predominante sem
corpos de Lewy (CALNE, 2005).
A forma mais comum de DP autossmica recessiva devida a
mutaes no gene PARK2, que codifica a protena parkina, uma protena
ubiquitina ligase E3 (SUTHERLAND et al., 2007). Mutaes neste gene
resultam em degenerao ao passo que a superexpresso impede a
neurodegenerao associada disfuno do sistema ubiquitina-proteossoma
(KALIA et al., 2004). Alm disso, mutaes neste gene podem ser
responsveis por aproximadamente 70% de parkinsonismo juvenil (com incio
antes dos 20 anos) e 50% dos casos de DP familiar de incio precoce (antes
dos 45 anos) (SUTHERLAND et al., 2007).
De acordo com alguns autores, fatores no-genticos, como por
exemplo, exposio a agentes txicos ambientais (pesticidas e metais),
estariam envolvidos tanto quanto fatores genticos na gnese da DP e que at
mesmo esses fatores ambientais seriam antecedentes hereditariedade na
etiologia DP (COLLINS e NEAFSEY, 2002).

8
1.5.1. Fatores ambientais
Aps a descoberta de que pessoas intoxicadas por MPTP (1metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina), desenvolviam uma sndrome idntica
DP, numerosos estudos foram conduzidos buscando confirmar a hiptese de
que a neurodegenerao na DP resulta da exposio crnica a neurotoxinas
dopaminrgicas

(DAUER

PRZEDBORSKI,

2003).

Assim

numerosas

evidncias surgiram indicando que fatores ambientais estariam envolvidos na

patognese da DP (GUILARTE et al., 2006).
O paraquat (1-1-dimetil-4,4-biperidnio) estruturalmente muito
semelhante ao MPP+ (1-metil-4-fenilpiridnio), metablito ativo do MPTP, e
importante herbicida (DAUER e PRZEDBORSKI, 2003; LANDRIGAN et al.,
2005). Conforme KUTER e colaboradores (2007) a administrao sub-crnica
de paraquat produziu degenerao de neurnios dopaminrgicos e ativou
mecanismos compensatrios envolvendo as transmisses dopaminrgica,
noradrenrgica, serotoninrgica e GABArgica.
Vrias outras toxinas ambientais de uso na agricultura podem ser
fatores de risco na DP, como o caso do pesticida rotenona. Sabe-se que a
exposio crnica, contnua e sistmica a este agente txico seletivamente
inibe o complexo I da cadeia respiratria mitocondrial, causando seletiva
degenerao dopaminrgica com acmulo de incluses citoplasmticas ricas
em ubiquitina e -sinuclena (LOGROSCINO, 2005). Alm desta disso, a
rotenona foi capaz de induzir sinais de parkinsonismo em ratos de laboratrio
(LANDRIGAN et al., 2005).
Alm dessas toxinas, sabe-se que a exposio crnica a
elevados nveis de mangans podem levar ao acmulo deste metal nos

9
gnglios da base, resultando no chamado manganismo, que produz sintomas
como tremores, rigidez e psicose (LANDRIGAN et al., 2005).
Segundo alguns autores, certos pesticidas e metais induzem
alteraes conformacionais na -sinuclena (UVERSKY et

al., 2002),

aumentando as agregaes de -sinucleina (GOLTS et al., 2002). Isto pode ser

de grande importncia ao considerar que alguns estudos tm sugerido que sinuclena pode ser uma protena chave na fisiopatologia da DP, uma vez que
mutaes nesta protena podem levar ao incio precoce da doena
(PANKRATZ e FOROUND, 2004).

1.5.2. Excitotoxicidade
O termo "excitotoxicidade" surgiu com Olney em 1978, quando
documentou que a toxicidade do glutamato era devida sua interao com
receptores que mediavam o efeito excitatrio nos neurnios (DOBLE, 1999).
Atualmente, tem-se estimado que a excitotoxicidade neuronal possa ser um
importante processo na morte celular progressiva na DP (DICKIE et al., 1996).
Conforme EMERIT et al. (2004), a excitotoxicidade e apoptose
so as duas principais causas de morte celular, e em ambos os processos
encontram-se envolvidas espcies reativas de oxignio (ROS) e espcies
reativas de nitrognio (RNS).
Os nveis de clcio na clula so regulados por canais de clcio
voltagem-dependente e receptores ionotrpicos (NMDA) (MICHALUK, 2002),
mantendo o gradiente diferencial entre a superfcie interna e externa.
O clcio intracelular desempenha diversas e importantes funes
fisiolgicas, contudo, quando em grande quantidade, este on causa

10
hiperestimulao das atividades normais e morte neuronal (EMERIT et al.,
2004).
O excesso de clcio intracelular pode ocasionar a ativao de
diversas protenas, como proteases (ex.: protease citoslica- calpana - ativada
por clcio que leva destruio do citoesqueleto) (DOBLE, 1999), protena
quinase C, fosfatases, fosfolipases (ex.: fosfolipase A2 que ataca a membrana
celular e organelas), xido ntrico sintase neuronal (NOSn), xantina oxidase, e
produo de radicais livres (EMERIT et al., 2004).
Os radicais livres produzidos como conseqncia da ativao de
enzimas clcio dependentes, como a fosfolipase A2, xido ntrico sintase
(NOS), xantina peroxidase e disfuno mitocondrial cooperam em muito para a
morte celular (DOBLE, 1999). Conforme este autor, a hipxia pode estimular a
liberao de cido glutmico que, atravs de receptores NMDA, mata a clula
por excitotoxicidade, uma vez que dados obtidos in vitro demonstram que a
morte celular das culturas celulares submetidas hipxia pode ser bloqueada
pelo aumento das concentraes de magnsio no meio extracelular,
antagonistas de receptores NMDA ou drogas que inibem a liberao de
glutamato (riluzol).
Diversas evidncias sugerem que a excitotoxicidade mediada por
glutamato, neurotransmissor excitatrio, pode ser um importante fator na
patognese da DP, uma vez que antagonistas de glutamato, como por
exemplo, a amantadina parecem ser antiparkinsonianos (KOLLER, 1997).
Sabe-se que em condies normais, a neurotransmisso
glutamatrgica delicadamente controlada como um mecanismo de proteo
contra a excitotoxicidade, uma vez que a excessiva ativao de receptores de
glutamato em vrias desordens neurodegenerativas pode levar injria e

11
morte neuronal por excessivo influxo de clcio (EMERIT et al., 2004). Segundo
estes mesmos autores, a concentrao de glutamato nos neurnios
glutamatrgicos menor no meio extracelular (aproximadamente 0,6 mmol/l)
em comparao com o intracelular (aproximadamente 10 mmol/l). Quando os
nveis de glutamato extracelular aumentam ocorre dano neuronal.

1.5.3. Neuroinflamao
Numerosos estudos tm demonstrado que o estresse oxidativo,
disfuno mitocondrial, defeito no sistema ubiquitina-proteossoma (UPS) e
inflamao so importantes processos envolvidos no desenvolvimento e
progresso da DP (ASANUMA et al., 2004).
A resposta imune local no crebro no envolve o sistema imune
perifrico, ocorrendo desta forma, sem a participao de anticorpos e clulas.
Ao invs disso, depende da sntese de componente inflamatrio pelos
neurnios, glia e micrglia (McGEER e McGEER, 2004).
Conforme citado por FAHN e SULZER (2004) clulas da glia e
micrglia, a partir de um insulto txico, poderiam produzir substncias nocivas
clula, tais como citocinas pr-inflamatrias, prostaglandinas e espcies
reativas ao oxignio (ROS) e ao nitrognio (RNS).
De acordo com McGEER e McGEER (2004) a ativao microglial
pode resultar em aumento da produo de nions superxidos e outras
neurotoxinas e, como j demonstrado in vitro, tal efeito pode contribuir para
processos neurotxicos, incluindo dano s clulas dopaminrgicas (HIRSCH et
al., 2005). Ainda, a ativao microglial induzida por lipopolissacardeo (LPS)
pode causar upregulation da enzima cicloxigenase-2 (COX-2) e desta forma,
aumentar a sntese de prostaglandinas que podem ativar diretamente caspase-

12
3 ou indiretamente liberar glutamato levando a excitotoxicidade (HALD e
LOTHARIUS, 2005). Corroborando tais evidncias, foram relatadas na DP
aumento no nmero de clulas microgliais ativadas (HIRSCH et al., 2005).
Sabe-se que a injeo intracerebral de LPS pode induzir a
expresso de citocinas inflamatrias e suas respectivas molculas, por
exemplo, interleucina (IL)-1, IL-6, IL-12, fator de necrose tumoral (TNF-) e
xido ntrico sintase induzida (iNOS). Mais ainda, a injeo intranigral de LPS
pode induzir a degenerao dopaminrgica em ratos (ASANUMA et al., 2004).
Conforme

HALD

LOTHARIUS

(2005),

citocinas

pr-

inflamatrias como TNF- e IL-1 podem desencadear toxicidade neuronal e

ainda, podem potenciar a reposta inflamatria inicial pelo aumento da produo
de NO microglial.
O envolvimento de processos inflamatrios na DP foi reforado
por alguns achados, como a descoberta de macrfagos derivado de micrglia
na substncia negra de pacientes com DP e que a inibio (ou atenuao) da
resposta imune microglial aumentava a sobrevivncia neuronal em modelos
animais da 6-hidroxidopamina (6-OHDA) e MPTP (CROISIER et al., 2005).
Corroborando com a hiptese do envolvimento do processo
inflamatrio na DP, vrios investigadores encontraram nveis elevados e
citocinas, tais como TNF-, IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, dentre outras no fludo
cerebroespinhal de pacientes com DP (HIRSCH et al., 2005).

1.5.4. Estresse oxidativo

Atualmente, acredita-se que a produo de ROS e RNS no
crebro desempenhe um importante papel na defesa inespecfica deste rgo.
Contudo, quando ativado inadequadamente, este processo pode levar perda

13
de neurnios devido alta susceptibilidade destas clulas ao dano oxidativo
(ISCHIOPOULOS e BECKMAN, 2003).
As ROS e RNS so normalmente produzidos pelo metabolismo
celular e acredita-se que ambas desempenhem um papel dual no organismo,
ora como espcies benficas e ora como espcies nocivas ao organismo. Em
concentraes baixas e moderadas, essas espcies defenderiam o organismo
contra agentes infecciosos e estariam envolvidas em diversos sistemas de
sinalizao celular. J em nveis elevados, essas espcies produziriam dano
celular conhecido como estresse oxidativo (VALKO et al., 2007).
A partir do momento em que a produo de espcies reativas
excede

capacidade

de

remoo

pelos

antioxidantes

endgenos,

componentes biolgicos como DNA, lipdeos, protenas e outras molculas

sofrem alteraes oxidativas por esses oxidantes resultando em alterao
celular e muitas vezes, morte da clula (ISCHIOPOULOS e BECKMAN, 2003).
SCHAPIRA e colaboradores (1989) relataram pela primeira vez
que pacientes com doena de Parkinson apresentavam a atividade do
complexo I da cadeia transportadora de eltrons mitocondrial reduzida na
substncia negra. O possvel envolvimento do complexo I mitocondrial na
patognese da DP foi intensificado com a comprovao de que a neurotoxina
MPTP capaz de produzir sinais caractersticos da doena em animais.
Quando administrada convertida ao on MPP+ que se acumula no interior das
mitocndrias e inibe o complexo I da cadeia transportadora de eltrons,
resultando na menor produo de ATP, aumento da concentrao de clcio e
produo aumentada de radicais livres (WATANABE et al., 2005). Conforme
citado por WEISSMAN e colaboradores (2007), animais tratados com inibidores

14
do complexo I mitocondrial, que como dito anteriormente reduzem a produo
de ATP e aumentam a produo de ROS, desenvolvem parkinsonismo.
Sabe-se que a degradao espontnea do neurotransmissor
dopamina resulta na produo de radicais superxido, perxido de hidrognio,
radical hidroxila e quinonas reativas, que so potencialmente txicos para os
neurnios (ASANUMA et al., 2004; MICHALUK, 2002).

Essas espcies

reativas poderiam atacar facilmente o DNA mitocondrial, por ser este

desprovido de histonas protetoras, resultando em alterao desta estrutura
(ZHANG et al., 1999).

1.6.

Modelos animais da doena de Parkinson

Existem diversos modelos animais para o estudo da DP, dentre

eles esto o modelo da 6-OHDA, MPTP, rotenona, paraquat, LPS e reserpina
(LEE MOSLEY et al., 2006). Esses modelos animais so bastante importantes
para o desenvolvimento de novos agentes antiparkinsonianos, mas tambm
como ferramenta na elucidao da patognese da DP (JENNER, 2003).
O modelo animal da reserpina bastante til no estudo da DP por
causar depleo de monoaminas, entretanto, a principal desvantagem deste
modelo que o dficit motor produzido temporrio e no resulta em dano do
trato nigroestriatal como ocorre na DP idioptica. J a injeo unilateral de 6OHDA resulta em perda de neurnios dopaminrgicos como na DP, entretanto
a principal limitao deste modelo que o comportamento rotacional produzido
no observado na DP (JENNER, 2003).
Animais expostos rotenona, potente membro dos rotenides
(SARAVANAN et al., 2005), apresentam caractersticas clnicas e patolgicas
muito semelhantes quelas da DP (NEWHOUSE et al., 2004), como

degenerao

dopaminrgica

nigroestriatal,

incluses

positivas

15
para -

sinuclena e ubiquitina e dficit motor (SHERER et al., 2003).

1.6.1. Modelo do MPTP

O MPTP uma neurotoxina que foi descoberta depois da induo
de sndrome parkinsoniana irreversvel em dependentes aps a injeo desta
neurotoxina como um contaminante da sntese ilcita de 1-metil-4-fenil-4propionoxipiperidina (MPPP), um anlogo do narctico meperidina (DAUER e
PRZEDBORSKI, 2003; LEE MOSLEY et al., 2006).
O MPTP capaz de produzir mudanas clnicas, bioqumicas e
neuropatolgicas semelhantes a que ocorre na DP idioptica (SCHULZ e
FALKENBURGER, 2004), embora raramente ocasione a formao de corpos
de Lewy (NEWHOUSE et al., 2004). Devido esta similaridade bioqumica e
histolgica com a DP o modelo do MPTP tem sido muito importante para a
compreenso da fisiopatologia da DP (JENNER, 2003).
Essa

neurotoxina

bem

conhecida

por

produzir

morte

relativamente seletiva dos neurnios dopaminrgicos da substncia negra, com

conseqente diminuio nos nveis de dopamina no estriado, como ocorre na
DP (WATANABE et al., 2005), entretanto, o MPTP tambm causa perda dos
neurotransmissores noradrenalina e serotonina no locus coeruleus e no ncleo
da Rafe, respectivamente (MARIEN, et al., 2004).
O MPTP altamente lipoflico e uma vez administrado ao animal,
atravessa

facilmente

barreira

hematoenceflica,

sendo

convertido

rapidamente nas clulas gliais MPP+, radical livre altamente neurotxico

(JENNER, 2003). O efeito neurotxico do MPTP baseia-se na produo de seu

16
metablito,

on

1-metil-4-fenilpiridnio

(MPP+)

pela

enzima

monoaminooxidase-B (MAO-B) nas clulas gliais. Esse on devido elevada

afinidade pelos transportadores de dopamina (DAT) acumula-se no interior das
mitocndrias dos neurnios dopaminrgicos. Dentro destas estruturas, o on
MPP+ inibe o complexo I da cadeia transportadora de eltrons, que consome
aproximadamente 100% do oxignio molecular (SCHULZ e FALKENBURGER,
2004), resultando na menor produo de ATP, aumento da concentrao de
clcio intracelular e produo aumentada de radicais livres (WATANABE et al.,
2005).
A inibio do complexo I e a produo de superxido so
responsveis pela toxicidade do MPTP. Tal fato pode ser evidenciado em
camundongos transgnicos, que por superexpressarem a enzima superxido
dismutase (SOD Cu/Zn), a principal enzima inativadora de superxido,
mostraram-se resistentes toxicidade pelo MPTP. Enquanto que animais
portadores de uma deficincia parcial na enzima SOD mangans ou animais
Knock-out para enzima glutationa peroxidase, so mais suscetveis referida
toxina (SCHULZ e FALKENBURGER, 2004).
Alm do estresse oxidativo mitocondrial e deficincia energtica
causada pelo MPP+, esta substncia ainda liga-se ao transportador vesicular
de monoaminas (VMAT2) e transportado para dentro da vescula, expulsando
desta o neurotransmissor dopamina. O acmulo de dopamina no citosol da
clula pode predominantemente sofrer autoxidao e produzir ainda mais
espcies

reativas

ao

(PRZEDBORSKI, 2005).

oxignio

(ROS),

como

radicais

superxidos

17
Ainda, o excesso de dopamina citoslica pode sofrer ao de
enzimas, como a COX-2, presente nos neurnios dopaminrgicos da
substncia negra, e gerar a formao de dopamina quinona. Tambm, esse
aumento de dopamina no citosol neuronal pode aumentar a formao de
neuromelanina, implicando em um importante aumento na susceptibilidade
morte neuronal. Essa hiptese da neuromelanina contribuir para a morte
neuronal creditada pela possibilidade destes pigmentos atuarem como
reservatrios txicos intraneuronais, pela ligao transitria com metais, como
ferro e vrios radicais livres como MPP+ (PRZEDBORSKI, 2005; DAUER e
PRZEDBORSKI, 2003).
Segundo

PRZEDBORSKI

(2005),

morte

dopaminrgica

neuronal pela administrao de MPTP precedida pelo estresse oxidativo e

dficit de energia, e que estes processos no so os principais responsveis
pela morte neuronal, apesar de causarem a injria inicial. Na verdade, esses
processos atuam provocando a injria inicial e ativando vias moleculares que
levam morte da clula, que executaro a morte da clula. Entre estes esto
quinases dependentes de ciclina e vrios componentes da maquinaria
apopttica. Desta forma, embora esses fatores no se encontrem capazes de
iniciar a leso, atuariam amplificando a neurodegenerao e auxiliando na
progresso crnica da doena.
O DAT uma protena transportadora de dopamina dependente
de sdio e cloreto responsvel pela recaptao e liberao de dopamina das
terminaes nervosas pr-sinpticas dos axnios terminais no estriado e
dendritos na substncia negra. Essa protena consiste em um timo marcador
de

neurnios

dopaminrgicos

(WATANABE

et

al.,

2005).

Devido

neurotoxicidade do MPTP e 6-hidroxidopamina serem dependentes de sua

18
elevada afinidade por este transportador (ALAM e SCHMIDT, 2004), pode-se
supor que esta protena tenha um papel chave na doena de Parkinson
(WATANABE et al., 2005). Estes autores propem que bloqueadores
especficos da ativao glial e inibidores da afinidade elevada ao DAT podem
ser novas estratgias teraputicas na DP.

1.7. Melatonina (N-acetil-5-metoxitriptamina)

1.7.1. Caractersticas gerais

A melatonina um neurohormnio pertencente ao grupo das
indolaminas. Os grupos funcionais presentes so demasiadamente importantes
na ligao ao receptor e para sua oxidao qumica (HARDELAND et al.,
2006). Esta substncia atravessa facilmente a barreira hematoenceflica
(BHE), sendo detectado no fludo crebro-espinhal, saliva e leite (KENNAWAY,
2000).
sintetizada principalmente na glndula pineal, mas pequena
quantidade de melatonina produzida na retina, osso, pele, intestino,
plaquetas e bile (CLAUSTRAT et al., 2005). Este neurohormnio encontra-se
presente em todos os vertebrados e tambm em tecidos vegetais (PUERTA et
al., 2007). Conforme CLAUSTRAT e colaboradores (2005) os nveis desta
substncia nas folhas, sementes e frutos so baixos, entretanto consistem em
uma importante fonte de suplemento de melatonina.
Em indivduos adultos, os nveis circulantes de melatonina so
extremamente baixos (< 20 pmol/L). Esses nveis aumentam aproximadamente
s 21:00 h, com pico mximo s 03:00 h e retornam a nveis menores
aproximadamente s

09:00h (KENNAWAY, 2000). Como no ocorre

19
armazenamento de melatonina na glndula pineal, o perfil deste hormnio no
plasma reflete confiavelmente a atividade da glndula pineal (CLAUSTRAT et
al., 2005).

Figura 1. Estrutura qumica da melatonina. Retirado de AKKAS et

al. (2007).

1.7.2. Sntese e Degradao

A melatonina ritmicamente secretada pela glndula pineal e
produzida a partir do aminocido triptofano (SUMAYA et al., 2004). A estrutura
cerebral envolvida no controle da produo e secreo de melatonina o
ncleo supraquiasmtico (SCN), localizado no hipotlamo anterior. Esta
estrutura naturalmente rtmica, com um perodo que encerra s 24 horas. A
ritmicidade do SCN garantida pela sincronia com o ciclo solar atravs de
projees oriundas da retina (fibras retino-hipotalmica), informando a ausncia
ou presena de luz (KENNAWAY, 2000). Na presena de luz, a sntese de
melatonina inibida, entretanto durante a noite sua produo estimulada
(HARDELAND et al, 2006).
A

sntese

de

melatonina

inicia-se

com

ligao

do

neurotransmissor noradrenalina em receptores 1 e 1 - adrenrgicos,

resultando na ativao de adenilato ciclase e consequentemente no aumento
de AMPc (CLAUSTRAT et al., 2005). Este segundo mensageiro por sua vez,

20
pode mediar a fosforilao da enzima serotonina-N-acetiltransferase (AANAT),
aumentando a atividade da enzima e ainda, ativar um repressor da transcrio
de gene induzido por AMPc, que um elemento modulador responsivo a este
segundo mensageiro que tem por finalidade limitar a produo de melatonina
durante a noite (CLAUSTRAT et al., 2005; HARDELAND et al., 2006).
O aminocido triptofano, pela ao da enzima triptofano 5
monooxigenase (T5M), convertido em 5-hidroxitriptofano. A partir do 5hidroxitriptofano pela ao da enzima aromtica aminocido descarboxilase
(AAAD), ocorre a sntese de 5-hidroxitriptamina (5-HT), que em seguida
convertida em N-acetilserotonina pela enzima serotonina-N-acetiltransferase
(AANAT), que a enzima passo limitante da sntese de melatonina na glndula
pineal, local onde esta enzima expressa. O passo final do processo de
sntese

da

melatonina

ocorre

pela

ao

da

enzima

hidroxindol-O-

metiltransferase (HIOMT) resultando na formao de melatonina (BOUTIN et

al., 2005; HARDEAND et al., 2006) (ver Fig. 2). Certa quantidade de
melatonina produzida excretada de forma inalterada, outra parte eliminada
atravs de uma via clssica de hidroxilao envolvendo enzimas do citocromo
P450 1A2, que catalisa a formao de 6-hidroximelatonina que ento sofre
conjugao com cido glicurnico ou sulfato, gerando um composto mais
habilitado a excreo. Uma via alternativa a estes processos consiste na
abertura do ncleo indol durante o processo de oxidao pela enzima
indolamina-2,3-dioxigenase (IDO) e/ou pela mieloperoxidase (MPO) levando a
produo de N-acetil-5-metoxiquinuramina (AMK) (BOUTIN et al., 2005). A
importncia deste metablito ativo da melatonina ainda pouco conhecida,
mas acredita-se que ele possa estar envolvido em muitos dos efeitos desse
hormnio (BOUTIN et al., 2005).

21
Triptofano
T5M
5-hidroxitriptofano
AAAD
5-hidroxitriptamina
AANAT
N-acetilserotonina
HIOMT
IDO/MPO
AMK

Melatonina
CIP450

Melatonina

6-hidroximelatonina

Figura 2. Via de sntese e metabolismo da melatonina. A melatonina

sintetizada a partir do aminocido triptofano pela ao da enzima triptofano 5
monooxigenase (T5M) gerando 5-hidroxitriptofano. Este pela ao das enzimas
aromtica aminocido descarboxilase (AAAD), serotonina-N-acetiltransferase
(AANAT) e hidroxindol-O-metiltransferase (HIOMT), sequencialmente, resulta
na produo de melatonina. O catabolismo da melatonina pode ocorrer via
enzimas do citocromo P450 1A2 ou alternativamente, pela ao das enzimas
indolamina-2,3-dioxigenase (IDO) e/ou pela mieloperoxidase (MPO) levando a
produo de N-acetil-5-metoxiquinuramina (AMK). Ainda, uma poro de
melatonina excretada na forma inalterada. Adaptado de BOUTIN et al.
(2005).

22
1.7.3. Mecanismo de ao

Uma vez liberada a melatonina transmite informao sobre o

fotoperodo para os tecidos centrais e perifricos que expressam stios para a
ligao da melatonina e parece exercer importantes funes no organismo
(BOUTIN et al., 2005).
Alguns stios para a ligao da melatonina j forma identificados:
receptores acoplados protena G (MT1 e MT2) e a enzima quinona redutase 2
(QR2/MT3), que est envolvida nos processos de toxificao e detoxificao
(BOUTIN et al., 2005; WITT-ENDERLY et al., 2003). Alm desses alvos, a
melatonina pode regular a expresso de genes atuando em receptores
nucleares, interagir com protenas celulares, tais como calmodulina ou protenas
associadas tubulina, e ainda pode, diretamente, seqestrar espcies reativas
de oxignio e espcies reativas de nitrognio (HORSTMAN et al., 2002;
CLAUSTRAT et al., 2005).
O receptor MT1 (MT1R) encontrado em vrios tecidos, como
ncleo supraquiasmtico (SCN) e vasos cardacos, alm de outras regies
cerebrais e tecidos perifricos, e esta envolvido na modulao do ritmo
circadiano e constrio de vasos cardacos. Essa vasta distribuio deste
receptor pode ser um fator que contribua para a diversidade de respostas
geradas pela melatonina (WITT-ENDERLY et al., 2003). Alm disso, MT1R
formado de 350 aminocidos (ALARMA-ESTRANY e PINTOR, 2007) e se liga
diversas protenas G (CLAUSTRAT et al., 2005), incluindo Gi2, Gi3, Gq, Gs,
G16 (WITT-ENDERLY et al., 2003) que mediam a ativao de fosfolipase C
(PLC-) e inibio da enzima adenilato ciclase, resultando em resposta inibitria
sobre a cascata de sinalizao mediada pelo AMPc, diminuindo a atividade de

23
protena quinase A (PKA) e a fosforilao de CREB (elemento de ligao
responsivo ao AMPc) (CLAUSTRAT et al., 2005; WITT-ENDERLY et al., 2003).
O receptor MT2 (MT2R) constitudo de 362 aminocidos
(ALARMA-ESTRANY e PINTOR, 2007) e est presente no cerebelo, SCN,
retina, rim, ovrio, vasos cardacos e vrias clulas cancerosas, e encontra-se
envolvido na fisiologia da retina, modulao do ritmo circadiano, dilatao de
vasos cardacos e resposta inflamatria na microcirculao (WITT-ENDERLY et
al., 2003). Este receptor est relacionado inibio da enzima adenilato ciclase
e guanilato ciclase, inibindo a formao de AMPc e GMPc, repectivamente, e
hidrlise de fosfoinositdeos (IP) (BOUTIN et al., 2005).
De acordo com HARDELAND e colaboradores (2006) ambos
receptores (MT1R e MT2R) esto envolvidos no feedback do SCN, sendo que o
MT1R causa supresso da estimulao neuronal, enquanto MT2R mostra-se
necessrio para o ritmo circadiano. Polimorfismo dos receptores MT1 e MT2 foi
detectado em humanos e pode estar relacionado a distrbios do sono
(CLAUSTRAT et al., 2005).
Estes

dois

receptores

MT1R

MT2R

apresentam

aproximadamente 60% de homologia e localizaes cromossmicas diferentes,

sendo que o gene do MT1R encontra-se na posio 4q35-1 e o do MT2R
posiciona-se em 11q21-22 (ALARMA-ESTRANY e PINTOR, 2007).
O receptor MT3 (quinona redutase 2 - QR2) foi identificado em
vrios rgos, como crebro, rim, fgado, corao, tecido adiposo marrom,
msculo esqueltico, pulmo e bao (WITT-ENDERLY et al., 2003). Este
receptor no pertence famlia dos receptores acoplados a protena G
(IUVONE et al., 2005). QR2 uma enzima pertencente ao grupo das quinonas
redutases e est envolvida no processo de detoxificao do organismo

24
(BOUTIN et al., 2005; ALARMA-ESTRANY e PINTOR, 2007). Acredita-se que
estes receptores tambm estejam envolvidos no efeito antioxidante da
melatonina (HARDELAND et al., 2006). Conforme citado por BONDY e
SHARMAN (2007) a inibio de QR2 mediada pela melatonina em altas doses
poderia resultar na inibio da atividade (possivelmente txica), similarmente
ao resveratrol, de MT3R e assim num fator protetor para o organismo.
De acordo ALARMA-ESTRANY e PINTOR (2007) dependendo
do tecido, rgo e espcie, a melatonina pode ativar diferentes cascatas de
segundos mensageiros e em alguns casos, pode regular positiva ou
negativamente a mesma via de transduo de sinal.
Muitos dos efeitos produzidos pela melatonina ainda no tm
seu mecanismo farmacolgico elucidado. Assim, devido s caractersticas
estruturais deste neurohormnio acredita-se que a melatonina, da mesma
forma que outros hormnios endgenos, seja um ligante natural de receptores
nucleares, como RZR/ROR, e que esta interao resulte nos efeitos
imunomodulatrios da melatonina (CLAUSTRAT et al., 2005).
Alm dos mecanismos citados acima, a melatonina tambm
exibe um efeito antioxidante direto e indireto (CLAUSTRAT et al., 2005).
Diretamente, a melatonina interage com vrias espcies reativas ao oxignio e
nitrognio, bem como radicais orgnicos, prevenindo dano ao DNA, protenas e
lipdios de membrana por radicais livres (CUI et al., 2004). Indiretamente, este
neurohormnio produz ao antioxidante por atenuar a produo de radicais
livres atravs de efeitos antiinflamatrios, antiexcitatrios e por causar
downregulation de enzimas pr-oxidantes (NO sintase e lipoxigenase), alm de
aumentar as defesas antioxidantes por upregulation de enzimas antioxidantes
(glutationa peroxidase, glutationa redutase, glucose 6-fosfato desidrogenase e

25
algumas vezes, catalase e Cu-, Zn-,Mn-superxido dismutase) (HARDELAND
et al., 2006; CLAUSTRAT et al., 2005).
Ainda, acredita-se que as aes antiinflamatrias da melatonina
so decorrentes da formao do metablito AMK, capaz de causar inibio e
downregulation da cicloxigenase do tipo 2 (COX-2) (HARDELAND et al., 2006).

1.7.4. Melatonina na doena de Parkinson

Na DP, processos como a neuroinflamao e estresse oxidativo
parecem estar significativamente envolvidos na patognese desta doena. A
ativao microglial, disfuno mitocondrial e a produo aumentada de
espcies reativas contribuem para a disfuno neuronal por dano oxidativo
molcula de DNA, protenas e lipdeos, ocasionando injria neuronal e
conseqente morte celular (LEE MOSLEY et al, 2006).
Algumas toxinas teis no desenvolvimento de modelos animais
para o estudo da DP, como MPTP, rotenona ou 6-OHDA, produzem dano
neuronal atravs de disfuno mitocondrial e estresse oxidativo que por sua
vez, pode ser inibido por agentes antioxidantes e restauradores da cadeia
transportadora de eltrons (AGUIAR et al., 2005; LEON et al., 2004; SHARMA
et al., 2006).
Conforme CUI e colaboradores (2004) mutaes no DNA
mitocondrial (DNAmt) resultam em disfuno desta estrutura, com conseqente
aumento na liberao de ROS pela mitocndria e falha energtica (diminuio
de ATP) que ento pode ocasionar diminuio das defesas antioxidantes,
deteriorao do potencial de membrana nos neurnios e desequilbrio na
homeostasia do clcio, o que pode contribuir para a morte neuronal por
excitotoxicidade. Desta forma, essas evidncias acabam por suportar a

26
hiptese do envolvimento do estresse oxidativo, excitotoxicidade e disfuno
mitocondrial na patognese da DP.
Baseado nessas evidncias, a melatonina parece exercer efeito
neuroprotetor por aumentar a atividade do complexo I mitocondrial (LEON et al,
2004; KHALDY et al, 2003), restaurando os nveis energticos da clula, bem
como diretamente seqestrar espcies reativas como radicais hidroxila (OH),
xido ntrico (NO) e peroxinitrito (ONOO-), impedindo o dano celular induzido
por essas substncias (LEON et al, 2004). Alm disso, o efeito neuroprotetor
deste neurohormnio pode resultar da atenuao do processo inflamatrio por
inibio e downregulation da enzima cicloxigenase tipo 2 (COX-2) (HARDEAND
et al, 2006) e mais, por diminuir a induo de fosforilao da via c-Jun-Nterminal quinase (JNK), importante via apopttica (CHETSAWANG et al., 2004)
(ver Fig. 3).
A importncia da melatonina na funo neuronal reforada por
alguns autores que relatam que com o envelhecimento ocorrem alteraes
como aumento na calcificao da glndula pineal e diminuio na secreo de
melatonina e que tais fatos estariam relacionados a vrias desordens
psiquitricas (WILLIS, 2005; CUI et al., 2004).
Desta forma, tm-se sugerido que a melatonina apresente um
possvel efeito protetor contra a degenerao neuronal (CHETSAWANG et al.,
2004).

27

Agregao de protenas

Toxinas ambientais
(MPTP)

Melatonina

Agentes infecciosos
O
COX-2

Complexo I

Enzimas pr-apoptticas

SOD

iNOS

Fe
H O
NO

ONOO-

NO

++

Fe

+++

RNS

PGE2
IL-1

dano DNA,
protenas
lipdios

ROS

OH + OH

2 2

PGE2

Depleo de ATP

Melatonina
COX-2
Citocinas inflamatrias
Bax; p53

NF-B

IFN-

Morte neuronal

TNF-
Micrglia

Neurnio

Figura 3. A figura ilustra o envolvimento da neuroinflamao e estresse oxidativo

na patognese da doena de Parkinson e aponta os possveis alvos de ao da
melatonina, como o seqestro de espcies reativas, efeitos antiinflamatrios e
ainda, efeito restaurador da atividade mitocondrial. Adaptado de LEE MOSLEY et
al, 2006.

1.7.5. Efeitos da Melatonina em outros sistemas biolgicos

Este

neurohormnio

exibe

diversas

propriedades,

como

imunomodulatria (controlando a ativao de clulas T, B, NK, liberao de

citocinas) e propriedade antiinflamatria que est relacionada inibio de
PGE2 e downregulation da enzima COX-2 (HARDELAND et al., 2006).
Alm

destes

efeitos

melatonina

possui

atividade

anticonvulsivante (YILDIRIM e MARANGOZ, 2006) e parece estar envolvida na

modulao das funes cerebrais, melhorando o prejuzo cognitivo evidenciado
em ratos tornados diabticos pela injeo de estreptozotocina (TUZCU e
BAYDAS, 2006).

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Ainda, MENDELSON (2002) demonstrou que a administrao de
melatonina na rea pr-ptica medial (MPA) do hipotlamo anterior de ratos
resultou em aumento dose-dependente do tempo total de sono nos animais,
principalmente do sono no REM (NREM) e, segundo este autor, baseado em
estudos prvios, tal efeito pode ser mediado pela ao da melatonina na
transmisso GABArgica.
O sistema cardiovascular tambm parece sofrer influncia deste
neurohormnio secretado pela glndula pineal. Conforme MACCHI e BRUCE
(2004) existe maior risco de derrame e infarto do miocrdio no perodo da
manh coincidentemente com a queda dos nveis de melatonina e ainda,
pacientes com doena coronariana, quando comparados a indivduos normais,
apresentam nveis diminudos de melatonina noturna e nveis aumentados de
noradrenalina. GUVEN e colaboradores (2007) verificaram que a melatonina
produziu certo efeito cardioprotetor frente cardiotoxicidade induzida por
epirrubicina, um agente quimioterpico de amplo espectro do grupo dos
antraciclinas, em ratos.
Alm desses e de outros efeitos, a melatonina ainda parece estar
envolvida na modulao imune. Segundo MACCHI e colaboradores (2004)
vrios trabalhos tm mostrado que esse hormnio possui propriedades
oncostticas que podem reduzir a promoo ou progresso do tumor e que a
extrao da pineal em ratos resulta em acelerado crescimento de carcinoma de
Walker 265, sarcoma Yoshida e tumores mamrios, dentre outros. Um estudo
investigando a capacidade da melatonina de limitar a freqncia de incio de
cncer mamrio, bem como inibir a progresso do tumor induzido por
dimetilbenzantraceno (DMBA) determinou que a melatonina apresenta efeito
preventivo e curativo neste tipo de tumor (LENOIR et al., 2005), sugerindo que

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esta substncia poderia reduzir o risco de cncer de mama induzido por fatores
ambientais no identificados.
Uma vez que os tratamentos atualmente disponveis para a DP e
outras desordens neurodegenerativas baseiam-se apenas no alvio dos
sintomas no alterando a evoluo da doena (KITAMURA et al, 2002), a
procura por novos agentes capazes de retardar ou impedir a progresso da
doena de fundamental importncia no tratamento da DP.
Assim, embora a melatonina j tenha sido estuda em alguns
modelos animais da DP, muitos aspectos ainda no foram respondidos. Por
esta razo, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos farmacolgicos da
administrao exgena de melatonina no modelo animal de parkinsonismo
induzido pelo MPTP.